專利名稱：淫羊藿總黃酮提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥材淫羊藿中提取總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
朝鮮淫羊藿Epimedium koreanum Nakai為《中華人民共和國藥典》收載的常用中藥淫羊藿品種之一。本品以地上部分入藥，具有補腎壯陽，強筋骨，祛風濕的功效，藥理實驗顯示具有補腎壯陽、擴張血管、抗氧化、抗菌抗病毒作用，提高機體免疫功能和預防骨質(zhì)疏松的作用。淫羊藿屬植物的化學成分，主要為黃酮、木酯素、生物堿和多糖，此外有揮發(fā)油、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞麻酸等。隨著新的分離技術(shù)在天然藥物分離方面的不斷應(yīng)用，從淫羊藿中分離獲得活性更高的化合物，為新藥的開發(fā)和研制提供更多的先導化合物。經(jīng)文獻檢索，已有報導對其進行了大量的化學研究工作，朝鮮淫羊藿藥材的化學成分較多，對其有效部位進行了技術(shù)研究，共鑒定出16個化合物，分別是淫羊藿苷A(Epimedoside A)、朝藿定A(Epimedin A)、淫羊藿次苷-I(IcarisideI)、朝藿定B(Epimedin B)、朝藿定C(Epimedin C)、淫羊藿苷(Icariin)、朝藿苷丙(KorepimedosideC)、大花淫羊藿苷F(Ikarisoside F)、朝藿苷A(Caohuoside A)、朝藿苷B(Caohuoside B)、朝藿苷E(Caohuoside E)、寶藿苷-I(icariside-II)、EpimedokoreanosideI、Epimedoside C、2″-O-rhamnoylicariside II、Epimedokoreanoside C。這些主要藥效成分的鑒定，為闡明朝鮮淫羊藿的藥理作用，制劑質(zhì)量的安全可控性做好基礎(chǔ)。
藥理學研究結(jié)果表明不同種淫羊藿在化學成分和藥理作用方面雖相似，但主成分黃酮類化合物的含量有很大差異，即使為同一種亦會因產(chǎn)地、采收季節(jié)不同而影響含量。淫羊藿植株各部位中，葉和根莖所含的黃酮類成分量較高，而莖中非常少。根莖中除黃酮類成分外，尚含較多量生物堿，故地上部分和根莖應(yīng)分開使用。淫羊藿具一定的免疫抑制作用。從成分來看，起免疫抑制作用的主要是黃酮部位，起免疫增強作用的可能為多糖部位，故淫羊藿常顯示雙相調(diào)節(jié)作用。
目前淫羊藿中淫羊藿總黃酮提取分離的方法，大多數(shù)是采用水煎煮(或醇提取)，乙酸乙酯(或正丁醇)反復萃取的方法。得到產(chǎn)品的純度只有70％左右，方法比較繁瑣，且有機溶媒對生產(chǎn)人員有一定的危害性，亦帶來一定的不安全隱患。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供通過一種提取純度較高的淫羊藿總黃酮提取工藝。
本發(fā)明取淫羊藿藥材用乙醇浸泡，置回流提取罐中加熱回流提取，濾液過濾后減壓濃縮成稠膏，加入乙醇，靜置分層，收集上清液，過濾，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，再用乙醇浸泡，靜置分層，收集上清液，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，取稠膏上于已處理好的DM130型大孔吸附樹脂柱；先用水洗脫至洗脫液無色，再用乙醇洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮成稠膏，用乙醇醇沉，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，過篩即得淫羊藿總黃酮提取物。
本發(fā)明中淫羊藿主要是朝鮮淫羊藿。
本發(fā)明中所獲得的淫羊藿總黃酮提取物中主要是淫羊藿苷和總黃酮。
本發(fā)明僅單味淫羊藿一藥，中醫(yī)稱作“單方”，藥物七情中屬“單行”。淫羊藿即為本方君藥，無臣、佐、使藥配伍。淫羊藿總黃酮則是其有效部位的提取物，溫腎助陽，對主病主癥針對性更強，功能專一，作用更加明確。古代淫羊藿常作煎劑服用，上世紀八十年代有人報告用淫羊藿浸膏片劑治療冠心病，現(xiàn)在將其有效部位提取制成注射液，改變用藥途徑，使本藥通過心脈直達病所，更有利、更有效治療冠心病。冠心病，根據(jù)其臨床表現(xiàn)，與中醫(yī)胸痹心痛病相當?！靶乇浴辈∶钤缫娪凇秲?nèi)經(jīng)》，對本病的病因、一般癥狀及真心痛的表現(xiàn)均有記載?！督饏T要略》認為“心痛”是胸痹的臨床表現(xiàn)，“胸痹緩急”即心痛時發(fā)時緩為其特點，其病機以陽微陰弦為主。根據(jù)辨證求因、審因論治原則，針對這類冠心病的治療，宜采用溫腎助陽法。本制劑選用淫羊藿為原材料，提取其有效部位總黃酮為原料，制劑而成。淫羊藿，又名仙靈脾《雷公炮炙論》，為小檗科植物淫羊藿的地上部分。其味辛、甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)。功能補腎助陽，祛風除濕，強筋健骨?！爸我磺欣滹L勞氣，補腰膝，強心力，丈夫絕陽不起，女子絕陰無子，筋骨攣急，四肢不任，老人昏耄，中年健忘”。由此可以看到，淫羊藿的功能較多，臨床治療適應(yīng)范圍較廣，“強心力”是其中一個重要方面。淫羊藿通過溫腎助陽，鼓動心陽，溫養(yǎng)心脈，改善心脈痹阻的病理，恢復心脈暢通，通則不痛，以達到消除癥狀、改善病情的目的。
具體實施例方式本發(fā)明取淫羊藿藥材用乙醇浸泡，置回流提取罐中加熱回流提取，濾液過濾后減壓濃縮成稠膏，加入乙醇，靜置分層，收集上清液，過濾，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，再用乙醇浸泡，靜置分層，收集上清液，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，取稠膏上于已處理好的DM130型大孔吸附樹脂柱(DM130型大孔吸附樹脂柱的預處理以95％乙醇冷浸24小時，濕法上柱，先用95％乙醇洗柱至洗出液無色，后用純化水洗柱，至洗出液無醇味，待上柱)；先用水洗脫至洗脫液無色，再用乙醇洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮成稠膏，用乙醇醇沉，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，過篩即得淫羊藿總黃酮提取物。
實施例1本發(fā)明取朝鮮淫羊藿藥材，以50～70％乙醇浸泡12～24小時，置回流提取罐中加熱回流提取二～三次，每次加50～70％乙醇10～20倍量，每次回流提取1～2小時，濾過，合并濾液；濾液減壓濃縮至密度約為1.05～1.30(60℃測定)的稠膏，加以10％～30％乙醇放置12～24小時，靜置分層，收集上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮至密度約為1.05～1.30(60℃測定)的稠膏，再以70％～85％乙醇放置12～24小時，靜置分層，收集上清液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至密度約為1.05～1.30(60℃測定)的稠膏，取稠膏上于已處理好的DM130型大孔吸附樹脂柱(DM130型大孔吸附樹脂柱的預處理以95％乙醇冷浸24小時，濕法上柱，先用95％乙醇洗柱至洗出液無色，后用純化水洗柱，至洗出液無醇味，待上柱)；先用水洗脫至洗脫液無色(水洗目的是除去水溶性的雜質(zhì)，如鞣質(zhì)、多糖等)，再用10％～30％乙醇(可除去葉綠素)和50～70％乙醇洗脫，洗至洗脫液無色(可洗出黃酮苷類成分)，收集50～70％乙醇洗脫液，濃縮成稠膏，用70％～85％乙醇醇沉12～24小時(可除去提取物中大多糖)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏，70～80℃真空干燥，粉碎，過篩，即得淫羊藿總黃酮提取物。
實施例2本發(fā)明取朝鮮淫羊藿藥材，以60％乙醇回流提取，濾過，濾液濃縮成稠膏，再以不同濃度的乙醇醇沉，濾過，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏，取稠膏上于已處理好的DM130型大孔吸附樹脂柱；先用水洗脫至洗脫液無色，再用25％乙醇和60％乙醇洗脫，洗至洗脫液無色，收集60％乙醇洗脫液，濃縮成稠膏，用85％乙醇醇沉，濾過，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥，粉碎，過篩，即得淫羊藿總黃酮提取物。
按本發(fā)明方法所得淫羊藿總黃酮提取物，以淫羊藿苷和總黃酮計，其中總黃酮含量可達80％以上，淫羊藿苷的含量可達30％以上。而佘白蓉、秦達念、佘運初的《淫羊藿黃酮精制方法的建立》中淫羊藿總黃酮的含量在54％左右。
功能與主治溫陽通脈，擴張冠狀血管，增加冠脈流量，用于冠心病心絞痛引起的胸痹陽氣虛衰證，癥見胸悶氣短；胸痛徹背；心悸汗出；畏寒；肢冷等。
藥理作用通過對淫羊藿總黃酮進行主要藥效學、一般藥理學、急性毒性、長期毒性及過敏性、溶血性和局部刺激性的全身給藥相關(guān)的特殊安全性試驗，證明本品療效確切，無毒無刺激性，是可供臨床使用的安全制劑。
1、淫羊藿總黃酮對大鼠血液流變學的影響試驗表明淫羊藿總黃酮能明顯降低全血粘度，紅細胞壓積，纖維蛋白原含量，與模型組比較有顯著性差異。
2、淫羊藿總黃酮對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響試驗表明淫羊藿總黃酮模型組及溶媒組大鼠注射垂體后葉素后，T波發(fā)生明顯變化。S點明顯抬高模型組靜注垂體后葉素后，可使大鼠心電圖p-p間期延長，心率減慢，淫羊藿總黃酮注射液各劑量組對之影響不明顯。
3、淫羊藿總黃酮對犬血流動力學的影響試驗表明淫羊藿總黃酮對麻醉犬的血壓(收縮壓SAP，舒張壓DAP，平均動脈壓MAP)以及心率(HR)與偽手術(shù)比較無顯著性差異(P＞0.05)。能明顯增加冠脈流量(CBF)、心輸出量(CO)、每搏輸出量(SV)、心指數(shù)(CI)、心搏指數(shù)(SI)、左室內(nèi)峰壓(LVSP)、心室收縮參數(shù)(+dp/dtmax)和心室舒張參數(shù)(-dp/dtmax)，明顯降低血管總外周阻力(TPVR)和左室舒張末期壓(LVEDP)(P＜0.05，P＜0.01)；但對心肌耗氧量和每搏功指數(shù)(SWI)影響不明顯(P＞0.05)。
4、淫羊藿總黃酮對麻醉犬心肌缺血的影響試驗表明淫羊藿總黃酮與模型組、溶媒對照組、偽手術(shù)組以及自身給藥前比較對心率、收縮壓、舒張壓均無顯著性影響(P＞0.05)；并能明顯縮小心肌梗塞范圍，與模型組及溶媒組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。對犬冠狀動脈結(jié)扎所致心肌梗塞的Δ∑-ST和ΔN-ST與模型組及溶媒對照組比均有明顯下降(P＜0.05，P＜0.01)；能明顯降低血清中LD、LDH、MDA、CK含量，增加SOD活性，與模型組及溶媒對照組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。
5、通過對淫羊藿總黃酮注射液及注射用淫羊藿總黃酮的安全性試驗血管刺激性試驗、過敏反應(yīng)試驗、溶血與凝集試驗表明，淫羊藿總黃酮注射液及注射用淫羊藿總黃酮對血管無刺激性，淫羊藿總黃酮注射液及注射用淫羊藿總黃酮無過敏反應(yīng)，淫羊藿總黃酮注射液及注射用淫羊藿總黃酮無溶血與凝集現(xiàn)象。臨床可供安全使用。
本發(fā)明開發(fā)的淫羊藿總黃酮提取物、淫羊藿總黃酮注射液、注射用淫羊藿總黃酮，對其藥材的化學成分研究結(jié)果表明，40種黃酮類化合物，其中以8-異戊烯基黃酮苷類化合物為主要成分。對淫羊藿總黃酮制劑進行了藥效學以擴張冠狀動脈血管、降低血壓等動物模型為對象，進行了藥效學實驗。結(jié)果表明本品的擴張冠狀動脈血管的作用比較顯著，很有開發(fā)研究的價值。我們將朝鮮淫羊藿總黃酮研制成靜脈注射劑供臨床使用。嚴格按照國家新藥審評辦法的有關(guān)要求，對本品的藥學研究、藥理毒理、臨床研究等內(nèi)容進行了科學、系統(tǒng)的研究和開發(fā)，研究結(jié)果表明本品及其制劑安全可靠，無毒無刺激性。
權(quán)利要求
1.一種淫羊藿總黃酮提取工藝，其特征在于取淫羊藿藥材用乙醇浸泡，置回流提取罐中加熱回流提取，濾液過濾后減壓濃縮成稠膏，加入乙醇，靜置分層，收集上清液，過濾，濾液減壓回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，再用乙醇浸泡，靜置分層，收集上清液，過濾，濾液減壓回收乙醇，濃縮成稠膏，取稠膏上于已處理好的DM130型大孔吸附樹脂柱；先用水洗脫至洗脫液無色，再用乙醇洗脫至無色，收集乙醇洗脫液，濃縮成稠膏，用乙醇醇沉，過濾，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，真空干燥，粉碎，過篩即得淫羊藿總黃酮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿總黃酮提取工藝，其特征在于淫羊藿主要是朝鮮淫羊藿。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿總黃酮提取工藝，其特征在于所獲得的淫羊藿總黃酮提取物中主要是淫羊藿苷和總黃酮。
全文摘要
一種淫羊藿總黃酮提取工藝，涉及中藥材淫羊藿中提取總黃酮的方法。本發(fā)明的目的是提供通過一種提取純度較高的淫羊藿總黃酮提取工藝。本發(fā)明取淫羊藿藥材，以乙醇回流提取，濾過，濾液濃縮成稠膏，再以不同濃度的乙醇醇沉，濾過，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏，取稠膏上于已處理好的DM130型大孔吸附樹脂柱；先用水洗脫至洗脫液無色，再用乙醇和乙醇洗脫，洗至洗脫液無色，收集乙醇洗脫液，濃縮成稠膏，用乙醇醇沉，濾過，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥，粉碎，過篩，即得淫羊藿總黃酮提取物。淫羊藿總黃酮是淫羊藿有效部位的提取物，溫腎助陽，對主病主癥針對性更強，功能專一，作用更加明確。
文檔編號A61P39/06GK1977873SQ20051011906
公開日2007年6月13日 申請日期2005年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月9日
發(fā)明者潘宇, 孫淑娜, 李欣 申請人:長春至寶藥業(yè)科技開發(fā)有限責任公司