專利名稱：抗輻射損傷藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種能預(yù)防和治療輻射損傷的抗輻射損傷藥物。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)代生活與工作環(huán)境中，到處充滿電磁輻射。按輻射產(chǎn)生原因一般可分五種天然輻射主要是指陽光照射；電器輻射是指電視廣播設(shè)備、電信產(chǎn)品(如手機、電腦等)、家用電器(如電磁爐、微波爐等)和各種工業(yè)設(shè)備的電磁輻射；醫(yī)療輻射是指X光透視、CT、核磁共振、鈷60放射治療等發(fā)出的高強度輻射；建筑材料輻射是指各種墻體和裝飾材料(如石材、瓷磚、涂料等)中異常的放射性元素所產(chǎn)生的輻射；最后一種是指核輻射，極其危險的輻射，隨著核電事業(yè)的發(fā)展，這種潛在輻射危險是不容忽視的。所有這些輻射使得現(xiàn)代人們生活在一個輻射無處不在的環(huán)境中，長期接受電磁輻射可使人在不知不覺中導(dǎo)致精力和體力減退，引發(fā)心血管疾病、腫瘤、白血病、性功能低下、死精、胎兒畸形、視力降低以及骨髓造血機能降低、神經(jīng)衰弱綜合癥、肩頸腕綜合癥、易患感冒、衰老加快等多種不良反應(yīng)。目前在我國，放射治療仍然是腫瘤治療的主要手段，腫瘤患者在接受放射治療時，機體的正常細胞也接受了同樣強度的輻射損傷，引起胃腸功能紊亂、骨髓抑制，尤其是嚴重的損傷了人體免疫系統(tǒng)，如不及時進行免疫修復(fù)，一方面可加劇殘余癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移，另一方面會繼發(fā)機體的多系統(tǒng)多器官疾病，這些問題已成為放射醫(yī)學(xué)和腫瘤治療亟待解決的問題。
目前在輻射防護和臨床腫瘤治療上用于防治輻射損傷的藥物，多為化學(xué)合成藥物，其毒副作用較大，所以開發(fā)藥食同用、抗輻射功效較強且無毒副作用天然藥物是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能有效預(yù)防和治療輻射損傷且無毒副作用的抗輻射損傷藥物。
盛產(chǎn)于長白山區(qū)的松茸〔Tricholoma matsutake(S.Ito et Imai)Sing.〕在真菌分類系統(tǒng)中隸屬于擔子菌門，口蘑屬，屬藥食兩用植物，味道鮮美獨特，富含多種氨基酸、維生素、微量元素和多糖，營養(yǎng)價值豐富，已有研究表明松茸具有免疫增強活性及較強的抗腫瘤活性；人參(Panax ginseng C.A.Mey.)為五加科多年生宿根性草本植物，具有提高腦、體力活動能力和免疫功能，增強抗應(yīng)激、抗疲勞、抗腫瘤、抗衰老及抗炎癥等作用。
本發(fā)明人通過大量實驗研究發(fā)現(xiàn)，松茸中的松茸多糖具有較好的預(yù)防和治療輻射損傷作用，與人參多糖按一定比例進行組合的協(xié)同作用對預(yù)防和治療輻射損傷的效果更為明顯。
據(jù)此，提出本發(fā)明抗輻射損傷藥物，即由下述按重量百分比混合的活性成分組成松茸多糖80-60％、人參多糖20-40％，所述的松茸多糖、人參多糖是從天然植物松茸、人參中通過水提醇沉法提取獲得。
本發(fā)明藥物的制備方法如下1.松茸多糖的提取鮮松茸去除其表面泥土，清水洗凈，置烘箱中40～60℃恒溫烘干至恒重，粉碎過40目篩，得松茸干粉。索氏提取法回流去除脂肪，得藥渣，按與水1∶40～1∶20的比例水提，溫度控制在90-100℃之間，浸提三次，3h/次，合并濾液，抽濾去除雜質(zhì)，加熱濃縮至原液的1/40后，90％以上乙醇沉淀兩次，最后將沉淀干燥、研磨得多糖粉末。
2.人參多糖的提取采用在提取人參皂甙過程中產(chǎn)生的大量人參根“廢渣”直接水提，溫度控制在95℃以上，水提三次，3h/次，合并濾液，抽濾去除雜質(zhì)，加熱濃縮至原液的1/40后，90％以上乙醇沉淀三次，最后將沉淀干燥、研磨得多糖粉末。
3.將松茸多糖粉末與人參多糖粉末按設(shè)定比例混合均勻，即制備成了本發(fā)明抗輻射損傷藥物的活性成分。
本發(fā)明藥物的活性成分可輔以任何藥學(xué)上可接受的載體或輔料制成任何一種常規(guī)的口服劑型，如膠囊劑、口服液、片劑等。
本發(fā)明藥物具有清除體內(nèi)自由基、增強特異和非特異免疫力、保護造血功能、抑制腫瘤細胞等功能，特別適用于預(yù)防和治療輻射引起的機體損傷。
本發(fā)明藥物的藥效學(xué)試驗如下一、動物藥效學(xué)實驗(一)受試藥物對X射線照射小鼠氧化功能的保護作用1.實驗材料SOD、MDA、CAT、GSH-Px試劑盒ICR小鼠Philips深部X線治療機。
2.實驗步驟清潔級雄性ICR小鼠購于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部動物中心，20±2g，150只，隨機分為正常對照組(NC)、輻射對照組(IC)和低(400mg/kg)、中(800mg/kg)、高(1200mg/kg)三個受試藥物組，每日灌胃給藥，0.1ml/10g，正常對照組和輻射對照組給予等量的生理鹽水，連續(xù)7天，第8天除正常對照組外均接受2Gy劑量的照射，于照后第1、5、14天每組各取50只摘眼球取血，離心，獲得血清。測定血清中的SOD、MDA、CAT、GSH-Px含量，使用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。
3.實驗結(jié)果受試藥物對X射線照射小鼠氧化功能的保護作用實驗結(jié)果詳見表1至表4。
表1.受試藥物對X射線照射小鼠血清中SOD活性的影響(U/ml)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較表2.受試藥物對X射線照射小鼠血清中CAT活性的影響(nmol/ml)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較表3.受試藥物對X射線照射小鼠血清中MDA含量的影響(ku/L)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較表4.受試藥物對X射線照射小鼠血清中GSH-Px含量的影響(ku/L)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較
(二)受試藥物對X射線照射小鼠免疫系統(tǒng)的保護作用1.實驗材料1640培養(yǎng)液小牛血清2.實驗步驟1)模型制作同(一)2)脾細胞對刀豆蛋白A(ConA)反應(yīng)性測定采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法。調(diào)小鼠脾細胞濃度為1×107個/ml，ConA濃度為10ug/ml，于96孔平底培養(yǎng)板上每孔各加入100ul的脾細胞，每個樣品設(shè)三復(fù)孔，刺激孔每孔加入100ul ConA，細胞對照孔每孔加入100ul培養(yǎng)液，37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，終止培養(yǎng)前2h每孔加入10ulMTT，培養(yǎng)結(jié)束后，吸出上清，每孔加入二甲亞楓100ul，570nm酶標儀測定吸光度OD值。
3.實驗結(jié)果受試藥物對X射線照射小鼠免疫系統(tǒng)的保護作用實驗結(jié)果見表5。
表5.受試藥物對X射線照射小鼠脾細胞ConA誘導(dǎo)增殖反應(yīng)的影響

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較(三)受試藥物對X射線照射小鼠造血系統(tǒng)的保護作用1.實驗材料Giemsa染液熒光顯微鏡752紫外分光光度計倒置顯微鏡2.實驗步驟(1)模型制作同上述實驗(一)(2)骨髓成纖維祖細胞集落形成單位(CFU-F)測定1)骨髓細胞懸液制備脫頸椎法處死小鼠，無菌條件下取股骨，用5ml注射器吸取RPMI1640培養(yǎng)液將骨髓細胞全部沖入到廣口瓶中，200目細胞過濾網(wǎng)過濾制備成單細胞懸液，計數(shù)有核細胞，備用。
2)配制培養(yǎng)體系配制10ml培養(yǎng)體系，20％小牛血清，1×107個細胞，其余用培養(yǎng)液補齊，植入培養(yǎng)瓶內(nèi)，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，終止培養(yǎng)后，倒掉培養(yǎng)液，生理鹽水沖洗兩遍，甲醇固定10分鐘，Giemsa染色12分鐘，倒置顯微鏡下觀察，計數(shù)超過50個細胞以上的為一個集落。
(3)單細胞凝膠電泳測定骨髓細胞DNA損傷
1)制片和電泳磨砂載玻片上鋪正常熔點瓊脂糖(NMA)為第一層，第二層為80ul低熔點瓊脂糖(LMA)與10ul細胞混合液，第三層鋪正常熔點瓊脂糖，置于冰盒上凝固。將鋪好的凝膠玻片置于預(yù)冷的新鮮配制的細胞裂解液中，4℃避光裂解1.5小時，避光解旋40min后，調(diào)電壓25V，電流為300mA，避光電泳20min。
2)中和與染色取出玻片，Tris緩沖液沖洗中和至中性，EB染色，熒光顯微鏡下觀察，每張玻片計數(shù)100個細胞，求拖尾率。
(4)骨髓DNA含量的測定剪開股骨頭，0.005mol·L-1氯化鈣10ml將全部骨髓沖入離心管中，置4℃冰箱30min，2500轉(zhuǎn)/min離心15min，棄去上清液，將沉淀物加0.2ml 0.1mol·L-1高氯酸5ml充分混合，90℃加熱15min冷卻，過濾，濾液用紫外分光光度計于260nm處測定A260，計算DNA含量，DNA(μg)＝40×50×A(260nm)吸光度值。
3.實驗結(jié)果(1)受試藥物對X射線照射小鼠CFU-F的影響見表6。
表6.受試藥物對X射線照射CFU-F的影響(個/1×107)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較(2)受試藥物對X射線照射小鼠骨髓DNA損傷的影響見表7。
表7.受試藥物對X射線照射小鼠骨髓DNA損傷的影響(個/1×105)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較(3)受試藥物對X射線照射骨髓DNA含量的影響見表8。
表8.受試藥物對X射線照射骨髓DNA含量的影響(ug/m)

*p＜0.05與輻射對照組比較，**p＜0.01與輻射對照組比較(四)急性毒性實驗清潔級ICR小鼠100只，體重20±2g，隨機分為五組，雌雄各半，采用完全法分組，最高劑量為15000mg/kg，最低劑量為5000mg/kg體重，經(jīng)口灌胃給藥，給藥后觀察小鼠全身反應(yīng)，連續(xù)觀察2周。
實驗結(jié)果各組小鼠未有死亡，生長狀態(tài)良好，體重增加，LD50＞5000mg/kg。
二、臨床實驗我們選擇18例放療科接受一個療程放射治療的宮頸癌、肝癌、乳腺癌患者并隨機分為兩組，實驗組和對照組。在其他臨床相同的情況下，實驗組在接受放射治療前，每日口服受試藥物所制備成的口服液2次，連續(xù)服用1周，接受放射治療后，繼續(xù)服用3周；對照組不服用本受試藥物。實驗結(jié)果表明，與對照組相比，服用受試藥物的患者，惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)得到改善，食欲增加，一般體重都略有增加，睡眠、虛弱無力狀態(tài)很快得到改善。
具體實施例方式
以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。
實施例1本發(fā)明抗輻射損傷藥物的制備。
1.松茸多糖的提取將松茸干粉索式回流去除脂肪物質(zhì)后，水提三次，每次加水量為干粉體積的40倍，合并三次水煎液，經(jīng)過濾、濃縮后，用90-100％濃度乙醇沉淀三次，揮干溶酶后，得松茸多糖固體粉末。
2.人參多糖的提取采用在提取人參皂甙過程中產(chǎn)生的大量人參根“廢渣”直接水提，溫度控制在95℃以上，水提三次，3h/每次，合并濾液，抽濾去除雜質(zhì)，加熱濃縮至原液的1/40后，用90％以上濃度乙醇沉淀三次，最后將沉淀干燥、研磨得人參多糖粉末。
3.將上述提取的松茸多糖粉末和人參多糖粉末按松茸多糖為80-60％、人參多糖為20-40％的重量百分比混合均勻，即為本發(fā)明藥物的活性成分組合物。
將該活性成分組合物輔以任何藥學(xué)上可接受的載體或輔料可制成任何一種常規(guī)的口服劑型抗輻射損傷藥物。
實施例2抗輻射損傷藥物膠囊的制備。
稱取80g實施例1方法制備的活性成分組合物置于混合器中，邊攪拌邊緩慢加入15g淀粉，噴入適量純水，高速攪拌5分鐘，濕粒過16目篩，置烘箱60℃干燥后整粒，加入硬脂酸鎂5g混勻，滅菌，裝0號膠囊(0.25g/膠囊)，即得膠囊劑型抗輻射損傷藥物。
實施例3抗輻射損傷藥物口服液的制備。
稱取80g實施例1方法制備的活性成分組合物置于混合器中，邊攪拌邊緩慢加入蜂蜜10g、蔗糖6g、檸檬酸2g、硬脂酸鎂2g，混合均勻后，加1L蒸餾水混勻制備成溶液，滅菌，分裝成100瓶(10ml/瓶)，即得本發(fā)明口服液劑型抗輻射損傷藥物。
實施例4抗輻射損傷藥物含片的制備。
稱取80g實施例1方法制備的活性成分組合物置于混合器中，邊攪拌邊緩慢加入蜂蜜6g、蔗糖10g、檸檬酸2g、硬脂酸鎂2g，混合均勻后加適量蒸餾水混勻干燥、制片(0.25g/片)，即得本發(fā)明含片劑型抗輻射損傷藥物。
權(quán)利要求
1.一種抗輻射損傷藥物，其特征在于由下述按重量百分比混合的活性成分組成松茸多糖80-60％、人參多糖20-40％，所述的松茸多糖、人參多糖是從天然植物松茸、人參中通過水提醇沉法提取獲得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗輻射損傷藥物，其特征在于輔以任何藥學(xué)上可接受的載體或輔料制成任何一種常規(guī)的口服劑型。
全文摘要
本發(fā)明提出一種能預(yù)防和治療輻射損傷的抗輻射損傷藥物，由下述按重量百分比混合的活性成分組成松茸多糖80－60％、人參多糖20－40％，所述的松茸多糖、人參多糖是從天然植物松茸、人參中通過水提醇沉法提取獲得。本發(fā)明藥物具有清除體內(nèi)自由基、增強特異和非特異免疫力、保護造血功能、抑制腫瘤細胞等功能，特別適用于預(yù)防和治療輻射引起的機體損傷。
文檔編號A61P17/00GK1823810SQ20051011907
公開日2006年8月30日 申請日期2005年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月15日
發(fā)明者李娟 , 李雪靜, 李靜, 王宏芳, 孫志偉, 徐坤, 吳新宇, 侯雷 申請人:吉林大學(xué)