專利名稱：一種丹參三七有效部位組合物及制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥丹參、三七提取物的有效部位組合物。
本發(fā)明還涉及上述組合物的制備方法。
本發(fā)明還涉及上述組合物在制備治療心血管病藥中的用途。
背景技術(shù)：
丹參系唇形科鼠尾草屬植物的根，為常用的活血化瘀藥，是經(jīng)過多年臨床實踐驗證過的有效中藥，是治療心血管病最常用的藥物。三七為五加科植物三七Panax Notoginseng(Burk.)F.H. Chen(PN)的干燥根，也是經(jīng)過多年臨床實踐驗證過的有效中藥。丹參常同三七配伍，其功效為活血化瘀，理氣止痛。常用于治療胸中憋悶、心絞痛等癥?，F(xiàn)有的中成藥有復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參滴丸、復(fù)方丹參注射液等都由丹參和三七為主配伍而成。由于缺血再灌注廣泛發(fā)生，因此在人類心血管病理生理學(xué)上非常重要。通過缺氧復(fù)氧(hypoxia/reoxyenation，H/R)可以模擬缺血再灌注的病理生理模型。在H/R過程中，受損內(nèi)皮細(xì)胞的乳酸脫氫酶(LDH)從細(xì)胞內(nèi)滲漏出來。藥物對內(nèi)皮細(xì)胞H/R的保護(hù)作用可能會減少或抑制LDH的滲漏。丹參、三七對缺血心肌和再灌注心臟具有明顯的保護(hù)作用，但它們的有效部位組合物對培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞缺血再灌注的保護(hù)作用研究尚缺乏。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種中藥丹參、三七提取物的有效部位組合物。
本發(fā)明的又一目的在于提供制備上述組合物的方法。
本發(fā)明的又一目的在于提供上述組合物的用途，即在制備治療心血管病藥中的用途。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的丹參、三七提取物的有效部位組合物為丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位和三七正丁醇部位；其重量比，丹參氯仿部位∶丹參乙酸乙酯部位∶三七正丁醇部位＝10∶10∶1-1∶1∶5。該組合物可以凍干粉形式存在。
本發(fā)明提供的上述組合物的制備方法如下a)取丹參和三七生藥材，分別加入藥材量6～15倍的60～95％乙醇溶液回流提取1-3小時，分別得到丹參總提物和三七總提物的提取液；b)丹參總提物的提取液抽干后用水返溶，氯仿萃取，水層調(diào)pH＝3后再用乙酸乙酯萃取，分別得到丹參氯仿部位及丹參乙酸乙酯部位；c)三七總提物的提取液抽干用水后返溶，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，得到三七正丁醇部位；f)將丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位和三七正丁醇部位按比例混合，得丹參三七有效部位組合物。
上述各步驟中的產(chǎn)物可以制成凍干粉再進(jìn)行后續(xù)處理。
本發(fā)明提供的丹參三七有效部位組合物可用于制備治療心血管疾病的藥物。
具體實施例方式
為了便于理解本發(fā)明，下面以丹參為例，對丹參總提物及不同溶劑萃取部位的藥理試驗予以說明。將丹參用乙醇溶液提取后，總提物再通過不同溶劑依次萃取，按極性分成不同部位。將體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通過缺氧復(fù)氧建立H/R模型來模擬缺血再灌注的病理生理模型，并對丹參總提物及不同溶劑萃取部位作藥理試驗。結(jié)果表明在無細(xì)胞毒性的安全濃度范圍內(nèi)，丹參總提物、氯仿部位，乙酸乙酯部位具有抗血管內(nèi)皮細(xì)胞H/R損傷作用。即丹參中對心血管疾病起主要治療作用的是氯仿部位和乙酸乙酯部位。而氯仿部位中含有的主要成分是丹參酮，乙酸乙酯部位中含有的主要成分是丹參酚酸類，因此丹參中對心血管疾病起主要治療作用的是丹參酮和丹參酚酸類成分。
丹參總提物及不同部位的制備將丹參粉碎后用6～15倍量60～95％乙醇溶液回流提取3h，提取液抽干后用水返溶，然后分別用氯仿、乙酸乙酯依次萃取。丹參總提物、氯仿、乙酸乙酯層減壓濃縮后冷凍干燥為凍干粉，分別得到丹參總提物、氯仿部位、乙酸乙酯部位。
對于三七按照與丹參相似的方法進(jìn)行制備及藥理試驗。分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇為溶劑依次萃取，正丁醇部位是有效部位，而正丁醇部位中含有的主要成分是皂甙。對丹參、三七有效部位組合藥的藥理試驗采用丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位及三七正丁醇部位進(jìn)行組合。對丹參氯仿部位∶丹參乙酸乙酯部位∶三七正丁醇部位的比例各為10∶10∶1、5∶5∶1、5∶5∶3、1∶1∶1、3∶3∶5、1∶1∶5及1∶1∶10的組合藥進(jìn)行的藥理試驗表明除了比例為1∶1∶10的組合藥，其它比例的組合藥都具有抗血管內(nèi)皮細(xì)胞H/R損傷作用。
本發(fā)明具有以下有益效果1.發(fā)掘了丹參、三七不同部位的新醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。
2.丹參氯仿部位，乙酸乙酯部位(丹參酮、丹參酚酸)及三七正丁醇部位(皂甙)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞H/R損傷有很明顯的保護(hù)作用，因而用這三個有效部位，即丹參酮、丹參酚酸及三七皂甙配制的藥物應(yīng)該有良好的藥用前景。
3.丹參來源豐富，價廉，三七來源也很豐富且價格不高，丹參酮、丹參酚酸和三七皂甙的制備工藝簡單，應(yīng)該有很好的工業(yè)化應(yīng)用前景。
下面通過實施例的描述，進(jìn)一步說明但不限制本發(fā)明。
實施例1丹參有效部位的制備取丹參生藥材1kg用13倍藥材重量的65％乙醇溶液回流提取1.5h×2，濾過，提取液濃縮后冷凍干燥為凍干粉得73.46克。用100ml水溶解25g凍干粉，然后用300ml×4氯仿萃取，水層調(diào)PH＝3后再用300ml×4乙酸乙酯萃取。氯仿和乙酸乙酯層減壓濃縮后冷凍干燥為凍干粉，分別得到剩余丹參總提物、氯仿部位及乙酸乙酯部位凍干粉各48.46，5.13，5.32克。收率各為生藥量的7.35％、1.50％、1.56％。
實施例2三七有效部位的制備取三七生藥材1kg用13倍藥材重量的95％乙醇溶液回流提取1.5h×2，濾過，提取液濃縮后冷凍干燥為凍干粉得176.40克。用200ml水溶解50g凍干粉，然后分別用600ml×4石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取。正丁醇層減壓濃縮后冷凍干燥為凍干粉，得到剩余三七總提物、三七正丁醇部位凍干粉各126.40，23.27克。收率各為生藥量的17.64％、7.88％。
實施例3丹參及不同部位對HUVECs細(xì)胞存活率的研究將體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為8組，分別為空白組及不同劑量的藥物組，劑量分別為0.1ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，100ng/mL，1μg/mL，10μg/mL，100μg/mL。用MTT比色法測其對正常培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長的結(jié)果，以評價藥物無細(xì)胞毒性的安全濃度范圍。結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹參及不同部位在1-100ng/mL的濃度范圍對正常培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞沒有毒性損傷效應(yīng)(見表1)。
實施例4丹參及不同部位對H/R損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用研究每種藥物的藥效學(xué)實驗中都將體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分組(1)正常對照組置常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，換培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)6h。(2)H/R組置缺氧條件下培養(yǎng)2h，換培養(yǎng)基后再置常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h。(3)H/R+藥物組置缺氧條件下培養(yǎng)2h，換含藥培養(yǎng)基后再置常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h。余同H/R模型組。通過計算不同組細(xì)胞的LDH漏出率的差異性，可判斷藥物抗血管內(nèi)皮細(xì)胞H/R損傷的作用。LDH漏出率計算公式為LDH漏出率＝上清液LDH活性/(上清液LDH活性+胞漿LDH活性)結(jié)果(見表2)丹參總提物各濃度，丹參氯仿部位中濃度以及丹參乙酸乙酯部位高濃度與模型組比有極顯著性差異。即丹參總提物、氯仿部位，乙酸乙酯部位具有抗血管內(nèi)皮細(xì)胞H/R損傷作用。丹參中起主要抗H/R損傷作用的物質(zhì)在氯仿部位和乙酸乙酯部位中。這說明丹參能對H/R所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷起保護(hù)作用是由丹參中氯仿部位所含的化學(xué)成分和丹參中乙酸乙酯部位所含的化學(xué)成分協(xié)同作用的結(jié)果。而丹參氯仿部位所含的化學(xué)成分為丹參酮，乙酸乙酯部位所含的化學(xué)成分為酚酸類，因此丹參中丹參酮和酚酸類成分對H/R所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷都有保護(hù)作用，丹參對H/R所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用是丹參酮和酚酸類成分作用的結(jié)果，即丹參中對心血管疾病的治療作用是丹參酮和酚酸類成分協(xié)同的結(jié)果。
實施例5丹參三七有效部位組合藥對H/R損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用研究將丹參三七有效部位按生藥比例進(jìn)行組合，丹參中氯仿部位和乙酸乙酯部位提取率相當(dāng)，故組合時此兩部位保持比例為1∶1，再與三七正丁醇部位組合，相當(dāng)于丹參與三七以不同比例配伍。保持藥物總濃度為100ng/ml，對丹參氯仿部位∶丹參乙酸乙酯部位∶三七正丁醇部位的比例各為10∶10∶1、5∶5∶1、5∶5∶3、1∶1∶1、3∶3∶5、1∶1∶5及1∶1∶10的組合藥，按照實施例4進(jìn)行藥理學(xué)實驗，結(jié)果(見表3)表明除了丹參氯仿部位∶丹參乙酸乙酯部位∶三七正丁醇部位的比例為1∶1∶10的組合藥，其它比例的組合藥都具有抗血管內(nèi)皮細(xì)胞H/R損傷作用。
表1丹參、三七及不同部位對HUVECs細(xì)胞存活率的影響(n＝6)

注與空白對照組比**P＜0.01，*P＜0.05表2.丹參、三七及不同部位對HUVECs缺氧復(fù)氧LDH漏出率的影響

注與正常對照組比較均有極顯著性差異；各給藥組與模型組比**P＜0.01，*P＜0.05
表3.丹參、三七及有效部位不同比例組合藥對HUVECs缺氧復(fù)氧LDH漏出率的影響

注與正常對照組比較均有極顯著性差異；各給藥組與模型組比**P＜0.01，*P＜0.0權(quán)利要求
1.一種丹參三七提取物的有效部位組合物，為丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位和三七正丁醇部位；其重量比，丹參氯仿部位∶丹參乙酸乙酯部位∶三七正丁醇部位＝10∶10∶1-1∶1∶5。
2.如權(quán)利要求1所述的有效部位組合物，其特征在于，該組合物為凍干粉。
3.制備權(quán)利要求1所述有效部位組合物的方法，其步驟如下a)分別取丹參和三七生藥材，各自加入藥材重量6～15倍的60～95％乙醇溶液回流提取1-3小時，分別得到丹參總提物和三七總提物的提取液；b)丹參總提物的提取液抽干后用水返溶，氯仿萃取，水層調(diào)pH＝3后再用乙酸乙酯萃取，收集丹參氯仿部位及丹參乙酸乙酯部位；c)三七總提物的提取液抽干后用水返溶，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，收集三七正丁醇部位；f)將丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位和三七正丁醇部位按比例混合，得丹參三七有效部位組合物。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟a至步驟f中的各產(chǎn)物可先制成凍干粉。
5.權(quán)利要求1或2所述的有效部位組合物在制備治療心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種丹參三七提取物的有效部位組合物，為丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位和三七正丁醇部位；其重量比＝10∶10∶1－1∶1∶5。其制備步驟為分別取丹參和三七生藥材，各自加入藥材重量6～15倍的60～95％乙醇溶液回流提取1－3小時，分別得到丹參總提物和三七總提物的提取液；丹參總提物的提取液抽干后用水返溶，氯仿萃取，水層調(diào)pH＝3后再用乙酸乙酯萃取，收集丹參氯仿部位及丹參乙酸乙酯部位；三七總提物的提取液抽干后用水返溶，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，收集三七正丁醇部位；將丹參氯仿部位、丹參乙酸乙酯部位和三七正丁醇部位按比例混合，得丹參三七有效部位組合物。該組合物可用于治療心血管疾病的藥物開發(fā)。
文檔編號A61P9/00GK1981805SQ20051012648
公開日2007年6月20日 申請日期2005年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月14日
發(fā)明者曾桂鳳, 肖紅斌, 梁鑫淼 申請人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所