專利名稱：：包含蛋白質(zhì)聚合物與多功能間隔物的傷口敷料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及傷口護理領(lǐng)域，特別是涉及作為傷口敷料適于局部施用的蛋白質(zhì)聚合物凝膠的形成。本發(fā)明還涉及藥物遞送領(lǐng)域，特別是涉及靜脈內(nèi)或者局部遞送治療劑的方法與組合物。本發(fā)明還描述了用于制備用來附著或包含適于治療疾病，處理出血和組織修復(fù)的治療劑的蛋白質(zhì)載體系統(tǒng)的方法。本發(fā)明涉及利用容易實施的化學過程，形成一系列從可溶性的小蛋白聚合物到凝膠的藥物遞送介質(zhì)。該方法簡單并且適用于商業(yè)用途?？扇苄跃酆衔锟捎糜诎邢蝮w內(nèi)特異性的位點并且遞送一種或多種從小藥物到大的蛋白質(zhì)的治療活性劑?；钚詣﹥?yōu)選通過化學鍵，或通過吸附，或在形成的過程中將活性劑包含在聚合物內(nèi)附著到聚合物。同一聚合物內(nèi)可以遞送多種試劑。本發(fā)明還涉及適合局部施用于例如外部傷口，燒傷及潰瘍等其他應(yīng)用的凝膠的形成。這種應(yīng)用可以作為繃帶的內(nèi)容物，或作為敷料，或作為直接施用于皮膚并膠凝的噴霧或溶液。凝膠在體內(nèi)同樣可以用作使藥物減慢或控釋的介質(zhì)，并且也可通過在相鄰的組織膜之間形成屏障而用于防止或抑制外科手術(shù)后的組織粘連。本發(fā)明還描述了適用于涂層外科工具，例如導(dǎo)管或支架，以及用于診斷(如ELISA，ELISPOT)或處理目的，例如用于包括干細胞在內(nèi)的細胞生長之用的玻璃或塑料平板的化合物的形成。本發(fā)明還描述了在添加或者不添加止血劑和/或凝結(jié)劑條件下形成“天然的”組織密封劑。傷口敷料的選擇很復(fù)雜。為病人選擇適當?shù)姆罅闲枰屑毑⑶揖_的評估傷口，了解愈合過程，以及具有對市場銷售的許多可用的敷料性質(zhì)的專門知識。病人以及經(jīng)濟因素同樣必須在考慮的范圍內(nèi)。沒有仔細考慮所有這些因素，敷料的選擇可能是武斷的并且可能是無效的。眾所周知，溫暖濕潤的傷口環(huán)境有利于愈合并且可以防止組織脫水和細胞死亡。所設(shè)計的最現(xiàn)代的傷口護理產(chǎn)品可提供這些條件。目前有幾種可用的傷口護理敷料。其中最常用的是水凝膠，水膠體，藻酸鹽，聚合物膜和聚合物泡沫。每一種產(chǎn)品具有通性，但是在特定產(chǎn)品類型之中每一種特殊品牌的構(gòu)造和性能可能有非常大的不同。沒有一種產(chǎn)品適用于所有類型的傷口或者愈合的所有階段。決定敷料本身適用于特殊類型傷口的主要特性包括其對身體的適應(yīng)性(需要保持傷口完全閉合)，液體和氣味的吸收特性，處理和粘附特性，以及需要時具有抗菌和止血的活性?？赡苡绊懏a(chǎn)品選擇的其他因素包括敷料引起過敏反應(yīng)的可能性、應(yīng)用及去除的方便性(重要的是使傷口表面的疼痛和創(chuàng)傷最小)以及敷料更換的間隔期。敷料不應(yīng)該脫落那些可能延遲愈合或者易于使傷口感染的顆粒或纖維。敷料同樣不應(yīng)該含有對細胞生長有副作用的可提取物(extractable)。對于濕潤的交叉(interactive)傷口的愈合，為了確保細菌屏障并降低感染幾率，減少的水分損失，以及將疼痛減至最小，完全充填較深的傷口是重要的。為確保腔隙被完全充填，敷料經(jīng)常被迫進入傷口，更進一步損傷了組織。水凝膠傷口敷料特別適用于燒傷，潰瘍和諸如褥瘡的較深傷口，因為除了其他方面，它們可以減輕疼痛，給予一種涼爽的感覺并且控制傷口表面水化。不象許多藻酸鹽敷料，它們不粘附傷口而且不用預(yù)浸泡就可容易地除去。然而，盡管易于使用，經(jīng)常用水凝膠敷料難以完全填充傷口腔隙(例如當包扎腿部潰瘍時)，所以水凝膠敷料經(jīng)常不能對細菌提供良好的屏障并且可能不適用于感染的傷口。很明顯需要一種改進的、表現(xiàn)出更多合乎需要的特性，更加的“通用”，由此適用于更寬范圍的傷口類型以及愈合階段的傷口敷料。特別是，具有水凝膠敷料的優(yōu)點，而且具有更好的抗細菌特性并能夠完全地填充任何形狀和尺寸的傷口腔隙的敷料將比目前三維水凝膠提供更有價值的改進。此外，以控制的方式將活性成分，例如藥物遞送到傷口位點的傷口敷料將具有其他的優(yōu)點。合乎需要的活性成分，例如通過促進凝血，可能有助于阻止或防止感染，減輕疼痛，減少炎癥和/或促進愈合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人血清白蛋白(HSA)顯示出許多使其特別有益于傷口愈合的特性。例如，通過可逆結(jié)合廣泛的藥物分子，HSA可以對藥物遞送提供控釋的機制。HSA結(jié)合金屬離子(例如鋅，銅和銀)，所述離子在傷口的抗感染治療中可能是很重要的，并且可以對傷口部位消毒以及清除自由基。HSA抑制病理性血小板聚集，并且還降低了炎癥化學物質(zhì)(引起搔癢的)的水平。HSA是不致敏性的且在傷口部位能自然地發(fā)揮抗細菌/抗病毒的活性。白蛋白被用于許多其他的醫(yī)學用途，例如增加血容量。WO99/66964涉及用作生物粘附劑，外科密封劑的基于白蛋白的組合物，以及用于藥物遞送的可植入裝置及假體(prosthesis)。這些組合物的粘附特性使他們不宜用作外部傷口敷料并且，盡管這些組合物會在體內(nèi)分解，體內(nèi)應(yīng)用的適應(yīng)性也受到不需要的粘附的限制。外科手術(shù)之后，目的用來重新連接受損害組織的粘附劑也可能使傷口部位粘連到鄰近的組織/器官，并且造成更進一步的損傷。WO99/66964公開了利用輔助分子改變白蛋白分子間的交聯(lián)率和/或交聯(lián)度。據(jù)報道二羧酸能夠加速牛血清白蛋白的凝膠化。然而，我們發(fā)現(xiàn)根據(jù)WO99/66964形成的產(chǎn)品與本發(fā)明的聚合物相比是較干燥且易碎。這種易碎的產(chǎn)品不適合用作傷口敷料?，F(xiàn)在已經(jīng)設(shè)計了形成可以解決或相當程度上減輕上述和/或與現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)的其他缺點的傷口敷料的方法。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了形成傷口敷料的方法，該方法包括通過蛋白質(zhì)與多功能間隔物或其活化衍生物反應(yīng)形成蛋白質(zhì)聚合物。傷口敷料可以在原位形成。根據(jù)本發(fā)明上下文，“原位”是指蛋白質(zhì)與多功能間隔物反應(yīng)形成敷料發(fā)生在傷口部位。組合物的成分可以同時或很快相繼施用于傷口，或所述成分可在使用之前即刻混合然后再將混合物施用于傷口部位。傷口敷料的原位形成特別有利，因為敷料具有傷口精確的形狀，完全填充傷口腔隙而不會使組織的暴露增加。精確的匹配確保傷口被完全密封。通過在膠凝發(fā)生之前或在膠凝過程中將基材添加到組合物中，可以將所述基材原位整合進敷料中。特別是，優(yōu)選用可透水蒸氣的膜覆蓋組合物，防止聚合物凝膠干燥并且，最重要的是保持傷口濕潤?？赏杆魵獾哪?yōu)選在膠凝過程末期添加以便其牢固、均勻地粘附而不會過深地陷入組合物中。本發(fā)明的傷口敷料同樣可以預(yù)先形成(即在施用到傷口部位之前交聯(lián)的)。這樣的敷料可以采用用蛋白質(zhì)聚合物浸漬的繃帶形式，或具有或者不具有基材的凝膠片的形式。特殊形狀和尺寸的凝膠可以針對特殊的傷口類型或身體區(qū)域進行特別的模制?；蛘?，在施用之前可以從較大的凝膠片被即刻切割成需要的合適尺寸的敷料?！暗鞍拙酆衔铩痹诒景l(fā)明上下文是指由通過源于多功能間隔物的連接基團連接在一起的大量完整蛋白質(zhì)單位組成的聚合物?？梢岳斫?，單個蛋白質(zhì)分子在由一連串共價結(jié)合在一起的氨基酸殘基構(gòu)成的意義上是“聚合”的。這種單個蛋白質(zhì)分子在此處使用的術(shù)語的含義內(nèi)不是蛋白質(zhì)聚合物。相反，蛋白質(zhì)聚合物是由單個蛋白質(zhì)分子結(jié)合到一起，形成通過連接基團共價結(jié)合在一起的這種分子的鏈或矩陣所產(chǎn)生的反應(yīng)產(chǎn)物。本發(fā)明中可以利用的蛋白質(zhì)包括球蛋白與纖維蛋白或結(jié)構(gòu)蛋白，及其混合物。球蛋白質(zhì)的實例包括合成的或天然的血清蛋白，其天然或合成的衍生物，鹽，其酶促化、化學、或者以其它方式修飾，裂解，縮短或交聯(lián)，氧化或水解的衍生物或亞單位。血清蛋白的實例為白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白、纖維蛋白原、血紅蛋白、凝血酶及其他凝血因子。纖維蛋白或結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)實例包括合成的或天然的膠原，彈性蛋白，角蛋白，纖維蛋白，以及纖連蛋白，其天然的或合成的衍生物，及其混合物。特別優(yōu)選的蛋白質(zhì)是白蛋白。當根據(jù)本發(fā)明制備的蛋白質(zhì)聚合物計劃用于人體時，所用的蛋白質(zhì)優(yōu)選為人源的，即實際上來源于人，或結(jié)構(gòu)上與人源的蛋白質(zhì)相同(或基本上相同)。因此特別優(yōu)選的蛋白質(zhì)是人血清白蛋白。人血清白蛋白可以源于血清，例如從捐獻的血中獲得。人血清白蛋白作為分級血液產(chǎn)品很容易獲得，并且作為血液增容劑多年來已經(jīng)安全地用于靜脈內(nèi)輸送。然而，為了消除或降低可能的污染物，例如可能存在于血液來源產(chǎn)品的病毒或其他有害因子傳播的風險，以及與從捐獻血分離的物質(zhì)有關(guān)的供應(yīng)的可能限制，蛋白質(zhì)，例如人血清白蛋白可以是來源于微生物(包括細胞系)、經(jīng)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染表達該蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因植物或動物的重組產(chǎn)品。對于獸醫(yī)學應(yīng)用而言，可以根據(jù)需要使用非人動物來源的蛋白質(zhì)。這樣的蛋白質(zhì)實例包括馬血清白蛋白，狗血清清蛋白等?？梢允褂玫鞍踪|(zhì)混合物，即超過一種不同的蛋白質(zhì)。與間隔物反應(yīng)的蛋白質(zhì)分子上的官能團包括氨基。因此，優(yōu)選的蛋白質(zhì)包括具有相對高比例含有游離氨基，特別是NH2基團的氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。這樣的氨基酸殘基的一個實例是賴氨酸，因此，本發(fā)明中特別優(yōu)選使用的蛋白質(zhì)包括含有賴氨酸殘基的蛋白質(zhì)，尤其是具有高比例賴氨酸殘基的蛋白質(zhì)，例如每個蛋白質(zhì)分子超過20個賴氨酸殘基，更優(yōu)選超過30個或40個賴氨酸殘基。本發(fā)明所使用的多功能間隔物包括聚羧酸，聚胺，聚(羧基/氨基)化合物(即具有大量羧基和氨基的化合物)，多元醇，聚酮，聚醛以及聚酯。優(yōu)選聚羧酸或聚胺間隔物，更優(yōu)選二羧酸或二胺。聚羧酸包括檸檬酸和聚丙烯酸。優(yōu)選間隔物是雙功能間隔物，特別是同雙功能間隔物。聚胺包括聚(賴氨酸)和脫乙酰殼多糖。特別優(yōu)選間隔物是二羧酸。二羧酸間隔物最優(yōu)選烷撐二羧酸，特別是如下分子式為的直鏈烷撐二羧酸分子HOOC(CH2)nCOOH其中n為1到大約20。優(yōu)選，n為2到12，更優(yōu)選為3到8。優(yōu)選的直鏈烷撐二羧酸間隔物是直鏈烷撐二羧酸是特別有用的間隔物，因為所生成的蛋白質(zhì)聚合物的特性可以僅僅通過改變烷撐鏈的長度進行改變。通常，在固定的蛋白質(zhì)濃度，且隨著二羧酸鏈長的增長，膠凝時間減少則聚合物變硬，彈性減小而且更加混濁。盡管化學過程簡單，依然可以通過調(diào)整僅僅少數(shù)變量制備廣泛的蛋白質(zhì)聚合物系統(tǒng)。除了提高控制水平，還可以從組合物與反應(yīng)條件較合理地預(yù)測聚合物的特性。為了促進間隔物與蛋白質(zhì)分子的反應(yīng)，通常需要間隔物被活化，即間隔物的官能團被轉(zhuǎn)變?yōu)閷Φ鞍踪|(zhì)中的基團更具反應(yīng)性的基團。本領(lǐng)域技術(shù)人員很熟悉合適的活化化學反應(yīng)并且該反應(yīng)包括形成活性酯基。適于與二羧酸間隔物一起使用的一種特定種類的活化劑是碳二亞胺化合物，并且本發(fā)明使用的特別優(yōu)選的活化劑是乙基[二甲基氨基丙基]-碳二亞胺(EDC)。本發(fā)明的一個實施方案中，將二羧酸(長度優(yōu)選為C6-C10)加入到蛋白質(zhì)溶液中。將EDC加入到混合物中，并使反應(yīng)得以進行。蛋白質(zhì)溶液的濃度，二羧酸與蛋白質(zhì)的比例，EDC的量與時間對所需的結(jié)果來說都是很重要的。EDC活化-COOH基并且使其與蛋白質(zhì)上的游離胺基連接。反應(yīng)控制是指可以控制聚合，從相同的反應(yīng)混合物產(chǎn)生可溶性聚合物，不溶性顆粒或凝膠。超過95％的初始蛋白質(zhì)濃度可以轉(zhuǎn)化為聚合物，并且高達100％可以轉(zhuǎn)化變成凝膠。省去二羧酸間隔物，單獨使用EDC(在此處描述的條件下)，在幾小時到幾天的時間內(nèi)僅僅引起部分聚合，與使用二羧酸時獲得的聚合物相比產(chǎn)量降低。通常，本發(fā)明的方法可以在溶液中進行。優(yōu)選地，將活化試劑，例如EDC加入到蛋白質(zhì)和二羧酸的溶液中。EDC可以在例如蒸餾水的溶液中，或可以固體，例如粉末形式加入到蛋白質(zhì)和二羧酸溶液中。盡管就理論而論，可以用EDC首先活化二羧酸然后將活化的間隔物添加到蛋白質(zhì)溶液中，而實踐發(fā)現(xiàn)這樣并不能產(chǎn)生通過將EDC添加到蛋白質(zhì)和間隔物的混合物獲得的良好結(jié)果。為了便于施用，需要配置作為混合干粉的反應(yīng)物，在即將施用之前向其中加入水，鹽水或緩沖溶液。不添加EDC，蛋白質(zhì)與二羧酸可能不反應(yīng)，因此，為了將試劑存儲為粉末同時沒有過早反應(yīng)的危險，需要使蛋白質(zhì)/二羧酸粉末與EDC粉末分開儲存，例如容納在分開的小袋內(nèi)。一種優(yōu)選的應(yīng)用方法是含有蛋白質(zhì)/二羧酸溶液與EDC粉末的注射器，溶液和粉末通過易破的膜分開。通過對注射器的活塞加壓，使用者迫使膜破裂并且在即將施用之前使試劑混合?？梢酝ㄟ^傾注，涂抹或噴灑溶液將溶液施用到傷口部位。傷口敷料可能需要向傷口部位遞送治療活性成分。諸如抗生素，抗病毒劑，消炎劑，止血劑，止痛藥和噬菌體等藥物可以直接或通過促進傷口部位吸收的載體例如脂質(zhì)體加入到組合物中。也可以整合促進或改進組織修復(fù)的活性物，例如生長因子，抗疤痕藥劑，和促進血管生成的藥劑。通過消除感染以及吸收滲出液，可以減少惡臭的傷口氣味。然而，通過將藥劑(例如炭)整合進敷料而減少/消除傷口氣味，所述敷料吸收引起氣味的揮發(fā)性分子。整合的活性化合物通過從凝膠中濾出并隨著降解而從凝膠釋放被遞送到傷口部位。決定活性物質(zhì)釋放速率的關(guān)鍵因素是蛋白質(zhì)聚合物的柔軟度/硬度?；钚曰衔飶妮^柔軟的聚合物中更容易濾出，因為它們不會通過有效地交聯(lián)蛋白質(zhì)分子而被滯留其中。柔軟的聚合物同樣可以較快的速率降解，因為疏松的結(jié)構(gòu)可以使水分和酶更容易地滲透其中。本發(fā)明的另一方面提供了通過上述方法制備的傷口敷料，即包含由蛋白質(zhì)與多功能間隔物或其活化衍生物反應(yīng)而形成的蛋白質(zhì)聚合物的傷口敷料。還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明特別優(yōu)選的化學過程可產(chǎn)生適用于許多其他治療應(yīng)用的蛋白質(zhì)聚合物。因此，本發(fā)明的另一方面提供了一種形成蛋白質(zhì)聚合物的方法，該方法包括將蛋白質(zhì)與二羧酸或其活化衍生物反應(yīng)，條件是蛋白質(zhì)不是牛血清白蛋白。本發(fā)明的另外一方面是形成蛋白質(zhì)聚合物的方法，該方法包括將蛋白質(zhì)與烷撐二羧酸或其活化衍生物反應(yīng)。蛋白質(zhì)優(yōu)選為白蛋白，特別是人血清白蛋白。通過適當?shù)剡x擇反應(yīng)物和反應(yīng)條件，可以制備具有多種特性的產(chǎn)品。因此，蛋白質(zhì)聚合物可以可溶的形式，不溶性顆粒的形式，或以凝膠的形式進行制備。凝膠形式可以在從非常粘稠到柔軟而無粘附力的范圍內(nèi)改變，且硬度可以逐漸增加直到獲得具有較少形變的非常硬的凝膠。為了獲得這些不同結(jié)果而可以改變的參數(shù)包括蛋白質(zhì)原材料的選擇，間隔物的選擇，不同的反應(yīng)物濃度，反應(yīng)溫度及不同反應(yīng)步驟的持續(xù)時間。通過控制用于形成凝膠的試劑的比率和溫度，凝膠形成的速度有很大的變化范圍，從數(shù)秒到數(shù)分鐘到數(shù)小時。膠凝反應(yīng)最好在溫和的酸性pH值條件下進行(例如pH＝5-6)。然而，通常優(yōu)選提高凝膠最終的pH值至接近生理pH值。有許多控制凝膠最終的pH值的方法。一種方法是改變蛋白質(zhì)與二羧酸的摩爾比；低水平二羧酸使凝膠接近于生理pH值。第二種方法是改變蛋白質(zhì)與EDC的摩爾比；高EDC水平產(chǎn)生較高的pH值的凝膠。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員，可以看出可以找到可以實現(xiàn)在所需pH值下特殊應(yīng)用所需的凝膠堅硬度的平衡條件。膠凝反應(yīng)可以是兩階段反應(yīng)，開始是凝膠化，隨后是第二“固化”階段。對于HSA，二羧酸和EDC的某種組合，例如，如果EDC的水平太低的話，反應(yīng)就不會進行到固化階段。然而，在凝膠化后觀察到pH值的降低并且凝膠重新溶解。認為為了將反應(yīng)無論如何推進到固化階段，EDC必須活化最小比例的羧酸基團。低pH值的聚合物通常穩(wěn)定性較低，因為在間隔物和HSA中有未反應(yīng)的羧酸基團。添加另外的化合物可能是有利的。例如，為了控速釋放(如上面有關(guān)傷口敷料所描述的)添加藥物或其他活性化合物，和/或其他的修飾試劑，這些修飾試劑可改變聚合物的特性，例如釋放水分，影響柔韌性，改善吸光度，皮膚感覺和美感，機械和/或粘附強度，或改變蛋白質(zhì)聚合物的降解分布譜(profile)。乙醇，葡萄糖和甘油是可以加入到本發(fā)明的蛋白質(zhì)凝膠中的化合物的實例?？梢蕴砑颖娝苤囊志鷦┮掖紒砀纳颇z的抗細菌特性，添加葡萄糖來提供能源從而促進細胞生長，甘油有助于防止傷口部位水分損失以及維持凝膠在傷口部位的完整性。對用于慢性傷口的本發(fā)明的傷口敷料中，葡萄糖特別有用，因為慢性傷口通常缺少血液供給，從而缺少能源供應(yīng)，因此細胞生長不好。我們發(fā)現(xiàn)添加乙醇，甘油或葡萄糖通過進一步減少易碎性改善了聚合物的堅硬度。盡管在一個階段可以向HSA和二羧酸添加修飾試劑，但是在實踐中(利用乙醇，葡萄糖，或甘油)，我們發(fā)現(xiàn)在與剩余的未經(jīng)修飾的HSA與羧酸間隔物混合之前，用修飾試劑修飾某一百分比的HSA更有效。因此，將修飾試劑加入到水性HSA，而加入EDC來促進反應(yīng)。將經(jīng)修飾的HSA與乙醇溶液加入到未修飾的HSA和二羧酸溶液中，然后將這個“凝膠溶液”與EDC反應(yīng)形成凝膠。修飾蛋白質(zhì)除了用來改善蛋白質(zhì)聚合物的物理特性，經(jīng)修飾的HSA可能具有治療用途。例如，去-配體的白蛋白具有可以捕獲并消除毒素，細胞因子等的有用的結(jié)合位點。利用低蛋白濃度可以制備可溶形式的聚合物。在中性pH值更容易產(chǎn)生可溶性聚合物。通過添加合適的緩沖液，例如磷酸鹽緩沖鹽水，容易獲得低濃度和中性的pH值?？扇苄跃酆衔镞m于腸胃外遞送并且作為遞送介質(zhì)具有許多應(yīng)用，例如遞送藥物，遞送用于影像技術(shù)的造影劑，或作為血小板替代物或增強劑(遞送止血劑)。由于血小板替代物和/或增強劑在癌癥病人治療中的應(yīng)用，促進了對它們的需求。癌癥治療的一個副作用是血小板大幅度削減，或患血小板減少癥。目前這種病情是通過輸注血液來源的血小板來治療的，但是因為化療方案攻擊性增加并且因為骨髓移植使用的增加，對血小板的需求正在增長。此外，血液來源的血小板存在傳播病毒感染的可能，在儲存期間不穩(wěn)定性，而且引發(fā)免疫反應(yīng)。術(shù)語“血小板替代物”和“血小板增強劑”經(jīng)常錯誤或為了方便而互換。本發(fā)明上下文中“血小板替代物”是指完全的血小板替換，不必要求存在自然產(chǎn)生的血小板。另一方面，“血小板增強劑”可能需要在傷口部位自然形成血小板拴子(因此天然的血小板數(shù)量可能需要超過閾值水平)。然后血小板增強劑聚集在血小板栓子處形成凝塊，從而改善血栓形成時血小板的活性。根據(jù)本發(fā)明可通過將凝結(jié)劑或其他活性肽衍生物固定在聚合物表面，以維持它們的生化活性來制備血小板替代物/增強劑。尤其是，本發(fā)明的蛋白質(zhì)聚合物可與這樣的試劑結(jié)合，所述試劑通過血小板表面表達的特異性受體來促進或調(diào)節(jié)血小板粘附和聚集。一個實例是與纖維蛋白原，纖維蛋白原活性肽及vonWillebrand因子相互作用的GPIIb/IIIa受體。與纖維蛋白原結(jié)合的方法包括使蛋白質(zhì)聚合物硫醇化，用N-[馬來酰亞氨基己酸]酰肼活化纖維蛋白原，然后通過蛋白質(zhì)聚合物上的硫醇基結(jié)合活化的纖維蛋白原。血小板替代物/增強劑可以通過靜脈內(nèi)輸注遞送而且在血管內(nèi)于體內(nèi)傷口部位被活化。作為遞送介質(zhì)，蛋白質(zhì)聚合物適于緩釋或控釋藥物。此外，通過遞送活性劑或由于它們的吸收特性，本發(fā)明的蛋白質(zhì)聚合物可以用于解毒應(yīng)用。蛋白質(zhì)聚合物能自然地增強對難以獨立靶向的身體區(qū)域的藥物遞送。更優(yōu)選地，蛋白質(zhì)聚合物可以與一個或多個與體內(nèi)特定位點有親合力的靶向部分結(jié)合。合適的靶向部分可以是抗體?？贵w本身可以作為治療劑，另外可以連接一個或多個輔助試劑，例如細胞毒素，靶向的抗癌治療的放射性核素，或疫苗或基因。靶向部分可與患病的特定器官或部位有親合力，能增強輔助試劑遞送到那些部位，和/或可以改變那些試劑的生物分布，例如使試劑在特定的器官聚集，例如肝臟，從而使得器官得到靶向。類似地，本發(fā)明的蛋白質(zhì)聚合物能夠與靶向部分及造影劑結(jié)合。造影劑可以是用于磁共振成像(MRI)或核成像的金屬，，或作為放療中的治療劑。隨著二羧酸間隔物相對于活化劑濃度的增加和/或反應(yīng)時間的增加并同時維持低蛋白濃度，可以制備不溶性蛋白質(zhì)顆粒?；蛘?，通過在有機的溶劑，例如丙酮中分散本發(fā)明的可溶性的蛋白質(zhì)聚合物，能夠制備不溶性顆粒。利用本發(fā)明的方法，能夠生產(chǎn)具有不同堅硬度(柔軟到堅硬)，與不同粘附強度的蛋白質(zhì)聚合物凝膠。本發(fā)明中無粘附性的蛋白質(zhì)凝膠通過在鄰近組織膜之間形成屏障可用于阻止或抑制外科手術(shù)后組織粘連。通過調(diào)整試劑和反應(yīng)條件，降解速度的選擇要求滿足例如聚合物可以設(shè)計成當傷口愈合時能夠被降解。凝膠的原位形成確保特定區(qū)域的完全覆蓋達到合乎需要的厚度。凝膠能夠被用作薄膜，此外組合物可以注入到一個較大的腔中，以便填充這個腔隙?；蛘?，本發(fā)明的粘附性的凝膠可用于將組織粘合在一起，例如封閉切口，裂口、穿孔和/組織防止液體或氣體滲入。眾所周知，縫合以及將脆弱的組織釘在一起本身可以引起組織損傷/弱化，以及繼之而來的問題，例如生物留題滲漏或細菌感染。生理粘附已被描述提供了粘合組織的方法。然而，這些組合物中沒有一個被認為是完全滿意的。仍然需要確實安全且有效的生物粘附組合物，并且其特性能夠易于調(diào)整以適合于組織的性質(zhì)與損傷程度。類似地，蛋白質(zhì)凝膠可適于涂層修復(fù)以及外科器械，例如導(dǎo)管或支架。這樣的涂層可具有有助于裝置保持在預(yù)定位置的生物粘附特性。在聚合物中使用天然蛋白質(zhì)并且特別是HSA，將降低機體自然防護對抗異物進入引起的對植入物排斥的風險。本發(fā)明的蛋白質(zhì)聚合物適于涂層用于診斷(例如ELISA，ELISPOT)或處理目的，例如用于包括干細胞在內(nèi)的細胞生長的玻璃或塑料平板。利用高水平的二羧酸間隔物和/或EDC可以制備硬凝膠?？梢栽O(shè)想本發(fā)明的硬凝膠可以用于加強和/或修復(fù)骨或軟骨，作為人工骨植入物或其他修復(fù)裝置。凝膠可以在原位形成或在模具中預(yù)成形?，F(xiàn)在將對本發(fā)明進行更詳細的描述，僅通過舉例，參考下列非限制性的實施例，闡述了如下內(nèi)容○改變組分濃度與組合物、pH值及時間的反應(yīng)條件能夠產(chǎn)生不同形式的聚合物。○在中性pH值、較低蛋白質(zhì)濃度條件下能夠更容易產(chǎn)生可溶性聚合物。○在反應(yīng)中增加間隔物和活化劑的水平將產(chǎn)生不溶性顆粒，當可溶性聚合物與有機溶劑混合時也可以產(chǎn)生不溶性顆粒?！鹪黾拥鞍踪|(zhì)濃度并降低反應(yīng)的pH值產(chǎn)生凝膠。另外，通過改變凝膠組分的比率，蛋白質(zhì)的濃度和pH值或這些因素的組合可以改變凝膠的物理性質(zhì)(柔軟到堅硬以及粘附特性)。這是生產(chǎn)用于包括傷口敷料，凝膠植入物及生物粘附劑的治療用途的凝膠的一個重要因素?？s寫DMSO二甲基亞砜EDC乙基[二甲基氨基丙基]碳二亞胺EMCHN-[馬來酰亞胺己酸]酰肼HSA人血清白蛋白PBS磷酸鹽緩沖鹽水圖1顯示了利用標準條件在瓊脂糖6B柱上通過凝膠過濾分離本發(fā)明的可溶性聚合物，其中在280nm測定吸光度。圖2顯示了經(jīng)過45小時的時間從本發(fā)明的凝膠釋放四環(huán)素。實施例1形成可溶性的蛋白質(zhì)聚合物1.1利用癸二酸形成HSA的可溶性聚合物將癸二酸(146mg)的2.5mlDMSO溶液加入到10ml的20％HSA溶液(BPL，Zenalb)與20ml0.01MPBS緩沖液pH＝7.4中，攪拌直到溶液澄清。將EDC(276mg)的7.5mlPBS緩沖液加入到該溶液中并攪拌16小時(過夜)。離心所生成的溶液以除去少量的不溶性聚合物。利用標準條件將可溶性組分在瓊脂糖凝膠6B柱上進行凝膠過濾。在A280nm監(jiān)控蛋白質(zhì)洗脫液。結(jié)果顯示在圖1中。在～340mls洗脫單體的HSA。1.2利用己二酸制備HSA可溶性聚合物將己二酸26.3mg的1ml50％乙醇溶液加入到5ml20％HSA(BPL，Zenalb)溶液與25ml0.01M的PBS緩沖液，pH＝7.4的攪拌溶液中，攪拌直到溶液變澄清。EDC，69mg的4mlPBS緩沖溶液液被逐滴加入到該溶液中同時進行攪拌。將所生成的溶液另外攪拌2小時。離心所生成的溶液除去少量的不溶性聚合物。利用標準條件在瓊脂糖6B柱上凝膠過濾可溶性組分(如上所述的實施例1.1)。1.3將纖維蛋白原與可溶性HSA蛋白質(zhì)聚合物連接來產(chǎn)生血小板替代物在這個實施例中，通過將凝血因子，纖維蛋白原固定到HSA可溶性聚合物表面以此來維持纖維蛋白原的生化活性從而制備血小板替代物(增強劑)。血小板替代物可以通過靜脈內(nèi)輸注來遞送而且在血管內(nèi)體內(nèi)的傷口部位被活化。1.3.1可溶性蛋白質(zhì)聚合物的制備將癸二酸(30mg)的1.25mlDMSO溶液加入到5ml20％HSA溶液(BPL，Zenalb)的15mlPBS緩沖液(0.01M；pH＝7.4)中并攪拌直到溶液變澄清。將EDC(57mg)的4mlPBS緩沖液溶液加入到HSA/間隔物溶液中并且在室溫下攪拌3小時?？梢杂闷渌煌兼滈L度的二羧酸代替上述反應(yīng)中的癸二酸。1.3.2蛋白質(zhì)聚合物的硫醇化將固體2-亞氨基硫雜環(huán)戊烷(210mg)加入到聚合物溶液中，接著在室溫下暗處溫育1.5小時。然后聚合物在0.01MpH＝7.4PBS溶液中利用標準條件在交聯(lián)葡聚糖G25柱上通過凝膠過濾脫鹽。1.3.3活化纖維蛋白原用于與聚合物偶聯(lián)纖維蛋白原(750mg)的10ml0.05M磷酸鹽緩沖液與2.5ml100mM的高碘酸鈉的0.1M醋酸鈉緩沖液混合，并在室溫下暗處溫育30分鐘。然后將活化的纖維蛋白原在0.01MpH＝7.4PBS溶液中在交聯(lián)葡聚糖G25柱上通過凝膠過濾脫鹽?；罨奶桥c酰肼在這個實施例中為N-[馬來酰亞胺己酸]酰肼(EMCH)(11mg)室溫下暗處反應(yīng)2小時。1.3.4活化的纖維蛋白原與蛋白質(zhì)聚合物的偶聯(lián)將活化的EMCH-纖維蛋白原溶液加入到亞氨基硫醇化的聚合物溶液中并攪拌過夜。離心所生成的溶液除去所有不溶解的物質(zhì)，然后在0.01MpH＝7.4PBS溶液中在瓊脂糖凝膠6B柱上進行凝膠過濾。實施例2不溶性顆粒的形成2.1在水溶液中形成不溶性顆粒不溶性的蛋白質(zhì)聚合物顆?？梢酝ㄟ^與實施例1類似的方法進行制備，但在保持低蛋白質(zhì)濃度的同時增加二羧酸間隔物及EDC濃度和/或增加反應(yīng)時間。HSA(1ml20％；BPL，Zenalb)與戊二酸在3ml蒸餾水中以摩爾比1/40進行混合。將EDC的1ml蒸餾水溶液加入到HSA/EDC摩爾比為1/120的攪拌溶液中。室溫下攪拌溶液3小時然后離心。用蒸餾水沖洗沉淀然后干燥。2.2在有機溶劑中形成不溶性顆粒通過將上述實施例1中產(chǎn)生的可溶性聚合物分散到有機溶劑，如丙酮中也可以產(chǎn)生不溶性顆粒。將1體積的可溶性聚合物溶液(實施例1)與10體積的丙酮室溫下混合15分鐘。將所生成的顆粒通過離心或潷析進行收集。實施例3形成蛋白質(zhì)聚合物凝膠3.1利用癸二酸與高濃度的HSA溶液制備HSA聚合物凝膠將48.5mg癸二酸的1ml二甲基亞砜溶液加入到4ml20％的HSA溶液(BPL，Zenalb)中。攪拌溶液直到變澄清。加入92mgEDC的2ml蒸餾水溶液。反應(yīng)中HSA的終濃度是114mg/ml。HSA/癸二酸/EDC的終摩爾比為1/20/40。所生成的混合物在加入EDC后30秒形成凝膠。值得注意的是在與這個實施例等同的實驗中，除了缺少二羧酸，凝膠在2小時后形成。這種情況下的凝膠的特性不適用于傷口敷料，硬的、易碎性質(zhì)使敷料難以施用和去除。原位形成凝膠的時間對于實際應(yīng)用來說太長。3.2利用癸二酸與低濃度的HSA溶液制備HSA聚合物凝膠除HSA最終濃度是72mg/ml以外，利用實施例3.1中描述的相同的實驗程序。HSA/癸二酸/EDC的終摩爾比是1/20/40。所生成的混合物在5分鐘之內(nèi)形成凝膠。3.3利用己二酸與高濃度的HSA溶液制備HSA聚合物凝膠將35mg己二酸溶于4ml20％HSA溶液中(BPL，Zenalb)。如上所述加入92mgEDC的2ml蒸餾水溶液。HSA/己二酸/EDC的終摩爾比是1/20/40。所生成的混合物在2分鐘之后形成柔軟的凝膠聚合物。3.4制備含有血紅蛋白的凝膠HSA(300mg)與血紅蛋白(100mg)，癸二酸(24.25mg的0.5ml二甲亞砜溶液)，EDC(46mg的1ml蒸餾水溶液)以及2mlPBS緩沖液(如上所述)混合在一起得到80mg/ml的終蛋白質(zhì)濃度。10分鐘后形成凝膠。實施例4間隔物長度對凝膠特性的影響為了確定改變二羧酸間隔物鏈長度的影響，將EDC作為活化劑，利用不同的濃度的HSA與四種不同的二羧酸間隔物來制備蛋白質(zhì)聚合物凝膠。二羧酸的二甲基亞砜溶液(120μ摩爾于250μl中)或(90μ摩爾于250μl中)加入到1ml的20％HSA水溶液中，二羧酸/HSA的摩爾比為40/1與30/1。在室溫下攪拌溶液直到變澄清。然后加入EDC/二羧酸摩爾比為2/1的EDC水溶液。凝膠的膠凝時間與特性在詳述在下表1-3中。膠凝反應(yīng)是雙相反應(yīng)在初始凝膠化后緊接著第二“固化階段”。膠凝時間與初始觀察到的凝膠化有關(guān)，并且凝膠硬度涉及“固化”之后凝膠的最終狀態(tài)。表1HSA/二羧酸/EDC的摩爾比為1/40/80的時，二羧酸鏈長度對膠凝時間的影響表2HSA/二羧酸/EDC的摩爾比為1/30/60時二羧酸鏈長度對膠凝時間的影響表3HSA/二羧酸/EDC摩爾比為1/40/80時HSA濃度與二羧酸鏈長度對凝膠特性的影響在每一HSA濃度，膠凝時間縮短則通常凝膠變得更硬，彈性更小且隨著二羧酸鏈長度的增加更混濁。增加HSA的濃度可縮短膠凝時間且增加凝膠的硬度。實施例5膠凝時間和凝膠特性的控制凝膠的不同施用將需要不同的膠凝時間與凝膠堅硬度。凝膠能夠在數(shù)秒或相當長的時間內(nèi)形成。凝膠可以非常柔軟且“有粘性”非常硬且有彈性。有幾種方法來控制這些參數(shù)，且對于任何施用任何一種或所有下列方法都可以使用。下列所述所有的凝膠是澄清的，除非另有說明。5.1通過改變HAS與二羧酸間隔物的摩爾比控制膠凝時間與凝膠特性室溫下通過將戊二酸(GA)溶解在HSA水溶液中(20％USP)，然后加入EDC的蒸餾水溶液來活化膠凝反應(yīng)從而產(chǎn)生凝膠。凝膠混合物被輕輕地倒轉(zhuǎn)幾次以確保充分混合。HAS與戊二酸的摩爾比在兩種EDC濃度下從1/0變化為1/40。實驗結(jié)果顯示在下表4與5中。表4改變HSA/GA摩爾比的影響(HAS與EDC的摩爾比為1∶35)表5改變HSA/GA摩爾比的影響(HSA與EDC摩爾比為1∶70)最初增加戊二酸水平縮短膠凝時間則產(chǎn)生更硬的凝膠。然而更高水平的戊二酸時凝膠不穩(wěn)定，這可以通過增加EDC的水平來抵消。這在實施例6中討論。5.2通過改變HSA濃度控制膠凝時間與凝膠特性利用實施例5.1中描述的方法制備凝膠。HSA與戊二酸摩爾比為1/5并且HSA與EDC的摩爾比為1/70。HSA的濃度從182mg/ml變化到120mg/ml。結(jié)果在下面表6中顯示。表6HSA濃度對膠凝時間與凝膠硬度的影響降低HSA的濃度導(dǎo)致更長的膠凝時間和與更柔軟的凝膠。5.3通過改變HSA與EDC的摩爾比控制膠凝時間與凝膠特性利用實施例5.1中描述的方法制備凝膠。HSA與戊二酸的摩爾比為1/10并且HSA的終濃度是166mg/ml。HSA與EDC的摩爾比從1/35變化到1/80。結(jié)果在下面表7中顯示。表7改變HSA/EDC摩爾比的影響表7，以及與上述表4和表5的比較顯示更高水平的EDC導(dǎo)致膠凝時間的縮短和更硬的凝膠。5.4通過添加乙醇，葡萄糖和甘油控制膠凝時間和凝膠特性更重要的方法是在有低濃度EDC的存在情況下，通過與諸如乙醇，葡萄糖或甘油(它們都具有活性的-OH基團)的試劑反應(yīng)初始修飾HSA來制備HSA“凝膠溶液”。通過與乙醇反應(yīng)制備HSA凝膠溶液描述如下。5.4.1通過與乙醇反應(yīng)制備HSA凝膠溶液將乙醇逐滴加入到攪拌過的20％水性HSA溶液中。攪拌溶液直到變澄清。將固體EDC加入到該溶液中(HSA/EDC的摩爾比為1/15)并且在室溫下攪拌至少2小時。將戊二酸溶于20％水性HSA中并且在室溫下攪拌30分鐘。為了制備最終的“凝膠溶液”，將經(jīng)修飾的HSA/乙醇溶液與未經(jīng)修飾的HSA/戊二酸溶液以1/1的體積比進行混合，且在室溫下攪拌30分鐘。HSA與戊二酸的最終摩爾比為1/5。將該混合物或“凝膠溶液”與EDC反應(yīng)來形成先前實施例所述的凝膠。乙醇/HSA溶液的體積比從1/7變化到1/14，結(jié)果在下面表8中顯示。表8經(jīng)修飾的HSA/乙醇體積比對膠凝時間和凝膠硬度的影響(*凝膠化反應(yīng)中加入的HSA與EDC的摩爾比)HSA與乙醇的最初反應(yīng)導(dǎo)致膠凝時間的普遍縮短。在乙醇低水平時，產(chǎn)生柔軟的凝膠。然而，大于10％體積比(v/v)的乙醇產(chǎn)生更硬的凝膠。這些凝膠沒有發(fā)現(xiàn)易碎性；盡管它們有硬度，它們?nèi)匀皇侨犴g的。利用上述制備的乙醇/HSA凝膠溶液，用10％v/v的乙醇且HSA/戊二酸摩爾比在1/0到1/40范圍內(nèi)，重復(fù)實施例5.1中描述的實驗。結(jié)果顯示在下面的表9和10中。表9利用乙醇修飾的HSA(HSA/EDC的摩爾比為1/35)，HSA/戊二酸摩爾比的影響表10利用乙醇修飾的HSA(HSA/EDC的摩爾比為1/70)，HSA/戊二酸摩爾比的影響5.4.2通過與葡萄糖反應(yīng)制備HSA凝膠溶液如實施例5.4.1所述制備凝膠溶液，但是用葡萄糖替換乙醇，最終的HSA/葡萄糖摩爾比為1/15，且最終的HSA/戊二酸摩爾比為1/5。產(chǎn)生的凝膠比沒有葡萄糖的類似凝膠更柔軟，而且膠凝時間縮短。5.4.3通過添加甘油制備HSA凝膠溶液將甘油加入到20％HSA溶液中(USP)，體積百分比為0到16.7。然后利用實施例5.1描述的方法制備凝膠。甘油的加入縮短了膠凝時間并且顯示當未加覆蓋物，室溫下放置兩星期時可以減緩凝膠的干燥。5.4.4通過直接向凝膠溶液添加乙醇或葡萄糖來制備HSA凝膠溶液如果將乙醇或者葡萄糖直接加入到HSA溶液中，然后按實施例5.1描述的方法形成凝膠，可見分別類似于實施例5.4.1和5.4.2但是更不顯著的影響，其中包括用添加劑預(yù)先修飾HSA的步驟。實施例6增加二羧酸的水平對形成的凝膠穩(wěn)定性的影響在凝膠溶液中增加戊二酸的水平已經(jīng)顯示出可形成最初為中等到硬的，隨時間回復(fù)到柔軟的凝膠，或者再溶解形成粘稠溶液的柔軟凝膠。對該溶解過程的控制可以成為在不同的施用中控制藥物遞送的有用方法。按實施例5.1.描述的方法制備凝膠。在HSA與EDC為2個摩爾比時HSA與戊二酸的摩爾比從1/5變化到1/35。結(jié)果顯示在下面表11中。隨著戊二酸比例的增加，膠凝時間縮短直到?jīng)]有凝膠形成的點。中間狀態(tài)產(chǎn)生的凝膠，靜置時再溶解形成粘稠溶液。這顯示為在反應(yīng)過程中pH值改變的結(jié)果。戊二酸低水平時，凝膠溶液的pH值在加入EDC后上升到6-7，直到凝膠形成。戊二酸高水平時，pH值最初上升然后又下降到酸性的pH值5-6，使得柔軟凝膠再溶解或阻止凝膠形成。表11戊二酸水平對形成的凝膠的穩(wěn)定性的影響實施例7控制凝膠pH值凝膠反應(yīng)最好在酸性pH值進行。有可能提高最終凝膠的pH值以接近生理pH值。有兩種方法控制凝膠的pH值。一種方法是改變HSA與二羧酸的摩爾比；低水平的二羧酸提供接近生理pH值的凝膠。第二種方法是改變HSA與EDC的摩爾比，高水平的EDC導(dǎo)致形成較高pH值的凝膠。對于那些本領(lǐng)域技術(shù)人員，可以看出找到一種平衡狀態(tài)，獲得在合乎需要的pH值下特殊施用所需的凝膠堅硬度是可能的。7.1利用不同濃度的二羧酸控制凝膠的pH值通過在20％HSA溶液(USP)中溶解戊二酸，并且加入EDC的蒸餾水溶液以提供最終HSA濃度為166mg/ml來制備凝膠。采用的HSA與EDC的摩爾比為1∶35和1∶70。結(jié)果在上述的表4與5中顯示。在這些EDC水平，利用1∶20或者更低的has與戊二酸的摩爾比可以形成凝膠。如果完全象實施例6中論述的那樣形成，更高水平的二羧酸凝膠是不穩(wěn)定的。獲得的凝膠pH值的范圍是從5.3到7.6。7.2改變EDC的水平來控制凝膠的pH值HSA與戊二酸摩爾比為1∶10時，通過將戊二酸溶解于20％HSA溶液(USP)制備凝膠。加入EDC的蒸餾水溶液以提供HSA的最終濃度為166mg/ml且HSA與EDC的摩爾比為1∶35到1∶80。結(jié)果在上述的表6中顯示。通過改變EDC水平可以獲得5.6到6.6的凝膠pH值范圍。通過比較上述的表4和5的數(shù)據(jù)同樣支持這個結(jié)果。在凝膠混合物中增加EDC的水平同樣獲得更短的膠凝時間與更硬的凝膠。實施例8生產(chǎn)生物粘附劑生物粘附性凝膠制備成液體或者為干粉。利用向兩片肉(3cm2牛排)之間施加液體或者粉末來測量抗張強度。一片肉附于卡片上且通過夾子和支架固定原地。將砝碼附于較低的第二片肉來測量抗張強度。在加砝碼之前，肉在37℃溫育5分鐘。8.1將HSA(4m120％；BPL，Zenalb)與戊二酸及EDC的混合比例分別為1/50/100。測得的抗張強度為63mg/mm2。8.2通過將200mg凍干的HSA(Sigma)與戊二酸及EDC分別以1/50/100或者1/60/140混合來制備干粉劑?？箯垙姸入S間隔物和EDC比例的增加而增加。1/50/100混合時的抗張強度為～180mg/mm2。1/60/120混合時的抗張強度為～280mg/mm2。實施例9從凝膠中釋放藥物(四環(huán)素)向1ml20％HSA溶液中加入150μl10mg/ml的四環(huán)素乙醇溶液。如同先前實施例子中所描述的利用摩爾比分別為1/30/60與1/40/80的HSA/戊二酸/EDC形成凝膠。在被置入含有5ml蒸餾水的小瓶內(nèi)之前，凝膠被留置過夜。在364nm測量四環(huán)素隨時間的釋放(圖2)。實施例10HSA凝膠溶液的穩(wěn)定性10.1乙醇修飾的HSA凝膠溶液在4℃和室溫時的穩(wěn)定性乙醇修飾的HSA凝膠溶液(如實施例5.4.1所描述的那樣制備)經(jīng)0.22μm濾膜進行無菌過濾。在密封的小瓶中，一半溶液在4℃存儲而另一半在室溫下存儲。在第0，7，21和28天，等分溶液與水性EDC溶液反應(yīng)，并且比較膠凝時間，凝膠特性，pH值以及凝膠穩(wěn)定性。表12在4℃儲存凝膠溶液所有制備的凝膠在37℃于密封的小瓶中保存14天，用以比較凝膠穩(wěn)定性；在這一期間沒有顯示任何敗壞或者細菌生長的跡象。表13室溫下儲存凝膠溶液數(shù)據(jù)證明經(jīng)乙醇修飾的HSA凝膠溶液在4℃和室溫下至少穩(wěn)定4周。10.2葡萄糖修飾的HSA凝膠溶液在4℃和室溫下的穩(wěn)定性利用葡萄糖修飾的HSA凝膠溶液(如同實施例5.4.2所描述)重復(fù)上述實驗。顯示在室溫下存儲的溶液穩(wěn)定2周。在4℃存儲的溶液顯示至少穩(wěn)定4周。10.3在4℃和室溫下HSA/戊二酸溶液的穩(wěn)定性利用實施例10.1中所描述的過程，HSA(200mg/ml)與戊二酸(HSA/戊二酸摩爾比為1/37)溶液顯示在4℃和室溫下至少穩(wěn)定4周。10.4在37℃和室溫下HSA/己二酸溶液的穩(wěn)定性利用實施例10.1中所描述的程序，HSA(200mg/ml)與己二酸(HSA/己二酸摩爾比為1/30)溶液顯示在37℃和室溫下至少穩(wěn)定3周。實施例11形成的凝膠的穩(wěn)定性HSA/戊二酸/EDC摩爾比為1/40/80，1/50/100，1/60/120及1/70/140的凝膠在4℃，室溫及37℃在密封的小瓶中保存6周。盡管4周后較高比值的凝膠的濁度輕微增加，存儲在4℃和室溫下的所有凝膠均穩(wěn)定6周。存儲在37℃的所有凝膠穩(wěn)定2周。到3周時這些凝膠硬度增加并且變得更混濁。沒有凝膠顯示任何細菌生長的跡象。實施例12凝膠的原位施用體外在豬皮上切割孔(2cm2，0.5cm深，)(如上述實施例5.1所描述進行制備)在孔內(nèi)原位形成凝膠，用可透過水蒸氣的膜覆蓋(例如Tagaderm，3M)并且在37℃下溫育。凝膠保持柔軟而且不干燥。很容易將它們從附于膜的“傷口”處去除。權(quán)利要求1.形成傷口敷料的方法，所述方法包括通過蛋白質(zhì)與多功能間隔物或其活化的衍生物反應(yīng)形成蛋白質(zhì)聚合物。2.權(quán)利要求1的方法，其中的蛋白質(zhì)聚合物在原位形成。3.權(quán)利要求1的方法，其中的蛋白質(zhì)聚合物在施用之前形成。4.權(quán)利要求3的方法，其中的基材被整合進敷料內(nèi)。5.權(quán)利要求3或4的方法，其中敷料為繃帶或者凝膠片的形式。6.前述權(quán)利要求任一項的方法，進一步包括向傷口敷料施用可透水蒸氣的膜。7.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中蛋白質(zhì)為球蛋白。8.權(quán)利要求1到6任一項的方法，其中蛋白質(zhì)為纖維蛋白。9.權(quán)利要求7的方法，其中球蛋白是血清蛋白。10.權(quán)利要求9的方法，其中蛋白質(zhì)為白蛋白。11.權(quán)利要求10的方法，其中白蛋白為人血清白蛋白。12.權(quán)利要求1的方法，其中蛋白質(zhì)來源于血液。13.權(quán)利要求1的方法，其中蛋白質(zhì)為重組體產(chǎn)品。14.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中間隔物選自聚羧酸，聚胺，聚(羧基/氨基)化合物，多元醇，聚酮，聚醛及聚酯。15.權(quán)利要求14的方法或者傷口敷料，其中間隔物為聚羧酸。16.權(quán)利要求15的方法，其中聚羧酸為二羧酸。17.權(quán)利要求16的方法，其中二羧酸為烷撐二羧酸。18.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中活化間隔物以促進與蛋白質(zhì)分子的反應(yīng)。19.權(quán)利要求18的方法，其中活化劑為碳二亞胺化合物。20.權(quán)利要求19的方法，其中碳二亞胺化合物為乙基[二甲基氨基丙基]碳二亞胺。21.前述權(quán)利要求任一項的方法制備的傷口敷料。22.傷口敷料，包含由蛋白質(zhì)與多功能的間隔物，或者其活化的衍生物反應(yīng)而形成的蛋白質(zhì)聚合物。23.權(quán)利要求22的傷口敷料，其通過蛋白質(zhì)與多功能間隔物或者其活化的衍生物在傷口部位反應(yīng)而原位形成。24.權(quán)利要求22的傷口敷料，其在將敷料施用于傷口部位之前預(yù)形成。25.權(quán)利要求24的傷口敷料，包含浸漬有蛋白質(zhì)聚合物的繃帶。26.權(quán)利要求24的傷口敷料，為凝膠片的形式。27.權(quán)利要求25的傷口敷料，其中凝膠片具有基材。28.權(quán)利要求21到27任一項的傷口敷料，進一步包含一種或多種治療活性劑。29.權(quán)利要求28的傷口敷料，其中治療活性劑選自抗生素，抗病毒藥，消炎劑，止痛藥，止血劑，噬菌體，生長因子，抗疤痕劑，氣味吸收劑，以及促血管生成的藥劑。30.形成蛋白質(zhì)聚合物的方法，包括蛋白質(zhì)與二羧酸或者其活化衍生物反應(yīng)，條件是蛋白質(zhì)不是牛血清白蛋白。31.形成蛋白質(zhì)聚合物的方法，包含蛋白質(zhì)與烷撐二羧酸或其活化衍生物反應(yīng)。32.權(quán)利要求30或權(quán)利要求31的方法，其中蛋白質(zhì)為白蛋白。33.權(quán)利要求32的方法，其中蛋白質(zhì)為人血清白蛋白。34.權(quán)利要求30到33任一項的方法，其中二羧酸具有以下分子式HOOC(CH2)nCOOH其中n為從1到20，優(yōu)選從2到12，更優(yōu)選地從3到8。35.權(quán)利要求30到34任一項的方法，其中二羧酸用碳二亞胺活化劑活化。36.權(quán)利要求35的方法，其中活化劑為乙基[二甲基氨基丙基]碳二亞胺。37.通過蛋白質(zhì)與二羧酸或者其活化衍生物反應(yīng)而形成的蛋白質(zhì)聚合物，條件是蛋白質(zhì)不是牛血清白蛋白。38.通過蛋白質(zhì)與烷撐二羧酸或者其活化衍生物反應(yīng)而形成的蛋白質(zhì)聚合物。39.權(quán)利要求37或38的蛋白質(zhì)聚合物，其為溶液形式。40.權(quán)利要求37或38的蛋白質(zhì)聚合物，其為不溶性顆粒形式。41.權(quán)利要求37或38的蛋白質(zhì)聚合物，其為凝膠形式。42.權(quán)利要求37到41任一項的蛋白質(zhì)聚合物在向身體遞送一種或多種治療活性組分中的應(yīng)用。43.權(quán)利要求41的蛋白質(zhì)聚合物在局部治療傷口，燒傷或潰瘍中的應(yīng)用。44.權(quán)利要求43的應(yīng)用，其中蛋白質(zhì)聚合物作為預(yù)成形的凝膠施用于傷口，燒傷或潰瘍。45.權(quán)利要求43的應(yīng)用，其中蛋白質(zhì)與二羧酸間隔物以溶液形式施用于傷口，燒傷或潰瘍，并且蛋白質(zhì)聚合物在原位形成。46.權(quán)利要求37或38的蛋白質(zhì)聚合物作為用于植入體內(nèi)的裝置的涂層中的應(yīng)用。47.權(quán)利要求39的蛋白質(zhì)聚合物用作血小板替代物或血小板增強劑的應(yīng)用。48.權(quán)利要求39的蛋白質(zhì)聚合物，其中蛋白質(zhì)聚合物與一種或多種凝結(jié)劑或活性肽衍生物偶聯(lián)。49.權(quán)利要求48的蛋白質(zhì)聚合物，其中蛋白質(zhì)聚合物與纖維蛋白原偶聯(lián)。50.權(quán)利要求39的蛋白質(zhì)聚合物，該聚合物被偶聯(lián)至治療活性劑，或其前體，并偶聯(lián)至與對體內(nèi)特定部位具有親合力的靶向部分。51.權(quán)利要求50的偶聯(lián)物在靶向抗癌癥治療中的應(yīng)用。52.權(quán)利要求39的蛋白質(zhì)聚合物，所述聚合物偶聯(lián)至造影劑并偶聯(lián)至對體內(nèi)特定部位具有親合力的靶向部分。53.權(quán)利要求39的偶聯(lián)物在醫(yī)學成像中的應(yīng)用。54.制備根據(jù)權(quán)利要求21或22的傷口敷料的試劑盒，包含第一組合物與第二組合物，第一組合物與第二組合物保存在分開的容器內(nèi)，從而防止第一組合物與第二組合物之間的反應(yīng)。55.權(quán)利要求54的試劑盒，其中第一組合物包含蛋白質(zhì)和多功能間隔物，而第二組合物包含多功能間隔物的活化劑。56.權(quán)利要求55的試劑盒，其中第一組合物為溶液而第二組合物為粉末。57.人或動物體的治療方法，包含將權(quán)利要求37到41任一項的蛋白質(zhì)聚合物施用于身體。58.權(quán)利要求57的方法，其中靜脈內(nèi)施用蛋白質(zhì)聚合物。59.權(quán)利要求57的方法，其中局部施用蛋白質(zhì)聚合物。60.權(quán)利要求57到59任一項的方法，其中以溶液的形式施用蛋白質(zhì)聚合物。61.權(quán)利要求59的方法，其中以粉末的形式施用蛋白質(zhì)聚合物。62.權(quán)利要求59的方法，其中以凝膠形式施用蛋白質(zhì)聚合物。63.權(quán)利要求59的方法，其中向身體施用蛋白質(zhì)與二羧酸交聯(lián)劑，使蛋白質(zhì)聚合物在原位形成。全文摘要本發(fā)明描述了形成傷口敷料的方法。該方法包含通過蛋白質(zhì)與多功能的間隔物，或其活化衍生物反應(yīng)而形成蛋白質(zhì)聚合物。多功能間隔物優(yōu)選為聚羧酸，尤其是二羧酸，而且用這種間隔物制備的蛋白質(zhì)聚合物適合于廣泛的治療應(yīng)用，包括用作傷口敷料，用于向身體遞送治療活化劑，以及作為生物粘附劑和密封劑。文檔編號A61L27/22GK1921897SQ200580005202公開日2007年2月28日申請日期2005年2月17日優(yōu)先權(quán)日2004年2月17日發(fā)明者羅伊·哈里斯,瓦埃勒·納西申請人:前沿蛋白質(zhì)系統(tǒng)有限公司