專利名稱：一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當(dāng)今世界最常見和危害最大的疾病之一，在許多國家已成為人口死亡的主要原因之一；據(jù)調(diào)查，近年來的發(fā)病率有逐年增高趨勢(shì)，而且中、青年患者不斷增加，心腦缺血性疾病己成為危害我國人民健康的常見病、多發(fā)??；為了達(dá)到防治目的，許多發(fā)明人及藥品企業(yè)對(duì)其做了大量的研究工作。藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，才能不斷的更新發(fā)展，為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識(shí)產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究、控制該藥物組合物質(zhì)量的方法；目前，在相關(guān)藥物制劑中，一般僅以野黃芩苷、黃芪甲苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中的某種成分為檢測(cè)指標(biāo)，但是它根本不能全面反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量，僅以此用來控制藥物組合物的質(zhì)量不是十分合理；如果用別的指標(biāo)進(jìn)行控制，由于沒有現(xiàn)成的檢測(cè)方案、檢測(cè)條件等等，所以比較難于實(shí)施。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的藥物組合物的質(zhì)量控制方法。這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了檢測(cè)的指標(biāo)、檢測(cè)的手段、技術(shù)方法等等，以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費(fèi)者能全面認(rèn)識(shí)產(chǎn)品質(zhì)地。
該藥物組合物的藥味組成及配比如下(按重量份) 由燈盞花素0.1～50份、黃芪10～5000份與三七10～5000份制作而成；或是由相應(yīng)重量份黃芪藥材、三七藥材經(jīng)提取精制后得到的提取物與相應(yīng)重量份燈盞花素加適當(dāng)輔料制作而成。
上述藥物組合物的劑型為注射劑或口服制劑；其中注射劑包括直接用于注射給藥的注射液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液和用冷凍干燥法或噴霧干燥法制備的注射用無菌粉末或無菌塊狀物；口服制劑包括片劑、分散片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、丸劑、微丸劑、散劑、滴丸劑、緩釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑、凝膠劑、煎膏劑、浸膏劑和膜劑。臨床上用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆、肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發(fā)癥等疾病。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的 藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容 (1)指紋圖譜測(cè)試，包括以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種； (2)黃芪對(duì)照藥材、三七對(duì)照藥材、野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測(cè)試方法； (3)野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、總皂苷中全部或部分成分的含量測(cè)試方法。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種 a、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液； (2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測(cè)波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～50個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜； (6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部 I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00； II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±20％； b、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液； (2)參照物溶液的制備取適量黃芪和三七藥材中的主要活性成分對(duì)照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、黃芪甲苷中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測(cè)波長為190～400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～40個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜； (6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部 I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00； II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±20％。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種 a、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)藥物組合物適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至20分鐘，乙腈的比例為從4％升至25％，從20分鐘至40分鐘，乙腈的比例為從25％升至45％，從40分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從45％升至70％，從60分鐘至70分鐘，乙腈的比例為從70％升至80％，從70分鐘至80分鐘，乙腈的比例為從80％升至100％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長為254±2nm，柱溫25℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜； (6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部 I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％； b、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長203±2nm，柱溫30℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜； (6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部 I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對(duì)偏差不得超過±10％。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種 a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005 moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰； c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品、三七皂苷R1對(duì)照品中的一種或幾種，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈蓟虼姿嵋阴ヌ崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)； d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別 取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰； e、藥物組合物中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.05％～5％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至3～6，用醋酸乙酯或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴セ蚣状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇1～30∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； f、藥物組合物中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用10％～70％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛。喜⒄〈家?，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～30∶1～20∶0.2～10的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％～50％硫酸乙醇溶液，80～160℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； g、藥物組合物中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰； h、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～20∶0.1～3為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； i、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種 a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑； b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰； c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rbl、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別 取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰； e、藥物組合物中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； f、藥物組合物中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)； g、藥物組合物中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰； h、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)； i、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種 a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為200～410nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg； b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng) 每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg； 每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg； 每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg； 每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg； c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg； d、藥物組合物中黃芪甲苷的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.02mg； e、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng) (1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg； (2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法是以下一種或幾種方法 a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg； b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng) (1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg； (2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg； (3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg； (4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg； c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛一冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg； d、藥物組合物中黃芪甲苷的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg； e、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測(cè)定 取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng) (1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg； (2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述組合物的注射制劑的含量測(cè)定結(jié)果，按照重量百分比計(jì)算，野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、總皂苷中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標(biāo)成分。因此本申請(qǐng)人制定了以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜、鑒別和含量測(cè)定來全面控制藥物組合物的質(zhì)量。但是由于藥物組合物中的各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對(duì)指紋圖譜的制定、鑒別和含量測(cè)定造成干擾，導(dǎo)致鑒別、含量測(cè)定和各部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須控制流動(dòng)相、展開劑等色譜條件，才能得到良好的薄層色譜、含測(cè)條件和指紋圖譜。也就是說，由于處方中各成分相互之間的干擾影響，導(dǎo)致藥物組合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜特征峰發(fā)生改變，而只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的薄層色譜、含測(cè)條件和指紋圖譜。
通過實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對(duì)以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實(shí)驗(yàn)例1 以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜 a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品 對(duì)照品芒柄花素中國藥品生物制品檢定所 b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 1.色譜柱的選擇 研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)三種牌號(hào)的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號(hào)的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil C18色譜柱分離效果最好，柱效最高(以參照物芒柄花素計(jì)算)。故最終選用Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動(dòng)相的選擇 研究過程中分別考察了(1)甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鈉(20∶80)，(2)乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉(10∶90)，(3)乙腈-0.05mol/L磷酸氫二鈉(梯度洗脫)(4)乙腈-水(梯度洗脫)，溶劑比例為從0分鐘至20分鐘，乙腈的比例為從4％升至25％，從20分鐘至40分鐘，乙腈的比例為從25％升至45％，從40分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從45％升至70％，從60分鐘至70分鐘，乙腈的比例為從70％升至80％，從70分鐘至80分鐘，乙腈的比例為從80％升至100％。結(jié)果顯示流動(dòng)相(1)條件下，峰形較差，1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動(dòng)相(2)流動(dòng)相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動(dòng)相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測(cè)波長的確定 研究中在乙腈-水(梯度洗脫)流動(dòng)相條件下，分別考察了在不同波段典型波長230、254、270、300下的色譜峰情況，結(jié)果表明，254nm檢測(cè)時(shí)能兼顧各成分色譜峰的峰度、分離度和基線，故選擇254nm為本品指紋圖譜檢測(cè)波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù) 4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色譜儀，WML-2010色譜工作站。色譜柱為Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)峰寬10；斜率100；最小峰面積500。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備 取待測(cè)藥物組合物0.1g，加正丁醇溶解，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状枷♂屩?ml，作為供試品溶液。
6.參照物溶液的制備 取芒柄花素，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù) 根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例2 以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜 a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品 對(duì)照品人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所 b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 1.色譜柱的選擇 研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號(hào)的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號(hào)的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到5400(以參照物人參皂苷Rg1計(jì)算)。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動(dòng)相的選擇 研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)，(3)乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液(梯度洗脫)(4)乙腈-水(梯度洗脫)(梯度洗脫體積配比為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％)四種流動(dòng)相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動(dòng)相(1)條件下，峰形較差，1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動(dòng)相(2)流動(dòng)相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動(dòng)相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測(cè)波長的確定 研究中在乙腈-水(梯度洗脫)流動(dòng)相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在203nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm±2作為檢測(cè)波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù) 4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備 精密稱取本品適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備 人參皂苷Rg1為三七主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，同時(shí)兼顧中間體和藥材的研究，因此選定人參皂苷Rg1作為參照物。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù) 根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例3 藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 為了突出燈盞細(xì)辛的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對(duì)野黃芩苷進(jìn)行了展開 條件 問題 正己烷-苯-甲酸乙酯-甲酸(5-5-10-4)硅膠H薄層板對(duì)照品展開至前沿 醋酸乙酯-苯-乙酸(5-4-3)硅膠H薄層板 對(duì)照品未分開，陰性有干擾 醋酸乙酯-苯-甲酸(5-4-3)硅膠G薄層板 對(duì)照品未分開，陰性有干擾 氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7-2-4)硅膠GF254薄層板對(duì)照品未分開，陰性有干擾 甲苯-醋酸乙酯(8-1)硅膠H薄層板 對(duì)照品未分開，陰性有干擾 甲醇-醋酸乙酯-甲酸(10-5-0.5)硅膠G薄層板 對(duì)照品展開至前沿 甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)聚酰胺膜 分離清晰，Rf值適中陰性無干擾 經(jīng)過篩選，確定了以聚酰胺膜為固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例4 藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 為了突出燈盞細(xì)辛的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了野黃芩苷作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對(duì)野黃芩苷進(jìn)行了分離 經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)為流動(dòng)相，在此條件下，野黃芩苷保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對(duì)稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例5 藥物組合物人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法 為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對(duì)麥冬進(jìn)行了展開 經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例6 藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相色譜鑒別方法 為了突出三七的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對(duì)人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1進(jìn)行了分離 乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘全15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上保留時(shí)間適中，峰行尖升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％十八烷基硅銳，對(duì)稱，陰性無干擾 烷鍵合硅膠 經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％，在此條件下，人人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對(duì)稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例7 藥物組合物中黃芪的薄層色譜鑒別方法 為了突出黃芪的特征，選擇了黃芪對(duì)照藥材作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥物組合物中存在較多與黃芪對(duì)照藥材結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對(duì)黃芪對(duì)照藥材進(jìn)行了展開 經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇(10-1)為展開劑，在此條件下，黃芪對(duì)照藥材特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例8 藥物組合物中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 為了突出黃芪的特征，選擇了黃芪甲苷作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥物組合物中存在較多與黃芪甲苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行了展開 經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-水(13-7-2)的下層溶液為展開劑，在此條件下，黃芪甲苷特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例9 藥物組合物中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 為了突出黃芪的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了黃芪甲苷作為其特征成分，但是由于藥物組合物中存在較多與黃芪甲苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行了分離 經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水(32∶68)為流動(dòng)相，在此條件下，黃芪甲苷保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對(duì)稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例10 藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法 為了突出黃芪黃酮類成分的特征，選擇了芒柄花素、毛蕊芒柄花素作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥物組合物中存在較多與芒柄花素、毛蕊芒柄花素結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對(duì)芒柄花素、毛蕊芒柄花素進(jìn)行了展開 經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(2.5-3-4-0.5)為展開劑，在此條件下，芒柄花素、毛蕊芒柄花素特征斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例11 藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法 為了突出黃芪黃酮類成分的特征，除了薄層鑒別方法以外，選擇了芒柄花素、毛蕊芒柄花素作為其特征成分，但是由于藥物組合物中存在較多與芒柄花素、毛蕊芒柄花素結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動(dòng)相對(duì)芒柄花素、毛蕊芒柄花素進(jìn)行了分離 經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例由40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例由50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％為流動(dòng)相，在此條件下，芒柄花素、毛蕊芒柄花素保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對(duì)稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例12 藥物組合物中野黃芩苷含量測(cè)定 1儀器與試藥 1.1主要儀器 高效液相色譜儀 LC-2010AHT SHIMADZU 紫外/可見分光光度儀 TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限公司 電子分析天平 BP211D SARTORIUS 超聲波清洗機(jī) KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司 1.2試藥 野黃芩苷 中國藥品生物制品檢定所 甲醇 分析純 北京化工廠 乙腈 色譜純 迪馬公司 磷酸 分析純 北京化學(xué)試劑公司 2野黃芩苷 由中國藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測(cè)定純度為96.40％，符合含量測(cè)定用對(duì)照品要求(在測(cè)定中，按照96.40％的純度進(jìn)行折算)。
3檢測(cè)波長的選擇 取野黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，野黃芩苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》相關(guān)品種并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，選擇335nm作為野黃芩苷含量測(cè)定的檢測(cè)波長。
4色譜條件 色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT； 色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm； 流動(dòng)相甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)； 流速1.0ml/min； 柱溫30℃； 進(jìn)樣量10μl； 檢測(cè)波長335nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到野黃芩苷對(duì)照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于2000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5線性關(guān)系考察 精密量取野黃芩苷對(duì)照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，野黃芩苷的量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
野黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果 回歸方程Y＝3222232.53x+3654.50 相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999 結(jié)果表明野黃芩苷在0.1886μg～0.9428μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，野黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定野黃芩苷的含量。
6精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定5次，考察對(duì)照品溶液精密度，測(cè)定結(jié)果見下表。
精密度試驗(yàn) 結(jié)果表明，對(duì)照品溶液精密度良好。
7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 7.1對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 結(jié)果表明，對(duì)照品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
7.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 9加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.12g(共5份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對(duì)照品溶液(C＝0.681mg/ml)1.0ml，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
藥物組合物中野黃芩苷的含量為5.755mg/g。
加樣回收率實(shí)驗(yàn) 平均回收率＝97.94％，RSD＝1.02％ 11樣品含量測(cè)定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測(cè)定法項(xiàng)下的操作。
野黃芩苷含量測(cè)定 實(shí)驗(yàn)例13 藥物組合物中總皂苷含量測(cè)定 1儀器、試藥 1.1儀器普析通 TU-1810SPC 紫外/可見分光光度儀 SARTORIUS BP211D 電子分析天平 1.2試藥香草醛 分析純 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所 甲醇 色譜純 J.T.Baker 冰醋酸 分析純 上海試劑一廠 高氯酸 分析純 天津市鑫源化工廠 純凈水 娃哈哈 2方法與結(jié)果 2.1檢測(cè)波長的選擇 精密稱取人參皂苷Rg15.14mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，在700～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，黃芪甲苷在547nm處有最大吸收，空白無干擾，因此選擇547nm為分光光度法測(cè)定藥物組合物中總皂苷的檢測(cè)波長。
2.2對(duì)照品溶液的制備 人參皂苷Rg15mg，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
2.3供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V A)，在547nm的波長處測(cè)定吸收度。以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得。
3線性關(guān)系的考察 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品5.03mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V A)，在547nm的波長處測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷的量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝0.0062X+0.0047；r＝0.9999 人參皂苷Rg1在20.12～100.6μg范圍線性良好。
人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定數(shù)據(jù) 3精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測(cè)定法項(xiàng)下操作，連續(xù)測(cè)定5次。
精密度實(shí)驗(yàn) 5穩(wěn)定性試驗(yàn) 5.1對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測(cè)定法項(xiàng)下操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測(cè)定。
對(duì)照品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 5.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg，按正文測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測(cè)定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 6重復(fù)性試驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg(共5份)，按正文測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 7回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約25mg(共5份)，精密稱定，分置25ml量瓶中；精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液(0.657mg/ml)1ml(共5份)，精密稱定，分置上述25ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml具塞試管中，按正文測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，以隨行溶劑為空白，依法測(cè)定吸收度，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，即得。
藥物組合物中總皂苷的含量29.24mg/g 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 平均回收率＝97.77％ RSD＝0.93％ 8三批中試樣品含量測(cè)定 取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測(cè)定結(jié)果 實(shí)驗(yàn)例14 藥物組合物中三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1含量測(cè)定 1儀器與試藥 1.1儀器 Alltech UVIS-201高效液相色譜儀，Alltech HPLC system工作站(美國) KQ250B超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司) ZK-30ABX電熱真空干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器公司) Mettler AE240電子天平(上海梅特勒公司) 1.2試藥 三七皂苷R1中國藥品生物制品檢定所 人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所 人參皂苷Rb1中國藥品生物制品檢定所 所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購于德國Merck公司水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
2色譜條件 色譜柱Diamonsil(TM)C18，5μm；250×4.6mm； 流動(dòng)相乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫； 梯度洗脫系統(tǒng) 流速1ml/min，兩次進(jìn)樣間隔平衡時(shí)間3min； 檢測(cè)波長203nm； 柱溫30℃； 進(jìn)樣量10μl 理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
檢測(cè)波長的選擇 三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1，均在203nm波長處有最大吸收，因此選用203nm作為本品的檢測(cè)波長。
3對(duì)照品溶液的制備 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；再分別吸取上述溶液各1ml，置同-5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每ml含三七皂苷R10.124mg、人參皂苷Rg10.284mg和人參皂苷Rb10.428mg的對(duì)照品溶液。
4供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱取2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
5陰性供試品溶液的制備 照本品處方稱取除三七外的其它成分，按本品制備工藝制成陰性供試品。精密稱取2.40572g，照供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，作為陰性供試品溶液。
6系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 根據(jù)上述色譜條件得到三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、混合對(duì)照品、樣品、陰性色譜圖，理論板數(shù)n大于3000，樣品中各對(duì)照品峰與相近峰分離清晰完全，分離度大于1.5，陰性無干擾。
7線性關(guān)系的考察 取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人參皂苷Rg11.42mg和人參皂苷Rb12.14mg的溶液，作為貯備液；精密量取前述對(duì)照品貯備液各0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，依次注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程為三七皂苷R1Y＝208361.76X-1972.29 r＝0.9995； 人參皂苷Rg1Y＝293933.01X-13982.75 r＝0.9994； 人參皂苷Rb1Y＝192503.18X-9202.56 r＝0.9993。
結(jié)果表明三七皂苷R1在0.248-2.480μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好； 人參皂苷Rg1在0.568-5.680μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好； 人參皂苷Rb1在0.856-8.560μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
線性關(guān)系試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果 三七皂苷R1X(μg)0.248 0.496 0.992 1.488 1.9842.480 峰面積 50263 100526 200106 305920 413269 511633 人參皂苷Rg1X(μg) 0.568 1.136 2.272 3.408 4.5445.680 峰面積 160211 319838 652866 984424 1298968 1675375 人參皂苷Rb1X(μg) 0.856 1.712 3.424 5.136 6.8488.560 峰面積 160162 338350 629600 961552 1313361 1650024 8精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，連續(xù)測(cè)定5次，考察對(duì)照品溶液精密度。
精密度試驗(yàn) 9穩(wěn)定性試驗(yàn) 9.1對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人參皂苷Rg10.284mg/ml和人參皂苷Rb10.428mg/ml)，分別在0、2、6、10、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，考察對(duì)照品溶液穩(wěn)定性。
對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 9.2供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中精密稱取2.30587g，按正文供試品溶液制備下進(jìn)行操作，分別在0、2、6、10、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
穩(wěn)定性試驗(yàn) 結(jié)果表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。
10重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約2.5g(共5份)，按正文測(cè)定法供試品溶液制備和測(cè)定項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性試驗(yàn) 結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好。
11、加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約1.25g(共5份)，分別置50ml量瓶中，另精密量取混合對(duì)照品溶液4ml(其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的濃度為0.4136mg/ml、2.3172mg/ml、2.4408mg/ml)，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
經(jīng)測(cè)定已知藥物組合物中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量分別是1.525、7.909、10.318mg/g。
三七皂苷R1加樣回收率試驗(yàn) 平均回收率＝97.00％；RSD＝1.64％。
人參苷Rg1加樣回收率試驗(yàn) 平均回收率＝97.64％；RSD＝0.67％。
人參苷Rb1加樣回收率試驗(yàn) 平均回收率＝97.69％；RSD＝0.99％。
12三批中試樣品含量測(cè)定 取本品樣品三批，按正文所述方法處理。
三批樣品含量測(cè)定結(jié)果 實(shí)驗(yàn)例15 黃芪甲苷含量測(cè)定 儀器與試藥 (1)主要儀器 高效液相色譜儀 P-426 Alltech 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 2000ES Alltech 高效液相色譜儀 1100 series Agilent 超聲波清洗機(jī) KQ250B 昆山市超聲儀器有限公司 電熱真空干燥箱 ZK-30ABX 北京中興偉業(yè)儀器公司 電子分析天平 AE240 Mettler (2)試藥黃芪甲苷中國藥品生物制品檢定所 所用甲醇、乙腈均為色譜純，均購于天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)開發(fā)公司 水為重蒸水，其它試劑均為分析純。
照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
1色譜條件 色譜柱Platinum C18 4.6×250mm 5μm； 流動(dòng)相乙腈-水(32∶68)； 流速1.0ml/min； 蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)漂移管溫度110℃，氣流量2.7L/min； 柱溫30℃。
根據(jù)上述條件得到黃芪甲苷、供試品、陰性色譜圖；黃芪甲苷峰達(dá)到基線分離，與相近峰分離清晰完全，保留時(shí)間適中，峰形尖銳，對(duì)稱，理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
2對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥器減壓干燥24小時(shí)的黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，即得。
3供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中精密稱取約5g，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
4測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl，供試品溶液200μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷的含量，即得。
5線性關(guān)系考察 精密吸取黃芪甲苷(0.2085mg/ml)對(duì)照品溶液2、4、8、12、16μl，注入液相色譜儀，以黃芪甲苷的量(μg)的常用對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積的常用對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
黃芪甲苷線性關(guān)系 黃芪甲苷回歸方程Y＝1.0700X+6.0705； 黃芪甲苷相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999； 黃芪甲苷在0.417～3.336μg范圍內(nèi)線性良好。
6精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次。
對(duì)照品溶液精密度試驗(yàn) 結(jié)果表明，精密度良好。
7穩(wěn)定性試驗(yàn) 7.1對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(0.1668mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別于0、6、12、24、48小時(shí)重復(fù)測(cè)定1次，記錄峰面積積分值。
對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在48小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
7.2供試品穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，分別在0、6、12、24、48小時(shí)重復(fù)測(cè)定1次，記錄峰面積積分值。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 結(jié)果表明，供試品溶液在48小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性試驗(yàn) 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中精密稱取約5g(共5份)，按正文供試品溶液的制備和測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行處理，分別從中精密吸取20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
供試品重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明，重現(xiàn)性良好。
9加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中精密稱取約2.5g(共5份)，分置具塞錐形瓶中；精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品水溶液(0.1687mg/ml)1ml(共6份)，分置上述具塞錐形瓶中，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。精密吸取續(xù)濾液20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。經(jīng)測(cè)定已知藥物組合物中黃芪甲苷的含量分別是0.07097mg/g。
黃芪甲苷加樣回收率試驗(yàn) 黃芪甲苷平均回收率＝97.56％；RSD＝0.69％ 10三批樣品黃芪甲苷含量測(cè)定 取中試樣品三批，按正文所述方法處理，精密吸取20μl進(jìn)樣測(cè)定。
三批中試樣品黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果 實(shí)驗(yàn)例16 藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素含量測(cè)定 1儀器與試藥 1.1主要儀器 高效液相色譜儀 LC-2010AHT SHIMADZU 紫外/可見分光光度儀 TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限公司 電子分析天平 BP211D SARTORIUS 超聲波清洗機(jī) KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司 1.2試藥 甲醇 分析純 北京化工廠 乙腈 色譜純 迪馬公司 磷酸 分析純 北京化學(xué)試劑公司 2芒柄花素、毛蕊芒柄花素 由中國藥品生物制品檢定所提供芒柄花素、毛蕊芒柄花素，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測(cè)定純度均大于98％，符合含量測(cè)定用對(duì)照品要求。
3檢測(cè)波長的選擇 取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品適量，精密稱定，分加甲醇制成每1ml各含約0.05mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，芒柄花素、毛蕊芒柄花素均在250nm處有最大吸收，選擇250nm作為芒柄花素、毛蕊芒柄花素含量測(cè)定的檢測(cè)波長。
4色譜條件 色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT； 色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm； 流動(dòng)相甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％； 流速1.0ml/min； 柱溫30℃； 進(jìn)樣量10μl； 檢測(cè)波長250nm。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.005mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于2000，芒柄花素、毛蕊芒柄花素色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5線性關(guān)系考察 精密量取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.04808mg、毛蕊芒柄花素0.04912mg)0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。分別以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
芒柄花素標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果 回歸方程Y＝6249485.23x+73.50 相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999 結(jié)果表明芒柄花素在0.019232μg～0.09616μg范圍內(nèi)線性良好。
毛蕊芒柄花素標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果 回歸方程Y＝5184777.08x-37.30 相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999 結(jié)果表明毛蕊芒柄花素在0.019648μg～0.09824μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，芒柄花素、毛蕊芒柄花素的標(biāo)準(zhǔn)曲線均過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量。
6精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.004808mg、毛蕊芒柄花素0.004912mg)10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定5次，考察對(duì)照品溶液精密度，測(cè)定結(jié)果見下表。
精密度試驗(yàn) 結(jié)果表明，對(duì)照品溶液精密度良好。
7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 7.1對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.004808mg、毛蕊芒柄花素0.004912mg)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
對(duì)照品溶液穩(wěn)定件試驗(yàn) 結(jié)果表明，對(duì)照品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
7.2供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測(cè)定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 9加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.25g，精密稱定，置5ml量瓶中；精密量取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品混合溶液(每1ml分別含芒柄花素0.01136mg、毛蕊芒柄花素0.01152mg)1ml(共5份)，分置上述5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
藥物組合物中芒柄花素的含量為0.04971mg/g；毛蕊芒柄花素的含量為0.04937mg/g 芒柄花素加樣回收率實(shí)驗(yàn) 平均回收率＝97.42％，RSD＝0.92％ 毛蕊芒柄花素加樣回收率實(shí)驗(yàn) 平均回收率＝97.75％，RSD＝1.70％ 10樣品含量測(cè)定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測(cè)定法項(xiàng)下的操作。
含量測(cè)定
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)該發(fā)明組方的凍干粉針適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至20分鐘，乙腈的比例為從4％升至25％，從20分鐘至40分鐘，乙腈的比例為從25％升至45％，從40分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從45％升至70％，從60分鐘至70分鐘，乙腈的比例為從70％升至80％，從70分鐘至80分鐘，乙腈的比例為從80％升至100％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長為254±2nm，柱溫25℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有21個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)凍干粉針?biāo)幬锝M合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜； (6)將待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，符合下列要求 I.計(jì)算待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％。
實(shí)施例2采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)凍干粉針適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長203±2nm，柱溫30℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有15個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)凍干粉針中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜； (6)將待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，符合下列要求 I.計(jì)算待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％。
實(shí)施例3采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備精密稱取本發(fā)明組方凍干粉針適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-1％冰醋酸，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至20分鐘，乙腈的比例為從3％升至22％，從20分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從22％升至46％，從45分鐘至65分鐘，乙腈的比例為從46％升至73％，從65分鐘至75分鐘，乙腈的比例為從73％升至81％，從75分鐘至80分鐘，乙腈的比例為從81％升至100％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長為254±2nm，柱溫25℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有20個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)凍干粉針中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜； (6)將待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，符合下列要求 I.計(jì)算待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％。藥物組合物藥物組合物 實(shí)施例4采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)凍干粉針適量，加乙醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-1％冰醋酸，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長203±2nm，柱溫30℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)13批供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有13個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)凍干粉針中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜； (6)將待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，符合下列要求 I.計(jì)算待測(cè)凍干粉針的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)凍干粉針指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％。
實(shí)施例5采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備取本發(fā)明組方注射液1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； (2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為甲醇-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，甲醇的比例為從7％升至40％，從15分鐘至30分鐘，甲醇的比例為從40％升至55％，從30分鐘至45分鐘，甲醇的比例為從55％升至75％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從75％升至85％，從60分鐘至40分鐘，甲醇的比例為從85％升至100％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長為254±2nm，柱溫25℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有22個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)注射液藥物組合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)注射液的指紋圖譜； (6)將待測(cè)注射液的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，符合下列要求 I.計(jì)算待測(cè)注射液的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)注射液指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％。
實(shí)施例6采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜 (1)供試品溶液的制備取注射液作為供試品溶液； (2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液； (3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，甲醇的比例為20％，從10分鐘至40分鐘，甲醇的比例為從20％升至40％，從45分鐘至60分鐘，甲醇的比例為從400％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長203±2nm，柱溫40℃； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有14個(gè)； (5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)注射液中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)注射液的指紋圖譜； (6)將待測(cè)注射液的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，符合下列要求 I.計(jì)算待測(cè)注射液的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00； II.待測(cè)注射液指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％； III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％。
實(shí)施例7凍干粉針中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針1g，加甲醇10ml提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實(shí)施例8凍干粉針中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例9凍干粉針中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針5g，用正丁醇20ml提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例10凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別 取待測(cè)凍干粉針2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例11凍干粉針中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)中凍干粉針5g，加乙醇20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液10ml溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例12凍干粉針中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針5g，加甲醇10ml溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解后加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例13凍干粉針中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針5g，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水32％∶68％為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例14凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針3g，加甲醇10ml提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例15凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)凍干粉針0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例16凍干粉針中野黃芩苷的含量測(cè)定 取待測(cè)凍干粉針0.25g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例17凍干粉針中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定 取待測(cè)凍干粉針2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(xiàng) (1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg； (2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg； (3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg； (4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例18凍干粉針中總皂苷的含量測(cè)定 取待測(cè)凍干粉針50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例19凍干粉針中黃芪甲苷的含量測(cè)定 取待測(cè)凍干粉針5g，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇80ml洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg。
實(shí)施例20凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量測(cè)定 取待測(cè)凍干粉針0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下兩項(xiàng) (1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg； (2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
實(shí)施例21注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液10ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水7∶2∶1∶0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例22注射液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液5ml，置25ml量瓶中，加水定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液45％∶55％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例23注射液中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液20ml，蒸干，殘?jiān)眉状?ml，作為供試品溶液；取三七對(duì)照藥材適量，加二氯甲烷回流提取，棄去二氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正丁醇-醋酸乙酯-水5∶1∶33的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例24注射液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別 取待測(cè)注射液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫在35℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例25注射液中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液20ml，蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液10ml溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用正丁醇20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇5∶0.8為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例26注射液中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液20ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解后加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例27注射液中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液20ml，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、30％甲醇30ml、65％甲醇80ml洗脫，收集65％甲醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.5％冰醋酸30％∶70％為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例28注射液中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液30ml，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙醇-醋酸乙酯-水3∶4∶3∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例29注射液中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法 取待測(cè)注射液10ml，蒸干，殘?jiān)眉状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為65％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫40℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例30注射液中野黃芩苷的含量測(cè)定 取待測(cè)注射液30ml，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，已經(jīng)-1％冰醋酸水溶液40％∶60％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例31注射液中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量測(cè)定 取待測(cè)注射液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％冰醋酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min檢測(cè)波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下幾項(xiàng) (1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg； (2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg； (3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg； (4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例32注射液中總皂苷的含量測(cè)定 精密量取待測(cè)注射液0.8ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液1ml，高氯酸4ml，搖勻，60℃水浴上加熱7分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例33注射液中黃芪甲苷的含量測(cè)定 取待測(cè)注射液20ml，加水20ml溶解后用水飽和正丁醇提取，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、30％甲醇30ml、65％甲醇80ml洗脫，收集65％甲醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.5％冰醋酸30％∶70％為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg。
實(shí)施例34注射液中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量測(cè)定 取待測(cè)注射液10ml，蒸干，殘?jiān)眉状歼m量使溶解并定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為65％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下兩項(xiàng) (1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg； (2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
實(shí)施例35片劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法 取待測(cè)片劑，粉碎，從中取約1g，加醋酸乙酯10ml提取，離心，上清液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水7∶2∶1∶∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例36片劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法 取本品0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.5％甲酸水溶液45％∶55％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例37片劑中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄層色譜鑒別方法 取本品粉末10g，用水溶解，濾過，濾液用水飽和正丁醇20ml提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右掖?ml溶解，作為供試品溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加乙醚回流提取，棄去乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水10∶35∶20∶8在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
實(shí)施例38片劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R的液相色譜鑒別 取本品粉末10g，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，已經(jīng)-0.5％甲酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至13分鐘，乙腈的比例為18％，從13分鐘至20分鐘，乙腈的比例由18％上升至42％，從20分鐘至25分鐘，乙腈的比例為42％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫在40℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例39片劑中黃芪的薄層色譜鑒別方法 取本品粉末10g，加正丁醇20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液10ml溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯20ml提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醇9∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例40片劑中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法 取本品10g，加乙醇40ml超聲處理使溶解，取出，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解后加于中性氧化鋁柱，用50％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml溶解后加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水15∶5∶5的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例41片劑中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法 取本品粉針10g，加水20ml溶解后用醋酸乙酯提取，每次40ml，合并醋酸乙酯液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，醋酸乙酯液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、35％乙醇50ml、65％乙醇50ml洗脫，收集65％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，45％∶55％甲醇-0.5％甲酸為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例42片劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的薄層色譜鑒別方法 取本品粉末6g，加甲醇10ml提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水3∶2∶5∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
實(shí)施例43片劑中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的液相色譜鑒別方法 取本品1g，精密稱定，置5ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，流動(dòng)相B的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，流動(dòng)相B的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，流動(dòng)相B的比例為65％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫35℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
實(shí)施例44片劑中野黃芩苷的含量測(cè)定 取本品0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.5％甲酸水溶液45％∶55％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg。
實(shí)施例45片劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量測(cè)定 取本品粉末10g，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相40ml，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，已經(jīng)-0.5％甲酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至13分鐘，乙腈的比例為18％，從13分鐘至20分鐘，乙腈的比例由18％上升至42％，從20分鐘至25分鐘，乙腈的比例為42％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫在40℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng) (1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg； (2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg； (3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg； (4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg。
實(shí)施例46片劑中總皂苷的含量測(cè)定 取本品粉針0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加3％香草醛-冰醋酸溶液1ml，高氯酸2.0ml，搖勻，70℃水浴上加熱10分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg。
實(shí)施例47片劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定 取本品粉針10g，加水20ml溶解后用醋酸乙酯提取，每次40ml，合并醋酸乙酯液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，醋酸乙酯液蒸干，殘?jiān)铀?ml溶解后通過D101大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，依次用水50ml、35％乙醇50ml、65％乙醇50ml洗脫，收集65％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状?ml溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，45％∶55％甲醇-0.5％甲酸為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg。
實(shí)施例48凍干粉針中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的含量測(cè)定 取本品粉末1g，精密稱定，置5ml量瓶中，加流動(dòng)相適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加流動(dòng)相定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸水溶液，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，流動(dòng)相B的比例為從45％升至55％，從10分鐘至20分鐘，流動(dòng)相B的比例為從55％升至65％，從30分鐘至50分鐘，流動(dòng)相B的比例為65％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫35℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下兩項(xiàng) (1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg； (2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
權(quán)利要求
1、一種以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容
(1)指紋圖譜測(cè)試，包括以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種；
(2)黃芪對(duì)照藥材、三七對(duì)照藥材、野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1中全部或部分成分的鑒別測(cè)試方法；
(3)野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、總皂苷中全部或部分成分的含量測(cè)試方法。
2、按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種
a、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
(2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；
(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測(cè)波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；
(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～50個(gè)；
(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；
(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部
I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；
II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；
III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±20％；
b、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
(2)參照物溶液的制備取適量黃芪和三七藥材中的主要活性成分對(duì)照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、黃芪甲苷中的一種，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合適濃度，作為參照物溶液；
(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈或甲醇-水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測(cè)波長為190～400nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；
(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～40個(gè)；
(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；
(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部
I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；
II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；
III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±20％。
3、按照權(quán)利要求2所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜中的一種或兩種
a、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)藥物組合物適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，即得；
(2)參照物溶液的制備取芒柄花素，用甲醇溶解并稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；
(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至20分鐘，乙腈的比例為從4％升至25％，從20分鐘至40分鐘，乙腈的比例為從25％升至45％，從40分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從45％升至70％，從60分鐘至70分鐘，乙腈的比例為從70％升至80％，從70分鐘至80分鐘，乙腈的比例為從80％升至100％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長為254±2nm，柱溫25℃；
(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～30個(gè)；
(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪黃酮類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；
(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部
I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；
II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；
III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相對(duì)偏差不得超過±10％；
b、采用液相色譜法測(cè)試以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備精密稱取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，搖勻，即得；
(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；
(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至14分鐘，乙腈的比例為15％，從14分鐘至45分鐘，乙腈的比例為從15％升至30％，從45分鐘至60分鐘，乙腈的比例為從30％升至80％，流速為1ml/min、檢測(cè)波長203±2nm，柱溫30℃；
(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測(cè)得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其它共有色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，共有峰有3～20個(gè)；
(5)以(1)～(3)所述方法作為待測(cè)藥物組合物中以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜的測(cè)試手段，制備待測(cè)樣品的指紋圖譜；
(6)將待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對(duì)比，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部
I.計(jì)算待測(cè)藥物組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；
II.待測(cè)藥物組合物指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；
III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對(duì)偏差不得超過±10％。
4、按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種
a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3％～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液或0.3～10％三氯化鐵乙醇溶液，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視或105℃烘1～15分鐘后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為200～410nm；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；
c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Rb1對(duì)照品、三七皂苷R1對(duì)照品中的一種或幾種，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，棄去三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚液，殘?jiān)铀柡驼〈蓟虼姿嵋阴ヌ崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，80℃～160℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；
d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別
取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；
e、藥物組合物中黃芪的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.05％～5％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至3～6，用醋酸乙酯或正丁醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴セ蚣状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇1～30∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
f、藥物組合物中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用10％～70％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板或聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-水1～30∶1～20∶0.2～10的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％～50％硫酸乙醇溶液，80～160℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
g、藥物組合物中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～15％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；
h、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～20∶0.1～3為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下或紫外光燈365nm或254nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
i、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
5、按照權(quán)利要求4所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的鑒別方法包括以下中的一種或幾種
a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點(diǎn)于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；
b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；
c、藥物組合物中三七、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對(duì)照藥材、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種，制備對(duì)照溶液；三七對(duì)照藥材溶液的制備取三七對(duì)照藥材適量，加三氯甲烷回流提取，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
d、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的液相色譜鑒別
取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；
e、藥物組合物中黃芪的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加乙醇提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.3％氫氧化鈉溶液溶解，濾過，濾液用鹽酸條件pH值至5～6，用醋酸乙酯提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)哟姿嵋阴ト芙?，作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材、同法制成對(duì)照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇10∶1為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
f、藥物組合物中黃芪甲苷的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解后加于中性氧化鋁柱，用40％甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀芙夂蠹铀柡驼〈继崛?，合并正丁醇液，用水洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水13∶7∶2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；
g、藥物組合物中黃芪甲苷的液相色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇或70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰；
h、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的薄層色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；另取芒柄花素、毛蕊芒柄花素中的一種或兩種，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水2.5∶3∶4∶0.5為展開劑，展開，展距5cm，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；
i、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的液相色譜鑒別方法
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至20分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對(duì)照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰。
6、按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種
a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或流動(dòng)相或水溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或或甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液2％～30％∶2％～30％∶96％～40％或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為200～410nm；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于2mg；
b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動(dòng)相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測(cè)波長為190～410nm范圍內(nèi)的一個(gè)或幾個(gè)或蒸發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)
每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；
每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；
每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；
每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于6mg；
c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛一冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，搖勻，30～80℃水浴上加熱3～50分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以黃芪甲苷或人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或三七皂苷R1計(jì)，不得少于10mg；
d、藥物組合物中黃芪甲苷的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用正丁醇或醋酸乙酯提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，15％～85％∶85％～1 5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為190～410nm或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.02mg；
e、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇或乙醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇或乙腈，流動(dòng)相B為水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長為190～410nm，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng)
(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.01mg；
(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.01mg。
7、按照權(quán)利要求6所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物含量的測(cè)試方法是以下一種或幾種方法
a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為335nm；以外標(biāo)一點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于4mg；
b、藥物組合物中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中一種或幾種的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一種或幾種對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至15分鐘，乙腈的比例為20％，從15分鐘至21分鐘，乙腈的比例由20％上升至40％，從21分鐘至25分鐘，乙腈的比例為20％；流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長203nm，柱溫為30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或幾項(xiàng)
(1)每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于5mg；
(2)每單位量含人參皂苷Rb1的限度不得少于7mg；
(3)每單位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；
(4)每單位量含人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1的總和的限度不得少于12mg；
c、藥物組合物中總皂苷的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴或流水冷卻，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液，以人參皂苷Rg1為對(duì)照品，同法制得對(duì)照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測(cè)定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于20mg；
d、藥物組合物中黃芪甲苷的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，加水溶解后用水飽和正丁醇提取，合并提取液，用氨試液洗滌，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙夂笸ㄟ^D101大孔吸附樹脂柱，依次用水、40％乙醇、70％乙醇洗脫，收集70％乙醇洗脫部分，蒸干，殘?jiān)眉状既芙饣蛳♂屩梁线m濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以黃芪甲苷對(duì)照品的甲醇或乙醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，32％∶68％乙腈-水為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黃芪甲苷的限度不得少于0.04mg；
e、藥物組合物中芒柄花素、毛蕊芒柄花素的一種或兩種的含量測(cè)定
取待測(cè)藥物組合物適量，加甲醇提取，提取液作為供試品溶液；以芒柄花素、毛蕊芒柄花素對(duì)照品的甲醇溶液為對(duì)照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為水，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至10分鐘，水的比例為從40％升至50％，從10分鐘至30分鐘，水的比例為從50％升至60％，從30分鐘至50分鐘，水的比例為60％，檢測(cè)波長為250nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算，待測(cè)藥物組合物以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，含量限度應(yīng)為以下一項(xiàng)或兩項(xiàng)
(1)每單位量含芒柄花素的限度不得少于0.02mg；
(2)每單位量含人毛蕊芒柄花素的限度不得少于0.02mg。
8、按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞花素、三七、黃芪制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物制成的注射制劑的含量測(cè)定結(jié)果，按照重量百分比計(jì)算，野黃芩苷、黃芪甲苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1、總皂苷中的全部或部分物質(zhì)的總含量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由燈盞花素與三七、黃芪或二者的提取物、有效部位制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該組方制劑中以黃芪黃酮類成分特征為主和以黃芪皂苷類、三七皂苷類成分特征為主的指紋圖譜測(cè)試方法和/或燈盞花素、三七、黃芪的鑒別測(cè)試方法和/或含量測(cè)定方法，本發(fā)明為該組方制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴(yán)格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時(shí)為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測(cè)方法，為確保患者用藥的有效性、安全性提供了數(shù)字化的說明。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1951417SQ20051010939
公開日2007年4月25日 申請(qǐng)日期2005年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月19日
發(fā)明者于文風(fēng) 申請(qǐng)人:北京奇源益德藥物研究所