專利名稱：7,16－海松二烯酸用于制備抗艾滋病藥物的用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，是7，16-海松二烯酸用于制備抗艾滋病藥物的用途。
背景技術(shù)：
香榧(Torreya grandis cv.Merrilli)為紅豆杉科榧屬植物，是一種生長在我國南方的高大喬木。其種子為香榧子，為著名干果。種子外層有一層假種皮，在種子加工過程中作為廢棄物除去。從假種皮中分離得到一種7，16-海松二烯化學成分，經(jīng)采用紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振方法進行結(jié)構(gòu)解析，確定其化學結(jié)構(gòu)為7，16-海松二烯(G.MalallahM.Afzal，M.Kurian and S.GulshanMImpact of oil pollution on some desert plant，Environment International，1998，24(8)919-924)具有以下化學結(jié)構(gòu) 但其用途迄今未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明對7，16-海松二烯酸提供一種制備抗艾滋病藥物的用途。
經(jīng)體外試驗發(fā)現(xiàn)，該化合物對艾滋病毒HIV-1蛋白酶有顯著的抑制活性，半數(shù)抑制濃度為33.68μg/ml。對整合酶亦顯示有顯著的抑制活性，半數(shù)抑制濃度為45.79μg/ml。故可用于制備抗艾滋病的藥物。
具體實施例方式
本發(fā)明的制備方法如下一、由香榧假種皮提取7，16-海松二烯酸的制備方法1.提取香榧假種皮經(jīng)粉碎后用5-8倍量的石油醚浸泡，滲濾3次，然后藥渣用10倍量的85％乙醇滲濾提取，提取液回收得浸膏，浸膏用2倍水混懸后，用等量的乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取物。
2.分離乙酸乙酯萃取物進行硅膠柱層析，用石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1～7∶3進行梯度洗脫，薄層檢測，收集含該化學成分的流份，再經(jīng)Sephadex LH-20柱層析純化，用二氯甲烷∶甲醇＝4∶1洗脫，得7，16-海松二烯酸。
3.結(jié)構(gòu)鑒定白色針晶，mp 126～129℃；分子式C20H30O2；紅外光譜Vmaxcm-13400，1667，1606，1489；電子轟擊質(zhì)譜m/z302[M+]，287，273，257，241；核磁共振氫譜(CD)Cl3，ppm)δ5.85(1H，dd，J＝16.2，10.8Hz，H-16)，4.97(1H，dd，J＝16.2，0.8Hz，H-17)，4.91(1H，dd，J＝0.8，10.8Hz，H-17)，5.37(1H，br，H-7)，核磁共振碳譜(CDCl3，ppm)δ38.8(C-1)，17.9(C-2)，37.0(C-3)，46.3(C-4)，45.0(C-5)，25.1(C-6)，120.9(C-7)，135.6(C-8)，52.0(C-9)，35.0(C-10)，20.0(C-11)，36.1(C-12)，36.7(C-13)，46.1(C-14)，21.5(C-15)，150.2(C-16)，109.2(C-17)，185.4(C-18)，17.0(C-19)，15.2(C-20)。
當然7，16-海松二烯酸也可用化學方法合成。
二、抗艾滋病毒蛋白酶或整合酶活性檢測方法如下1.抗HIV-1蛋白酶活性試驗測試原理HIV-1蛋白酶在適當反應條件和反應體系中可將熒光標記底物切開，熒光強度就降低。故可將7，16-海松二烯酸加入該反應體系，通過檢測酶反應產(chǎn)物中熒光強度的變化來反映酶的活性變化，從而反映其對酶的抑制作用。
測試材料和方法1.HIV-1 PR由國家新藥篩選中心提供，-85℃保存。
2.配制7，16-海松二烯酸溶液臨用前溶于DMSO或雙蒸水配成1mg/ml濃度，2倍稀釋，各5個稀釋度。
3.陽性對照藥印地那韋(indinavir)，葛蘭素公司提供。
4.底物20個和30個寡核苷酸，MP公司合成。
5.測試方法樣品稀釋后加入含有熒光標記底物的反應緩沖液中，并加入基因工程靶酶，在最佳反應條件下孵育，用FLUO star Galaxy熒光儀測定熒光值。
測試結(jié)果該化學成分抑制HIV-1PR的IC50為33.68μg/ml。
2.抗HIV-1整合酶活性試驗測試原理用合成的30個寡核苷酸作供體底物，用合成的20個寡核苷酸作為靶底物，在96孔板包被供體底物加入純化的HIV-1整合酶，進行ELISA反應，檢測靶DNA的鏈轉(zhuǎn)移的產(chǎn)物，以生物素標記的堿性磷酸酶系統(tǒng)顯色，酶標儀測定OD值。在反應體系中加入樣品可用于篩選該酶的抑制劑。
測試材料和方法1.HIV-1 IN由國家新藥篩選中心提供。
2.樣品處理臨用前將其溶于水或DMSO配成1mg/ml濃度，用雙蒸水作5倍稀釋，4個稀釋度。
3.陽性對照藥牛膝多糖硫酸酯，上海有機所提供。
4.供體底物和靶底物上海生物工程有限公司合成。
5.測試方法樣品稀釋后加入供體底物包被96孔板中，并加入含有基因工程靶酶和biotin-靶底物的反應Buffer中，在最佳反應條件下孵育，以生物素標記的堿性磷酸酶系統(tǒng)顯色，測定405nm吸收值OD值。
測試結(jié)果該化學成分抑制HIV-1 IN的IC50為45.79μg/ml。
實施例17，16-海松二烯酸的制備取浙江產(chǎn)的香榧假皮種6公斤，用30升石油醚冷浸3天后滲濾，藥渣用60公斤85％乙醇滲濾提取，收集乙醇滲濾液，減壓回收，得乙醇浸膏1.3公斤，浸膏用2.6公斤混懸后，用等量的乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取液，減壓回收乙酸乙酯，得浸膏620克。
將上述浸膏進行硅膠柱層析，用石油醚∶乙酸乙酯(9∶1～7∶3)約30升進行洗脫，每200毫升為1流份，合并第110～130流份，減壓回收溶劑，殘留物再經(jīng)凝膠SephadexHL-20柱層析，用二氯甲烷∶甲醇(4∶1)5升進行洗脫，每50毫升為1流份，合并第15～20流份，回收溶劑，得純7，16-海松二烯酸18毫克。
權(quán)利要求
1.7，16-海松二烯酸在制備抗艾滋病藥物中的應用，其化學結(jié)構(gòu)式如下
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領域，是7，16－海松二烯酸用于制備抗艾滋病藥物的用途。經(jīng)體外抗艾滋病毒蛋白酶或整合酶活性檢測，其對艾滋病毒HIV－1蛋白酶的半數(shù)有效抑制濃度IC
文檔編號A61P31/18GK1977833SQ20051011090
公開日2007年6月13日 申請日期2005年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月29日
發(fā)明者易楊華, 周大錚, 李玲, 劉寶姝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學