專利名稱：一種治療乳腺增生的藥物組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，特別涉及一種治療乳腺增生的藥物組合物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
乳腺增生是一種乳腺組織異常增生的疾病，屬于中醫(yī)乳癖的范疇。其特點為乳腺小葉、小管和未植導(dǎo)管高度擴張，呈囊腫樣改變。乳腺增生在病理上，一方面表現(xiàn)為乳腺導(dǎo)管的囊性擴張，形成大小不等的囊腫；另一方面表現(xiàn)為導(dǎo)管上皮有不同程度的乳頭狀增生，小葉內(nèi)和小葉間纖維組織也有不同程度的增生。由于乳腺增生病的組織形態(tài)復(fù)雜，所以其組織學(xué)分類方法也多種多樣，如小葉增生癥、慢性乳腺炎、纖維囊性乳腺病、良性上皮增生癥、腺病等。
現(xiàn)代研究表明，乳腺增生的發(fā)生與體內(nèi)雌激素含量過高有關(guān)。其病因多為患者卵巢功能失調(diào)，黃體素分泌下降，雌激素相對增高，出現(xiàn)乳腺組織對卵巢激素反應(yīng)不協(xié)調(diào)，導(dǎo)致乳腺組織增生和復(fù)舊的周期性過程發(fā)生病理性改變，因而也失去了黃體素對雌激素的抑制性影響，如未梢導(dǎo)管的不規(guī)則出芽，上皮增生，引起小管擴張和囊腫形成等。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為女性由于月經(jīng)、孕產(chǎn)等大量耗傷氣血，生理機能逐步趨于衰退，多易氣血兩虛。而現(xiàn)代社會的高強度快節(jié)奏使婦女遭受來自社會、家庭的各種壓力大增，更易導(dǎo)致氣滯血瘀、經(jīng)脈不通。
治療乳腺增生病常用的西藥有激素類、碘制劑及其他對癥治療藥物。傳統(tǒng)的激素類制劑主要是用雄性激素來對抗雌激素。應(yīng)用雄性激素治療可能會出現(xiàn)一些副作用，如有一些男性化表現(xiàn)多毛、嗓音變粗、痤瘡等；另外還可能會有不同程度的肝臟損害、頭暈、惡心等。以后，人們逐漸認(rèn)識到，乳腺增生病并非單純的雌激素分泌增加，而是由于雌、孕激素的比率失衡，特別是月經(jīng)周期中的黃體期孕激素分泌不足，雌激素相對增高所致，于是主張用黃體酮治療本病，以糾正雌、孕激素分泌的失衡。服用雌激素亦可出現(xiàn)惡心、嘔吐、頭痛等副作用，有些患者病情反可加重。
目前治療乳腺增生病的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法有很大缺陷，尚不完善。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明藥物組合物是通過如下重量份的十味原料制成三七60-90重量份，香附60-90重量份，八角蓮30-60重量份，鼠婦蟲20-40重量份，黑螞蟻20-40重量份，五香血藤500-700重量份，雞矢藤500-700重量份，金蕎麥500-700重量份，大紅袍500-700重量份，柴胡300-500重量份。
上述十味原料藥的最佳重量配比如下三七75重量份，香附75重量份，八角蓮45重量份，鼠婦蟲30重量份，黑螞蟻30重量份，五香血藤600重量份，雞矢藤600重量份，金蕎麥600重量份，大紅袍600重量份，柴胡400重量份。
上述十味原料藥的優(yōu)選重量配比如下三七61重量份，香附89重量份，八角蓮31重量份，鼠婦蟲39重量份，黑螞蟻21重量份，五香血藤505重量份，雞矢藤695重量份，金蕎麥525重量份，大紅袍675重量份，柴胡305重量份。
上述十味原料藥的優(yōu)選重量配比如下三七89重量份，香附61重量份，八角蓮59重量份，鼠婦蟲21重量份，黑螞蟻39重量份，五香血藤695重量份，雞矢藤505重量份，金蕎麥675重量份，大紅袍525重量份，柴胡495重量份。
取上述藥物組合物原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床可接受的任何劑型，如濃縮丸劑、膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、片劑、口服液體制劑、緩釋劑、或注射劑等。
本發(fā)明藥物組合物的具體制備工藝如下取三七、香附、八角蓮、鼠婦蟲、黑螞蟻粉碎成細(xì)粉，混勻，滅菌，備用；取五香血藤、雞矢藤、金蕎麥、大紅袍、柴胡五味，加水8-12倍量煎煮2-4次，每次1-2小時，合并，煎液，濾過，濾液濃縮至60℃相對密度為1.1-1.4的稠膏，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床可接受的口服固體制劑，如濃縮水丸，膠囊劑、顆粒劑或片劑等。
本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑的質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定方法鑒別方法包括如下方法中的一種或幾種A、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取粉末2-4g，加乙醇40-60ml，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材0.5-1.5g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各4-6ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇為6-8∶2-4的展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取粉末2-4g，加無水乙醚40-60ml，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各4-6ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，稱取3-5g，，加60-80％乙醇50-70ml，超聲0.5-1.5小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次20-40ml，合并正丁醇液，加0.5-1.5％氫氧化鈉溶液洗滌2-4次，每次20-40ml，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；吸取上述2種溶液各4-6ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為13-17∶38-42∶20-24∶8-12的比例，在10℃以下放置2-4小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在100-110℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
質(zhì)量控制方法中的含量測定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝18-22∶78-82為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定1-3g，置具塞錐形瓶中，加入60-80％的乙醇40-60mL，超聲處理50-70分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取2-4次，每次20-40ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取2-4次，每次10-30ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取3-5次，每次20-40ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌2-4次，每次20-40ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含三七以人參皂苷Rg1(C42H72O14)不得少于12mg。
本發(fā)明藥物組合物制劑包括濃縮水丸、膠囊劑、顆粒劑或片劑等臨床可接受的口服固體制劑，每日服用量相當(dāng)于原生藥量4.6-5.0g。
本發(fā)明質(zhì)量控制方法依據(jù)試驗結(jié)果表明其重復(fù)性好，儀器精密度和操作精密度較好；本藥物組合物口服固體制劑穩(wěn)定性和溶散性均良好，提取溶劑的提取率高、分離好。
柴胡的薄層鑒別、香附的薄層鑒別和三七的薄層鑒別方法，重現(xiàn)性好，陰性無干擾；藥品標(biāo)準(zhǔn)保留了三七薄層色譜鑒別，并增加了柴胡、香附的薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法測定三七中人參皂苷Rg1的含量，使藥品標(biāo)準(zhǔn)能更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。
下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1 含量測定方法方法學(xué)考察(1)測定波長的選擇對人參皂苷Rg1對照品做紫外掃描，從光譜圖可以看出人參皂苷Rg1在203nm處有最大吸收值，故選擇測定波長為203nm。
(2)提取溶劑的確定精密稱取本藥物組合物濃縮丸3份，每份1.5g，分別用甲醇、70％乙醇、正丁醇作為溶劑，超聲處理后進行HPLC測定，記錄人參皂苷Rg1峰面積積分值，計算本藥物組合物濃縮丸中的含量，結(jié)果見表1表1 提取溶劑考察結(jié)果
根據(jù)試驗結(jié)果，用甲醇、70％乙醇、正丁醇都可以將人參皂苷Rg1從本藥物組合物濃縮丸中提取出來，但用70％乙醇提取的提取率高、分離好，故選擇提取溶劑為70％乙醇。
(3)提取時間的確定試驗中考察了提取時間的影響，精密稱取本藥物組合物濃縮丸1.5g，加入50ml 70％乙醇超聲處理，分別取20min、40min、60min、80min時的提取液進行HPLC分析，記錄人參皂苷Rg1峰面積積分值。結(jié)果見表2表2 提取時間考察結(jié)果
由測定數(shù)據(jù)看出，本藥物組合物濃縮丸超聲處理60min人參皂苷Rg1含量已經(jīng)穩(wěn)定，故選擇超聲處理60min。
(4)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗及專屬性考察對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備，取本發(fā)明藥物組合物濃縮丸4g，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇50mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次30ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次30ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得。
藥材溶液的制備，取三七藥材，粉碎，精密稱取0.2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇50mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次30ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次30ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得。
陰性對照溶液的制備，取除三七外的其他藥材按制劑工藝制備陰性樣品，取陰性樣品2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇50mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次30ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次30ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性。將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得。
分別精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液及藥材溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
分析色譜圖可知對照品、供試品、藥材中人參皂苷Rg1峰的保留時間基本一致，陰性對照在人參皂苷Rg1峰位置處無干擾，從而說明供試品中的人參皂苷Rg1峰來自于三七藥材，即人參皂苷Rg1專屬于三七藥材，理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算不低于3000。
(5)線性關(guān)系考察分別精密量取0.426mg/mL對照品溶液1μL、4μL、7μL、10μL、13μL進行HPLC測定，記錄色譜圖，結(jié)果見表3
表3 線性關(guān)系考察結(jié)果
以上結(jié)果表明，在進樣量0.426～5.538μg范圍內(nèi)成線性關(guān)系。
(6)穩(wěn)定性試驗取本藥物組合物濃縮丸，按供試品溶液制備方法制備后，分別在0、1、3、5、10、16、24小時進行HPLC測定，記錄峰面積積分值，以考察其穩(wěn)定性，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值，結(jié)果見表4表4 穩(wěn)定性考察結(jié)果
由試驗結(jié)果知，在24小時之內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。
精密度試驗取本藥物組合物濃縮丸，按供試品溶液制備方法制備后，重復(fù)進樣六次，進行HPLC測定，記錄峰面積積分值，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值，試驗數(shù)據(jù)見表5表5 精密度試驗結(jié)果
試驗結(jié)果表明儀器精密度和操作精密度較好。
(8)重復(fù)性試驗精密稱取本藥物組合物濃縮丸5份，按供試品溶液的制備方法制備后，進行HPLC測定，數(shù)據(jù)見表6
表6 重復(fù)性試驗結(jié)果(n＝5)
試驗結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
(9)回收率試驗采用加樣回收法，精密稱取本藥物組合物濃縮丸5份，分別加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液1.6mL(即含3.376mg)，揮干溶劑，加入70％的乙醇50mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次30ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次30ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得。
進行HPLC測定，記錄峰面積積分值，計算的含量，以下式計算回收率，數(shù)據(jù)見表7回收率％＝(測出總量-本藥物組合物濃縮丸中的含量)*100％/加入對照品量表7 回收試驗結(jié)果
經(jīng)計算平均回收率為100.21％，RSD＝2.20。
(10)樣品的測定精密稱取10批本藥物組合物濃縮丸，每批3份，每份約2g，按供試品溶液的制備方法制備后，進行HPLC測定，記錄峰面積積分值，計算的含量，結(jié)果見表8
表8 樣品測定結(jié)果
根據(jù)以上測定結(jié)果，本藥物組合物濃縮丸中平均含量(％)為0.3114，即本藥物組合物濃縮丸，每丸含人參皂苷Rg1不得低于0.5mg。
下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例所述的效果。
實施例1濃縮丸的制備三七75g，香附75g，八角蓮45g，鼠婦蟲30g，黑螞蟻30g，五香血藤600g，雞矢藤600g，金蕎麥600g，大紅袍600g，柴胡400g。
以上十味，取三七、香附、八角蓮、鼠婦蟲、黑螞蟻粉碎成細(xì)粉，混勻，滅菌備用；其余五香血藤等五味，加水10倍量煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時、第三次1小時，合并，煎液，濾過，濾液濃縮至60℃相對密度為1.25的稠膏，噴霧干燥或濃縮至適量，與上述粉末混合，制成濃縮水丸。
實施例2膠囊劑的制備三七61g，香附89g，八角蓮31g，鼠婦蟲39g，黑螞蟻21g，五香血藤505g，雞矢藤695g，金蕎麥525g，大紅袍675g，柴胡305g。
以上十味，取三七、香附、八角蓮、鼠婦蟲、黑螞蟻粉碎成細(xì)粉，混勻，滅菌備用；其余五香血藤等五味，加水9倍量煎煮二次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并，煎液，濾過，濾液濃縮至60℃相對密度為1.13的稠膏，噴霧干燥或濃縮至適量，與上述粉末混合，加常規(guī)輔料，裝膠囊。
實施例3顆粒劑的制備三七89g，香附61g，八角蓮59g，鼠婦蟲21g，黑螞蟻39g，五香血藤695g，雞矢藤505g，金蕎麥675g，大紅袍525g，柴胡495g。
以上十味，取三七、香附、八角蓮、鼠婦蟲、黑螞蟻粉碎成細(xì)粉，混勻，滅菌備用；其余五香血藤等五味，加水11倍量煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時、第三次1小時，合并，煎液，濾過，濾液濃縮至60℃相對密度為1.38的稠膏，噴霧干燥或濃縮至適量，與上述粉末混合，加常規(guī)輔料，制成顆粒。
實施例4片劑的制備三七75g，香附75g，八角蓮45g，鼠婦蟲30g，黑螞蟻30g，五香血藤600g，雞矢藤600g，金蕎麥600g，大紅袍600g，柴胡400g。
以上十味，取三七、香附、八角蓮、鼠婦蟲、黑螞蟻粉碎成細(xì)粉，混勻，滅菌備用；其余五香血藤等五味，加水10倍量煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時、第三次1小時，合并，煎液，濾過，濾液濃縮至60℃相對密度為1.25的稠膏，噴霧干燥或濃縮至適量，與上述粉末混合，加常規(guī)輔料，制成片劑。
實施例5濃縮丸的質(zhì)量控制方法鑒別方法A、取實施例1內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3g，加乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材1g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇＝7∶3為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取實施例1內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3g，加無水乙醚50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取實施例1內(nèi)容物適量，研細(xì)，稱取4g，加70％乙醇60ml，超聲1小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，加1％氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次30ml，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；吸取上述4種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為15∶40∶22∶10的比例，在10℃以下放置3小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
實施例6濃縮丸的質(zhì)量控制方法取實施例1的藥物組合物制劑進行含量測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝20∶80為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本藥物組合物的濃縮丸劑的日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇50mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次30ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次30ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物濃縮丸每丸含三七以人參皂苷Rgl(C42H72O14)計，不得少于0.5mg。
實施例7濃縮丸的質(zhì)量控制方法鑒別方法
A、取實施例1內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3g，加乙醇45ml，超聲處理35分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.6ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材1g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇＝6∶4為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取實施例1內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末4g，加無水乙醚55ml，超聲處理25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取實施例1內(nèi)容物適量，研細(xì)，稱取4g，加65％乙醇65ml，超聲1小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，加1％氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次30ml，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；吸取上述4種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為14∶41∶21∶11的比例，在10℃以下放置3小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
取實施例1的藥物組合物制劑進行含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝19∶81為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備，取本發(fā)明藥物組合物的濃縮丸日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇55mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次35ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次25ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次35ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次25ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物濃縮丸每丸含三七以人參皂苷Rg1(C42H72O14)計，不得少于0.5mg。
實施例8膠囊的質(zhì)量控制方法鑒別方法A、取實施例2內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3g，加乙醇50ml，超聲處理35分鐘，濾過，濾液蒸干。殘渣加甲醇0.9ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材1.4g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5.5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇＝8∶2為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取實施例2內(nèi)容物適量，研細(xì)，稱取3.5g，加68％乙醇58ml，超聲1小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，加1％氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次25ml，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；吸取上述4種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為16∶39∶23∶9的比例，在10℃以下放置3小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
取實施例2的藥物組合物制劑進行含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝21∶79為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本藥物組合物膠囊日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入72％的乙醇58mL，超聲處理62分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次35ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次15ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次35ml，棄去水層；正丁醇層用1％Na0H溶液洗滌3次，每次25ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物膠囊按日服用劑量計，含三七以人參皂苷Rg1(C42H72O14)計，不得少于12mg。
實施例9顆粒的質(zhì)量控制方法鑒別方法A、取實施例3內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末2.5g，加乙醇45ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材1g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇＝8∶2為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取實施例3內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3.5g，加無水乙醚55ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
取實施例3的藥物組合物制劑進行含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝19∶81為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本藥物組合物的顆粒日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇45mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取4次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次25ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次35ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次35ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物顆粒按日服用劑量計，含三七以人參皂苷Rg1(C42H72O14)計，不得少于12mg。
實施例10片劑的質(zhì)暈控制方法鑒別方法B、取實施例4內(nèi)容物適量，研細(xì)，取粉末3.5g，加無水乙醚45ml，超聲處理35分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.8ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5.5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取實施例4內(nèi)容物適量，研細(xì)，稱取4.5g，加68％乙醇65ml，超聲1小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，加0.8％氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次35ml，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.8ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；吸取上述4種溶液各4.5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為13∶42∶20∶12的比例，在10℃以下放置3小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
取實施例4的藥物組合物制劑進行含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝20∶80為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本藥物組合物的片劑的日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇50mL，超聲處理62分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次25ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次25ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次35ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物片劑按日服用劑量計，含三七以人參皂苷Rg1(C42H72O14)計，不得少于12mg。
權(quán)利要求
1.一種治療乳腺增生的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份制成三七60-90重量份，香附60-90重量份，八角蓮30-60重量份，鼠婦蟲20-40重量份，黑螞蟻20-40重量份，五香血藤500-700重量份，雞矢藤500-700重量份，金蕎麥500-700重量份，大紅袍500-700重量份，柴胡300-500重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥按重量份制成三七75重量份，香附75重量份，八角蓮45重量份，鼠婦蟲30重量份，黑螞蟻30重量份，五香血藤600重量份，雞矢藤600重量份，金蕎麥600重量份，大紅袍600重量份，柴胡400重量份。
3.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于取上述組合物原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床可接受的濃縮丸劑、膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液體制劑、緩釋劑或注射劑。
4.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物制劑的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟取三七、香附、八角蓮、鼠婦、黑螞蟻粉碎成細(xì)粉，混勻，滅菌，備用；取五香血藤、雞矢藤、金蕎麥、大紅袍、柴胡五味，加水8-12倍量煎煮2-4次，每次1-2小時，合并，煎液，濾過，濾液濃縮至60℃相對密度為1.1-1.4的稠膏，噴霧干燥或濃縮至適量，與上述粉末混合，加入常規(guī)輔料，按照工藝，制成臨床可接受的口服固體制劑。
5.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別中的一種或幾種A、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取粉末2-4g，加乙醇40-60ml，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材0.5-1.5g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各4-6ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇＝6-8∶2-4為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取粉末2-4g，加無水乙醚40-60ml，超聲處理20-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各4-6ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，稱取3-5g，加60-80％乙醇50-70ml，超聲0.5-1.5小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取2-4次，每次20-40ml，合并正丁醇液，加0.5-1.5％氫氧化鈉溶液洗滌2-4次，每次20-40ml，再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，分別加甲醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；吸取上述2種溶液各4-6ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為13-17∶38-42∶20-24∶8-12的比例，在10℃以下放置2-4小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在100-110℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下鑒別中的一種或幾種A、取本藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取粉末3g，加乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取柴胡對照藥材藥材1g，按供試品處理方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯∶乙醇為7∶3的展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，取粉末3g，加無水乙醚50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取α-香附酮對照品0.01ml，加甲醇溶解制成對照溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿為展開劑，展開，取出，曬干，紫外254nm檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本發(fā)明藥物組合物口服固體制劑適量，研細(xì)，稱取4g，加70％乙醇60ml，超聲1小時，濾過，濾液揮至無醇味，轉(zhuǎn)移置分液漏斗中，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液；加1％氫氧化鈉溶液洗滌3次，每次30ml；再加正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Rg1，Rb1，三七皂苷R1對照品，分別加甲醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；吸取上述4種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水為15∶40∶22∶10的比例，在10℃以下放置3小時的下層溶液為展開劑；展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點。
7.如權(quán)利要求5或6所述的藥物組合物口服固體制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中還包括如下含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝18-22∶78-82為流動相；室溫；檢測波長為203nm；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備，精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備，取本藥物組合物口服固體制劑日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定1-3g，置具塞錐形瓶中，加入60-80％的乙醇40-60mL，超聲處理50-70分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取2-4次，每次20-40ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取2-4次，每次10-30ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取3-5次，每次20-40ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌2-4次，每次20-40ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含三七以化學(xué)成分為C42H72O14的人參皂苷Rg1不得少于12mg。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定為色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈∶水＝20∶80為流動相；檢測波長為203nm；室溫；理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算應(yīng)不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物口服固體制劑日服用劑量的5/6，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加入70％的乙醇50mL，超聲處理60分鐘，過濾，取濾液揮至無醇味，加少量水溶解，用60-90℃石油醚萃取3次，每次30ml，棄去石油醚；水層用氯仿萃取3次，每次20ml，棄去氯仿；水層再用飽和正丁醇萃取4次，每次30ml，棄去水層；正丁醇層用1％NaOH溶液洗滌3次，每次30ml；再用正丁醇飽和的水洗至中性；將正丁醇液揮干，加甲醇定容至25ml容量瓶中，即得；測定法；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；本藥物組合物口服固體制劑按日服用劑量計，含三七以化學(xué)成分為C42H72O14的人參皂苷Rg1不得少于12mg。
9.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物在制備治療乳腺增生的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開一種治療乳腺增生的中藥組合物制劑的質(zhì)量控制方法，該藥物組合物主要由三七、香附、八角蓮、鼠婦蟲、黑螞蟻、五香血藤、雞矢藤、金蕎麥、大紅袍、柴胡制成。其質(zhì)量控制方法鑒別中，保留了三七薄層色譜鑒別，并增加了柴胡、香附的薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法測定三七中人參皂苷Rg1的含量。
文檔編號A61K35/56GK1814114SQ200510134298
公開日2006年8月9日 申請日期2005年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者謝黎 申請人:謝黎