專利名稱：C10環(huán)戊基酯取代的紫杉烷的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及具有作為抗腫瘤劑功效的新的紫杉烷。
紫杉烷家族的萜類(漿果赤霉素III和通常也稱作紫杉醇的紫杉酚是其中的成員)一直是生物學(xué)和化學(xué)領(lǐng)域中受到極大關(guān)注的對(duì)象。紫杉酚本身被用作癌癥化療劑，具有寬范圍的腫瘤抑制活性。紫杉酚具有2′R，3′S構(gòu)型和下列結(jié)構(gòu)式 其中Ac為乙?；褺z為苯甲?；?。
Colin等人在美國專利4,814,470中報(bào)導(dǎo)某些紫杉醇類似物具有比紫杉酚顯著更大的活性。這些類似物之一通常被稱作多西他賽(Taxotere)，具有下列結(jié)構(gòu)式 盡管紫杉酚和多西他賽是有用的化療劑，但是它們的療效存在局限性，包括對(duì)某些類型的癌癥療效有限和以多種劑量施用時(shí)對(duì)患者的毒性。因此，仍然需要另外的具有改善的療效和更小毒性的化療劑。
發(fā)明概述因此，在本發(fā)明的各個(gè)方面中，一個(gè)方面提供了作為抗腫瘤劑在毒性和療效方面比得上紫杉酚和多西他賽的紫杉烷。一般而言，這些紫杉烷在C10上具有環(huán)戊基酯取代基，在C9上具有酮基取代基，在C7上具有羥基取代基，在C3′上具有噻吩基取代基，且在C3′上具有異丙氧基氨基甲酸酯取代基。
因此，簡言之，本發(fā)明涉及紫杉烷本身，涉及其前藥，涉及包含紫杉烷或前藥以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，涉及治療和施用方法，涉及制備包含紫杉烷或前藥的藥物的方法。
本發(fā)明的其它目的和特征將在下文中部分變得顯而易見，部分被指出。
附圖簡要說明

圖1描述了在Panc-1研究中用化合物9091與化合物3071治療的小鼠的中值腫瘤生長曲線(口服q4d×4劑量)。
圖2描述了在HT29研究中用化合物9091與化合物3071治療的小鼠的中值腫瘤生長曲線(口服q4d×4劑量)。
圖3描述了在HT29研究中用化合物9091治療的小鼠的中值腫瘤生長曲線(60mg/kg的口服單劑量)。
圖4描述了在Panc-1研究中用化合物9091治療的小鼠的中值腫瘤生長曲線(60mg/kg和120mg/kg的口服單劑量)。
圖5描述了在HT29研究中用靜脈內(nèi)劑量的化合物9091治療的小鼠的中值腫瘤生長曲線圖。
圖6描述了在HT29研究中用介質(zhì)治療或用q4d×4靜脈內(nèi)劑量的在5％E-95％I-20、含5％ET的鹽水和含5％EC的鹽水中的化合物9091治療的小鼠的組中值腫瘤生長曲線；(E-乙醇；I-英脫利匹特；T-吐溫；C-聚氧乙烯蓖麻油(cremophor)；例如含5％EC的鹽水為含5％乙醇和5％聚氧乙烯蓖麻油的鹽水)。
圖7描述了在Panc-1研究中用靜脈內(nèi)劑量的化合物9091治療的小鼠的中值腫瘤生長曲線。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明的紫杉烷具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)
其中X3為噻吩基，Ac為乙?；褻7羥基取代基和C10環(huán)戊基羰基氧基取代基獨(dú)立地具有α或β立體化學(xué)構(gòu)型。在一個(gè)實(shí)施方案中，X3為2-噻吩基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，X3為2-噻吩基且C7羥基取代基和C10環(huán)戊基羰基氧基取代基都具有β立體化學(xué)構(gòu)型。
對(duì)于包括對(duì)紫杉醇(紫杉酚)敏感的和有抗藥性的腫瘤系在內(nèi)的某些腫瘤類型而言，本發(fā)明的化合物的抗癌活性優(yōu)于常規(guī)使用的紫杉烷類。本發(fā)明的化合物不管是口服施用還是靜脈內(nèi)施用均具有相當(dāng)好的耐受性，以單劑量或多劑量施用均有效且有改善的毒性特性。本發(fā)明的化合物在非聚氧乙烯蓖麻油介質(zhì)中也是有效的。
本發(fā)明的紫杉烷可以通過以下方法獲得用具有紫杉烷四環(huán)核和C13金屬氧化物取代基的醇鹽處理β-內(nèi)酰胺，形成在C13上具有β-酰氨基酯取代基的化合物(在Holton的美國專利5,466,834中有更詳細(xì)的描述)，然后除去羥基保護(hù)基。所述的β-內(nèi)酰胺具有以下的結(jié)構(gòu)式(1) 其中P2為羥基保護(hù)基，X3為噻吩基，X5為異丙氧基羰基，所述的醇鹽具有結(jié)構(gòu)式(2)
其中M為金屬或銨，P7為羥基保護(hù)基，R10為環(huán)戊基羰基氧基。
結(jié)構(gòu)式(2)的醇鹽可以由10-脫乙?；鶟{果赤霉素III(或其衍生物)制備，方法是選擇性地保護(hù)C7羥基，然后酯化C10羥基，隨后用氨基金屬鹽(metallic amide)進(jìn)行處理。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，用硅烷基選擇性地保護(hù)10-脫乙?；鶟{果赤霉素III的C7羥基，例如如Denis等人(J.Am.Chem.Soc.，1988，110，5917)所述。一般而言，硅烷化試劑可以單獨(dú)使用或與催化量的堿例如堿金屬堿組合使用。
或者，紫杉烷的C10羥基可以在不存在堿的情況下被選擇性地?；缛鏗olton等人的PCT專利申請(qǐng)WO 99/09021中所述?？捎糜谶x擇性?；仙纪榈腃10羥基的?；瘎┌ㄈ〈幕蛭慈〈耐榛蚍蓟狒?。盡管對(duì)于許多酰化劑，紫杉烷的C10羥基的?；瘜⒁宰銐虻乃俾蔬M(jìn)行，但是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過在反應(yīng)混合物中包含路易斯酸可以增加反應(yīng)速率。優(yōu)選的路易斯酸包括氯化鋅、氯化錫、三氯化鈰、氯化亞銅、三氯化鑭、三氯化鏑和三氯化鐿。當(dāng)?；瘎樗狒麜r(shí)，特別優(yōu)選氯化鋅或三氯化鈰。
制備和拆分β-內(nèi)酰胺原料的方法一般是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，β-內(nèi)酰胺可以如Holton的美國專利No.5,430,160(第9欄，第2-50行)或Holton的美國專利No.6,649,632(第7欄，第45行-第8欄，第60行)所述的那樣制備，在此將這兩篇專利全文引入作為參考。所得的β-內(nèi)酰胺對(duì)映體混合物可以使用脂肪酶或使用例如Patel的美國專利No.5,879,929(第16欄，第1行-第18欄，第27行)或Patel的美國專利No.5,567,614中所述的酶或例如Holton的美國專利No.6,548,293(第3欄，第30-61行)所述的肝勻漿通過立體選擇性水解來拆分。例如，美國專利No.6,649,632公開了在β-內(nèi)酰胺的C4位上具有呋喃基取代基的β-內(nèi)酰胺的制備。進(jìn)行對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的改變，可以如這些現(xiàn)有技術(shù)的專利中所述的那樣或者進(jìn)一步如實(shí)施例1中所公開的那樣制備在β-內(nèi)酰胺的C4位上具有噻吩基取代基的β-內(nèi)酰胺。
本發(fā)明的化合物可以是前藥形式。一般而言，藥學(xué)上可接受的衍生物或前藥是本發(fā)明的化合物的任何藥學(xué)上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其它衍生物，當(dāng)施用于接受者后，它們能夠直接或間接地提供本發(fā)明的化合物或其具有抑制性質(zhì)的活性代謝物或殘余物。特別有利的衍生物或前藥是當(dāng)這類化合物被施用于患者時(shí)可增加本發(fā)明化合物的生物利用度(例如通過使口服施用的化合物更易于吸收入血液中)的那些或者與母體化合物相比增加母體化合物向生物學(xué)隔室(例如腦或淋巴系統(tǒng))遞送的那些。藥學(xué)上可接受的前藥包括但不限于用一種或多種以下基團(tuán)衍生化的本發(fā)明的紫杉烷磷酸根、新戊酰基氧基甲基、乙酰氧基甲基、2-苯并[c]呋喃酮基、2，3-二氫化茚基、甲氧基甲基、甲基吡啶甲磺酸鹽、碳酸氫根、鹽、膦酰氧基甲基碳酸酯、肉桂酸根、氨基酸、苯甲?；?、酰基、硫芳基、基于聚乙二醇的(polyethylene glycol based)、酯連接的(ester linked)、聚環(huán)氧烷、葡聚糖、聚乙烯醇、基于碳水化合物的聚合物、寡肽、聚谷氨酸、聚氨基酸、2-鹵代氮雜芳烴的鹽、高極性氫基糖等。在本發(fā)明的紫杉烷分子中用于形成前藥的合適位置包括但不限于C2′和C7位。各種形式的前藥在本領(lǐng)域中是眾所周知的。例如，關(guān)于這類前藥衍生物，參見(a)Design of Prodrugs，H.Bundgaard編輯(Elsevier，1985)和Methods in Enzymology，第42卷，第309-396頁，K.Widder等人編輯(Acamedic Press，1985)；(b)A Textbook ofDrug Design and Development，Krosgaard-Larsen和H.Bundgaard編輯，第5章，“前藥的設(shè)計(jì)與應(yīng)用(Design and Application of Prodrugs)”，H.Bundgaard撰寫，第113-191頁(1991)；(c)H.Bundgaard，Advanced DrugDelivery Reviews，8，1-38(1992)；(d)H.Bundgaard等人，Journal ofPharmaceutical Sciences，77，285(1988)；和(e)N.Kakeya等人，Chem PharBull，32，692(1984)。
本發(fā)明的紫杉烷可用于在包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物中抑制腫瘤生長，優(yōu)選以藥物組合物的形式施用，所述藥物組合物包含抗腫瘤有效量的本發(fā)明的化合物以及與之組合的至少一種藥學(xué)或藥理學(xué)上可接受的載體。載體在本領(lǐng)域中又稱為賦形劑、介質(zhì)、輔劑、助劑或稀釋劑，是藥學(xué)上惰性的、使組合物具有合適的稠度或形式且不減小抗腫瘤化合物的療效的任何物質(zhì)。如果當(dāng)適當(dāng)?shù)厥┯糜诓溉閯?dòng)物或人時(shí)其不產(chǎn)生不良作用、變態(tài)反應(yīng)或其它不希望的反應(yīng)，則載體是“藥學(xué)或藥理學(xué)上可接受的”。
含有本發(fā)明的抗腫瘤化合物的藥物組合物可以以任何常規(guī)方式進(jìn)行配制。適當(dāng)?shù)膭┬腿Q于所選擇的施用途徑。本發(fā)明的組合物可以被配制用于任何施用途徑，只要通過該途徑可以達(dá)到靶組織。合適的施用途徑包括但不限于口服、胃腸外(例如靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下、直腸、皮下、肌內(nèi)、眶內(nèi)、囊內(nèi)、脊柱內(nèi)、腹膜內(nèi)或胸骨內(nèi))、局部(鼻、透皮、眼內(nèi))、膀胱內(nèi)、鞘內(nèi)、腸道、肺、淋巴內(nèi)、腔內(nèi)、陰道、經(jīng)尿道、真皮內(nèi)、耳、乳房內(nèi)、口腔、常位(orthotopic)、氣管內(nèi)、病灶內(nèi)、經(jīng)皮、內(nèi)窺鏡、透粘膜、舌下和腸內(nèi)施用。
用于本發(fā)明的組合物的藥學(xué)上可接受的載體對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是眾所周知的，基于多種因素對(duì)其進(jìn)行選擇所使用的特定的抗腫瘤化合物和其濃度、穩(wěn)定性以及預(yù)期的生物利用度；用組合物治療的疾病、障礙或病癥；施用對(duì)象、其年齡、大小和總體狀況；以及施用途徑。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地確定合適的載體(參見例如J.G.Nairn，Remington′sPharmaceutical Science(A.Gennaro編輯)，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，(1985)，第1492-1517頁，將其內(nèi)容引入本文作為參考)。
所述組合物優(yōu)選地被配制成片劑、可分散的粉末、丸劑、膠囊劑、軟膠囊、膠囊形片劑(caplet)、凝膠劑、脂質(zhì)體、顆粒劑、溶液、混懸劑、乳劑、糖漿劑、酏劑、含片(troche)、糖衣丸、錠劑或任何其它可口服施用的劑型。用于制備可用于本發(fā)明的口服劑型的技術(shù)和組合物在下列參考文獻(xiàn)中有描述7 Modern Pharmaceutics，第9章和第10章(Banker & Rhodes編輯，1979)；Lieberman等人，Pharmaceutical Dosage FormsTablet(1981)；和Ansel，Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms第2版(1976)。
用于口服施用的本發(fā)明的組合物包含在藥學(xué)上可接受的載體中的抗腫瘤有效量的本發(fā)明的化合物。用于固體劑型的合適的載體包括糖、淀粉和其它常規(guī)物質(zhì)，包括乳糖、滑石粉、蔗糖、明膠、羧甲基纖維素、瓊脂、甘露醇、山梨醇、磷酸鈣、碳酸鈣、碳酸鈉、高嶺土、海藻酸、阿拉伯膠、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、糖精鈉、碳酸鎂、西黃蓍膠、微晶纖維素、膠體二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、滑石粉、硬脂酸鎂和硬脂酸。另外，這類固體劑型可以是無包衣的或者可以通過已知的技術(shù)被包衣；例如以延遲崩解和吸收。
本發(fā)明的抗腫瘤化合物也可以優(yōu)選地被配制用于胃腸外施用，例如配制成用于經(jīng)由靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下、直腸、皮下、肌內(nèi)、眶內(nèi)、囊內(nèi)、脊柱內(nèi)、腹膜內(nèi)或胸骨內(nèi)途徑注射施用。用于胃腸外施用的本發(fā)明的組合物包含在藥學(xué)上可接受的載體中的抗腫瘤有效量的抗腫瘤化合物。適用于胃腸外施用的劑型包括溶液劑、混懸劑、分散劑、乳劑或任何其它可胃腸外施用的劑型。用于制備胃腸外劑型的技術(shù)和組合物是本領(lǐng)域已知的。
在制備用于口服或胃腸外施用的液體劑型中使用的合適的載體包括非水性的藥學(xué)上可接受的極性溶劑例如油、醇、酰胺、酯、醚、酮、烴及其混合物，以及水、鹽水溶液、葡萄糖溶液(例如DW5)、電解質(zhì)溶液或任何其它水性的藥學(xué)上可接受的液體。
合適的非水性的藥學(xué)上可接受的極性溶劑包括但不限于醇(例如α-甘油縮甲醛(glycerol formal)、β-甘油縮甲醛、1，3-丁二醇、具有2-30個(gè)碳原子的脂肪族或芳族醇例如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、叔丁醇、己醇、辛醇、戊烯水合物、芐醇、甘油(丙三醇)、乙二醇、己二醇、四氫糠醇、十二醇、十六醇或十八醇，脂肪醇的脂肪酸酯例如聚亞烷基二醇(例如聚丙二醇、聚乙二醇)、脫水山梨醇、蔗糖和膽固醇)；酰胺(例如二甲基乙酰胺(DMA)、苯甲酸芐酯DMA、二甲基甲酰胺、N-(β-羥基乙基)-乳酰胺、N，N-二甲基乙酰胺_酰胺、2-吡咯烷酮、1-甲基-2-吡咯烷酮或聚乙烯吡咯烷酮)；酯(例如，1-甲基-2-吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、乙酸酯如單乙酸甘油酯、二乙酸甘油酯和三乙酸甘油酯、脂肪族或芳族酯如辛酸乙酯、油酸烷基酯、苯甲酸芐酯、乙酸芐酯、二甲基亞砜(DMSO)、甘油酯如單、二或三甘油基檸檬酸酯或酒石酸酯、苯甲酸乙酯、乙酸乙酯、碳酸乙酯、乳酸乙酯、油酸乙酯、脫水山梨醇的脂肪酸酯、脂肪酸衍生的PEG酯、單硬脂酸甘油酯、甘油酯如單、二或三甘油酯、脂肪酸酯如肉豆蔻酸異丙酯、脂肪酸衍生的PEG酯如PEG-羥基油酸酯和PEG-羥基硬脂酸酯、N-甲基吡咯烷酮、普流羅尼60、聚氧乙烯山梨醇油酸聚酯如聚(乙氧基化的)30-60山梨醇聚(油酸酯)2-4、聚(氧乙烯)15-20單油酸酯、聚(氧乙烯)15-20單12-羥基硬脂酸酯和聚(氧乙烯)15-20單蓖麻醇酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇酯如聚氧乙烯-脫水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯-脫水山梨醇單棕櫚酸酯、聚氧乙烯-脫水山梨醇單月桂酸酯、聚氧乙烯-脫水山梨醇單硬脂酸酯和來自ICI Americas，Wilmington，DE的Polysorbate20、40、60或80、聚乙烯吡咯烷酮、亞烷基氧基修飾的脂肪酸酯如聚乙二醇40氫化蓖麻油和聚氧乙基化蓖麻油(例如，CremophorEL溶液或CremophorRH 40溶液)、糖類脂肪酸酯(即單糖(例如，戊糖如核糖、核酮糖、阿拉伯醣、木糖、來蘇糖和木酮糖，己醣如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖和山梨糖，丙糖，四糖，庚糖和辛糖)、二糖(例如，蔗糖、麥芽糖、乳糖和海藻糖)或寡聚糖或其混合物與一種或多種C4-C22脂肪酸(例如，飽和脂肪酸如辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸和硬脂酸，和不飽和脂肪酸如棕櫚油酸、油酸、反油酸、芥酸和亞油酸)的縮合產(chǎn)物)，或類固醇酯)；具有2-30個(gè)碳原子的烷基醚、芳基醚或環(huán)狀醚(例如，乙醚、四氫呋喃、異山梨醇二甲醚(dimethyl isosorbide)、二甘醇一乙醚)；糖原質(zhì)(glycofurol)(四氫糠醇聚乙二醇醚)；具有3-30個(gè)碳原子的酮(例如，丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮)；具有4-30個(gè)碳原子的脂肪族、脂環(huán)族或芳族烴(例如，苯、環(huán)己烷、二氯甲烷、二氧戊環(huán)、己烷、正癸烷、正十二烷、正己烷、環(huán)丁砜、四氫噻吩砜、四亞甲基亞砜、甲苯、二甲基亞砜(DMSO)或四亞甲基亞砜)；礦物油、植物油、動(dòng)物油、精油或合成來源的油(例如，礦物油如脂肪族或蠟質(zhì)的烴、芳族烴、脂肪族和芳族混合烴(mixed aliphatic and aromatic based hydrocarbons)和精制石蠟油，植物油如亞麻子油、桐油、紅花油、豆油、蓖麻油、棉子油、花生油、菜子油、椰子油、棕櫚油、橄欖油、玉米油、玉米胚油、芝麻油、桃仁油和花生油以及甘油酯如甘油一酯、甘油二酯或甘油三酯，動(dòng)物油如魚油、海產(chǎn)品油、鯨蠟油、鱈魚肝油、鲆魚肝油、角鯊烯、角鯊?fù)楹王忯~肝油、油酸油(oleic oil)和聚氧乙基化蓖麻油)；具有1-30個(gè)碳原子和任選地一個(gè)以上鹵素取代基的烷基或芳基鹵化物；二氯甲烷；單乙醇胺；石油醚；三乙醇胺；ω-3-聚不飽和脂肪酸(例如，α-亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸)；12-羥基硬脂酸和聚乙二醇的聚乙二醇酯(SolutolHS-15，來自BASF，Ludwigshafen，德國)；聚氧乙烯甘油(polyoxyethyleneglycerol)；月桂酸鈉；油酸鈉；或脫水山梨醇單油酸酯。
用于本發(fā)明的其它藥學(xué)上可接受的溶劑對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是眾所周知的，可以從以下參考文獻(xiàn)中確定The Chemotherapy Source Book(Williams & Wilkens Publishing)，The Handbook of PharmaceuticalExcipients，(American Pharmaceutical Association，Washington，D.C.，和The Pharmaceutical Society of Great Britain，London，England，1968)，Modern Pharmaceutics，(G.Banker等人編輯，第三版)(Marcel Dekker，Inc.，New York，New York，1995)，The Pharmacological Basis ofTherapeutics，(Goodman & Gilman，McGraw Hill Publishing)，Pharmaceutical Dosage Forms，(H.Lieberman等人編輯)(Marcel Dekker，Inc.，New York，New York，1980)，Remington′s Pharmaceutical Sciences(A.Gennaro編輯，第19版)(Mack Publishing，Easton，PA，1995)，The UnitedStates Pharmacopeia 24，The National Formulary 19，(National Publishing，Philadelphia，PA，2000)，A.J.Spiegel等人，以及非水溶劑在胃腸外產(chǎn)品中的用途(Use of Nonaqueous Solvents in Parenteral Products)，JOURNALOF PHARMACEUTICAL SCIENCES，第52卷，第10期，第917-927頁(1963)。
優(yōu)選的溶劑包括那些已知穩(wěn)定抗腫瘤化合物的溶劑，例如富含甘油三酯的油，例如紅花油、豆油或其混合物，以及亞烷基氧基修飾的脂肪酸酯如聚乙二醇40氫化蓖麻油和聚氧乙基化蓖麻油(例如，CremophorEL溶液或CremophorRH 40溶液)。可商購獲得的富含甘油三酯的油包括Intralipid乳化豆油(Kabi-Pharmacia Inc.，Stockholm，Sweden)、Nutralipid乳劑(McGaw，Irvine，California)、LiposynII 20％乳劑(每毫升溶液中含有100mg紅花油、100mg豆油、12mg卵磷脂和25mg甘油的20％的脂肪乳溶液；Abbott Laboratories，Chicago，Illinois)、LiposynIII 20％乳劑(每毫升溶液中含有100mg紅花油、100mg豆油、12mg卵磷脂和25mg甘油的20％的脂肪乳溶液；Abbott Laboratories，Chicago，Illinois)、基于總脂肪酸含量以重量計(jì)含有25％至100％二十二碳六烯?；奶烊换蚝铣傻母视脱苌?Dhasco(來自Martek Biosciences Corp.，Columbia，MD)、DHA Maguro(來自Daito Enterprises，Los Angeles，CA)、Soyacal和Travemulsion。乙醇是用于溶解所述抗腫瘤化合物以形成溶液、乳劑等的優(yōu)選溶劑。
為了制藥工業(yè)中眾所周知的多種目的，可以在本發(fā)明的組合物中包含另外的次要組分。這些組分大多將賦予這樣的性質(zhì)增加抗腫瘤化合物在施用部位的滯留、保護(hù)組合物的穩(wěn)定性、控制pH、有助于將抗腫瘤化合物制成藥物劑型的加工等。這些組分中的每一種各自存在的量優(yōu)選為總組合物的小于約15重量％，更優(yōu)選為小于約5重量％，最優(yōu)選為總組合物的小于約0.5重量％。如制劑領(lǐng)域中眾所周知的那樣，一些組分例如填充劑或稀釋劑可以占總組合物的至多90重量％。這類添加劑包括預(yù)防紫杉烷再沉淀的防凍劑、表面活性劑、潤濕劑或乳化劑(例如卵磷脂、聚山梨酯-80、普流羅尼60、聚氧乙烯硬脂酸酯和聚乙氧基化蓖麻油)、防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸乙酯)、微生物防腐劑(例如芐醇、苯酚、間甲酚、氯丁醇、山梨酸、硫柳汞和對(duì)羥基苯甲酸酯)、調(diào)節(jié)pH的物質(zhì)或緩沖劑(例如酸、堿、乙酸鈉、脫水山梨醇單月桂酸酯)、調(diào)節(jié)摩爾滲透壓濃度的物質(zhì)(例如甘油)、增稠劑(例如單硬脂酸鋁、硬脂酸、十六醇、十八醇、瓜爾膠、甲基纖維素、羥丙基纖維素、三硬脂精、十六烷基蠟酯(cetyl wax esters)、聚乙二醇)、著色劑、染料、助流劑、非揮發(fā)性聚硅氧烷(例如環(huán)甲基硅酮)、粘土(例如膨潤土)、膠粘劑、膨脹劑(bulking agent)、矯味劑、甜味劑、吸附劑、填充劑(例如，糖如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纖維素或磷酸鈣)、稀釋劑(例如水、鹽水、電解質(zhì)溶液)、粘合劑(例如，淀粉如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉或馬鈴薯淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、糖類、聚合物、阿拉伯膠)、崩解劑(例如，淀粉如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉或羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽例如藻酸鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉或交聚維酮)、潤滑劑(例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其鹽如硬脂酸鎂或聚乙二醇)、包衣劑(例如包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普膠、聚乙二醇或二氧化鈦的濃糖溶液)以及抗氧化劑(例如焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、葡萄糖、酚類和苯硫酚)。
通過這些途徑進(jìn)行的劑型施用可以是連續(xù)的或間斷的，這取決于例如患者的生理?xiàng)l件、施用目的是治療還是預(yù)防以及從業(yè)人員已知的和可估計(jì)的其它因素。
本發(fā)明的藥物組合物的施用劑量和施用方案可以由治療癌癥領(lǐng)域的普通技術(shù)人員容易地確定。應(yīng)當(dāng)理解的是，抗腫瘤化合物的劑量將取決于接受者的年齡、性別、健康狀況和體重、伴隨治療的類型(如果存在的話)、治療的頻率、所需療效的性質(zhì)。對(duì)于任何施用方式而言，遞送的抗腫瘤化合物的實(shí)際量以及達(dá)到本文所述的有益效果所必需的給藥方案還將部分取決于諸如抗腫瘤化合物的生物利用度、所治療的障礙、所需的治療劑量和對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的其它因素等因素。在本發(fā)明的情況下施用于動(dòng)物、特別是人的劑量應(yīng)當(dāng)在合理的時(shí)間段中足以對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生所需的治療響應(yīng)。優(yōu)選地，無論是口服施用還是通過另一種途徑施用，抗腫瘤化合物的有效量是當(dāng)通過該途徑施用時(shí)將產(chǎn)生所需的治療響應(yīng)的任何量。優(yōu)選地，用于口服施用的組合物用這樣的方式制備，在一個(gè)或多個(gè)口服制劑中的單劑量含有至少20mg抗腫瘤化合物/m2患者體表面積，或至少50、100、150、200、300、400或500mg抗腫瘤化合物/m2患者體表面積，其中人的平均體表面積為1.8m2。優(yōu)選地，用于口服施用的組合物的單劑量含有約20至約600mg抗腫瘤化合物/m2患者體表面積，更優(yōu)選約25至約400mg/m2，甚至更優(yōu)選約40至約300mg/m2，甚至更優(yōu)選約50至約200mg/m2。優(yōu)選地，用于胃腸外施用的組合物周這樣的方式制備，單劑量含有至少20mg抗腫瘤化合物/m2患者體表面積，或至少40、50、100、150、200、300、400或500mg抗腫瘤化合物/m2患者體表面積。優(yōu)選地，在一個(gè)或多個(gè)胃腸外制劑中的單劑量含有約20至約500mg抗腫瘤化合物/m2患者體表面積，更優(yōu)選約40至約400mg/m2，甚至更優(yōu)選約60至約350mg/m2。但是，劑量可以根據(jù)給藥方案而變化，可以根據(jù)所需的治療效果對(duì)給藥方案進(jìn)行調(diào)整。應(yīng)當(dāng)注意的是，本文所提供的有效劑量的范圍并非旨在限制本發(fā)明，而是代表優(yōu)選的劑量范圍。最優(yōu)選的劑量將根據(jù)個(gè)體施用對(duì)象而調(diào)整，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員無需過多實(shí)驗(yàn)即可理解和確定之。
抗腫瘤化合物在液體藥物組合物中的濃度優(yōu)選為約0.01mg至約10mg/mL組合物，更優(yōu)選為約0.1mg至約7mg/mL，甚至更優(yōu)選為約0.5mg至約5mg/mL，最優(yōu)選為約1.5mg至約4mg/ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，9091在該劑型中的濃度為2至4mg/mL。一般優(yōu)選較低的濃度，因?yàn)榭鼓[瘤化合物多數(shù)在溶液中以低濃度溶解?；诮M合物的總重量，抗腫瘤化合物在用于口服施用的固體藥物組合物中的濃度優(yōu)選為約5重量％至約50重量％，更優(yōu)選約8重量％至約40重量％，最優(yōu)選約10重量％至約30重量％。
在一個(gè)實(shí)施方案中，用于口服施用的溶液是通過以下方法制備的將抗腫瘤化合物溶解在任何藥學(xué)上可接受的能溶解所述化合物的溶劑(例如乙醇或聚乙二醇)中，形成溶液。在攪拌的同時(shí)向溶液中加入適當(dāng)體積的載體(其為表面活性劑，例如CremophorEL溶液、聚山梨酯80、Solutol HS15或Vitamin E TPGS)，形成用于口服施用于患者的藥學(xué)上可接受的溶液。例如，所得的組合物可以含有至多約10％乙醇和/或至多約10％表面活性劑，更典型地，濃度為約5-10體積％的乙醇，等體積的表面活性劑以及80-90體積％的蒸餾水。為了口味的目的，可以用稀櫻桃或覆盆子糖漿代替一部分蒸餾水，優(yōu)選余量為水的約10-30％的糖漿。在一個(gè)實(shí)施方案中，9091在該劑型中的濃度為2至4mg/mL。如果需要，可以將這類溶液配制成含有最小量乙醇或不含乙醇，在本領(lǐng)域中已知的是當(dāng)在口服劑型中以某些濃度施用時(shí)乙醇會(huì)導(dǎo)致不良的生理學(xué)作用。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，溶液包含約5％乙醇，約5％選自聚山梨酯80(例如Tween 80)、聚乙氧基化蓖麻油(例如Cremophor)及其混合物的表面活性劑，以及約90％蒸餾水。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于口服施用的粉末或片劑是通過以下方法制備的將抗腫瘤化合物溶解在任何藥學(xué)上可接受的能溶解所述化合物的溶劑(例如乙醇或聚乙二醇)中，形成溶液。當(dāng)將溶液在真空下干燥時(shí)任選地溶劑能被蒸發(fā)。在干燥之前可向溶液中加入另外的載體，例如CremophorEL溶液。將所得的溶液在真空下干燥，得到玻璃狀物。然后將該玻璃狀物與粘合劑混合形成粉末?？梢詫⒎勰┡c填充劑或其它常規(guī)的壓片物質(zhì)混合，并加工成用于口服施用于患者的片劑。還可以將粉末加入到任何上文所述的液體載體中以形成用于口服施用的溶液劑、乳劑、混懸劑等。
用于胃腸外施用的乳劑可通過以下方法制備將抗腫瘤化合物溶解在任何藥學(xué)上可接受的能溶解所述化合物的溶劑(例如乙醇或聚乙二醇)中以形成溶液。在攪拌的同時(shí)向溶液中加入適當(dāng)體積的載體(其為脂肪乳，如LiposynII、LiposynIII或Intralipid乳劑)，形成用于胃腸外施用于患者的藥學(xué)上可接受的乳劑。例如，所得的組合物可以含有至多約10％的乙醇和/或約90％以上的載體(脂肪乳)，更典型地，濃度為約5-10體積％乙醇和約90-95體積％載體(脂肪乳)。在一個(gè)實(shí)施方案中，9091在給藥溶液中的濃度為約1-2mg/mL。典型地，脂肪乳含有約10％至約20％脂肪，優(yōu)選約20％脂肪。如果需要，這類乳劑可以被配制成含有最少量的乙醇或Cremophor溶液或者不含乙醇或Cremophor溶液，在本領(lǐng)域中已知的是當(dāng)在胃腸外劑型中以某些濃度被施用時(shí)乙醇或Cremophor溶液會(huì)導(dǎo)致不良的生理作用。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，乳劑包含約5％乙醇和約95％的脂肪乳(例如Intralipid 20％、Liposyn II 20％或其混合物)。在該優(yōu)選的實(shí)施方案中，所得的組合物不含已知可導(dǎo)致不良生理作用的物質(zhì)，例如聚乙氧基化蓖麻油(例如Cremophor)和聚山梨酯80(例如Tween 80)。
用于胃腸外施用的溶液可以通過以下方法制備將抗腫瘤化合物溶解在任何藥學(xué)上可接受的能溶解所述化合物的溶劑(例如乙醇或聚乙二醇)中以形成溶液。在攪拌的同時(shí)向溶液中加入適當(dāng)體積的載體(其為表面活性劑，例如Cremophor溶液、聚山梨酯80或Solutol HS15)，形成用于胃腸外施用于患者的藥學(xué)上可接受的溶液。例如，所得的組合物可以含有至多約10％乙醇和/或至多約10％表面活性劑，更典型地，濃度為約5-10體積％的乙醇，等體積的表面活性劑以及80-90體積％的鹽水。如果需要，這類溶液可以被配制成含有最少量的乙醇或Cremophor溶液或者不含乙醇或Cremophor溶液，在本領(lǐng)域中已知的是當(dāng)在胃腸外劑型中以某些濃度被施用時(shí)乙醇或Cremophor溶液會(huì)導(dǎo)致不良的生理作用。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，溶液包含約5％乙醇、約5％聚山梨酯80(例如Tween 80)或聚乙氧基化蓖麻油(例如Cremophor)以及約90％鹽水(0.9％氯化鈉)。為了最小化或消除潛在的不良作用(例如超敏反應(yīng))，接受該實(shí)施方案的患者優(yōu)選用地塞米松、苯海拉明或任何另一種本領(lǐng)域已知的可最小化或消除這些不良作用的物質(zhì)進(jìn)行預(yù)治療。
其它合適的胃腸外劑型包括脂質(zhì)體。脂質(zhì)體一般為雙親性化合物的球形或類球形群集體或聚集體，其包含脂類化合物，典型地是一個(gè)或多個(gè)同心層形式，例如單層或雙層。脂質(zhì)體可以用離子或非離子性脂類配制。用非離子性脂類配制的脂質(zhì)體也稱作非離子表面活性劑微囊(noisome)。關(guān)于脂質(zhì)體的參考文獻(xiàn)包括(a)Liposomes Second EditionA PracticalApproach，V.Torchillin和V.Weissig編輯，Oxford University Press，2003；(b)M.Malmstein，Surfactants and Polymers in Drug Delivery，MarcelDekker Inc.，2002；和(c)Muller等人，Emulsions and Nanosuspensions forthe Formulation of Poorly Soluble Drugs，Medpharm Scientific Publishers，1998。
如果需要，用于口服或胃腸外施用的上述乳劑或溶液可以用IV袋、小瓶或其它常規(guī)容器以濃的形式進(jìn)行包裝，并且如本領(lǐng)域已知的那樣，在使用前用任何藥學(xué)上可接受的液體例如鹽水稀釋以形成可接受的紫杉烷濃度。
本文所用的術(shù)語“羥基保護(hù)基”和“羥基保護(hù)基團(tuán)”表示能夠保護(hù)游離羥基的基團(tuán)(“被保護(hù)的羥基”)，在需要保護(hù)的反應(yīng)完成后，其可以被除去而不干擾分子的其它部分。各種羥基保護(hù)基及其合成可以在T.W.Greene的Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，1981或Fieser & Fieser中找到。舉例性的羥基保護(hù)基包括甲氧基甲基、1-乙氧基乙基、芐氧基甲基、(β-三甲基硅烷基乙氧基)甲基、四氫吡喃基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、叔丁基(二苯基)硅烷基、三烷基硅烷基、三氯甲氧基羰基和2，2，2-三氯乙氧基甲基。
本文中所用的“Ac”意指乙?；弧癇z”意指苯甲?；?；“TES”意指三乙基硅烷基；“TMS”意指三甲基硅烷基；“LAH”意指氫化鋁鋰；“10-DAB”意指10-脫乙酰基漿果赤霉素III；“THF”意指四氫呋喃；“DMAP”意指4-二甲基氨基吡啶；“LHMDS”意指六甲基二硅烷基氨基鋰；“TESCl”意指氯化三乙基硅烷；“cPtc-Cl”意指環(huán)戊烷甲酰氯；“DMF”意指N，N-二甲基甲酰胺；“MOP”意指2-甲氧基丙烯；“iProc”意指N-異丙氧基羰基；“iProc-Cl”意指氯甲酸異丙酯；且“LDA”意指二異丙基氨基鋰。
下列實(shí)施例用于舉例說明本發(fā)明。
實(shí)施例1化合物9091的制備 10-DAB的保護(hù)和酰化為SIT310。使用下列方法，先后用氯化三乙基硅烷(TESCl)保護(hù)10-DAB的C7-羥基和用環(huán)戊烷甲酰氯(cPtc-Cl)?；銫10-羥基，生成SIT310。
優(yōu)選地，對(duì)于每1g 10-DAB，反應(yīng)在6mL DMF中進(jìn)行，為澄清溶液(10-DAB在22℃下可以以約5mL/g溶解在DMF中，但是當(dāng)冷卻至0-5℃時(shí)將會(huì)沉淀)。在室溫下將DMAP加入到10-DAB在DMF中的溶液中會(huì)幫助其溶解。優(yōu)選地，用無水溶劑和反應(yīng)物處于惰性氮?dú)夥障?。水?huì)以1∶2的比例消耗氯化三乙基硅烷。
向處于惰性氮?dú)夥障碌呐溆写帕嚢琛?nèi)部溫度探針和加料漏斗的烘箱干燥的1-L的帶夾套的三頸圓底燒瓶(RBF)中加入10-DAB(54.46g，0.100mol)、DMAP(36.60g，0.300mol)和無水DMF(330mL)。將混合物(0.3M)在22℃下進(jìn)行攪拌，得到澄清的淺黃色溶液。用循環(huán)冷卻器將反應(yīng)混合物冷卻至反應(yīng)器內(nèi)部溫度為0-5℃。
7-TES保護(hù)在加料漏斗中放入TESCl(17.6mL，0.105mol，1.05eq)。當(dāng)反應(yīng)器內(nèi)部溫度＜5℃時(shí)，開始滴加TESCl以控制放熱并保持反應(yīng)器內(nèi)部溫度＜5℃(加入時(shí)間20-30分鐘)。加入15mL TESCl后，DMAP-HCl鹽開始沉淀。加入完成后，將反應(yīng)在0-5℃下攪拌2.5小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)(3∶1，EtOAc∶庚烷)表明與7-TES-10-DAB產(chǎn)物(Rf＝0.65)相比有少量原料(Rf＝0.20)。反應(yīng)混合物的HNMR取樣表明，根據(jù)C10甲醇質(zhì)子共振積分，原料量是產(chǎn)物的2.5％。加入另外的TESCl(0.45mL，0.0027mol)，將混合物在0-5℃下進(jìn)行攪拌。2小時(shí)后，HNMR取樣表明存在＜1％的原料10-DAB、約1.2％的7，13-雙硅烷基化的副產(chǎn)物(將反應(yīng)攪拌過夜沒有進(jìn)一步的變化)。
10-cPtc形成在加料漏斗中放入環(huán)戊烷甲酰氯(12.76mL，0.105mol)，歷經(jīng)30分鐘滴加至反應(yīng)燒瓶中以控制放熱并保持反應(yīng)器內(nèi)部溫度＜10℃。加入完成后，將混合物在15-22℃下攪拌12小時(shí)。對(duì)反應(yīng)混合物的TLC監(jiān)測(cè)表明約95％轉(zhuǎn)化為極性較小的產(chǎn)物。反應(yīng)混合物的HNMR取樣表明，根據(jù)C10甲醇質(zhì)子共振積分，相對(duì)于產(chǎn)物，殘留有4.5％的中間體7-TES-10-DAB。加入另外的cPtc-Cl(0.55mL，0.0045mol)，將混合物攪拌4.5小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)(1∶1，EtOAc∶庚烷)表明完全轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，開始后處理。
后處理將反應(yīng)混合物歷經(jīng)5分鐘逐漸傾入到含有1.5L冰冷的水的快速攪拌著的3-L燒瓶中，形成稠厚的白色沉淀。攪拌15分鐘后，通過中號(hào)多孔玻璃布氏漏斗(medium frit Buchner funnel)真空過濾收集沉淀。將濾餅用純水充分洗滌。TLC表明水濾液中沒有產(chǎn)物，棄去。將濾餅溶解在乙酸乙酯(300mL)中，收集到真空過濾燒瓶中。將漏斗用乙酸乙酯(100mL)洗滌到乙酸乙酯濾液中。將濾液轉(zhuǎn)移到2-L的分液漏斗中，用水(1×100mL)、飽和碳酸氫鈉溶液(1×100mL)和鹽水(1×50mL)洗滌。將有機(jī)層用MgSO4(30g)干燥1小時(shí)。過濾除去MgSO4，用乙酸乙酯洗滌到濾液中。通過在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將濾液濃縮至～100mL。將剩余的乙酸乙酯用乙腈(500mL)交換。將混合物進(jìn)一步濃縮，直至在旋轉(zhuǎn)燒瓶中殘留的約375mL乙腈中觀察到有晶體形成。停止?jié)饪s，加入50mL乙腈以幫助晶體的攪拌。然后將溶液冷卻至-20℃達(dá)1小時(shí)，同時(shí)在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上旋轉(zhuǎn)。通過真空過濾收集晶體。將濾餅用-20℃的冷乙腈(150mL)和環(huán)境溫度的庚烷(200mL)洗滌。在22℃、高真空(＜0.1mmHg)下干燥晶體過夜至恒重(59.90g，79.3％)。Mp241-243℃，97.5％ HPLC純度。KF0.96％w/w水。晶體的HNMR譜確證為SIT310的結(jié)構(gòu)。[α]D20＝-43.5(MeOH，2.07)。
將乙腈濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下濃縮至～100mL，得到第二批晶體。
先后進(jìn)行SIT302的保護(hù)和N-?；?轉(zhuǎn)化為SIT304。使用下列方法，先后用2-甲氧基丙烯(MOP)保護(hù)SIT302的羥基和用氯甲酸異丙酯(iProc-Cl)引入N-異丙氧基羰基(iProc)基團(tuán)，得到SIT304。
優(yōu)選地，下列反應(yīng)在無水條件下和在氮惰性氣氛下的溶劑中進(jìn)行。玻璃儀器和設(shè)備用三乙胺堿洗滌并充分干燥。在＞0℃的溫度下、在痕量酸的存在下MOP容易地聚合。在-25℃、＜15mL THF/g的濃度下，SIT302會(huì)沉淀。
MOP保護(hù)向在氮?dú)夥障逻M(jìn)行磁力攪拌的配有0.5-L加料漏斗和低溫探針的干燥的2-L RBF中加入SIT302(36.0g，0.213mol)和THF(540mL)，得到澄清的淺黃色溶液。將該溶液冷卻至-25℃，然后放入pTsOH單水合物(1.8g，9.4mmol)。在加料漏斗中放入MOP(23.5mL，0.245mol)。反應(yīng)器溫度達(dá)到-25℃后，滴加MOP，滴加速度應(yīng)控制放熱并保持反應(yīng)器溫度＜-20℃(15分鐘)。加入完成后，用2∶1乙酸乙酯∶己烷洗脫的TLC監(jiān)測(cè)表明有～15％ SIT302(Rf＝0.2)殘留。歷經(jīng)5分鐘滴加另外的MOP(5mL，0.052mol)以完成向極性較小的MOP保護(hù)的SIT302(Rf＝0.5)的轉(zhuǎn)化。在-25℃下用三乙胺(108mL，0.775mol)淬滅縮酮形成反應(yīng)。
N-?；贛OP保護(hù)反應(yīng)被淬滅后，將DMAP(3.24g，0.0265mol)加入到反應(yīng)燒瓶中，升溫至環(huán)境溫度。將加料漏斗在氮?dú)饬飨赂稍?，裝入iProc-Cl(245mL，1.0M在甲苯中，0.245moI)。反應(yīng)器溫度為22℃后，開始滴加氯甲酸酯以控制放熱并保持反應(yīng)器溫度低于28℃。在30分鐘內(nèi)完成加入，得到白色三乙基氯化銨沉淀。在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)后，用1∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脫的TLC監(jiān)測(cè)表明～90％轉(zhuǎn)化，殘留10％ MOP-SIT302。向反應(yīng)中加入另外的iProc-Cl(40mL，0.04mol)。在22℃下攪拌2.5小時(shí)后，TLC顯示完全轉(zhuǎn)化為極性較小的產(chǎn)物，開始后處理。
后處理向反應(yīng)混合物中加入1∶1飽和碳酸氫鈉∶鹽水的混合物(300mL)，劇烈攪拌10分鐘。然后將混合物轉(zhuǎn)移到2-L分液漏斗中，使各層分離。放出下面的水層并棄去。將有機(jī)層用鹽水洗滌兩次(2×100mL)，在攪拌下用MgSO4(15g)干燥1小時(shí)。過濾除去MgSO4，用乙酸乙酯洗滌濾餅以確保產(chǎn)物的完全回收(TLC)。將濾液轉(zhuǎn)移至3-L的蒸發(fā)容器中，在40℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮成油狀物以除去甲苯和THF溶劑。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的蒸發(fā)燒瓶中將該粘稠的油狀物溶解在乙酸乙酯(500mL)中，在良好的攪拌下歷經(jīng)10分鐘向該蒸發(fā)燒瓶中加入庚烷(1500mL)。將澄清溶液進(jìn)一步在真空下濃縮。在除去約350mL溶劑混合物后，開始形成晶體，停止真空濃縮。通過在22℃下連續(xù)旋轉(zhuǎn)1小時(shí)、然后在0℃下旋轉(zhuǎn)1小時(shí)將混合物冷卻。通過真空過濾收集晶體，將濾餅用冷庚烷(150mL)洗滌。在高真空(0.1mmHg)、環(huán)境溫度下干燥產(chǎn)物至恒重(51.52g，0.157mol，73.7％)。將濾液濃縮至約200mL體積以生成第二批晶體。冷卻至0℃達(dá)1小時(shí)后，通過真空過濾收集第二批晶體，用庚烷(～50mL)洗滌并干燥至恒重(10.25g，0.031mol，14.7％)。在用TLC監(jiān)測(cè)兩批晶體表明具有相似的純度后，將其合并(61.52g，88.4％)。Mp74-75℃，99.4％ HPLC純度。KF1.48％w/w水。晶體的HNMR譜確證了SIT304的結(jié)構(gòu)。[α]D20＝+3.6(MeOH，0.93)。將其貯存在＜-20℃的處于氮?dú)夥障碌挠萌野废礈爝^的燒瓶中。
SIT310鋰醇鹽偶聯(lián)-轉(zhuǎn)化為SIT312。使用下列方法，將SIT310和SIT304偶聯(lián)，生成SIT312。
反應(yīng)對(duì)濕氣敏感。優(yōu)選地，反應(yīng)在惰性氮?dú)夥?、無水反應(yīng)器和溶劑中進(jìn)行。二異丙基氨基鋰(LDA)堿應(yīng)當(dāng)是在使用前新鮮制備的。
LDA制備向處于氮?dú)夥障碌呐溆写帕嚢韬蛢?nèi)溫溫度探針的烘箱干燥的250mL RBF中加入二異丙基胺(13.1mL，92.98mmol)和THF(26mL)。將混合物冷卻至-45℃，滴加新鮮滴定的n-BuLi溶液(54mL，1.62M，85.83mmol)以控制放熱并保持反應(yīng)器溫度＜-40℃。在歷經(jīng)30分鐘滴加完成后，將冷卻浴在使用前升溫至0-5℃。
偶聯(lián)反應(yīng)向處于氮?dú)夥障碌呐溆写帕嚢韬蛢?nèi)部溫度探針的烘箱干燥的1-L RBF中加入SIT310(54.0g，71.525mmol)、SIT304(28.1g，85.83mmol)和THF(325mL，0.22M)。將混合物冷卻至-45℃。在加料漏斗中放入新鮮制備的LDA，歷經(jīng)30分鐘滴加到反應(yīng)燒瓶中以控制放熱并保持反應(yīng)器溫度＜-40℃。加入后，將反應(yīng)器溫度升至-20℃，并在攪拌下保持該溫度達(dá)1.5小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)(1∶3/EtOAc∶Hept)表明有～10％ SIT31(Rf＝0.25)、～90％產(chǎn)物SIT312，沒有原料SIT304殘留。向反應(yīng)混合物中加入固體形式的另外的SIT304(2.8g，8.56mmol)。在-20℃下攪拌1.5小時(shí)后，TLC分析顯示反應(yīng)完全，開始后處理。
后處理向在-20℃下的反應(yīng)燒瓶中加入1∶1飽和碳酸氫鈉和鹽水的混合物(100mL)以淬滅反應(yīng)。將反應(yīng)燒瓶升溫至環(huán)境溫度，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。加入乙酸乙酯(200mL)以幫助分層。放出水相并棄去。將有機(jī)層用鹽水(50mL)再洗滌一次，用MgSO4(30g)干燥。過濾除去MgSO4，將濾餅用乙酸乙酯(100mL)洗滌到濾液中。通過真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮濾液至約150mL體積。將殘余的溶劑用異丙醇(500mL)交換。進(jìn)一步濃縮至體積約350-400mL后，開始形成晶體，停止?jié)饪s。在攪拌下將混合物冷卻至0℃達(dá)1小時(shí)。通過真空過濾收集晶體，用預(yù)先冷卻的0℃的異丙醇(200mL)洗滌，在高真空(0.1mmHg)下干燥至恒重(73.58g，68.0mmol，95.0％)。晶體的HNMR譜確證了SIT312的結(jié)構(gòu)。MP137-140℃，HPLC純度95.4％。其在HPLC制備條件下不穩(wěn)定，在分析中失去2′-MOP保護(hù)(0.83％)。
先后將SIT312脫保護(hù)-轉(zhuǎn)化為9091。使用下列方法，先后在酸性條件下除去SIT312的MOP和TES保護(hù)基，生成9091。
向配有磁力攪拌、內(nèi)部溫度探針和加料漏斗的帶夾套的1-L RBF中放入SIT312(70.0g，64.67mmol)和THF(350mL，0.185M)。用循環(huán)浴將混合物冷卻至0℃。向加料漏斗中放入甲酸(96％，175mL，4.45mol)。歷經(jīng)30分鐘滴加甲酸以控制放熱并保持反應(yīng)器溫度＜10℃。在甲酸加入完成后，在加料漏斗中放入1.0M HCl(87.5mL，87.5mmol)。歷經(jīng)15分鐘進(jìn)行HCl的滴加以控制放熱并保持反應(yīng)器溫度＜10℃。在加入后，反應(yīng)混合物的TLC(1∶1EtOAc∶Hept)表明立即失去MOP保護(hù)基，得到與SIT312(Rf＝0.7)相比極性更大的產(chǎn)物(Rf＝0.65)。將混合物在8-10℃下進(jìn)行攪拌。9小時(shí)后，TLC表明＞95％轉(zhuǎn)化為極性更大的產(chǎn)物以及約2-3％副產(chǎn)物(Rf＝0.55)和～1％Rf＝0.65的中間體，開始后處理。
后處理將反應(yīng)用乙酸乙酯(1L)稀釋，轉(zhuǎn)移至3-L的分液漏斗中，用水洗滌兩次(2×500ml)，用飽和碳酸氫鈉洗滌兩次(2×100mL)。測(cè)定有機(jī)層的pH為8，將其用鹽水洗滌兩次(2×100mL)。通過TLC分析監(jiān)測(cè)水相表明沒有產(chǎn)物。將有機(jī)層用Na2SO4(100g)干燥1小時(shí)。將Na2SO4用Whatman No.1濾紙靠重力過濾除去，用乙酸乙酯洗滌濾餅以確保產(chǎn)物的完全回收。通過在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮濾液，得到泡沫狀物(65.59g)。泡沫狀物的HNMR譜確證了9091的結(jié)構(gòu)以及三乙基硅烷基化的副產(chǎn)物。
重結(jié)晶將泡沫狀物溶解在乙酸乙酯(280mL)中，在攪拌下升溫至50℃。歷經(jīng)15分鐘逐漸加入庚烷(455mL)以保持澄清溶液。將混合物逐漸冷卻至環(huán)境溫度。在22℃下1小時(shí)后，引入晶種，5分鐘內(nèi)出現(xiàn)晶體形成。將混合物在0℃水浴中冷卻1小時(shí)，隨后通過真空過濾收集晶體，用0℃的冷1∶4 EtOAc∶庚烷混合物(200mL)洗滌濾餅。在環(huán)境溫度和高真空(＜0.1mmHg)下干燥3小時(shí)后，得到57.23g(預(yù)期57.23g)白色粉末。HPLC分析通過面積/面積積分表明純度為96.8％，雜質(zhì)1.2％。在50℃下將白色粉末再次溶解在乙酸乙酯(225mL)中。在輕輕攪拌的同時(shí)，逐漸加入庚烷(320mL)以保持澄清溶液。加入完成后，將混合物冷卻至22℃，在5分鐘內(nèi)自發(fā)形成晶體。在22℃下10小時(shí)后，將混合物冷卻至0℃。在0℃下1小時(shí)后，通過真空過濾收集晶體，用0℃的冷1∶4 EtOAc∶庚烷混合物(200mL)洗滌濾餅。晶體的HPLC分析表明純度水平為98.5％。將該白色粉末在50℃和高真空(0.1mmHg)下干燥2天至恒重(40.58g，45.3mmol，70.0％)。MP159-161℃，98.5％ HPLC純度。1HNMR和13CNMR譜確證了9091的結(jié)構(gòu)。[α]D20＝-43.1(MeOH，0.91)。
將第一次重結(jié)晶的母液濃縮，得到15.0g蠟狀物。將其用庚烷(200mL)研磨，得到約7g自由流動(dòng)的粉末。將該粉末用硅膠快速柱色譜法純化，用1∶1乙酸乙酯∶庚烷洗脫。合并含有9091的級(jí)分，在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮，得到5.84g 9091。合并含有雜質(zhì)的級(jí)分，得到0.55g白色固體，HNMR譜確證為7-甲酰氧基-9091。
濃縮第二次重結(jié)晶的母液，得到4.50g物質(zhì)。將其與5.84g第一個(gè)母液的色譜法純化的9091合并，得到10.34g(17.8％)。
化合物9091的1HNMR數(shù)據(jù)(CDCl3)化合物9091的1H和13C化學(xué)位移
實(shí)施例2通過細(xì)胞集落形成試驗(yàn)測(cè)定體外細(xì)胞毒性將400個(gè)細(xì)胞(HCT116人結(jié)腸癌，來自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA)接種于含有2.7mL培養(yǎng)基(含有10％胎牛血清和100單位青霉素/mL和100g鏈霉素/mL的改良的McCoy 5a培養(yǎng)基)的60mm培養(yǎng)皿中。將細(xì)胞在CO2培養(yǎng)箱中于37℃下溫育5小時(shí)，附著在培養(yǎng)皿的底部。將本發(fā)明的化合物以終濃度的10倍新鮮混合到培養(yǎng)基中，然后取0.3mL該儲(chǔ)備液，加入到在培養(yǎng)皿中的2.7mL培養(yǎng)基中。然后將細(xì)胞與藥物一起在37℃下溫育72小時(shí)。在溫育結(jié)束時(shí)，潷出含藥的培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿用4mL Hank平衡鹽溶液(HBSS)洗滌，加入5mL新鮮培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中進(jìn)行集落形成。溫育7天后，使用集落計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞集落進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算細(xì)胞生存率，測(cè)定每個(gè)供試化合物的IC50(產(chǎn)生50％集落形成抑制的藥物濃度)。
使用vM46(有抗藥性的人結(jié)腸癌HCT116變體，由California PacificMedical Center，CA的Li-Xi博士提供)進(jìn)行相同的評(píng)價(jià)。使用MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化)試驗(yàn)以類似方式進(jìn)行DLD-1(有抗藥性的人結(jié)腸癌，來自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA)評(píng)價(jià)。
實(shí)施例39091的口服療效評(píng)價(jià)用獲自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA的人胰腺腫瘤異種移植物Panc-1評(píng)價(jià)9091的療效。用于該研究的腫瘤被維持在無胸腺的裸鼠上。將腫瘤碎片(1mm3)皮下植入到每個(gè)供試小鼠的右脅。每周兩次對(duì)腫瘤進(jìn)行監(jiān)測(cè)，然后，當(dāng)其大小達(dá)到200-400mm3、平均250-300mm3時(shí)每天一次進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在研究的第1天，將動(dòng)物分為腫瘤大小為171.5-320.0mm3且組平均腫瘤大小為212.6-216.0mm3的治療組。用以下公式計(jì)算以mm3為單位的腫瘤大小
其中w為以mm計(jì)的腫瘤寬度，I為以mm計(jì)的腫瘤長度。假設(shè)1mg相當(dāng)于1mm3腫瘤體積來估算腫瘤重量。將小鼠以每組六只小鼠進(jìn)行分組，按照表1A和1B的方案進(jìn)行治療。所有治療均為口服施用，第1天施用一次(qd×1)。第2組和第3組分別接受120和60mg/kg的化合物9091。在所有組中，給藥體積為0.6mL/20g小鼠，按照每只動(dòng)物的體重依比例確定。當(dāng)每只動(dòng)物的腫瘤達(dá)到預(yù)設(shè)終點(diǎn)大小(1200mm3)時(shí)對(duì)其實(shí)施安樂死。通過以下方程計(jì)算每只小鼠達(dá)到終點(diǎn)的時(shí)間(TTE) 其中TTE以天數(shù)表示，終點(diǎn)體積以mm3表示，b為截距，m為通過log-轉(zhuǎn)換的腫瘤生長數(shù)據(jù)集的線性回歸得到的線的斜率。所述數(shù)據(jù)集包括超過研究終點(diǎn)體積的第一次觀察結(jié)果和達(dá)到終點(diǎn)體積之前相鄰進(jìn)行的三個(gè)連續(xù)觀察結(jié)果。未達(dá)到終點(diǎn)的動(dòng)物被給定TTE值，其等于研究的最后一天(59天)。被分類為TR(治療相關(guān)性)死亡或NTRM(非治療相關(guān)性轉(zhuǎn)移)死亡的動(dòng)物被給定TTE值，其等于死亡的那天。被分類為NTR(非治療相關(guān)性)死亡的動(dòng)物從TTE計(jì)算中排除。從腫瘤生長延遲(TGD)確定治療療效，其被定義為與對(duì)照組相比治療組中值TTE的增長TGD＝T-C，以天數(shù)表示，或?yàn)閷?duì)照組中值TTE的百分比%TGD=T-CC×100]]>其中T＝治療組的中值TTE，C＝對(duì)照組的中值TTE治療可導(dǎo)致動(dòng)物的腫瘤部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR響應(yīng)中，在研究期間連續(xù)三次測(cè)定腫瘤體積為第1天體積的50％或更小，且這三次測(cè)定中的一次或多次等于或大于13.5mm3。在CR響應(yīng)中，在研究期間連續(xù)三次測(cè)定腫瘤體積小于13.5mm3。在研究終止時(shí)具有CR響應(yīng)的動(dòng)物被另外分類為長期無腫瘤存活者(LTTFS)。
關(guān)于毒性，在第1-5天每天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行稱重，然后每周稱重兩次，直至研究完成。頻繁對(duì)小鼠進(jìn)行檢查以確定任何與藥物相關(guān)的不良副作用的明顯跡象。在小鼠中癌癥藥物的最大耐受劑量(MTD)的可接受的毒性通過NCI被定義為在試驗(yàn)期間組平均體重(BW)損失小于20％，且在10只受治療的動(dòng)物中有不超過一例發(fā)生毒性死亡。采用時(shí)序檢驗(yàn)(log rank test)分析藥物治療組和介質(zhì)治療對(duì)照組的TTE值之間差異的顯著性。用時(shí)序檢驗(yàn)對(duì)除了NTR死亡的動(dòng)物以外的所有動(dòng)物的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。在P＝0.05的情況下進(jìn)行雙側(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組中值腫瘤生長曲線顯示中值腫瘤體積(MTV)是時(shí)間的函數(shù)。當(dāng)動(dòng)物由于腫瘤大小或TR死亡退出研究時(shí)，對(duì)該動(dòng)物記錄的最終腫瘤體積被包括在用于計(jì)算隨后的時(shí)間點(diǎn)的中值體積的數(shù)據(jù)中。如果在治療組中發(fā)生了一例以上的死亡，則該組的腫瘤生長曲線在第二例死亡時(shí)被截止。
第2組和第3組分別接受120和60mg/kg的化合物9091。第2組和第3組均出現(xiàn)212％ TGD和高度顯著的抗腫瘤活性(P＜0.001)。對(duì)于每組的六只小鼠，MTV分別為56和148mm3。在2組中，9091產(chǎn)生3個(gè)PR響應(yīng)和3個(gè)LTTFS。在3組中，9091產(chǎn)生5個(gè)PR響應(yīng)和1個(gè)LTTFS?；衔?091在120和60mg/kg兩個(gè)劑量下均產(chǎn)生100％的存活率和6個(gè)消退響應(yīng)這些治療分別產(chǎn)生3個(gè)和1個(gè)LTTFS，并分別導(dǎo)致10.7％和5.5％的組平均BW損失。
以下的表1A和1B含有所述數(shù)據(jù)Panc-1研究的治療響應(yīng)總結(jié)表1A
TTE-達(dá)到終點(diǎn)的時(shí)間(天)，1200mgT-C-治療組與對(duì)照組TTE(天)之間的差異，％TGD＝[(T-C)/C]n-小鼠數(shù)5％ EC-5％乙醇+5％ Cremophor
表1B
CR-在研究期間連續(xù)三次測(cè)定沒有明顯的腫瘤PR-在研究期間連續(xù)三次測(cè)定腫瘤消退至初始大小的＜＝50％LTTES-長期無腫瘤存活者，在研究結(jié)束時(shí)被分類為CR的動(dòng)物時(shí)序檢驗(yàn)相當(dāng)于Mantel-Haenszel檢驗(yàn)；與第1組相比，ns＝不顯著，*-p＜0.05，**-p＜0.01，***-p＜0.001TR-治療相關(guān)性死亡NTR-非治療相關(guān)性死亡實(shí)施例49091的靜脈內(nèi)療效評(píng)價(jià)用人胰腺腫瘤異種移植物Panc-1評(píng)價(jià)9091的抗腫瘤活性。將人Panc-1胰腺癌維持在無胸腺裸鼠中。將腫瘤碎片(1mm3)皮下植入到每個(gè)供試小鼠的右肋。每周兩次對(duì)腫瘤進(jìn)行監(jiān)測(cè)，然后，當(dāng)其大小達(dá)到200-400mm3、平均250-300mm3時(shí)每天一次進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在研究的第1天，將動(dòng)物分為腫瘤大小為171.5-486.0mm3且組平均腫瘤大小為269.7-275.0mm3的6只小鼠的組。將小鼠分組，每組含有6只小鼠，按照表2A和2B中的方案進(jìn)行治療。所有治療均靜脈內(nèi)施用。對(duì)照組1的小鼠接受乙醇5％和Liposyn II 95％介質(zhì)，在1天施用一次(qd×1)。第2組每隔一天×5接受20mg/kg的9091。第3組以q4d×4接受30mg/kg的9091。第4組和第5組分別以qd×1接受120和60mg/kg的9091。對(duì)于qd×1的給藥方案，給藥體積為0.5ml/20g體重，對(duì)于qod×5或q4d×4的給藥時(shí)間表，給藥體積為0.3ml/20g體重。給藥體積以每只動(dòng)物的體重依比例確定。在第1天以單劑量對(duì)第1組給予介質(zhì)(qd×1)。在6只用介質(zhì)治療的小鼠中有5只生長到1200-mm3的終點(diǎn)體積，中值TTE為15.8天。沒有消退響應(yīng)。存在1只56-天的存活者，這表明每組均存在有一只腫瘤移植物植入有些不令人滿意的潛在背景水平。
第2組以qod×5接受20mg/kg的9091。第3組以q4d×4接受30mg/kg的9091。第4組和第5組分別以qd×1接受120和60mg/kg的9091。在第2組中，有5只TR死亡，其不能進(jìn)行治療療效的評(píng)價(jià)。第4組中有2只小鼠死與NTR原因。第3-5組各出現(xiàn)254％的TGD。這一結(jié)果在第3組和第5組具有高度顯著性(P＜0.01)，在第4組具有顯著性(P＜0.05)。在第3-5組中沒有腫瘤達(dá)到終點(diǎn)體積；6只小鼠的MTv分別為40、58和126mm3。在第3組中，記錄到5個(gè)PR響應(yīng)和1個(gè)LTTFS。在第4組和第5組的每個(gè)組中，記錄到6個(gè)PR響應(yīng)。在q4d×4 30mg/kg的方案中9091最有效。該治療產(chǎn)生了5個(gè)PR響應(yīng)和1個(gè)LTTFS，同時(shí)導(dǎo)致～13％的最大組平均BW損失。120和60mg/kg的單劑量各產(chǎn)生了6個(gè)PR響應(yīng)，同時(shí)分別導(dǎo)致～8％和～5％的組平均BW損失。這三種9091治療各產(chǎn)生6個(gè)研究結(jié)束存活者，MTV分別為40、58和126mm3。
表2Panc-1研究的治療響應(yīng)總結(jié)表2A
TTE-達(dá)到終點(diǎn)的時(shí)間(天)，1200mg
T-C-治療組與對(duì)照組TTE(天)之間的差異，％TGD＝[(T-C)/C]n-小鼠數(shù)表2B
CR-在研究期間連續(xù)三次測(cè)定沒有明顯的腫瘤PR-在研究期間連續(xù)三次測(cè)定腫瘤消退至初始大小的＜＝50％LTTES-長期無腫瘤存活者，在研究結(jié)束時(shí)被分類為CR的動(dòng)物時(shí)序檢驗(yàn)相當(dāng)于Mantel-Haenszel檢驗(yàn)；與第1組相比，ns＝不顯著，*-p＜0.05，**-p＜0.01，***-p＜0.001TR-治療相關(guān)性死亡NTR-非治療相關(guān)性死亡實(shí)施例5用HT29異種移植物進(jìn)行的9091的療效研究按照與實(shí)施例3和4中所述的關(guān)于Panc-1異種移植物類似的口服和靜脈內(nèi)施用方案，還用HT29(獲自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA的人結(jié)腸癌)異種移植物對(duì)化合物9091進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果總結(jié)在表3和表4中。
表3A使用化合物9091進(jìn)行的HT29研究的方案設(shè)計(jì)
表3B使用化合物9091進(jìn)行的HT29研究的治療響應(yīng)總結(jié)
n-小鼠數(shù)5％EC-5％乙醇和5％聚氧乙烯蓖麻油表4A使用化合物9091(IV)進(jìn)行的HT29研究的方案設(shè)計(jì)
表4B使用化合物9091進(jìn)行的HT29研究的治療響應(yīng)總結(jié)
化合物9091在小鼠異種移植物中的評(píng)價(jià)的圖示結(jié)果在圖1-7中給出。
實(shí)施例6大鼠的體內(nèi)毒性評(píng)價(jià)用250-300g的Sprague-Dawley大鼠進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)，每個(gè)劑量組使用3只大鼠。一個(gè)研究由供試化合物的3個(gè)劑量組(即靜脈內(nèi)施用3mg/kg、9mg/kg和12mg/kg；15mg/kg、30mg/kg和40mg/kg)和1個(gè)對(duì)照組構(gòu)成。在第4天和第10天觀察動(dòng)物，并收集臨床化學(xué)數(shù)據(jù)。在第11天將大鼠實(shí)施安樂死，安樂死后切下神經(jīng)并固定以進(jìn)行進(jìn)一步檢查。
如下所述對(duì)每只大鼠進(jìn)行評(píng)分，給予整合所有參數(shù)的最終毒性評(píng)分。對(duì)死亡的大鼠給定評(píng)分為0。以下表5給出了關(guān)于各毒性參數(shù)如何對(duì)所述評(píng)分作出貢獻(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)。大部分參數(shù)對(duì)總的可能評(píng)分130貢獻(xiàn)正值。對(duì)于體重、白細(xì)胞和血小板的減少，考慮恢復(fù)。如果參數(shù)沒有顯示出恢復(fù)，則從總數(shù)中減去-5?？傇u(píng)分除以13使其進(jìn)入0至10的尺度。關(guān)于神經(jīng)毒性評(píng)分，-10表示發(fā)現(xiàn)了軸突變性損傷，0表示沒有損傷。
表5.大鼠毒性評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)
最高評(píng)分(每只大鼠)＝130；組評(píng)分＝3只大鼠的平均值/13Avg＝3只大鼠的平均值； Wt Avg＝(∑(劑量×組評(píng)分))/24cont-對(duì)照AST-天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)；ALT-丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；PTL-血小板 BUN-血尿氮WBC-白細(xì)胞化合物9091的口服給藥大鼠毒性研究的數(shù)據(jù)樣本在表6中給出。
表6.大鼠毒性評(píng)分的樣品輸入；口服給藥研究
從對(duì)大鼠口服和兩個(gè)靜脈內(nèi)給藥方案的完整研究中得到的評(píng)分總結(jié)在以下的表7中，并與以前公開的類似化合物3071進(jìn)行了比較?；衔?071的結(jié)構(gòu)可以在實(shí)施例9中找到。
表7.化合物9091的大鼠研究的毒性評(píng)分(與3071比較)
實(shí)施例7用小鼠異種移植物研究的體內(nèi)療效評(píng)價(jià)為了簡化對(duì)小鼠異種移植物研究的解釋，療效評(píng)分來自以上實(shí)施例4和5所述的小鼠異種移植物研究。
評(píng)分＝10*(TWd1-TWdn)/TWd1，其中TWd1＝第1天的腫瘤重量TWDn＝第10天或更晚的最低腫瘤重量因此，完全消退的最佳評(píng)分為10?；衔?091的結(jié)果總結(jié)在表8a和8b中，并且與同類物3071和3102的值進(jìn)行了比較。
表8A在60和120mg/kg的單劑量口服小鼠異種移植物研究中9091與3071的療效比較
表8B.
在靜脈內(nèi)單劑量小鼠異種移植物研究中9091與3102的療效比較
實(shí)施例9比較療效和毒性數(shù)據(jù)對(duì)于相應(yīng)于下式的療效相當(dāng)?shù)幕衔?，來自?xì)胞增殖研究的另外的療效數(shù)據(jù)以及來自大鼠毒性研究的評(píng)分在表9中給出。
除了化合物9091以外，表9中所列出的所有化合物均出現(xiàn)在PCT公開WO 01/57032中。
表9毒性數(shù)據(jù)的比較總結(jié)
上述研究結(jié)果顯示化合物9091屬于對(duì)抗幾種腫瘤系有效的一類物質(zhì)。當(dāng)與同類物相比較時(shí)，證明化合物9091靜脈內(nèi)施用時(shí)在大鼠中具有最佳的毒性特性。盡管其在口服大鼠研究中具有較好的毒性特性，但是在口服單劑量異種移植物研究中化合物9091比化合物3071更有效，在60mg/kg和120mg/kg靜脈內(nèi)單劑量異種移植物研究中化合物9091比化合物3102(另一個(gè)同類物)有效得多。
因此，化合物9091具有作為供口服和靜脈內(nèi)施用的安全且有效的抗腫瘤物質(zhì)的潛能。
權(quán)利要求
1.具有以下結(jié)構(gòu)的紫杉烷 其中X3為噻吩基，Ac為乙?；?，Bz為苯甲酰基。
2.權(quán)利要求1的紫杉烷，其具有以下結(jié)構(gòu)
3.權(quán)利要求1的紫杉烷，其中C7羥基取代基和C10環(huán)戊基羰基氧基取代基都具有β立體化學(xué)構(gòu)型。
4.包含權(quán)利要求1的紫杉烷和至少一種藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中紫杉烷濃度為約0.01mg/mL至10mg/mL。
6.權(quán)利要求4的組合物，其中所述的組合物為用于口服施用的單劑量單位形式，并且所述的劑量單位形式含有至少20mg紫杉烷/m2患者體表面積。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述的劑量單位形式含有約25mg至約400mg紫杉烷/m2患者體表面積。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述的劑量單位形式含有約50mg至約200mg紫杉烷/m2患者體表面積。
9.權(quán)利要求4的組合物，其中所述的組合物為用于胃腸外施用的單劑量單位形式，并且所述的劑量單位形式含有至少20mg紫杉烷/m2患者體表面積。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述的劑量單位形式含有約40mg至約400mg紫杉烷/m2患者體表面積。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述的劑量單位形式含有約60mg至約350mg紫杉烷/m2患者體表面積。
12.權(quán)利要求4的組合物，其中所述的組合物包含至多約10％的乙醇。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述的組合物是用于口服施用的組合物。
14.權(quán)利要求13的組合物，其中所述的組合物為口服溶液形式。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述的組合物包含至少約90％的蒸餾水。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述的組合物包含小于約10％的表面活性劑。
17.權(quán)利要求16的組合物，其中所述的表面活性劑為聚山梨酯80、聚乙氧基化蓖麻油或其組合。
18.權(quán)利要求12的組合物，其中所述的組合物是用于胃腸外施用的組合物。
19.權(quán)利要求18的組合物，其中所述的組合物為乳劑形式。
20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述的組合物是通過將乙醇溶液與脂肪乳合并而制得的。
21.權(quán)利要求20的組合物，其中所述的脂肪乳含有約10至約20％的脂肪。
22.權(quán)利要求18的組合物，其中所述的組合物為溶液。
23.權(quán)利要求22的組合物，其中所述的組合物包含至少約85％的鹽水。
24.權(quán)利要求23的組合物，其中所述的組合物包含小于約10％的表面活性劑。
25.權(quán)利要求24的組合物，其中所述的表面活性劑為聚山梨酯80、聚乙氧基化蓖麻油或其組合。
26.抑制哺乳動(dòng)物腫瘤生長的方法，所述方法包括施用治療有效量的藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1的紫杉烷和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述的藥物組合物是口服施用的。
28.權(quán)利要求26的方法，其中所述的藥物組合物是胃腸外施用的。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述的哺乳動(dòng)物用地塞米松、苯海拉明或其它可最小化由于施用所述藥物組合物而引起的不良反應(yīng)的物質(zhì)進(jìn)行預(yù)治療，并且所述的藥物組合物包含表面活性劑。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述的表面活性劑為聚山梨酯80、聚乙氧基化蓖麻油或其組合。
31.權(quán)利要求26的方法，其中所述的腫瘤為乳腺癌、肺癌胰腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌或前列腺癌。
32.權(quán)利要求31的方法，其中所述的腫瘤為Panc-1胰腺癌或HT-29結(jié)腸癌。
33.權(quán)利要求26的方法，其中所述的腫瘤對(duì)紫杉酚有抗藥性。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述的腫瘤為人結(jié)腸癌。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述的腫瘤為VM46人結(jié)腸癌。
36.權(quán)利要求34的方法，其中所述的腫瘤為DLD-1人結(jié)腸癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及在C10上具有環(huán)戊基酯取代基、在C9上具有酮基取代基、在C2上具有羥基取代基、在C3′上具有2－噻吩基取代基且在C3′上具有異丙氧基氨基甲酸酯取代基的紫杉烷。
文檔編號(hào)A61K31/38GK1918152SQ200580004898
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2005年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月13日
發(fā)明者R·A·赫爾頓, P·烏 申請(qǐng)人:佛羅里達(dá)州立大學(xué)研究基金有限公司