專利名稱：調(diào)節(jié)炎性和轉(zhuǎn)移過程的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供用化合物來調(diào)節(jié)炎性應答和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)過程的方法。本發(fā)明還提供了通過測定用這些化合物治療的對象中ICAM、VCAM或E-選凝素分子的水平來監(jiān)測本發(fā)明化合物的效果的方法。
背景技術(shù)：
氨基喹啉酮(quinolinone)苯并咪唑基化合物，例如4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮與它們的互變異構(gòu)體和鹽是諸如VEGFR2(KDR，F(xiàn)lk-1)、FGFR1和PDGFRβ等各類激酶有效的抑制劑，IC50范圍是10-27nM。4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮對其顯示活性的各種酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶和試驗方法參見美國專利號6,605,617；美國專利申請?zhí)?0/644,055和美國專利申請?zhí)?0/706,328，以上各篇文獻如同全文列出一樣，出于所有目的全文納入本文作為參考。這種激酶對激發(fā)和維持新血管生長以及腫瘤增殖重要。因此，這些抑制劑可直接應用于諸如實體和血液學癌癥的各種疾病的治療中。所以，鑒定用這些激酶抑制劑治療的對象的血漿生物標記為監(jiān)測對象對治療的生理應答提供了一種方便的方法。
細胞粘著分子在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和與免疫細胞相互作用中起重要作用。VCAM(血管細胞粘著分子)是一種跨膜糖蛋白，表達在內(nèi)皮細胞和各種癌癥，例如膀胱癌、乳腺癌、胃腸癌、卵巢癌、腎癌、何杰金與非何杰金淋巴瘤的細胞上。VCAM由VEGF誘導，主要表達在活化的內(nèi)皮細胞上。ICAM(可誘導的細胞粘著分子)也表達在內(nèi)皮細胞和包括成纖維細胞、造血細胞和腫瘤細胞的各種細胞中，。存在于血漿中的ICAM的可溶形式通過膜相關(guān)分子的蛋白酶解切割作用產(chǎn)生。E-選凝素(內(nèi)皮白細胞粘著分子)是一種表達于內(nèi)皮細胞中的跨膜糖蛋白，其介導嗜中性白細胞、單核細胞和T細胞粘著于內(nèi)皮細胞。E-選凝素也介導腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。
高濃度的可溶性ICAM、VCAM和E-選凝素被認為是腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和炎性應答期間中內(nèi)皮細胞激活的標記。這些位于內(nèi)皮細胞上的細胞粘著分子能介導轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞的粘著并外滲入血管。令人感興趣的是這些分子是可誘導的，在正常內(nèi)皮細胞上表達不佳，但在接觸細胞因子，例如IL-2或TNF-a后能高度表達。此外，一些這種分子優(yōu)先表達于不同的血管床上，VCAM富集于肺中而E-選凝素富集于肝臟。
基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一類降解胞外基質(zhì)(ECM)的大部分成分的蛋白酶。在正常生理條件下，它們在發(fā)育、組織重塑和形態(tài)發(fā)生中起重要作用。然而，某些金屬蛋白酶水平升高暗示了生理疾病，例如癌癥和炎癥?；啄ぶ邪饣|(zhì)的降解對腫瘤細胞在各種位點的組織侵襲和轉(zhuǎn)移重要，該降解作用取決于MMP的活性。MMP家族有超過20種成員。這些蛋白酶中的兩個是MMP-2(明膠酶A，72KD)和MMP-9(明膠酶B，92KD)。MMP-2和MMP-9是癌癥發(fā)展和轉(zhuǎn)移的重要調(diào)節(jié)劑，它們的水平在各種癌癥患者中頻繁升高。
Bergers等的報道(“基質(zhì)金屬蛋白酶-9在癌癥發(fā)生期間激發(fā)血管生成開關(guān)”(Matrix metalloproteinase-9 triggers the angiogenic switch during carcinogenesis)；Berger，G.等，Nature Cell Biology，2737-744；2000)揭示MMP-9/明膠酶B通過增加VEGF的釋放來在多級胰腺癌發(fā)生期間作為血管生成開關(guān)的功能成分。
以下文獻公開了可用于抑制血管生成和血管內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶和抑制其它酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶的各種喹啉苯并咪唑化合物，包括4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮或它們的互變異構(gòu)體和它們的合成方法，各篇文獻如同全文列出一樣，出于所有目的全文納入本文作為參考美國專利號6,605,617；美國專利號6,756,383；提交的美國專利申請?zhí)?0/116,117(2003年2月6日以US 2003/0028018A1公布)；美國專利申請?zhí)?0/644,055(2004年5月13日公布，美國專利申請?zhí)?004/0092535)；美國專利申請?zhí)?0/983,174；美國專利申請?zhí)?0/706,328(2004年11月4日以2004/0220196公布)；美國專利申請?zhí)?0/982,757；和美國專利申請?zhí)?0/982,543。
十分需要調(diào)節(jié)細胞粘著分子和基質(zhì)金屬蛋白酶的水平的方法。因此，這些方法構(gòu)成了細胞粘著分子和基質(zhì)金屬蛋白酶介導的炎性和轉(zhuǎn)移性疾病治療中重要且急需的療法。
發(fā)明簡述本發(fā)明涉及用結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物治療人或動物對象的方法，以及它們在人或動物對象中的應用。本發(fā)明也涉及所述化合物、互變異構(gòu)體、所述化合物的鹽、所述互變異構(gòu)體的鹽或它們的混合物在制備本文所述方法使用的藥物中的應用。
本發(fā)明一方面提供調(diào)節(jié)對象中炎性應答或降低細胞粘著的方法。這些方法包括給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。給予所述化合物、所述互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物后，對象的炎性應答得到調(diào)節(jié)和/或?qū)ο蟮募毎持鴾p少。
在一方面，所述化合物、互變異構(gòu)體、所述化合物的鹽、所述互變異構(gòu)體的鹽或它們的混合物用于調(diào)節(jié)炎性應答。
在另一方面，所述化合物、互變異構(gòu)體、所述化合物的鹽、所述互變異構(gòu)體的鹽或它們的混合物用于減少細胞粘著。
在另一方面，所述化合物、互變異構(gòu)體、所述化合物的鹽、所述互變異構(gòu)體的鹽或它們的混合物用于降低ICAM、VCAM或E-選凝素的水平。
在另一方面，所述化合物、互變異構(gòu)體、所述化合物的鹽、所述互變異構(gòu)體的鹽或它們的混合物用于減少循環(huán)細胞粘著分子的水平。
在另一方面，所述化合物、互變異構(gòu)體、所述化合物的鹽、所述互變異構(gòu)體的鹽或它們的混合物用于降低循環(huán)ICAM、VCAM或E-選凝素的水平。
在另一方面，本發(fā)明提供一種監(jiān)測人或動物對象的疾病或治療進展的方法。該方法包括給予結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物后測定對象中至少一種細胞粘著分子的量。在一些實施方案中，細胞粘著分子選自可誘導的細胞粘著分子(ICAM)、血管細胞粘著分子(VCAM)或內(nèi)皮白細胞粘著分子(E-選凝素)。一些這樣的方法還包括從對象采集血樣，然后測定至少一部分樣品中的至少一種細胞粘著分子的量。其它實施方案包括給予對象所述化合物、所述互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。
在另一方面，本發(fā)明提供一種鑒定需要結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物的對象的方法。該方法包括測定給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物之前、之后和給予期間對象中至少一種細胞粘著分子的量。在一些實施方案中，細胞粘著分子選自可誘導的細胞粘著分子、血管細胞粘著分子或內(nèi)皮白細胞粘著分子。在一些實施方案中，該方法還包括測定對象的細胞粘著分子的量后，給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。
結(jié)構(gòu)I如下所示 其中，R1、R2、R3和R4可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO2、-OH、-OR15基團、-NR16R17基團、取代與未取代的脒基(amidinyl)、取代與未取代的胍基(guanidinyl)、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和-C(＝O)R18基團；R5、R6、R7和R8可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-NO2、-OH、-OR19基團、-NR20R21基團、-SH、-SR22基團、-S(＝O)R23基團、-S(＝O)2R24基團、-CN、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代和未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)R25基團、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基(heterocyclyloxyalkyl)；R12選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R13選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-OH、烷氧基、芳氧基、-NH2、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基、取代與未取代的芳基氨基、取代與未取代的二烷基氨基、取代與未取代的二芳基氨基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R15和R19可以相同或不同，它們獨立選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的二雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R16和R20可以相同或不同的，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R17和R21可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R18、R23、R24和R25可以相同或不同，它們獨立選自H、-NH2、-NH(烷基)、-NH(芳基)、-N(烷基)2、-N(芳基)2、-N(烷基)(芳基)、-NH(雜環(huán)基)、-N(雜環(huán)基)(烷基)、-N(雜環(huán)基)(芳基)、-N(雜環(huán)基)2、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、-OH、取代與未取代的烷氧基、取代與未取代的芳氧基、取代與未取代的雜環(huán)基、-NHOH、-N(烷基)OH、-N(芳基)OH、-N(烷基)O-烷基、-N(芳基)O-烷基、-N(烷基)O-芳基和-N(芳基)O-芳基；和R22選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基。
本發(fā)明的其它目的、特點和優(yōu)點將從以下詳述中明白。
附圖簡述

圖1顯示了各種用量的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物1)對4T1鼠乳腺腫瘤模型(運載體(灰色外框的圓形)；10mpk(方形)；30mpk(灰色三角形)；60mpk(X)；100mpk(菱形)和150mpk(豎排在下的圓形(filed circle))的作用。給藥18天后，皮下腫瘤的生長得到抑制(與對照相比達40-80％)，肝臟轉(zhuǎn)移完全抑制，肺轉(zhuǎn)移抑制達60-97％。
圖2A和2B顯示當以各種用量的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮給藥時，患4T1乳腺腫瘤的小鼠的血清中可溶性ICAM(圖2A；用100或150mg/kg抑制大于70％)和可溶性VCAM(圖2B；用100或150mg/kg抑制達44-47％)的劑量依賴性減少。
圖3顯示用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮治療攜帶4T1腫瘤的小鼠的血清中小鼠特異的可溶性E-選凝素的劑量依賴性抑制。
圖4A、4B和4C是顯示用100mg/kg的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮給藥7天后，植入KM12L4a腫瘤細胞的小鼠中MMP9和VEGF減少的酶譜(Zymography)和VEGF ELISA(圖4B)數(shù)據(jù)。
圖5是顯示當培養(yǎng)中的HUVEC用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)處理后，ICAM和VCAM表達減少的掃描圖像。
圖6是顯示當培養(yǎng)中的HUVEC用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)處理后，α5整聯(lián)蛋白而非αV整聯(lián)蛋白表達減少的掃描圖像。
發(fā)明詳述以下縮寫和定義用于說明書全文本文使用的短語“細胞的粘著”指細胞粘著。對象中細胞粘著的量一般與對象中細胞粘著分子，例如VCAM、ICAM和E-選凝素的量相關(guān)聯(lián)。
“VCAM”是血管細胞粘著分子的縮寫。
“ICAM”是可誘導細胞粘著分子的縮寫。
“E-選凝素”也稱為內(nèi)皮白細胞粘著分子。
“4T1”是鼠乳腺細胞系。
“BALB/C”是用于腫瘤異種移植(xenograph)實驗的小鼠品系。
“bFGF”是堿性成纖維細胞生長因子的縮寫。
“FGFR1”也稱為bFGFR，是與成纖維細胞生長因子FGF相互作用的酪氨酸激酶的縮寫。
“FGF”的與FGFR1相互作用的成纖維細胞生長因子的縮寫。
“FGFR3”是經(jīng)常表達于多發(fā)性骨髓瘤型癌癥的酪氨酸激酶成纖維細胞生長因子受體3的縮寫。
“Flk-1”是胎肝激酶1的縮寫，也稱為激酶插入域酪氨酸激酶或KDR(人)，也稱為血管內(nèi)皮生長因子受體-2或VEGFR2(KDR(人)、Flk-1(小鼠))。
“PDGF”是血小板衍生生長因子的縮寫。PDGF與酪氨酸激酶PDGFα和PDGFβ相互作用。
“RTK”是受體酪氨酸激酶的縮寫。
“VEGF”是血管內(nèi)皮生長因子的縮寫。
“VEGF-RTK”是血管內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶的縮寫。
“ELISA”是酶聯(lián)免疫吸附測定的縮寫。
“MMP-2”是基質(zhì)金屬蛋白酶-2的縮寫[包括72KD(原MMP-2)蛋白和62KD(活性MMP-2)蛋白]。MMP-2也稱為明膠酶A。
“MMP-9”是基質(zhì)金屬蛋白酶-9的縮寫[包括105KD(原MMP-9)蛋白和92KD(活性MMP-9)蛋白]。MMP-9也稱為明膠酶B。
“Ki67”是一種細胞增殖標記。
“胱冬酶-3”是一種凋亡標記。胱冬酶-3的活化需要將無活性的胱冬酶-3蛋白酶解成大小是17KD和19KD的“切割的胱冬酶-3”。
“PARP”是聚ADP-核糖聚合酶的縮寫且是一種凋亡標記。它是116KD的蛋白質(zhì)，并被切割成89KD的蛋白質(zhì)。
“CD31”是一種內(nèi)皮細胞的標記。通過免疫組織化學方法用抗CD31抗體免疫染色腫瘤切片可顯示腫瘤中微管的數(shù)量(或微管的密度)。
提及某元素，例如氫或H時，一般表示包括該元素的所有同位素。例如，如果R基團定義為包含氫或H，它也包含氘和氚。
短語“未取代的烷基”指不含雜原子的烷基。因此，該短語包括直鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。該短語也包括直鏈烷基的支鏈異構(gòu)體，包括但不限于作為例子的以下基團-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)等。該短語也包括環(huán)狀烷基，例如環(huán)烷基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基，以及用以上定義的直鏈和支鏈烷基取代的這種環(huán)。該短語也包括多環(huán)烷基，例如但不限于金剛烷基降冰片基(adamantyl norbornyl)和雙環(huán)[2.2.2]辛基，以及用以上定義的直鏈和支鏈烷基取代的這種環(huán)。因此，術(shù)語“未取代的烷基”包括伯烷基、仲烷基和叔烷基。未取代的烷基也可與母體化合物中的一個或多個碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子連接。優(yōu)選的未取代的烷基包括具有1-20個碳原子的直鏈和支鏈烷基和環(huán)狀烷基。更優(yōu)選的這種未取代的烷基具有1-10個碳原子，還要優(yōu)選的這種基團具有1-5個碳原子。最優(yōu)選的未取代的烷基包括具有1-3個碳原子的直鏈和支鏈烷基，包括甲基、乙基、丙基和-CH(CH3)2。
短語“取代的烷基”指如上定義的未取代的烷基，其中一個或多個連接碳或氫原子的鍵被連接非氫或非碳原子的鍵替代，所述非氫或非碳原子例如但不限于鹵化物中的鹵素，如F、Cl、Br和I；在諸如羥基、烷氧基、芳氧基和酯基中的氧原子；在諸如硫醇基團、烷基和芳基硫醚基團、砜基團、磺酰基和亞砜基團中的硫原子；在諸如胺、酰胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、N-氧化物、二酰亞胺和烯胺中的氮原子；諸如三烷基甲硅烷基、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基和三芳基甲硅烷基中的硅原子；和各種其它基團中的其它雜原子。取代的烷基也包括其中一個或多個連接碳或氫原子的鍵被連接雜原子的鍵取代，所述雜原子例如是羰基、羧基和酯基中的氧；二酰亞胺、肟、腙和腈中的氮。優(yōu)選的取代的烷基包括其中一個或多個連接碳或氫原子的鍵被一個或多個連接氟原子的鍵取代。取代的烷基的例子是三氟甲基和其它含有三氟甲基的烷基。其它烷基包括其中一個或多個連接碳或氫原子的鍵被連接氧原子的鍵取代，從而使取代的烷基含有羥基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)氧基。還有其它烷基包括具有胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、(烷基)(芳基)胺、二芳基胺、雜環(huán)基胺、(烷基)(雜環(huán)基)胺、(芳基)(雜環(huán)基)胺或二雜環(huán)基胺的烷基。
短語“未取代的芳基”指不含有雜原子的芳基。因此，該短語包括但不限于例如苯基、聯(lián)苯基、蒽基(anthracenyl)、萘次甲基。雖然該短語“未取代的芳基”包括含有稠合環(huán)，例如萘的基團，它不包括具有與環(huán)原子之一結(jié)合的其它基團，例如烷基或鹵素的芳基，因為本文認為諸如甲苯基的芳基是下述取代的芳基。未取代的芳基優(yōu)選苯基。然而，未取代的芳基可與母體化合物中一個或多個碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子結(jié)合。
短語“取代的芳基”相對于未取代的芳基的含義與取代的烷基相對于未取代的烷基的含義相同。。然而，取代的芳基也包括其中芳香碳之一與上述非碳或非氫原子之一連接的芳基，也包括其中該芳基的一個或多個芳香碳與本文定義的取代和/或未取代的烷基、烯基或炔基連接的芳基。這包括芳基的兩個碳原子與烷基、烯基或炔基的兩個原子連接以形成稠環(huán)系統(tǒng)(例如，二氫萘基或四氫萘基)的連接排列。因此，短語“取代的芳基”包括但不限于甲苯基和羥苯基等。
短語“未取代的烯基”是指直鏈和支鏈以及環(huán)狀基團，例如以上定義的未取代的烷基的所述的那些基團，除了至少在兩個碳原子之間有一個雙鍵。。例子包括但不限于乙烯基、-CH＝C(H)(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝C(H)2、-C(CH3)＝C(H)(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2、環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。
短語“取代的烯基”相對于未取代的烯基的含義與取代的烷基相對于未取代的烷基的含義相同。。取代的烯基包括其中非碳或非氫原子與和另一碳形成雙鍵的碳連接的烯基；以及其中非碳或非氫原子之一與不涉及和另一碳形成雙鍵的碳結(jié)合的烯基。
短語“未取代的炔基”指直鏈和支鏈基團，例如以上定義的關(guān)于未取代的烷基所述的基團，除了在兩個碳原子之間至少具有一個三鍵。例子包括但不限于-C≡C(H)、-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-C(H2)C≡C(H)、-C(H)2C≡C(CH3)和-C(H)2C≡C(CH2CH3)等。
短語“取代的炔基”相對于未取代的炔基的含義與取代的烷基相對于未取代的烷基的含義相同。取代的炔基包括其中非碳或非氫原子與和另一碳形成三鍵的碳連接的炔基；以及其中非碳或非氫原子與不涉及和另一碳形成三鍵的碳連接的炔基。
短語“未取代的芳烷基”指如上定義的未取代的烷基，其中未取代的烷基的氫或碳鍵被連接以上定義的芳基的鍵替代。例如，甲基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基上的氫原子被連接苯基的鍵替代，例如假設(shè)甲基的碳與苯的碳連接，則該化合物是未取代的芳烷基(即，芐基)。因此，該短語包括但不限于諸如芐基、二苯基甲基和1-苯基乙基(-CH(C6H5)(CH3))等的基團。
短語“取代的芳烷基”相對于未取代的芳烷基的含義與取代的芳基相對于未取代的芳基的含義相同。然而，取代的芳烷基也包括其中該基團的烷基部分的碳或氫鍵被連接非碳或非氫原子的鍵替代的基團。取代的芳烷基的例子包括但不限于-CH2C(＝O)(C6H5)和-CH2(2-甲基苯基)等。
短語“未取代的雜環(huán)基”指含有3個或更多個環(huán)原子的芳香環(huán)和非芳香環(huán)化合物，其中所述環(huán)原子中的一個或多個例如但不限于N、O和S的雜原子，包括單環(huán)、雙環(huán)和多環(huán)化合物，例如但不限于喹寧環(huán)基(quinuclidyl)。雖然該短語“未取代的雜環(huán)基”包括稠合的雜環(huán)基環(huán)，例如苯并咪唑基，它不包括具有和環(huán)原子之一連接的其它基團，例如烷基或鹵素的雜環(huán)基，因為諸如2-甲基苯并咪唑基的化合物是取代的雜環(huán)基。雜環(huán)基的例子包括但不限于含有1-4個氮原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、二氫吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三唑基(例如，4H-1，2，4-三唑基、1H-1，2，3-三唑基、2H-1，2，3-三唑基等)、四唑基(例如，1H-四唑基、2H-四唑基等)；含有1-4個氮原子的3-8元飽和環(huán)，例如但不限于吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基；含有1-4個氮原子的稠合的不飽和雜環(huán)基，例如但不限于吲哚基、異氮雜茚基、二氫吲哚基、中氮茚基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基、吲唑基、苯并三唑基；含有1-2個氧原子和1-3個氮原子的不飽和3-8元環(huán)，例如但不限于唑基、異唑基、二唑基(例如，1，2，4-二唑基、1，3，4-二唑基、1，2，5-二唑基等)；含有1-2個氧原子和1-3個氮原子的飽和3-8元環(huán)，例如但不限于嗎啉基；含有1-2個氧原子和1-3個氮原子的不飽和稠合雜環(huán)基，例如苯并唑基、苯并二唑基、苯并嗪基(例如2H-1，4-苯并嗪基等)；含有1-3個硫原子和1-3個氮原子的不飽和3-8元環(huán)，例如但不限于噻唑基、異噻唑基、噻二唑基(thiadiazolyl)(例如1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基等)；含有1-2個硫原子和1-3個氮原子的3-8元飽和環(huán)，例如但不限于噻唑啶基(thiazolodinyl)；含有1-2個硫原子的3-8元飽和與不飽和環(huán)，例如但不限于噻吩基、二氫二硫雜環(huán)己二烯基(dihydrodithiinyl)、二氫二亞硫?；?dihydrodithionyl)、四氫噻吩、四氫噻喃；含有1-2個硫原子和1-3個氮原子的不飽和稠合雜環(huán)基環(huán)，例如但不限于苯并噻唑基、苯并噻二唑基(benzothiadiazolyl)、苯并噻嗪基(例如2H-1，4-苯并噻嗪基等)、二氫苯并噻嗪基(例如，2H-3，4-二氫苯并噻嗪基等)；含有氧原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于呋喃基；含有1-2個氧原子的不飽和稠合雜環(huán)基環(huán)，例如但不限于苯并間二氧雜環(huán)戊烯基(benzodioxolyl)(例如1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基等)；含有氧原子和1-2個硫原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于二氫氧硫雜環(huán)己二烯基(dihydrooxathiinyl)；含有1-2個氧原子和1-2個硫原子的3-8元飽和環(huán)，例如1，4-氧硫雜環(huán)己烷；含有1-2個硫原子的不飽和稠合環(huán)，例如苯并噻吩基、苯并二硫雜環(huán)己二烯基(benzodithiinyl)；和含有氧原子和1-2個氧原子的不飽和稠合雜環(huán)基，例如苯并氧硫雜環(huán)己二烯基(benzoxathiinyl)。雜環(huán)基也包括其中環(huán)中一個或多個S原子與一個或兩個氧原子形成雙鍵的上述基團(亞砜和砜)。例如，雜環(huán)基包括四氫噻吩氧化物和四氫噻吩1，1-氧化物。雜環(huán)基優(yōu)選含有5或6個環(huán)原子。雜環(huán)基更優(yōu)選包括嗎啉(基)、哌嗪(基)、哌啶(基)、吡咯烷(基)、咪唑(基)、吡唑(基)、1，2，3-三唑(基)、1，2，4-三唑(基)、四唑(基)、噻吩(基)、硫代嗎啉(基)(thiomorpholine)、其中硫代嗎啉的S原子與一個或多個O原子連接的硫代嗎啉(基)、吡咯(基)、高哌嗪(基)、唑烷-2-酮(基)、吡咯烷-2-酮(基)、唑(基)、喹寧環(huán)(基)、噻唑(基)、異唑(基)、呋喃(基)和四氫呋喃(基)。
短語“取代的雜環(huán)基”指如上定義的未取代的雜環(huán)基，其中一個或多個環(huán)原子與非氫原子相連，所述非氫原子例如是以上關(guān)于取代的烷基和取代的芳基所述的。例子包括但不限于2-甲基苯并咪唑基、5-甲基苯并咪唑基、5-氯苯并噻唑基、N-烷基哌嗪基，如1-甲基哌嗪基、哌嗪-N-氧化物、N-烷基哌嗪N-氧化物、2-苯氧基-噻吩和2-氯吡啶基等。此外，取代的雜環(huán)基也包括其中連接非氫原子的鍵是連接碳原子的鍵的雜環(huán)基，所述碳原子是取代與未取代的芳基、取代與未取代的芳烷基或未取代的雜環(huán)基的一部分。例子包括但不限于1-芐基哌啶基、3-苯基硫代嗎啉基(3-phenythiomorpholinyl)、3-(吡咯烷-1-基)-吡咯烷基和4-(哌啶-1-基)-哌啶基。一些取代的雜環(huán)基的例子是N-烷基取代的哌嗪基，例如N-甲基哌嗪，取代的嗎啉基和哌嗪N-氧化物基團，例如哌嗪N-氧化物和N-烷基哌嗪N-氧化物。特別適合作為R6或R7基團的一些取代的雜環(huán)基的例子是取代的哌嗪基，例如N-烷基取代的哌嗪基，如N-甲基哌嗪等，取代的嗎啉基，哌嗪N-氧化物和N-烷基哌嗪N-氧化物基團。
短語“未取代的雜環(huán)基烷基”指以上定義的未取代的烷基，其中未取代的烷基的氫或碳鍵被連接以上定義的雜環(huán)基的鍵替代。例如，甲基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基上的氫原子被連接雜環(huán)基的鍵替代，例如假設(shè)甲基的碳與吡啶的2位碳(與吡啶的N連接的碳原子之一)或吡啶的3位碳或4位碳連接，則該化合物是未取代的雜環(huán)基烷基。
短語“取代的雜環(huán)基烷基”相對于未取代的雜環(huán)基烷基的含義與取代的芳烷基具有相對于未取代的芳烷基的含義一樣。然而，取代的雜環(huán)基烷基也包括其中非氫原子與該雜環(huán)基烷基的雜環(huán)基中的雜原子，例如但不限于哌啶基烷基中哌啶環(huán)的氮原子連接的基團。此外，取代的雜環(huán)基烷基也包括以下基團其中該基團的烷基部分的碳鍵或氫鍵被連接取代和未取代的芳基或取代和未取代的芳烷基的鍵替代。例子包括但不限于苯基-(哌啶-1-基)-甲基和苯基-(嗎啉-4-基)-甲基。
短語“未取代的烷基氨基烷基”指以上定義的未取代的烷基，其中碳或氫鍵被連接氮原子的鍵替代，所述氮原子與氫原子和以上定義的未取代的烷基連接。例如，甲基(-CH3)是未取代的烷基。如果甲基上的氫原子被連接氮原子的鍵替代，所述氮原子與氫原子和乙基結(jié)合，則得到的化合物-CH2-N(H)(CH2CH3)是未取代的烷基氨基烷基。
除了連接一個或兩個烷基中的碳或氫原子的一個或多個鍵被連接以上取代的烷基所述的非碳或非氫原子的鍵取代外，短語“取代的烷基氨基烷基”指如上定義的未取代的烷基氨基烷基，連接所有烷基氨基烷基中的氮原子的鍵本身不使所有烷基氨基烷基成為取代的。然而，取代的烷基氨基烷基包括其中連接該基團的氮原子的氫被非碳和非氫原子替代的基團。
短語“未取代的二烷基氨基烷基”指如上定義的未取代的烷基，其中碳鍵或氫鍵被連接氮原子的鍵替代，所述氮原子連接如上定義的其它兩個類似或不同的未取代的烷基。
短語“取代的二烷基氨基烷基”指如上定義的未取代的二烷基氨基烷基，其中連接一個或多個烷基中碳或氫原子的一個或多個鍵被與取代的烷基所述的非碳和非氫原子相連的鍵替代。連接所有二烷基氨基烷基中的氮原子的鍵本身不使所有二烷基氨基烷基成為取代的。
短語“未取代的烷氧基”指以下羥基(-OH)其中連接氫原子的鍵被連接以上定義的其它未取代的烷基的碳原子的鍵替代。
短語“取代的烷氧基”指以下羥基(-OH)其中連接氫原子的鍵被連接以上定義的其它取代的烷基的碳原子的鍵替代。
短語“未取代的雜環(huán)氧基”指以下羥基(-OH)其中連接氫原子的鍵被連接以上定義的其它未取代的雜環(huán)基的環(huán)原子的鍵替代。
短語“取代的雜環(huán)氧基”指以下羥基(-OH)其中連接氫原子的鍵被連接以上定義的其它取代的雜環(huán)基的環(huán)原子的鍵替代。
短語“未取代的雜環(huán)氧基烷基”指如上定義的未取代的烷基其中碳鍵或氫鍵被與氧原子的鍵替代，所述氧原子與以上定義的未取代的雜環(huán)基相連。
短語“取代的雜環(huán)氧基烷基”指如上定義的未取代的雜環(huán)氧基烷基其中連接雜環(huán)氧基烷基中烷基的碳或氫基團的鍵與以上取代的烷基所述的非碳和非氫原子連接，或者其中所述雜環(huán)氧基烷基的雜環(huán)基是以上定義的取代的雜環(huán)基。
短語“未取代的雜環(huán)基烷氧基(heterocylylalkoxy)”指如上定義的未取代的烷基，其中碳鍵或氫鍵被連接與母體化合物連接的氧原子的鍵替代，并且其中未取代的烷基的另一碳或氫鍵與如上定義的未取代的雜環(huán)基連接。
短語“取代的雜環(huán)基烷氧基”指如上定義的未取代的雜環(huán)基烷氧基，其中與所述雜環(huán)基烷氧基的烷基部分的碳或氫的鍵被連接到上文關(guān)于取代的烷基所述的非碳和非氫原子，或者其中雜環(huán)基烷氧基的雜環(huán)基是如上定義的取代的雜環(huán)基。此外，取代的雜環(huán)基烷氧基也包括其中連接該基團的烷基部分的碳鍵或氫鍵被一個或多個其它的取代和未取代的雜環(huán)基取代的基團。例子包括但不限于吡啶-2-基嗎啉-4-基甲基和2-吡啶-3-基-2-嗎啉-4-基乙基。
短語“未取代的芳基氨基烷基”指如上定義的未取代的烷基，其中碳鍵和氫鍵被與氮原子的鍵替代，所述氮原子與至少一個如上定義的未取代的芳基連接。
短語“取代的芳基氨基烷基”指如上定義的未取代的芳基氨基烷基，除了芳基氨基烷基的烷基是如上定義的取代的烷基或者芳基氨基烷基的芳基是取代的芳基，除了連接所有芳基氨基烷基中的氮原子的鍵本身不使所有芳基氨基烷基成為取代的。然而，取代的芳基氨基烷基不包括其中與該基團的氮原子連接的氫被非碳和非氫原子替代的基團。
短語“未取代的雜環(huán)基氨基烷基”指如上定義的未取代的烷基，其中碳或氫鍵被與氮原子的鍵替代，所述氮原子與至少一個以上定義的未取代的雜環(huán)基連接。
短語“取代的雜環(huán)基氨基烷基”指如上定義的未取代的雜環(huán)基氨基烷基，其中雜環(huán)基是如上定義的取代的雜環(huán)基和/或烷基是如上定義的取代的烷基。連接所有雜環(huán)基氨基烷基中的氮原子的鍵本身不使所有雜環(huán)基氨基烷基成為取代的。然而，取代的雜環(huán)基氨基烷基不包括其中與所述基團的氮原子連接的氫被非碳和非氫原子替代的基團。
短語“未取代的烷基氨基烷氧基”指如上定義的未取代的烷基，其中碳或氫鍵被與氧原予的鍵替代，所述氧原子與母體化合物連接，并且其中未取代的烷基的另一碳或氫鍵連接到氮原子，所述氮原子與氫原子和如上定義的未取代的烷基連接。
短語“取代的烷基氨基烷氧基”指如上定義的未取代的烷基氨基烷氧基，其中與連接在母體化合物的氧原子連接的烷基的碳或氫原子的鍵被一個或多個與非碳和非氫原子的鍵取代，如以上對取代的烷基的描述，和/或如果連接到氨基的氫連接到非碳和非氫原子和/或如果連接到胺的氮的烷基連接到非碳和非氫原子，如以上對取代的烷基的描述。所有烷基氨基烷氧基中存在胺和烷氧基官能團本身不使所有這種基團成為取代的烷基氨基烷氧基。
短語“未取代的二烷基氨基烷氧基”指如上定義的未取代的烷基，其中碳或氫鍵被與氧原子的鍵替代，所述氧原子與母體化合物連接，并且其中未取代的烷基的另一碳或氫鍵與氮原子結(jié)合，所述氮原子連接如上定義的其它兩個類似或不同的未取代的烷基。
短語“取代的二烷基氨基烷基”指如上定義的未取代的二烷基氨基烷氧基，其中與連接在母體化合物的氧原子連接的烷基的碳或氫原子的鍵被一個或多個與非碳和非氫原子的鍵取代，如以上對取代的烷基的描述，和/或如果連接到胺的氮的烷基連接到非碳和非氫原子，如以上對取代的烷基的描述。。所有二烷基氨基烷氧基中存在胺和烷氧基官能團本身不使所有這種基團成為取代的二烷基氨基烷氧基。
關(guān)于羥基、胺基和巰基的術(shù)語“受保護的”指用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的保護基團來保護這些官能團以免發(fā)生不利反應的形式，所述保護基團例如《有機合成中的保護基團》(Protective Groups in Organic Synthesis)，Greene，T.W.；Wuts，P.G.M.，John Wiley & Sons，New York，NY，(第3版，1999)所列出的，這些保護基團可用書中所述的方法加上或除去。受保護的羥基的例子包括但不限于甲硅烷基醚，例如通過羥基與以下試劑反應得到，所述試劑例如但不限于叔丁基二甲基-氯硅烷、三甲基氯硅烷、三異丙基氯硅烷、三乙基氯硅烷；取代的甲醚和乙醚，例如但不限于甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚(methythiomethyl ether)、芐氧基甲基醚、叔丁氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氫吡喃基醚、1-乙氧基乙基醚、烯丙基醚、芐基醚；酯類，例如但不限于苯甲酰甲酸酯(benzoylformate)、甲酸酯、乙酸酯、三氯乙酸酯和三氟乙酸酯。受保護的胺基包括但不限于酰胺，例如甲酰胺、乙酰胺、三氟乙酰胺和苯甲酰胺；二酰亞胺，例如苯鄰二甲酰亞胺和二硫代琥珀酰亞胺；等等。受保護的巰基包括但不限于硫醚，例如S-芐基硫醚和S-4-吡啶甲基硫醚；取代的S-甲基衍生物，例如半硫代縮醛、二硫代縮醛和氨基硫縮醛；等等。
“藥學上可接受的鹽”包括與無機堿、有機堿、無機酸、有機酸或堿性或酸性氨基酸形成的鹽。就無機堿形成的鹽而言，本發(fā)明包括，例如堿金屬，如鈉或鉀；堿土金屬，如鈣或鎂；或鋁和氨(形成的鹽)。就有機堿形成的鹽而言，本發(fā)明包括，例如三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺(形成的鹽)。就無機酸形成的鹽而言，本發(fā)明包括，例如鹽酸、硼氫酸(hydroboric acid)、硝酸、硫酸和磷酸(形成的鹽)。就有機酸形成的鹽而言，本發(fā)明包括，例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、反丁烯二酸、草酸、酒石酸、乳酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸和對甲苯磺酸(形成的鹽)。就堿性氨基酸形成的鹽而言，本發(fā)明包括，例如精氨酸、賴氨酸和鳥氨酸(形成的鹽)。酸性氨基酸包括，例如天冬氨酸和谷氨酸。
一方面，本發(fā)明提供調(diào)節(jié)對象的炎性應答和/或降低細胞粘著的方法。這種方法包括給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。給予所述化合物、所述互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物后，對象的炎性應答得到調(diào)節(jié)和/或細胞粘著被降低。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供治療人或動物對象的與炎癥相關(guān)的疾病的方法。該方法包括給予人或動物對象有效量的結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。炎癥和炎性應答可伴隨各種生物狀況發(fā)生。這種生物狀況的例子包括癌癥、自身免疫疾病、哮喘、過敏反應、濕疹、微生物感染、諸如燒傷或割傷的外傷、狼瘡、關(guān)節(jié)炎、心血管疾病(例如但不限于中風和局部缺血病損)、呼吸道細菌和病毒感染以及其它炎性應答相關(guān)疾病。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供治療人或動物對象中與細胞粘著相關(guān)的疾病的方法。該方法包括給予人或動物對象有效量的結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供降低人或動物對象的細胞粘著分子，例如ICAM、VCAM、E-選凝素、MMP-2或MMP-9水平的方法。該方法包括給予人或動物對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。給藥后，對象中細胞粘著分子的量通常減少。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供降低人或動物對象的循環(huán)ICAM、VCAM、E-選凝素、MMP-2或MMP-9水平的方法。該方法包括給予人或動物對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供減少人或動物對象的循環(huán)細胞粘著分子的方法。該方法包括給予人或動物對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物。
在還有另一實施方案中，本發(fā)明提供監(jiān)測人或動物對象的疾病或治療的進展的方法。該方法包括給予人或動物對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物并測定對象中諸如ICAM、VCAM、E-選凝素、MMP-2或MMP-9的分子水平的量。
在另一方面，本發(fā)明提供監(jiān)測人或動物對象的疾病或治療的進展的方法。該方法包括在給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物之后測定對象中的至少一種細胞粘著分子的量。在一些實施方案中，細胞粘著分子選自可誘導的粘著分子(ICAM)、血管細胞粘著分子(VCAM)或內(nèi)皮白細胞粘著分子(E-選凝素)。一些這樣的方法還包括從對象采集血樣然后測定至少一部分樣品中的至少一種細胞粘著分子的量。
在另一方面，本發(fā)明提供鑒定需要結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物的對象的方法。該方法包括在給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物之前、期間或之后測定對象中的至少一種細胞粘著分子的量。在一些實施方案中，所述細胞粘著分子選自可誘導的粘著分子、血管細胞粘著分子或內(nèi)皮白細胞粘著分子。在一些實施方案中，所述細胞粘著分子選自可誘導的粘著分子(ICAM)、血管細胞粘著分子(VCAM)或內(nèi)皮白細胞粘著分子(E-選凝素)。一些這樣的方法還包括從對象采集血樣然后測定至少一部分樣品中的至少一種細胞粘著分子的量。
在本文所述任何方法的一些實施方案中，對象是癌癥患者。
結(jié)構(gòu)I如下式所示
其中，R1、R2、R3和R4可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO2、-OH、-OR15基團、-NR16R17基團、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和-C(＝O)R18基團；R5、R6、R7和R8可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-NO2、-OH、-OR19基團、-NR20R21基團、-SH、-SR22基團、-S(＝O)R23基團、-S(＝O)2R24基團、-CN、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代和未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)R25基團、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R12選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R13選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-OH、烷氧基、芳氧基、-NH2、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基、取代與未取代的芳基氨基、取代與未取代的二烷基氨基、取代與未取代的二芳基氨基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R15和R18可以相同或不同，它們獨立選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的二雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R16和R20可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R17和R21可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R18、R23、R24和R25可以相同或不同，它們獨立選自H、-NH2、-NH(烷基)、-NH(芳基)、-N(烷基)2、-N(芳基)2、-N(烷基)(芳基)、-NH(雜環(huán)基)、-N(雜環(huán)基)(烷基)、-N(雜環(huán)基)(芳基)、-N(雜環(huán)基)2、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、-OH、取代與未取代的烷氧基、取代與未取代的芳氧基、取代與未取代的雜環(huán)基、-NHOH、-N(烷基)OH、-N(芳基)OH、-N(烷基)O-烷基、-N(芳基)O-烷基、-N(烷基)O-芳基和-N(芳基)O-芳基；和R22選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基。
在結(jié)構(gòu)I所示化合物或所述化合物的互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽的一些實施方案中，R5、R6、R7或R8中的至少一個選自取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的飽和的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；-OR19基團，其中R19選自取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的二雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；-NR20R21基團，其中R20選自取代與未取代的雜環(huán)基；-NR20R21基團，其中R21選自取代與未取代的雜環(huán)基、-C(＝O)H、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；和-C(＝O)R25基團，其中R25選自H、-NH2、-NH(烷基)、-NH(芳基)、-N(烷基)2、-N(芳基)2、-N(烷基)(芳基)、-NH(雜環(huán)基)、-N(雜環(huán)基)(烷基)、-N(雜環(huán)基)(芳基)、-N(雜環(huán)基)2、取代與未取代的芳基、取代與未取代的芳氧基和取代與未取代的雜環(huán)基。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物1)或其互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽。在一些這樣的實施方案中，所述鹽選自酒石酸鹽、蘋果酸鹽、乳酸鹽、雙乙酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽、雙甲磺酸鹽和雙鹽酸鹽(bishydrochloride)。
在一些具體的實施方案中，結(jié)構(gòu)I所示化合物是4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮或其互變異構(gòu)體的乳酸鹽。
在一些具體的實施方案中，給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，所述鹽是乳酸鹽。
在一些實施方案中，R12和R13中至少一個是H，在其它實施方案中R12和R13均是H。
在一些實施方案中，R1選自F、Cl、取代與未取代的烷氧基、取代與未取代的雜環(huán)基烷氧基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷氧基、取代與未取代的芳基氨基烷氧基、取代與未取代的二烷基氨基烷氧基、取代與未取代的二芳基氨基烷氧基和取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷氧基。
在一些實施方案中，R1是F，R2、R3、R3、R4、R5和R8均是H，R6或R7之一是H。
在一些其它實施方案中，R5、R6、R7和R8中的至少一個是取代或未取代的雜環(huán)基。
在還有其它實施方案中，R5、R6、R7和R8中的至少一個是含有至少一個O或N原子的取代或未取代的雜環(huán)基。
在還有其它實施方案中，R5、R6、R7和R8中的至少一個是取代或未取代的雜環(huán)基并且所述雜環(huán)基選自嗎啉(基)、哌嗪(基)、哌啶(基)、吡咯烷(基)、硫代嗎啉(基)、高哌嗪(基)、四氫噻吩(基)、四氫呋喃(基)和四氫吡喃(基)。
在還有其它實施方案中，R6或R7中的至少一個是取代或未取代的雜環(huán)基。
在還有其它實施方案中，R6或R7中的至少一個是含有至少一個O或N原子的取代或未取代的雜環(huán)基。
在還有其它實施方案中，R6或R7之一是取代或未取代的雜環(huán)基并且所述雜環(huán)基選自嗎啉(基)、哌嗪(基)、哌啶(基)、吡咯烷(基)、硫代嗎啉(基)、高哌嗪(基)、四氫噻吩(基)、四氫呋喃(基)和四氫吡喃(基)。
在還有其它具體的實施方案中，R6或R7之一選自取代與未取代的嗎啉基和取代與未取代的哌嗪基。在一些這樣的實施方案中，R6或R7之一是哌嗪N-氧化物或N-烷基取代的哌嗪(基)。
在還有其它實施方案以及一些實施方案中，R6或R7中的至少一個選自-NR20R21基團，其中R20選自取代與未取代的雜環(huán)基；和-NR20R21基團，其中R21選自取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基。
在還有另一實施方案中，R1選自H和F。
在還有另一實施方案中，下面兩個表格列出了所述化合物與它們相應的鹽和互變異構(gòu)體。這些化合物的合成方法描述于有關(guān)各種激酶試驗方法的美國專利號6,605,617；公布的美國專利申請?zhí)?004/0092535；公布的美國專利申請?zhí)?004/0220196。因此，每篇參考文獻如同全文列出一樣，出于所有目的全文納入本文作為參考。
示范性化合物表
其它示范性化合物的表
在還有另一實施方案中，結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物，其中結(jié)構(gòu)II如下式所示
其中，A具有如下所示結(jié)構(gòu)之一
其中，Ra選擇H或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
在一些實施方案中，當結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物時，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如結(jié)構(gòu)IIA所示化合物。
在一些具體的實施方案中，結(jié)構(gòu)IIA所示化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物給予患者，并且所述鹽是乳酸鹽。
在一些實施方案中，當結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物時，Ra是H，結(jié)構(gòu)II所示化合物是結(jié)構(gòu)IIB所示化合物。
在一些實施方案中，當結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物時，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如結(jié)構(gòu)IIC所示化合物。
任何實施方案的化合物可用于制備本發(fā)明任何方法所用的藥物或藥學制劑。
本發(fā)明所用的藥學制劑可包括任何上述實施方案的任何化合物、互變異構(gòu)體或鹽和藥學上可接受的載體(例如本文所述的)的組合。
本發(fā)明也提供通過混合本發(fā)明的一種或多種化合物或它們的藥學上可接受的鹽互變異構(gòu)體或它們的混合物與藥學上可接受的載體、賦形劑、粘合劑、稀釋劑等制備的組合物來治療或緩解與轉(zhuǎn)移性腫瘤相關(guān)的疾病。本發(fā)明的組合物可用于制備本發(fā)明任何方法所用的制劑。這種組合物的形式可以是，例如粒劑、粉末劑、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酏劑、懸液或溶液。本發(fā)明的組合物可配制為各種給藥途徑，例如通過口服給藥、鼻給藥、直腸給藥、皮下注射、靜脈內(nèi)注射、肌肉內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射。以下劑型只是例子，不應理解為是對本發(fā)明的限制。
就口服、口腔含服和舌下給藥而言，粉劑、懸液、粒劑、片劑、丸劑、膠囊、明膠膠囊和小膠囊(caplet)是可接受的固體劑型?？赏ㄟ^例如將本發(fā)明的一種或多種化合物、藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體或它們的混合物與至少一種添加劑，例如淀粉或其它添加劑混合來制備這些劑型。合適的添加劑是蔗糖、乳糖、纖維素糖、甘露醇、麥芽糖醇、葡聚糖、淀粉、瓊脂、海藻酸鹽、幾丁質(zhì)、殼聚糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成的聚合物或甘油酯?？诜┬腿芜x含有其它成分以協(xié)助給藥，例如無活性的稀釋劑或潤滑劑，如硬脂酸鎂；或防腐劑，如對羥基苯甲酸酯或山梨酸；或抗氧化劑，如抗壞血酸、生育酚或半胱氨酸；崩解劑；粘合劑；增稠劑；緩沖劑；甜味劑；調(diào)味劑或加香劑?？捎帽绢I(lǐng)域已知的合適的包衣材料進一步處理片劑和丸劑。
口服給藥的液體劑型可以是藥學上可接受的乳劑、糖漿、酏劑、懸液和溶液的形式，這些形式可含有無活性的稀釋劑，例如水?？捎脽o菌液體，例如但不限于油、水、醇和這些物質(zhì)的組合將藥學制劑和藥物制備為液體懸液或溶液?？杉尤胨帉W上合適的表面活性劑、懸浮劑、乳化劑來口服或胃腸外給藥。
如上所述，懸液可包括油。這種油包括但不限于花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油和橄欖油。懸液制劑也可含有脂肪酸酯，例如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、脂肪酸甘油酯和乙酰化的脂肪酸甘油酯。懸液制劑可包含醇類，例如但不限于乙醇、異丙醇、十六烷醇、甘油和丙二醇。懸液制劑中也可使用醚類，例如但不限于聚(乙二醇)，石油烴類，例如礦物油和礦脂；和水。
就鼻給藥而言，藥學制劑和藥物可以是含適當?shù)娜軇┖腿芜x的其它化合物的噴劑或氣溶膠，所述其它化合物例如但不限于穩(wěn)定劑、抗菌劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度修飾劑和這些物質(zhì)的組合。氣溶膠制劑的推進劑可含有壓縮空氣、氮氣、二氧化碳或低沸點的烴類。
可注射劑型一般包括可用合適的分散劑或潤濕劑和懸浮劑制備的水性懸液或油性懸液?？勺⑸鋭┬涂梢允怯萌軇┗蛐揎梽┲苽涞娜芤合嗷驗閼乙盒问??？山邮艿娜軇┗蜻\載體包括無菌水、林格溶液或等滲鹽水溶液?；蛘?，無菌油可用作溶劑或懸浮劑。油或脂肪酸優(yōu)選非揮發(fā)性的，包括天然或合成的油、脂肪酸、甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯。
就注射而言，藥學制劑和/或藥物可以是適合于用上述合適的溶液重建的粉末。例子包括但不限于冷凍干燥、旋狀干燥或噴霧干燥的粉末、無定形粉末、粒劑、沉淀物或細粒劑。就注射而言，制劑和任選含有穩(wěn)定劑、pH調(diào)節(jié)劑、表面活性劑、生物利用度修飾劑和這些物質(zhì)的組合。
就直腸給藥而言，藥學制劑和藥物可以是栓劑、軟膏、灌腸劑、片劑或乳膏的形式，以將化合物釋放在腸、乙狀結(jié)腸曲和/或直腸中。通過將本發(fā)明的一種或多種化合物或該化合物的藥學上可接受的鹽或互變異構(gòu)體與可接受的運載體，例如可可油或聚乙二醇混合來制備直腸栓劑，所述直腸栓劑在正常的儲存溫度下為固態(tài)，在適合將藥物釋放到體內(nèi)如直腸的溫度下是液態(tài)。油類也可用于制備軟明膠類制劑和栓劑。也含有果膠、卡波姆、甲基纖維素、羥丙基纖維素或羧甲基纖維素以及緩沖劑和防腐劑的懸液制劑可用水、鹽水、葡聚糖水溶液和相關(guān)的糖溶液制備。
除了上述代表性的劑型，藥學上可接受的賦形劑和載體一般是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，因而包括于本發(fā)明中。這種賦形劑和載體描述于，例如《雷明頓藥物科學》(Remingtons Pharmaceutical Sciences)，Mack Pub.Co.，New Jersey(1991)，該書如同全部列出一樣，出于所有目的納入本文作為參考。
本發(fā)明的制劑可設(shè)計為下述的短效、快速釋放、長效和緩釋形式。因此，藥學制劑也可配制為控釋或緩慢釋放形式。
本發(fā)明的組合物也可包含，例如微膠粒或脂質(zhì)體，或一些其它被囊(encapsulated)形式，或可以延長釋放的形式給藥從而提供延長的存儲和/或遞送作用。因此，藥學制劑和藥物可壓縮為丸狀或圓柱形，作為長效注射劑(depot injection)或植入物，例如支架(stent)經(jīng)肌肉內(nèi)或皮下植入。這種植入物可利用已知的惰性材料，例如硅酮和生物可降解的聚合物。
可視對象的疾病條件、年齡、體重、總體健康狀況、性別和飲食、給藥間隔、給藥途徑、排出率和藥物的組合來調(diào)整具體的劑量。任何含有有效量的任何上述劑型在常規(guī)實驗的范圍內(nèi)，因此也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
治療有效劑量視給藥途徑和劑型而不同。優(yōu)選的本發(fā)明的一種或多種化合物是顯示高治療指數(shù)的制劑。治療指數(shù)是毒性作用和治療性作用之間的劑量比，其表示為LD50和ED50之比。LD50是50％(受者)群體的致死劑量，ED50是在50％(受者)群體中治療有效的劑量。LD50和ED50通過標準藥學方法在動物細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏写_定。
本發(fā)明的藥學制劑和藥物包括結(jié)構(gòu)I所示化合物或互變異構(gòu)體、鹽或它們的混合物與藥學上可接受的載體的組合。因此，本發(fā)明的化合物可用于制備藥物和藥學制劑。這種藥物和藥學制劑可用于本文所述的任何治療方法中。
本發(fā)明的化合物和制劑特別適用于組合治療。與本發(fā)明的方法或組合物聯(lián)用的作為抗癌癥藥物的激酶抑制劑包括表皮生長因子受體(EGFR)激酶抑制劑，例如小分子喹唑啉，如吉非替尼(gefitinib)(US 5457105、US 5616582和US 5770599)、ZD-6474(WO 01/32651)、埃羅替尼(erlotinib)(Tarceva，US 5,747,498和WO96/30347)和拉帕替尼(1apatinib)(US 6,727,256和WO 02/02552)。與本發(fā)明的方法或組合物聯(lián)用的作為抗癌癥藥物的激酶抑制劑也包括血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)激酶抑制劑，例如但不限于SU-11248(WO 01/60814)、SU 5416(US5,883,113和WO 99/61422)、SU 6668(US 5,883,113和WO 99/61422)、CHIR-258(US6,605,617和US 6,774,237)、瓦塔拉尼(vatalanib)或PTK-787(US 6,258,812)、VEGF-Trap(WO 02/57423)、B43-染料木因(WO-09606116)、芬維A胺(fenretinide)(視黃酸對羥基苯胺)(US 4,323,581)、IM-862(WO 02/62826)、貝伐單抗(bevacizumab)或Avastin(WO 94/10202)、KRN-951、3-[5-(甲基磺?；哙ぜ谆?-吲哚基]-喹諾酮(3-[5-(methylsulfonylpiperadine methyl)-indolyl]-quinolone)、AG-13736和AG-13925、吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪、ZK-304709、Veglin、VMDA-3601、EG-004、CEP-701(US 5,621,100)和Cand5(WO 04/09769)。
本發(fā)明的化合物可用于治療各種對象。合適的對象包括動物，例如哺乳動物和人。合適的哺乳動物包括但不限于靈長類動物，例如但不限于狐猴、猿和猴；嚙齒類動物，例如大鼠、小鼠和豚鼠；家兔和野兔；牛；馬；豬；山羊；綿羊；有袋類動物和食肉動物，例如貓科動物、犬科動物和熊。在一些實施方案中，對象或患者是人。在其它實施方案中，對象或患者是嚙齒類動物，例如小鼠或大鼠。在一些實施方案中，對象或患者是除人以外的動物，在一些這樣的實施方案中，對象或患者是除人以外的哺乳動物。
化合物的純化和特征鑒定通過使用裝有2690分離模塊的Waters Millenium液相系統(tǒng)(Milford，馬薩諸塞州)的高效液相(HPLC)鑒定本發(fā)明化合物的特征。分析柱是Alltech(Deerfield，伊利諾斯州)的Alltima C-18反相柱，4.6×250mm。使用梯度洗脫，一般始于5％乙腈/95％水，在40分鐘期間漸增至100％乙腈。所有溶劑含有0.1％三氟乙酸(TFA)。通過220或254nm處的紫外(UV)吸收來檢測化合物。HPLC溶劑得自Burdick and Jackson(Muskegan，密歇根州)或Fisher Scientific(Pittsburg，賓夕法尼亞州)。在一些情況中，使用玻璃或塑料襯底(backed)的硅膠板，例如Baker-Flex硅膠1B2-F可彎曲板通過薄層層析(TLC)來估計純度。TLC結(jié)果在紫外光下，或利用熟知的碘蒸氣和其它各種顯色技術(shù)不難檢測。
質(zhì)譜分析用兩臺LCMS儀器之一進行Waters系統(tǒng)(Alliance HT HPLC和Micromass ZQ質(zhì)譜儀；柱Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶劑系統(tǒng)水配制的5-95％乙腈，含0.05％TFA；流速0.8mL/分鐘；分子量范圍150-850；圓錐電壓(Cone Voltage)20V；柱溫40℃)或Hewlett Packard系統(tǒng)(1100系列HPLC；柱Eclipse XDB-C18，2.1×50mm；溶劑系統(tǒng)水配制的1-95％乙腈，含0.05％TFA；流速0.4mL/分鐘；分子量范圍150-850；圓錐電壓50V；柱溫30℃)。所有質(zhì)量記錄為質(zhì)子化母體離子的質(zhì)量。
GCMS分析在Hewlet Packard儀器上進行(裝有質(zhì)量選擇性檢測器5973的HP6890系列氣相色譜；注射器體積1μL；起始柱溫50℃；最終柱溫250℃；梯度時間(Ramp time)20分鐘；氣體流速1mL/分鐘；柱5％苯基甲基硅氧烷，#HP 190915-443型，尺寸30.0m×25μm×0.25μm)。
使用Flash 40色譜系統(tǒng)和KP-Sil，60A(Biotage，Charlottesville，維吉尼亞州)或通過使用C-18反相柱的HPLC進行制備型分離。Flash 40Biotage系統(tǒng)中通常使用的溶劑是二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、己烷和三乙胺。反相HPLC中通常使用的溶劑是各種濃度的含0.1％三氟乙酸的乙腈和水。
合成4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮 A.合成5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺方法A 5-氯-2-硝基苯胺(500g，2.898mol)和1-甲基哌嗪(871g，8.693mol)置于裝有冷凝器的2000mL燒瓶中并用N2吹掃。燒瓶置于100℃的油浴中并加熱直至用HPLC測定到5-氯-2-硝基苯胺完全反應(通常要過夜)。HPLC確定5-氯-2-硝基苯胺消失后，反應混合物(仍是熱的)直接倒入2500mL室溫的水中并攪拌。攪拌得到的混合物直至達到室溫，然后過濾。如此得到的黃色固體加入到1000mL水中并攪拌30分鐘。過濾得到的混合物，用TBME(500mL，2×)洗滌得到的固體，然后用橡皮障(rubber dam)真空干燥1小時。將得到的固體轉(zhuǎn)移至干燥的托盤，在50℃的真空烘箱中干燥至恒重，得到670g(97.8％)黃色粉末狀的標題化合物。
方法B將5-氯-2-硝基苯胺(308.2g，1.79mol)加入裝有頂部攪拌器、冷凝器、氣體入口、加料漏斗和溫度計探頭的5000mL的4-頸圓底燒瓶中。然后用N2吹掃該燒瓶。在攪拌下，將1-甲基哌嗪(758.1g，840mL，7.57mol)和200標準乙醇(508mL)加入反應燒瓶。再次以N2吹掃該燒瓶，反應維持在N2氣氛中。在加熱套中將該燒瓶加熱至內(nèi)部溫度為97℃(+/-5℃)并維持于該溫度直至HPLC確定反應完成(通常約40小時)。反應完成后，停止加熱，在攪拌下，使反應混合物冷卻至內(nèi)部溫度約為20℃-25℃，反應攪拌2-3小時。除非已有沉淀，否則將5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺的晶種(0.20g，0.85mmol)加入反應混合物。在約1小時期間將水(2,450mL)加入到攪拌的反應混合物中同時使內(nèi)部溫度維持于約20℃-30℃。加水完成后，得到的混合物于20℃-30℃的溫度攪拌約1小時。然后過濾得到的混合物，用水(3×2.56L)洗滌燒瓶和濾餅。金黃色固體產(chǎn)物在約50℃的真空烘箱中真空干燥至恒重，416g(產(chǎn)率為98.6％)。
方法C5-氯-2-硝基苯胺(401g，2.32mol)加入裝有頂部攪拌器、冷凝器、氣體入口、加料漏斗和溫度計探頭的12L的4-頸圓底燒瓶中。然后用N2吹掃該燒瓶。在攪拌下，將1-甲基哌嗪(977g，1.08L，9.75mol)和100％乙醇(650mL)加入反應燒瓶。再次以N2吹掃該燒瓶，反應維持在N2氣氛中。在加熱套中將該燒瓶加熱至內(nèi)部溫度為97℃(+/-5℃)并維持于該溫度直至HPLC確定反應完成(通常約40小時)。反應完成后，停止加熱，在攪拌下，使反應混合物冷卻至內(nèi)部溫度約為80℃，在1小時期間經(jīng)加料漏斗向混合物中加入水(3.15L)同時使內(nèi)部溫度維持于約82℃(+/-3℃)。加水完成后，停止加熱反應混合物在不少于4小時期間冷卻至內(nèi)部溫度為20-25℃。然后于內(nèi)部溫度為20-30C再攪拌反應混合物1小時。過濾得到的混合物，用水(3×2.56L)、50％乙醇(1×1L)和95％乙醇(1×1L)洗滌燒瓶和濾餅。金黃色固體產(chǎn)物置于干燥的盤中，在約50℃的真空烘箱中真空干燥至恒重，546g(產(chǎn)率為99％)。
B.合成[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯方法A 給5000mL的4-頸燒瓶裝上攪拌器、溫度計、冷凝器和氣體進/出口。裝好的燒瓶中加入265.7g(1.12mol，1.0當量)的5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺和2125mL的200標準強度(proof)EtOH。N2吹掃得到的溶液15分鐘。然后加入20.0g的5％Pd/C(50％H2O w/w)。于40-50℃(內(nèi)部溫度)劇烈攪拌反應物同時用H2對混合物鼓泡。通過HPLC每小時監(jiān)測反應中5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺的消失情況。反應時間一般是6小時。
所有5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺從反應物中消失后，N2吹掃溶液15分鐘。然后加入固體狀的440.0g(2.25mol)鹽酸3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯。反應于40-50℃(內(nèi)部溫度)攪拌直至反應完成。通過HPLC檢測二氨基化合物的消失情況來監(jiān)測反應。反應時間一般是1-2小時。反應完成后，冷卻至室溫，經(jīng)硅藻土(Celite)過濾材料墊過濾。用無水EtOH(2×250mL)洗滌硅藻土過濾材料，減壓濃縮濾液得到稠的棕色/橙色油狀物。將得到的油狀物溶解在850mL0.37％HCl溶液中。然后一次性加入固體NaOH(25g)，有沉淀物形成。得到的混合物攪拌1小時，然后過濾。H2O(2×400mL)洗滌固體，并于50℃在真空烘箱內(nèi)干燥得到251.7g(74.1％)淺黃色粉末狀的[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯。
方法B給5000mL的4-頸加套燒瓶裝上機械攪拌器、冷凝器、溫度探頭、氣體進口和油鼓泡器(oil bubbler)。裝好的燒瓶中加入300g(1.27mol)的5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺和2400mL的200標準強度EtOH(可以并且也用95％乙醇進行了反應，就該反應而言無需使用200標準乙醇)。攪拌得到的溶液并用N2吹掃15分鐘。然后向反應燒瓶中加入22.7g的5％Pd/C(50％H2O w/w)。反應容器用N2吹掃15分鐘。N2吹掃后，通過向燒瓶中維持緩慢但恒定的H2流來用H2吹掃反應容器。于45-55℃(內(nèi)部溫度)攪拌反應物同時用H2對混合物鼓泡直至HPLC確定5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺完全消耗。反應時間一般是6小時。
所有5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基苯胺從反應中消失后，N2吹掃溶液15分鐘。二胺中間體對空氣敏感，所以應小心以避免接觸空氣。在約30分鐘期間向反應混合物中加入500g(2.56mol)的鹽酸3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯。反應物在N2氣氛中于45-55℃(內(nèi)部溫度)攪拌直至HPLC確定二胺完全消耗。反應時間一般是約2小時。反應完成后，趁熱經(jīng)硅藻土墊過濾反應物。然后用200標準強度EtOH(3×285mL)洗滌反應燒瓶和硅藻土。濾液合并在5000mL燒瓶中，減壓除去約3300mL乙醇，得到橙色油狀物。依次向得到的油狀物中加入水(530mL)和1M HCL(350mL)并攪拌得到的混合物。劇烈攪拌得到的溶液的同時在約20分鐘期間加入30％NaOH(200mL)，內(nèi)部溫度維持于約25-30℃，pH調(diào)節(jié)至9-10之間。攪拌得到的懸液約4小時同時維持內(nèi)部溫度于約20-25℃。過濾得到的混合物，用H2O(3×300mL)洗滌濾餅。收集的固體在真空烘箱中于50℃真空干燥至恒重，得到345.9g(90.1％)淺黃色粉末狀的[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯。在另一后處理方法中，合并濾液并真空除去乙醇直至除去至少約90％的乙醇。然后向得到的油狀物中加入中性pH的水，將溶液冷卻至約0℃。然后緩慢加入20％NaOH水溶液并快速攪拌從而將pH上調(diào)至9.2(用pH計讀數(shù))。然后過濾得到的混合物并如上述干燥。另一后處理方法得到淡褐色到淡黃色，產(chǎn)率高達97％的產(chǎn)物。
減少[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯中水含量的方法將之前已經(jīng)后處理過并干燥至水含量約為8-9％H2O的[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(120.7g)置于2000mL圓底燒瓶中，用無水乙醇(500mL)溶解。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀加熱直至除去所有溶劑從而將琥珀色的溶液濃縮為稠的油狀物。該方法至少重復兩次。如此得到的稠的油狀物置于燒瓶并在真空烘箱中于50℃加熱過夜。卡爾費希爾分析結(jié)果表明水含量為5.25％。通過該方法降低水含量使得以下實施例的步驟中產(chǎn)率增高。可用其它溶劑，例如甲苯和THF代替該干燥方法中的乙醇。
C.合成4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮方法A 將[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(250g，820mmol)(如上所述用乙醇干燥)在裝有冷凝器、機械攪拌器、溫度探頭的5000mL燒瓶中溶解于THF(3800mL)并用氬氣吹掃。將2-氨基-6-氟-芐腈(95.3g，700mmol)加入溶液，內(nèi)部溫度升至40℃。當所有固體溶解并且溶液溫度達到40℃時，在5分鐘期間加入固體KHMDS(376.2g，1890mmol)。鉀堿加完后，得到非均勻的黃色溶液，內(nèi)部溫度升至62℃。60分鐘后，內(nèi)部溫度回落至40℃，HPLC確定反應完成(無起始物質(zhì)或未環(huán)化的中間體存在)。然后將稠的反應混合物倒入H2O(6000mL)中以猝滅(反應)并攪拌得到的混合物直至其達到室溫。然后過濾混合物，用水(1000mL 2×)洗滌過濾墊。亮黃色固體置于干燥托盤上，在真空烘箱內(nèi)于50℃干燥過夜，得到155.3g(47.9％)所需的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮。
方法B給5000mL的4-頸加套燒瓶裝上蒸餾裝置、溫度探頭、冷凝器、N2進口、加料漏斗和機械攪拌器。向反應器中加入[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(173.0g，570mmol)，用N2吹掃反應器15分鐘。然后在攪拌下，向燒瓶中加入干燥THF(2600mL)。所有固體溶解后，視需要采用加熱通過蒸餾除去溶劑(真空或大氣壓，較高的溫度有助于除水)。除去1000mL溶劑后，停止蒸餾，用N2吹掃反應物。然后向反應容器中加入1000mL干燥THF，當所有固體溶解后，再次進行蒸餾(真空或大氣壓)裝置再除去1000mL溶劑。這種加入干燥THF并除去溶劑的過程重復至少4次(第4次蒸餾除去60％的溶劑，而前3次只除去40％的溶劑)，然后取出1mL樣品用于卡爾費希爾分析來確定水含量。如果分析顯示樣品水含量低于0.20％，則如下段所述繼續(xù)反應。然而如果分析顯示水含量超過0.20％，則繼續(xù)上述干燥方法直至水含量達到低于0.20％。
采用上段所述方法使水含量達到低于或約為0.20％后，用回流冷凝器替代蒸餾裝置，向反應物中加入2-氨基-6-氟-芐腈(66.2g，470mmol)(一些方法中采用0.95當量)。然后將反應物加熱至內(nèi)部溫度為38-42℃。當內(nèi)部溫度達到38-42℃時，在5分鐘期間經(jīng)加料漏斗向反應物中加入KHMDS溶液(1313g，1.32mol，20％的KHMDS的THF溶液)，同時在加料期間使內(nèi)部溫度維持于約38-50℃。當鉀堿加入完成后，攪拌反應物3.5-4.5小時(在一些實施例中攪拌30-60分鐘，反應可能在該段時間內(nèi)完成)同時使內(nèi)部溫度維持于約38-42℃。然后從反應物中取樣并通過HPLC分析。如果反應未完成，在5分鐘期間再向燒瓶中加入KHMDS溶液，在38-42℃攪拌反應物45-60分鐘(KHMDS溶液的加入量按照下述確定如果IPC比率＜3.50，則加入125mL；如果10.0≥IPC比率≥3.50，則加入56mL；如果20.0≥IPC比率≥10，則加入30mL。IPC比率等于對應于4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮)的面積除以對應于未環(huán)化的中間體的面積)。反應一旦完成(IPC比率＞20)，將反應器冷卻至內(nèi)部溫度為25-30℃，并在15分鐘期間向反應器中加入水(350mL)同時維持內(nèi)部溫度為25-35℃(在其它方案中，反應在40℃進行，加水在5分鐘內(nèi)進行。猝滅較快減少了隨時間產(chǎn)生的雜質(zhì)量)。然后用蒸餾裝置替代回流裝置，視需要采用加熱通過蒸餾(真空或大氣壓)除去溶劑。除去1500mL溶劑后，停止蒸餾，用N2吹掃反應物。然后向反應燒瓶中加入水(1660mL)，同時維持內(nèi)部溫度于20-30℃。然后在20-30℃攪拌反應混合物30分鐘，隨后將其冷卻至內(nèi)部溫度為5-10℃，再攪拌1小時。過濾得到的懸液，用水(3×650mL)洗滌燒瓶和濾餅。如此得到的固體在真空烘箱中于50℃真空干燥至恒重，得到103.9g(42.6％產(chǎn)率)的黃色粉末狀4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮。
方法C 將[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-乙酸乙酯(608g，2.01mol)(干燥的)和2-氨基-6-氟-芐腈(274g，2.01mol)裝入4-頸的12L燒瓶中，該燒瓶放置于加熱套上并裝有冷凝器、機械攪拌器、氣體進口和溫度探頭。用N2吹掃反應容器，將甲苯(7.7L)加入反應混合物同時攪拌。用N2再次吹掃反應容器并使之維持于N2氣氛中。升高混合物的內(nèi)部溫度直至達到63℃(+/-3℃)?；旌衔锏膬?nèi)部溫度維持于63℃(+/-3℃)同時從燒瓶中減壓蒸餾出約2.6L甲苯(380+/-10托，蒸餾頭t＝40℃(+/-10℃)(采用卡爾非希爾分析來檢測混合物中的水含量。如果水含量高于0.03％，則再加入2.6L甲苯，重復蒸餾。重復該方法直至水含量達到低于0.03％)。水含量達到低于0.03％后，停止加熱，反應物在N2氣氛中冷卻至內(nèi)部溫度為17-19℃。然后在N2氣氛中向反應物中加入THF配制的叔丁醇鉀(20％的THF溶液；3.39kg，6.04摩爾叔丁醇鉀)，加入速度要使反應物的內(nèi)部溫度維持低于20℃。叔丁醇鉀加完后，在內(nèi)部溫度低于20℃攪拌反應物30分鐘。然后將溫度升至25℃，攪拌反應物至少1小時。再將溫度升至30℃，攪拌反應物至少30分鐘。隨后用HPLC檢測起始物質(zhì)的消耗來監(jiān)測反應的完成情況(一般是在2-3小時內(nèi)，兩種起始物質(zhì)均耗盡(面積％HPLC低于0.5％))。如果2小時后，反應未完成，則再一次性加入0.05當量的叔丁醇鉀，HPLC顯示反應完成時該方法終止。反應完成后，向攪拌的反應混合物中加入650mL水。然后將反應物升溫至內(nèi)部溫度為50℃并從反應混合物中減壓蒸餾除去THF(體積約為3L)。隨后用加料漏斗向反應混合物中滴加水(2.6L)。再將混合物冷卻至室溫并攪拌至少1小時。然后過濾混合物，用水(1.2L)、70％乙醇(1.2L)和95％乙醇(1.2L)洗滌濾餅。亮黃色的固體置于干燥托盤中并在真空烘箱內(nèi)于50℃干燥至恒重，得到674g(85.4％)所需的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮。
純化4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮裝有冷凝器、溫度探頭、N2進口和機械攪拌器的3000mL的4-頸燒瓶置于加熱套中。然后給燒瓶中加入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(101.0g，0.26mol)，該黃色固體懸浮于95％乙醇(1000mL)中并攪拌。在一些情況中采用8∶1的溶劑比。然后將懸液加熱至溫和地回流(溫度約為76℃)同時攪拌，約1小時。再攪拌反應物45-75分鐘同時回流。此時，停止加熱并將懸液冷卻至25-30℃。然后過濾懸液，用水(2×500mL)洗滌過濾墊。黃色固體置于干燥托盤中并在真空烘箱內(nèi)于50℃干燥至恒重(一般是16小時)得到97.2g(96.2％)黃色粉末狀的純化產(chǎn)物。
D.制備 4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮的乳酸鹽
給3000mL 4-頸加套燒瓶裝上冷凝器、溫度探頭、N2進口和機械攪拌器。反應容器用N2吹掃至少15分鐘，然后裝入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(484g，1.23mol)。制備D，L-乳酸(243.3g，1.72mol單體-見下段)、水(339mL)和乙醇(1211mL)的溶液，然后裝入反應燒瓶。以中速開始攪拌，反應物加熱至內(nèi)部溫度為68-72℃。反應物的內(nèi)部溫度維持于68-72℃15-45分鐘，然后停止加熱。得到的混合物經(jīng)10-20微米燒結(jié)玻璃過濾器(frit)過濾，濾液收集在12L燒瓶中。該12L燒瓶裝有內(nèi)部溫度探頭、回流冷凝器、加料漏斗、氣體進口和出口以及頂部攪拌器。然后以中速攪拌濾液并加熱至回流(內(nèi)部溫度約為78℃)。在約20分鐘期間向燒瓶中加入乙醇(3,596mL)同時維持溫和的回流。然后在15-25分鐘內(nèi)將反應燒瓶冷卻至內(nèi)部溫度約64-70℃并維持于該溫度約30分鐘。檢查反應器中的晶體。如果無晶體存在則向燒瓶中加入4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮乳酸鹽的晶體(484mg，0.1摩爾％)，反應物在64-70℃攪拌30分鐘隨后再次檢查燒瓶中的晶體。一旦存在晶體，將攪拌速度降至低速并在64-70℃再攪拌反應物90分鐘。然后在約2小時期間將反應物冷卻至約0℃，得到的混合物經(jīng)25-50微米燒結(jié)過濾器過濾。用乙醇(484mL)洗滌反應器并攪拌直至內(nèi)部溫度約為0℃。用冷乙醇洗滌濾餅，該方法重復至少兩次。收集的固體在真空烘箱中于50℃真空干燥至恒重得到510.7g(85.7％)黃色的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮乳酸鹽晶體。過濾過程中一般采用橡皮障或惰性條件。雖然干燥的固體未顯示出非常吸濕，潮濕的濾餅易于吸收水分從而變得發(fā)粘。應小心避免潮濕的濾餅與空氣長期接觸。
市售的乳酸通常含有約8-12％w/w的水，并含有除單體乳酸之外的二聚體和三聚體。乳酸二聚體和單體的摩爾比一般約為1.0∶4.7。商品級的乳酸可用于上段所述方法，因為單乳酸鹽優(yōu)先從反應混合物中沉淀。
鑒定代謝物在如本文引用的參考文獻所述的兩周毒性研究的合并(pooled)大鼠血漿中鑒定并表征了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-喹啉-2-酮(化合物1)的兩個代謝物。這兩種鑒定的代謝物是以下所示的哌嗪N-氧化物化合物(化合物2)和N-脫甲基化的化合物(化合物3)。
化合物2
化合物3化合物1-3的IC50采用本文引用的各種參考文獻所述的方法測定了許多蛋白質(zhì)酪氨酸激酶的激酶活性。其中一些列于下表。
表1.化合物1-3的IC50
合成4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基-4-氧化哌嗪-1-基(4-methyl-4-oxidopiperazin-1-yl))-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物2)和4-氨基-5-氟-3-(6-哌嗪-1-基-1H-苯并咪唑-2-基)喹啉-2(1H)-酮(化合物3)為證實所鑒定的化合物1的代謝物的結(jié)構(gòu)，獨立合成該兩種代謝物。
如以下方案所示合成化合物1的N-氧化物代謝物，化合物2。在乙醇、二甲基乙酰胺和過氧化氫的混合物中加熱化合物1。反應完成后，過濾分離化合物2并用乙醇洗滌。如果需要，該產(chǎn)物可通過柱層析進一步純化。
如以下方案所示合成化合物1的N-脫甲基代謝物，化合物3。用哌嗪處理5-氯-2-硝基苯胺得到4，然后用叔丁氧基羰基(Boc)保護4得到5。還原硝基在與3-乙氧基-3-亞氨基丙酸乙酯縮合得到6。用六甲基二硅氮烷鉀(potassiumhexamethyldisilazide)作為堿，縮合6與6-氟鄰氨基苯甲腈得到7。用HCl水溶液處理粗品7得到在純化后呈黃色/棕色固體的所需代謝物。
為鑒定4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-l-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮處理(過程中)的血漿生物標記(plasma biomarker)，使用4T1自發(fā)轉(zhuǎn)移性小鼠乳腺腫瘤模型并通過ELISA分析循環(huán)血清標記。
4T1乳腺腫瘤細胞作為皮下腫瘤在BALB/C小鼠中生長，當腫瘤達到約150mm3時，開始用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物1)處理(10、30、60、100和150mg/kg)。小鼠每日經(jīng)口服給藥，持續(xù)18天。
18天后，從每只小鼠收集血清，通過ELISA試驗測定循環(huán)細胞粘著分子、可溶性ICAM、VCAM和E-選凝素的水平。
圖1顯示了4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮在4T1鼠乳腺腫瘤模型中的作用。給藥18天后，皮下腫瘤的生長受到抑制(與對照相比為40-80％)，肝臟轉(zhuǎn)移完全抑制，肺轉(zhuǎn)移抑制達60-97％。圖1和下表中顯示了有關(guān)轉(zhuǎn)移發(fā)生率的各種數(shù)據(jù)。
在Nunc Maxisorb的“U”型底微量滴定板(#449824)的孔上以50μL/孔涂布磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)配制的5μg/mL單克隆捕獲抗體，大鼠抗小鼠VCAM-1(R&D Systems #BCA12)，37℃孵育1小時。用洗滌緩沖液[含0.1％吐溫20和1％山羊血清(Gibco BRL#16210-072)的PBS]洗滌板三次?？子?50μL/孔的洗滌緩沖液封閉并在37℃孵育1小時。從孔中除去封閉溶液，標準品(NOS衍生的重組小鼠VCAM-1/Fc嵌合體，R&D Systems #643-VM)和樣品用洗滌緩沖液稀釋并加入孔中。
標準品的使用范圍是4000pg/mL-31pg/mL。血清樣品稀釋為1/200，然后進行3倍連續(xù)稀釋。樣品和標準品以50μL/孔加入并在37℃孵育1小時。洗滌板3次并以50μL/孔與用洗滌緩沖液稀釋為1/200的一抗(生物素化的山羊抗小鼠VCAM-1，R&D Systems #BAF643)在37℃孵育1小時。板如上所述洗滌并與PBS配制為1/200的鏈霉抗生物素蛋白-HRP(R&D Systems #DY998)/1％的無吐溫20的山羊血清在37℃孵育1小時。
板用洗滌緩沖液洗滌3次，用PBS洗滌3次。然后用50μL/孔的TMB底物(Kirkegaard & Perry labs # 50-76-00)對板顯影并于室溫孵育10分鐘。加入50μL/孔的4N H2SO4終止反應，用Molecular Devices Vmax板讀數(shù)儀在450-550雙波長處對板讀數(shù)。
在Nunc Maxisorb的“U”型底微量滴定板(#449824)的孔上以50μL/孔涂布磷酸緩沖鹽水(PBS)配制的5μg/mL單克隆捕獲抗體，大鼠抗小鼠ICAM-1(R&D Systems #BSA2)，37℃孵育1小時。用洗滌緩沖液[含0.1％吐溫20和1％Carnation脫脂奶粉的PBS]洗滌板三次。孔用150μL/孔的洗滌緩沖液封閉并在37℃孵育1小時。從孔中除去封閉溶液，標準品(植入KM12L4a或4T1腫瘤的小鼠的血清集合)和樣品用洗滌緩沖液稀釋并加入孔中。
所用標準品的稀釋范圍是1/10-1/1280。血清樣品稀釋為1/15，然后進行3倍連續(xù)稀釋。樣品和標準品以50μL/孔加入并在37℃孵育1小時。洗滌板3次并以50μL/孔與用洗滌緩沖液稀釋為1/250的一抗(山羊抗-ICAM-1，Santa CruzBiotechnology #sc-1511)在37℃孵育1小時。板如上所述洗滌并與用洗滌緩沖液配制為1/2000的二抗(HRPO標記的豬抗-山羊IgG，Caltag #G50007)以50μL/孔在37℃孵育1小時。
板用洗滌緩沖液洗滌3次，用PBS洗滌3次，然后用50μL/孔的TMB底物(Kirkegaard & Perry labs # 50-76-00)對板顯影并于室溫孵育10分鐘。加入50μL/孔的4N H2SO4終止反應，用Molecular Devices Vmax板讀數(shù)儀在450-550雙波長處對板讀數(shù)。
利用R&D Systems Quantikine M，小鼠sE-選凝素免疫測定試劑盒#MESOO根據(jù)生產(chǎn)商的方案化驗血清樣品。
體內(nèi)KM12L4a人結(jié)腸異種移植雌性Nu/nu小鼠(6-8周齡，18-22g)得自Charles River Laboratories(Wilmington，馬薩諸塞州)。腫瘤細胞(2×106KM12L4a)皮下植入小鼠的側(cè)腹(flank)，生長至所需體積后開始治療。給予攜帶腫瘤的小鼠100mg/kg的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮，7天，無痛處死每只小鼠。切下腫瘤并快速冷凍于液氮中。
MMP-2和MMP-9活性的酶譜切下的腫瘤在含有蛋白酶抑制劑(Roche Molecular Biochemicals)和磷酸酶抑制劑(Sigma)的RIPA緩沖液(1×磷酸緩沖鹽水配制的1％Nonidet P-40、0.5％脫氧膽酸鈉、0.1％十二烷基硫酸鈉，pH 7.2)中裂解。在含明膠底物的12％SDS聚丙烯酰胺上通過明膠酶譜分析了總共50μg蛋白質(zhì)。電泳后，凝膠在2.5％Triton X-100中洗滌兩次，15分鐘，在50mM Tris-HCl和10mM CaCl2，pH 7.6中于37℃孵育過夜，用0.5％考馬斯藍染色并用50％甲醇脫色。
ELISA利用可購得的ELISA試劑盒(R and D Systems，Minneapolis，明尼蘇達州)根據(jù)生產(chǎn)商的方法定量KM12L4a腫瘤裂解物中的VEGF-A蛋白質(zhì)水平。
對體內(nèi)給予4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮后取出的KM12L4a人結(jié)腸腫瘤的分析顯示VEGF的產(chǎn)生減少和MMP-9的活性降低。通過抗體免疫組織化學染色觀察到這些改變伴隨著腫瘤細胞增殖降低(Ki67)、凋亡的誘導(PARP切割和胱冬酶-3增加)和血管密度降低(CD31)。
以下文件公開了用于抑制血管生成和血管內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶以及抑制其它酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶的許多喹啉酮苯并咪唑化合物的制備方法，包括4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮或其互變異構(gòu)體，每篇文獻如同在本文中全部列出一樣，出于所有目的全文納入本文作為參考美國專利號6,605,617；美國專利號6,756,383；提交的美國專利申請?zhí)?0/116,117(2003年2月6日公布，US 2003/0028018A1)；美國專利申請?zhí)?0/644,055(2004年5月13日公布，美國專利申請?zhí)?004/0092535)；美國專利申請?zhí)?0/983,174；美國專利申請?zhí)?0/706,328(2004年11月4日公布，2004/0220196)；美國專利申請?zhí)?0/982,757和美國專利申請?zhí)?0/982,543。
Western印跡分析HUVEC培養(yǎng)在含或不含100nM的4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮(化合物1)的EGM(內(nèi)皮細胞生長培養(yǎng)基)中，在處理后0、16和24小時收集細胞裂解物。相等量的蛋白質(zhì)加樣于4-20％SDS-PAGE中，用抗ICAM、VCAM、α5整聯(lián)蛋白和αv整聯(lián)蛋白的抗體檢測凝膠。通過用抗β-肌動蛋白抗體檢測來評價相等的加樣和效果。在體外，用4-氨基-5-氟-3-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(1H)-酮處理的HUVEC中ICAM、VCAM和α5整聯(lián)蛋白的表達減少。
應該理解本發(fā)明的有機化合物可顯示互變異構(gòu)現(xiàn)象。由于本說明書中的化學結(jié)構(gòu)式一次只能代表一種可能的互變異構(gòu)形式，應該理解本發(fā)明包括所示結(jié)構(gòu)式的任何互變異構(gòu)形式。例如，結(jié)構(gòu)IIIB所示化合物顯示具有以下互變異構(gòu)體IIIBa 互變異構(gòu)體IIIBa結(jié)構(gòu)IIIB所示化合物的其它互變異構(gòu)體、互變異構(gòu)體IIIBb和互變異構(gòu)體IIIBc如下所示
互變異構(gòu)體IIIBb 互變異構(gòu)體IIIBc如同全部列出一樣，本文引用的所有文件或參考文獻出于所有目的全文納入本文作為參考。
應該理解的是本發(fā)明不限于本文為說明而列出的實施方案，而是包括本發(fā)明范圍內(nèi)它們的所有這種形式。
權(quán)利要求
1.一種調(diào)節(jié)對象中炎性應答和/或降低細胞粘著的方法，包括給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，其中給藥后對象中的炎性應答得到調(diào)節(jié)和/或?qū)ο笾械募毎持鴾p少，并且結(jié)構(gòu)I如下式所示 其中，R1、R2、R3和R4可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO2、-OH、-OR15基團、-NR16R17基團、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和-C(＝O)R18基團；R5、R6、R7和R8可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-NO2、-OH、-OR19基團、-NR20R21基團、-SH、-SR22基團、-S(＝O)R23基團、-S(＝O)2R24基團、-CN、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代和未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)R25基團、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R12選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R13選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-OH、烷氧基、芳氧基、-NH2、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基、取代與未取代的芳基氨基、取代與未取代的二烷基氨基、取代與未取代的二芳基氨基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R15和R19可以相同或不同，它們獨立選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的二雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R16和R20可以相同或不同的，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R17和R21可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R18、R23、R24和R25可以相同或不同，它們獨立選自H、-NH2、-NH(烷基)、-NH(芳基)、-N(烷基)2、-N(芳基)2、-N(烷基)(芳基)、-NH(雜環(huán)基)、-N(雜環(huán)基)(烷基)、-N(雜環(huán)基)(芳基)、-N(雜環(huán)基)2、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、-OH、取代與未取代的烷氧基、取代與未取代的芳氧基、取代與未取代的雜環(huán)基、-NHOH、-N(烷基)OH、-N(芳基)OH、-N(烷基)O-烷基、-N(芳基)O-烷基、-N(烷基)O-芳基和-N(芳基)O-芳基；和R22選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，給藥后對象中的循環(huán)粘著分子的水平降低。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，給藥后，對象中的可誘導細胞粘著分子、血管細胞粘著分子或內(nèi)皮白細胞粘著分子中至少一種的量減少。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括在給予所述化合物、所述互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物后測定對象中的可誘導細胞粘著分子、血管細胞粘著分子或內(nèi)皮白細胞粘著分子中至少一種的量。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，給藥后，對象中的基質(zhì)金屬蛋白酶的量減少。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述基質(zhì)金屬蛋白酶是基質(zhì)金屬蛋白酶-2或基質(zhì)金屬蛋白酶-9。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物，并且結(jié)構(gòu)II如下式所示 其中，A具有如下所示結(jié)構(gòu)之一 其中，Ra選自H或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIA所示化合物
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，給予對象結(jié)構(gòu)IIA所示化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，并且所述鹽是乳酸鹽。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，Ra是氫，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIB所示化合物
11.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIC所示化合物
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，并且所述鹽是乳酸鹽。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對象是癌癥患者。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，R12和R13均是H。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，R6或R7中的至少一個是取代或未取代的雜環(huán)基。
16.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，R6或R7中的至少一個是取代或未取代的哌嗪基。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，R1是F，R2、R3、R4、R5和R8各自是H，R6或R7之一是H。
18.一種鑒定需要結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物的對象的方法，包括在給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物之前、期間或之后測定對象中的至少一種細胞粘著分子的量，其中所述細胞粘著分子選自可誘導細胞粘著分子、血管細胞粘著分子或內(nèi)皮白細胞粘著分子，并且結(jié)構(gòu)I如下式所示 其中，R1、R2、R3和R4可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO2、-OH、-OR15基團、-NR16R17基團、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和-C(＝O)R18基團；R5、R6、R7和R8可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-NO2、-OH、-OR19基團、-NR20R21基團、-SH、-SR22基團、-S(＝O)R23基團、-S(＝O)2R24基團、-CN、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代和未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)R25基團、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R12選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R13選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-OH、烷氧基、芳氧基、-NH2、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基、取代與未取代的芳基氨基、取代與未取代的二烷基氨基、取代與未取代的二芳基氨基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R15和R19可以相同或不同，它們獨立選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的二雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R16和R20可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R17和R21可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R18、R23、R24和R25可以相同或不同，它們獨立選自H、-NH2、-NH(烷基)、-NH(芳基)、-N(烷基)2、-N(芳基)2、-N(烷基)(芳基)、-NH(雜環(huán)基)、-N(雜環(huán)基)(烷基)、-N(雜環(huán)基)(芳基)、-N(雜環(huán)基)2、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、-OH、取代與未取代的烷氧基、取代與未取代的芳氧基、取代與未取代的雜環(huán)基、-NHOH、-N(烷基)OH、-N(芳基)OH、-N(烷基)O-烷基、-N(芳基)O-烷基、-N(烷基)O-芳基和-N(芳基)O-芳基；和R22選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物，并且結(jié)構(gòu)II如下式所示 其中，A具有如下所示結(jié)構(gòu)之一 其中，Ra選自H或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIA所示化合物
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，給予對象結(jié)構(gòu)IIA所示化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，并且所述鹽是乳酸鹽。
22.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，Ra是氫，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIB所示化合物
23.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIC所示化合物
24.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，并且所述鹽是乳酸鹽。
25.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述對象是癌癥患者。
26.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，R12和R13均是H。
27.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，R6或R7中的至少一個是取代或未取代的雜環(huán)基。
28.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，R6或R7中的至少一個是取代或未取代的哌嗪基。
29.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，R1是F，R2、R3、R4、R5和R8各自是H，R6或R7之一是H。
30.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，還包括從對象采集血樣，然后測定至少一部分樣品中的至少一種細胞粘著分子的量。
31.一種監(jiān)測對象的疾病或治療的進展的方法，包括在給予對象結(jié)構(gòu)I所示化合物、所述化合物的互變異構(gòu)體、所述化合物的藥學上可接受的鹽、所述互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物之后測定對象中的至少一種細胞粘著分子的量，其中所述細胞粘著分子選自可誘導細胞粘著分子、血管細胞粘著分子或內(nèi)皮白細胞粘著分子，并且結(jié)構(gòu)I如下式所示 其中，R1、R2、R3和R4可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-CN、-NO2、-OH、-OR15基團、-NR16R17基團、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基和-C(＝O)R18基團；R5、R6、R7和R8可以相同或不同，它們獨立選自H、Cl、Br、F、I、-NO2、-OH、-OR19基團、-NR20R21基團、-SH、-SR22基團、-S(＝O)R23基團、-S(＝O)2R24基團、-CN、取代與未取代的脒基、取代與未取代的胍基、取代與未取代的伯烷基、仲烷基和叔烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的烯基、取代與未取代的炔基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代和未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)R25基團、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R12選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R13選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-OH、烷氧基、芳氧基、-NH2、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基、取代與未取代的芳基氨基、取代與未取代的二烷基氨基、取代與未取代的二芳基氨基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R15和R19可以相同或不同，它們獨立選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的二雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(烷基)氨基烷基、取代與未取代的(雜環(huán)基)(芳基)氨基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R16和R20可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基；R17和R21可以相同或不同，它們獨立選自H、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、取代與未取代的雜環(huán)基、-C(＝O)H、-C(＝O)-烷基、-C(＝O)-芳基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)NH(芳基)、-C(＝O)N(烷基)2、-C(＝O)N(芳基)2、-C(＝O)N(烷基)(芳基)、-C(＝O)O-烷基、-C(＝O)O-芳基、取代與未取代的雜環(huán)基烷基、取代與未取代的氨基烷基、取代與未取代的烷基氨基烷基、取代與未取代的二烷基氨基烷基、取代與未取代的芳基氨基烷基、取代與未取代的二芳基氨基烷基、取代與未取代的(烷基)(芳基)氨基烷基、-C(＝O)-雜環(huán)基、-C(＝O)-O-雜環(huán)基、-C(＝O)NH(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(雜環(huán)基)2、-C(＝O)-N(烷基)(雜環(huán)基)、-C(＝O)-N(芳基)(雜環(huán)基)、取代與未取代的雜環(huán)基氨基烷基、取代與未取代的羥基烷基、取代與未取代的烷氧基烷基、取代與未取代的芳氧基烷基和取代與未取代的雜環(huán)氧基烷基；R18、R23、R24和R25可以相同或不同，它們獨立選自H、-NH2、-NH(烷基)、-NH(芳基)、-N(烷基)2、-N(芳基)2、-N(烷基)(芳基)、-NH(雜環(huán)基)、-N(雜環(huán)基)(烷基)、-N(雜環(huán)基)(芳基)、-N(雜環(huán)基)2、取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基、-OH、取代與未取代的烷氧基、取代與未取代的芳氧基、取代與未取代的雜環(huán)基、-NHOH、-N(烷基)OH、-N(芳基)OH、-N(烷基)O-烷基、-N(芳基)O-烷基、-N(烷基)O-芳基和-N(芳基)O-芳基；和R22選自取代與未取代的烷基、取代與未取代的芳基和取代與未取代的雜環(huán)基。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，結(jié)構(gòu)I所示化合物是結(jié)構(gòu)II所示化合物，并且結(jié)構(gòu)II如下式所示 其中，A具有如下所示結(jié)構(gòu)之一 其中，Ra選自H或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIA所示化合物
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，給予對象結(jié)構(gòu)IIA所示化合物的藥學上可接受的鹽、互變異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽或它們的混合物，并且所述鹽是乳酸鹽。
35.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，Ra是氫，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIB所示化合物
36.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，Ra是甲基，結(jié)構(gòu)II所示化合物是如以下結(jié)構(gòu)IIC所示化合物
37.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述患者是癌癥患者。
38.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，R12和R13均是H。
39.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，還包括從對象采集血樣，然后測定至少一部分樣品中的至少一種細胞粘著分子的量。
全文摘要
本發(fā)明提供了使用具有結(jié)構(gòu)(I)的化合物或該化合物的鹽或互變異構(gòu)體治療細胞粘著和轉(zhuǎn)移過程相關(guān)疾病的方法。
文檔編號A61K31/5377GK1960731SQ200580009523
公開日2007年5月9日 申請日期2005年2月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月20日
發(fā)明者S·H·李, C·C·海斯 申請人:希龍公司