專利名稱：含有黃褥花果葉萃取物的血糖水平升高抑制劑和age生成抑制劑以及含有它們的食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血糖水平升高抑制劑和高級糖基化終產(chǎn)物(AGE)生成抑制劑。
背景技術(shù)：
隨著近年來飲食習慣和生活方式的變化，糖尿病患者的數(shù)量日益增多。目前，在日本糖尿病患者的數(shù)量高達7,000,000，如果加上未來的糖尿病患者，該數(shù)目可能多達15,000,000。
糖尿病這種代謝障礙表現(xiàn)出由胰島素激素活性水平不足所引起的長期血糖過多狀態(tài)。長期血糖過多狀態(tài)可能導致引發(fā)各種類型的并發(fā)癥，例如神經(jīng)疾病、白內(nèi)障、腎病、視網(wǎng)膜病變、關(guān)節(jié)硬化、動脈粥樣硬化、以及糖尿病性壞疽。并發(fā)癥主要分為由借助于蛋白質(zhì)與患者血液中的葡萄糖相結(jié)合的非酶促糖基化而引起的血管疾病以及由葡萄糖代謝后生成的山梨糖醇堆積引起的細胞破壞而導致的神經(jīng)疾病。由蛋白質(zhì)-葡萄糖結(jié)合形成的糖基化蛋白質(zhì)隨著反應的進一步進行生成被稱作高級糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end product，AGE)的化合物。據(jù)推論，AGE與血管內(nèi)皮細胞中的特異性受體(RAGE)相結(jié)合，促進出現(xiàn)糖尿病性血管疾病。
因此，抑制血糖水平升高以及抑制AGE生成被認為是用于治療和預防糖尿病及糖尿病并發(fā)癥的方法。
過去已經(jīng)開發(fā)出很多用于治療和預防糖尿病及糖尿病并發(fā)癥的藥劑。
這類藥劑的實例包括血糖水平升高抑制劑(其被施用至進餐后血糖水平出現(xiàn)異常的糖尿病患者)和α-葡萄糖苷酶抑制劑(它可以抑制碳水化合物的消化和吸收，從而預防血糖水平升高)。已知伏格列波糖和阿卡波糖是α-葡萄糖苷酶的代表性抑制劑。已知羰基試劑氨基胍是AGE生成抑制劑的實例之一。這些藥劑作為抗糖尿病藥物或抗糖尿病并發(fā)癥藥物備受關(guān)注，并為此進行了很多臨床試驗。
盡管這些藥劑具有顯著的療效，但是它們也強加給患者各種各樣的副作用，例如攝取后出現(xiàn)胃氣脹、因與其它血糖過低藥物聯(lián)合使用而引發(fā)的血糖過低狀態(tài)、以及惡心或頭痛。
為了克服上述缺陷，已經(jīng)開發(fā)出各種由天然成分制成的藥劑，它們具有緩和的療效，但是卻避免了與副作用相關(guān)的問題。例如已知紫蘇萃取物(JP專利公開號(未審)2000-102313)、巴拉圭茶萃取物(JP專利公開號(未審)2003-146900)、羅布麻(Apocynum venetum)葉萃取物(JP專利公開號(未審)2002-053486)、以及枇杷葉萃取物(JP專利公開號(未審)2003-128571)是由天然成分制成的α-葡萄糖苷酶抑制劑。作為由天然成分制成的AGE生成抑制劑，例如通過萃取稻谷如野生稻谷得到的抗糖尿病活性物質(zhì)和抗糖尿病并發(fā)癥活性物質(zhì)以及其制備方法(JP專利號3,334,016)是已知的，當然這類藥劑的數(shù)量還不是足夠的多。
黃褥花果(Acerola)是一種Rutales目Malpighiaceae科Malpighia屬熱帶水果，其原產(chǎn)在加勒比群島。目前，黃褥花果果實在全世界范圍被廣泛用作飲料和保健食品。然而，目前尚未檢測出黃褥花果葉中的有用組分。黃褥花果葉作為從未使用過的資源，一直期待著發(fā)現(xiàn)其工業(yè)價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供由天然成分制得的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑以及含有任一種抑制劑的食品。
本發(fā)明包括下述發(fā)明。
(1)血糖水平升高抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
(2)根據(jù)(1)的血糖水平升高抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
(3)AGE生成抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
(4)根據(jù)(3)的AGE生成抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
(5)根據(jù)(1)-(4)中任意一項的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其被用于治療或預防糖尿病或糖尿病并發(fā)癥。
(6)根據(jù)(1)-(5)中任意一項的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其將被加入至食品中。
(7)含有根據(jù)(1)-(6)中任意一項的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑的食品。
(8)含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品的食品。
本說明書中包括公開在本申請優(yōu)先權(quán)文本日本專利申請?zhí)?004-080520說明書和/或附圖中的部分或全部內(nèi)容。
發(fā)明效果本發(fā)明提供了含有天然形成的物質(zhì)作為活性成分的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑，以及含有任一抑制劑的食品。
附圖簡述

圖1示出了實施例1制備的純化黃褥花果葉萃取物與純化黃褥花果果實萃取物的麥芽糖酶抑制活性測量的對比結(jié)果。
圖2示出了實施例1制備的純化黃褥花果葉萃取物對AGE生成的抑制活性的測量結(jié)果。
發(fā)明優(yōu)選實施方案本發(fā)明涉及血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。作為本發(fā)明所用的黃褥花果葉的萃取來源的黃褥花果的產(chǎn)地或種類并無特別限制。例如，黃褥花果可以生長在日本沖繩、或者巴西。本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑含有天然形成的物質(zhì)也就是黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。因此，這類抑制劑涉及很低的副作用。本發(fā)明有效地利用了從未使用過的資源即黃褥花果葉，這使得本發(fā)明更為可取。
黃褥花果葉萃取物可以由新鮮的、半干或干燥黃褥花果葉得到。另外，萃取物還可以由保持未處理狀態(tài)的葉或者被充分磨碎或切碎的葉得到。
對于黃褥花果葉萃取物并無特殊限制，只要是通過常規(guī)技術(shù)萃取到的即可。黃褥花果葉萃取物可以視需要進行濃縮。在本發(fā)明中，還可以使用黃褥花果葉萃取物的加工產(chǎn)品。本文中所使用的術(shù)語“黃褥花果葉萃取物的加工產(chǎn)品”包括但不限于黃褥花果葉萃取物通過各種色譜技術(shù)得到的純化產(chǎn)物。
黃褥花果葉萃取物或其加工產(chǎn)品優(yōu)選使用水或親水性有機溶劑得到。至于親水性有機溶劑，可以使用例如各種已知的有機溶劑，諸如醇類如甲醇、乙醇、甘油、丙二醇和1，3-丁二醇，丙酮，四氫呋喃，乙腈，1，4-二烷，吡啶，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺，以及乙酸。這類親水性有機溶劑優(yōu)選與水混和。
對于萃取條件并無特殊現(xiàn)制。溫度范圍通常為0℃-120℃，優(yōu)選為20℃-50℃。萃取持續(xù)時間為大約1-24小時，優(yōu)選為大約1或2小時。用于萃取的溶劑用量優(yōu)選為原料質(zhì)量的1-20倍。
萃取完畢后，殘余物可以通過過濾或者離心除去，得到萃取物。萃取物可以視需要進一步濃縮。
所得到的萃取物偶爾含有糖類、有機酸等。因此，為了除去這類物質(zhì)，優(yōu)選完成一純化步驟。純化可以通過例如正相或逆相色譜法、離子交換色譜法、或凝膠過濾完成。這些技術(shù)可以充分地聯(lián)合使用。
如實施例所述，用于本發(fā)明中的黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品具有抑制血糖水平升高和抑制AGE生成的活性。這類活性可能是由于所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚而引起的。盡管對于這些多酚的組成尚不清楚，但是據(jù)信這種組成在導致具有抑制血糖水平升高和抑制AGE生成的活性方面是有用的。
對于黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品在本發(fā)明血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑中的含量并無特殊限制，只要可以獲得所需效果即可。本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑中除了含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品之外，還可以含有任意的其它成分。
本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑可以為同時含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品與常規(guī)藥物載體的制劑形式。對于劑型并無特殊限制，其完全可以根據(jù)需要加以確定。一般來說，劑型可以是口服制劑，例如片劑、膠囊劑、顆粒劑、細顆粒劑、粉劑、液體制劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、或酏劑，非腸道制劑例如注射劑、滴劑、栓劑、吸入劑、透皮吸收劑、透粘膜吸收劑、粘合制劑、或軟膏劑。
口服制劑可以通過常規(guī)技術(shù)，使用各種賦型劑例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉、或無機鹽制備得到。
除了上述賦型劑之外，這類型制劑還可以含有例如粘合劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、助流劑、調(diào)味劑、著色劑、或者芳香物質(zhì)。
粘合劑的具體實例包括結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、低取代的羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、羧甲基乙基纖維素、羥乙基纖維素、小麥淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、糊精、預膠化淀粉、部分預膠化淀粉、羥丙基淀粉、Pullulan、聚乙烯基吡咯烷酮、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物E、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物RS、甲基丙烯酸共聚物L、甲基丙烯酸共聚物、聚乙烯縮醛二乙氨基乙酸酯、聚乙烯醇、阿拉伯樹膠、粉末阿拉伯樹膠、瓊脂、明膠、白色蟲膠、黃蓍膠、純化蔗糖、以及聚乙二醇(Macrogol)。
崩解劑的具體實例包括結(jié)晶纖維素、甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、小麥淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、部分預膠化的淀粉、羥丙基淀粉、羧甲基淀粉鈉、以及黃蓍膠。
表面活性劑的具體實例包括大豆卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸聚烴氧基酯(polyoxyl stearate)、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯聚氧丙二醇、去水山梨糖醇倍半油酸酯、去水山梨糖醇三油酸酯、去水山梨糖醇單硬脂酸酯、去水山梨糖醇單棕櫚酸酯、去水山梨糖醇單月桂酸酯、聚山梨酯、甘油單硬脂酸酯、十二烷基硫酸鈉、以及聚桂醇。
潤滑劑的實例包括小麥淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、硬脂酸、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、水合二氧化硅、輕質(zhì)無水硅酸、合成硅酸鋁、干燥氫氧化鋁凝膠、滑石、硅酸鎂鋁、磷酸氫鈣、無水磷酸氫鈣、蔗糖脂肪酸酯、石蠟、氫化植物油、以及聚乙二醇。
助流劑的具體實例包括水合二氧化硅、輕質(zhì)無水硅酸、干燥氫氧化鋁凝膠、合成硅酸鋁、以及硅酸鎂。
當本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑以液體制劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、或酏劑形式給藥時，其中可以含有味道和香味矯正劑或者著色劑。
本發(fā)明還涉及含有前述血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制的食品。本發(fā)明的食品可以為任意形式，例如糖果(如蜜餞、糖錠、果醬、或口香糖)或飲料(諸如清爽飲料如茶或酒精飲料)形式、以及常見“食品”的形式。本發(fā)明的食品可以制備成用于特定保健用途的食品形式(例如用于預防糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的食品)。對于血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑在食品中的含量并無特殊限制，只要能夠達到所需效果即可。
本發(fā)明還涉及含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品的食品。迄今為止，尚未將黃褥花果葉用于食品中。
下面參照后面的實施例對本發(fā)明進行更詳細的描述，當然本發(fā)明的技術(shù)范圍并不受這些實施例的限制。
實施例1黃褥花果葉均勻加工處理后，向其中加入3倍體積的蒸餾水，接著進行1小時萃取。上述步驟進行兩次，萃取物離心、過濾、凍干后，再次稀釋在蒸餾水中。所得到的溶液裝填在C18筒柱(Sep-Pak Vac 35ccC18筒柱，Waters)上，用蒸餾水洗滌，0.2％TFA/甲醇溶液洗脫。洗脫部分蒸發(fā)至干，得到純化的萃取物。
接下來，通過Folin-Denis方法測量所得到的純化萃取物中的多酚含量。具體地說，將純化萃取物溶解于蒸餾水中，濃度為0.5mg/ml，將0.1ml所得到的溶液、2.9ml蒸餾水、和0.5ml Folin-Ciocalteu試劑(Merck)進行混和?；旌衔锓胖?分鐘，向其中加入20％碳酸鈉溶液，混合物再放置60分鐘，測量650nm處的吸收值。使用兒茶素作為標準參考物質(zhì)繪制分析曲線。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，純化萃取物中的多酚含量為25％。
實施例2按照下述方法，時實施例1中制得的純化黃褥花果葉萃取物進行α-葡萄糖苷酶抑制活性(麥芽糖酶抑制活性)測量。
向商購得到的大鼠小腸丙酮粉末中，加入9倍體積的56mM馬來酸鹽緩沖液(pH6.0)，混合物用玻璃勻化器勻化。產(chǎn)物離心后，回收上清液，將其定義為粗制酶溶液。將20倍稀釋的該粗制酶溶液用于麥芽糖酶反應中。
開始時，將0.6ml 2mg/ml樣本溶液加入至0.6ml 2％麥芽糖溶液中，混合物在37℃下培養(yǎng)5分鐘，向其中加入0.6ml上述粗制酶溶液，反應在37℃下進行120分鐘。通過在沸水中加熱10分鐘使酶滅活，離心后，通過HPLC測量上清液中的葡萄糖水平。
HPLC條件如下。
柱Shim-pack CLC-NH2柱(6.0×150mm)柱溫室溫流速2ml/分鐘流動相75％乙腈檢測RI單獨地，除了使用蒸餾水而不是樣本溶液(用量與樣本溶液所用用量相同)之外，類似地重復上述反應，反應產(chǎn)物定義為對照樣本，類似地測得其中的葡萄糖水平。將對照樣本的測量結(jié)果定義為麥芽糖抑制作用為0％。
圖1示出了采用上述技術(shù)測得的結(jié)果。圖1還示出了黃褥花果果實的測量結(jié)果，作為對照實施例，它是按照與黃褥花果葉相同的方式得到的。
從圖1中明顯看出，純化黃褥花果葉萃取物具有麥芽糖酶抑制活性。
實施例3按照下述方法，對實施例1中制得的純化黃褥花果葉萃取物進行抗AGE生成的抑制活性測量。
將牛血清白蛋白(16mg/ml，1ml)、1ml 4M葡萄糖、1ml 1/15M磷酸鹽緩沖液(pH7.2)、和1ml 0.3mg/ml樣本溶液進行混和，產(chǎn)物儲存在60℃下。七天后，使用熒光光譜計測量由蛋白質(zhì)和葡萄糖生成的AGE。使用325nm的激發(fā)波長和405nm的發(fā)射波長分析AGE初始產(chǎn)物。使用370nm的激發(fā)波長和440nm的發(fā)射波長分析AGE高級產(chǎn)物。為了進行對照，按照相同方式完成了使用氨基胍的試驗。另外，除了使用蒸餾水而不是樣本溶液(用量與樣本溶液所用用量相同)之外，還重復進行了與上述相同的試驗，反應產(chǎn)物定義為對照樣本，類似地進行熒光分析。將對照樣本的測量結(jié)果定義為AGE抑制作用為0％。
采用上述技術(shù)測得的結(jié)果如圖2所示。
從圖2中明顯看出，純化的黃褥花果葉萃取物具有與氨基胍相當?shù)目笰GE生成的抑制活性。
在此將本文中所引用的全部出版物、專利、和專利申請的全部內(nèi)容引入作為參考。
權(quán)利要求
1.血糖水平升高抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的血糖水平升高抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
3.高級糖基化終產(chǎn)物(AGE)生成抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的AGE生成抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其被用于治療或預防糖尿病或糖尿病并發(fā)癥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其將被加入至食品中。
7.含有根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑的食品。
8.含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品的食品。
全文摘要
本發(fā)明目的在于提供由天然成分制得的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑、以及含有這些抑制劑的食品。所述血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
文檔編號A61P3/10GK1933846SQ20058000889
公開日2007年3月21日 申請日期2005年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月19日
發(fā)明者青木仁史, 花村高行, 間山千鄉(xiāng) 申請人:株式會社日冷食品