專利名稱：羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物、其制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物、該提取物的制備方法、中藥制劑，及其在治療心腦缺血藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
我國羅布麻葉資源有三種羅布麻屬植物羅布麻葉(Apocynum venetum L.)又稱紅麻、白麻屬植物大花羅布麻葉[Poacynum hendersonni(Hook.f.)Wodson]和白麻屬植物紫斑羅布麻葉[Poacynum pictum(Schrenk)Baill]，統(tǒng)稱為羅布麻葉，因?qū)俨煌瑢僦参?，其黃酮成分也有異，相互之間并無可比性。本發(fā)明所涉及的是羅布麻屬植物羅布麻葉(Apocynumvenetum L.)，包括新疆產(chǎn)的羅布麻屬植物紅麻葉(Apocynum venetum L.)。
目前研究羅布麻有效成分的方法可歸納為兩種1、先用水或醇提取，將回收溶劑后的提取物混懸于水中，分別用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇提取，劃分成幾個提取部分。再用硅膠柱或葡聚糖凝膠柱層析、分離成單組分物質(zhì)。
2、申請?zhí)?2110431.X的發(fā)明專利申請“羅布麻有效部位的提取分離方法”，和申請?zhí)?00410064551.0的發(fā)明專利申請“一種羅布麻提取物及其提取方法”。
上述的第一種方法是試驗室研究單一黃酮成分的方法，不適合總黃酮的制備。第二種方法中，前一項專利申請對于羅布麻有效部位的提取分離方法為羅布麻提取液經(jīng)處理后通過大孔吸附樹脂柱，先采用水洗脫至水洗脫液無色，并用20-39％的乙醇水溶液洗脫，再用40-70％的乙醇水溶液洗脫。收集40-70％的洗脫液濃縮后形成的浸膏即為有效部位，總黃酮含量為50-60％，該技術(shù)方案的缺點是不能明確所提供的有效部位由哪些黃酮成分組成，雖提供有效部位總黃酮含量為50-60％，但還未達(dá)到靜脈注射用二類原料藥的標(biāo)準(zhǔn)，即80％以上。第二項專利申請中對于羅布麻高純提取物的制備方法是取羅布麻葉300g，用10倍量40％乙醇水回流提取3次，每次0.5hr，合并提取液，室溫下靜置過夜、過濾，去沉淀，濾液減壓濃縮至總體積900mL，濃縮液加1％殼聚糖的乙酸溶液180mL，攪拌2min，室溫靜置2-4hr，抽濾，棄去殘渣，上清液過處理好的聚酰胺樹脂柱，隨后以600mL水，用鹽酸調(diào)pH為3后，進(jìn)行洗脫除雜，然后用70％乙醇水溶液洗脫至無AlCl3反應(yīng)，收集70％乙醇水溶液并減壓濃縮至近干，水浴蒸干后，80℃烤箱干燥，得黃棕色至黃色粉末，為羅布麻高純提取物，出膏率為1.8％。羅布麻高純提取物的金絲桃苷含量為17.8％、總黃酮(以金絲桃苷計)含量為42.8％、水解后的槲皮素含量為36.7％。該技術(shù)方案所存在的問題是雖然提供了金絲桃苷含量、總黃酮含量、水解后的槲皮素含量，但不能明確提取物由哪些黃酮成分組成，不能完整地反映該提取物質(zhì)量；該提取物總黃酮(以金絲桃苷計)含量為42.8％，這一含量既未達(dá)到靜脈注射用二類原料藥的標(biāo)準(zhǔn)，即80％以上，也未達(dá)到口服用二類原料藥的標(biāo)準(zhǔn)，即50％以上。
據(jù)文獻(xiàn)報道羅布麻葉(Apocynum venetum L.)含有黃酮及其糖苷、三萜及甾醇、木脂素、香豆素、有機(jī)酸及酯、環(huán)醇、糖類和氨基酸等10余類成分。藥理研究表明黃酮類成分是其中的主要活性成分類別之一，化學(xué)研究表明羅布麻葉黃酮類成分以蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆苷、黃芪苷、6″-O-乙?；愰纹ぼ?、槲皮素和山柰酚等8種成分含量較高。不同的提取方法得到的提取物由于包含不同的黃酮類化合物、不同的含量，其藥理、藥性存在很大差異，都是一種新的物質(zhì)。因此在保證藥效的前提下，盡可能提高提取物總黃酮的純度和明確提取物中主要黃酮類成分是技術(shù)難點。
中藥羅布麻及其制劑目前臨床是用于治療高血壓疾病，尚未見到用于治療腦缺血性疾病的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為避免上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題，提供一種高含量羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物，藥理和化學(xué)研究表明該提取物活性成分明確，質(zhì)量可控。
本發(fā)明另一目的是提供該羅布麻葉總黃酮提取物的制備方法。
本發(fā)明又一目的在于提供所述提取物的中藥制劑。
本發(fā)明目的還在于提供該羅布麻葉總黃酮提取物在治療心腦缺血疾病中的應(yīng)用。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物，其特征是所述提取物總黃酮含量為50-95％；其中所含黃酮成分包括蘆丁0.2-30.0％、金絲桃苷0.5-30.0％、異槲皮苷10.0-30.0％、三葉豆苷3.0-20.0％、黃芪苷2.0-5.0％、6″-O-乙酰基異槲皮苷1.0-6.0％、槲皮素0.5-4.0％、山柰酚0.2-3.0％，其他黃酮類成分余量。
本發(fā)明羅布麻葉總黃酮提取物制備方法是按如下步驟操作a、將干燥的羅布麻葉粉碎成粗粉，用8-10倍量的30-95％乙醇加熱回流提取1-2小時，共提取2-3次；其中，用于回流提取的乙醇優(yōu)選為60-80％乙醇。
b、將提取液在低于60℃的條件下減壓濃縮至60℃時比重為1.13-1.16的浸膏，加入原生藥量3-5倍量沸水，分次溶解，靜置24小時過濾；c、濾液通過聚酰胺柱層析，首先用水沖洗8-12個柱體積，再用不同濃度醇水溶液分段洗脫、收集、濃縮，所述分段洗脫、收集、濃縮的操作過程為用10％-20％乙醇水溶液或10％-20％甲醇水溶液洗脫1-2個柱體積、去除洗脫液；
用40-50％乙醇水溶液或40-50％甲醇水溶液洗脫，按照洗脫時間的先后順序，分段收集，分別獲得前段洗脫液、中段洗脫液和后段洗脫液，去除前段洗脫液，用70-80％乙醇水溶液或70-80％甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液；將該洗脫液與所述后段洗脫液合并后，在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到50％-70％的羅布麻葉總黃酮提取物；將所述中段洗脫液在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到80％-95％的羅布麻葉總黃酮提取物。
本發(fā)明羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物的中藥制劑，其特征是所述中藥制劑是以所述羅布麻葉總黃酮提取物為藥物有效成份，加入藥用輔料后制成的滴丸、片劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、混懸劑、口服液、粉針劑、注射劑、輸液。
本發(fā)明羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物用于治療心腦缺血性疾病。
與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在1、本發(fā)明羅布麻提取物是以總黃酮含量、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆、黃芪苷、6″-O-乙?；愰纹ぼ铡㈤纹に?、山柰酚的含量對其進(jìn)行確切的表征，以這一表征方式進(jìn)行表征的黃酮類物質(zhì)以及羅布麻葉總黃酮提取物具有顯著的抗腦缺血性作用，均未見相關(guān)文獻(xiàn)的報道。
2、本發(fā)明采用高效液相色譜法，可以對提取物中對蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆苷、黃芪苷、6″-O-乙?；愰纹ぼ?、槲皮素、山柰酚的黃酮成分進(jìn)行明確定性和定量。
3、本發(fā)明羅布麻葉提取物是以新的提取方法從羅布麻葉中提取所得，對于心腦缺血性疾病有可靠的療效。
4、本發(fā)明根據(jù)羅布麻葉中黃酮等酚性成分的酚羥基與聚酰胺的酰胺基形成氫鍵而被聚酰胺吸附的原理，設(shè)計了羅布麻葉乙醇提取物用水溶解，通過聚酰胺柱吸附，先用水洗去不被吸附的雜質(zhì)，并用10％-20％乙醇水溶液洗去低酚性為成分如氯原酸等酚酸性成分，再用40％-80％乙醇水溶液涕度洗脫黃酮成分，而多酚性成分鞣質(zhì)保留在柱上，從而達(dá)到富集黃酮成分；在40％-80％乙醇水溶液涕度洗脫黃酮成分時，根據(jù)洗脫曲線，分段收集濃縮，從而得到總黃酮含量為50％-95％兩個原料藥，分別作為口服和靜脈注射制劑的原料。
5、本發(fā)明可以滿足個廣大心腦缺血患者對不同劑型的要求。
本發(fā)明羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物，其提取分離工藝不僅限于上述工藝，亦可采用其他提取分離手段得到。
利用上述工藝得到的羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物的總黃酮含量及各組成成分含量測定方法為1、羅布麻葉總黃酮提取物干燥后，總黃酮含量的測定采用NaNO2-Al(NO2)3-NaOH絡(luò)合比色法進(jìn)行測定，本品含總黃酮(以蘆丁計)為50-95％。
2.羅布麻葉總黃酮提取物干燥后，組成成分蘆丁(Rutin)、金絲桃苷(Hyperin)、異槲皮苷(Isoquercetin)、三葉豆苷(Trifolin)、黃芪苷(Astragalin)、6″-O-乙?；愰纹ぼ?Isoquercetin-6″-O-acetate)、槲皮素(Quercetin)和山柰酚(Kaempferol)的含量測定均采用高效液相色譜法，各成分含量見實施例1-3。
下面用藥理實驗結(jié)果闡明其藥效作用一、羅布麻葉總黃酮(AVTF)對腦缺血損傷的影響1、AVTF對小鼠斷頭后張口喘氣時間的影響結(jié)果如表1所示，40、80、100mg.kg-1AVTF可明顯延長小鼠斷頭后張口喘氣時間，并呈一定的量效關(guān)系。
表1 AVTF對小鼠斷頭后張口喘氣時間的影響(x±s)

與對照組比較，*P＜0.05。
2、AVTF對腦梗塞組織重量的的影響結(jié)果如表2所示，大鼠MCAO后有明顯的腦梗塞發(fā)生，AVTF可顯著降低腦梗塞組織重量百分比，在25～100mg.kg-1范圍內(nèi)呈一定的量效關(guān)系。
表2 AVTF對MCAO致大鼠腦梗塞組織重量的影響(x±s)

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
二、羅布麻葉總黃酮(AVTF)對血栓形成的影響結(jié)果如表4所示，大鼠頸總動脈-靜脈環(huán)路可致血栓的形成，25、50、100mg.kg-1AVTF可明顯降低血栓的濕重。
表3對膠原致血小板聚集率的影響(x±s，n＝8)

與對照組比較，**P＜0.01。
表4 AVTF對大鼠頸總動脈-靜脈環(huán)路致血栓形成的影響(x±s)

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
三、結(jié)論l、小鼠斷頭后張口喘氣模型是一篩選研究抗腦缺血、缺氧藥物較好的實驗方法，其特點為重復(fù)性好、快速簡便。在該模型上，本研究發(fā)現(xiàn)40、80、100mg.kg-1羅布麻葉總黃酮(AVTF)可明顯延長小鼠斷頭后張口喘氣時間；大鼠MCAO是一常用的研究腦缺血損傷的動物模型，與人腦梗塞損傷較為接近。本研究在該模型上發(fā)現(xiàn)，與100mg.kg-1EGB一樣，在25-100mg.kg-1范圍內(nèi)，羅布麻葉總黃酮能顯著減輕腦組織梗塞重量，并呈一定的量效關(guān)系。這些結(jié)果表明羅布麻葉總黃酮對腦缺血、缺氧性損傷有保護(hù)作用。
2、羅布麻葉總黃酮在0.025-0.100mg.ml-1范圍內(nèi)，能顯著抑制Coll誘發(fā)的家兔血小板聚集反應(yīng)，表明羅布麻葉總黃酮有明顯的抗血小板聚集作用。
3、在大鼠頸總動脈-靜脈旁路血栓形成模型上，25、50、100mg.kg-1羅布麻葉總黃酮可明顯降低血栓的濕重，提示羅布麻葉總黃酮對血栓形成有抑制作用。
綜上所述，羅布麻葉總黃酮對缺血性腦損傷有保護(hù)作用。


圖1為羅布麻屬植物羅布麻葉(Apocynum venetum L.)總黃酮提取物HPLC圖譜。
該圖譜能對羅布麻葉總黃酮提取物組成成分蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆苷、黃芪苷、6″-O-乙酰基異槲皮苷、槲皮素、山柰酚的黃酮成分進(jìn)行明確定性和定量。
圖2為羅布麻屬植物新疆紅麻葉(Apocynum venetum L.)總黃酮提取物HPLC圖譜。
該圖譜能對紅麻葉總黃酮提取物組成成分蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、三葉豆苷、黃芪苷、6″-O-乙酰基異槲皮苷、槲皮素、山柰酚的黃酮成分進(jìn)行明確定性和定量。
具體實施例方式下面通過實施例對羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物提取方法及其制劑的制備方法作進(jìn)一步詳述。
對于羅布麻葉總黃酮提取物的制備，具體操作過程如下1、將干燥的羅布麻葉粉碎成粗粉，用8-10倍量的30-95％乙醇水溶液加熱回流提取1-2小時，共提取2-3次；2、將提取液在低于60℃的條件下減壓濃縮至60℃時比重為1.13-1.16的浸膏，加入原生藥量3-5倍量沸水，分次溶解，靜置24小時過濾；3、濾液通過聚酰胺柱層析，首先用水沖洗8-12個柱體積，再用不同濃度醇水溶液分段洗脫、收集、濃縮，操作過程為用40-50％乙醇水溶液或40-50％甲醇水溶液洗脫3個柱體積、以每0.5個柱體積的洗脫液為1份，按照洗脫時間的先后順序，分段收集，分別獲得第一段至第六段共6份洗脫液，去除第一段洗脫液，并合其中第2至第4段洗脫液得中段洗脫液，并合其中第5、第6段洗脫液得后段洗脫液；用70-80％乙醇水溶液或70-80％甲醇水溶液洗脫1-2個柱體積，收集洗脫液；將該洗脫液與后段洗脫液合并后，在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到50％-70％的羅布麻葉總黃酮提取物；將中段洗脫液在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到80％-95％的羅布麻葉總黃酮提取物。
實施例1取羅布麻屬植物羅布麻葉生藥粗粉1kg，加10倍量80％乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，放冷，過濾，減壓回收乙醇至無醇時，并濃縮至60℃相對密度為1.13的浸膏；加相當(dāng)于生藥5倍量的沸水，分次攪拌使溶解，過濾，濾液加于按常規(guī)方法處理好的聚酰胺柱上，用水沖洗10個柱體積后，用10％乙醇水溶液洗脫2個柱體積，50％乙醇水溶液洗脫3個柱體積，70％乙醇水溶液洗脫2個柱體積，分段收集50％乙醇水溶液，每0.5柱體積的洗脫液為1份，收集第2-第4份洗脫液；70％乙醇水溶液洗脫液和50％乙醇水溶液的第5、第6份洗脫液合并，分別在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉總黃酮提取物A和羅布麻葉總黃酮提取物B。
50％乙醇水溶液得羅布麻葉總黃酮提取物A收得率為1.2％，其總黃酮(以蘆丁計)含量為90.5％、蘆丁1.10％、金絲桃苷24.41％、異槲皮苷25.60％、三葉豆苷5.50％、黃芪苷4.10％、6″-O-乙酰基異槲皮苷2.81％、槲皮素2.07％、山柰酚1.50％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。
70％乙醇水溶液得羅布麻葉總黃酮提取物B收得率為0.6％，其總黃酮(以蘆丁計)含量為61.5％、蘆丁0.51％、金絲桃苷5.21％、異槲皮苷23.10％、三葉豆苷8.75％、黃芪苷4.21％、6″-O-乙?；愰纹ぼ?.15％、槲皮素2.95％、山柰酚1.90％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。
實施例2取紅麻葉生藥粗粉1kg，加8倍量70％乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，放冷，過濾，減壓回收乙醇至無醇時，并濃縮至60℃相對密度為1.14的浸膏；加相當(dāng)于生藥4倍量的沸水，分次攪拌使溶解，過濾，濾液加于按常規(guī)方法處理好的聚酰胺柱上，用水沖洗10個柱體積后，用10％乙醇水溶液洗脫1個柱體積，用50％乙醇水溶液洗脫3個柱體積，80％乙醇水溶液洗脫2個柱體積，分段收集50％乙醇水溶液，每0.5個柱體積的洗脫液為1份，收集第2-第4份洗脫液；80％乙醇水溶液洗脫液和50％乙醇水溶液的第5和第6份洗脫液合并，分別在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得紅麻葉總黃酮提取物A和紅麻葉總黃酮提取物B。
50％乙醇水溶液得紅麻葉總黃酮提取物A收得率為1.7％，其總黃酮(以蘆丁計)含量為85.0％、蘆丁25.81％、金絲桃苷1.93％、異槲皮苷28.70％、三葉豆苷12.47％、黃芪苷3.61％、6″-O-乙?；愰纹ぼ?.38％、槲皮素0.80％、山柰酚0.50％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。
80％乙醇水溶液得紅麻葉總黃酮提取物B收得率為0.4％，其總黃酮(以蘆丁計)含量為60.5％、蘆丁1.05％、金絲桃苷2.59％、異槲皮苷25.06％、三葉豆苷15.08％、黃芪苷3.99％、6″-O-乙?；愰纹ぼ?.05％、槲皮素1.50％、山柰酚0.78％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。
實施例3取羅布麻葉生藥粗粉1kg，加8倍量60％乙醇水溶液加熱回流提取2小時，共提取3次，合并提取液，放冷，過濾，減壓回收乙醇至無醇時，并濃縮至60℃相對密度為1.16的浸膏；加相當(dāng)于生藥4倍量的沸水，分次攪拌使溶解，過濾，濾液加于按常規(guī)方法處理好的聚酰胺柱上，用水沖洗10個柱體積，用10％乙醇水溶液洗脫1個柱體積，用40％甲醇水溶液洗脫3個柱體積，70％甲醇水溶液洗脫2個柱體積，分段收集40％甲醇水溶液，每0.5個柱體積的洗脫液為1份，收集第2-第4份洗脫液；70％甲醇水溶液洗脫液和40％甲醇水溶液的第5和第6份洗脫液合并，分別在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得羅布麻葉總黃酮提取物A和羅布麻葉總黃酮提取物B。
40％甲醇水溶液得羅布麻葉總黃酮提取物A收得率為1.4％，其總黃酮(以蘆丁計)含量為81.5％、蘆丁1.20％、金絲桃苷23.05％、異槲皮苷25.57％、三葉豆苷5.21％、黃芪苷4.07％、6″-O-乙?；愰纹ぼ?.80％、槲皮素2.60％、山柰酚0.75％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。
70％甲醇水溶液得羅布麻葉總黃酮提取物B收得率為0.65％，其總黃酮(以蘆丁計)含量為60.0％、蘆丁0.50％、金絲桃苷5.20％、異槲皮苷23.05％、三葉豆苷8.20％、黃芪苷3.75％、6″-O-乙酰基異槲皮苷4.50％、槲皮素2.10％、山柰酚1.80％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。
實施例4羅布麻葉總黃酮片組分量羅布麻葉總黃酮提取物1-100g糊精90g微晶纖維素 105g低取代羥丙甲纖維素 15g70％的乙醇溶液 15ml硬脂酸鎂1g制備過程羅布麻葉總黃酮提取物、糊精、硬脂酸鎂、低取代羥丙甲纖維素分別粉碎過80目篩；將羅布麻總黃酮與糊精、2/3量的低取代羥丙甲纖維素及70％的乙醇溶液混合研磨，使均勻，制軟材；再20目篩制顆粒，干燥，整粒后加入剩余的低取代羥丙甲纖維素，混勻，再加入硬脂酸鎂混勻，壓1000片；檢驗合格后包裝。
實施例5羅布麻葉總黃酮滴丸組分量羅布麻葉總黃酮提取物1-50gPEG4000 15g
PEG6000 22g制備過程將聚乙二醇4000、聚乙二醇6000加熱，再將熔融羅布麻葉總黃酮提取物加入其中，充分?jǐn)嚢?，使藥物充分分散于基質(zhì)中；將上述藥液轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)上，70℃～80℃密閉保溫10～20分鐘，用無水甲基硅油作冷卻劑，10℃～20℃梯度冷卻，用30～60滴/分速度進(jìn)行滴制，即得成型丸粒。再收集滴丸，用無水石油醚洗滌用30～60滴/分速度進(jìn)行滴制，即得成型丸粒。再收集滴丸，用無水石油醚洗滌2次，涼干，包裝即可。
實施例6羅布麻葉總黃酮輸液以制備含量為0.04％(g/ml)的羅布麻葉總黃酮輸液制劑250ml瓶為例。
將2g羅布麻葉總黃酮提取物加入到1000ml新鮮注射用水加熱溶解后，加入5克針用活性炭，加熱煮沸20分鐘后過濾，濾液冷卻至40℃以下，用新鮮注射用水稀釋至5000ml，再用1mol/L的碳酸氫鈉調(diào)PH為7.0左右，加入45克藥用氯化鈉及6g藥用亞硫酸氫鈉攪拌溶解，使之成為1L溶液中含0.4克羅布麻總黃酮。測pH、含量合格后，無菌罐裝到250ml輸液瓶中，于115℃下熱壓滅菌30分鐘，即得每瓶250ml溶液含0.1g羅布麻葉總黃酮輸液制劑。
實施例7羅布麻葉總黃酮凍干粉針組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 5-100g吐溫80120g活性炭4g甘露醇400g泊絡(luò)沙姆 8g制備過程稱取羅布麻葉總黃酮提取物干粉、吐溫、泊絡(luò)沙姆將其熔融放入研缽中研磨使其充分分散，加入二氧化碳飽和過的新鮮注射用水到3500ml，加入甘露醇，在水浴(50-70℃)加入針用活性炭，邊加入邊攪拌，煮沸5-10分鐘后，冷卻至40℃用垂熔濾器濾過。用新鮮注射用水稀釋至4000ml，測pH、含量合格后，，過0.45um膜，再過0.22um膜，灌裝1000個西林瓶中，預(yù)凍，冷凍即得每瓶含5-100mg羅布麻總黃酮提取物凍干粉。
實施例8羅布麻葉總黃酮注射液組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 5-50g碳酸氫鈉 12g焦亞硫酸鈉2g注射用水 1000m
制備過程取注射用水1000ml，煮沸，冷卻至室溫，備用。按處方取配置量20％的注射取注射用水1000ml，煮沸，冷卻至室溫，備用。按處方取配置量20％的注射用水，加入羅布麻葉總黃酮提取物使溶解，分次緩慢加入碳酸氫鈉并不斷攪拌，待液面無氣泡產(chǎn)生時，加入焦亞硫酸鈉溶解，加剩余的注射用水至全量。用PH酸度計測定藥液PH值應(yīng)為5.5-8.0、若不在此范圍內(nèi)，可用硫酸氫鈉調(diào)節(jié)。藥液用3號垂熔玻璃濾斗濾過至澄明，灌封500支安瓿，100℃，30分鐘滅菌，即得。
實施例9羅布麻葉總黃酮軟膠囊組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 5-100g蜂蠟 10g食用植物油150g明膠 10g甘油 3g水13g制備過程稱取羅布麻葉總黃酮提取物與經(jīng)過加熱滅菌、澄清的食用植物油及蜂蠟熔融物混合，充分?jǐn)噭蚣吹媚倚奈?。取明膠加入適量水使其膨脹；另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70℃～80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，熔化，保溫1-2小時，靜置，使泡沫上浮，除去上浮的泡沫，以潔凈白布濾過，保溫待用。將已制好的明膠液，置明膠液貯槽中控制溫度在60℃左右，將羅布麻葉總黃酮提取物放入藥液貯槽內(nèi)；液狀石蠟溫度以10-25℃為宜，室溫10-20℃，滴頭溫度30-60℃，開始滴丸。滴出的膠丸先均勻地攤于紗網(wǎng)上，在10℃以下低溫吹風(fēng)4小時以上，再用擦丸機(jī)擦去表面的石蠟，然后再低溫(10℃以下)吹風(fēng)20小時以上，于40-50℃干燥約24小時。取出干燥的膠丸，燈檢，除去廢丸后，用95％乙醇洗滌，再在40-50℃以下吹干，經(jīng)質(zhì)量檢查合格后，即可包裝。
實施例10羅布麻葉總黃酮膠囊劑組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 5-100g淀粉 125g70％乙醇 適量制備過程將淀粉、羅布麻葉總黃酮提取物混勻，過80目篩，加入適量的70％乙醇，制軟材，再用20目篩制顆粒，干燥，整粒，裝膠囊，共制成1000粒，每粒含羅布麻葉總黃酮提取物5-100mg，即可。
實施例11羅布麻葉總黃酮顆粒劑組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 1-10g糊精 28g糖粉 10g酒石酸 1g50％乙醇(體積分?jǐn)?shù)) 適量將羅布麻葉總黃酮提取物、糊精、糖粉分別過100目篩，按等體積遞增配研法將羅布麻葉總黃酮組合物與輔料混勻，再將酒石酸溶于50％乙醇(體積分?jǐn)?shù))中，一次加入上述混合物中，混勻，制軟材，過16目尼龍篩，60℃以下干燥，整粒后用塑料袋包裝，每袋2g，含羅布麻葉總黃酮提取物50-500mg。
實施例12羅布麻葉總黃酮混懸劑組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 5-50g羥甲基纖維素鈉 5g甘油 100ml蒸餾水 適量制備過程取羅布麻葉總黃酮提取物于乳缽中，加甘油研磨成細(xì)膩糊狀，另將羥甲基纖維素鈉用200ml水制成膠漿，在攪拌下緩緩加入乳缽中研勻，移入量器中，加蒸餾水至全量，攪勻，即得。
實施例13羅布麻葉總黃酮口服液組分 量羅布麻葉總黃酮提取物 2-50g煉蜜 30g山梨酸 5g枸櫞酸鈉 5g香精 1ml水 適量制備過程將羅布麻葉總黃酮提取物溶于水中，加入煉蜜、山梨酸、枸櫞酸鈉、香精混勻，制成200ml，封裝，即得。
以上實施例僅為了對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，而本發(fā)明范圍不受所舉實施例的局限。
權(quán)利要求
1.一種羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物，其特征是所述提取物總黃酮含量為50-95％；其中所含黃酮成分包括蘆丁0.2-30.0％、金絲桃苷0.5-30.0％、異槲皮苷10.0-30.0％、三葉豆苷3.0-20.0％、黃芪苷2.0-5.0％、6″-O-乙?；愰纹ぼ?.0-6.0％、槲皮素0.5-4.0％、山柰酚0.2-3.0％，其他黃酮類成分余量。
2.權(quán)利要求1所述羅布麻葉總黃酮提取物的制備方法，其特征是按如下步驟操作a、將干燥的羅布麻葉粉碎成粗粉，用8-10倍量的30-95％乙醇水溶液加熱回流提取1-2小時，共提取2-3次；b、將提取液在低于60℃的條件下減壓濃縮至60℃時比重為1.13-1.16的浸膏，加入原生藥量3-5倍量沸水，分次溶解，靜置24小時過濾；c、濾液通過聚酰胺柱層析，首先用水沖洗8-12個柱體積，再用不同濃度醇水溶液分段洗脫、收集、濃縮，所述分段洗脫、收集、濃縮的操作過程為用10-20％乙醇水溶液或10-20％甲醇水溶液洗脫1-2個柱體積、去除洗脫液；用40-50％乙醇水溶液或40-50％甲醇水溶液洗脫，按照洗脫時間的先后順序，分段收集，分別獲得前段洗脫液、中段洗脫液和后段洗脫液，去除前段洗脫液；用70-80％乙醇水溶液或70-80％甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液；將該洗脫液與所述后段洗脫液合并后，在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到50％-70％的羅布麻葉總黃酮提取物；將所述中段洗脫液在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到80％-95％的羅布麻葉總黃酮提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是在所述步驟c中的分段洗脫、收集、濃縮的操作過程為用40-50％乙醇水溶液或40-50％甲醇水溶液洗脫3個柱體積、以每0.5個柱體積的洗脫液為1份，按照洗脫時間的先后順序，分段收集，分別獲得第一段至第六段共6份洗脫液，去除第一段洗脫液，并合其中第2至第4段洗脫液得中段洗脫液，并合其中第5、第6段洗脫液得后段洗脫液；用70-80％乙醇水溶液或70-80％甲醇水溶液洗脫1-2個柱體積，收集洗脫液；將該洗脫液與后段洗脫液合并后，在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到50％-70％的羅布麻葉總黃酮提取物；將中段洗脫液在低于60℃條件下減壓濃縮，真空干燥得總黃酮含量達(dá)到80％-95％羅布麻葉總黃酮提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟a中用于回流提取的乙醇為60-80％乙醇。
5.權(quán)利要求1或2所述羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物的中藥制劑，其特征是所述中藥制劑是以所述羅布麻葉總黃酮提取物為藥物有效成份，加入藥用輔料后制成的滴丸、片劑、膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、混懸劑、口服液、粉針劑、注射劑、輸液。
6.權(quán)利要求1所述羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物用于治療心腦缺血性疾病。
全文摘要
羅布麻屬植物羅布麻葉總黃酮提取物、其制備及應(yīng)用，其特征是總黃酮含量為50－95％，其所含黃酮成分為蘆丁0.2－30.0％、金絲桃苷0.5－30.0％、異槲皮苷10.0－30.0％、三葉豆苷3.0－20.0％、黃芪苷2.0－5.0％、6″－O－乙酰基異槲皮苷1.0－6.0％、槲皮素0.5－4.0％、山柰酚0.2－3.0％，以及其他數(shù)種黃酮類成分。本發(fā)明還公開了羅布麻葉總黃酮提取物的制備方法及羅布麻葉總黃酮提取物不同制劑的制備方法。本發(fā)明并公開了羅布麻葉總黃酮提取物在制備治療心腦缺血藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P9/00GK1931205SQ20051012318
公開日2007年3月21日 申請日期2005年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者王先榮, 周亞球, 劉東平 申請人:周亞球, 王先榮