專(zhuān)利名稱(chēng)：擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
老年性癡呆主要包括阿爾茨海默病(AD)和血管性癡呆(VD)，阿爾茨海默病約占60～70％，血管性癡呆約占20～30％。
阿爾茨海默病是一種由多源性因素引起的原發(fā)性大腦神經(jīng)退行性病變，為特有的中樞膽堿能神經(jīng)元的大量死亡及丟失。主要發(fā)生在皮質(zhì)區(qū)、杏仁核、嗅球和少數(shù)皮質(zhì)下核團(tuán)，如前腦基底部的Meynert氏核、藍(lán)斑核、外側(cè)下丘腦和內(nèi)側(cè)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等，伴有神經(jīng)炎斑、神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成，并有含β折片結(jié)構(gòu)的淀粉樣蛋白(Aβ)沉積。Aβ沉積導(dǎo)致膽堿能神經(jīng)細(xì)胞的損害，膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶水平下降和乙酰膽堿遞質(zhì)合成的降低和抑制釋放?；颊叩闹饕憩F(xiàn)為大腦皮層獲得性高級(jí)障礙，包括記憶、語(yǔ)言、感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)等功能的進(jìn)行性損害。
血管性癡呆(VD)是由腦血管因素導(dǎo)致腦組織損害引起的癡呆綜合征，包括缺血性腦卒中、出血性腦卒中以及急或慢性缺氧性腦血管病變引起的癡呆，可能是老年性癡呆中僅有的可預(yù)防和治療的一種癡呆，血管性癡呆能加重阿爾茨海默病的癥狀。血管性癡呆病程呈階梯性惡化，早期功能缺陷呈“斑塊”狀分布，有局灶性神經(jīng)癥狀和體征。絕大多數(shù)研究證實(shí)，腦血管病是血管性癡呆的基本原因。綜上所述，開(kāi)發(fā)研制新型有效、不良反應(yīng)極小的治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物已經(jīng)是刻不容緩。
擬人參皂苷元(ocotillol)是由擬人參皂苷F11(從西洋參中分離提取的四環(huán)三萜類(lèi)人參二醇型皂苷)轉(zhuǎn)化得到的苷元。
擬人參皂苷元結(jié)構(gòu)式本發(fā)明人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)擬人參皂苷元具有治療或預(yù)防老年性癡呆的醫(yī)藥用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病(AD)的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防血管性癡呆(VD)的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的擬人參皂苷元在用于上述任一用途時(shí)，其使用劑量范圍為5mg～400mg/天，優(yōu)選50mg～200mg/天。
本發(fā)明提供了以擬人參皂苷元為活性成分的用于治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物組合物，擬人參皂苷元的含量為5mg～400mg，優(yōu)選為50mg～200mg。
本發(fā)明所述的擬人參皂苷元可以按CN200410023510.7中所述的方法制備。
本發(fā)明中使用的擬人參皂苷元可以單獨(dú)使用或以藥物組合物形式使用。藥物組合物包括作為活性成分的擬人參皂苷元及藥用載體。該藥物組合物可以通過(guò)口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或靜脈途徑給藥。藥物組合物可以以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、糖漿、口嚼劑、貼劑或口服液的形式存在。本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明人通過(guò)下列試驗(yàn)證實(shí)了擬人參皂苷元(ocotillol)具有治療或預(yù)防老年性癡呆的作用，但并不限于此。試驗(yàn)所用的擬人參皂苷元由山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心天然藥物化學(xué)研究室提供，經(jīng)HPLC檢測(cè)含量＞95％。
具體實(shí)施例方式制備例1制備擬人參皂苷元將10升甘油加入小型具油浴加熱和攪拌的反應(yīng)罐中，再分別加入1kg的氫氧化鈉和1kg西洋參莖葉皂苷，攪拌，常壓下持續(xù)加熱升溫，升溫至210℃下保溫反應(yīng)40分鐘，反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液傾入60倍冷水中并攪拌，析出沉淀。靜置，過(guò)濾，水洗至中性，即得擬人參皂苷元粗品。再將此粗品經(jīng)硅膠柱層析，以正己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫，回收溶劑，以甲醇-乙酸乙酯混合溶劑重結(jié)晶得到40g擬人參皂苷元，收率4％。
制備例2制備擬人參皂苷元片劑稱(chēng)取擬人參皂苷元50g，葡甲胺30g，與120g微晶纖維素用5％PVP-乙醇溶液制粒，干燥后，加1％的硬脂酸鎂，壓片，規(guī)格為50mg/粒(以擬人參皂苷元計(jì))。
制備例3制備擬人參皂苷元膠囊稱(chēng)取擬人參皂苷元50g，葡甲胺45g，與95g微晶纖維素用5％PVP-乙醇溶液制粒，干燥后，裝入膠囊，規(guī)格為50mg/粒(以擬人參皂苷元計(jì))。
制備例4制備擬人參皂苷元滴丸稱(chēng)取擬人參皂苷元5g，葡甲胺6g，溶于41gPEG6000中，90℃下保溫，滴速1個(gè)/秒，規(guī)格為5mg/粒(以擬人參皂苷元計(jì))，丸重約為50mg，溶出度90％以上/30分鐘。
試驗(yàn)例1擬人參皂苷元對(duì)側(cè)腦室注射β淀粉肽所致癡呆大鼠記憶獲得性障礙的影響1材料擬人參皂苷元(ocotillol)按制備例方法制備。
β淀粉樣肽25～35片段，Sigma公司。
哈伯因(石杉?jí)A甲，Huperzine A)，河南竹林眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠產(chǎn)品，批號(hào)為0008036。
大鼠跳臺(tái)裝置，北京醫(yī)科大學(xué)儀器廠生產(chǎn)。
Y型水迷宮裝置，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所產(chǎn)品。
動(dòng)物普通級(jí)Wistar大鼠，雌雄各半，體重250g-280g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)。
2方法與結(jié)果取大鼠60只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，ocotillol小劑量組(0.5mg/kg)，ocotillol中劑量組(5mg/kg)，ocotillol大劑量組(40mg/kg)，哈伯因組(0.2mg·kg-1)，各組動(dòng)物分別按文獻(xiàn)陳勤，夏宗勤，胡雅兒.知母皂苷元對(duì)擬癡呆大鼠β-淀粉樣肽沉積及膽堿能系統(tǒng)功能的影響.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2002，18(4)390-3.所述方法，行腦定位右側(cè)單側(cè)腦室注射β淀粉樣肽4μg/只，正常對(duì)照組注射等量生理鹽水。造模結(jié)束后，灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)30天后按文獻(xiàn)徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京人民衛(wèi)生出版社，1991，662所述方法進(jìn)行訓(xùn)練。訓(xùn)練前，先將大鼠放在梯子附近使其自行爬上2次，之后分3階段進(jìn)行訓(xùn)練。第1階段用擋板在A處攔住，使大鼠從A處開(kāi)始訓(xùn)練；第2階段用擋板攔住B處，由此開(kāi)始訓(xùn)練；第3階段由起點(diǎn)C處開(kāi)始訓(xùn)練。每一階段學(xué)習(xí)訓(xùn)練2次，休息5min后再進(jìn)行下一階段訓(xùn)練。全部訓(xùn)練完畢后使大鼠休息5min，再將其放于爬梯附近使其自行爬上2次，然后直接將其放于C處，記錄大鼠游完全程到達(dá)爬梯的時(shí)間和進(jìn)入盲端的次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù))，5min不能游出者按5min計(jì)，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h后重復(fù)測(cè)試，作為記憶成績(jī)。
結(jié)果如表1顯示，模型組大鼠的學(xué)習(xí)成績(jī)、記憶成績(jī)與假手術(shù)組相比，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多、游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)；ocotillol劑量組、哈博因組與模型組比，錯(cuò)誤次數(shù)、游泳時(shí)間明顯減少。表明ocotillol對(duì)β-淀粉肽所致癡呆大鼠記憶獲得性障礙有明顯的治療作用。
表1 ocotillol對(duì)血管性癡呆大鼠水迷宮試驗(yàn)的影響(x±s，n＝10)

**P＜0.001vs假手術(shù)組；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs模型對(duì)照組試驗(yàn)例2擬人參皂苷元對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響1材料ocotillol按制備例方法制備。
尼莫地平片由正大青春寶藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)000605，每片20mg。
硝普鈉由北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)005071。
大鼠跳臺(tái)裝置，北京醫(yī)科大學(xué)儀器廠生產(chǎn)。
Y型水迷宮裝置，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物所產(chǎn)品。
動(dòng)物普通級(jí)Wistar大鼠，雌雄各半，體重250g-280g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)。
2方法與結(jié)果2.1擬人參皂苷元對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響取大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，尼莫地平組(10mg/kg)，ocotillol小劑量組(0.5mg/kg)，ocotillol中劑量組(5mg/kg)，ocotillol大劑量組(40mg/kg)，分別灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，3天后按文獻(xiàn)周小青，劉旺華，李花，等.丹龍醒腦片對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織興奮性氨基酸影響的實(shí)驗(yàn)研究.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，22(2)4-7所述血管性癡呆大鼠模型建立方法，將水合氯醛麻醉的大鼠腹腔注射0.05％硝普鈉(5ml/kg)，常規(guī)消毒，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉，10min后，再通10min，再夾閉10min。再通后，傷口嚴(yán)格消毒，縫合，回籠室溫(27±0.5)℃飼養(yǎng)并灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)30天。假手術(shù)組麻醉及手術(shù)過(guò)程同模型組，但不阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不注射硝普鈉。
造模后第11天開(kāi)始按文獻(xiàn)周小青，劉旺華，李花，等.丹龍醒腦片對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化和鈣超載的影響.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，22(3)1-5所述方法進(jìn)行學(xué)習(xí)訓(xùn)練。訓(xùn)練前先將動(dòng)物放入箱中自由活動(dòng)3min，熟悉環(huán)境，然后將動(dòng)物置于圓臺(tái)上，接通銅柵電源，記錄動(dòng)物3min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)(動(dòng)物跳下圓臺(tái)次數(shù))及受電擊總時(shí)間，作為學(xué)習(xí)訓(xùn)練成績(jī)。24h后直接將動(dòng)物置于圓臺(tái)上，記錄其放入至第1次下臺(tái)受到電擊的時(shí)間(潛伏期)、3min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)及受電擊總時(shí)間，作為記憶測(cè)試成績(jī)。
結(jié)果如表2顯示，模型組大鼠的學(xué)習(xí)成績(jī)、記憶成績(jī)與假手術(shù)組相比，錯(cuò)誤次數(shù)及受電擊時(shí)間顯著增多，潛伏期(記憶成績(jī))明顯縮短。Ocotillol劑量組、尼莫地平組與模型組比較，錯(cuò)誤次數(shù)、受電擊時(shí)間均明顯減少；潛伏期(記憶成績(jī))明顯延長(zhǎng)。
表2 ocotillol對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響(x±s)

**P＜0.01vs假手術(shù)組；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs模型對(duì)照組2.2擬人參皂苷元對(duì)血管性癡呆大鼠水迷宮試驗(yàn)的影響分組、給藥、造模同上。造模后第30天按文獻(xiàn)徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京人民衛(wèi)生出版社，1991，662所述方法進(jìn)行訓(xùn)練。訓(xùn)練前，先將大鼠放在梯子附近使其自行爬上2次，之后分3階段進(jìn)行訓(xùn)練。第1階段用擋板在A處攔住，使大鼠從A處開(kāi)始訓(xùn)練；第2階段用擋板攔住B處，由此開(kāi)始訓(xùn)練；第3階段由起點(diǎn)C處開(kāi)始訓(xùn)練。每一階段學(xué)習(xí)訓(xùn)練2次，休息5min后再進(jìn)行下一階段訓(xùn)練。全部訓(xùn)練完畢后使大鼠休息5min，再將其放于爬梯附近使其自行爬上2次，然后直接將其放于C處，記錄大鼠游完全程到達(dá)爬梯的時(shí)間和進(jìn)入盲端的次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù))，5min不能游出者按5min計(jì)，以此作為學(xué)習(xí)成績(jī)。24h后重復(fù)測(cè)試，作為記憶成績(jī)。
結(jié)果如表3顯示，模型組大鼠的學(xué)習(xí)成績(jī)、記憶成績(jī)與假手術(shù)組相比，錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多、游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)；ocotillol劑量組、尼莫地平組與模型組比，錯(cuò)誤次數(shù)、游泳時(shí)間明顯減少。
表3 ocotillol對(duì)血管性癡呆大鼠水迷宮試驗(yàn)的影響(x±s)


***P＜0.001vs假手術(shù)組；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs模型對(duì)照組試驗(yàn)例3擬人參皂苷元對(duì)血管性癡呆大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用1材料ocotillol按制備例方法制備。
尼莫地平片由正大青春寶藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)000605，每片20mg。
硝普鈉由北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)005071。
動(dòng)物普通級(jí)Wistar大鼠，雌雄各半，體重250g-280g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)。
2方法與結(jié)果2.1擬人參皂苷元對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響取大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，尼莫地平組(10mg/kg)，ocotillol小劑量組(0.5mg/kg)，ocotillol中劑量組(5mg/kg)，ocotillol大劑量組(40mg/kg)，分別灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，3天后按文獻(xiàn)周小青，劉旺華，李花，等.丹龍醒腦片對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織興奮性氨基酸影響的實(shí)驗(yàn)研究.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，22(2)4-7所述血管性癡呆大鼠模型建立方法，將水合氯醛麻醉的大鼠腹腔注射0.05％硝普鈉(5ml/kg)，常規(guī)消毒，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉，10min后，再通10min，再夾閉10min。再通后，傷口嚴(yán)格消毒，縫合，回籠室溫(27±0.5)℃飼養(yǎng)并灌胃相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7天。假手術(shù)組麻醉及手術(shù)過(guò)程同模型組，但不阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不注射硝普鈉。給藥7天后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片置10％福爾馬林中固定，經(jīng)脫水、浸蠟、包埋、切片等步驟后，制成8um厚的組織切片，甲苯胺藍(lán)染色，選擇每只大鼠視交叉與漏斗柄連線中點(diǎn)處按文獻(xiàn)劉小光，馮亦璞.丁基苯酞對(duì)局部腦缺血大鼠行為和病理改變的保護(hù)作用.藥學(xué)學(xué)報(bào).1995，30(12)896-903.所述方法用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，細(xì)胞核消失、細(xì)胞體暗染作為神經(jīng)元壞死的指標(biāo)，計(jì)算壞死神經(jīng)元數(shù)占總神經(jīng)元數(shù)的百分比。數(shù)據(jù)用x±SD表示，組內(nèi)給藥前后、組間均以參比差值法(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果顯示，模型對(duì)照組大鼠神經(jīng)元周?chē)g隙擴(kuò)大，出現(xiàn)散在的暗染神經(jīng)元，神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的皺縮。給予ocotillol組動(dòng)物有不同程度的減輕。我們以相同切面的腦片半影區(qū)來(lái)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。由表2可見(jiàn)，ocotillol大劑量、中劑量治療組皮層、紋狀體神經(jīng)元壞死百分比明顯減少，與模型對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)。表明ocotillol能夠明顯抑制癡呆大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷。
表4 ocotillol對(duì)局部腦缺血大鼠神經(jīng)元壞死百分比的影響(x±SD，n＝6)

與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01試驗(yàn)例4擬人參皂苷元急性毒性試驗(yàn)1材料ocotillol按制備例方法制備。
清潔級(jí)昆明系小鼠，18～22g，由山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)魯動(dòng)質(zhì)字200106003號(hào)。飼料由中國(guó)藥品生物制品鑒定檢驗(yàn)所提供。按SOP要求檢疫一周，剔除不合格動(dòng)物。試驗(yàn)室與飼養(yǎng)室條件一致。室溫18～25℃，濕度40～60％，過(guò)濾送風(fēng)，光照12小時(shí)。自由攝食和飲水，每日更換飲水瓶一次。
2方法2.1劑量設(shè)計(jì)動(dòng)物藥效試驗(yàn)顯示小鼠口服10mg/kg即有明顯的抗老年性癡呆作用。擬人參皂苷元能夠配制的可供灌胃用的混懸液為100mg/ml，小鼠灌胃給藥的最大允許體積為1ml/只，故設(shè)計(jì)給藥劑量為小鼠5.0g/kg，每日給藥1次。
2.2分組、給藥取健康小鼠40只，雌雄各半。隨機(jī)分為生理鹽水組和擬人參皂苷元組，每組20只。稱(chēng)重后，按5.0g/kg的劑量、1ml/20g的給藥體積灌胃，對(duì)照組灌胃等體積生理鹽水。給藥后密切觀察小鼠的毒性反應(yīng)和死亡情況；4小時(shí)后，改為每天觀察一次，連續(xù)14天。每周測(cè)量體重1次。
3結(jié)果結(jié)果如表5所示，灌胃給予ocotillol后，小鼠活動(dòng)未見(jiàn)異常。4小時(shí)內(nèi)，未見(jiàn)耳朵、眼瞼、四足等部位顏色的改變，尿液顏色未見(jiàn)明顯異常。14天內(nèi)，小鼠毛色光亮，飲食、活動(dòng)以及體重都與對(duì)照組無(wú)顯著差異。
表5小鼠口服5.0g/kg擬人參皂苷元體重的變化(x±s)

權(quán)利要求
1.擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
2.擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物中的應(yīng)用。
3.擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元的使用劑量為5mg～400mg/天。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元的使用劑量?jī)?yōu)選為50mg～200mg/天。
6.以擬人參皂苷元為活性成分的用于治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物組合物，擬人參皂苷元的含量為5mg～400mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，擬人參皂苷元的含量?jī)?yōu)選為50mg～200mg。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的藥物組合物，其可以通過(guò)口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或靜脈途徑給藥。
9.根據(jù)要求6或7所述的藥物組合物，其可以以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、糖漿、口嚼劑、貼劑或口服液形式存在。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其優(yōu)選以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸或糖漿的形式存在。
全文摘要
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防老年性癡呆的藥物中的用途。具體地提供了其在制備治療或預(yù)防阿爾茨海默病的藥物中的應(yīng)用，在制備治療或預(yù)防血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了含有擬人參皂苷元的用于老年癡呆的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K9/14GK1762368SQ200510113960
公開(kāi)日2006年4月26日 申請(qǐng)日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月19日
發(fā)明者孫芳, 張?zhí)? 馬雙剛, 田京偉 申請(qǐng)人:山東綠葉制藥有限公司