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一種治療缺血性心臟病的中藥組合物、制劑及其用途的制作方法

文檔序號(hào):1098514閱讀:174來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:一種治療缺血性心臟病的中藥組合物、制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種治療心血管疾病的中藥組合物,具體地說(shuō)涉及從丹參中提取的有效組分紫草酸(Lithospermic acid),丹酚酸B(Salvianolic acid B),丹酚酸E(Salvianolic acid E)與丹皮中提取的有效組分芍藥苷(Paeoniflorin)、沒(méi)食子酰芍藥苷(Galloyl-Paeoniflorin)、牡丹皮苷h(mudanpioside h)的組合,含有該組合物的制劑,及其在制備具有抗心肌細(xì)胞缺血作用藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
冠心病和心絞痛是危害人類健康的“第一殺手”,近年來(lái),隨著我國(guó)人口老年化以及人們工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化,冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多,嚴(yán)重威脅著人民的身心健康。我國(guó)因心腦血管疾病死亡者占總死亡人口的百分比,已由1957年的12.07%上升到2001年的42.6%,每年死于心腦血管疾病者達(dá)200萬(wàn)。
目前,有很多中藥用于心腦血管疾病的治療,如血府逐瘀湯,復(fù)方丹參滴丸等。
雙丹方由丹參和丹皮組成,主治心血瘀阻型胸痹心痛(缺血性心臟病)。缺血性心臟病屬中醫(yī)學(xué)胸痹范疇,患者血流表現(xiàn)為凝、粘、聚、滯狀態(tài)。中醫(yī)病機(jī)以血瘀阻滯心絡(luò)為主要矛盾,心失所養(yǎng),不通則痛,故活血化瘀為第一要法。雙丹方立足治本,丹參丹皮相須為用,活血化瘀,通絡(luò)止痛,恰合心血瘀阻型胸痹心痛病機(jī)。丹參活血中又兼有養(yǎng)血之功,活血而不傷正,通中有補(bǔ),相輔相成。雙丹顆粒于1996年上市,被列為2000年國(guó)家級(jí)星火項(xiàng)目計(jì)劃(00B101D7400035)。藥理研究表明雙丹方劑能顯著改善犬急性心肌缺血范圍和缺血程度,減少梗塞面積,顯著抑制血清肌酸磷酸激酶活性和乳酸脫氫酶釋放,抑制血小板粘附性和聚集性、抑制血栓形成;對(duì)垂體后葉素所致冠脈流量減少有明顯保護(hù)作用。
中藥通過(guò)多途徑、多靶點(diǎn)、整合調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)揮藥效作用,具有系統(tǒng)性特點(diǎn)。但是,傳統(tǒng)中藥化學(xué)成分復(fù)雜,藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確,難于質(zhì)量控制。治療心腦血管疾病的各種中藥有效部位的功效各有不同和側(cè)重,用有效部位的配伍代替全方,既具備中藥整體作用的特點(diǎn),同時(shí)降低了其復(fù)雜性,便于藥物的質(zhì)量控制。因此,提供更加方便有效的中藥有效部位復(fù)方制劑具有重要的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療缺血性心臟病的中藥有效組分復(fù)方組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供該組合物的用途。
本發(fā)明還提供了含有該組合物的制劑。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)施本發(fā)明的中藥組合物由丹參提取物和丹皮提取物組成,各組分的重量百分比為丹皮提取物15%~25%;丹參提取物75%~85%。
優(yōu)選的,本發(fā)明的中藥組合物各組分的重量百分比為丹皮提取物16%~24%;丹參提取物76%~84%。
更優(yōu)選的,本發(fā)明的中藥組合物各組分的重量百分比為丹皮提取物18%~22%丹參提取物78%~82%。
最佳的,本發(fā)明的中藥組合物各組分的重量百分比為丹皮提取物19%~21%;丹參提取物79%~81%。
本發(fā)明的中藥組合物中,丹參提取物中紫草酸的含量為3~4%,丹酚酸B的含量為92~94%,丹酚酸E的含量為1~2%;丹皮提取物中芍藥苷的含量為15~25%,沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為45~55%,牡丹皮苷h的含量為35~45%。
本發(fā)明中藥組合物的制備方法包括以下步驟(1)丹參提取物的制備將丹參粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇,加熱提取得提取液I,棄之。藥渣加入乙醇,加熱提取得提取液II,將提取液II濃縮成浸膏,用甲醇溶解浸膏,采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用低濃度甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液I,然后改換高濃度甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液II,濃縮干燥后得樣品;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品;制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱,流動(dòng)相為水和乙腈,梯度洗脫。
(2)丹皮提取物的制備將丹皮藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇,加熱提取得提取液,將提取液濃縮成浸膏,并將其與硅膠進(jìn)行拌樣,用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動(dòng)相,得洗脫液I,棄之,然后改換氯仿和甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液II,將洗脫液II濃縮干燥后得樣品;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品;制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱,流動(dòng)相為水和乙腈,梯度洗脫;(3)按照處方量將丹參提取物和丹皮提取物混合。
優(yōu)選的,本發(fā)明的中藥組合物的制備方法包括以下步驟(1)丹參提取物的制備取丹參藥材,將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8~1.2),加熱回流0.8~1.2小時(shí),提取1~3次,合并濾液得提取液I,棄之。在藥渣中加入60%~80%乙醇,加熱回流0.8~1.2小時(shí),提取1~3次,濾液合并得提取液II,將提取液II濃縮成浸膏,用40%~60%甲醇溶解浸膏,采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用3%~8%甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液I,然后改換50%~70%甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液II,濃縮干燥后得樣品;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品;制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱,流動(dòng)相為水和乙腈,梯度洗脫,流速為2.8~3.2ml/min,柱溫為室溫;(2)丹皮提取物的制備取丹皮藥材,將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8~1.2),加熱回流0.8~1.2小時(shí),提取1~3次,合并濾液得提取液,將提取液濃縮成浸膏,并將其與硅膠進(jìn)行拌樣,用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用石油醚和乙酸乙酯(47~53∶1)作為流動(dòng)相,得洗脫液I,棄之,然后改換氯仿和甲醇(8~13∶1)作為流動(dòng)相,得洗脫液II,將洗脫液II濃縮干燥后得樣品;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品;制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱,流動(dòng)相為水和乙腈,梯度洗脫,流速為2.8~3.2ml/min,柱溫為室溫;(3)按照處方量將丹參提取物和丹皮提取物混合。
最佳的,本發(fā)明的中藥組合物的制備方法是(1)丹參提取物的制備取丹皮藥材,將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1),加熱回流1小時(shí),提取2次,濾液合并得提取液I。藥渣加入70%乙醇,加熱回流1小時(shí),提取2次,濾液合并得提取液II,將提取液II濃縮成浸膏,用50%甲醇溶解浸膏,采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用5%甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液I,然后改換60%甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液II,濃縮干燥后得樣品;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18;10.0mm×250mm,5μm),流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B),梯度洗脫程序如下0min時(shí),流動(dòng)相A為85%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為15%的乙腈溶液;10in時(shí),流動(dòng)相A為79%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為21%的乙腈溶液;15min時(shí),流動(dòng)相A為69%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為31%的乙腈溶液;30min時(shí),流動(dòng)相A為63%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為37%的乙腈溶液;35min時(shí),流動(dòng)相A為15%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為85%的乙腈溶液;45min時(shí),流動(dòng)相A為15%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為85%的乙腈溶液;流速為3ml/min,柱溫為室溫;樣品用100%乙醇溶解,經(jīng)制備液相色譜分離,在時(shí)間段17.5~23.6min收集溶液,溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分;(2)丹皮提取物的制備取丹皮藥材,將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1),加熱回流1小時(shí),提取2次,合并濾液得提取液;將提取液濃縮成浸膏,并將其與硅膠進(jìn)行拌樣,用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用石油醚和乙酸乙酯(50∶1)作為流動(dòng)相,得洗脫液I,棄之,然后改換氯仿和甲醇(10∶1)作為流動(dòng)相,得洗脫液II,將洗脫液II濃縮干燥后得樣品;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品;制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(LichrospherC18;10.0mm×250mm,5μm),流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B),梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí),流動(dòng)相A為80%的水溶液、流動(dòng)相B為20%的乙腈溶液;40分鐘時(shí),流動(dòng)相A為20%的水溶液、流動(dòng)相B為80%的乙腈溶液;50分鐘時(shí),流動(dòng)相A為5%的水溶液、流動(dòng)相B為95%的乙腈溶液;流速為3ml/min,柱溫為室溫;樣品用100%乙醇溶解,經(jīng)制備液相色譜分離,在時(shí)間段14.2~18.4min收集溶液,溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分;(3)按照重量百分比,將丹皮提取19%~21%,丹參提取物79%~81%混合。
本發(fā)明中藥組合物可以加入輔料,按照常規(guī)制備方法制成藥劑學(xué)上任何一種形式。
本發(fā)明的中藥組合物還可以和其他具有相同療效的藥物成分配伍,按照常規(guī)方法制成藥劑學(xué)上接受的任何一種制劑。
所述的制劑包括針劑和口服制劑。其中針劑包括注射液、滴注液、粉針劑;口服制劑包括顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。
本發(fā)明的有益之處是本發(fā)明提供的中藥組合物是從丹參、丹皮藥材中提取出的有效成分的組合物,相比較現(xiàn)有的治療心腦血管疾病的中藥,其化學(xué)成分簡(jiǎn)單明確,在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制,在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。


圖1為本發(fā)明丹參提取物的HPLC分析圖;圖2為本發(fā)明丹皮提取物的HPLC分析圖。
具體實(shí)施例方式
下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容及有益效果,該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例一 本發(fā)明中藥組合物的制備取丹參藥材250g,將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1),加熱回流1小時(shí),提取2次,濾液合并得提取液I。藥渣加入70%乙醇,加熱回流1小時(shí),提取2次,濾液合并得提取液II,將提取液II濃縮成浸膏得138.3g,用50%甲醇溶解浸膏,采用ODS-C18柱對(duì)其進(jìn)行分離,首先用5%甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液I,然后改換60%甲醇作為流動(dòng)相,得洗脫液II,濃縮干燥后得樣品13.83g;用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱(Lichrospher C18;10.0mm×250mm,5μm),流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B),梯度洗脫程序如下0min時(shí),流動(dòng)相A為85%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為15%的乙腈溶液;10in時(shí),流動(dòng)相A為79%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為21%的乙腈溶液;15min時(shí),流動(dòng)相A為69%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為31%的乙腈溶液;30min時(shí),流動(dòng)相A為63%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為37%的乙腈溶液;35min時(shí),流動(dòng)相A為15%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為85%的乙腈溶液;45min時(shí),流動(dòng)相A為15%的水+0.1%醋酸溶液,流動(dòng)相B為85%的乙腈溶液;流速為3ml/min,柱溫為室溫;樣品用100%乙醇溶解,經(jīng)制備液相色譜分離,在時(shí)間段17.5~23.6min收集溶液,溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分5.70g。
取丹皮藥材250g,將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1),加熱回流1小時(shí),提取2次,濾液合并得提取液。將提取液濃縮成浸膏得22g,將浸膏和硅膠拌樣,用正相硅膠柱進(jìn)行分離,首先用石油醚和乙酸乙酯(50∶1)作為流動(dòng)相,得洗脫液I,然后改換氯仿和甲醇(10∶1)作為流動(dòng)相,得洗脫液II,濃縮干燥后得6.2g樣品。用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品。制備色譜的分離條件色譜柱為漢邦半制備柱(Lichrospher C18;10.0mm×250mm,5μm),流動(dòng)相為水(A)和乙腈(B),梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí),流動(dòng)相A為80%的水溶液、流動(dòng)相B為20%的乙腈溶液;40分鐘時(shí),流動(dòng)相A為20%的水溶液、流動(dòng)相B為80%的乙腈溶液;50分鐘時(shí),流動(dòng)相A為5%的水溶液、流動(dòng)相B為95%的乙腈溶液;流速為3ml/min,柱溫為室溫。樣品用100%乙醇溶解,經(jīng)制備液相色譜分離,在時(shí)間段14.2~18.4min收集溶液,溶液經(jīng)濃縮干燥后得到丹皮提取物0.58g。
實(shí)施例二 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將1.5×10-6克丹皮提取物與8.5×10-6克丹參提取物混合得混合物A。
實(shí)施例三 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將1.6×10-6克丹皮提取物與8.4×10-6克丹參提取物混合得混合物B。
實(shí)施例四 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將2.2×10-6克丹皮提取物與7.8×10-6克丹參提取物混合得混合物C。
實(shí)施例五 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將2.1×10-6克丹皮提取物與7.9×10-6克丹參提取物混合得混合物D。
實(shí)施例六 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將2.0×10-6克丹皮提取物與8.0×10-6克丹參提取物混合得混合物E。
實(shí)施例七 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將1.5×10-2~2.5×10-2克丹皮提取物與7.5×10-2~8.5×10-2克丹參提取物混合物,使混合中丹皮提取物占總重的15%~25%與丹參提取物占總重的75%~85%。
實(shí)施例八 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將1.6×10-2~2.4×10-2克丹皮提取物與7.6×10-2~8.4×10-2克丹參提取物混合物,使混合中丹皮提取物占總重的16%~24%與丹參提取物占總重的76%~84%。
實(shí)施例九 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將1.8×10-2~2.2×10-2克丹皮提取物與7.8×10-2~8.2×10-2克丹參提取物混合物,使混合中丹皮提取物占總重的18%~22%與丹參提取物占總重的78%~82%。
實(shí)施例十 本發(fā)明中藥組合物的制備按實(shí)施例一的方法提取得到丹參提取物和丹皮提取物,將1.7×10-2~1.9×10-2克丹皮提取物與7.9×10-2~8.1×10-2克丹參提取物混合物,使混合中丹皮提取物占總重的25%~28%與丹參提取物占總重的79%~81%。
實(shí)施例十一 本發(fā)明的丹參提取物中有效成分含量測(cè)定(1)丹參提取物中的紫草酸(Lithospermic acid),丹酚酸B(Salvianolic acid B),丹酚酸E(Salvianolic acid E)的含量測(cè)定(高效液相色譜法)色譜條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm);采用梯度洗脫,流動(dòng)相A相為0.2%冰醋酸水溶液,流動(dòng)相B相為含0.2%冰醋酸的乙腈溶液;梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí),流動(dòng)相A為80%的0.2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為20%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液;15分鐘時(shí),流動(dòng)相A為50%的0.2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液;20分鐘時(shí),流動(dòng)相A為50%的0.2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液;流速0.5mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)全波長(zhǎng);柱溫30℃;ELSD條件氮?dú)?.81/min,漂移管溫度105℃。
供試品溶液的制備稱取本品,用甲醇溶液溶解在容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,即得。
測(cè)定方法精密吸取供試品溶液,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
(2)上述丹參提取物HPLC-ELSD指紋圖譜測(cè)定方法參見(jiàn)(1)上述丹參提取物中紫草酸,丹酚酸B,丹酚酸E的含量測(cè)定(高效液相色譜法)。記錄色譜時(shí)間為25分鐘。
分析結(jié)果丹參有效組分的HPLC-ELSD分析譜圖見(jiàn)圖1,圖1中的1、2、3號(hào)峰分別是紫草酸,丹酚酸B,丹酚酸E,其含量分別為3.56%,93.02%,1.51%。
實(shí)施例十二 本發(fā)明的丹皮提取物中有效成分含量測(cè)定(1)丹皮提取物中芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、牡丹皮苷h的含量測(cè)定(高效液相色譜法)色譜條件色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm);采用梯度洗脫,流動(dòng)相A相為0.2%冰醋酸水溶液,流動(dòng)相B相為含0.2%冰醋酸的乙腈溶液;梯度洗脫程序如下0分鐘時(shí),流動(dòng)相A為90%的0.2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為10%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液;10分鐘時(shí),流動(dòng)相A為50%的0.2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為50%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液;30分鐘時(shí),流動(dòng)相A為5%的0.2%冰醋酸水溶液、流動(dòng)相B為95%的0.2%冰醋酸的乙腈溶液;流速0.5mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)全波長(zhǎng);柱溫30℃;ELSD條件漂移管溫度100℃;氮?dú)饬魉?.4L/min供試品溶液的制備稱取本品,用甲醇溶液溶解在容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,即得。
測(cè)定方法精密吸取供試品溶液,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。
(2)上述丹皮提取物HPLC-ELSD指紋圖譜測(cè)定方法參見(jiàn)(1)上述丹皮提取物中的芍藥苷、沒(méi)食子酰芍藥苷、Mudanpioside h含量測(cè)定(高效液相色譜法)。記錄色譜時(shí)間為30分鐘。
分析結(jié)果丹皮有效組分的HPLC-ELSD分析譜圖見(jiàn)圖2,圖2中的1、2、3號(hào)峰,分別是芍藥苷、牡丹皮苷h和沒(méi)食子酰芍藥苷。三個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間依次為9.8(芍藥苷),10.67(沒(méi)食子酰芍藥苷),10.97(牡丹皮苷h(Mudanpioside h))。
本發(fā)明提供丹皮提取物中芍藥苷的含量為15~25%,沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為45~55%,牡丹皮苷h(Mudanpioside h)的含量為35~45%。
本發(fā)明中,牡丹皮苷h的結(jié)構(gòu)式為 實(shí)施例十三 藥理實(shí)驗(yàn)原代心肌細(xì)胞培養(yǎng) 出生1~3天SD乳鼠處死后,取心臟,經(jīng)PBS液清洗后減成1mm3左右的碎塊。用0.125%胰蛋白酶(Sigma,USA)+0.05%膠原酶II(Gibco,USA)于37度消化3~4次。差速貼壁法分離成纖維細(xì)胞1.5小時(shí)后,細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至48孔板中(每孔約4×105細(xì)胞)。經(jīng)DMEM(Gibco,USA)加10%胎牛血清(Falcon,USA)培養(yǎng)3~6天的細(xì)胞供藥效篩選。篩選前1天替換為無(wú)血清培養(yǎng)液。培養(yǎng)3~6天的心肌細(xì)胞,PBS洗滌后加入含藥培養(yǎng)液。置于95%N2和5%CO2培養(yǎng)箱中缺氧6小時(shí)。然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧3小時(shí)。取細(xì)胞上清液測(cè)定LDH含量。
乳酸脫氫酶含量測(cè)定 細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量能夠表示細(xì)胞損傷程度。漏入上清液中的乳酸脫氫酶含量越高,表明細(xì)胞損傷也顯著。乳酸脫氫酶測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。測(cè)定方法為取30微升細(xì)胞上清液,加入50微升基質(zhì)緩沖液及10微升乳酸脫氫酶輔酶,37度振蕩15分鐘,再加入50微升2,4-二硝基苯肼,37度振蕩15分鐘。平行空白。取反應(yīng)液50微升加入200微升0.4mol/L氫氧化鈉溶液,靜置3~4分鐘后,用酶標(biāo)儀于450nm測(cè)定光度值。
給藥方案 實(shí)施例1中的丹參、丹皮提取物組合物A、B、C、D、E分別用無(wú)糖Hanks液配成10-4g/mL供試液,脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2%以下)。各組分在培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
結(jié)果所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示,采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。與模型組相比,P<0.05認(rèn)為顯著有效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1.丹參、丹皮提取物組合物對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶的影響

本發(fā)明采用乳鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型,通過(guò)對(duì)乳酸脫氫酶的測(cè)定,檢驗(yàn)本發(fā)明中藥組合物的抗心肌細(xì)胞缺血作用。結(jié)果顯示,丹參、丹皮提取物的組合物對(duì)降低乳酸脫氫酶釋放有非常顯著效果,說(shuō)明本發(fā)明中藥組合物具有明顯的抗心肌細(xì)胞缺血作用。
實(shí)施例十四 滴丸的制備取實(shí)施例一的丹皮有效組分0.5g,丹參有效組分2g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻,加熱熔融,化料后移至滴丸滴灌中,藥液滴至6~8℃液體石蠟中,除油,制得滴丸600粒。
實(shí)施例十五 凍干粉針劑的制備取實(shí)施例一的丹皮有效組分0.5g,丹參有效組分2g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉0.9g和蒸餾水1ml,上述組分混合均勻后,冷凍干燥,分裝800支,即得。
實(shí)施例十六 凍干粉針劑的制備取降香油1.5g,加入到13ml飽和的羥丙基β-環(huán)糊精中,攪拌溶解,濾過(guò),濾液低溫干燥得降香油和羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末。除上述降香油合羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末外,再取實(shí)施例一的丹參有效組分2g,丹皮提取物0.5g、甘露醇5.5g、依地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml,上述組分混勻后,冷凍干燥,分裝500支,即得。
權(quán)利要求
1.一種治療缺血性心臟病的中藥組合物,由丹參提取物和丹皮提取物組成,其特征是,各組分的重量百分比為丹皮提取物 15%~25%;丹參提取物 75%~85%。
2.權(quán)利要求1所述的中藥組合物,其特征是,各組分的重量百分比為丹皮提取物 16%~24%;丹參提取物 76%~84%。
3.權(quán)利要求1所述的中藥組合物,其特征是,各組分的重量百分比為丹皮提取物18%~22%丹參提取物78%~82%。
4.權(quán)利要求1所述的中藥組合物,其特征是,各組分的重量百分比為丹皮提取物19%~21%;丹參提取物79%~81%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的中藥組合物,其特征是,丹參提取物中紫草酸的含量為3~4%,丹酚酸B的含量為92~94%,丹酚酸E的含量為1~2%;丹皮提取物中芍藥苷的含量為15~25%,沒(méi)食子酰芍藥苷的含量為45~55%,牡丹皮苷h的含量為35~45%。
6.含有權(quán)利要求1-4任一權(quán)利要求所述的中藥組合物的藥用制劑,其特征是,按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥劑學(xué)接受的任一藥用制劑。
7.權(quán)利要求1-4任一權(quán)利要求所述的中藥組合物在制備具有抗心肌細(xì)胞缺血作用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明一種治療心血管疾病的中藥有效組分復(fù)方組合物,由丹參提取物、丹皮提取物組成的,其重量百分比為丹參提取物75%~85%,丹皮提取物15%~25%。本發(fā)明提供的組合物加入藥用輔料,按照藥劑學(xué)允許的制備方法可制成各種藥用制劑。本發(fā)明的中藥組合物所含化合物數(shù)目少,化合物結(jié)構(gòu)明確,且含量高。藥理實(shí)驗(yàn)表明,本發(fā)明的中藥組合物能顯著的抑制乳鼠心肌細(xì)胞中乳酸脫氫酶的釋放,具有明顯的抗心肌缺血作用。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1981816SQ20051012234
公開(kāi)日2007年6月20日 申請(qǐng)日期2005年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月14日
發(fā)明者程翼宇, 賀慶, 王毅, 王學(xué)偉, 李云飛, 胡興江, 葛志偉 申請(qǐng)人:天津天士力現(xiàn)代中藥研究開(kāi)發(fā)有限公司
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