專利名稱：Vla－4拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明取代的N-[N-(氰基苯基)磺?；?脯氨?；鵠苯基丙氨酸衍生物是VLA-4整聯(lián)蛋白拮抗劑，并可用于治療預(yù)防和抑制通過(guò)VLA-4結(jié)合和細(xì)胞粘連和活化介導(dǎo)的疾病。并且在口服后本發(fā)明化合物對(duì)帶有VLA-4的細(xì)胞顯示出顯著的受體占用，并且適于每天一次、兩次或三次給藥。本發(fā)明還涉及含有這些化合物的組合物以及使用這些化合物的治療方法。
背景技術(shù)：
VLA-4(“極遲抗原-4”；CD49d/CD29，或α4β1)是一種在所有白血球(除了血小板和成熟中性白細(xì)胞外，包括樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞類細(xì)胞)上表達(dá)的整聯(lián)蛋白，并且在所有這些細(xì)胞類型中是細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用的關(guān)鍵介質(zhì)。VLA-4的配體包括血管細(xì)胞粘連分子-1(VCAM-1)和纖維結(jié)合蛋白(FN)的CS-1功能區(qū)，以及基質(zhì)蛋白和骨橋蛋白。已經(jīng)表明，中和抗-α4抗體或阻斷抑制VLA-4與其配體之間相互作用的肽，在包括哮喘、多發(fā)性硬化、炎癥性腸病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的幾種動(dòng)物模型中同時(shí)具有預(yù)防和治療的效力。
α4人單克隆抗體那他珠單抗(Antegren，Elan/Biogen)已經(jīng)在治療多發(fā)性硬化(D.H.Miller等人，New England Journal of Medicine，348，15(2003))和克羅恩氏病(S.Ghosh等人，New England Journal ofMedicine，348，23(2003))中顯示出效果。在治療哮喘、關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和克羅恩氏病的早期臨床試驗(yàn)中還有幾種VLA-4拮抗劑。
在使用那他珠單抗的早期臨床試驗(yàn)中，觀察到淋巴細(xì)胞增生(VLA-4官能阻斷的代用標(biāo)志)和＞80％受體占用。報(bào)道證明小分子VLA-4拮抗劑在大鼠試驗(yàn)的自身免疫腦脊髓炎(EAE)試驗(yàn)(進(jìn)行皮下給藥后的多發(fā)性硬化動(dòng)物模型)中顯示出官能活性(D.R.Leone等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003))。顯示該化合物誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增生并具有緩慢的離解速率(分離速率)，導(dǎo)致在帶有VLA-4的細(xì)胞顯示出顯著和持續(xù)的受體占用。在該文獻(xiàn)中描述的EAE模型的受體占用、淋巴細(xì)胞增生和效果之間存在正相關(guān)。
G.Doherty等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，13，1891(2003)中已經(jīng)報(bào)道了一系列異煙酰-L-氨基苯基丙氨酸衍生物，其具有從Jurkat細(xì)胞的VLA-4上緩慢的離解速率(分離速率)。然而該化合物另外顯示出非常差的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，例如低口服生物利用率、中到高血漿清除率和短半衰期，以致于其不適于口服給藥。本發(fā)明化合物為有效的VLA-4拮抗劑，其在足以允許口服給藥的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)并維持受體占用。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中A為N或N+-O-；X和Y獨(dú)立地選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1選自(1)氫，(2)C1-10烷基，(3)-(C1-10烷基)-芳基，(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基，(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基，(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基，(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基和(8)-(C1-10烷基)N+(C1-3烷基)3；其中烷基任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自Ra的取代基取代，并且芳基任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自Rb的取代基取代；R2為氫或甲基；
R3和R4獨(dú)立地選自(1)氫，(2)-NRdRe，(3)-NRdS(O)mRe，(4)-NRdC(O)Re，(5)-NRdC(O)ORe，和(6)-NRdC(O)NRdRe，條件是R3和R4不同時(shí)為氫；Ra選自(1)-ORd，(2)-NRdS(O)mRe，(3)-NO2，(4)鹵素，(5)-S(O)mRd，(6)-SRd，(7)-S(O)2ORd，(8)-S(O)mNRdRe，(9)-NRdRe，(10)-O(CRfRg)nNRdRe，(11)-C(O)Rd，(12)-CO2Rd，(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe，(14)-OC(O)Rd，(15)-CN，(16)-C(O)NRdRe，(17)-NRdC(O)Re，(18)-OC(O)NRdRe，(19)-NRdC(O)ORe，(20)-NRdC(O)NRdRe，(21)-CRd(N-ORe)，(22)CF3，(23)-OCF3，(24)C3-8環(huán)烷基，和(25)雜環(huán)基，其中環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自Re的基團(tuán)取代；Rb選自(1)選自Ra的基團(tuán)，(2)C1-10烷基，(3)C2-10烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，和(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任選被1-3個(gè)選自獨(dú)立地選自Rc的基團(tuán)的取代基取代；Rc為(1)鹵素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)芳基，(7)-(C1-4烷基)-芳基，(8)羥基，(9)CF3，(10)OC(O)C1-4烷基，(11)OC(O)NRfRg或(12)芳氧基；Rd和Re獨(dú)立地選自氫、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任選被1-4個(gè)獨(dú)立地選自Rc的取代基取代；或Rd和Re與其所連接的原子(們)一起形成含有0-2個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S和N-Rh的其它雜原子的4-7元雜環(huán)，并且所述雜環(huán)任選與C3-8碳環(huán)稠和或任選被1-4個(gè)獨(dú)立地選自C1-10烷基的基團(tuán)取代；Rf和Rg獨(dú)立地選自氫、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或Rf和Rg與其所連接的碳原子一起形成含有0-2個(gè)獨(dú)立地選自氧、硫和氮的雜原子的5-7元環(huán)；Rh選自Rf和-C(O)Rf；Cy選自環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基；并且m是1或2。
在式I的一個(gè)實(shí)施方案中，X和Y中的一個(gè)為鹵素并且另一個(gè)選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。在此實(shí)施方案的一個(gè)子集中，X和Y中的一個(gè)為氯并且另一個(gè)為氯或甲氧基。在另一子集中X和Y分別為氯。
在式I的另一實(shí)施方案中，R1為氫、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基或-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基。在一個(gè)子集中R1為氫，并且在另一子集中R1為C1-4烷基。
在式I的另一實(shí)施方案中，R3為氫并且R4為NRdRe。在此實(shí)施方案的一個(gè)子集中，Rd為氫。在此實(shí)施方案的第二個(gè)子集中，Rd為氫并且Re選自C1-10烷基和環(huán)烷基。在第三個(gè)子集中Rd和Re與其所連接的原子一起形成不含有其它雜原子并且任選被1或2個(gè)獨(dú)立地選自C1-4烷基的基團(tuán)取代的4-7元雜環(huán)。R4的例子包括1-氮雜環(huán)丁烷基、1-吡咯烷基、1-哌啶基、2-甲基-1-哌啶基、3-甲基-1-哌啶基、4-甲基-1-哌啶基、3，5-二甲基-1-哌啶基、3，3-二甲基-1-哌啶基、4，4-二甲基-1-哌啶基、八氫喹啉-1-基、2-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-2-基、叔丁氨基和環(huán)丁氨基。
在式I的另一實(shí)施方案中，R3為NRdRe并且R4為氫。在此實(shí)施方案的一個(gè)子集中，Rd為氫。在此實(shí)施方案的一個(gè)子集中，該實(shí)施方案的第二個(gè)子集中，Rd為氫并且Re選自C1-10烷基和環(huán)烷基。R3的例子包括叔丁氨基和環(huán)丁氨基。
式I的一個(gè)實(shí)施方案提供式Ia化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中A為N或N+O-；R1選自氫、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-OC(O)-C1-4烷基；
R3和R4中的一個(gè)為NRdRe并且另一個(gè)為氫。
在式Ia的一個(gè)實(shí)施方案中，是如下化合物其中Rd為氫并且Re為叔丁基或環(huán)丁基，或者其中Rd、Re與其所連接的氮原子一起形成不含有其它雜原子并且任選被1或2個(gè)獨(dú)立地選自C1-4烷基的基團(tuán)取代的雜環(huán)。
在式Ia的一個(gè)實(shí)施方案中，是如下化合物其中R3為氫，R4為任選被1或2個(gè)獨(dú)立地選自C1-4烷基的基團(tuán)取代的哌啶-1-基，和R1是氫或C1-4烷基。
代表性的式I化合物包括但不限于N-{N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4(R)-環(huán)丁氨基-(L)-脯氨酰基}-4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-(L)-苯基丙氨酸及其乙酯；N-{N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-3(S)-叔丁氨基-(L)-脯氨?；鶀-4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-(L)-苯基丙氨酸及其乙酯、新戊酰氧基甲酯和1-(乙氧羰基氧基)乙酯；N-{N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4(R)-氮雜環(huán)丁烷基-(L)-脯氨?；鶀-4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(2-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(3-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(4-甲基哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(3，5-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(3，3-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯異煙酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(4，4-二甲基哌啶-1-基)-L-脯氨酰基-4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(八氫喹啉-1(2H)-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(八氫異喹啉-2(1H)-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其乙酯；(4R)-4-(2-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-2-基)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸及其甲酯；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明另一方面提供了用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防或治療細(xì)胞粘連介導(dǎo)的疾病、紊亂、病癥或癥狀的方法，其包含向所述哺乳動(dòng)物給藥有效量的式I化合物。這個(gè)方面包括式I化合物在制造用于在哺乳動(dòng)物中治療細(xì)胞粘連介導(dǎo)的疾病、紊亂、病癥或癥狀的藥物中的應(yīng)用。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病或紊亂選自哮喘、過(guò)敏性鼻炎、多發(fā)性硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、器官移植、急性白血病和鐮刀細(xì)胞性貧血。在另一實(shí)施方案中，所述方法用于預(yù)防或治療馬氣喘病。在又一實(shí)施方案中，所述方法用于預(yù)防或治療狗關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明另一方面提供在哺乳動(dòng)物中預(yù)防VLA-4作用的方法，其包含向所述哺乳動(dòng)物給藥治療有效量的式I化合物。這個(gè)方面包括式I化合物在制造用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防VLA-4作用的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明另一方面提供一種藥物組合物，其包含式I化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
“烷基”以及其它具有前綴“烷”的基團(tuán)，例如烷氧基、鏈烷酰基，指的是可為直鏈或支鏈的碳鏈或其組合。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等等。
“烯基”指的是含有至少一個(gè)碳碳雙鍵并且可為直鏈或支鏈的碳鏈或其組合。烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、異丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等等。
“炔基”指的是含有至少一個(gè)碳碳三鍵并且可為直鏈或支鏈的碳鏈或其組合。炔基的例子包括乙炔基、丙炔基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等等。
“環(huán)烷基”指的是各自具有3-10個(gè)碳原子的單或雙環(huán)飽和碳環(huán)。此處術(shù)語(yǔ)還包括稠和到芳基上的單環(huán)，其中連接點(diǎn)在非芳香部分。環(huán)烷基的例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、四氫萘基、十氫化萘基、茚滿基等等。
“芳基”指的是僅僅含有碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳香環(huán)。此處術(shù)語(yǔ)還包括稠和到單環(huán)環(huán)烷基或單環(huán)雜環(huán)基上的芳基，其中連接點(diǎn)在芳香部分。芳基的例子包括苯基、萘基、茚滿基、茚基、四氫萘基、2，3-二氫苯并呋喃基、二氫苯并吡喃基、1，4-苯并二氧六環(huán)基等等。
“雜芳基”指的是含有至少一個(gè)選自N、O和S的雜原子并且每個(gè)環(huán)含有5-6個(gè)原子的單環(huán)或雙環(huán)芳香環(huán)。雜芳基的例子包括吡咯基、異唑基、異噻唑基、吡唑基、吡啶基、唑基、二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、苯并唑基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、furo(2，3-b)吡啶基、喹啉基、吲哚基、異喹啉基等等。
“雜環(huán)基”指的是含有至少一個(gè)選自N、S和O的雜原子并且每個(gè)所述環(huán)具有3-10個(gè)原子的單環(huán)或雙環(huán)飽和環(huán)，其中連接點(diǎn)可為碳原子或氮原子。該術(shù)語(yǔ)還包括稠和到芳基或雜芳基上的單環(huán)雜環(huán)，其中連接點(diǎn)在非芳香部分?！半s環(huán)基”的例子包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、2，3-二氫furo(2，3-b)吡啶基、苯并嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、二氫吲哚基等等。該術(shù)語(yǔ)還包括通過(guò)氮原子連接的部分不飽和的非芳香單環(huán)，例如2-或4-吡啶酮，或N-取代的-(1H，3H)-嘧啶-2，4-二酮(N-取代的脲嘧啶)。
“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。
光學(xué)異構(gòu)體-非對(duì)映體-幾何異構(gòu)體-互變異構(gòu)體式I化合物含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心并因此可作為外消旋體和外消旋混合物、單一對(duì)映體、非對(duì)映體混合物和單一非對(duì)映體存在。
本發(fā)明意圖包括式I化合物的所有這些異構(gòu)形式。
此處所述某些化合物含有烯屬雙鍵，并且如果沒(méi)有另外指出，則包括E和Z幾何異構(gòu)體。
此處所述的某些化合物以不同氫連接點(diǎn)存在，稱為互變異構(gòu)體。這種例子可以為稱為酮-烯醇互變異構(gòu)體的酮及其烯醇形式。單個(gè)互變異構(gòu)體以及其混合物都包括在式I化合物內(nèi)。
通過(guò)例如分級(jí)結(jié)晶的方法，式I化合物可從例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物的合適溶劑中分離成對(duì)映體的非對(duì)映異構(gòu)體對(duì)。由此得到的對(duì)映體對(duì)可通過(guò)常規(guī)方法分離成單個(gè)立體異構(gòu)體，例如使用旋光活性胺作為拆分試劑或通過(guò)手性HPLC塔分離。
或者，通式I或Ia化合物的任何對(duì)映體還可使用已知構(gòu)形的旋光純起始物料或試劑通過(guò)立體專一性合成得到。
鹽術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指的是由藥學(xué)上可接受的無(wú)毒堿或酸(包括無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和無(wú)機(jī)或有機(jī)酸)制備得到的鹽。由無(wú)機(jī)堿衍生得到的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳鹽、亞錳、鉀、鈉、鋅等鹽。特別優(yōu)選銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。由藥學(xué)上可接受的有機(jī)無(wú)毒堿衍生的鹽包括伯、仲和叔胺的鹽，取代胺包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡堿、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡糖胺(glucosamine)、組胺酸、海蔥次苷、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤類、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、三羧甲基氨甲烷等。
當(dāng)本發(fā)明化合物為堿性時(shí)，其鹽可通過(guò)藥學(xué)上可接受的無(wú)毒酸(包括無(wú)機(jī)和有機(jī)酸)制備。這些酸包括醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來(lái)酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、撲酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸等。特別優(yōu)選檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、馬來(lái)酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
應(yīng)當(dāng)理解時(shí)的是，此處使用的式I化合物還意指包括其藥學(xué)上可接受的鹽。
應(yīng)用式I化合物拮抗VLA-4整聯(lián)蛋白作用的能力使其可用于預(yù)防或逆轉(zhuǎn)通過(guò)VLA-4結(jié)合到其多種配體所介導(dǎo)的癥狀、紊亂或疾病。因此這些拮抗劑將抑制細(xì)胞粘連過(guò)程，包括細(xì)胞活化、移植、增生和變異。因此本發(fā)明的另一個(gè)方面提供一種用于治療(包括預(yù)防、緩和、改善或抑制)通過(guò)VLA-4結(jié)合和細(xì)胞粘連和活化所介導(dǎo)的疾病或紊亂或癥狀的方法，其包含對(duì)哺乳動(dòng)物給藥有效量的式I化合物。這些疾病、紊亂、病癥或癥狀例如為(1)多發(fā)性硬化，(2)哮喘，(3)過(guò)敏性鼻炎，(4)過(guò)敏性結(jié)膜炎，(5)炎性肺病，包括慢性阻塞性肺病，(6)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，(7)膿毒性關(guān)節(jié)炎，(8)I型糖尿病，(9)器官移植排斥，(10)再狹窄，(11)自體骨髓移植，(12)病毒感染的炎性后遺癥，(13)心肌炎，(14)炎癥性腸病，包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病，(15)特定種類的基于毒性和免疫的腎炎，(16)接觸性皮膚過(guò)敏，(17)牛皮蘚，(18)腫瘤轉(zhuǎn)移，(19)動(dòng)脈粥樣硬化，(20)鐮頭細(xì)胞性貧血，(21)某些急性白血病，(22)各種黑素瘤、癌和肉瘤(包括多發(fā)性腦髓瘤)，(23)急性呼吸窘迫綜合癥，(24)葡萄膜炎，(25)循環(huán)休克；和(26)肝炎。這些疾病可發(fā)生在人和動(dòng)物中，并且動(dòng)物疾病可為多種不同名稱，例如馬氣喘病為馬中發(fā)病的氣道阻塞疾病，并且其還被不同的稱為COPD或復(fù)發(fā)性氣道阻塞疾病。式I化合物可用于在人和非人類動(dòng)物(例如馬、貓和狗)中治療VLA-4介導(dǎo)的疾病。
本發(fā)明化合物在這些疾病或紊亂中的應(yīng)用可在文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)導(dǎo)的動(dòng)物疾病模型中得到證實(shí)。以下為這些動(dòng)物疾病模型的例子i)實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎，類似于多發(fā)性硬化的神經(jīng)元脫髓鞘作用模型(例如參見(jiàn)T.Yednock等人，Nature，356，63(1993)和E.Keszthelyi等人，Neurology，47，1053(1996))；ii)作為不同時(shí)期哮喘模型的羊和豚鼠中支氣管過(guò)度反響(例如參見(jiàn)W.M.Abraham等人，J.Clin.Invest.93，776(1993)和A.A.r.Milne和P.P. Piper，Eur.J.Pharmacol.，282，243(1995))；iii)作為炎性關(guān)節(jié)炎模型的大鼠中的輔助誘發(fā)關(guān)節(jié)炎(參見(jiàn)C.Barbadillo等人，Arthr.Rheuma.(Suppl.)，3695(1993)和D.Seiffge，J.Rheumatol.，23，12(1996))；iv)NOD小鼠中繼承性自身免疫糖尿病(參見(jiàn)J.L.Baron等人，J.Clin.Invest.，93，1700(1994)，A.Jakubowski等人，J.Immunol.，155，938(1995)和X.D.Yang等人，Diabetes.46，1542(1997))；v)作為器官移植模型的小鼠中心臟同種移植存活率(參見(jiàn)M.Isobe等人，Transplant.Proc.，26，867(1994)和S.Molossi等人，J.Clin Invest.，95，2601(1995))；vi)在cotton-top娟毛猴中的自發(fā)慢性結(jié)腸炎，其類似于人潰瘍性結(jié)腸炎，炎癥性腸病中的一種形式(參見(jiàn)D.K.Podolsky等人，J，Clin.Invest.，92，372(1993))；vii)作為皮膚過(guò)敏性反應(yīng)模型的接觸過(guò)敏性模型(參見(jiàn)T.A.Ferguson and T.S.Kupper，J.Immunol.，150，1172(1993)和P.L. Chisholm等人，Eur.J.Immunol.，23，682(1993))；Viii)急性腎毒性腎炎(參見(jiàn)M.S.Mulligan等人，J，Clin.Invest.，91，577(1993))；ix)腫瘤轉(zhuǎn)移(例如參見(jiàn)M.Edward，Curr.Opin.Oncol.，7，185(1995))；x)試驗(yàn)自身免疫甲狀腺炎(參見(jiàn)R.W.McMurray等人，Autoimmunity，23，9(1996))；xi)大鼠中動(dòng)脈阻塞之后的局部缺血性組織損傷(參見(jiàn)F.Squadrito等人，Eur.J.Pharmacol.，318，153(1996))；xii)通過(guò)VLA-4抗體抑制TH2 T細(xì)胞細(xì)胞因子(包括IL-4和IL-5)的產(chǎn)生，其將減弱過(guò)敏反應(yīng)(J.Clinical Investigation 100.3083(1997))；viii)VLA-4整聯(lián)蛋白抗體使得長(zhǎng)期重組細(xì)胞在靈長(zhǎng)目動(dòng)物和小鼠中流通并增加細(xì)胞因子所誘導(dǎo)的活化(Blood.90 4779-4788(1997))；xiv)到VCAM-1的鐮狀網(wǎng)狀細(xì)胞粘連(Blood 85 268-274(1995)和Blood88 4348-4358(1996))；xv)由趨化因子基質(zhì)細(xì)胞源因子1調(diào)整的VLA-4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的到CS-1/纖維結(jié)合蛋白和VCAM-1的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞粘連(Blood，97，346-3512001)。
劑量范圍式I化合物預(yù)防劑量或治療劑量的大小當(dāng)然隨待治療的病癥的本質(zhì)和嚴(yán)重程度、使用的特定式I化合物以及其給藥途徑而變化。劑量還將根據(jù)具體病人的年齡、體重和反應(yīng)變化。通常，相對(duì)于哺乳動(dòng)物每公斤體重，日劑量范圍為約0.001毫克-約100毫克，優(yōu)選0.01毫克-約50毫克每公斤體重，最優(yōu)選0.1毫克-10毫克/公斤，以單次或分開(kāi)的劑量給藥。另一方面，有時(shí)還需要使用此范圍之外的劑量。
對(duì)于組合物使用靜脈內(nèi)給藥的應(yīng)用，合適的劑量范圍為對(duì)于每公斤體重每天約0.01毫克-約25毫克(優(yōu)選0.1毫克-約10毫克)式I化合物。
對(duì)于使用口服組合物的情形，合適的劑量范圍為每公斤體重每天約0.01毫克-約100毫克式I化合物，優(yōu)選約0.1毫克-約10毫克每公斤體重。
對(duì)于組合物使用舌下給藥的情形，合適的劑量范圍為對(duì)于每公斤體重每天0.01毫克-約25毫克(優(yōu)選0.1毫克-約5毫克)式I化合物。
對(duì)于哮喘的治療，式I化合物可以以約0.1毫克/公斤-約100毫克/公斤，優(yōu)選約1毫克/公斤-10毫克/公斤的劑量通過(guò)口服/吸入/舌下/等途徑每天給藥一次、兩次、三次等。該劑量可以單一日劑量給藥或每天分兩次或三次給藥。
對(duì)于多發(fā)性硬化的治療，式I化合物可以以約0.1毫克/公斤-約100毫克/公斤，優(yōu)選約1毫克/公斤-10毫克/公斤的劑量通過(guò)口服/吸入/舌下/等途徑每天給藥一次、兩次、三次等。該劑量可以單一日劑量給藥或每天分兩次或三次給藥。
對(duì)于炎癥性腸病的治療，式I化合物可以以約0.1毫克/公斤-約100毫克/公斤，優(yōu)選約1毫克/公斤-10毫克/公斤的劑量通過(guò)口服/吸入/等途徑每天給藥一次、兩次、三次等。該劑量可以單一日劑量給藥或每天分兩次或三次給藥。
對(duì)于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療，式I化合物可以以約0.1毫克/公斤-約100毫克/公斤，優(yōu)選約1毫克/公斤-10毫克/公斤的劑量通過(guò)口服/吸入/舌下/等途徑每天給藥一次、兩次、三次等。該劑量可以單一日劑量給藥或每天分兩次或三次給藥。
藥物組合物本發(fā)明另一方面提供包含式I化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。藥物組合物中的術(shù)語(yǔ)“組合物”意圖包括含有活性組分(們)、構(gòu)成載體的惰性成分(們)(藥學(xué)上可接受的賦形劑)，以及所有直接或間接由任何兩種或多種組分的組合、絡(luò)合或聚集，或一種或多種組分的分解，或由其一種或多種組分的其它類型的反應(yīng)或互相作用得到的任何產(chǎn)品。因此本發(fā)明藥物組合物包括通過(guò)混合式I化合物、其它活性組分(們)和藥學(xué)上可接受的賦形劑制成的任何組合物。
可以使用任何合適的給藥途徑以向哺乳動(dòng)物特別是人提供有效劑量的本發(fā)明化合物。例如可使用口服、舌下、直腸、局部、腸胃外、眼部給藥、肺部給藥、經(jīng)鼻給藥等方式。劑型包括片劑、錠劑、分散體、懸浮液、溶液、膠囊、乳劑、膏劑、氣霧劑等。
本發(fā)明藥物組合物包含作為活性組分的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，并且還可含有藥學(xué)上可接受的載體以及任選的其它治療成分。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指的是由藥學(xué)上可接受的無(wú)毒堿或酸(包括無(wú)機(jī)堿或酸和有機(jī)堿或酸)制成的鹽。
組合物中包括適于口服、舌下、直腸、局部、腸胃外(包括皮下、肌肉注射和靜脈內(nèi)注射)、眼部給藥(眼科)、肺部(吸入)或經(jīng)鼻給藥的組合物，不過(guò)在任何給定的情況下最合適的給藥途徑將取決于待治療病癥的本質(zhì)和嚴(yán)重程度以及活性組分的特性。藥物組合物可以便利地以單位劑型提供并可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法制備。
對(duì)于吸入法給藥，本發(fā)明化合物方便地以氣溶膠噴劑的形式從加壓包裝或噴霧器中遞送。所述化合物還可以可進(jìn)行配制的粉末形式遞送，并且粉末組合物可借助于吹入法粉末吸入器裝置吸入。吸入法優(yōu)選的遞送系統(tǒng)為計(jì)量劑量吸入(MDI)氣霧劑，其可在合適的氣霧劑推動(dòng)劑(例如碳氧化合物或烴)中以式I化合物的懸浮液或溶液的形式配制，或配制成干粉吸入(DPI)氣霧劑，其可在使用或不使用其它賦形劑的情況下以式I化合物的干燥粉末配制。
式I化合物合適的局部制劑包括透皮裝置、氣霧劑、乳劑、膏劑、洗劑、撲粉等。
實(shí)際應(yīng)用中，式I化合物可以作為活性組分根據(jù)常規(guī)藥物復(fù)方技術(shù)與藥物載體致密混合。根據(jù)例如口服或腸胃外(包括靜脈內(nèi))給藥所需的制劑形式，載體可為各種形式。為了制備適于口服劑型的組合物，可使用任何通常的藥物介質(zhì)，例如水、二元醇、油類、醇類、調(diào)味劑、防腐劑、著色劑等等可用于形成口服液體制劑，例如懸浮劑、酏劑和溶液；或載體例如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等可用于形成例如粉劑、膠囊和片劑的口服固體制劑，固體口服制劑比液體制劑更加優(yōu)選。由于易于給藥，片劑和膠囊代表為最有利的口服劑量單位形式，在這種情況下顯然使用固態(tài)藥物載體。如果需要的話，片劑可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)水成或非水成技術(shù)涂布。
除了上述常用劑型外，式I化合物還可通過(guò)緩釋方式和/或例如美國(guó)專利號(hào)3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；3,630,200和4,008,719中所述的遞送裝置給藥。
本發(fā)明適于口服的藥物組合物還可以離散單位存在，例如膠囊、扁膠囊或片劑，其中各自含有預(yù)定量的活性組分，組合物可以作為粉劑或粒劑、或在含水液體、非水液體、水包油型乳狀液或油包水型液體乳狀液中以溶液或懸浮液的形式存在。這種組合物可通過(guò)所有藥學(xué)方法制備，然而所有這些方法中包括使活性組分與組成一種或多種必要組分的載體組合的步驟。所述組合物通常通過(guò)將活性組分與液態(tài)載體或精細(xì)分散的固體載體或兩者均勻、致密混合而制備，然后如果需要的話，所得產(chǎn)品壓制成所需外觀。例如片劑可通過(guò)任選與一種或多種輔助組分壓縮或模壓制備。壓片可通過(guò)在合適的機(jī)器中壓制自由流動(dòng)形式例如粉末或顆粒的活性組分制備，活性組分任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑混合。模壓片可在合適的機(jī)器中模壓，用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)的粉狀化合物的混合物而制造。理想地，每個(gè)片劑中含有約1-約500毫克活性組分，并且每個(gè)扁膠囊或膠囊劑中含有約1-約500毫克活性組分。
以下為式I化合物典型藥物劑型的例子式I化合物注射懸浮液(I.M.) 毫克/毫升式I化合物 10甲基纖維素5.0吐溫800.5苯甲醇9.0苯扎氯銨 1.0注射用水加至總體積為1毫升片劑 毫克/片式I化合物 25
微晶纖維素415聚烯吡酮 14.0預(yù)膠凝淀粉43.5硬脂酸鎂 2.5500膠囊 毫克/膠囊式I化合物 25乳糖粉末 573.5硬脂酸鎂 1.5600氣溶膠每桶式I化合物 24毫克卵磷脂，NF濃縮液 1.2毫克三氯氟甲烷，NF4.025克二氯二氟甲烷，NF 12.15克聯(lián)合治療式I化合物還可以與可用于治療/預(yù)防/抑制或改善的式I化合物對(duì)其有用的疾病或病癥的其它藥物聯(lián)合使用。這些其它藥物可通過(guò)通常使用的途徑和用量與式I化合物同時(shí)給藥或相繼給藥。當(dāng)式I化合物與一種或多種其它藥物同時(shí)使用時(shí)，優(yōu)選除了包括式I化合物還包括這些其它藥物的藥物組合物。因此本發(fā)明藥物組合物還包括除了包含式I化合物還含有一種或多種其它活性組分的那些。可以與式I化合物聯(lián)合使用、分別給藥或在相同藥物組合物中的其它活性成分的例子包括但不限于(a)例如US 5,510,332、WO 97/03094、WO 97/02289、WO96/40781、WO 96/22966、WO 96/20216、WO 96/01644、WO 96/06108、WO95/15973和WO 96/31206中公開(kāi)的其它VLA-4拮抗劑和那他珠單抗；(b)甾體類，例如倍氯米松、甲基強(qiáng)的松龍、培他米松、脫氫可的松、地塞米松和氫化可的松；(c)免疫抑制劑，例如環(huán)孢子菌素、他克莫司、雷帕霉素以及其它FK-506類型免疫抑制劑；(d)抗組胺藥(H1-組胺拮抗劑)，例如溴苯撲爾敏、氯苯撲兒敏、右氯苯那敏、曲普立啶、克立馬丁、本海拉明、二苯珀瑞玲、特賴皮倫胺、羥嗪、甲地拉嗪、普魯米近、三甲潑拉嗪、阿扎他定、賽庚啶、安他唑林、非尼拉敏、新安替根、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、脫碳乙氧基氯雷他定等等；(e)非甾體抗哮喘藥，例如β2-激動(dòng)劑(特布它林、二羥苯基異丙氨基乙醇、非諾特羅、新異丙腎上腺素、舒喘寧、比托特羅、沙美特羅和吡布特羅)、茶堿、色甘酸鈉、阿托品、異丙托溴銨、白細(xì)胞三烯拮抗劑(扎魯司特、孟魯司特、普侖司特、依拉司特、泊比司特、SKB-106，203)、白細(xì)胞三烯生物合成抑制劑(齊留通、BAY-1005)；(f)非甾體消炎藥(NSAIDs)例如丙酸衍生物(阿明洛芬、苯惡洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、惡洛芬、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫惡洛芬)、乙酸衍生物(茚甲新、阿西美辛、阿氯芬酸、環(huán)氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋羅芬酸、異丁苯乙酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美汀、齊多美辛和佐美酸)、滅酸衍生物(氟滅酸、甲氯滅酸、甲滅酸、尼氟滅酸和托滅酸)、聯(lián)苯羧酸衍生物(雙氟尼酸和氟苯沙酸)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和特諾昔康(tenoxican))、水楊酸鹽(乙酰水楊酸、柳氮磺胺吡啶)和吡唑啉酮類(炎爽痛、bezpiperylon、戊烯保泰松、莫非保松、羥保泰松、苯基保泰松)；(g)環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑，例如塞來(lái)考昔、羅非考昔和帕瑞考昔；(h)IV型磷酸二酯酶抑制劑(PDE-IV)；(i)趨化因子受體拮抗劑，尤其是CCR-1、CCR-2和CCR-3；(j)膽固醇降低劑，例如HMG-CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀)、多價(jià)螯合劑(消膽胺和降脂樹(shù)脂II號(hào))、煙酸、非諾貝酸酸衍生物(吉非羅齊、安妥明、非諾貝特和扎貝特)和普羅布可；(k)抗糖尿病劑，例如胰島素制劑、磺酰脲類、縮二胍(二甲雙胍)、a-萄糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)和格列酮類(曲格列酮、吡咯列酮、恩格列酮、MCC-555、BRL49653等等)；(l)β干擾素制劑(干擾素β-1a、干擾素β-1b)；(m)抗膽堿能藥，例如毒蕈堿拮抗劑(異丙托和tiatropium)；(n)用于多發(fā)性硬化的當(dāng)前治療藥物，包括氫化潑尼松、格拉太咪爾、脫氧腺苷、米托蒽醌、甲氨蝶呤和環(huán)磷酰胺；(o)p38激酶抑制劑；(p)其它化合物，例如5-氨基水楊酸及其前藥，抗代謝物，例如咪唑硫嘌呤和6-巰基嘌呤，以及細(xì)胞毒素癌化療劑。
式I化合物與第二種活性組分的重量比可以變化并且取決于各個(gè)組分的有效劑量。通常將使用各個(gè)組分的有效劑量。因此，例如當(dāng)式I化合物與NSAID組合使用時(shí)，式I化合物與NSAID的重量比通常為約1000∶1-約1∶1000，優(yōu)選約200∶1-約1∶200。式I化合物與其它活性組分的組合也通常在上述范圍之內(nèi)，然而在每種情況下應(yīng)當(dāng)使用各個(gè)活性組分的有效劑量。
以下方案和實(shí)施例中可以使用的縮寫包括4-DMAP4-二甲氨基吡啶；AcCN乙腈；BOC叔丁氧基羰基；BOC-ON2-(叔丁氧基羰基氧基亞氨基)-2-苯基乙腈；BOP苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸鹽；鹽水飽和氯化鈉溶液；DIPEAN，N-二異丙基乙胺；DMF二甲基甲酰胺；DMSO二甲亞砜；Et乙基；EtOAc乙酸乙酯；EtOH；乙醇；g或gm克；h或hr小時(shí)；HATUO-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基(uronium)六氟磷酸鹽；HBTUO-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸鹽；HOAc乙酸；HOAt1-羥基-7-氮雜苯并三唑；HOBt1-羥基-苯并三唑；HPLC高壓液相色譜真空中；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)；Me甲基；
MeOH甲醇；mg毫克；MHz兆赫；min分鐘；mL毫升；mmol毫摩爾；MS或ms質(zhì)譜；MsCl甲磺酰氯；Ph苯基；Ph3P三苯基膦；PyBOP(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基六氟磷酸鹽；rt室溫；TEA三乙胺；TFA三氟乙酸；THF四氫呋喃。
本發(fā)明化合物可通過(guò)以下方案中所述的方法制備。在方案1中，取代的吡啶基-4-羧酸衍生物A用亞硫酰氯處理以制造羧酰氯衍生物，其隨后與4-氨基-(L)-苯基丙氨酸衍生物反應(yīng)以得到酰胺B。用強(qiáng)酸(TFA或鹽酸)除去B中的N-BOC保護(hù)基以得到游離胺C。
方案1
在方案2中，在堿(DIPEA或Na2CO3)的存在下適當(dāng)取代的(L)脯氨酸酯D(R′＝H)用3-氰基苯磺酰氯L磺?；缘玫交酋０稥，其中若含有酯保護(hù)基則用氫氧化物處理以得到游離酸。胺C和酸E在合適的偶聯(lián)劑(例如PyBOP、HBTU/HOAt，或者E可首先轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的酰氯)的存在下一起反應(yīng)以得到酰胺F?；蛘撸彼狨(R′＝BOC)通過(guò)用例如氫氧化鋰的堿處理水解得到相應(yīng)的酸。酸然后如上所述與C偶聯(lián)，除去BOC基后得到M。胺M然后在堿的存在下用L磺?；缘玫紽。F中的酯可用氫氧化物(如果R1為正或異烷基)或TFA或HCl(如果R1為叔丁基)水解以得到相應(yīng)的酸。
方案2
方案2(續(xù)) 生物學(xué)評(píng)價(jià)式I化合物為VLA-4的有效拮抗劑，對(duì)具有VLA-4的細(xì)胞具有顯著和持久的受體占用。測(cè)試化合物從Jurkat細(xì)胞上的VLA-4離解速率可根據(jù)G.Doherty等人在Bioorganic & Medicinal ChemistryLetters，13，1891(2003)中所述的方法進(jìn)行測(cè)定。在此測(cè)試中，本發(fā)明化合物具有超過(guò)3小時(shí)(t1/2＞3小時(shí))的離解半衰期，表明其為VLA-4的強(qiáng)結(jié)合抑制劑。
大鼠和狗口服后的VLA-4受體占用可通過(guò)D.R.Leone等人在J.Pharmacol.Exper.Therap.，305，1150(2003)中所述的方法進(jìn)行測(cè)定。口服后，本發(fā)明化合物顯示出持續(xù)并顯著的受體占用(＞50％)。
本發(fā)明化合物可通過(guò)以下實(shí)施例中詳述的方法制備。實(shí)施例的提供僅僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不能理解為以任何方式對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
參考實(shí)施例14-((3′，5′-二氯異煙?；?氨基)-(L)-苯基丙氨酸乙酯鹽酸鹽
步驟A在5分鐘內(nèi)，在氮?dú)鈿夥障略?℃向500毫升無(wú)水乙醇中加入亞硫酰氯(21毫升，0.29摩爾)，并將透明溶液在0℃攪拌10分鐘并在室溫?cái)嚢?0分鐘。一次加入4-硝基-L-苯基丙氨酸(50.2克，0.24摩爾)并將混合物回流過(guò)夜。所得混合物真空濃縮，得到白色固體狀的4-硝基-L-苯基丙氨酸乙酯鹽酸鹽(60克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.21(d，2H)，7.54(d.2H)，4.39(dd，1H)，4.22(q，2H)，3.24-3.40(m，2H)，1.22(t，3H).
步驟B在氮?dú)鈿夥障孪虿襟EA化合物(60克，0.22摩爾)在二氯甲烷(1.5升)的懸浮液中加入TEA(31毫升)。在室溫下攪拌10分鐘后加入連二碳酸二叔丁基酯(49克，0.22摩爾)和4-DMAP(0.1克)，然后反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜、用1N鹽酸(2×200毫升)、水(2×200毫升)和鹽水(1×250毫升)洗滌、通過(guò)無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮以得到N-BOC-4-硝基-L-苯基丙氨酸乙酯(78克)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14(d，2H)，7.28(d，2H)，4.30-4.65(m，1H)，4.15(q，2H)，3.00-3.30(m.2H)，1.35(s，9H)，1.20(t，3H).
步驟C步驟B化合物(78.3克，0.22摩爾)在無(wú)水乙醇(300毫升)的溶液用氮?dú)獯祾卟⒓尤?0％碳載鈀(1.0克)。在40-50psi氫化1小時(shí)后，反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾并且濾餅用乙醇洗滌，然后用乙酸乙酯洗滌。濃縮濾液，并將殘余物通過(guò)快速柱色譜在用4∶1-1∶1的乙酸乙酯/己烷洗脫的硅膠上純化，以得到N-BOC-4-氨基-L-苯基丙氨酸乙酯(60克)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.90(d，2H)，6.63(d，2H)，4.20-4.50(m，1H)，4.14(q，2H)，3.76-3.00(m，2H)，1.36(s，9H)，1.20(t，3H).
步驟D向吹氮處理的500毫升圓底燒瓶中加入3，5-二氯異煙酸(46.5克，0.24摩爾)、二氯甲烷(150毫升)、DMF(0.5毫升)和亞硫酰氯(20毫升，33.9克，0.28摩爾)。漿液回流5小時(shí)后另外加入亞硫酰氯(5毫升，0.70摩爾)和二氯甲烷(100毫升)，并將反應(yīng)混合物另外回流45分鐘并濃縮，殘余物與甲苯共沸以得到粗?；龋淞⒓词褂?。將粗?；热苡诙燃淄?150毫升)并在0℃在5分鐘內(nèi)加入到二氯甲烷(400毫升)中的步驟C化合物(60克，0.20摩爾)和4-甲基嗎啉(44毫升，0.40摩爾)中。在0℃攪拌1小時(shí)后反應(yīng)用稀碳酸氫鈉水溶液猝滅。分離有機(jī)層并將水層用二氯甲烷(500毫升)萃取。合并有機(jī)層、通過(guò)無(wú)水硫酸鎂干燥并真空濃縮，并將殘余物通過(guò)快速柱色譜在用4∶1-3∶2的乙酸乙酯/己烷洗脫的硅膠上純化，以得到N-BOC-4-((3′，5′-二氯異煙酰基)氨基)-L-苯基丙氨酸乙酯(95克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.60(s，2H)，7.54(d，2H)，7.20(d，2H)，4.20-4.36(m，1H)，4.10(q，2H)，3.02-3.12(m，1H)，2.82-2.92(m，1H)，1.34/1.30(s，9H)，1.20(t，3H).
步驟E在室溫下在2小時(shí)內(nèi)，步驟D化合物(95克，0.197摩爾)在乙酸乙酯(1.2升)中的溶液用氯化氫氣流處理。所得黃色懸浮液用己烷(250毫升)稀釋、冷卻至0℃并過(guò)濾。濾餅用己烷洗滌并真空干燥以黃色固體得到標(biāo)題化合物(80克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.66(d，2H)，7.30(d，2H)，4.28(dd，1H)，4.25(q，2H)，3.20(q，2H)，1.26(t，3H).
參考實(shí)施例2N-BOC-順式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯 步驟A反式-4-羥基-L-脯氨酸(72.8克，0.56摩爾)、2.5M氫氧化鈉(480毫升，1.20摩爾，2.18eq)、THF(100毫升)和連二碳酸二叔丁基酯(128克，0.58摩爾，1.07eq)的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。所得白色懸浮液冷卻到0℃、用濃鹽酸(105毫升，0.26摩爾，2.29eq)酸化并用二氯甲烷(1×1升，3×0.5升)和乙酸乙酯(2×1升)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鎂干燥、過(guò)濾并濃縮，以粘稠油狀物得到N-Boc-反式-4-羥基-L-脯氨酸(146.3克)。合并粗產(chǎn)物(144.5克，理論量0.56摩爾)、甲基碘(100毫升，1.6摩爾，2.90eq)、碳酸鉀(110克，0.8摩爾，1.42eq)和丙酮(2.5升)并將混合物回流4小時(shí)。反應(yīng)冷卻至室溫并攪拌過(guò)夜?；旌衔镞^(guò)濾并將濾餅用丙酮洗滌。濃縮濾液，殘余物溶于含有少量二氯甲烷的乙酸乙酯中并用鹽水洗滌、通過(guò)硫酸鎂干燥、過(guò)濾并濃縮得到白色漿液。漿液用己烷沖洗、冷卻到0℃并過(guò)濾。干燥濾餅以白色固體得到121.7克N-Boc-反式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯。
步驟B將步驟A化合物(144.5克，0.59摩爾)、三苯基膦(200克，0.76摩爾，1.29eq)、對(duì)硝基苯甲酸(150克，0.9摩爾，1.52eq)和THF(2.5升)混合并冷卻至0℃。在10分鐘內(nèi)加入重氮二甲酸二乙酯(120毫升，0.76摩爾，1.29eq)。反應(yīng)放熱至30℃并冷卻至室溫并攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)濃縮、殘余物用醚(1升)稀釋并將所得懸浮液過(guò)濾。濾液再次濃縮、重新溶于二氯甲烷并色譜純化(硅膠，二氯甲烷至5％乙酸乙酯/二氯甲烷的線性梯度)。合并產(chǎn)品餾分并濃縮。濃縮液用醚沖洗然后用己烷沖洗以得到白色漿液，將其過(guò)濾并干燥，以白色固體得到218.7克標(biāo)題化合物。
參考實(shí)施例3(4S)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-羥基脯氨酸甲酯 (4S)-4-羥基脯氨酸甲酯(52.0克，0.286摩爾)溶于500毫升二氯甲烷并冷卻至0℃。加入三乙胺(83.6毫升，0.600摩爾)，然后緩慢加入3-氰基苯磺酰氯(55.0，0.273摩爾)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。加入水，并將水層用二氯甲烷萃取3次。合并的有機(jī)層用1N鹽酸、H2O、1N氫氧化鈉和鹽水洗滌、通過(guò)硫酸鎂干燥并濃縮以得到粘稠殘余物。加入乙酸乙酯(300毫升)以完全溶解殘余物。緩慢加入約100毫升己烷直到溶液變得略微渾濁。然后混合物再次攪拌整夜以使產(chǎn)物沉淀。過(guò)濾克，固體并用30％乙酸乙酯/己烷漂洗2次，以灰白色粉末得到所需產(chǎn)品(66.2克，78％)。
1H-NMR(CDCl3，500MHz)δ8.20-8.18(m，1H，8.15-8.12(m，1H，7.92-7.89(m，1H，7.72(t，1H)，4.51-4.47(m，1H，4.42(br s，1H)，3.74(s，3H，3.53-3.49(m，1H)，3.46-3.43(m，1H)，3.39(br s，1H)，2.29-2.25(m，1H)，2.21-2.02(m，1H).MS(ESI)，計(jì)算值C13H14N2O5S 310.3，實(shí)測(cè)值m/e311.2(MH+).
實(shí)施例1N-{N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4(R)-環(huán)丁氨基-(L)-脯氨?；鶀-4-[(3′，5′-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸 步驟A在-20℃在45分鐘內(nèi)，向N-BOC-順式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯(60克，0.25摩爾)和DIPEA(100毫升，0.57摩爾)在二氯甲烷(800毫升)的溶液中加入三氟甲磺酸酐。在-20℃另外攪拌45分鐘后，一次加入環(huán)丁胺(55克，0.78摩爾)，并將反應(yīng)升溫至室溫并維持過(guò)夜。反應(yīng)用1N氫氧化鈉(250毫升)和飽和碳酸氫鈉水溶液(250毫升)淬滅。分離有機(jī)層、用鹽水洗滌、通過(guò)硫酸鎂干燥、過(guò)濾并濃縮，并將殘余物通過(guò)快速柱色譜通過(guò)用二氯甲烷至乙酸乙酯至5％甲醇/乙酸乙酯洗脫的硅膠純化，得到N-BOC-4(R)-環(huán)丁氨基-L-脯氨酸甲酯(77克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ4.8(br s，1H)，4.24-4.32(m，1H)，3.67/3.68(s，3H)，3.56-3.64(m，1H)，3.1-3.38(m，3H)，2.12-2.21(m，2H)，2.00-2.12(m，2H)，1.54-1.82(m，4H)，1.36/1.43(s，9H).
步驟B向步驟A化合物(77克，0.25摩爾)在CH3CN(350毫升)和水(150毫升)的溶液中加入氫氧化鋰一水合物(21克，0.50摩爾)，并將懸浮液在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物用CH3CN稀釋到總體積為1升、冷卻到0℃并過(guò)濾，并以N-BOC-4(R)-環(huán)丁氨基-(L)-脯氨酸鋰鹽的溶液得到濾液。將部分上述濾液(484毫升，0.22M，0.11摩爾)濃縮，并向殘余物中加入水(1升)、二氯甲烷(1升)、EDC(20.8克，0.11摩爾)、HOBt(14.6克，0.11摩爾)和4-((3′，5′-二氯異煙酰基)氨基)-(L)-苯基丙氨酸乙酯鹽酸鹽(39克，0.090摩爾)在水(1升)中的溶液。在室溫下將該兩相混合物劇烈攪拌4小時(shí)。分離有機(jī)層并將水層用二氯甲烷(0.5升)萃取。合并的有機(jī)層通過(guò)硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮，并將殘余物通過(guò)快速柱色譜在用乙酸乙酯至乙酸乙酯/甲醇/NH4OH(98∶1∶1)洗脫的硅膠上純化得到N-[N-BOC-4(R)-環(huán)丁氨基-(L)-脯氨酰基]-4-[(3′，5′-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯(48克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，7.57(d，2H)，7.20-7.30(m，2H)，4.80(br s，1H)，4.58-4.70(m，1H)，4.08-4.30(m，3H)，3.56-3.64(m，1H)，2.90-3.30(m，5H)，3.00-3.08(m，1H)，1.5-2.2(m，8H)，1.22(br s，9H)，1.2(t，3H).
步驟C向步驟B化合物在乙醇(300毫升)的溶液中加入4M二氧六環(huán)中的鹽酸(250ml)。室溫下攪拌整夜后將黃色透明溶液濃縮，并將殘余物用醚(1升)研制。所得懸浮液在室溫下攪拌2小時(shí)，并通過(guò)過(guò)濾收集沉淀。用醚洗滌濾餅并干燥以得到N-[4(R)-環(huán)丁氨基-(L)-脯氨酰基]-4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯鹽酸鹽(45.6克)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.86(d，1H)，8.62(s，2H)，7.58(d，2H)，7.26(d，2H)，4.80(br s，1H)，4.70(m，1H)，4.64(dd，1H)，4.15(q，2H)，3.80-3.95(m，3H)，3.5(dd，1H)，3.24(dd，1H)，3.00(dd，1H)，2.50-2.70(m，2H)，2.20-2.40(m，4H)，1.8-2.0(m，2H)，1.22(t，3H).
步驟D在0℃，向步驟C化合物(18克，30毫摩爾)、3-氰基苯磺酰氯(6.0克，30毫摩爾)、4-DMAP(50毫克)在THF(80毫升)和二氯甲烷(80毫升)的懸浮液中加入DIPEA(21毫升，0.12摩爾)。反應(yīng)混合物在3小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂潦覝兀⑺没旌衔餄饪s。殘余物溶于乙酸乙酯(400毫升)、用1N氫氧化鈉和鹽水洗滌并濃縮至干燥。殘余物通過(guò)快速柱色譜在用甲醇中的2N氨水/乙酸乙酯(0-3％)洗脫的硅膠上純化得到N-{N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4(R)-環(huán)丁氨基-(L)-脯氨?；鶀-4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯(18克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.19(m，1H)，8.00-8.04(m，2H)7.72(dd，1H)，7.63(d，2H)，7.32(d，2H)，4.70(dd，1H)，4.28(dd，1H)，4.20(q，2H)，3.60(dd，1H)，3.30(m，1H)，3.25(dd，1H)，3.10(m，1H)，3.06(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.07-2.14(m，2H)，1.98(m，1H)，1.75(m，1H)，1.60-1.66(m，4H)，1.27(t，3H).LC-MS計(jì)算值C33H34Cl2N6O6S 712，實(shí)測(cè)值m/e 713(M+H)+(2.8min).
向上述化合物(5.6克)在100毫升乙醇中的樣品中加入甲磺酸(1.1eq)。加入醚直到溶液變得渾濁。在室溫下攪拌6小時(shí)后通過(guò)過(guò)濾收集晶體以得到上述酯的甲磺酸鹽。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.30(s，1H)，8.02(dd，1H)，7.82(d，1H)，7.64-7.71(m，3H)，7.36(d，2H)，4.63(dd，1H)，4.56(dd，1H)，4.18(m，2H)，3.88(m，1H)，3.76-3.83(m，2H)，3.44(dd，1H)，3.24(dd，1H)，3.04(dd，1H)，2.70(s，3H)，2.30-2.38(m，3H)，2.13-2.24(m，3H)1.90-1.96(m，2H)，1.26(t，3H).LC-MS計(jì)算值C33H34Cl2N6O6S 712，實(shí)測(cè)值m/e 713(M+H)+(2.9min).
步驟E向步驟D化合物(游離胺，23克，32毫摩爾)在80毫升AcCN和40毫升水的溶液中加入氫氧化鋰一水合物(2.7克，65毫摩爾)。在室溫下攪拌2小時(shí)后反應(yīng)用甲酸水溶液(98％，2.4毫升，65毫摩爾)淬滅。反應(yīng)用水(20毫升)稀釋并在室溫下攪拌整夜。通過(guò)過(guò)濾收集形成的結(jié)晶以得到標(biāo)題化合物(18g)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.15(s，1H)，8.00(dd，1H)，7.88(dd，1H)，7.69(t，1H)，7.62(d，2H)，7.36(d，2H)，4.44-4.50(m，2H)，3.68-3.73(m，1H)，3.62-3.66(m，1H)，3.50-3.58(m，1H)，3.20-3.29(m，2H)，3.12(dd，1H)，2.20-2.32(m，3H)，1.92-2.00(m，3H)，1.76-1.84(m，2H).LC-MS計(jì)算值C31H30Cl2N6O6S 684，實(shí)測(cè)值m/e 685(M+H)+(2.6min).
向上述化合物(1.2克)在20毫升水和AcCN(3∶1)的樣品中加入甲磺酸(1.1eq)。將混合物凍干，并將固體殘余物在AcCN中結(jié)晶，以甲磺酸鹽得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.54(br d，1H)，8.08(s，1H) 8.00(br d，1H)，7.76(br d，1H)，7.66(d，2H)，7.65(t，1H)，7.38(d，2H)，4.64(br d，1H)，4.56(m，1H)，3.90-3.73(m，3H)，3.44(dd，1H)，3.28(dd，1H)，3.00(dd，1H)，2.70(s，3H)，2.39-2.30(m，3H)，2.24-2.12(m，3H)，1.96-1.89(m，2H).LC-MS計(jì)算值C31H30Cl2N6O6S 684，實(shí)測(cè)值m/e685(M+H)+(2.6min).
實(shí)施例2N-{N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-3(S)-叔丁氨基-(L)-脯氨?；鶀-4-[(3′，5′-二氯異煙酰基)氨基]-(L)-苯基丙氨酸(R1＝H)、乙酯(R1＝CH2CH3)、新戊酰氧基甲酯(R1＝-CH2OC(O)C(CH3)3)和1-(乙氧羰基氧基)乙酯(R1＝-CH(CH3)OC(O)OCH2CH3) 步驟A在0℃向(3S)-羥基-(L)-脯氨酸(Acros，20克，0.15摩爾)和碳酸鈉(26克，0.25摩爾)在500毫升水的溶液中加入粉末狀3-氰基苯磺酰氯(25克，0.12摩爾)。在室溫下攪拌整夜后，反應(yīng)混合物用濃鹽酸(pH＝3)酸化并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)。將有機(jī)萃取物干燥(硫酸鎂)、過(guò)濾并濃縮至干燥。然后將殘余物溶于二氯甲烷(100毫升)和甲醇(100毫升)，然后在0℃加入三甲基甲硅烷基重氮甲烷(醚中2M)直到黃色是持久的。在室溫?cái)嚢?5分鐘后，將混合物濃縮至干燥以得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-(3S)-羥基-(L)-脯氨酸甲酯(31.5克)。
LC-MS計(jì)算值C13H14N2O5S 310，實(shí)測(cè)值m/e 311(M+H)+(2.3min).
步驟B在0℃向步驟A化合物(31.5克，0.10摩爾)在200毫升乙酸乙酯的溶液中加入TEA(20毫升，0.14摩爾)和MsCl(9.5毫升，0.12摩爾)。在0℃攪拌20分鐘后，反應(yīng)用100毫升碳酸氫鈉水溶液淬滅。攪拌15分鐘后，反應(yīng)混合物在乙酸乙酯(300毫升)和碳酸氫鈉水溶液(200毫升)之間分配。分離有機(jī)層、用鹽水洗滌并濃縮至干燥，得到N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-(3S)-甲磺酰氧基-(L)-脯氨酸甲酯(40克)。
LC-MS計(jì)算值C14H16N2O7S2388，實(shí)測(cè)值m/e 389(M+H)+(2.7min).
步驟C向步驟B化合物(39.5克，0.10摩爾)在300毫升AcCN的溶液中加入TEA(35毫升，0.25摩爾)。在75℃加熱4小時(shí)后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。殘余物溶于乙酸乙酯(600毫升)并用1N氫氧化鈉水溶液和鹽水洗滌，并濃縮至干燥得到N-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-2，3-二氫脯氨酸甲酯(28克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.22(s，1H)，8.17(d，1H)，8.05(d，1H)，7.80(t，1H)，6.35(t，1H)，3.98(t，2H)，3.81(s，3H)，2.14(td，2H)，8.63(s，2H).LC-MS計(jì)算值C13H12N2O4S 292，實(shí)測(cè)值m/e 293(M+H)+(2.7min).
步驟D向步驟C化合物(26.4克，90毫摩爾)在225毫升環(huán)己烷和75毫升叔丁醇的懸浮液中加入叔丁胺(95毫升，0.90摩爾)。在50℃加熱48小時(shí)后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。固體殘余物與己烷一起研制并通過(guò)過(guò)濾收集，以外消旋混合物得到N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-3-叔丁氨基脯氨酸甲酯(29克)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.24(br s，1H)，8.16(br d，1H)，8.03(brd，1H)，7.80(dd，1H)，3.99(d，1H)，3.75(s，3H)，3.45-3.55(m，2H)，3.33(m，1H)，2.17(m，1H)，1.62(m，1H)，0.97(s，9H).LC-MS計(jì)算值C17H23N3O4S 365，實(shí)測(cè)值m/e 366(M+H)+(1.9min).
上述外消旋體(46克，0.13摩爾)樣品和(1R)-(10)樟腦磺酸(29克，0.13摩爾)溶于熱AcCN(210毫升)。冷卻至室溫后通過(guò)過(guò)濾收集結(jié)晶，其在AcCN中重結(jié)晶以(1R)-(10)-樟腦磺酸鹽得到12.4克一種純對(duì)應(yīng)體。通過(guò)將(1R)-(10)-樟腦磺酸鹽與乙酸乙酯和2N氫氧化鈉水溶液一起攪拌然后濃縮有機(jī)層，得到游離堿的純(3S)對(duì)應(yīng)體。LC-MS計(jì)算值C17H23N3O4S 365，實(shí)測(cè)值m/e 366(M+H)+(1.9min).
步驟E向步驟D中純(3S)對(duì)應(yīng)體(6.7克，18毫摩爾)在100毫升AcCN/水(2.5∶1)的溶液中加入氫氧化鋰一水合物(2.0克，46摩爾)。在室溫下攪拌2.5小時(shí)后，通過(guò)加入2N鹽酸水溶液(23毫升，46毫摩爾)將反應(yīng)淬滅，并將反應(yīng)混合物凍干以得到粗鋰鹽，其無(wú)須進(jìn)一步純化就可使用。向粗鋰鹽在70毫升無(wú)水DMF的懸浮液中加入4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯鹽酸鹽(8.0克，19毫摩爾)、PyBOP(11克，22毫摩爾)和N-甲基嗎啉(6.0毫升，55毫摩爾)。在室溫下攪拌2.5小時(shí)后，反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(250毫升)稀釋、用水(150毫升×2)和鹽水洗滌、通過(guò)無(wú)水硫酸鎂干燥、過(guò)濾并濃縮至干燥。殘余物通過(guò)快速柱色譜在硅膠上純化以得到標(biāo)題化合物的乙酯(R1＝CH2CH3，7.5克)。通過(guò)在AcCN中重結(jié)晶得到乙酯的晶體。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(s，2H)，8.23(br s，1H)，8.10(br d，1H)，8.03(br d，1H)，7.77(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，4.78(m，1H)，4.22(q，2H)，3.81(d，1H)，3.44(m，2H)，3.30-3，22(m，2H)，3.12(dd，1H)，1.83(m，1H)，1.43(m，1H)，1.31(t，3H)，0.91(s，9H).LC-MS計(jì)算值C33H36Cl2N6O6S 714，實(shí)測(cè)值m/e 715(M+H)+(2.9min).
步驟F向步驟E的乙酯(2.0克，2.8毫摩爾)在12毫升AcCN和6毫升水的溶液中加入NaOH(1N，7毫升，7.0毫摩爾)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20分鐘。反應(yīng)用2N鹽酸淬滅到pH＝5，并用200毫升THF/乙酸乙酯(1∶3/v/v)稀釋?；旌衔镉盟?50毫升)洗滌并濃縮以除去有機(jī)溶劑，并將殘余物凍干以得到標(biāo)題酸化合物(R1＝H，1.9克)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.64(s，2H)，8.20(br s，1H)，7.99(br d，2H)，7.72(t，1H)，7.59(d，2H)，7.38(d，2H)，4.55(m，1H)，4.21(br s，1H)，3.69-3.61(m，2H)，3.39(m，2H)，3.25(dd，1H)，3.08(dd，1H)，2.17(m， 1H)，1.72(m，1H)，1.18(s，9H).LC-MS計(jì)算值C31H32Cl2N6O6S 686，實(shí)測(cè)值m/e 687(M+H)+(2.7min).
新戊酰基甲酯(R1＝-CH2OC(O)C(CH3)3)通過(guò)用1當(dāng)量NaOH處理并隨后凍干，將步驟F的酸樣品轉(zhuǎn)化成鈉鹽。向由此得到的鈉鹽(0.10克，0.14毫摩爾)在0.5毫升DMSO的懸浮液中加入新戊酸氯乙酯(0.050毫升，0.35毫摩爾)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)、用TEA(0.1毫升)、AcCN(0.5毫升)和水(0.5毫升)稀釋，并通過(guò)用水中40-90％AcCN(含有0.1％TEA)洗脫的反相HPLC純化以得到含有一定雜質(zhì)的標(biāo)題化合物的新戊酰氧基甲酯。通過(guò)HPLC在用35％庚烷中異丙醇洗脫的chiralpak AD柱進(jìn)一步純化得到標(biāo)題化合物的新戊酰氧基甲酯。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22(br s，1H)，1，8.03(br d，1H)，8.00(br d，1H)，7.75(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，5.85(d，1H)，5.77(d，1H)，4.78(dd，1H)，3.80(d，1H)，3.50-3.40(m，2H)，3.30-3.22(m，2H)，3.10(dd，1H)，1.92(m，1H)，1.43(m，1H)，1.20(s，9H)，0.89(s，9H).LC-MS計(jì)算值C37H42Cl2N6O8S800，實(shí)測(cè)值m/e 801(M+H)+(3.1min).
1-(乙氧羰基氧基)乙酯(R1＝-CH(CH3)OC(O)OCH2CH3)通過(guò)上述對(duì)于新戊酰基甲酯所述相同的步驟，用碳酸1-氯乙基乙酯代替新戊酸氯甲酯制備了該酯。
LC-MS計(jì)算值C36H40Cl2N6O9S 802，實(shí)測(cè)值m/e 803(M+H)+(3.2min).
實(shí)施例3N-{N-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4(R)-氮雜環(huán)丁烷基-(L)-脯氨?；鶀-4-[(3′，5′-二氯異煙?；?氨基]-(L)-苯基丙氨酸乙酯 根據(jù)對(duì)實(shí)施例1步驟A-D所述的方法，在步驟A中用氮雜環(huán)丁烷代替環(huán)丁胺制備了標(biāo)題化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.62(s，2H)，8.22(br s，1H)，8.03(br d，2H).7.75(t，1H)，7.62(d，2H)，7.32(d，2H)，4.73(dd，1H)，4.24(dd，1H)，4.18(q，2H)，3.42(dd，1H)，3.23(dd，1H)，3.08(d，1H)，3.06(dd，1H)，2.97(m，2H)，2.88(m，2H)，2.82(m，1H)，1.85-1.75(m，3H)，1.74-1.68(1H).LC-MS計(jì)算值C32H32Cl2N6O6S 698，實(shí)測(cè)值m/e 699(M+H)+(3.1min).
實(shí)施例4(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙酰基)氨基]-L-苯基丙氨酸三氟乙酸鹽
步驟A參考實(shí)施例3的化合物(3.0克，9.67毫摩爾)溶于100毫升二氯甲烷。加入N，N-二異丙基乙胺(4.23毫升，24.22毫摩爾)并在氮?dú)鈿夥障聦⒎磻?yīng)混合物冷卻至-78℃。在10分鐘內(nèi)向溶液中滴加三氟甲磺酸酐(2.28毫升，13.55毫摩爾)。將混合物在-78℃攪拌1小時(shí)并然后在30分鐘內(nèi)緩慢溫?zé)嶂?30℃。在5分鐘內(nèi)滴加哌啶(1.91毫升，19.31毫摩爾)，并將溶液緩慢溫?zé)嶂潦覝夭嚢枵?。向溶液中加?0毫升水。水層用二氯甲烷萃取3次。合并的有機(jī)層通過(guò)硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物通過(guò)快速色譜純化，以橙色油狀物得到(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺?；鵠-4-(哌啶-1-基)-脯氨酸甲酯(3.61克，99％)，將其溶于15毫升乙腈和5毫升水。加入氫氧化鋰(1.00克，23.84毫摩爾)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。LCMS表明沒(méi)有留下起始物料，因此反應(yīng)混合物用23.84毫升1N鹽酸(23.84毫摩爾)中和。溶液在丙酮-干冰浴中冷凍并凍干16小時(shí)，以得到粗(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-脯氨酸，其無(wú)須進(jìn)一步純化直接用于下一反應(yīng)。
MS(ESI)計(jì)算值C17H21N3O4S 363.4，實(shí)測(cè)值m/e 364.2(MH+).
步驟B步驟A的化合物(9.56毫摩爾)懸浮在25毫升DMF中。加入(2S)-3-{4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]苯基}-1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-銨(aminium)氯化物(3.99克，9.53毫摩爾)、HATU(3.99克，10.49毫摩爾)和N-甲基嗎啉(2.62毫升，23.83毫摩爾)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將懸浮液在強(qiáng)力攪拌下滴加到100毫升水中。立即濾出沉淀并用水洗滌3次。淺黃色粉末真空干燥并通過(guò)制備性反相HPLC純化，以白色絨毛狀固體得到(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯三氟乙酸鹽(4.42克，55％)。
1H-NMR(MeOD，500MHz)δ8.63(s，2H)，8.49(d，1H)，8.15(s，1H)，8.04-8.01(m，1H)，7.91-7.87(m，1H)，7.71(t，1H)，7.64(d，2H)，7.34(d，2H)，4.63-4.57(m，2H)，4.18(q，2H)，3.96-3.93(m，2H)，3.49-3.44(m，3H)，3.25-3.20(m，1H)，3.06-2.97(m，3H)，2.40-2.37(m，1H)，2.20-2.16(m，1H)，1.98-1.93(m，2H)，1.80-1.78(m，1H)，1.70-1.66(m，2H)，1.54-1.50(m，1H)，1.25(t，3H).MS(ESI)計(jì)算值C34H36Cl2N6O6S 727.7，實(shí)測(cè)值m/e 727.2(M+).
步驟C步驟B的化合物(0.100克，0.14毫摩爾)溶于1.5毫升乙腈和0.5毫升水。加入氫氧化鋰(0.014克，0.33毫摩爾)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。LCMS表明沒(méi)有留下起始物料，因此將反應(yīng)混合物用三氟乙酸(0.03毫升，0.33毫摩爾)中和。溶液通過(guò)制備性反相HPLC純化以絨毛狀白色固體得到標(biāo)題化合物(0.043克，45％)。
1H-NMR(MeOD，500MHz)δ8.63(s，2H)，8.45(d，1H)，8.13(s，1H)，8.01(d，1H)，7.82(d，1H)，7.69-7.61(m，3H)，7.36(d，2H)，4.65-4.57(m，2H)，3.98-3.88(m，3H)，3.50-3.44(m，3H)，3.31-3.25(m，1H)，3.04-2.98(m，2H)，2.47-2.41(m，1H)，2.23-2.15(m，1H)，2.12-1.44(m，7H).MS(ESI)計(jì)算值C32H32Cl2N6O6S699.6，實(shí)測(cè)值m/e 699.1(M+).
實(shí)施例4A(4R)-1-[(3-氰基苯基)磺酰基]-4-(哌啶-1-基)-L-脯氨?；?4-[(3，5-二氯異煙?；?氨基]-L-苯基丙氨酸乙酯，及其鹽酸鹽和甲磺酸鹽實(shí)施例4步驟B的淡黃色粗粉末通過(guò)用乙酸乙酯(1％NH4OH)洗脫，隨后用乙酸乙酯(1％NH4OH)/甲醇＝99/1洗脫的正相硅膠色譜純化，以白色固體得到化合物游離堿。
標(biāo)題化合物游離堿(200毫克，0.28毫摩爾)溶于乙酸乙酯。滴加鹽酸(二氧六環(huán)中4N，100微升)并在室溫下攪拌30分鐘。將得到的沉淀過(guò)濾、用二乙醚洗滌(3×)并在高真空干燥，以白色固體得到標(biāo)題化合物鹽酸鹽。
標(biāo)題化合物游離堿(5.7克，7.8毫摩爾)溶于乙醇(200毫升)。滴加甲磺酸(570微升)并加入二乙醚(200毫升)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。將得到的沉淀過(guò)濾、用二乙醚洗滌(3×)并在高真空干燥，以白色固體得到標(biāo)題化合物甲磺酸鹽。
使用實(shí)施例4中所述的方法制備了以下化合物的三氟乙酸鹽





權(quán)利要求
1.式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中A為N或N+-O-；X和Y獨(dú)立地選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基；R1選自(1)氫，(2)C1-10烷基，(3)-(C1-10烷基)-芳基，(4)-(C1-10烷基)-O-C1-10烷基，(5)-(C1-10烷基)-OC(O)-C1-10烷基，(6)-(C1-10烷基)-OC(O)-芳基，(7)-(C1-10烷基)-OC(O)O-C1-10烷基和(8)-(C1-10烷基)N+(C1-3烷基)3；其中烷基任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自Ra的取代基取代，并且芳基任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自Rb的取代基取代；R2為氫或甲基；R3和R4獨(dú)立地選自(1)氫，(2)-NRdRe，(3)-NRdS(O)mRe，(4)-NRdC(O)Re，(5)-NRdC(O)ORe，(6)-NRdC(O)NRdRe，條件是R3和R4不同時(shí)為氫；Ra選自(1)-ORd，(2)-NRdS(O)mRe，(3)-NO2，(4)鹵素，(5)-S(O)mRd，(6)-SRd，(7)-S(O)2ORd，(8)-S(O)mNRdRe，(9)-NRdRe，(10)-O(CRfRg)nNRdRe，(11)-C(O)Rd，(12)-CO2Rd，(13)-CO2(CRfRg)nCONRdRe，(14)-OC(O)Rd，(15)-CN，(16)-C(O)NRdRe，(17)-NRdC(O)Re，(18)-OC(O)NRdRe，(19)-NRdC(O)ORe，(20)-NRdC(O)NRdRe，(21)-CRd(N-ORe)，(22)CF3，(23)-OCF3，(24)C3-8環(huán)烷基，和(25)雜環(huán)基；其中環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1-3個(gè)獨(dú)立地選自Rc的基團(tuán)取代；Rb選自(1)選自Ra的基團(tuán)，(2)C1-10烷基，(3)C2-10烯基，(4)C2-10炔基，(5)芳基，(6)-(C1-10烷基)-芳基，其中烷基、烯基、炔基和芳基任選被1-3個(gè)選自獨(dú)立地選自Rc的基團(tuán)的取代基取代；Rc為(1)鹵素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C1-4烷基，(5)C1-4烷氧基，(6)芳基，(7)-(C1-4烷基)-芳基，(8)羥基，(9)CF3，(10)OC(O)C1-4烷基，(11)OC(O)NRfRg或(12)芳氧基；Rd和Re獨(dú)立地選自氫、C1-10烷基、C2-10烯基、C2-10炔基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy，其中烷基、烯基、炔基和Cy任選被1-4個(gè)獨(dú)立地選自Rc的取代基取代；或Rd和Re與其所連接的原子(們)一起形成含有0-2個(gè)獨(dú)立地選自O(shè)、S和N-Rh的其它雜原子的4-7元雜環(huán)，并且其中所述雜環(huán)任選與C3-8碳環(huán)稠和或任選被1-4個(gè)獨(dú)立地選自C1-10烷基的基團(tuán)取代；Rf和Rg獨(dú)立地選自氫、C1-10烷基、Cy和-(C1-10烷基)-Cy；或Rf和Rg與其所連接的碳原子一起形成含有0-2個(gè)獨(dú)立地選自氧、硫和氮的雜原子的5-7元環(huán)；Rh選自Rf和-C(O)Rf；Cy選自環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基；并且m是1或2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X和Y之一為鹵素并且另一個(gè)選自鹵素、C1-3烷基和C1-3烷氧基。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氫、C1-4烷基、-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基或-(C1-4烷基)OC(O)-C1-4烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R3為氫并且R4為NRdRe。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R3為NRdRe并且R4為氫。
6.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其具有式Ia， 其中A為N或N+O-；R1選自氫、C1-10烷基、-(C1-4烷基)-芳基、-(C1-4烷基)-O-C1-4烷基和-(C1-4烷基)-OC(O)-C1-4烷基；R3和R4中的一個(gè)為NRdRe并且另一個(gè)為氫。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中Rd為氫并且Re為叔丁基或環(huán)丁基。
8.權(quán)利要求6的化合物，其中R3為氫，并且Rd和Re與其所連接的氮原子一起形成不含有其它雜原子并且任選被1或2個(gè)獨(dú)立地選自C1-4烷基的基團(tuán)取代的4-7元雜環(huán)。
9.一種藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體。
10.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制造用于治療或預(yù)防細(xì)胞粘連所介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求9的應(yīng)用，其中所述疾病選自哮喘、多發(fā)性硬化、炎癥性腸病、慢性阻塞性肺病、鐮狀細(xì)胞性貧血、白血病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
12.權(quán)利要求9的應(yīng)用，其中所述疾病為馬氣喘病。
全文摘要
式I化合物為VLA－4拮抗劑，并因而可用于抑制或預(yù)防細(xì)胞粘連和細(xì)胞粘連介導(dǎo)的疾病。這些化合物可以配制成藥物組合物并可適于治療包括潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、哮喘和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的炎癥性腸病。
文檔編號(hào)A61K31/44GK1930147SQ200580007438
公開(kāi)日2007年3月14日 申請(qǐng)日期2005年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月10日
發(fā)明者W·K·哈格曼, 林壽忠, 劉平, R·A·穆姆福德, T·S·雷格爾, N·D·史密斯, N·S·斯托克, J·祖尼克 申請(qǐng)人:默克公司