專利名稱：川芎有效組分、制備方法及其制劑與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療心血管疾病的中藥提取物，具體地說涉及從川芎中提取的有效組分，制備方法及其制劑與用途，該有效組分主要含有川芎釅內(nèi)酯(Senkyunolide I)。
背景技術(shù)：
冠心病和心絞痛是危害人類健康的“第一殺手”，近年來，隨著我國人口老年化以及人們工作、生活、飲食結(jié)構(gòu)及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴(yán)重威脅著人民的身心健康。天然產(chǎn)物中許多活性物質(zhì)具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已開發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥，如治療冠心病的藥物地奧心血康，它是由從中藥中提取的8種甾體皂甙制成的純中藥制劑；心達(dá)康是以沙棘為原料提取加工而成的純天然藥物，其有效成分為沙棘總黃酮。因而從天然產(chǎn)物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活性的有效物質(zhì)是發(fā)現(xiàn)、開發(fā)新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活性物質(zhì)是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導(dǎo)化學(xué)物，開發(fā)新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，用于開發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產(chǎn)物中提取活性物質(zhì)，開發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應(yīng)用價值和廣闊發(fā)展前景。
川芎為傘形科植物L(fēng)igusticum chuangxiong Hort的干燥根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。《圖經(jīng)本草》指出“以蜀川為勝”，故名川芎。川芎主產(chǎn)于四川灌縣、重慶和都江堰市等地，以灌縣產(chǎn)為最佳，在江西、湖北及云南等地亦有栽培，其中江西所產(chǎn)也稱執(zhí)芎，云南所產(chǎn)也稱云芎。川芎活血祛瘀，行氣開郁，祛風(fēng)止痛。用于血瘀氣滯所致的月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，肝郁氣滯而致血行不暢的胸脅疼痛，頭痛，風(fēng)寒濕痹，跌打腫痛。現(xiàn)代功效研究表明川芎不僅能“活血行氣，祛風(fēng)止痛”，而且還具有解表和燥濕的功效。川芎的化學(xué)成分主要有生物堿、揮發(fā)油等，還有、內(nèi)酯類、酚類等多種成分。含川芎嗪(chuanxiongzine)，即四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine)，黑麥草堿或川芎哚(perlolyrine)即1-(5-羥甲基-2-呋喃基)-9H-吡啶并〔3，4-b)吲哚〔1-(5-hydroxymethyl-2-furyl)-9H-pyrido〔3，4-b〕indo le〕等；揮發(fā)油中含葶本內(nèi)酯(ligust ilide)，香草酸(vanillic acid)，香草醛(vanillin)，匙葉桉油烯醇(spathulenol)等(范永春等，時珍國醫(yī)國藥，2003，14(9)574-576)。
川芎的應(yīng)用非常廣泛，以川芎為主藥的制劑也不勝枚舉，如逐瘀消腫合劑、柏子養(yǎng)心丸、補(bǔ)陽還五丹、川芎注射液等。川芎中阿魏酸可抑制血小板聚集，促進(jìn)血小板的解聚，抗血栓的形成，解除血管平滑肌痙攣，抗氧化和提高膜穩(wěn)定性，以及抗炎、鎮(zhèn)痛、抗生育、調(diào)節(jié)免疫功能、利肝保膽等藥理作用(楊廣德等，中成藥，2002，24(6)418-420)。其鈉鹽阿魏酸鈉對家兔脊髓、心肌缺血-再灌注損傷有保護(hù)作用(柯奇斌等，臨床麻醉學(xué)雜志，2002，18(8)425-428。陳莉芬等，重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2003，28(1)49-52。)，還具有降低腦毛細(xì)血管通透性從而促進(jìn)炎癥的改善(吳大正等，華西藥學(xué)雜志，2001，16(2)98-100)和延緩及治療白內(nèi)障的作用(祁明信等，中國病理生理雜志，2002，18(11)1390-1393)等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種川芎有效組分。
本發(fā)明的另一目的在于提供該川芎有效組分的制備方法。
本發(fā)明還提供了含有該丹參有效川芎的制劑及該組分的用途。
本發(fā)明通過以下述技術(shù)方案予以實(shí)施本發(fā)明的川芎有效組分，以重量百分比計，其中川芎釅內(nèi)酯(Senkyunolide I)的含量為85～95％；優(yōu)選地，以重量百分比計，川芎釅內(nèi)酯(Senkyunolide I)的含量為87～93％；最佳地，以重量百分比計，川芎釅內(nèi)酯(Senkyunolide I)的含量為89～91％。
本發(fā)明的川芎有效組分的制備方法，包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫。
優(yōu)選的川芎有效組分制備方法，包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8～1.2)，加熱回流0.8～1.2小時，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(47～53∶1)作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(8～13∶1)作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為9～11ml/min，柱溫為室溫。
最佳的川芎有效組分制備方法，包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1)，加熱回流1小時，提取2次，合并濾液得提取液；將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(50∶1)作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(10∶1)作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱(Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm)，流動相為水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序如下0分鐘時，流動相A為75％的水溶液、流動相B為25％的乙腈溶液；40分鐘時，流動相A為5％的水溶液、流動相B為95％的乙腈溶液；50分鐘時，流動相A為5％的水溶液、流動相B為95％的乙腈溶液；流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段10.0～16.2min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
本發(fā)明的川芎有效組分可以作為活性成分，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。
本發(fā)明的川芎有效組分還可以作為活性成分之一，加入藥劑學(xué)上接受的輔料，按照藥劑學(xué)上記載的制劑的制備方法制成制劑。
所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。
本發(fā)明的川芎有效組分及其制劑可在制備治療、預(yù)防心血管疾病藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果為1.本發(fā)明的提取分離工藝中使用了正相硅膠柱，能有效地除去糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高有效成分的含量，同時采用了制備色譜，能快速準(zhǔn)確的得到有效成分。
2.本發(fā)明提供的川芎有效組分化學(xué)成分簡單明確，在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。


圖1為本發(fā)明川芎有效組分的HPLC分析圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，該實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而對本發(fā)明并沒有限制。
實(shí)施例一 川芎有效組分的制備將200g川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏18.6g，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品2.5g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段10.0～16.2min min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.12g。
實(shí)施例二 川芎有效組分的制備將500g川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶0.8)，加熱回流0.8～1.2小時，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏36.8g，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(47∶1)作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(8∶1)作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品5.8g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為9～11ml/min，柱溫為室溫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段10.0～16.2min min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.23g。
實(shí)施例三 川芎有效組分的制備將500g川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1.2)，加熱回流0.8～1.2小時，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏36.8g，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(53∶1)作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇(13∶1)作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品5.8g；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為9～11ml/min，柱溫為室溫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段10.0～16.2min min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.24g。
實(shí)施例四 川芎有效組分的制備取川芎藥材250g，將其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1∶1)，加熱回流1小時，提取2次，濾液合并得提取液。將提取液濃縮成浸膏得21g，將浸膏和硅膠拌樣，用正相硅膠柱進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯(50∶1)作為流動相，得洗脫液I，然后改換氯仿和甲醇(10∶1)作為流動相，得洗脫液II，濃縮干燥后得4.3g樣品。用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品。制備色譜的分離條件色譜柱為Agient制備柱(Zorbax SB-C18；21.2mm×250mm)，流動相為水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序如下0分鐘時，流動相A為75％的水溶液、流動相B為25％的乙腈溶液；40分鐘時，流動相A為5％的水溶液、流動相B為95％的乙腈溶液；50分鐘時，流動相A為5％的水溶液、流動相B為95％的乙腈溶液；流速為10ml/min，柱溫為室溫。樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段10.0～16.2min min收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分0.15g。
實(shí)施例五 川芎有效組分的分析(1)上述川芎提取物中川芎釅內(nèi)酯(Senkyunolide I)的含量測定(高效液相色譜法)色譜條件 色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；采用梯度洗脫，流動相A相為0.2％冰醋酸水溶液，流動相B相為含0.2％冰醋酸的乙腈溶液；梯度洗脫程序如下0分鐘時，流動相A為90％的0.2％冰醋酸水溶液、流動相B為10％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；10分鐘時，流動相A為50％的0.2％冰醋酸水溶液、流動相B為50％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；30分鐘時，流動相A為5％的0.2％冰醋酸水溶液、流動相B為95％的0.2％冰醋酸的乙腈溶液；流速0.5mL·min-1；檢測波長全波長；柱溫30℃；ELSD條件漂移管溫度100℃；氮?dú)饬魉?.4L/min供試品溶液的制備 稱取本品，用甲醇溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定方法 精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得。
(2)上述川芎提取物HPLC-ELSD指紋圖譜測定方法 參見(1)上述川芎提取物中川芎釅內(nèi)酯(Senkyunolide I)的含量測定(高效液相色譜法)。記錄色譜時間為30分鐘。
分析結(jié)果 川芎有效組分的HPLC-ELSD分析譜圖見圖1，圖1中的1號峰是川芎釅內(nèi)酯。
本發(fā)明中，川芎釅內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)式為
實(shí)施例六 川芎有效組分制劑取實(shí)施例四的川芎有效組分0.5g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6～8℃液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。
實(shí)施例七 川芎有效組分制劑取實(shí)施例四的川芎有效組分0.5g、葡萄糖4.5g、硫代硫酸鈉0.9g和蒸餾水1ml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝500支，即得。
實(shí)施例八 川芎有效組分制劑取降香油1.5g，加入到13ml飽和的羥丙基β-環(huán)糊精中，攪拌溶解，濾過，濾葉低溫干燥，的降香油和羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末。除上述降香油合羥丙基β-環(huán)糊精的包合物粉末外，再取實(shí)施例四的川芎提取物0.5g、甘露醇5.5g、依地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，分裝300支，即得。
實(shí)施例九 川芎有效組分的藥理實(shí)驗(yàn)1藥理模型乳鼠心肌細(xì)胞缺血缺氧模型原代心肌細(xì)胞培養(yǎng) 出生1～3天SD乳鼠處死后，取心臟，經(jīng)PBS液清洗后切成1mm3左右的碎塊。用0.125％胰蛋白酶(Sigma，USA)+0.05％膠原酶II(Gibco，USA)于37度消化3～4次。差速貼壁法分離成纖維細(xì)胞1.5小時后，細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至48孔板中(每孔約4×105細(xì)胞)。經(jīng)DMEM(Gibco，USA)加10％胎牛血清(Falcon，USA)培養(yǎng)3-6天的細(xì)胞供藥效篩選。篩選前1天替換為無血清培養(yǎng)液。培養(yǎng)3～6天的心肌細(xì)胞，PBS洗滌后加入含藥培養(yǎng)液。置于95％N2和5％CO2培養(yǎng)箱中缺氧6小時。然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧3小時。取細(xì)胞上清液測定LDH含量。
給藥方案 按照實(shí)施例四方法提取得到的川芎有效組分用無糖Hanks液配成10-4g/mL供試液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2％以下)。各組分在培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
乳酶脫氫酶含量測定 細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量能夠表示細(xì)胞損傷程度。漏入上清液中的乳酸脫氫酶含量越高，表明細(xì)胞損傷也顯著。乳酸脫氫酶測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。測定方法為取30微升細(xì)胞上清液，加入50微升基質(zhì)緩沖液及10微升乳酸脫氫酶輔酶，37度振蕩15分鐘，再加入50微升2，4-二硝基苯肼，37度振蕩15分鐘。平行空白。取反應(yīng)液50微升加入200微升0.4mol/L氫氧化鈉溶液，靜置3～4分鐘后，用酶標(biāo)儀于450nm測定光度值。
所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示。采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。與模型組相比，P＜0.05認(rèn)為顯著有效。藥效結(jié)果見表1。根據(jù)心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)檢測結(jié)果，川芎有效組分對降低LDH釋放有非常顯著效果。
表1

2藥理模型臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) 取健康新生兒臍帶，用30～50mlHanks液洗凈靜脈血管內(nèi)的殘留血跡。視臍帶長度加入相應(yīng)量的0.1％膠原酶I，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱消化15～20分鐘。隨后將臍帶內(nèi)消化液小心收集到燒杯中，并用Hanks液將燒杯潤洗兩次，一并收集到燒杯中分裝于離心管，900rpm離心10分鐘。吸去上清液，用M199培養(yǎng)液(含10％胎牛血清，100U/ml雙抗，0.15mg/ml Heparin，10uM VC)充分溶解沉淀。將所得細(xì)胞懸液分裝于5cm2培養(yǎng)瓶，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。第二天換成采用含30ug/ml ECGS的M199培養(yǎng)液，之后每三天換一次培養(yǎng)液直至細(xì)胞鋪滿底面。所用細(xì)胞均為原代內(nèi)皮細(xì)胞。造模前將培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞接種至96孔板并培養(yǎng)一天， 所用細(xì)胞量為3.5～4萬/孔。造模時，吸棄舊的M199培養(yǎng)液，加入含藥無酚紅M199培養(yǎng)液，每孔總量為100ul。置于95％N2和5％CO2培養(yǎng)箱中缺氧12小時，然后在CO2培養(yǎng)箱中復(fù)氧2小時。取細(xì)胞上清液測定LDH含量和NO含量。
給藥方案 按照實(shí)施例四提取得到的川芎有效組分用無糖Hanks液配成10-4g/mL供試液，脂溶性成分可加入少量DMSO助溶(DMSO終濃度控制在0.2％以下)。各組分在無酚紅M199培養(yǎng)液中的終濃度控制在10-5g/mL。
乳酸脫氫酶含量測定 細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量能夠表示細(xì)胞損傷程度。漏入上清液中的乳酸脫氫酶含量越高，表明細(xì)胞損傷也顯著。乳酸脫氫酶測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。測定方法為取30微升細(xì)胞上清液，加入50微升基質(zhì)緩沖液及10微升乳酸脫氫酶輔酶，37度振蕩15分鐘，再加入50微升2，4-二硝基苯肼，37度振蕩15分鐘。平行空白。取反應(yīng)液50微升加入200微升0.4mol/L氫氧化鈉溶液，靜置3～4分鐘后，用酶標(biāo)儀于450nm測定光度值。
藥效結(jié)果 所有數(shù)據(jù)用均值±方差表示。采用單邊方差分析和T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。與模型組相比，P＜0.05認(rèn)為顯著有效。藥效結(jié)果見表2。根據(jù)內(nèi)皮細(xì)胞乳酸脫氫酶檢測結(jié)果，川芎有效組分對降低LDH釋放有非常顯著效果。
表2

權(quán)利要求
1.一種川芎有效組分，其特征在于，以重量百分比計，其中川芎釅內(nèi)酯的含量為85～95％。
2.如權(quán)利要求1所述的川芎有效組分，其特征在于，以重量百分比計，川芎釅內(nèi)酯的含量為87～93％。
3.如權(quán)利要求1所述的川芎有效組分，其特征在于，以重量百分比計，川芎釅內(nèi)酯的含量為89～91％。
4.權(quán)利要求1所述川芎有效組分的制備方法，包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫。
5.如權(quán)利要求書4所述的川芎有效組分的制備方法，包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱回流0.8～1.2小時，提取1～3次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，流速為9～11ml/min，柱溫為室溫。
6.如權(quán)利要求5所述的川芎有效組分的制備方法，其中乙酸乙酯和乙醇的體積比為1∶0.8～1.2，石油醚和乙酸乙酯的體積比為47～53∶1，氯仿和甲醇的體積比為8～13∶1。
7.如權(quán)利要求書4所述的川芎有效組分的制備方法，包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，合并濾液得提取液；將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫程序如下0分鐘時，流動相A為75％的水溶液、流動相B為25％的乙腈溶液；40分鐘時，流動相A為5％的水溶液、流動相B為95％的乙腈溶液；50分鐘時，流動相A為5％的水溶液、流動相B為95％的乙腈溶液；流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用100％乙醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段10.0～16.2min收集溶液，溶液經(jīng)濃縮干燥后得到有效組分。
8.權(quán)利要求7所述的川芎有效組分的制備方法，其中乙酸乙酯和乙醇的體積比為1∶1，石油醚和乙酸乙酯的體積比為50∶1，氯仿和甲醇的體積比為10∶1。
9.以權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述的川芎有效組分為活性成分制成的藥用制劑，其特征在于，川芎組分加入一種或多種藥劑學(xué)上接受的輔料按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥用制劑。
10.權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述的川芎有效組分在制備治療和預(yù)防心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種川芎有效組分、制備方法及其制劑與用途。在有效組分中，以重量百分比計，川芎釅內(nèi)酯的含量為85～95％。本發(fā)明的川芎有效組分的制備方法包括下列步驟將川芎藥材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進(jìn)行拌樣，用正相硅膠柱對其進(jìn)行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然后改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品，即得。本發(fā)明提供的川芎有效組分化學(xué)成分簡單明確，在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。
文檔編號A61P9/10GK1989984SQ20051013535
公開日2007年7月4日 申請日期2005年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月31日
發(fā)明者程翼宇, 賀慶, 王毅, 王學(xué)偉, 李云飛, 水文波, 胡興江, 葛志偉 申請人:天津天士力現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司