專利名稱：菘黃感冒顆粒的配方及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療感冒的中藥制劑，特別是涉及一種顆粒制劑，該顆粒制劑是由連翹、板藍(lán)根、金銀花、黃柏、大黃、黃芩、柴胡等中藥制成的。
背景技術(shù)：
感冒是由呼吸道病毒引起的一種發(fā)病率高的呼吸道疾病。患者常有發(fā)燒、頭痛、肌肉痛、鼻塞、流鼻涕、咽喉痛等癥狀。古代有傷風(fēng)、冒風(fēng)、冒寒、重傷風(fēng)、小傷寒等別稱?？捎闪鞲胁《尽⒈遣《?、腺病毒、呼吸道合胞病毒等病毒引起，成人、兒童皆可發(fā)生。感冒的致病原因是由于病毒感染引起，常見的致病病毒主要有流感病毒，腺病毒，呼吸道合胞病毒，冠狀病毒等。流感病毒，尤以甲型，極易變異，往往暴發(fā)、流行、或大流行；突然發(fā)生、發(fā)病率高、迅速蔓延、流行過程短但能多次反復(fù)。腺病毒致病在臨床上可表現(xiàn)為各種類型疾病，從上呼吸道感染到肺炎，以及膀胱炎、腦炎、角膜炎、腹瀉等。呼吸道合胞病毒感染后能引起嚴(yán)重的呼吸道疾病，重復(fù)感染較常見。
近年來，市場上治療感冒的中藥大量出現(xiàn)，有些屬于治標(biāo)不治本，有些使用價(jià)格昂貴的成分，有些在應(yīng)用過程中由于療效不確切而中斷使用。
有鑒于此，本發(fā)明人研制一種服用方便、作用平穩(wěn)、療效確切、劑型穩(wěn)定、質(zhì)量可控且無毒副作用的治療感冒的純中藥制劑，以滿足廣大患者的需求。
已經(jīng)知道，連翹為木犀科植物連翹Forsythia suspense(Thumb)Vahl.的干燥果實(shí)。含有連翹苷、連翹苷元、連翹酯苷A-E、松酯素、牛蒡子苷、樺木酸、齊墩果酸等有效成分。具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效。
板藍(lán)根為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort.的干燥根。含有靛藍(lán)、靛玉紅、芥子苷、表古堿、腺苷、多種氨基酸類。具有清熱解毒，涼血利咽的功效。
大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.，唐古特大黃Rheumtanguticum Maxium.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根和根莖。含有蒽類衍生物，包括蒽醌、蒽酚、蒽酮類以及它們的苷類。具有瀉熱通腸，涼血解毒的功效。
黃芩為唇形科植物黃芩Scutellarca baicalensis Georgi的干燥根。含黃酮類化合物，主要為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素等，此外，還含有揮發(fā)油、苯乙醇苷類成分。具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血的功效。
金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.，紅腺忍冬Lonicerahypoglauca Miq.山銀花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystylaRehd.的干燥花蕾或初開的花。主要含有綠原酸，還含苷類、黃酮類、揮發(fā)油類成分。具有清熱解毒，涼散風(fēng)熱的功效。
黃柏為蕓香科植物黃皮樹Phellodendron chinense Schneid.或黃柏Phellodendron amurense Rupr.的干燥樹皮。含有多種堿類，主要為小檗堿，并含黃柏堿、木蘭堿、掌葉防己堿等，另含有黃柏酮，黃柏內(nèi)酯、豆甾醇等。具有清熱解毒，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效。
柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹義柴胡Bupleurumscorzonerifolium Willde.的干燥根。主要含有五環(huán)三萜類柴胡皂苷a-f，活性較顯著的為柴胡皂苷a和d，并含少量的揮發(fā)油。具有和解表里，疏肝，升陽的功效。
本發(fā)明經(jīng)過配方篩選研究，得到用上述中藥制成的中藥制劑，解決了現(xiàn)有技術(shù)中的難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療實(shí)熱引起的感冒、發(fā)熱、咳嗽、咽喉腫痛等癥狀的中藥復(fù)方制劑。
本發(fā)明的中藥制劑，由連翹、板藍(lán)根、金銀花、黃柏、大黃、黃芩、柴胡等中藥原料制成，具有清熱解毒、涼血、利咽的功效。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種本發(fā)明的中藥制劑的制備方法。
本發(fā)明還提供用本發(fā)明的中藥制劑治療感冒的方法及用途。
本發(fā)明所述的中藥制劑，由以下重量配比的中藥原料制成連翹10～90份、板藍(lán)根10～90份、大黃1～30份、金銀花1～30份、黃芩1～30份、黃柏1～15份、柴胡1～30份其優(yōu)選的是連翹15～60份、板藍(lán)根15～60份、大黃5～20份、金銀花5～20份、黃芩5～20份、黃柏1～10份、柴胡5～20份。
最優(yōu)選的是連翹30份、板藍(lán)根30份、大黃10份、金銀花10份、黃芩10份、黃柏5份、柴胡10份以上組成是按重量作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減少，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以公斤為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以毫克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間的生藥材重量配比的比例不變。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對于特殊病人，如重癥或輕癥，肥胖或瘦小的病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的量的配比，增加或減少不超過100％，藥效不變。
以上組成中的中藥原料，尤其是佐藥和使藥可以用適當(dāng)?shù)木哂邢嗤幮缘闹兴幪鎿Q，替換后的中藥制劑其藥物作用不變。
本發(fā)明的中藥制劑，是通過將上述配方組成的中藥原料經(jīng)過提取或其他方式加工，制成藥物活性物質(zhì)，隨后，以該物質(zhì)為原料，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成的。所述活性物質(zhì)可以通過分別提取中藥原料得到，也可以通過共同提取中藥原料得到，也可以通過其他方式得到，如通過粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過篩、滲漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、層析等方法中的一種或多種得到、這些活性物質(zhì)可以是浸膏形式的物質(zhì)，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根據(jù)制劑的不同需要決定制成不同的濃度。
本發(fā)明的藥物制劑，優(yōu)選的是單位劑量的藥物制劑形式，在制成藥物制劑時(shí)可以制成任何可藥用的劑型，這些劑型選自片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑、貼劑，優(yōu)選的是口服制劑形式，最優(yōu)選的是顆粒劑形式。
本發(fā)明優(yōu)選的采用滲漉法提取本發(fā)明配方中的中藥材中的有效成分，提高了有效成分的提取率，降低了雜質(zhì)含量，提高了藥物的質(zhì)量和療效。
本發(fā)明的中藥制劑的制備方法可以采用以下方法上述配方中的中藥材，碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入0％～100％乙醇均勻潤濕，密閉放置15分鐘至數(shù)小時(shí)，使藥材充分膨脹，然后將膨脹的藥材裝入滲漉筒中，加入溶劑，一段時(shí)間后開始滲漉。將收集的滲漉液減壓蒸餾，濃縮。向濃縮液中加入適量的醫(yī)藥領(lǐng)域上可接受的輔料，制成藥劑學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選的是口服制劑，最優(yōu)選的是顆粒劑。
優(yōu)選的制備方法為將原藥材按配比連翹15～60份、板藍(lán)根15～60份、大黃5～20份、金銀花5～20份、黃芩5～20份、黃柏1～10份、柴胡5～20份，碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入50％～100％的乙醇均勻潤濕后，密閉放置30分鐘，使藥材充分膨脹，將膨脹的藥材裝入滲漉筒中，加入溶劑。加蓋浸漬后，滲漉。將收集的滲漉液減壓回收乙醇，將滲漉液濃縮。在濃縮液中加入輔料，按配比混合均勻，再加入50％～100％乙醇適量，制成軟材，然后過14目篩制成顆粒，將濕顆粒干燥，干顆粒過14目篩整粒，再過4號篩(65目)篩去細(xì)粉，然后分裝，密封，包裝即得顆粒劑。
對本發(fā)明的中藥制劑進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)性研究，以下通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說明本發(fā)明的有益效果。
藥效實(shí)驗(yàn)[藥物及試劑]用本發(fā)明實(shí)施例1方法制備的顆粒制劑為實(shí)驗(yàn)對象，(實(shí)驗(yàn)中稱為菘黃感冒顆粒)，由中國十七冶醫(yī)院制劑室提供，批號021216；三九感冒顆粒，深圳三九制藥股份有限公司，批號0206061；肝素，上海第一生化制藥廠，批號020811；2、4-二硝基苯酚，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號011212；二甲苯，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號020506；角叉菜膠由沈陽藥科大學(xué)藥理室提供，在應(yīng)用前一天，用注射用NS配制成1％的均勻混懸液，置4℃冰箱保存；啤酒酵母，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司，批號20010415。
HELA細(xì)胞株為安徽醫(yī)科大學(xué)微生物教研組病毒室儲(chǔ)存，于-84℃復(fù)蘇傳代后使用；MDCK細(xì)胞株為安徽醫(yī)科大學(xué)微生物教研組病毒室儲(chǔ)存，傳代后使用。
甲型流感病毒(68-1，H2N2)安徽醫(yī)科大學(xué)微生物教研組病毒室凍干毒種，在MDCK細(xì)胞上傳二代；腺病毒7型(ADV7)為安徽醫(yī)科大學(xué)微生物教研組病毒室儲(chǔ)存株，在HELA細(xì)胞上傳二代；呼吸道合胞病毒(RSV)為安徽醫(yī)科大學(xué)微生物教研組病毒室儲(chǔ)存株[34]，在HELA細(xì)胞上傳三代；乙型溶血性鏈球菌，由安徽中醫(yī)學(xué)院微生物教研室外檢咽拭子標(biāo)本分離得到，并根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》鑒定。
供試菌株共10種，107株分別是金黃色葡萄球菌(15株，含ATCC25923)，表皮葡萄球菌(10株)，甲型鏈球菌(9株)，乙型鏈球菌(11株)，肺炎鏈球菌(9株)，假白喉?xiàng)U菌(7株)，大腸桿菌(12株，含ATCC25922)，綠膿桿菌(12株)，肺炎克氏菌(9株)，白色念珠菌(12株)。其中標(biāo)準(zhǔn)菌株來自北京生物制品研究所。其中臨床菌種從合肥市第一人民醫(yī)院，合肥市康泰醫(yī)院，解放軍第105醫(yī)院，省中醫(yī)一、二附院提供的患者及本校微生物教研室外檢標(biāo)本中分離得到[動(dòng)物]健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，合格證皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)第01號，安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；健康Wistar大鼠雌雄各半，體重180～220g，合格證皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)第03號由安徽省醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室正常飼養(yǎng)1周。
721型分光光度計(jì)，上海東方儀器廠；TG328A分析天平，上海天平儀器廠；HHS-21-4B電熱恒溫水浴箱，上海醫(yī)療器械五廠；XSP-18B生物顯微鏡，南京江南光電公司；低溫冰箱，日立公司；TGL6G高速冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；80-2型離心沉淀器，江蘇大地自動(dòng)化儀器廠；TGL68高速臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；毛細(xì)管放大裝置，安徽中醫(yī)學(xué)院中藥藥理教研室；[方法]一、體外抗病毒試驗(yàn)選擇呼吸道常見病毒甲型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒；Hela細(xì)胞株、MDCK細(xì)胞株。先進(jìn)行病毒力測定、藥物毒性測定，再進(jìn)行藥物抗病毒試驗(yàn)。具體步驟如下。
(一)、病毒毒力測定MDCK細(xì)胞、HELA細(xì)胞40孔塑膠板單層培養(yǎng)，分別加入呼吸道常見病毒甲型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒，各病毒系列10倍稀釋液，于37℃5％CO2培養(yǎng)3天，每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變(CPE)，以+(25％)、++(50％)、+++(75％)、++++(100％)為病變程度；最高稀釋度不再出現(xiàn)新病變時(shí)為終點(diǎn)。按Reed-Muench法計(jì)算病毒半數(shù)感染劑量(TCID50)。每個(gè)毒株按0.5ml分裝，保存于-84℃，作為每次正式實(shí)驗(yàn)的毒種。
(二)、藥物對細(xì)胞的毒性測定取MDCK細(xì)胞和HELA細(xì)胞培養(yǎng)板，將受試藥(菘黃感冒顆粒)和陽性對照藥(三九感冒顆粒)配制成50mg/ml濃度(按生藥計(jì))，再按10倍系列稀釋成10-110-2…10-9等液，分別加入兩種細(xì)胞上。每孔0.1ml(每濃度重復(fù)4孔)37℃5％CO2培養(yǎng)5天(另設(shè)細(xì)胞對照)。每天在倒置顯微鏡下觀察，以細(xì)胞病變(CPE)為指標(biāo)，以+(25％)、++(50％)、+++(75％)、++++(100％)為病變程度；按72小時(shí)細(xì)胞病變用Reed-Muench法計(jì)算病毒半數(shù)中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)。
(三)、藥物抗病毒試驗(yàn)菘黃感冒顆粒和陽性對照藥(三九感冒顆粒)體外抗甲型流感病毒(68-1)、腺病毒(ADV7)、呼吸道合胞病毒(RSV)藥效試驗(yàn)分別在HELA和MDCK細(xì)胞進(jìn)行。試驗(yàn)設(shè)病毒對照(不加藥液)，細(xì)胞對照(不加藥液、不加病毒)。病毒感染加受試藥，陽性藥組。即MDCK細(xì)胞/HELA細(xì)胞→細(xì)胞懸液2*105/ml→分裝于96孔板，0.1ml/孔，2*104/孔→24h形成單層→傾去培養(yǎng)液→除細(xì)胞對照每孔加0.1ml100TCID50(68-1/ADV7/RSV)→37℃/34℃吸附1h→傾去病毒液，每孔(除兩個(gè)對照孔外)分別加入最大無毒濃度藥液并2倍稀釋6個(gè)濃度藥液(每濃度重復(fù)4孔)→37℃孵育或34℃孵育→40h后每日倒鏡下觀察細(xì)胞病變，記錄病變程度(+、++、+++、++++相應(yīng)為25％、50％、75％、100％)→當(dāng)病毒對照時(shí)，細(xì)胞對照(-)時(shí)記錄的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)(每個(gè)藥效實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次)。按Reed-Muench法計(jì)算抑制50％細(xì)胞病變的藥物濃度(IC50)，并計(jì)算治療指數(shù)(TI)。TI＝半數(shù)中毒濃度/半數(shù)有效濃度二、抗菌試驗(yàn)(一)、體外抗菌試驗(yàn)——對常見呼吸道細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)測定[供試培養(yǎng)基]白色念珠菌選用沙保氏培養(yǎng)基，其他細(xì)菌選用MH培養(yǎng)基并加入5％小牛血清。
將各供試菌株分別接種于上述相應(yīng)培養(yǎng)基中在供試培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)24h，選標(biāo)準(zhǔn)菌落移種于液體培養(yǎng)基中，白色念珠菌落，甲、乙型鏈球菌，肺炎鏈球菌培養(yǎng)12h，其他細(xì)菌培養(yǎng)6小時(shí)后，調(diào)整菌液濃度為108CFU/ml備用。
分別加入事先制備好的受試藥物和陽性對照藥(按生藥計(jì))，使培養(yǎng)基的藥物濃度分別為200mg、100mg、50mg、25mg、12.5mg、6.25mg、3.125mg、1.56mg、0.78mg/ml，均傾注平板。
培養(yǎng)基凝固后，用標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)取供試菌液一環(huán)(含菌量約為104CFU)接種于不同藥物濃度的培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。
在前后兩個(gè)不同梯度藥物濃度的兩個(gè)平板上，細(xì)菌生長數(shù)有80～90％突然減少，為MIC。最后將全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理記錄其MICR，MIC90，MIC50。比較藥物對各種細(xì)菌的MIC50判斷其體外抗菌活性。
(二)、體內(nèi)抗菌試驗(yàn)[菌株與菌液制備]將乙型溶血性鏈球菌菌株接種于含血清肉湯營養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)，37℃培養(yǎng)24h后，用5％干酵母液配制成每毫升含1.5×108、2×108、3×108、4×108、5×108CFU菌量5種濃度，供動(dòng)物感染預(yù)試。
取18～22g昆明種小鼠25只，隨機(jī)分為5組，每組5只，將已制備的5種濃度的菌液分別ip每組小鼠體內(nèi)，0.5ml/鼠，記錄動(dòng)物死亡數(shù)。判斷引起小鼠100％死亡最小感染菌量濃度。
將18～22g昆明種小鼠分5組，每組10只，雌雄各半，受試藥菘黃口服液高(25g/kg)、中(12.5g/kg)、低(6.25g/kg)三個(gè)劑量組，陽性藥(三九感冒顆粒12g/kg)組，生理鹽水組，各組按量ig給藥(或?qū)φ找?每鼠給藥容量為0.3ml/10g體重，感染前3天開始給藥，第3天給藥后1h，各組小鼠腹腔注射(ip)3×108CFU/ml菌液0.5ml/鼠，感染后繼續(xù)ig給藥(qd)治療，再連續(xù)給藥7天，期間觀察動(dòng)物的一般行為、死亡數(shù)及死亡時(shí)間，并記錄，與對照組比較，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
三、解熱試驗(yàn)(一)、菘黃感冒顆粒對2、4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響體重180～220g的Wistar大鼠，雌雄各半，共分6組，正常對照組(不給致熱源)，模型對照組，陽性藥(三九感冒顆粒12g/kg)對照組，受試藥菘黃口服液高(20g/kg)、中(10g/kg)、低(5g/kg)三個(gè)劑量組；每組8只，各組每鼠給藥(或?qū)φ找?ig容量為1.7ml/100g體重，連續(xù)3天，于第4天，測正常肛溫2次并記錄后，每鼠背部皮下注射2、4-二硝基苯酚30mg/kg，30分鐘后測肛溫，當(dāng)肛溫升高達(dá)1℃以上者，隨即按不同組別ig受試藥、陽性藥或NS，于給藥后1、2、3、4、5h，5個(gè)時(shí)段分別測其肛溫并記錄，觀察體溫變化情況，比較藥物的解熱作用。
(三)、菘黃感冒顆粒對啤酒酵母致大鼠發(fā)熱的影響體重180～220g的Wistar大鼠，雌雄各半。分組與給藥同“菘黃感冒顆粒對2、4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響”實(shí)驗(yàn)。連續(xù)3天，于第4天，測正常肛溫2次并記錄后，每鼠背部皮下注射10％啤酒酵母混懸液1ml/100g，每隔60分鐘后測肛溫一次，當(dāng)肛溫升高1℃以上者，隨即按不同組別ig受試藥、陽性藥或NS。于給藥后1、2、3、4、5h，5個(gè)時(shí)段分別測其肛溫并記錄，觀察體溫變化情況，比較藥物的解熱作用。
四、抗炎試驗(yàn)(一)、耳腫脹試驗(yàn)取昆明種小鼠50只，雄性，體重26～30g，隨機(jī)分成5組，每組10只。分別是空白對照組，受試藥高(25g/kg)、中(12.5g/kg)、低(6.25g/kg)三個(gè)劑量組，陽性藥組(12g/kg)。各組小鼠按0.3ml/10g體重每天ig.1次，連續(xù)6天，末次給藥(或?qū)φ找?后45min每只小鼠用二甲苯0.05ml涂于右耳前后兩面致炎，左耳對照。致炎后2小時(shí)將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm打孔器在左，右耳同一部位打下耳片，立即稱重，兩耳片重之差為腫脹度，比較組間差異。
(二)、大鼠足腫脹試驗(yàn)體重180～220g的大鼠，雌雄各半或不拘，隨機(jī)分成5組，每組10只。分別是空白對照組，受試藥高(20g/kg)、中(10g/kg)、低(5g/kg)三個(gè)劑量組，陽性藥組(12g/kg)。各組按1.7ml/100g體重每天ig.1次，連續(xù)6天，末次給藥(或?qū)φ找?后45min用1％角叉菜膠0.1ml分別注射于各鼠右足跖腱膜下致炎。致炎前右腳爪正面上端用圓珠筆作一清晰橫線，用毛細(xì)管容積測量法測鼠爪體積，然后于致炎后0.5、1、2、4、6小時(shí)各測鼠爪體積1次，致炎前后足容積差值為腫脹度，計(jì)算各鼠爪腫脹度，作t檢驗(yàn)，判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
五、免疫試驗(yàn)單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定——小鼠體內(nèi)炭廓清功能實(shí)驗(yàn)取昆明種小鼠50只，體重18～22g，雌雄各半分成5組，每組10只。分別是空白對照組，受試藥高(25g/kg)、中(12.5g/kg)、低(6.25g/kg)三個(gè)劑量組，陽性藥組(12g/kg)。各組小鼠按0.3ml/10g體重每天ig1次，連續(xù)6天，末次給藥(或?qū)φ找?30min后，各鼠由尾靜脈注射稀釋的印度墨汁0.1ml/10g體重，在注射后不同時(shí)間(1min，6min)用吸管(預(yù)先用肝素溶液潤濕)，分別從小鼠眶后靜脈取血0.020ml，溶于2ml1％Na2CO3溶液中搖勻，置721分光光度計(jì)在波長620nm下測取光密度(OD)。最后將小鼠頸椎脫臼處死，分別稱取胸腺、肝、脾重量。按下式計(jì)算廓清指數(shù)k或校正廓清指數(shù)α。
k＝(log OD1-log OD2)/(t2-t1)；進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
六、急性毒性試驗(yàn)最大給藥量試驗(yàn)取禁食12小時(shí)，20±2g的小鼠20只，雌雄各半，給以最大濃度的(1.5g/ml)的藥液，按0.4ml/10g，ig給藥三次，每次間隔5h，一日內(nèi)給藥劑量達(dá)180g/kg，觀察給藥后小鼠活動(dòng)情況，是否見明顯中毒癥狀，正常飼養(yǎng)7天，觀察小鼠有無死亡。小鼠處死，尸體解剖，觀察臟器。
結(jié)果一、體外抗病毒試驗(yàn)——對常見呼吸道病毒增殖抑制作用(一)、病毒毒力測定根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，按Reed-Muench法計(jì)算病毒半數(shù)感染劑量(TCID50)。結(jié)果為甲型流感病毒為10-1.77，腺病毒為10-3.71，呼吸道合胞病毒為10-2.33。分別以此劑量的病毒進(jìn)行試驗(yàn)。
(二)、藥物對細(xì)胞的毒性測定細(xì)胞的毒性測定結(jié)果72小時(shí)細(xì)胞病變，用Reed-Muench法計(jì)算病毒半數(shù)中毒濃度(TD50)和最大無毒濃度(TD0)。結(jié)果表明，菘黃感冒顆粒的TD50＝2109μg/ml、TD0＝50μg/ml比三九感冒顆粒的TD50＝6329μg/ml、TD0＝150μg/ml要小，說明菘黃感冒顆粒的細(xì)胞毒性大于三九感冒顆粒。見表1。
表1 菘黃感冒顆粒對MDCK細(xì)胞、HELA細(xì)胞
TD50、TD0測定(μg/ml)(按生藥計(jì))

(三)、藥物抗病毒試驗(yàn)根據(jù)藥物抗病毒試驗(yàn)結(jié)果，按Reed-Muench法計(jì)算抑制50％細(xì)胞病變的藥物濃度(IC50)，見表2，并計(jì)算治療指數(shù)(TI)，TI＝半數(shù)中毒濃度/半數(shù)有效濃度。見表3。由表2、3可知藥物抑制流感病毒，菘黃感冒顆粒與三九感冒顆粒沒有顯著性差異兩者的IC50數(shù)值相近。但是對腺病毒和呼吸道合胞病毒，菘黃感冒顆粒作用明顯強(qiáng)于三九感冒顆粒，其治療指數(shù)(TI)也小于三九感冒顆粒，提示該藥物作用效果強(qiáng)，但是毒性也增大，臨床使用上要注意劑量的控制。
表2 菘黃感冒顆粒對68-1、ADV7、RSV的抑制作用

表3 菘黃感冒顆粒對68-1、ADV7、RSV的TI值

二、抗菌試驗(yàn)(一)、體外抗菌試驗(yàn)——對常見呼吸道細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)測定在前后兩個(gè)不同梯度藥物濃度的兩個(gè)平板上，細(xì)菌生長數(shù)有80～90％突然減少，為MIC。最后將全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理記錄其MICR，MIC90，MIC50。結(jié)果菘黃感冒顆粒對受試10個(gè)種菌，107株，除對白色念珠菌作用較弱外，都有較好的抑制作用。從MIC50和MIC90可見，除對假白喉?xiàng)U菌外，菘黃感冒顆粒對8種細(xì)菌的體外抗菌作用均優(yōu)于三九感冒顆粒。見表4。
表4 菘黃感冒顆粒對107株細(xì)菌MIC測定結(jié)果(mg/ml)


(二)、體內(nèi)抗菌試驗(yàn)——對乙型溶血性鏈球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用a、乙型溶血性鏈球菌感染菌量預(yù)試結(jié)果結(jié)果引起小鼠100％死亡感染菌量3×108CFU/ml，見表5。
表5 乙型溶血性鏈球菌感染小鼠感染菌量預(yù)試結(jié)果

b、感染治療結(jié)果將實(shí)驗(yàn)期間觀察動(dòng)物的一般行為、死亡數(shù)及死亡時(shí)間，并記錄，與對照組比較，并進(jìn)行卡方統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果菘黃感冒顆粒對小鼠乙型溶血性鏈球菌感染有明顯的保護(hù)作用。經(jīng)X2檢驗(yàn)，菘黃感冒顆粒高劑量組和三九感冒顆粒組的生存率與模型對照組組間有顯著性差異，菘黃感冒顆粒低劑量組和中劑量組也比模型對照組死亡率低，結(jié)果見表6。
表6 菘黃感冒顆粒對鏈球菌感染小鼠體內(nèi)保護(hù)作用

與模型對照組相比*p＜0.05三、解熱試驗(yàn)(一)、菘黃感冒顆粒對2、4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響結(jié)果模型對照組從致熱后30min肛溫明顯高于正常對照組，說明發(fā)熱模型成功。菘黃口服液高、中劑量組有明顯解熱作用，其中中劑量與陽性藥三九感冒顆粒解熱作用相近。見表7。
(二)、菘黃感冒顆粒對啤酒酵母致大鼠發(fā)熱的影響結(jié)果模型對照組從致熱4h后，肛溫明顯高于正常對照組，說明發(fā)熱模型成功。菘黃感冒顆粒高、中劑量組有明顯解熱作用，其中中劑量與陽性藥三九感冒顆粒解熱作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與2、4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。見表8。
表7 菘黃感冒顆粒對2、4-二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱的影響

注(1)空白對照組不給致熱劑，只給同容量NS；(2)與空白對照組比；Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001；與模型對照組比*p＜0.05，**p＜0.01。
表8 菘黃感冒顆粒對啤酒酵母所致大鼠發(fā)熱的影響(n＝8)

注(1)空白對照組不給致熱劑，只給同容量NS；(2)與空白對照組比Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001；與模型對照組比*p＜0.05，**p＜0.01。
四、抗炎試驗(yàn)(一)、耳腫脹試驗(yàn)結(jié)果菘黃感冒顆粒高、中、低三個(gè)劑量組與空白組均有顯著性差異，其中中劑量組對二甲苯致小白鼠耳腫脹抑制效果最明顯，抗炎作用與陽性對照藥三九感冒顆粒無顯著性差異。見表9。
表9 菘黃感冒顆粒對二甲苯致小白鼠耳廓腫脹的影響(x±s)

與對照組比*p＜0.05，**p＜0.01。
(二)、大鼠足腫脹試驗(yàn)結(jié)果菘黃感冒顆粒高、中、低三個(gè)劑量組與空白組均有顯著性差異，小劑量組與中劑量組在致炎后兩小時(shí)就與空白組有顯著性差異，小劑量組與中劑量組起效迅速，抗炎作用與陽性對照藥三九感冒顆粒無顯著性差異。結(jié)果見表10。
表10 菘黃感冒顆粒對大鼠足腫脹的影響(x±s)

與空白對照組比*p＜0.05，**p＜0.01。
五、免疫試驗(yàn)單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的測定——小鼠體內(nèi)炭廓清功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明菘黃口服液大、中、小三個(gè)劑量組及陽性對照藥三九感冒顆粒均具有較好的免疫功能。說明本品具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能。見表11。
六、急性毒性試驗(yàn)——最大給藥量實(shí)驗(yàn)通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，未見小鼠明顯的急性毒性反應(yīng)，測不出LD50；本藥毒性極低，故按照急性毒性試驗(yàn)方法，進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)。
取禁食12小時(shí)，20±2g的小鼠20只，雌雄各半，給以最大濃度的(1.5g/m1)的藥液，按0.4ml/10g，ig給藥三次，每次間隔5h，使一日內(nèi)給藥劑量達(dá)180g/kg，給藥后小鼠活動(dòng)正常，未見明顯中毒癥狀，正常飼養(yǎng)7天，結(jié)果小鼠無死亡。小鼠處死，尸體解剖，未見明顯臟器病變。其對小鼠的一日最大給藥量為180g/kg，成人體重按60kg計(jì)，則小鼠的最大給藥量倍數(shù)＝每只小鼠的耐受藥量/小鼠的平均體重*成人平均體重/成人每日用量＝3.6g/20g*60kg/6g＝1800即菘黃口服液對小鼠的一日最大給藥量相當(dāng)于臨床成人用量的1800倍。
表11 菘黃感冒顆粒對小鼠體內(nèi)炭粒廓清功能的影響

與空白對照組比*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(一)、對流感病毒，腺病毒，呼吸道合胞病毒三種病毒，菘黃感冒顆粒具有較強(qiáng)的抗病毒效果。對流感病毒，菘黃感冒顆粒與陽性藥兩者的IC50數(shù)值相近，顯示作用效果相近。但是對腺病毒和呼吸道合胞病毒，同等劑量的情況下菘黃感冒顆粒作用明顯強(qiáng)于陽性對照藥，但其治療指數(shù)(TI)小于陽性對照藥，表明該藥物作用效果強(qiáng)，但是細(xì)胞毒性較大，治療安全指數(shù)范圍小，提示臨床使用時(shí)劑量不宜太大。
(二)、菘黃感冒顆粒在體外的抗菌效果高于陽性對照藥。試驗(yàn)的九種呼吸道致病菌，有八種的療效高于陽性對照藥。對金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，甲型鏈球菌，乙型鏈球菌，肺炎鏈球菌，大腸桿菌，綠膿桿菌，肺炎克氏菌菘黃感冒顆粒的MIC50和MIC90，均大大低于陽性藥，對白色念珠菌和陽性藥效果一樣，均較弱。對假白喉?xiàng)U菌作用效果與陽性藥相等。體內(nèi)抗菌試驗(yàn)，通過卡方檢驗(yàn)，雖然，菘黃感冒顆粒低劑量組和中劑量組與模型對照組組間沒有顯著性差異，但是死亡率低于模型組；大劑量組的藥效與陽性對照藥沒有顯著性差異，與模型組有顯著性差異。上述抗病毒、抗菌作用，提示該藥具有病因性治療作用。
(三)、菘黃感冒顆粒對兩種致熱劑的解熱作用效果相似。菘黃口服液高、中劑量組均有明顯解熱作用。此作用為該藥在臨床上具有較好退熱效果提供了藥理依據(jù)。
(四)、菘黃感冒顆粒三個(gè)劑量組對二甲苯致小白鼠耳腫脹抑制效果均較明顯，與空白組有顯著性差異，大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證同樣的劑量結(jié)果。結(jié)合解熱實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，印證了該藥在臨床上能有效地解除感冒癥狀。
(五)、菘黃感冒顆粒大、中、小三個(gè)劑量組及炭粒廓清試驗(yàn)表明該藥可提高吞噬指數(shù)K值和吞噬活性α值，有一定的提高免疫功能的作用，提示臨床上使用菘黃口服液治療感冒可起“標(biāo)本兼治”之效。
綜上所述，菘黃感冒顆粒對甲型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒三種抗病毒抑制作用較強(qiáng)，但治療指數(shù)(TI)三九感冒顆粒小，提示臨床上不宜超劑量使用；體外抗菌試驗(yàn)，菘黃感冒顆粒對金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，甲型鏈球菌，乙型鏈球菌，肺炎鏈球菌，大腸桿菌，綠膿桿菌，肺炎克氏菌，假白喉?xiàng)U菌較之三九感冒顆粒有較強(qiáng)的抑制作用，體內(nèi)抗菌與三九感冒顆粒相近；菘黃感冒顆粒具有良好的解熱、抗炎作用并具有一定的增強(qiáng)免疫功能作用；菘黃口服液對小鼠的一日最大給藥量相當(dāng)于臨床成人用量的1800倍。
本發(fā)明的中藥制劑對感冒的病因及癥狀具有明顯作用，并且療效確切、作用迅速、無明顯毒副作用、口感好、病人易接受。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)施例1取原藥材連翹90g、板藍(lán)根90g、大黃30g、金銀花30g、黃芩30g、黃柏15g、柴胡30g用碾槽碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入用量為原藥材3倍的75％的乙醇均勻潤濕后，密閉放置30分鐘，使藥材充分膨脹，取適量的脫脂棉墊鋪在滲漉筒的底部，然后將膨脹的藥材分次裝入滲漉筒中，每次投入后均勻壓平，裝完后用濾紙或紗布覆蓋，并放入玻璃珠，緩緩加入溶劑后，先打開滲漉筒的活塞，排除剩余空氣，當(dāng)溶液自活塞流出時(shí)，關(guān)閉活塞，繼續(xù)添加溶劑至高于藥粉5厘米，加蓋浸漬48小時(shí)后，以流速1ml/min開始滲漉，收集滲漉液。將收集的滲漉液于減壓下回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.30。在濃縮液中加入糊精適量，混合均勻，再加入75％乙醇少許，制成軟材，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)“手握成團(tuán)，輕壓即散”為準(zhǔn)，然后過14目尼龍篩制成無糖顆粒，濕顆粒于60℃干燥，干顆粒過14目篩整粒，再過4號篩(65目)篩去細(xì)粉，然后分裝，密封，包裝即得顆粒45g。
實(shí)施例2取原藥材連翹10g、板藍(lán)根10g、大黃5g、金銀花5g、黃芩5g、黃柏1g、柴胡5g用碾槽碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入用量為原藥材3倍的75％的乙醇均勻潤濕后，密閉放置30分鐘，使藥材充分膨脹，取適量的脫脂棉墊鋪在滲漉筒的底部，然后將膨脹的藥材分次裝入滲漉筒中，每次投入后均勻壓平，裝完后用濾紙或紗布覆蓋，并放入玻璃珠，緩緩加入溶劑后，先打開滲漉筒的活塞，排除剩余空氣，當(dāng)溶液自活塞流出時(shí)，關(guān)閉活塞，繼續(xù)添加溶劑至高于藥粉5厘米，加蓋浸漬48小時(shí)后，以流速1ml/min開始滲漉，收集滲漉液。將收集的滲漉液于減壓下回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.30。在濃縮液中加入糊精適量，混合均勻，再加入75％乙醇少許，制成軟材，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)“手握成團(tuán)，輕壓即散”為準(zhǔn)，然后過14目尼龍篩制成無糖顆粒，濕顆粒于60℃干燥，干顆粒過14目篩整粒，再過4號篩(65目)篩去細(xì)粉，然后分裝，密封，包裝即得顆粒45g。
實(shí)施例3取原藥材連翹30g、板藍(lán)根30g、大黃10g、金銀花10g、黃芩10g、黃柏5g、柴胡10g用碾槽碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入用量為原藥材3倍的75％的乙醇均勻潤濕后，密閉放置30分鐘，使藥材充分膨脹，取適量的脫脂棉墊鋪在滲漉筒的底部，然后將膨脹的藥材分次裝入滲漉筒中，每次投入后均勻壓平，裝完后用濾紙或紗布覆蓋，并放入玻璃珠，緩緩加入溶劑后，先打開滲漉筒的活塞，排除剩余空氣，當(dāng)溶液自活塞流出時(shí)，關(guān)閉活塞，繼續(xù)添加溶劑至高于藥粉5厘米，加蓋浸漬48小時(shí)后，以流速1ml/min開始滲漉，收集滲漉液。將收集的滲漉液于減壓下回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.30。在濃縮液中加入糊精，按配比(1∶2)混合均勻，再加入75％乙醇少許，制成軟材，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)“手握成團(tuán)，輕壓即散”為準(zhǔn)，然后過14目尼龍篩制成無糖顆粒，濕顆粒于60℃干燥，干顆粒過14目篩整粒，再過4號篩(65目)篩去細(xì)粉，然后分裝，密封，包裝即得顆粒45g。
實(shí)施例4取原藥材連翹150g、板藍(lán)根150g、大黃50g、金銀花50g、黃芩50g、黃柏25g、柴胡50g用碾槽碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入用量為原藥材3倍的75％的乙醇均勻潤濕后，密閉放置30分鐘，使藥材充分膨脹，取適量的脫脂棉墊鋪在滲漉筒的底部，然后將膨脹的藥材分次裝入滲漉筒中，每次投入后均勻壓平，裝完后用濾紙或紗布覆蓋，并放入玻璃珠，緩緩加入溶劑后，先打開滲漉筒的活塞，排除剩余空氣，當(dāng)溶液自活塞流出時(shí)，關(guān)閉活塞，繼續(xù)添加溶劑至高于藥粉5厘米，加蓋浸漬48小時(shí)后，以流速1ml/min開始滲漉，收集滲漉液。將收集的滲漉液于減壓下回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.30。在濃縮液中加入適量糊精及淀粉，再加入75％乙醇少許，制成軟材，然后過14目尼龍篩制粒，濕顆粒于60℃干燥，干顆粒過80目篩整粒，裝膠囊，即得膠囊劑50粒。
實(shí)施例5取原藥材連翹150g、板藍(lán)根150g、大黃50g、金銀花50g、黃芩50g、黃柏25g、柴胡50g
用碾槽碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入用量為原藥材3倍的75％的乙醇均勻潤濕后，密閉放置30分鐘，使藥材充分膨脹，取適量的脫脂棉墊鋪在滲漉筒的底部，然后將膨脹的藥材分次裝入滲漉筒中，每次投入后均勻壓平，裝完后用濾紙或紗布覆蓋，并放入玻璃珠，緩緩加入溶劑后，先打開滲漉筒的活塞，排除剩余空氣，當(dāng)溶液自活塞流出時(shí)，關(guān)閉活塞，繼續(xù)添加溶劑至高于藥粉5厘米，加蓋浸漬48小時(shí)后，以流速1ml/min開始滲漉，收集滲漉液。將收集的滲漉液于減壓下回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.30。在濃縮液中加入適量糊精及淀粉，再加入75％乙醇少許，制粒，然后過14目尼龍篩制粒，濕顆粒于60℃干燥，干顆粒過14目篩整粒，加入適量干淀粉、及滑石粉混勻后，壓片，即得片劑50片。
權(quán)利要求
1.一種治療感冒的中藥制劑，其特征在于，由以下配比的中藥原料制成，連翹10～90份、板藍(lán)根10～90份、大黃1～30份、金銀花1～30份、黃芩1～30份、黃柏1～15份、柴胡1～30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的中藥制劑，其特征在于，由以下配比的中藥原料制成，連翹15～60份、板藍(lán)根15～60份、大黃5～20份、金銀花5～20份、黃芩5～20份、黃柏1～10份、柴胡5～20份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的中藥制劑，其特征在于，由以下配比的中藥原料制成，連翹30份、板藍(lán)根30份、大黃10份、金銀花10份、黃芩10份、黃柏5份、柴胡10份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的中藥制劑，其特征在于，所述的制劑為顆粒劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的中藥制劑的制備方法，其特征在于，經(jīng)過如下步驟(1)、將原藥材按權(quán)利要求1所說的配比碾成粗粉，過10目篩，置容器中加入0％～100％乙醇均勻潤濕，密閉放置15分鐘至數(shù)小時(shí)，使藥材充分膨脹；(2)、將膨脹的藥材裝入滲漉筒中，加入溶劑，溶劑高于藥粉數(shù)厘米，浸漬1至數(shù)天后，開始滲漉，收集滲漉液；優(yōu)選的浸漬時(shí)間為48小時(shí)，優(yōu)選的滲漉速度為1ml/min；(3)、將收集的滲漉液減壓下蒸餾，濃縮。濃縮至相對密度為1.00～1.35；(4)、向濃縮液中加入適量的輔料，及合適的配比混合均勻，制成軟材；然后過14目篩制成顆粒，將濕顆粒干燥。其藥物與輔料的配比優(yōu)選的為1∶2；(5)、將干顆粒過14目篩整粒，再過4號篩(65目)篩去細(xì)粉，然后分裝，密封，包裝即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的制備方法，其特征在于提取工藝中乙醇溶液的濃度為65-95％。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的制備方法，其特征在于提取工藝中乙醇溶液的濃度為75％。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的制備方法，其特征在于提取工藝中加醇量為藥量的1-8倍。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的制備方法，其特征在于加醇量為藥量的3倍。
10.權(quán)利要求1的中藥制劑及制備是治療感冒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種菘黃感冒顆粒的配方及其制備方法，特別是涉及一種顆粒制劑，該顆粒制劑是由連翹、板藍(lán)根、金銀花、黃柏、大黃、黃芩、柴胡等中藥制成的。
文檔編號A61P31/00GK1751713SQ20051010566
公開日2006年3月29日 申請日期2005年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月29日
發(fā)明者王傳德, 陳衛(wèi)東 申請人:王傳德, 陳衛(wèi)東