專(zhuān)利名稱(chēng)：3－烷氧取代－2,5,7－三取代苯并吡喃－4－酮類(lèi)化合物及其制備方法和包含該類(lèi)化合 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，更具體涉及3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物、其制備方法及含此類(lèi)化合物的藥物組合物。該類(lèi)化合物可用于預(yù)防和治療SARS病毒和感冒病毒感染。
背景技術(shù)：
本發(fā)明以SARS病毒和HCoV-229E抗原型感冒病毒的3CL蛋白酶(3CLPro)為靶標(biāo)設(shè)計(jì)的一類(lèi)3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物及其制備方法。本發(fā)明還涉及該類(lèi)化合物作為SARS病毒和HCoV-229E抗原型感冒病毒抑制劑應(yīng)用于治療和/或預(yù)防SARS病毒和感冒病毒感染。
冠狀病毒屬于尼多病毒目(Nidovirales)冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)，是一類(lèi)球形、有包膜的正鏈RNA病毒，共有10余種，主要引起人和動(dòng)物的呼吸道和腸道疾病。過(guò)去將冠狀病毒分為3個(gè)組，I組和II組主要為哺乳動(dòng)物和人冠狀病毒，III組主要為禽類(lèi)冠狀病毒。其宿主范圍嚴(yán)格，細(xì)胞培養(yǎng)條件較苛刻，人冠狀病毒的適宜培養(yǎng)溫度為33℃～35℃。
人冠狀病毒分別屬于OC43和229E兩個(gè)抗原型，它是引起人類(lèi)上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒，主要發(fā)生在冬季和早春。潛伏期為2～5天，病程持續(xù)6～7天。主要臨床表現(xiàn)包括不適、鼻炎、頭痛、咽痛及咳嗽，可有發(fā)熱、聲音嘶啞、胸腹痛等，偶可引起小兒哮喘突然發(fā)作以及成人慢性支氣管炎加重。國(guó)外一些教科書(shū)指出，冠狀病毒偶可引起嚴(yán)重的下呼吸道感染。各國(guó)報(bào)道的人群抗體陽(yáng)性率不同，我國(guó)人群以往冠狀病毒中和抗體陽(yáng)性率在30％至60％，前蘇聯(lián)的抗體陽(yáng)性率則在53％至97％。在美國(guó)華盛頓D.C.地區(qū)，連續(xù)4年的血清流行病學(xué)研究表明，冠狀病毒占成人上呼吸道感染的10％-24％。在美國(guó)密執(zhí)安州的一次家庭檢查中，證明冠狀病毒可以感染各個(gè)年齡組，0-4歲占29.2％，40歲以上占22％，在15-19歲年齡組發(fā)病率最高。冠狀病毒HCV-229E是普通感冒病毒的一種，人類(lèi)約30％的感冒由其引起。
傳染性非典型性肺炎(簡(jiǎn)稱(chēng)“非典“)，又稱(chēng)嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)，是由一種新型冠狀病毒(SARS-CoV)引起的。這種新發(fā)現(xiàn)的病毒不屬于上述3組中的任何一組，是一種新型冠狀病毒。它可通過(guò)飛沫、糞便和尿液等多種途徑傳播。是傳染性很強(qiáng)、病死率高的急性疾病。臨床起病急，以發(fā)熱(＞38℃)為首發(fā)癥狀，可伴有畏寒、頭痛、關(guān)節(jié)酸痛、肌肉酸痛、乏力、腹瀉；嚴(yán)重者出現(xiàn)呼吸加速，氣促，或明顯呼吸窘迫，進(jìn)一步發(fā)展為呼吸困難甚至衰竭。病程一般為18～23天，重度患者更長(zhǎng)，乙肝攜帶者和高年齡組人群的預(yù)后較差。自2002年11月起，SARS在亞洲開(kāi)始流行，并迅速傳播到全世界。傳染性非典型肺炎病人中90％左右感染SARS病毒的人能夠痊愈，致死率約為10％左右。2003年4月16日，世界衛(wèi)生組織正式宣布SARS的病原體是一種新的冠狀病毒，并正式命名為SARS病毒。SARS病毒為正鏈的單鏈RNA病毒，復(fù)制不經(jīng)過(guò)DNA中間體，使用標(biāo)準(zhǔn)密碼子。
研究發(fā)現(xiàn)，SARS和感冒病毒中皆存在的一種稱(chēng)為3CL主蛋白酶的蛋白質(zhì)，它在病毒的整個(gè)生活史中起關(guān)鍵調(diào)控作用。只有當(dāng)病毒表達(dá)的聚蛋白被3CL蛋白酶切割生成功能蛋白后，病毒才能完成自身的復(fù)制功能(K.Anand，J.Ziebuhr，P.Wadhwani，J.R.Mesters，R.Hilgenfeld，Coronavirus main proteinase(3CLpro)structurebasis for design ofanti-SARS drugs，Science 300(2003)，1763-1767.)。因此，該蛋白酶是一個(gè)重要的藥物設(shè)計(jì)靶點(diǎn)，而對(duì)該蛋白酶的研究也就成為研發(fā)治療普通感冒和“非典”藥物的主攻方向之一。到目前為止，感冒和SARS尚無(wú)特異性治療和預(yù)防手段，特別是對(duì)SARS冠狀病毒感染，尚無(wú)特異性抗病毒療法。
近年來(lái)，“計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)”(Computer-Aided Drug Design，CADD)已成為現(xiàn)代藥物研究與開(kāi)發(fā)的一個(gè)重要方法和工具。運(yùn)用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)平均而言能縮短新藥研究周期0.9年，節(jié)省研究與開(kāi)發(fā)費(fèi)用1.3億美元。因此，CADD方法已廣泛地應(yīng)用于先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)與優(yōu)化。計(jì)算機(jī)輔助高通量虛擬已經(jīng)成為目前常用的一種計(jì)算機(jī)輔助藥物發(fā)現(xiàn)方法。其原理是運(yùn)用超級(jí)計(jì)算機(jī)通過(guò)分子對(duì)接的方法在多達(dá)數(shù)百萬(wàn)的小分子化合物庫(kù)中尋找可以與某一特定疾病靶標(biāo)蛋白結(jié)合的化學(xué)結(jié)構(gòu)，為進(jìn)一步的分子、細(xì)胞、動(dòng)物和臨床研究提供高效可靠的小分子先導(dǎo)化合物。
綜上所述，以3CL主蛋白酶作為靶標(biāo)，結(jié)合CADD和各種水平的生物活性測(cè)試試驗(yàn)，設(shè)計(jì)并合成的小分子化合物，對(duì)開(kāi)發(fā)抗病毒藥物具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
通過(guò)CADD的方法，發(fā)明人已經(jīng)找到了一個(gè)化合物，五羥黃酮-3-β-半乳糖苷(英文名為quercetin-3-d-galactoside或Hyperoside，俗名為金絲桃苷)，具有較強(qiáng)的SARS病毒和感冒病毒(229E抗原型)的3CL蛋白酶(3CL Mpro)雙效抑制作用。這個(gè)天然產(chǎn)物可以從天然植物中，如金絲桃、蔓越橘(cranberry)、黃蜀葵花、鹿蹄草及山楂等，提取得到。本發(fā)明人已就該化合物申請(qǐng)專(zhuān)利(專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00510024349.X)，并在此將該專(zhuān)利申請(qǐng)做為本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)提出。五羥黃酮-3-β-半乳糖苷被包含在式(I)的結(jié)構(gòu)中，對(duì)應(yīng)于本專(zhuān)利化合物IA-2(實(shí)施例4，斛皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖)；本申請(qǐng)的化合物為這個(gè)天然產(chǎn)物的衍生物，對(duì)化合物結(jié)構(gòu)類(lèi)型等都有廣泛的擴(kuò)展。而且分子結(jié)合活性和酶抑制活性也有一定的提高。
本發(fā)明所示化合物是通過(guò)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，經(jīng)藥物合成得到，并運(yùn)用表面等離子共振(BIAcore)實(shí)時(shí)測(cè)量它們與3CLPro的結(jié)合常數(shù)(KD)，揭示了具有較強(qiáng)的3CL蛋白酶的結(jié)合能力，證明了本發(fā)明化合物對(duì)SARS病毒和HCoV-229E抗原型感冒病毒的3CL蛋白酶的抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供具有抗SARS病毒和HCoV-229E抗原型感冒病毒作用的新型3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)通式如式(I)所示。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供以取代2-羥基苯乙酮為原料合成新型的3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物的方法。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物的藥物組合物及其在抗病毒方面的應(yīng)用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于可有效地抑制SARS病毒和HCoV-229E抗原型感冒病毒的3CL蛋白酶，通過(guò)阻斷其催化活性，從而阻止病毒完成自身的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制。因此可開(kāi)發(fā)成為新的抗病毒藥物。由于目前沒(méi)有治療SARS和感冒病毒的特效藥，因此含有本發(fā)明化合物的藥物組合物提供了一條通過(guò)抑制這些病毒蛋白酶的途徑而達(dá)到預(yù)防和治療SARS及感冒等疾病的目的。
本發(fā)明提供具有如下通式(I)結(jié)構(gòu)的3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物 其中R1選自含有1-3個(gè)選自氧、硫、氮的雜原子，或被苯基和芳香雜環(huán)并合，或被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素，C1-C6直鏈或支鏈烴基，氰基，硝基，氨基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，羧基，C1-C4烷氧基，巰基，C1-C4?；?，芳香基Ar的基團(tuán)所取代的芳香基Ar或5-7元芳香雜環(huán)。
R2選自C1-C6直鏈或支鏈的飽和或不飽和烷基，C3-C7飽和或不飽和環(huán)烷基，芳香基Ar、和5-7元雜環(huán)基，以及具有下列結(jié)構(gòu)的糖基
其中，Ar選自取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基和取代或未取代的聯(lián)苯基，取代基可以是1-4個(gè)選自鹵素、C1-C6直鏈或支鏈烴基、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4不飽和烴氧基、羧基、酯基、C1-C6羧基烷氧基、C1-C6酯基烷氧基、C1-C6羧基烷基、C1-C6酯基烷基、氰基、硝基、氨基、羥甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基、C1-C4?；幕鶊F(tuán)；所述雜環(huán)基含有1-3個(gè)選自氧、硫、氮的雜原子，并可任選地被苯基并合和/或被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-C6直鏈或支鏈烴基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、酯基、C1-C6羧基烷氧基、C1-C6酯基烷氧基、C1-C6羧基烷基、C1-C6酯基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4不飽和烴氧基、巰基、C1-C4?；r的基團(tuán)所取代。
R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，C1-C6直鏈或支鏈的飽和或不飽和烷基及烷氧基，硝基，鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，羥基，以及具有下列結(jié)構(gòu)的糖基
R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫，羥基，C1-C5的烷氧基及乙酰氧基。
本發(fā)明還提供本申請(qǐng)要求保護(hù)的化合物及其中間體化合物IV、V、VI、VII的制備方法。
方法一以槲皮黃酮為原料，分別經(jīng)酚羥基保護(hù)，O-烷基化，脫保護(hù)制得，合成方法具體如反應(yīng)式1所示1)將斛皮素與過(guò)量二氯二苯甲烷混勻，升溫至170-200℃攪拌10-60分鐘。冷至室溫，所得固體柱層析分離得產(chǎn)物，從而得到2-(2，2-二苯基-苯并[1，3]二氧五環(huán)-5-基)-3，5，7-三羥基-苯并吡喃-4-酮(化合物IV)；2)將IV、無(wú)機(jī)物與過(guò)量的R2X投入到適量得DMF中，惰性氣體保護(hù)下，室溫?cái)嚢?0-40小時(shí)，加水，有機(jī)溶劑萃取，干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，殘余物柱層析分離得產(chǎn)物，從而得到2-(2，2-二苯基-苯并[1，3]二氧五環(huán)-5-基)-5，7-二羥基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮(化合物V)。
其中R2的定義與上面所述的相同，X選自氯或溴；3)將化合物V投入無(wú)水乙醇中，室溫?cái)嚢柘?，Pd/C催化氫化攪拌3-24小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸除大部分溶劑，殘余物柱層析或重結(jié)晶分離得產(chǎn)物，從而得到2-(3，4-二羥基苯基)-5，7-二羥基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮(IA)。
反應(yīng)式1 3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物IA制備方法二以取代2-羥基苯乙酮為原料，分別經(jīng)酚羥基保護(hù)，AFO反應(yīng)，O-烷基化，脫保護(hù)制得，合成方法具體如反應(yīng)式2所示1)選擇性酚羥基芐基保護(hù)得到的鄰羥基苯乙酮，與適當(dāng)?shù)娜〈┰贏FO(Algar-Flynn-Oyamada)反應(yīng)條件(J.Med.Chem.2000，43，3752-3760)下化合得到目標(biāo)物，從而得到2，5-二取代-7-芐氧基-3-羥基-苯并吡喃-4-酮(化合物VI)。
2)將步驟1)中得到的化合物與過(guò)量的R2X投入到適量DMF中，回流攪拌10-40小時(shí)，加水，有機(jī)溶劑萃取，干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)柱層析或重結(jié)晶分離得產(chǎn)物，從而得到化合物2，5-二取代-7-芐氧基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮；其中R2的定義與上面所述的相同，X選自氯或溴。
3)以上面方法一的3)中類(lèi)似的方法得到2，5-二取代-7-羥基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮(IB)。
反應(yīng)式2 3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物IB制備其中R1，R2和R3的定義如上所述。
在兩種方法的步驟(2)中所用的無(wú)機(jī)物為Na2CO3、K2CO3、NaHCO3以及無(wú)機(jī)堿，吡啶、三乙胺、二乙胺；惰性氣體為氮?dú)饣驓鍤?；萃取用有機(jī)溶劑為乙酸乙脂、氯仿、二氯甲烷、乙醚。
在兩種方法的步驟(3)中所用有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、四氫呋喃、丙醇、異丙醇；反應(yīng)溫度在20-60℃；催化氫化用鈀/碳催化劑，其中鈀含量為5％～30％，本發(fā)明式(I)化合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如下3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物其中，R1為基團(tuán)(II)
R2選自C1-C6直鏈或支鏈的飽和或不飽和烷基，C3-C7飽和或不飽和環(huán)烷基，芳香基Ar、和5-7元雜環(huán)基，以及具有下列結(jié)構(gòu)的糖基 R3和R4選自羥基；R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫，羥基，C1-C5的烷氧基及乙酰氧基。
本發(fā)明式(I)化合物的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如下3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物其中，R1為基團(tuán)(II) R2的定義如前所述；R3選自氫，R4選自羥基。
本發(fā)明式(I)化合物的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如下3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物
其中，R1為結(jié)構(gòu)基團(tuán)(III) R2的定義如前所述；R3選自氫，R4選自羥基。
本發(fā)明式(I)化合物的第四個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是如下3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物其中，R1為基團(tuán)(III) R2的定義如前所述；R3和R4選自羥基。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供可用于預(yù)防和/或治療病毒感染疾病的藥物組合物，所述藥物組合物含有式(I)所示3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物，其可用于體內(nèi)治療并具有生物相容性。所述藥物組合物可以根據(jù)不同給藥途徑而制備成各種形式。本發(fā)明的藥物組合物可以用于預(yù)防和/或治療病毒感染疾病。
本發(fā)明所提供的藥用組合物可以是多種形式，如片劑、膠囊、粉末、糖漿、溶液狀、懸浮液和氣霧劑等，并可以存在于適宜的固體或液體的載體或稀釋液中和適宜的用于注射或滴注的消毒器具中。該藥用組合物也可以包含氣味劑、香味劑等，其理想的比例是式(I)化合物作為活性成分占總重量比65％～99.5％，其余部分為占總重量比0.5-40％，或更好為1-20％，或最好為1-10％的藥學(xué)可接受的載體、稀釋液或溶液或鹽溶液等。另外，在制劑配方的單位劑量中優(yōu)選包含1mg-5000mg有效化合物。
口服制劑可以由本申請(qǐng)要求保護(hù)的化合物與維生素C及口服制劑中常用的藥物載體和賦形劑制成。其中藥物載體和賦形劑包括乳糖；淀粉及其衍生物類(lèi)如玉米淀粉、羧甲基淀粉等；纖維素衍生物如甲基和乙基纖維素；明膠；無(wú)機(jī)類(lèi)化合物如輕質(zhì)氧化鎂、滑石粉等；油如植物油等；包含劑如β-環(huán)糊精；以及二元醇類(lèi)如聚乙二醇?？诜苿┛勺龀善瑒?、膠囊、乳劑、溶液等，也可應(yīng)用于固體分散片、脂質(zhì)體制劑、靶向制劑和控釋制劑等。在片劑中，可將含有有效量本專(zhuān)利化合物與含有酒石酸或拘橡酸混合組成的崩解劑一起制成泡騰片，當(dāng)遇水時(shí)產(chǎn)生二氧化碳?xì)怏w使片劑迅速崩解。
注射制劑的典型形式為粉針劑、混懸型注射劑等，配制注射劑所采用的藥物可接受的稀釋劑可以采用等滲鹽水、5％葡萄糖水溶液、注射用水、茶油、大豆油、麻油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、聚氧乙烯蓖麻油；吐溫80、卵磷脂、脫氧膽酸鈉、蛋黃磷脂；醋酸、醋酸鈉、乳酸、檸檬酸、酒石酸及鈉鹽、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、碳酸鈉；明膠、羧甲基纖維素鈉、果膠、山梨醇溶液、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸丁酯及乙酯、三氯叔丁醇；利多卡因；腦磷脂、大豆磷脂等。
如上所述的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物可對(duì)哺乳動(dòng)物臨床使用，包括人和動(dòng)物，可以通過(guò)口、鼻、皮膚、肺、或者胃腸道等的給藥途徑。最佳優(yōu)選為口服。最佳優(yōu)選一次性服用的日劑量為0.02-200mg/kg體重，或分次服用的劑量為0.01-100mg/kg體重。不管用何種服用方法，個(gè)人的最佳劑量應(yīng)依據(jù)具體的治療而定。通常情況下是從小劑量開(kāi)始，逐漸增加劑量一直到找到最適合的劑量。
式(I)化合物通過(guò)阻斷3CL蛋白酶的催化活性，從而阻止病毒完成自身的復(fù)制。因而該類(lèi)化合物可應(yīng)用于治療病毒感染疾病的藥物。
具體實(shí)施例方式
在以下的實(shí)施例中將進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例中的所有參數(shù)以及其余的說(shuō)明，除另有說(shuō)明外，都是以質(zhì)量(克)為單位。
實(shí)施例12-(2，2-二苯基-苯并[1，3]二氧五環(huán)-5-基)-3，5，7-三羥基-苯并吡喃-4-酮(化合物IV)的制備將5克斛皮素與10.5克二氯二苯甲烷加入到50毫升圓底燒瓶中，升溫至180℃攪拌10分鐘。冷至室溫，所得固體柱層析分離(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc＝85∶15)，得黃色固體產(chǎn)物IV 2.7克，收率39.1％。Mp239-240℃(lit.222-224℃)。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ6.22(1H，d)，6.50(1H，d)，7.26(1H，d)，7.44-7.60(10H，m)，7.80-7.83(2H，m)。
實(shí)施例22-(2，2-二苯基-苯并[1，3]二氧五環(huán)-5-基)-3-O-β-D-四乙?；拎咸烟?5，7-二羥基-苯并吡喃-4-酮(化合物V的一種)將0.3克IV，0.13克碳酸鉀和0.4克四乙酰-α-D-吡喃葡萄糖投入到50毫升圓底燒瓶中，氬氣保護(hù)下，0℃攪拌2小時(shí)，轉(zhuǎn)至室溫，攪拌12小時(shí)，加適量水，乙酸乙脂萃取，干燥，減壓蒸除溶劑，殘余物柱層析分離(洗脫劑石油醚/EtOAc＝4∶1)得黃色固體產(chǎn)物0.16克，收率31.2％。MS-ESI 797[M+H]+。
實(shí)施例3斛皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(化合物IA的一種(IA-1))將0.16克V-1與30毫克Pd/C(30％)投入到10毫升無(wú)水乙醇中，室溫?cái)嚢柘職浣夥磻?yīng)24小時(shí)。過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，殘余物柱層析分離(洗脫劑石油醚/EtOAc＝2∶1)得斛皮素-3-O-β-D-四乙?；拎咸烟?2毫克。
將上述產(chǎn)物與8毫克甲醇鈉投入到10無(wú)水甲醇中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加適量陽(yáng)離子交換樹(shù)脂中和(Dowex 50X4-400)，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，所得固體用少量二氯甲烷洗得黃色固體22毫克，收率23.7％(兩步總收率)。Mp 172-174℃；1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ3.1-3.8(7H，m)，5.49(1H，d)，6.22(1H，d)，6.43(1H，d)，6.87(1H，d)，7.61(2H，m)。MS-ESI 465[M+H]+，HRMS(ESI)m/z ca1cd C21H21O12[M+H]+465.1033，found 465.1067。
實(shí)施例4斛皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖(化合物IA的一種(IA-2))將四乙酰-α-D-吡喃葡萄糖替換成四乙酰-α-D-吡喃半乳糖，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1-3，得橙黃色固體75毫克，Mp187-190℃，收率45.7％(后兩步總收率)。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ3.20-3.62(7H，m)，5.37(1H，d)，6.19(1H，d)，6.40(1H，d)，6.82(1H，d)，7.51(1H，d)，7.66(1H，d)。MS-ESI 465[M+H]+，HRMS(ESI)m/z calcd C21H21O12[M+H]+465.1053，found 465.1067。
實(shí)施例5斛皮素-3-O-β-D-吡喃阿拉伯糖(化合物IA的一種(IA-3))將四乙酰-α-D-吡喃葡萄糖替換成四乙酰-α-D-吡喃阿拉伯糖，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1-3，得黃色固體37毫克，Mp 41-44℃，收率40.7％(后兩步總收率)。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ3.20-3.80(6H，m)，5.30(1H，d)，6.23(1H，d)，6.44(1H，d)，6.87(1H，d)，7.66(1H，d)，7.69(1H，d)。MS-ESI 435[M+H]+，HRMS(ESI)m/z calcd C20H19O11[M+H]+435.0927，found 435.0909。
實(shí)施例6斛皮素-3-O-β-L-吡喃巖藻糖(化合物IA的一種(IA-4))
將四乙酰-α-D-吡喃葡萄糖替換成四乙酰-α-D-吡喃巖藻糖，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例1-3，得黃色固體63毫克，Mp 172-174℃，收率38.7％(后兩步總收率)。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ1.02(3H，d)，3.30-3.60(5H，m)，5.36(1H，d)，6.23(1H，d)，6.44(1H，d)，6.86(1H，d)，7.56(1H，d)，7.71(1H，d)。MS-ESI 449[M+H]+，HRMS(ESI)m/z calcd C21H21O11[M+H]+449.1084，found 449.1087。
實(shí)施例73’，4’，7-三芐氧基-黃酮醇(化合物VI的一種)將1.21克4-芐氧基-2-羥基苯乙酮，1.59克3，4-二芐氧基苯甲醛投入到20毫升二氧六環(huán)/乙醇混合溶液中(3∶2)，冰浴冷卻攪拌下，滴加40％氫氧化鉀4毫升，完畢后轉(zhuǎn)至室溫?cái)嚢?6小時(shí)。125毫升二氯甲烷，水洗三次(3×40毫升)，干燥，過(guò)濾濃縮得固體直接投于下步反應(yīng)。
將上述固體，5.4％氫氧化鈉16毫升，二氧六環(huán)17毫升和無(wú)水乙醇47毫升混合，冰浴冷卻攪拌下，滴加30％雙氧水2.1毫升，完畢后保持0℃攪拌2小時(shí)，轉(zhuǎn)為室溫?cái)嚢?2小時(shí)。32毫升2M鹽酸酸化，抽率，水洗，乙醇洗得黃色固體2.3克。收率42.7％(兩步總收率)。
1H-NMR(400Hz，CDCl3)δ5.17(2H，s)，5.25(4H，s)，7.06(3H，m)，7.25-7.53(15H，m)，7.78(1H，d)，7.90(1H，s)，8.13(1H，d)。
實(shí)施例83-O-環(huán)己基-3’，4’，7-三芐氧基-黃酮醇(化合物VII的一種)
將VI-1 100毫克，溴代環(huán)己烷150毫克和碳酸鉀50毫克投入到5毫升DMF中，氬氣保護(hù)下，加熱至100℃攪拌24小時(shí)，冷至室溫，加入適量得水，乙酸乙脂萃取，干燥，減壓蒸除溶劑，殘余物柱層析分離(洗脫劑石油醚/EtOAc＝8∶1)得黃色固體90毫克。收率75.0％。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ1.06-1.40(6H，m)，1.60(2H，m)，1.80(2H，m)，4.24(1H，m)，5.17(2H，s)，5.23(2H，s)，5.26(2H，s)，6.92(1H，d)，7.05(2H，d)，7.30-7.50(15H，m)，7.70(1H，d)，7.84(1H，d)，8.16(1H，d)。
實(shí)施例93-O-環(huán)己基-3’，4’，7-三羥基-黃酮醇(化合物IB的一種(IB-1))將80毫克VII-1，20毫克Pd/C(10％)投入到20毫升無(wú)水乙醇中，室溫?cái)嚢柘職浣?4小時(shí)，過(guò)濾，濃縮得到的殘余物柱層析分離(洗脫劑石油醚/EtOAc＝2∶1)得黃色固體17毫克。Mp 98-100℃，收率36.2％。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ1.06-1.40(6H，m)，1.60(2H，m)，1.80(2H，m)，4.24(1H，m)，6.85-6.92(3H，m)，7.47(1H，d)，7.57(1H，d)，7.90(1H，d)。MS-EI 368(M+)，286(100％)。HRMS(EI)m/z calcdC21H20O6(M+)368.1258，found 368.1260。
實(shí)施例103-[2-(2，5-二甲氧基苯基)-2-氧代-乙氧基]-3’，5’，7-三羥基-黃酮醇(化合物IB的一種(IB-2))將溴代環(huán)己烷替換成α-溴代-2，5-二甲氧基苯乙酮，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8-9，得黃色固體25毫克。Mp 138-140℃，收率25.0％。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ3.72(3H，s)，3.79(3H，s)，5.33(2H，s)，6.84-6.91(4H，m)，7.16(2H，m)，7.26(1H，d)，7.59(2H，m)，7.88(1H，d)。MS-ESI 465[M+H]+。HRMS(ESI)m/z calcd C25H21O9[M+H]+465.1186，found 465.1164。
實(shí)施例113-O-環(huán)庚基-3’，4’，7-三羥基-黃酮醇(化合物IB的一種(IB-3))將溴代環(huán)己烷替換成溴代環(huán)庚烷，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8-9，得黃色固體110毫克。Mp 68-70℃，收率75.0％。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ1.20-1.60(8H，m)，1.87(4H，m)，4.45(1H，m)，6.85-6.91(3H，m)，7.45(1H，d)，7.57(1H，s)，7.89(1H，d)。MS-EI 382(M+)，286(100％)。HRMS(EI)m/z calcd C22H22O6(M+)382.1425，found 382.1416。
實(shí)施例123-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)-2-基甲氧基)-3’，5’，7-三羥基-黃酮醇(化合物IB的一種(IB-4))將溴代環(huán)己烷替換成2-溴甲基-2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8-9，得黃色固體90毫克。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ2.38(3H，s)，2.45(3H，s)，4.67(2H，s)，5.21(2H，s)，7.25-7.46(7H，m)，7.55(1H，s)，7.84(1H，d)，7.94(1H，s)，8.47(1H，d)，8.61(1H，s)。MS-ESI 460[M+H]+。
實(shí)施例133-(2-氧代-四氫呋喃-3-基氧基)-3’，5’，7-三羥基-黃酮醇(化合物IB的一種(IB-5))將溴代環(huán)己烷替換成3-溴代-二氫呋喃-2-酮，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8-9，得黃色固體29毫克。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ4.69(2H，s)，5.20(2H，s)，7.31-7.46(4H，m)，7.55(2H，d)，7.73(1H，d)，7.84(1H，d)，7.94(1H，s)，8.06(1H，d)，8.48(1H，d)，8.62(1H，s)。MS-ESI 557[M+H]+。
實(shí)施例142-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)-6-基)-3-羥基-7-芐氧基-苯并吡喃-4-酮(化合物VI的一種(VI-2))將3，4-二芐氧基苯甲醛替換成2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)-6-甲醛，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例7，得黃色固體0.6克。收率15.5％(兩步總收率)。MS-ESI 387[M+H]+。
實(shí)施例152-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)-6-基)-3-O-環(huán)己基-7-芐氧基-苯并吡喃-4-酮(化合物VII的一種(VII-2))將VI-1替換成VI-2，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例8，得黃色固體200毫克。收率83.3％。MS-ESI 499[M+H]+。
實(shí)施例16
2-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)-6-基)-3-O-環(huán)己基-7-羥基-苯并吡喃-4-酮(化合物IB的一種(IB-6))將100毫克VII-2，20毫克Pd/C(10％)投入到20毫升無(wú)水乙醇中，室溫?cái)嚢柘職浣?4小時(shí)，過(guò)濾，濃縮得到的殘余物柱層析分離(洗脫劑石油醚/EtOAc＝2∶1)得黃色固體55毫克。Mp137-139℃，收率69.6％。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ1.06-1.40(6H，m)，1.60(2H，m)，1.80(2H，m)，4.10(1H，m)，4.34(4H，t)，6.94(2H，m)，7.04(1H，d)，7.65(2H，m)，7.92(1H，d)。MS-EI 394(M+)，312(100％)。HRMS(EI)m/z calcd C23H22O6(M+)394.1431，found 394.1416。
實(shí)施例174-[2-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧六環(huán)-6-基)-7-羥基-苯并吡喃-4-酮-3-氧基]-丁酸甲酯(化合物IB的一種(IB-7))將溴代環(huán)己烷替換成γ-丁酸甲酯，其余所需原料、試劑及制備方法同實(shí)施例15-16，得黃色色固體320毫克。Mp168-170℃，收率89.6％。
1H-NMR(400Hz，DMSO-d6)δ1.86(2H，m)，2.42(2H，t)，3.56(3H，s)，3.97(2H，t)，4.34(4H，m)，6.92(2H，m)，7.03(1H，d)，7.55(2H，m)，7.91(1H，d)。MS-EI 412(M+)，101(100％)。HRMS(EI)m/z calcdC22H20O8(M+)412.1138，found 412.1159。
實(shí)施例18本發(fā)明部分化合物與SARS 3CL及HCV 3CL蛋白酶結(jié)合活性測(cè)定
SARS和HCV 3CL蛋白酶與3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物結(jié)合活性的篩選和動(dòng)力學(xué)常數(shù)的測(cè)定基于SPR(表面等離子共振)原理，使用的儀器是Biacore 3000(Biacore AB，Uppsala，Sweden)。以下以SARS 3CL蛋白酶為例，HCV 3CL蛋白酶方法類(lèi)似。
(1)SARS 3CL蛋白酶質(zhì)粒(pQE30-SARS_3CLpro)的構(gòu)建根據(jù)SARS 3GLprocDNA序列設(shè)計(jì)引物，包含Hind III和BamHI酶切位點(diǎn)，PCR擴(kuò)增SARS 3CLpro片段，將酶切后的PCR產(chǎn)物和表達(dá)載體pQE30連接后鑒定正確，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌M15進(jìn)行表達(dá)。
(2)SARS 3CL蛋白酶的表達(dá)及純化將表達(dá)菌株M15(含pQE30-SARS_3CLpro質(zhì)粒)接種到含有100μg/mL氨卞青霉素和25μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)8小時(shí)后轉(zhuǎn)接至相同的新鮮培養(yǎng)基LB中，繼續(xù)培養(yǎng)3小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，然后將溫度降為22℃，加0.5mM IPTG繼續(xù)誘導(dǎo)5小時(shí)。菌體經(jīng)超聲破碎后，4℃，14,000rmp離心，得到的上清液通過(guò)Ni柱親和層析得高純度的SARS 3Cl蛋白酶。
(3)SARS 3CL蛋白酶的偶聯(lián)徹底清洗Biacore 3000機(jī)器后，用HBS-EP緩沖液(10mM Hepes，150mM NaCl，3mM EDTA and 0.005％(v/v)surfactant P20，pH 7.4)平衡機(jī)器至基線平穩(wěn)。0.2M N-ethyl-N’-dimethylaminopropyl carbodiimide(N-乙基-N’-二甲基氨丙基碳二亞胺)和50mM N-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)1∶1混和，以5μL/min進(jìn)樣7分鐘以活化芯片表面。SARS 3CL蛋白酶用10mM乙酸鈉，pH4.3，稀釋至終濃度為25μg/ml以5μL/min流速進(jìn)樣，至偶聯(lián)量為4000RU左右。最后，用1M鹽酸乙醇胺，pH 8.5以5μL/min流速進(jìn)樣7分鐘，封閉芯片表面，最終SARS3CL蛋白酶的偶聯(lián)量為4000RU左右。
(4)化合物篩選化合物用100％DMSO溶解，母液濃度為10mM。用HBS-EP緩沖液稀釋化合物，至終濃度為1μM和10μM，DMSO的終濃度為0.1％。根據(jù)待篩化合物與芯片上SARS 3CL蛋白酶的結(jié)合的RU(ResponseUnit，共振單位)值，判斷化合物是否具有結(jié)合活性。有結(jié)合活性的化合物可進(jìn)行詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。
(5)動(dòng)力學(xué)測(cè)定SARS 3CL蛋白酶偶聯(lián)完成后，平衡過(guò)夜至基線平穩(wěn)，然后進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)定。工作緩沖液用HBS-EP(含0.1％DMSO)，將3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物配成不同的濃度梯度，以30μl/min進(jìn)樣1min，解離2min，然后用相同緩沖液穩(wěn)定2min。得到化合物與SARS3CL蛋白酶相互作用的傳感圖，再用Biacore分析軟件中的1∶1(Langmuir)結(jié)合模型或穩(wěn)態(tài)模型進(jìn)行擬合，得到確切的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)常數(shù)。
(6)試驗(yàn)結(jié)果表1為3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物與SARS和HCV 3CL蛋白酶結(jié)合的實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)果。從表1可以看出，本發(fā)明化合物對(duì)SARS和HCV 3CL蛋白酶均有較強(qiáng)的結(jié)合活性。
表1.3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物與SARS和HCV 3CL蛋白酶結(jié)合的數(shù)據(jù)

實(shí)施例19本發(fā)明部分化合物抑制SARS病毒3CL蛋白酶的IC50測(cè)定(1)試驗(yàn)材料熒光底物Dabcyl-KNSTLQSGLRKE-Edans由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成。SARS冠狀病毒3CL蛋白酶為本實(shí)驗(yàn)室利用細(xì)胞分子生物學(xué)方法，按照文獻(xiàn)方法(Haifang Sun，Haibin Luo，Changying Yu，Tao Sun etc，Molecular cloning，expression，purification，and massspectrometric characterization of 3C-like Proteinase of SARS coronavirus，Protein Expression and Purification，2003，302-308)用pQE30載體(Qiagen)構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pQE30-3CL，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌M15(Qiagen)中進(jìn)行表達(dá)，并通過(guò)NTA-Ni柱層析的方法純化獲得。
(2)試驗(yàn)方法有結(jié)合活性的化合物可用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的方法進(jìn)行復(fù)篩和IC50值測(cè)定。實(shí)驗(yàn)中使用的底物為EDANS和Dabcyl標(biāo)記的帶有SARS 3CLpro特異性酶切位點(diǎn)的多肽，序列為EDANS-Val-Asn-Ser-Thr-Leu-Gln-Ser-Gly-Leu-Arg-Lys-(Dabcyl)-Met。用GENios酶標(biāo)儀(TECAN)測(cè)定340nm激發(fā)光下不同反應(yīng)體系在發(fā)射波長(zhǎng)為488nm時(shí)熒光強(qiáng)度值的變化，反應(yīng)連續(xù)測(cè)定1小時(shí)。抑制劑IC50值測(cè)定方法同上，即選用不同抑制劑的濃度，反應(yīng)體系總體積為200μL，反應(yīng)物濃度分別為3CL蛋白酶的終濃度為1μM，熒光底物的終濃度為10μM，化合物的終濃度分別為200μM～0.01μM。測(cè)定化合物IC50值時(shí)設(shè)定空白對(duì)照，即不加化合物，但加相同濃度DMSO的3CL蛋白酶樣品以及單獨(dú)熒光底物溶液的樣品。每個(gè)樣品設(shè)復(fù)孔，測(cè)定值取平均。根據(jù)不同濃度化合物存在條件下，SARS病毒3CL蛋白酶酶切熒光底物的反應(yīng)速度，與未加待測(cè)化合物但加0.5％DMSO的反應(yīng)速度進(jìn)行比較，計(jì)算得到各濃度下的抑制率。即含0.5％DMSO條件下的酶活性為100％，抑制率為100％減去不同濃度抑制劑下酶的相對(duì)活性乘以100％。根據(jù)Logistic公式用origin軟件進(jìn)行非線性擬合計(jì)算測(cè)定化合物IC50值。公式A(I)/A0=1-11+(I/IC50)p]]>上述公式中，A0指加0.5％DMSO時(shí)的酶活性，A(I)指不同待測(cè)化合物濃度下的酶活性，I指待測(cè)化合物的濃度，p指μ因子。
(3)試驗(yàn)結(jié)果表2為3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物抑制SARS病毒3CL蛋白酶的IC50測(cè)定結(jié)果，進(jìn)一步證明本發(fā)明化合物對(duì)SARS3CL蛋白酶具有較強(qiáng)的抑制活性。
表2.3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物抑制SARS病毒3CL蛋白酶的IC50測(cè)定結(jié)果。

實(shí)施例20包含本專(zhuān)利化合物的口服片劑的制備通法專(zhuān)利化合物125克維生素C 100克微粉硅膠 40克預(yù)膠化淀粉10克硬脂酸鎂 適量將本專(zhuān)利化合物與維生素C、微粉硅膠等附加劑混合均勻，用10％預(yù)膠化淀粉漿作為黏合劑，濕法制粒，真空干燥。加入適量硬脂酸鎂混合，壓制成片劑500片，每片含專(zhuān)利化合物有效成分0.25克。
實(shí)施例21包含本專(zhuān)利化合物的口服液的制備通法專(zhuān)利化合物25克維生素C 50克蔗糖 100克羧甲基纖維素鈉5克吐溫 適量蒸餾水適量適量與上述附加劑加熱混合均勻，冷卻后再與維生素C及本專(zhuān)利化合物充分混合，配成1000毫升口服液。每10ml含專(zhuān)利化合物有效成分0.25克。
實(shí)施例22包含本專(zhuān)利化合物的膠囊的制備通法專(zhuān)利化合物125克維生素C 50克低取代羥丙基纖維素10克微粉硅膠 40克微晶纖維素適量70％乙醇 適量硬脂酸鎂 適量將本專(zhuān)利化合物與維生素C、微粉硅膠及低取代羥丙基纖維素等附加劑混合均勻，用70％乙醇做濕潤(rùn)劑，濕法制粒，真空干燥。加入適量硬脂酸鎂混合，裝入1000枚硬膠囊，每枚硬膠囊含專(zhuān)利化合物有效成分0.125克。
實(shí)施例23包含本專(zhuān)利化合物的針劑的制備通法專(zhuān)利化合物300克45％乙醇 1350ml聚氧乙烯蓖麻油1500克將本專(zhuān)利化合物與45％乙醇及聚氧乙烯蓖麻油混合均勻，冷藏、過(guò)濾，灌裝成1000小瓶，每小瓶含專(zhuān)利化合物有效成分0.3克。使用前用生理鹽水250ml稀釋?zhuān)o脈滴注。
實(shí)施例24包含本專(zhuān)利化合物的泡騰片的制備通法酸顆粒部分專(zhuān)利化合物100克檸檬酸450克乳糖 50克堿顆粒部分NaHCO3390克乳糖 40克阿斯巴甜 10克桔味香精 4克將酸顆粒部分和堿顆粒部分分別混合制粒后，再將這兩個(gè)部分充分混合，壓制成250粒。每粒約重4克，含專(zhuān)利化合物有效成分0.25克。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明的3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物的制備方法具有反應(yīng)條件溫和、原料豐富易得、操作及后處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，且本發(fā)明的化合物毒性很低。
本發(fā)明的3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物在計(jì)算機(jī)虛擬篩選以及在兩種病毒3CL蛋白酶結(jié)合試驗(yàn)和酶抑制試驗(yàn)中均顯示了陽(yáng)性結(jié)果。應(yīng)證了其病毒的作用機(jī)制。因此，本發(fā)明的化合物可用于制備抗病毒的藥物。
權(quán)利要求
1.3-烷氧取代-2，5，7-三取代苯并吡喃-4-酮類(lèi)化合物，如下式(I)表示， 其中R1選自含有1-3個(gè)選自氧、硫、氮的雜原子，可被苯基和芳香雜環(huán)并合，或被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素，C1-C6直鏈或支鏈烴基，氰基，硝基，氨基，羥基，羥甲基，三氟甲基，三氟甲氧基，羧基，C1-C4烷氧基，巰基，C1-C4?；枷慊鵄r的基團(tuán)所取代的芳香基Ar或5-7元芳香雜環(huán)；R2選自C1-C6直鏈或支鏈的飽和或不飽和烷基，C3-C7飽和或不飽和環(huán)烷基，芳香基Ar、和5-7元雜環(huán)基，以及具有下列結(jié)構(gòu)的糖基 芳香基Ar選自取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基和取代或未取代的聯(lián)苯基，取代基可以是1-4個(gè)選自鹵素、C1-C6直鏈或支鏈烴基、羥基、C1-C4烷氧基、C1-C4不飽和烴氧基、羧基、酯基、C1-C6羧基烷氧基、C1-C6酯基烷氧基、C1-C6羧基烷基、C1-C6酯基烷基、氰基、硝基、氨基、羥甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基、C1-C4酰基的基團(tuán)；所述雜環(huán)基含有1-3個(gè)選自氧、硫、氮的雜原子，并可任選地被苯基并合和/或被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、C1-C6直鏈或支鏈烴基、氰基、硝基、氨基、羥基、羥甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基、酯基、C1-C6羧基烷氧基、C1-C6酯基烷氧基、C1-C6羧基烷基、C1-C6酯基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4不飽和烴氧基、巰基、C1-C4酰基、芳香基Ar的基團(tuán)所取代；R3和R4各自獨(dú)立地選自氫，C1-C6直鏈或支鏈的飽和或不飽和烷基及烷氧基，硝基，鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，羥基，以及具有下列結(jié)構(gòu)的糖基 R5、R6、R7和R8各自獨(dú)立地選自氫，羥基，C1-C5的烷氧基及乙酰氧基。
2.按照權(quán)利要求1中所述化合物，其中R1為基團(tuán)(II) R2的定義與權(quán)利要求1中的相同；R3和R4為羥基。
3.按照權(quán)利要求1中所述化合物，其中R1為結(jié)構(gòu)基團(tuán)(III) R2的定義與權(quán)利要求1中的相同；R3為氫，R4為羥基。
4.按照權(quán)利要求1中所述化合物，其中R1為基團(tuán)(III) R2的定義與權(quán)利要求1中的相同；R3和R4為羥基。
5.按照權(quán)利要求1中式(I)化合物，其中R1為基團(tuán)(II) R2的定義與權(quán)利要求1中的相同；R3為氫，R4為羥基。
6.一種制備如權(quán)利要求2所述化合物的方法，包括以下步驟1)將斛皮素與過(guò)量二氯二苯甲烷混勻，升溫至170-200℃攪拌10-60分鐘。冷卻至室溫，所得產(chǎn)物經(jīng)固體柱層析分離從而得到2-(2，2-二苯基-苯并[1，3]二氧五環(huán)-5-基)-3，5，7-三羥基-苯并吡喃-4-酮；2)將步驟1)中得到的化合物和無(wú)機(jī)物與過(guò)量的R2X投入到適量的DMF中，惰性氣體保護(hù)下，室溫?cái)嚢?0-40小時(shí)，加水，有機(jī)溶劑萃取，干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)柱層析分離，從而得到化合物2-(2，2-二苯基-苯并[1，3]二氧五環(huán)-5-基)-5，7-二羥基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮；其中R2的定義同權(quán)利要求1中的相同，X選自氯或溴；3)將步驟2)中得到的化合物投入有機(jī)溶劑中，室溫?cái)嚢柘?，Pd/C催化氫化攪拌3-24小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)柱層析分離，從而得到化合物2-(3，4-二羥基苯基)-5，7-二羥基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮。
7.一種制備如權(quán)利要求3所述化合物的方法，包括以下步驟1)選擇性酚羥基芐基保護(hù)得到的鄰羥基苯乙酮，與適當(dāng)?shù)娜〈┰贏FO反應(yīng)條件下化合得到目標(biāo)物，從而得到化合物2，5-二取代-7-芐氧基-3-羥基-苯并吡喃-4-酮；2)將步驟1)中得到的化合物與過(guò)量的R2X投入到適量DMF中，回流攪拌10-40小時(shí)，加水，有機(jī)溶劑萃取，干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)柱層析或重結(jié)晶分離得產(chǎn)物，從而得到化合物2，5-二取代-7-芐氧基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮；其中R2的定義同權(quán)利要求1中的相同，X選自氯或溴；3)以權(quán)利要求6中第3步類(lèi)似的方法制備化合物2，5-二取代-7-羥基-3-烷氧基-苯并吡喃-4-酮。
8.如權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其中步驟(2)中所用的無(wú)機(jī)物為Na2CO3、K2CO3、NaHCO3以及無(wú)機(jī)堿，吡啶、三乙胺、二乙胺；惰性氣體為氮?dú)饣驓鍤?；萃取用有機(jī)溶劑為乙酸乙脂、氯仿、二氯甲烷、乙醚。
9.如權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其中步驟(3)中所用有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、四氫呋喃、丙醇、異丙醇；反應(yīng)溫度在20-60℃；催化氫化用鈀/碳催化劑，其中鈀含量為5％～30％。
10.一種藥物組合物，該藥物組合物包含權(quán)利要求1所述化合物和賦形劑、載體或稀釋劑。
11.按照權(quán)利要求10所述藥物組合物，其中，制劑配方的單位劑量中包含1mg-5000mg權(quán)利要求1所述的化合物。
12.按照權(quán)利要求10所述藥物組合物，其中，給藥途徑包含口服、鼻腔吸入、透皮吸收、肺部給藥以及非腸道的注射給藥。
13.按照權(quán)利要求10所述藥物組合物，其中，日劑量為0.02-200mg/kg體重，或分次服用的劑量為0.01-100mg/kg體重。
14.權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療或預(yù)防由病毒感染所引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
15.按照權(quán)利要求10所述包含權(quán)利要求1所述化合物的藥物組合物，用于預(yù)防和治療病毒感染及其相關(guān)疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型的3－烷氧取代－2，5，7－三取代苯并吡喃－4－酮類(lèi)化合物其制備方法及其該類(lèi)化合物在制備防治冠狀病毒引起的SARS及感冒疾病的藥物中的應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)通式如式(I)所示。此類(lèi)化合物可作為SARS病毒和HCoV－229E抗原型感冒病毒的3CL蛋白酶的雙效抑制劑，從而阻止SARS病毒和感冒病毒的進(jìn)一步復(fù)制。本發(fā)明還涉及以該類(lèi)化合物為活性物質(zhì)的藥物制劑。目前沒(méi)有治療SARS和感冒病毒的特效藥，因此含有本發(fā)明化合物的藥物組合物通過(guò)抑制病毒蛋白酶的途徑而達(dá)到預(yù)防和治療SARS及感冒等疾病的目的。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1990479SQ20051013295
公開(kāi)日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月29日
發(fā)明者朱維良, 李劍, 潘春木, 陳莉莉, 陳剛, 羅成, 左之利, 柳紅, 羅小民, 陳凱先, 沈旭, 蔣華良 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所, 新加坡理工學(xué)院