專利名稱：治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，屬于對藥品進(jìn)行質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人類發(fā)現(xiàn)腫瘤已有3000年以上的歷史。上皮性的惡性腫瘤稱為癌，約占所有惡性腫瘤的90％以上。癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的一大類疾病，并且患者在不斷上升。由本申請人研制的一種治療腫瘤的藥物，它主要由斑蝥、人參、黃芪、刺五加制備而成，該產(chǎn)品具有清熱解毒，消瘀散結(jié)的作用，在治療原發(fā)性肝癌，肺癌，直腸癌，惡性淋巴瘤，婦科惡性腫瘤等疾病方面取得良好的效果。但是如何有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，確保該產(chǎn)品的臨床療效，是本申請人長期以來一直研究的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，該注射制劑包括注射液、凍干粉和大輸液，本發(fā)明對制劑中主要有效成分人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定以及人參和黃芪的薄層鑒別進(jìn)行了研究和篩選，所制定的質(zhì)量控制方法能全面有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，從而確保了該制劑的臨床療效。
本發(fā)明所述治療腫瘤的注射制劑是這樣構(gòu)成的按照重量組份計(jì)算它主要由斑蝥0.5-5、人參20-80、黃芪50-150、刺五加100-200制備而成。
本發(fā)明所述注射制劑這樣制備人參切片，用20-85％乙醇加熱回流提取1-5次，合并提取液，濾過，回收乙醇，藥液備用；藥渣與其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，濾過，濾液與人參提取液合并，以石硫法沉淀處理1-3次，所得上清液加乙醇使含醇量達(dá)50-99％，靜置過夜，取上清液減壓回收乙醇至無醇味，再按照常規(guī)方法分別制成注射液、大輸液或凍干粉制劑。
所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、檢查、鑒別、含量測定項(xiàng)目中的部分或全部；其中鑒別包括與α-萘酚的顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照的薄層鑒別；含量測定包括對制劑中人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定。
本制劑中人參和黃芪的鑒別方法是以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10、10℃以下放置的下層溶液為展開劑的薄層鑒別方法。
鑒別方法包括以下項(xiàng)目的部分或全部
(1)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)尤爰状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
更具體的鑒別方法包括以下項(xiàng)目的部分或全部(1)取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)取凍干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的內(nèi)徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
本制劑中人參皂苷Re的含量測定方法是以人參皂苷Re對照品為對照的分光光度法。
本制劑中斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照，以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液的氣相色譜法。
含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
更具體的含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
所述質(zhì)量控制方法包括性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別(1)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)尤爰状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查PH值應(yīng)為3.0-6.0；重金屬取凍干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)拥酱罂孜綐渲珼A-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用以下質(zhì)量控制方法將更容易控制本發(fā)明制劑的質(zhì)量，更利于保證本制劑的臨床療效。故所述質(zhì)量控制方法還可包括性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別(1)取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)取凍干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的內(nèi)徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查PH值應(yīng)為3.0-6.0；重金屬取凍干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)浦?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本制劑中，人參具有增強(qiáng)免疫力的作用，斑蝥具有抗腫瘤的作用。人參和斑蝥均為該產(chǎn)品中起主要作用的藥物，而人參皂苷Re和斑蝥素又分別是人參和斑蝥中的主要有效成分，故本發(fā)明應(yīng)對人參皂苷Re及斑蝥素進(jìn)行含量測定，方能有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，但是如何有效測定該制劑中人參皂苷Re和斑蝥素的含量，是本發(fā)明的難點(diǎn)所在。經(jīng)過研究，我們發(fā)現(xiàn)，采用分光光度法，并采用氯仿提取藥物，然后再用水飽和的正丁醇提取，加入無水硫酸鈉后過大孔吸附樹脂的方法制備供試品溶液，可有效測定該制劑中人參皂苷Re的含量；采用氣相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)為以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；用該方法可有效測定制劑中斑蝥素的含量。另外在制備斑蝥素供試品溶液的方法中，我們沒有使用K-D濃縮器，減少了檢驗(yàn)成本。
本發(fā)明還對人參和黃芪進(jìn)行了薄層鑒別研究，并以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照，采用水飽和的正丁醇提取，然后過樹脂柱的方法提取藥物，制備供試品溶液；以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，用該方法鑒別制劑中的人參和黃芪藥材，其分離度好，斑點(diǎn)顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好。所以用本發(fā)明方法可有效控制治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量，保證該制劑的臨床療效。
本發(fā)明的質(zhì)量控制方法是經(jīng)過大量的篩選得到的最佳方案，以下實(shí)驗(yàn)研究為本發(fā)明的優(yōu)選過程。
一、人參皂苷Re含量測定方法研究1、供試品溶液制備方法研究方法1取藥物，置分液漏斗中，用氯仿提取，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用70％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)瑩u勻，即得。
方法2取藥物，置蒸發(fā)皿中，于水浴上濃縮，加氯仿振搖提取，棄去氯仿，再加水飽和的正丁醇振搖提取3次，合并正丁醇，加氨試液洗1次，棄去堿液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓吹谩?br>
根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，采用方法1制備供試品溶液，人參皂苷Re提取更為完全。
二、斑蝥素含量測定方法研究1、供試品溶液制備方法研究方法1取藥物，置具塞試管中，加入1.8mol/L硫酸溶液，搖勻，再加入氯仿，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得。
方法2取藥物，加入1.8mol/L硫酸溶液，用氯仿提取3次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮并定容，即得。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，兩種方法所提取的斑蝥素含量無明顯差別。但是由于方法2中使用了K-D濃縮器，增加了檢驗(yàn)成本。另據(jù)本申請人了解，由于K-D濃縮器多用于食品的檢測，在藥品檢測中使用的不多，且國內(nèi)大多數(shù)藥物檢驗(yàn)所均無K-D濃縮器，故本發(fā)明中采用方法1檢測本產(chǎn)品中斑蝥素的含量，不僅可以相對減少檢驗(yàn)成本，還方便各省藥檢所對該產(chǎn)品進(jìn)行檢測。
三、人參、黃芪薄層鑒別研究供試品溶液制備方法一取藥物，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用40％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)尤爰状既芙?，作為供試品溶液；同法制備缺人參、黃芪陰性對照液。
供試品溶液制備方法二取藥物，裝入濾紙筒內(nèi)，置索氏提取器中，加乙醚提取至無色，棄去乙醚液，加甲醇浸泡過夜后再加甲醇提取至無色，用少量甲醇洗滌容器，合并提取液及洗滌液，水浴蒸干，殘?jiān)盟崛劢猓?.1mol/L氫氧化鈉飽和的正丁醇提取6次，合并正丁醇提取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?；同法制備缺人參、黃芪陰性對照液。
展開劑選擇分別以氯仿、醋酸乙酯、乙腈、水不同比例的混合溶液；氯仿、醋酸乙酯、甲醇、水不同比例的混合溶液；氯仿、甲醇、水不同比例的混合溶液為展開劑。
結(jié)果采用方法一制備供試品溶液，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，其分離度好，斑點(diǎn)顯色清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好。最佳展開劑為氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4、10℃以下放置的下層溶液。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明對制劑中主要有效成分人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定以及人參和黃芪的薄層鑒別進(jìn)行了研究和篩選，所采用的質(zhì)量控制方法科學(xué)合理，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，不僅能全面有效地控制治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量，確保該制劑的臨床療效，而且所采用的方法相對減少了檢驗(yàn)成本。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
本發(fā)明的實(shí)施例1性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別(1)取凍干粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液60ml濃縮至10ml；或取注射液10ml；分別取上述藥品，加乙醇50ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌2次，將沉淀物用蒸餾水5ml溶解，取1ml置試管中，微熱后加入5％α-萘酚乙醇溶液50滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.5ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)取凍干粉300g加注射用水50ml使溶解、或取大輸液300ml濃縮至30ml；或取注射液50ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水3ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱(內(nèi)徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁)上，用水100ml洗滌，再用40％甲醇液50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝4∶8∶3∶4，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查PH值應(yīng)為3.8-5.0；重金屬取凍干粉20g加注射用水2ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍干粉150g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1.6mg，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，用水冷卻2分鐘，加冰醋酸5ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在544nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大輸液120ml濃縮至20ml；或取注射液20ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取3次，每次20ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌2次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次，每次50ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉3g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算。該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為10％和5％，1∶1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液60ml濃縮至10ml；或取注射液10ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1.8mol/L硫酸溶液1ml，搖勻，再精密加入1ml氯仿，密塞，振搖3分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各4μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本發(fā)明的實(shí)施例2性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別取凍干粉30g加注射用水5ml使溶解、或取大輸液30ml濃縮至5ml；或取注射液5ml；分別取上述藥品，加乙醇20ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1次，將沉淀物用蒸餾水2ml溶解，取0.5ml置試管中，微熱后加入2％α-萘酚乙醇溶液2滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；檢查PH值應(yīng)為3.0-5.0；熱原分別取凍干粉100g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；
含量測定斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5％和2％，1∶9混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉30g加注射用水5ml使溶解、或取大輸液30ml濃縮至5ml；或取注射液5ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1mol/L硫酸溶液0.5ml，搖勻，再精密加入0.5ml氯仿，密塞，振搖1分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本發(fā)明的實(shí)施例3性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別取凍干粉200g加注射用水40ml使溶解、或取大輸液200ml濃縮至40ml；或取注射液40ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水1ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱(內(nèi)徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁)上，用水50ml洗滌，再用20％甲醇液30ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝10∶5∶0.5∶10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測定人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1mg，搖勻，即得；
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2％香草醛冰醋酸溶液0.1ml、高氯酸0.5ml，搖勻，置40℃水浴中加熱10分鐘，取出，用水冷卻0.5分鐘，加冰醋酸2ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉60g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液50ml濃縮至10ml；或取注射液10ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)拥酱罂孜綐渲珼A-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用40％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml。
本發(fā)明的實(shí)施例4性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；檢查重金屬取凍干粉40g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re2mg，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加10％香草醛冰醋酸溶液1ml、高氯酸1.5ml，搖勻，置80℃水浴中加熱30分鐘，取出，用水冷卻5分鐘，加冰醋酸10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉150g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液200ml濃縮至30ml；或取注射液30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取5次，每次10ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌5次，每次5ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取6次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.4ml/min，棄去洗液，用90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)浦?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為20％和10％，9∶1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大輸液100ml濃縮至20ml；或取注射液20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入3mol/L硫酸溶液3ml，搖勻，再精密加入3ml氯仿，密塞，振搖10分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各15μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
本發(fā)明的實(shí)施例5
性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別(1)取凍干粉100g加注射用水20ml使溶解、或取大輸液100ml濃縮至20ml；或取注射液20ml；分別取上述藥品，加乙醇100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌5次，將沉淀物用蒸餾水10ml溶解，取3ml置試管中，微熱后加入10％α-萘酚乙醇溶液10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)取凍干粉400g加注射用水60ml使溶解、或取大輸液400ml濃縮至60ml；或取注射液60ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取5次，每次15ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水10ml溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱(內(nèi)徑1～1.5cm，長15cm，填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁)上，用水150ml洗滌，再用85％甲醇液100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1∶15∶6∶1，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查PH值應(yīng)為3.8-6.0；重金屬取凍干粉80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍干粉200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。
權(quán)利要求
1.一種治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，該注射制劑包括注射液、凍干粉和大輸液，其特征在于所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、檢查、鑒別、含量測定項(xiàng)目中的部分或全部；其中鑒別包括與α-萘酚的顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照的薄層鑒別；含量測定包括對制劑中人參皂苷Re和斑蝥素的含量測定。
2.按照權(quán)利要求1所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于本制劑中人參和黃芪的鑒別方法是以人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品為對照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10、10℃以下放置的下層溶液為展開劑的薄層鑒別方法。
3.按照權(quán)利要求1或2所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于鑒別方法包括以下項(xiàng)目的部分或全部(1)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)尤爰状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
4.按照權(quán)利要求3所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于具體的鑒別方法包括以下項(xiàng)目的部分或全部(1)取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)取凍干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的內(nèi)徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
5.按照權(quán)利要求1所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于本制劑中人參皂苷Re的含量測定方法是以人參皂苷Re對照品為對照的分光光度法。
6.按照權(quán)利要求1所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于本制劑中斑蝥素的含量測定方法是以斑蝥素對照品為對照，以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液的氣相色譜法。
7.按照權(quán)利要求1、5或6所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
8.按照權(quán)利要求7所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于具體的含量測定方法包括(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)拥酱罂孜綐渲珼A-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
9.按照權(quán)利要求1所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述質(zhì)量控制方法包括性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別(1)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；加入乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，加入預(yù)先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-85％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)尤爰状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查PH值應(yīng)為3.0-6.0；重金屬取凍干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加入2-10％香草醛冰醋酸溶液和高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加入冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)拥酱罂孜綐渲珼A-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，搖勻，作為對照品溶液；供試品溶液的制備分別取凍干粉加注射用水溶解、或取大輸液濃縮、或直接取注射液；置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液，搖勻，再精密加入氯仿，密塞，振搖，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
10.按照權(quán)利要求9所述治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述質(zhì)量控制方法包括性狀對于注射液產(chǎn)品為淺棕色的澄明液體；對于大輸液產(chǎn)品為黃色至淺棕色的澄明液體；對于凍干粉產(chǎn)品為黃色至淺棕色疏松塊狀物；鑒別(1)取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2ml，在二液面接界處顯紫紅色環(huán)；(2)取凍干粉200-400g加注射用水40-60ml使溶解、或取大輸液200-400ml濃縮至40-60ml；或取注射液40-60ml；分別取上述藥品，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水1-10ml溶解，加入預(yù)先制備好的內(nèi)徑1～1.5cm、長15cm、填充12cm的DA-201樹脂后，再填充2g中性氧化鋁的DA-201樹脂柱上，用水50-150ml洗滌，再用20-85％甲醇液30-100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇或乙腈∶水＝1-10∶5-15∶0.5-6∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱，置紫外光燈200-500nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；檢查PH值應(yīng)為3.0-6.0；重金屬取凍干粉40-80g加注射用水10ml使溶解、或取大輸液2ml、或取注射液2ml，置坩堝中，水浴上蒸干，依照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；熱原分別取凍干粉100-200g加注射用水30ml使溶解、或取大輸液30ml、或取注射液30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至80-150ml，按家兔體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定；其他本發(fā)明的注射液、凍干粉或大輸液應(yīng)符合中國藥典關(guān)于注射劑項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定；含量測定(1)人參皂苷Re對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re1-2mg，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.1-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱10-30分鐘，取出，用水冷卻0.5-5分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在300-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；供試品溶液的制備取凍干粉60-150g加注射用水10-30ml使溶解、或取大輸液50-200ml濃縮至10-30ml；或取注射液10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-5次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-6次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-10g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發(fā)皿中，用正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，用蒸餾水溶解殘?jiān)?，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)?，移?ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密量取供試品溶液100μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.15mg/ml；凍干粉中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于2％；大輸液制劑中含人參以人參皂苷Re計(jì)，不得少于0.02mg/ml；(2)斑蝥素 照中國藥典氣相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和2-10％，1-9∶9-1混合裝柱；柱溫為160±10℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500；對照品溶液的制備取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.1mg的溶液，作為對照品溶液；供試品溶液的制備取凍干粉30-100g加注射用水5-20ml使溶解、或取大輸液30-100ml濃縮至5-20ml；或取注射液5-20ml；分別取上述藥品，置具塞試管中，加入1-3mol/L硫酸溶液0.5-3ml，搖勻，再精密加入0.5-3ml氯仿，密塞，振搖1-10分鐘，靜置分層，必要時(shí)離心，取下層液即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各2-15祃，注入氣相色譜儀，計(jì)算；該注射制劑中，注射液中含斑蝥素為0.0005～0.004mg/ml；凍干粉中含斑蝥素為0.01～0.1％；大輸液制劑中含斑蝥素為0.00008～0.0008mg/ml。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療腫瘤的注射制劑的質(zhì)量控制方法，所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、檢查、鑒別、含量測定項(xiàng)目中的部分或全部；其中鑒別包括與α－萘酚的顯色反應(yīng)、以人參皂苷Re、Rg
文檔編號A61K9/19GK1823887SQ20051020088
公開日2006年8月30日 申請日期2005年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月29日
發(fā)明者葉湘武, 張梅 申請人:貴州益佰制藥股份有限公司