專利名稱：一種中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當(dāng)今世界最常見和危害最大的疾病之一，在許多國家已成為人口死亡的主要原因之一；據(jù)調(diào)查，近年來的發(fā)病率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加，心腦缺血性疾病已成為危害我國人民健康的常見病、多發(fā)?。粸榱诉_(dá)到防治目的，許多發(fā)明人及藥品企業(yè)對其做了大量的研究工作。藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究、控制該中藥復(fù)方制劑質(zhì)量的方法；目前，在相關(guān)藥物制劑中，一般僅以野黃芩苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1為檢測指標(biāo)，但是它根本不能全面反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量，僅以此用來控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量不是十分合理；如果用別的指標(biāo)進行控制，由于沒有現(xiàn)成的檢測方案、檢測條件等等，所以比較難于實施。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法。這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標(biāo)、檢測的手段、技術(shù)方法等等，以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地。
該中藥復(fù)方制劑的藥味組成及配比如下(按重量份)方案一三七 1～99重量份 燈盞細(xì)辛 99～1重量份方案二三七 1～99重量份 燈盞細(xì)辛提取物 30～0.1重量份方案三三七提取物 0.1～30重量份 燈盞細(xì)辛 99～1重量份方案四三七提取物 0.1～30重量份 燈盞細(xì)辛提取物 30～0.1重量份方案五三七總皂苷 0.1～30重量份 燈盞細(xì)辛總黃酮 30～0.1重量份上述中藥復(fù)方制劑的劑型為注射劑或口服制劑；其中注射劑包括直接用于注射給藥的注射液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液和用冷凍干燥法或噴霧干燥法制備的注射用無菌粉末或無菌塊狀物；口服制劑包括片劑、分散片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸劑、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、凝膠劑、煎膏劑、浸膏劑和膜劑。臨床上用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆、肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發(fā)癥等疾病。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測試，包括以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；(2)燈盞細(xì)辛對照藥材、三七對照藥材、野黃芩苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、總黃酮、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取野黃芩苷，用甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為0.5％～100％乙腈溶液或甲醇0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的相對偏差不得超過±20％。
b、采用液相色譜法測試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量三七藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的相對偏差不得超過±20％。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％升至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的相對偏差不得超過±10％。
b、采用液相色譜法測試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈∶水，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的相對偏差不得超過±10％。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷對照品中的一種或兩種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和燈盞細(xì)辛對照藥材溶液、野黃芩苷對照品溶液的一種或兩種各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘渣加水飽和正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～3010℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點，陰性無干擾；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm；以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，用甲醇或水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算；或取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計，不得少于5mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計，不得少于10mg。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法是以下一種或幾種方法a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于10mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于20mg。
所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計算，野黃芩苷、總黃酮、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標(biāo)成分。因此本申請人制定了以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜、鑒別和含量測定來全面控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。但是由于中藥復(fù)方制劑中的各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對指紋圖譜的制定、鑒別和含量測定造成干擾，導(dǎo)致鑒別、含量測定和各部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須控制流動相、展開劑等色譜條件，才能得到良好的薄層色譜、含測條件和指紋圖譜。也就是說，由于處方中各成分相互之間的干擾影響，導(dǎo)致中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛、三七部分的指紋圖譜特征峰發(fā)生改變，而只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的薄層色譜、含測條件和指紋圖譜。
通過實驗證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實驗例1以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜的制備a、實驗儀器、試劑及樣品對照品野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實驗1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil C18色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到70000(以參照物野黃芩苷計算)。故最終選用Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)為實驗研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-水(梯度洗脫)(4)流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％升至30％四種流動相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長230、254、270、300下的色譜峰情況，結(jié)果表明，230nm檢測時能兼顧各成分色譜峰的峰度、分離度和基線，故選擇230nm為本品指紋圖譜檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色譜儀，WML-2010色譜工作站。色譜柱為Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)峰寬10；斜率100；最小峰面積50000。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計算，同時保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實驗例2以三七成分特征為主的指紋圖譜a、實驗儀器、試劑及樣品對照品人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實驗
1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到5400(以參照物人參皂苷Rg1計算)。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實驗研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液(梯度洗脫)(4)乙腈-水(梯度洗脫)(梯度洗脫體積配比為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％)四種流動相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在乙腈-水(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在203nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm±2作為檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計算，同時保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備人參皂苷Rg1為三七主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，同時兼顧中間體和藥材的研究，因此選定人參皂苷Rg1作為參照物。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實驗例3中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，選擇了燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷作為其特征，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對野黃芩苷進行了展開

經(jīng)過篩選，確定了以聚酰胺膜為固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例4中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了野黃芩苷作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對野黃芩苷進行了分離

經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)為流動相，在此條件下，野黃芩苷保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例5中藥復(fù)方制劑人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征斑點，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進行了展開

經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例6中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別方法為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1進行了分離

經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％，在此條件下，人人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例7中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷含量測定1儀器與試藥1.1主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHT SHIMADZU紫外/可見分光光度儀 TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限公司電子分析天平BP211D SARTORIUS超聲波清洗機KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司1.2試藥野黃芩苷 中國藥品生物制品檢定所甲醇 分析純 北京化工廠乙腈 色譜純 迪馬公司磷酸分析純 北京化學(xué)試劑公司2野黃芩苷 由中國藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測定純度為96.40％，符合含量測定用對照品要求(在測定中，按照96.40％的純度進行折算)。
3檢測波長的選擇 取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，野黃芩苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》相關(guān)品種并結(jié)合文獻(xiàn)報道，選擇335nm作為野黃芩苷含量測定的檢測波長。
4色譜條件色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT；色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動相甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量10μl；檢測波長335nm。
對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到野黃芩苷對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于2000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5提取時間的選擇 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g(共3份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5、10、20min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
提取時間考察

結(jié)果表明，超聲處理5min即可提取完全。
6線性關(guān)系考察 精密量取野黃芩苷對照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。以峰面積為縱坐標(biāo)，野黃芩苷的量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
野黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝3259091.50x-1830.06相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明野黃芩苷在0.1886μg～0.9428μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計算，野黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點，因此選用外標(biāo)一點法測定野黃芩苷的含量。
7精密度實驗 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結(jié)果見下表。
精密度試驗

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8穩(wěn)定性實驗8.1對照品溶液的穩(wěn)定性實驗 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時進樣測定。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗

結(jié)果表明，對照品溶液24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8.2供試品溶液的穩(wěn)定性實驗精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時進樣測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實驗

結(jié)果表明，供試品溶液24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9重復(fù)性實驗 取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項下進行操作。
重復(fù)性實驗

10加樣回收率實驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.13g(共6份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對照品溶液(C＝0.6782mg/ml)1.0ml，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量為4.958mg/g。
加樣回收率實驗

平均回收率＝97.96％，RSD＝0.88％11樣品含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項下的操作。
野黃芩苷含量測定

實驗例8中藥復(fù)方制劑中總黃酮含量測定1儀器與試藥(1)主要儀器紫外分光光度計 TU-1810SPC北京普析通用儀器有限責(zé)任公司電子分析天平BP211DSARTORIUS超聲波清洗機KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司(2)試藥蘆丁中國藥品生物制品檢定所(批號0080-9705)乙醇分析純阿托茲精細(xì)化工有限公司硝酸鋁 分析純天津市化學(xué)試劑三廠亞硝酸鈉分析純天津市化學(xué)試劑三廠氫氧化鈉分析純天津市北方化玻購銷中心2檢測波長的選擇 取蘆丁對照品，按正文對照品溶液的制備方法進行操作，獲得對照品溶液。取中藥復(fù)方制劑，按正文測定法中供試品溶液的制備方法進行操作，獲得供試品溶液。吸取蘆丁對照品溶液，供試品溶液，按正文總黃酮測定項下擬定的方法，在400～800nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果表明，對照品溶液與供試品溶液均在510nm有最大吸收，溶劑無干擾，因此選擇510nm作為分光光度法測定中藥復(fù)方制劑中總黃酮含量的檢測波長。
3對照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品20mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.1mg)。
4供試品溶液的制備 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，取約0.25g，置25ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，即得。
5測定法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各3.0ml，分置10ml量瓶中，各加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亞硝酸鈉溶液(1→20)0.3ml搖勻，放置6分鐘，再加硝酸鋁溶液(1→10)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在510nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。
6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取蘆丁對照品溶液(C＝0.1064mg/ml)0.0ml，1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，分置10ml量瓶中，分別加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亞硝酸鈉溶液(1→20)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，再加硝酸鋁溶液(1→10)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)，在510nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝10.818x-0.0005；相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999；結(jié)果表明蘆丁在0.0110～0.0530mg/ml范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計算，蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點，因此選用外標(biāo)一點法測定總黃酮的含量。
7精密度試驗 精密吸取蘆丁對照品溶液(濃度0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，測定5次。
精密度試驗

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8穩(wěn)定性試驗8.1對照品溶液穩(wěn)定性試驗 精密吸取蘆丁對照品溶液(濃度0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、15、30分鐘重復(fù)測定一次。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗

結(jié)果表明，對照品溶液穩(wěn)定性良好。
8.2供試品溶液穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、15、30min測定吸收度。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗

結(jié)果表明，供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9重復(fù)性試驗 取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項下進行操作。
重復(fù)性試驗

結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
10加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，取0.13g(共6份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，精密稱取經(jīng)120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品26.34mg，置25ml量瓶中，加60％乙醇適量超聲處理使溶解，取出，放至室溫，用60％乙醇定至刻度，搖勻，精密量取1.5ml(共6份)，分置上述25ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，用60％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液3.0ml，分置10ml量瓶中，照正文測定法項下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，計算，即得。
中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量為12.18mg/g。
加樣回收率試驗

平均回收率＝97.95％，RSD＝0.93％。
11樣品的含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項下的操作，測定樣品含量。
總黃酮的含量測定

實驗例9 中藥復(fù)方制劑中總皂苷含量測定1儀器、試藥1.1儀器普析通 TU-1810SPC 紫外/可見分光光度儀SARTORIUS BP211D 電子分析天平1.2試藥香草醛 分析純 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所甲醇色譜純 J.T.Baker冰醋酸 分析純 上海試劑一廠高氯酸 分析純 天津市鑫源化工廠純凈水 娃哈哈2方法與結(jié)果2.1檢測波長的選擇 精密稱取人參皂苷Rg15.14mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，在700～400nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果表明，黃芪甲苷在547nm處有最大吸收，空白無干擾，因此選擇547nm為分光光度法測定中藥復(fù)方制劑中總皂苷的檢測波長。
2.2對照品溶液的制備 人參皂苷Rg15mg，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
2.3供試品溶液的制備 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度。以外標(biāo)一點法計算，即得。
3線性關(guān)系的考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品5.03mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VA)，在547nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷的量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝0.0062X+0.0047；r＝0.9999人參皂苷Rg1在20.12～100.6μg范圍線性良好。
人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)

3精密度試驗 精密量取對照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測定法項下操作，連續(xù)測定5次。
精密度實驗

5穩(wěn)定性試驗5.1對照品溶液的穩(wěn)定性試驗精密量取對照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測定法項下操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時測定。
對照品溶液穩(wěn)定性實驗

5.2供試品溶液的穩(wěn)定性實驗 取本品裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg，按正文測定法項下進行操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實驗

6重復(fù)性試驗 取本品裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg(共5份)，按正文測定法項下進行操作。
重復(fù)性實驗

7回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約25mg(共5份)，精密稱定，分置25ml量瓶中；精密量取人參皂苷Rg1對照品溶液(0.642mg/ml)1ml(共5份)，精密稱定，分置上述25ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml具塞試管中，按正文測定法項下進行操作，以隨行溶劑為空白，依法測定吸收度，按外標(biāo)一點法計算，即得。
中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量24.41mg/g
加樣回收率實驗

平均回收率＝97.18％ RSD＝1.10％8三批中試樣品含量測定取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測定結(jié)果

實驗例10 中藥復(fù)方制劑中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1含量測定1儀器與試藥1.1儀器Alltech UVIS-201高效液相色譜儀，Alltech HPLC system工作站(美國)KQ250B超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)ZK-30ABX電熱真空干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器公司)Mettler AE240電子天平(上海梅特勒公司)1.2試藥三七皂苷R1中國藥品生物制品檢定所人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所人參皂苷Rb1中國藥品生物制品檢定所所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購于德國Merck公司水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
2色譜條件色譜柱Diamonsil(TM)C18，5μm；250×4.6mm；流動相乙腈-水為流動相，梯度洗脫；
梯度洗脫系統(tǒng)

流速1ml/min，兩次進樣間隔平衡時間3min；檢測波長203nm；柱溫30℃；進樣量10μl理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000。
檢測波長的選擇 三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1，均在203nm波長處有最大吸收，因此選用203nm作為本品的檢測波長。
3對照品溶液的制備 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；再分別吸取上述溶液各1ml，置同一5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每ml含三七皂苷R10.124mg、人參皂苷Rg10.284mg和人參皂苷Rb10.428mg的對照品溶液。
4供試品溶液的制備 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱取2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
5陰性供試品溶液的制備 照本品處方稱取除三七外的其它成分，按本品制備工藝制成陰性供試品。精密稱取2.40572g，照供試品溶液的制備項下方法制備，作為陰性供試品溶液。
6系統(tǒng)適用性試驗 根據(jù)上述色譜條件得到三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、混合對照品、樣品、陰性色譜圖，理論板數(shù)n大于3000，樣品中各對照品峰與相近峰分離清晰完全，分離度大于1.5，陰性無干擾。
7線性關(guān)系的考察 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；精密量取前述對照品貯備液各0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，依次注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量(μg)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程為三七皂苷R1Y＝208361.76X-1972.29 r＝0.9995；人參皂苷Rg1Y＝293933.01X-13982.75 r＝0.9994；人參皂苷Rb1Y＝192503.18X-9202.56 r＝0.9993。
結(jié)果表明三七皂苷R1在0.248-2.480μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rg1在0.568-5.680μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Rb1在0.856-8.560μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
線性關(guān)系試驗測定結(jié)果

8精密度試驗 取對照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，連續(xù)測定5次，考察對照品溶液精密度。
精密度試驗

9穩(wěn)定性試驗9.1對照品溶液穩(wěn)定性試驗 取對照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，分別在0、2、6、10、24小時進樣測定，考察對照品溶液穩(wěn)定性。
對照品溶液的穩(wěn)定性試驗

9.2供試品溶液的穩(wěn)定性試驗 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱取2.48425g，，按正文供試品溶液制備下進行操作，分別在0、2、6、10、24小時進樣測定。
穩(wěn)定性試驗

結(jié)果表明供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。
10重復(fù)性試驗 取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約2.5g(共5份)，按正文測定法供試品溶液制備和測定項下進行操作。
重復(fù)性試驗

結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好。
11、加樣回收率試驗 采用加樣回收法，取裝量差異項下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約1.25g(共5份)，分別置50ml量瓶中，另精密量取混合對照品溶液4ml(其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的濃度為0.385mg/ml、1.694mg/ml、2.403mg/ml)，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
經(jīng)測定已知中藥復(fù)方制劑中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量分別是1.242、6.711、8.434mg/g。
三七皂苷R1加樣回收率試驗

平均回收率＝97.65％；RSD＝0.53％。
人參苷Rg1加樣回收率試驗

平均回收率＝97.95％；RSD＝0.87％。
人參苷Rb1加樣回收率試驗

平均回收率＝97.92％；RSD＝1.01％。
12三批中試樣品含量測定取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測定結(jié)果

實驗例1采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本發(fā)明組方粉針制劑適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％升至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為本發(fā)明組方粉針制劑中以燈盞細(xì)辛特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備本發(fā)明組方粉針制劑的指紋圖譜；(6)將本發(fā)明組方粉針制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算本發(fā)明組方粉針制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.本發(fā)明組方粉針制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
實驗例2采用液相色譜法測試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本發(fā)明組方粉針制劑適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈∶水，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為本發(fā)明組方粉針制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將本發(fā)明組方粉針制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算本發(fā)明組方粉針制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.本發(fā)明組方粉針制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
實驗例3本發(fā)明組方粉針制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方粉針制劑2g，加甲醇10ml提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實驗例4本發(fā)明組方粉針制劑野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取本發(fā)明組方粉針制劑0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實驗例5本發(fā)明組方粉針制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方粉針制劑3g，用正丁醇10ml提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇2ml溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
實驗例6本發(fā)明組方粉針制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取本發(fā)明組方粉針制劑2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
實驗例7本發(fā)明組方粉針制劑野黃芩苷的含量測定取本發(fā)明組方粉針制劑0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實驗例8本發(fā)明組方粉針制劑中總黃酮的含量測定本發(fā)明組方粉針制劑0.25g，置25ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于10mg。
實驗例9本發(fā)明組方粉針制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取本發(fā)明組方粉針制劑2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實驗例10本發(fā)明組方粉針制劑中總皂苷的含量測定取本發(fā)明組方粉針制劑50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取2.5ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液1.25ml，高氯酸5ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于20mg。
實驗例11采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取本發(fā)明組方小水針制劑作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加乙制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％甲醇，流動相B為1％冰醋酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％升至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為本發(fā)明組方小水針制劑中以燈盞細(xì)辛特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備本發(fā)明組方小水針制劑的指紋圖譜；(6)將本發(fā)明組方小水針制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算本發(fā)明組方小水針制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.本發(fā)明組方小水針制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
實驗例12采用液相色譜法測試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取本發(fā)明組方小水針制劑作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈∶1％冰醋酸溶液，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為本發(fā)明組方小水針制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將本發(fā)明組方小水針制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部
I.計算本發(fā)明組方小水針制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.本發(fā)明組方小水針制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
實驗例13本發(fā)明組方小水針制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方小水針制劑10ml，水浴蒸干，殘渣加乙醇10ml提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加三氯甲烷提取，濾過，濾液揮干，殘渣用乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以乙醇-甲酸乙酯-醋酸8∶2∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實驗例14本發(fā)明組方小水針制劑野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取本發(fā)明組方小水針制劑10ml，置25ml量瓶中，加乙醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加乙醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液45％∶55％為流動相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實驗例15本發(fā)明組方小水針制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方小水針制劑30ml，用正丁醇10ml提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加二氯甲烷回流提取，棄去二氯甲烷液，殘渣加醋酸乙酯提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇2ml溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加乙制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-加酸乙酯-甲醇-水22∶45∶10∶15在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
實驗例16本發(fā)明組方小水針制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取本發(fā)明組方小水針制劑25ml，置50ml量瓶中，加乙醇至刻度，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
實驗例17本發(fā)明組方小水針制劑野黃芩苷的含量測定取本發(fā)明組方小水針制劑作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-1％冰醋酸水溶液55％∶45％為流動相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實驗例18本發(fā)明組方小水針制劑中總黃酮的含量測定本取本發(fā)明組方小水針制劑作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液作為對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于10mg。
實驗例19本發(fā)明組方小水針制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取本發(fā)明組方小水針制劑25ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實驗例20本發(fā)明組方小水針制劑中總皂苷的含量測定取本發(fā)明組方小水針制劑50ml，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解并定量轉(zhuǎn)移置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取2.5ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液1.25ml，高氯酸5ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于20mg。
實驗例21本發(fā)明組方膠囊制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方膠囊制劑2g，加甲醇10ml提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加甲酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸6∶4∶2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實驗例22本發(fā)明組方膠囊制劑野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取本發(fā)明組方膠囊制劑0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％甲酸水溶液48％∶52％為流動相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實驗例23本發(fā)明組方膠囊制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取本發(fā)明組方膠囊制劑3g，用醋酸乙酯10ml提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇2ml溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-乙醇-水14∶30∶10∶15在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。
實驗例24本發(fā)明組方膠囊制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取本發(fā)明組方膠囊制劑2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.2％磷酸為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為30％，從15分鐘至30分鐘，乙腈的比例由30％上升至40％，從30分鐘至50分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
實驗例25本發(fā)明組方膠囊制劑野黃芩苷的含量測定取本發(fā)明組方膠囊制劑0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.4％磷酸水溶液46％∶54％為流動相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實驗例26本發(fā)明組方膠囊制劑中總黃酮的含量測定本發(fā)明組方膠囊制劑0.25g，置25ml量瓶中，加80％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加80％乙醇溶液至刻度，搖勻作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于10mg。
實驗例27本發(fā)明組方膠囊制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取本發(fā)明組方膠囊制劑2.5g，置50ml量瓶中，加乙醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，甲醇的比例為25％，從15分鐘至30分鐘，甲醇的比例由25％上升至38％，從30分鐘至35分鐘，甲醇的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
權(quán)利要求
1.一種以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測試，包括以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；(2)燈盞細(xì)辛對照藥材、三七對照藥材、野黃芩苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、總黃酮、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取野黃芩苷，用甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為0.5％～100％乙腈溶液或甲醇0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～5mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20％。b、采用液相色譜法測試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量三七藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光散射檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20％。
3.按照權(quán)利要求2所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測試以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜和以三七成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種a、采用液相色譜法測定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％升至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以燈盞細(xì)辛特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。b、采用液相色譜法測試以三七成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈∶水，梯度洗脫，，溶劑比例為從0分鐘至12分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測波長203±2nm，柱溫30℃；(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以三成分特征為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準(zhǔn)，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復(fù)方制劑中以三七成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.計算待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.待測中藥復(fù)方制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10％。
4.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷對照品中的一種或兩種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和燈盞細(xì)辛對照藥材溶液、野黃芩苷對照品溶液的一種或兩種各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘渣加水飽和正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇或乙醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各1～30μl，分別點于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～3010℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點，陰性無干擾；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
5.按照權(quán)利要求4所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的鑒別方法包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中燈盞細(xì)辛藥材、野黃芩苷中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材、野黃芩苷中的一種或幾種制備對照溶液；燈盞細(xì)辛對照藥材溶液的制備取燈盞細(xì)辛對照藥材，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動相，檢測波長為335nm；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復(fù)方制劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復(fù)方制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅參或人參對照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對照藥材溶液；三七對照藥材溶液的制備取三七對照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘渣加水飽和正丁醇提取，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘渣用甲醇溶解，作為對照藥材溶液；對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾；d、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰，陰性無干擾。
6.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇或乙醇或流動相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm；以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，用甲醇或水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算；或取待測中藥復(fù)方制劑適量，加水溶解并稀釋至合適濃度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計，不得少于5mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計，不得少于10mg。
7.按照權(quán)利要求6所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑含量的測試方法是以下一種或幾種方法a、中藥復(fù)方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動相，檢測波長為335nm；以外標(biāo)一點進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；b、中藥復(fù)方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于10mg；c、中藥復(fù)方制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測定取待測中藥復(fù)方制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項或幾項(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；d、中藥復(fù)方制劑中總皂苷的含量測定取待測藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點法進行計算，待測中藥復(fù)方制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計，不得少于20mg。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞細(xì)辛、三七制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復(fù)方制劑的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計算，野黃芩苷、總黃酮、總皂苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由燈盞細(xì)辛和三七或其提取物、有效部位制成的中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括燈盞細(xì)辛和三七的指紋圖譜測試方法和/或鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發(fā)明為該組方制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴(yán)格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測方法，為確?；颊哂盟幍挠行?、安全性提供了數(shù)字化的說明。
文檔編號A61P7/02GK1939368SQ20051010781
公開日2007年4月4日 申請日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月30日
發(fā)明者于文風(fēng) 申請人:北京奇源益德藥物研究所