專(zhuān)利名稱(chēng)：：羥甲基丁酸鹽組合物及其應(yīng)用的制作方法羥曱基丁酸鹽組合物及其應(yīng)用本發(fā)明涉及預(yù)防和治療慢性炎性疾病、癌癥和偶然體重減輕的方法。在本發(fā)明的實(shí)施過(guò)程中，對(duì)患者經(jīng)腸給予單獨(dú)的HMB或HMB與二十碳五烯酸(20:5w-3)、FOS、肉堿及其混合物的組合。可以向包括富含大的中性氨基酸，諸如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸并且基本上不含游離氨基酸的氨基-氮源的食品中添加HMB。
背景技術(shù)：
：不希望的體重減輕，特別是瘦體重降低相對(duì)常見(jiàn)地存在于臨床疾病中，并且對(duì)發(fā)病率和死亡率具有顯著的影響。這種情況在癌癥患者中特別確切，其中這類(lèi)質(zhì)量下降可以使治療受限并且由此影響總體預(yù)后。惡病質(zhì)是特征在于食欲缺乏、體重減輕、過(guò)早飽滿(mǎn)感、虛弱、瘦體重降低和多器官機(jī)能障礙的綜合征。它是慢性疾病(惡性和非惡性的)的常見(jiàn)結(jié)果并且與慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性心力衰竭(CHF)、腎衰竭、AIDS、癡呆、慢性肝病和癌癥有關(guān)。它通常與疾病嚴(yán)重程度的其它指示物無(wú)關(guān)。(Witte，K.K.A.和Clark,A.L.:"導(dǎo)致慢性疾病中的惡病質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)異常"(Nutritionalabnormalitiescontributingtocachexiainchronicillness.)—InternationalJournalofCardiology85:23-31,2002)。肺病通常與惡病質(zhì)相關(guān)并且大量患有COPD,特別是肺氣腫的患者在該病的過(guò)程中變得虛弱。體重減輕是預(yù)后的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素并且通常與耗氧量增加相關(guān)。這種情況與發(fā)生無(wú)力進(jìn)行相關(guān)肌肉能量代謝(Kutsuzawa，T，等:"患有慢性阻塞性肺病的患者中的肌肉能量代謝和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，，(Muscleenergymetabolismandnutritionalstatusinpatientswithchronicobstructivepulmonarydisease.)-Am.J.Respir.Crit.CareMed.152(2):647-652,1995)。COPD還與由外周血液中促炎細(xì)胞因子和急性期蛋白質(zhì)的濃度升高反映出的一般性全身炎癥反應(yīng)升高有關(guān)(Schols,A.M.等"患有慢性阻塞性肺病的患者小組中代謝紊亂與炎癥介體之間的相關(guān)性證據(jù)"(Evidenceforarelationbetweenmetabolicderangementsandincreasedlevelsofinflammatorymediatorsinasubgroupofpatientswithchronicobstructivepulmonarydisease.)-Thorax51:819-824，1996;Takabatake,N.等"患有慢性阻塞性肺病的患者中的循環(huán)瘦蛋白"(Circulatingleptininpatientswithchronicobstructivepulmonarydisease.)-AmJRespirCritCareMed159:1215-1219，1999;Dentener，M.A.等:"COPD中的全身抗炎介體在惡化的治療過(guò)程中可溶性細(xì)胞介素I受體H增加"(Systemicanti-inflammatorymediatorsinCOPD:increaseinsolubleintedeukinIreceptorIIduringtreatmentofexacerbations.)-Thorax56:721-726，2001.)。這類(lèi)改變通常與肌肉萎縮綜合征有關(guān)。使用溫育的肌肉和肌肉提取物進(jìn)行的研究提示ATP-依賴(lài)性泛蛋白-蛋白體途徑是造成大部分最終導(dǎo)致肌肉萎縮的蛋白水解增加的原因。特別地，泛蛋白-綴合的蛋白的水平增加和聚泛蛋白、某些蛋白體亞單位和泛蛋白綴合的酶E2wk的mRNA水平增加是在大部分萎縮肌肉中發(fā)現(xiàn)的特征(Schols，A.M.W.J.:"肺惡病質(zhì)"(Pulmonarycachexia.)-IntlJCardiology85:101-110，2002;Jagoe，R.T.和Goldberg,A.L.:"我們?nèi)笔Я私饧∪馕s中的泛蛋白-蛋白體途徑嗎？"(Whatdowereallyknowabouttheubiquitin-proteosomepathwayinmuscleatrophy)-CurrOpinClinNutrMetabCare4:183-190，2001)?；加屑膊“l(fā)展至轉(zhuǎn)移性疾病的癌癥的大部分患者在其治療程序過(guò)程中發(fā)生惡病質(zhì)并且該惡病質(zhì)導(dǎo)致其死亡。癌癥患者體重減輕的頻率對(duì)患有乳腺癌、急性髓細(xì)胞性白血病和肉瘤的患者而言在40%左右，而在患有胰腺和胃癌的患者中達(dá)80%以上。約60%患有肺、結(jié)腸或前列腺癌的患者在開(kāi)始化療前已經(jīng)發(fā)生了體重減輕。盡管預(yù)治療營(yíng)養(yǎng)不良(體重減輕)與不良后果之間的相關(guān)性得到確立，但是尚未證實(shí)惡病質(zhì)發(fā)生與腫瘤大小、疾病階段和惡性腫瘤類(lèi)型或持續(xù)時(shí)間之間存在一致的相關(guān)性。癌癥惡病質(zhì)并非單純是腫瘤的局部作用。通常發(fā)生蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物代謝的改變。例如，碳水化合物代謝異常包括總葡萄糖更新率增加、肝葡萄糖異生增加、葡萄糖耐受不良和葡萄糖水平升高。通常注意到脂解增加、游離脂肪酸和甘油更新增加、高脂血癥和脂蛋白脂肪酶活性下降。與癌癥惡病質(zhì)相關(guān)的體重減輕不僅因體脂肪儲(chǔ)存減少，而且因全身蛋白質(zhì)質(zhì)量下降所致，其中骨骼肌廣泛萎縮。蛋白質(zhì)更新增加和難以調(diào)節(jié)的氨基酸氧化也可能是重要的。作為對(duì)癌癥反應(yīng)而產(chǎn)生的宿主衍生的因子的存在涉及到作為惡病質(zhì)的病原體，例如腫瘤壞死因子-ot(TNF)或惡液質(zhì)素、白細(xì)胞介素-l(IL-l)、IL-6、y-干擾素(IFN)和前列腺素(PGs)(例如PGE2)。體重減輕常見(jiàn)于患有肺和胃腸道癌的患者，導(dǎo)致體脂肪和肌肉蛋白質(zhì)大量缺失，而非肌肉蛋白質(zhì)保持不受影響。盡管體脂肪缺失在能量?jī)?chǔ)存方面是重要的，但是骨骼肌蛋白的缺失產(chǎn)生不動(dòng)性和最終呼吸肌功能損傷，從而導(dǎo)致死于墜積性肺炎。盡管惡病質(zhì)通常伴隨食欲缺乏，但是單獨(dú)的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充不能維持穩(wěn)定的體重并且任何增加的體重均是因脂肪組織增加和水增加而非瘦體重所致。對(duì)嗜欲刺激劑，諸如醋酸甲地孕酮和醋酸甲羥孕酮同樣是確切的，提示瘦體重缺失是因非能量不足的因素所致。骨骼肌質(zhì)量是蛋白質(zhì)合成率與降解率之間的平衡?；加邪┌Y惡病質(zhì)的患者表現(xiàn)出骨骼肌中蛋白質(zhì)合成阻滯和蛋白質(zhì)降解增加，這反映在泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途徑的表達(dá)增加方面，即蛋白質(zhì)降解的主要決定因素。因此，來(lái)自惡病質(zhì)癌癥患者的骨骼肌表現(xiàn)出泛蛋白和蛋白酶體亞單位的mRNA的表達(dá)增加，而蛋白酶體的蛋白水解活性與泛蛋白表達(dá)平行增加。合成代謝刺激物不能增加惡病質(zhì)患者的痩體重提示在肌肉質(zhì)量可能增加前，蛋白質(zhì)降解必須得到減弱。二十碳五烯酸(EPA)下調(diào)惡病質(zhì)小鼠骨骼肌中泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途徑的表達(dá)增加，并且已經(jīng)證實(shí)可使患有胰腺癌的惡病質(zhì)患者的體重保持穩(wěn)定。當(dāng)患者消耗時(shí)，含有32g蛋白質(zhì)和2gEPA體重的高密度能量補(bǔ)充劑增加并且這僅歸因于瘦體重增加(Barber，M.D.，Ross,J.A.,Voss，A.C"Tisdale，M.J.，F(xiàn)earon，K.C.H."富含魚(yú)油的口服營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑對(duì)患有胰腺癌的患者體重減輕的作用"(Theeffectofanoralnutritionalsupplementenrichedwithfishoilonweight-lossinpatientswithpancreaticcancer.)-Br.J.Cancer,81:80-86，1999)。近期May等的研究(May,P.E.,Barber,A.，D'Olimpio，J.T"Hourihane，A.和Abumrad，N.N."使用口服補(bǔ)充給藥法與P-羥基-p-甲基丁酸酯、精氨酸和谷氨酰胺的組合逆轉(zhuǎn)與癌癥相關(guān)的消痩"(Reversalofcancer-relatedwastingusingoralsupplementationwithacombinationofp國(guó)羥基-(3-methylbutyrate，arginineandglutamine.)-Am.J.Surg.，183:471-479,2002)證實(shí)showedamixtureofHMB、精氨酸和谷氨酰胺的混合物可有效增加患有晚期(IV階段)癌癥的體重減輕患者的體重。此外，正如使用EPA觀(guān)察到的，體重增加歸因于不含脫脂物質(zhì)增加。提示了多不飽和脂肪酸二十碳五烯酸通過(guò)抑制體液中脂解劑的脂解活性和酶胍基-苯曱酸guanidino-benzoatase的活性在治療惡病質(zhì)中的應(yīng)用。參見(jiàn)Tisdale，M.J"和Beck，A.的1995年10月10日授權(quán)的美國(guó)專(zhuān)利US5，457，130;和Tisdale等CancerResearch50:5022-5026(1990年8月)。然而，Tisdale教導(dǎo)的產(chǎn)品為固體劑型，要求已經(jīng)患病的患者每天吞咽12-16粒膠嚢。這種方法存在嚴(yán)重的缺陷，包括吞咽困難、噯氣和不良?xì)馕?。已?jīng)發(fā)現(xiàn)在不同申請(qǐng)的上下文中使用了HMB。特別地，在Nissen等的美國(guó)專(zhuān)利US6,031，000中描述了包括約0.5g-約30gHMB的組合物，其中約0.5g-約30g基于HMB的鈣鹽的重量；以及約0.5g-約50g的游離L-精氨酸和約0.5g-約50g的游離L-谷氨酰胺。本專(zhuān)利還提供了治療動(dòng)物與疾病相關(guān)的消瘦的方法，降低動(dòng)物甘油三酯血清水平的方法，降低動(dòng)物血清病毒載量的方法，和使具有內(nèi)臟區(qū)和皮下區(qū)的動(dòng)物的脂肪重新分布的方法。所有方法均包括對(duì)所述動(dòng)物給予包括HMB和至少一種游離氨基酸的組合物。Nissen等的美國(guó)專(zhuān)利US5，348，979中描述了HMB在人體受試者的氮保留中的應(yīng)用。正如通過(guò)尿氮減少所確定的，給予的HMB的量有效保存蛋白質(zhì)。該方法可以用于存在因疾病情況導(dǎo)致的負(fù)氮平衡的患者，并且還可以用于發(fā)生蛋白質(zhì)缺失的正常大齡人?？梢酝ㄟ^(guò)口服或通過(guò)靜脈內(nèi)注射給予HMB。HMB的有效量基于其鉤鹽/千克體重/24小時(shí)在0.01-0.20克HMB范圍。Nissen等的美國(guó)專(zhuān)利US5,028,440中描述了飼養(yǎng)產(chǎn)肉家畜以增加瘠瘦組織發(fā)育的方法。對(duì)動(dòng)物給予HMB或其可食用鹽，其用量持續(xù)獲得瘠瘦組織重量大量增加的足夠時(shí)間長(zhǎng)度。該方法特別適用于反芻動(dòng)物，包括肉牛和羔羊，因?yàn)镠MB未經(jīng)可感覺(jué)到的瘤胃破壞。還可以使用其它家畜實(shí)施該方法，包括小雞和火雞。飼喂0.5-100mg范圍的HMB。Nissen等的美國(guó)專(zhuān)利US4,992,470中描述了HMB顯著地比a-酮異己酸(KIC)更為有效地在激活哺乳動(dòng)物T淋巴細(xì)胞的免疫功能中的應(yīng)用。為了激活T淋巴細(xì)胞，通過(guò)經(jīng)HMB進(jìn)入哺乳動(dòng)物血液的途徑對(duì)該哺乳動(dòng)物給予HMB或其可食用的水溶性鹽。給予量足以有效促進(jìn)其T淋巴細(xì)胞的種質(zhì)遺傳。該方法適用于馴養(yǎng)哺乳動(dòng)物，特別包括牛、綿羊和豬。HMB還可以作為免疫系統(tǒng)刺激劑用于人。通過(guò)口服或非腸道給予500-2,500毫克(mg)/人體受試者/24小時(shí)用量的HMB(基于Ca-HMB)。Kunz的德國(guó)專(zhuān)利DE29707308中描述了支鏈氨基酸與HMB組合在促進(jìn)負(fù)重練習(xí)群體中肌肉產(chǎn)生中的應(yīng)用。Kunz教導(dǎo)了每日服用3gm補(bǔ)充劑并且消耗200gm蛋白質(zhì)/天提高了營(yíng)養(yǎng)蛋白的價(jià)值并且顯著增加了蛋白質(zhì)功效。Kunz還教導(dǎo)了當(dāng)HMB與蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物和/或游離氨基酸混合物而非與完整(純的)蛋白質(zhì)聯(lián)用時(shí)可以獲得更為良好的作用。Engel等的美國(guó)專(zhuān)利US5，976，50中描述了用于體重減輕的由基于糖的混合物的糖果構(gòu)成的膳食補(bǔ)充劑，所述基于糖的糖果混合物由含有治療量的脫乙酰殼多糖、醉椒根和可以包括膽堿/inusital、吡啶甲酸鉻、HMB、肉堿和丙酮酸鹽的脂肪燃燒營(yíng)養(yǎng)物組成?；煊忻撘阴ざ嗵呛妥斫犯臓I(yíng)養(yǎng)組分起燃燒無(wú)論何種身體消耗的脂肪的作用，即更好地代謝任意攝入并且不會(huì)吸引至脫乙酰殼多糖的脂肪。為舉重群體設(shè)計(jì)的含有HMB的商品包括Golden,Colorado的EASInc.的LeanDynamX。LeanDynamX提供了不使用強(qiáng)刺激劑支持脂肪消耗的組分摻合物。這些組分包括HMB、吡啶甲酸鉻、共軛亞油酸、巴拉圭茶葉葉和莖和酒石酸肉堿。將粉末組合物與水混合并且每天服用2-3份，其中在練習(xí)比賽前30分鐘服用一份。額夕卜的商品包括來(lái)自Hauppauge，NY的TwinlabCorporation的MegaHMBFuel。MegaHMBFuel⑧在1粒膠嚢中含有750mgHMB。提示的每日劑量為4粒膠嚢以便對(duì)可能在激烈抗阻訓(xùn)練后發(fā)生的對(duì)肌細(xì)胞損害提供援助。Garleb等的美國(guó)專(zhuān)利US5，444，054和相關(guān)美國(guó)專(zhuān)利US5，780，451也受到關(guān)注。這些對(duì)比文件中描述了用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的組合物和方法。這類(lèi)組合物包括蛋白質(zhì)源，它可以是高生物值的完整或水解蛋白(col.21);不消化的寡糖，諸如果糖寡聚體；和含有相對(duì)高比例二十碳五烯酸的脂質(zhì)摻合物，它可以提供相對(duì)高的co-3-o6脂肪酸之比。DeMichde等的美國(guó)專(zhuān)利US5，223，285中討論了長(zhǎng)鏈脂肪酸生物途徑和生理作用，將該文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文作為參考。預(yù)防和/或治療惡病質(zhì)仍然是一個(gè)破壞性的問(wèn)題。動(dòng)物和人體研究均提示營(yíng)養(yǎng)物支持大多在充實(shí)患有癌癥的宿主的體重方面無(wú)效。探討完全胃腸外營(yíng)養(yǎng)(TPN)支持法作為細(xì)胞毒性抗肺瘤療法輔助法的隨機(jī)化試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)治療效果幾乎沒(méi)有改善。例如，參見(jiàn)Brennan，M.F.，和Burt，M.E.，1981,CancerTreatmentReports65(Suppl.5):67-68。這一結(jié)果與TPN可以刺激動(dòng)物腫瘤生長(zhǎng)的明確證明提示TPN在癌癥治療中的常規(guī)應(yīng)用并未得到證明。Kisner，D.L.，1981，CancerTreatmentReports65(Suppl.5):1-2。發(fā)明概述本發(fā)明涉及預(yù)防和治療慢性炎性疾病、癌癥和偶然體重減輕的方法。在本發(fā)明的實(shí)施過(guò)程中，通過(guò)非腸道對(duì)患者單獨(dú)給予HMB或HMB與二十碳五烯酸(20:5co-3)、FOS、肉堿及其混合物的組合。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了治療患者與疾病相關(guān)的消瘦的方法。該方法包括對(duì)所述患者給予上述組合物，它包括足以治療與疾病相關(guān)的消痩的用量的HMB，其中在對(duì)患者給予該組合物時(shí)，與疾病相關(guān)的消痩得到治療。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了減緩患者腫瘤生長(zhǎng)率的方法。該方法包括對(duì)所述患者給予上述組合物，它包括足以減緩患者腫瘤生長(zhǎng)率的用量的HMB，其中在對(duì)患者給予該組合物時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)率減緩。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了預(yù)防或治療患者疾病的方法，通過(guò)下調(diào)蛋白激酶C、核因子k-B、泛蛋白綴合酶和26S蛋白酶體的成分的表達(dá)和/或活性來(lái)進(jìn)行。這些方法包括對(duì)所述患者給予HMB、其鹽、其代謝物或衍生物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以將HMB加入到食品中，所述食品包括富含大的中性氨基酸，諸如亮氨酸、異亮氨酸、翔氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸的氨基-氮源并且基本上不含游離氨基酸。附圖簡(jiǎn)述附圖1顯示了描述PIF誘導(dǎo)的蛋白酶體活化中涉及的骨骼肌中潛在胞內(nèi)情況的流程圖。附圖2顯示了HMB對(duì)具有MAC16肺瘤的小鼠體重(A)和腫瘤體積(B)的作用的劑量響應(yīng)曲線(xiàn)。通過(guò)管飼法使用0.05(*)、(U25(o)和0.25g/kg(X)的濃度經(jīng)口服給予HMB(在PBS中)。對(duì)照組小鼠接受單獨(dú)的PBS("。所示的結(jié)果為平均值士SEM，其中n=20。附閨3顯示了HMB(0.25g/kg;■)、EPA(0.6g/kg;X)和與PBS對(duì)照品(，)的組合(o)對(duì)具有MAC16肺瘤的小鼠體重的作用。所示的結(jié)果為平均值土SEM，其中n=20。附圖4顯示了具有MAC16腫瘤并且用EPA(0石g/kg)、HMB(0.25g/kg)或其組合治療3天的小鼠的比目魚(yú)肌(A)重量和比目魚(yú)肌(B)的蛋白質(zhì)降解率。所示的值為平均值土SEM，其中n-6。附圖5顯示了正如糜蛋白酶-類(lèi)'酶活性確定的HMB和EPA對(duì)具有MAC16腫瘤并且治療3天的小鼠腓腸肌中蛋白酶體功能活性的作用。所示的結(jié)果為平均值土SEM，其中n-6。附圖6顯示了通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)的用PBS(對(duì)照組)、HMB(0.25g/kg)、EPA(0.6glkg)或其組合治療3天的小鼠腓腸肌中蛋白酶體20Sct-亞單位(A)和p-亞單位(B)的表達(dá)。顯示了印跡(n-6)的光密度分析。A.對(duì)照組(實(shí)心條)，HMB(空心條)，EPA(雜點(diǎn)條)和組合(斑點(diǎn)條)附圖7顯示了通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)的用PBS(對(duì)照組)、HMB(0.25g/kg)、EPA(0.6g/kg)或其組合(HMB+EPA)治療3天的小鼠腓腸肌中蛋白酶體19S亞單位、MSS1(A)和p42(B)的表達(dá)。顯示了印跡(n-6)的光密度分析。A.對(duì)照組(實(shí)心條)，HMB(空心條)，EPA(雜點(diǎn)條)和組合(斑點(diǎn)條)顯示了印跡(n-6)的光密度分析。附圖8顯示了通過(guò)蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)的用PBS(對(duì)照組)、HMB(0.25g/kg)、EPA(0.6g/kg)或其組合(HMB+EPA)治療3天的小鼠腓腸肌中E2^的表達(dá)。顯示了印跡(n-6)的光密度分析。A.對(duì)照組(實(shí)心條)，HMB(空心條)，EPA(雜點(diǎn)條)和組合(斑點(diǎn)條)顯示了印跡(n-6)的光密度分析。附圖9(A)顯示了在沒(méi)有(X)或有50pMEPA(口)或25pM(o)或50]lim("hmb存在下piF對(duì)<:2<:12肌管中總蛋白質(zhì)降解的作用。在添加PIF后24小時(shí)進(jìn)行測(cè)定并且表示為平均值土SEM，其中ii-9.1。(B)顯示了在有或沒(méi)有EPA(50pM)或HMB(25或50nM)存在下用PIF處理的鼠肌管的可溶性提取物的胰凝乳蛋白酶活性。符號(hào)與(A)中的相同。將結(jié)果表示為平均值土SEM，其中n-9.1。附圖10顯示了EPA和HMB對(duì)PIF-誘導(dǎo)20S蛋白酶體a-亞單位(A)、(3-亞單位(B)和p42(C)的作用。(D)中顯示了肌動(dòng)蛋白加載控制。在用單獨(dú)PIF(泳道A-C)或用PIF在有50)uMEPA(泳道D-F)、50pMHMB(泳道G-I)或25pMHMB(泳道J-L)存在下以PIF4.2nM(泳道B、E、H和K)或10nM(泳道C、F、I和L)的濃度處理后24小時(shí)對(duì)C2C12肌管的可溶性提取物進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。對(duì)照組培養(yǎng)物接受PBS(泳道A)、50juMEPA(泳道D)、50]uMHMB(泳道G)或25|liMHMB(泳道J)。所示的印跡為三次單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的代表。附圖11顯示了PIF對(duì)鼠肌管中胞質(zhì)(A)和膜結(jié)合(B)PKCa作用的蛋白質(zhì)印跡。用單獨(dú)的PIF(泳道A-C)或用PIF在有50pMEPA(泳道D-F)、50|iiMHMB(泳道G-I)或25|uMHMB(泳道J-L)存在下以4.2nM(泳道B、E、H和K)或10nMPIF(泳道C、F、I和L)處理細(xì)胞。對(duì)照組細(xì)胞接受PBS(泳道A)，50pMEPA(泳道D)、50|iiMHMB(泳道G)或25^iMHMB(泳道J)。所示的印跡為三次單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的代表。附圖12顯示了用單獨(dú)的PIF(泳道A-C)或用PIF在有50^iMEPA(泳道D-F)、50juMHMB(泳道G-I)或25juMHMB(泳道J-L)存在下以4.2nM(泳道B、E、H和K)或10nM(泳道C、F、I和L)的PIF濃度處理的鼠肌管的可溶性提取物中總ERKl/2(p44和p42)(A)和活性(磷酸化)ERK1/2(B)的蛋白質(zhì)印跡。對(duì)照組細(xì)胞接受PBS(泳道A)，50pMEPA(泳道D)、50|iiMHMB(泳道G)或25^MHMB(泳道J)。所示的印跡為三次單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的代表。附圖13顯示了通過(guò)蛋白質(zhì)印跡測(cè)定的<:2<:12微管暴露30分鐘對(duì)iKBa(A)胞質(zhì)水平的作用和如EMSA(B和C)測(cè)定的與DNA結(jié)合的NF-kB活化。光密度分析為3個(gè)重復(fù)印跡或EMSAs的平均值。(A)用單獨(dú)的PIF(泳道A-E)或用PIF在有50|liMHMB存在下以O(shè)(泳道A和F)、2.1(泳道B和G)、4.2(泳道C和H)、10.5(泳道D和I)或16.8nMPIF(泳道E和J)的濃度處理肌管。在(B)和(C)中，用、2.1、4.2、10.5或16.8nMPIF在沒(méi)有(深色條)或有(空心條)25MHMB(B)或50MHMB(C)存在下處理肌管。發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)HMB也稱(chēng)作P-羥基-P-甲基丁酸或P-羥基-異戊酸，它可以以其游離酸的形式表示為(CH3)2(OH)CCH2COOH。HMB為肌肉轉(zhuǎn)氨基成a-酮異己酸(KIC)形成的亮氨酸的代謝物，隨后KIC在肝胞質(zhì)溶膠中氧化得到HMB。術(shù)語(yǔ)"大的中性氨基酸"指的是亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸。氨基酸為蛋白質(zhì)的構(gòu)建單元。其特征在于在化合物的末端上存在與相同碳連接的羧基(COOH)和氨基(NH2)。"基本上不含游離氨基酸"指的是每日劑量的組合物中含有低于0.4克總游離氨基酸含量的組合物。例如，如果將產(chǎn)品設(shè)計(jì)成以1罐/天的速率給予，那么1罐產(chǎn)品婚育低于總計(jì)0.4克的游離氨基酸。所述氨基酸為那些天然存在的L-異構(gòu)體，它們由一種或多種如下化合物組成L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸(或L-胱氨酸)、L-谷氨酸、L-谷氨酸、谷氨酸、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴(lài)氨酸、L-賴(lài)氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸和L-纈氨酸或其食品-或藥物上-可接受的鹽、酯類(lèi)、鹽或衍生物(諸如甲酯類(lèi)或乙酯類(lèi))。術(shù)語(yǔ)"惡病質(zhì)"指的是全身性的不健康和營(yíng)養(yǎng)不良狀態(tài)。通常與惡性癌癥有關(guān)并且由其誘導(dǎo)，且特征在于食欲不振、體重減輕，尤其是瘦體重和肌肉萎縮。術(shù)語(yǔ)"脂肪酸"指的是帶有一般約12-24個(gè)碳長(zhǎng)的烴鏈的羧酸族。當(dāng)經(jīng)鏈中的至少一個(gè)位置上不飽和(帶有雙鍵)時(shí)，根據(jù)第一個(gè)雙鍵的位置命名這類(lèi)脂肪酸。co-3脂肪酸在來(lái)自鏈的甲基端的第三個(gè)碳上帶有第一個(gè)雙鍵；并且包括，但不限于a-亞麻酸、十八碳四烯酸、二十碳五烯酸("EPA")、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸("DHA")等。o>6脂肪酸在來(lái)自鏈的甲基端的第六個(gè)碳上帶有第一個(gè)雙鍵；并且包括，但不限于亞油酸、(3-亞麻酸、花生四烯酸("AA，，)等。本文所用的術(shù)語(yǔ)"食品"指的是含有脂肪、氨基氮和碳水化合物中的一種或多種并且以推薦的每日量給患者提供營(yíng)養(yǎng)支持中的某些或全部的膳食載體。食品通常含有維生素、礦物、微量礦物等以便提供膳食替代物、藥膳、補(bǔ)充劑的平衡營(yíng)養(yǎng)。食品可以為任意典型形式，諸如飲料、粉末、方條狀食品、汁、碳酸鹽飲料、瓶裝水。術(shù)語(yǔ)"參考日攝取量或RDI"指的是基于基本維生素和礦物的擬定飲食供應(yīng)量的一組膳食參考。擬定飲食供應(yīng)量為一組由NationalAcademyofSciences確立的一組估計(jì)的營(yíng)養(yǎng)素供給量，它們定期更新以反映出最新的科學(xué)知識(shí)。術(shù)語(yǔ)"患者"指的是人、狗、貓和任意其它非反芻動(dòng)物。應(yīng)將在本申請(qǐng)中任意涉及的數(shù)值范圍視為由形容詞"約"修飾。此外，應(yīng)將任意數(shù)值范圍視為提供涉及對(duì)該范圍中的小組的權(quán)利要求的支持。例如，在本說(shuō)明書(shū)中應(yīng)將公開(kāi)的1-10的范圍視為提供支持并且要求保護(hù)該范圍中的任意小組(即2-9、3-6、4-5、2.2-3.6、2.1-9.9等的范圍)。盡管本發(fā)明并不限于任何特定的操作理論，但是申請(qǐng)人描述了下列可能的機(jī)理。在極端必需(例如饑餓等)的情況下，骨骼肌通常由身體利用為氨基酸和能量的貯器。這種情況由肌肉中蛋白水解的增量調(diào)節(jié)和蛋白質(zhì)合成的下調(diào)介導(dǎo)。氨基酸從肌肉中釋放至全身環(huán)境的凈結(jié)果用于維持危急的系統(tǒng)。當(dāng)良好的健康和足夠的營(yíng)養(yǎng)物利用得以恢復(fù)時(shí)，肌肉重建。就惡病質(zhì)而言，這種系統(tǒng)不適當(dāng)?shù)鼗罨?，由此甚至在營(yíng)養(yǎng)足夠的情況中，肌肉組織蛋白質(zhì)持續(xù)分解。不適當(dāng)活化的關(guān)鍵蛋白水解系統(tǒng)之一為泛蛋白蛋白體系統(tǒng)。當(dāng)正常起作用時(shí)，該系統(tǒng)識(shí)別老化或以某種其它方式受損或不再需要的蛋白質(zhì)并且標(biāo)記它們以便通過(guò)與泛蛋白綴合而除去。這類(lèi)泛蛋白化的蛋白由蛋白體識(shí)別并且被其降解，從而釋放游離泛蛋白和肽類(lèi)以及能量-消耗過(guò)程中的游離氨基酸。存在大量活化或增量調(diào)節(jié)這種系統(tǒng)的信號(hào)分子，包括蛋白水解-誘導(dǎo)因子(PIF)，它是由某些誘導(dǎo)惡病質(zhì)的腫瘤產(chǎn)生的蛋白質(zhì)因子。PIF與肌肉細(xì)胞結(jié)合導(dǎo)致對(duì)磷脂酶A(PLA)的增量調(diào)節(jié)。該過(guò)程由此產(chǎn)生最終活化蛋白激酶c的信號(hào)傳導(dǎo)因子，導(dǎo)致用于泛蛋白綴合和蛋白體的某些亞單位的基因活化(通過(guò)核因子kb，NFkB)。這種信號(hào)傳導(dǎo)的所有凈結(jié)果為泛蛋白蛋白體系統(tǒng)的增量調(diào)節(jié)，并且不適當(dāng)?shù)那闆r是肌肉中持續(xù)的蛋白質(zhì)降解。附圖1表示這種活化順序的詳細(xì)途徑。蛋白激酶C蛋白激酶C為一族鈣-和脂質(zhì)-活化的絲氨酸-蘇氨酸激酶，它們?cè)诖罅堪麅?nèi)信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)中起關(guān)鍵作用。存在至少12種不同的PKC同種型，基于其一級(jí)結(jié)構(gòu)和生化特性將它們分成三類(lèi)(CACarter:"作為藥物靶的蛋白激酶C:藥物或膳食預(yù)防和治療癌癥的內(nèi)含"("ProteinkinaseCasadrugtarget:Implicationsfordrugordietpreventionandtreatmentofcancer.")-CurrentDrugTargets1:163-183(2000)。它們是常規(guī)的-(cPKCa、pi、pil和M)，需要二?；视汀⒘字＝z氨酸和鈣用于活化；新的(nPKCS、s、"、e和in)，需要二?；视秃土字＝z氨酸，但不依賴(lài)于鈣；和非典型的(aPKC人、t和；)，為不依賴(lài)于鉀和二?；视偷摹KC合成為膜結(jié)合酶原。通過(guò)蛋白水解裂解除去前序列且隨后磷酸化可以將感受態(tài)酶從膜釋放至胞質(zhì)溶膠。隨后與特定組的激活物發(fā)生相互作用而產(chǎn)生活性酶。因此，存在幾種水平的調(diào)節(jié)可能，包括控制表達(dá)、控制蛋白酶解加工、控制起始的磷酸化結(jié)果和最終調(diào)節(jié)完整活性所需的各種激活物的胞質(zhì)水平。蛋白激酶C涉及某些信號(hào)傳導(dǎo)途經(jīng)，它們可導(dǎo)致細(xì)胞有絲分裂和增殖、編程性細(xì)胞死亡、血小板活化、改建肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架、調(diào)節(jié)離子通道和分泌。此外，PKC還為助長(zhǎng)腫瘤的佛波酯類(lèi)的主要受體的其它觀(guān)察結(jié)果為研究這種酶的作用機(jī)理提供了關(guān)鍵的試劑。PKC調(diào)節(jié)與炎癥、心血管、外周微血管、CNS、腫瘤學(xué)、免疫和傳染性疾病狀態(tài)相關(guān)的途經(jīng)并且被視為藥物研發(fā)的重大和重要的靶物(P.G.Goekjian和M.R.Jirousek:"治療疾病中的蛋白激酶C:研發(fā)中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途經(jīng)、抑制劑和試劑，，("ProteinKinaseCintheTreatmentofDisease:SignalTransductionPathways,Inhibitors,andAgentsinDevelopment")—CurrentMedicinalChemistry6(9):903，(1999);CAO'Brian，NEWard,KRGravitt和KPGupta:"胂瘤促進(jìn)劑受體蛋白激酶C:人結(jié)腸癌的化學(xué)預(yù)防和療法的新耙物，，("ThetumorpromoterreceptorproteinkinaseC:Anoveltargetforchemopreventioiiandtherapyofhumancoloncancer.")-GrowthFactorsandTumorPromotion:ImplicationsforRiskAssessment,117-120頁(yè)1995，Wiley-Liss，Inc.;FBattaini:"作為中樞系統(tǒng)疾病狀態(tài)中的治療靶的蛋白激酶C，,("ProteinKinaseCisoformsastherapeutictargetsinnervoussystemdiseasestates.")-PharmacologicalResearch44(5):353-361，RNFrank:"用于糖尿病性視網(wǎng)膜病的潛在新醫(yī)學(xué)療法蛋白激酶C抑制劑，，("Potentialnewmedicaltherapiesfordiabeticretinopathy:ProteinKinaseCinhibitors.)-AmJOphthalmol133:693-698(2002);MMeier和GLKing:"血管疾病中蛋白激酶C的活化及其藥理學(xué)抑制，，("ProteinKinaseCactivationanditspharmacologicalinhibitioninvasculardisease.")-VascularMedicine5:173-185(2000))。NFkB核因子KB(NFKB)為一族在各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子。成熟分子為由如下5種基因產(chǎn)物中的一種或兩種構(gòu)成的同型二聚體或異二聚體(RelA(p65)、p50，RelB，c-Rel和p52)-最常見(jiàn)的是RdA和p50的二聚體。在非活化條件下，nfkb通過(guò)與抑制蛋白IkBoc結(jié)合而局限在胞質(zhì)溶膠中。上游信號(hào)傳導(dǎo)包括IkB激酶，并且結(jié)合的iKBa的磷酸化導(dǎo)致其從NFkB中釋放，使得后者轉(zhuǎn)移至核并且活化特異性基因轉(zhuǎn)錄。磷酸化的iKBa被泛蛋白-蛋白體途經(jīng)所降解。NFkB被廣泛認(rèn)為是與炎癥相關(guān)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子。因此，它在急性和慢性炎性疾病中均起關(guān)鍵作用(ABLentsch和PAWard:"急性炎癥過(guò)程中NFkB的活化和調(diào)節(jié)"("ActivationandregulationofNFkBduringacuteinflammation.")-ClinChemLabMed37(3):205-208。它還在其它疾病的某些方面中起作用，諸如轉(zhuǎn)移癌(VBAndela，AHGordon,GZotalis，RNRosier,JJGoater，GDLewis,EMSchwarz，JEPuzas和RJO'Keefe:"NFKB:前列腺癌轉(zhuǎn)移至骨中的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子"("NFkB:Apivotaltranscriptionfactorinprostatecancermetastasistobone.")-ClinicalOrthopaedicsandRelatedResearch415S:S75-S85(2003))。這種轉(zhuǎn)錄因子涉及糖尿病綜合征的發(fā)生(E.Ho和TMBray:"抗氧化劑NFkB的活化和致糖尿病性，，("Antioxidants,NFkBactivationanddiabetogenesis.，，)-ProceedingsoftheSocietyforExperimentalBiologyandMedicine222:205-213(1999))和免疫發(fā)展和調(diào)節(jié)(JMoscat，MTDiaz-Meco和PReimert:"蛋白激酶C同種型導(dǎo)致的NFkB活化和B-細(xì)胞功能，，("NFkBactivationbypropteinkinaseCisoformsandB-cellfunction.")-EMBOReports4:31-36(2003))。最后，NFkB與控制編程性細(xì)胞死亡以及生長(zhǎng)和分化相關(guān)。實(shí)際上，認(rèn)為PIF(蛋白水解誘導(dǎo)因子，由腫瘤釋放并且涉及癌癥-誘導(dǎo)瘦體重量減輕)是胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié)物并且最終通過(guò)NFKB引起信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)(F.Delfino和WHWalker:"NFKB信號(hào)傳導(dǎo)途經(jīng)的激素調(diào)節(jié)"("HormonalregulationoftheNFKBsignalingpathway.")-MolecularandCellularEndocrinology157:1-9(1999);TMWatchorn，IWaddell，NDowidar和JARoss:"蛋白水解誘導(dǎo)因子通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子NFkB和STST3調(diào)節(jié)肝基因表達(dá)，，("Proteolysis-inducingfactorregulateshepaticgeneexpressionviathetranscriptionfactorNFkBandSTST3.")-FASEBJ15:562-564(2001))。另外眾所周知EPA通過(guò)抑制因PLA活化，特別是花生四烯酸(AA)釋放產(chǎn)生的信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)惡病質(zhì)發(fā)揮其有益作用。這一過(guò)程通過(guò)除去起始信號(hào)傳導(dǎo)事件防止了隨后泛蛋白-蛋白體途經(jīng)的增量調(diào)節(jié)和活化。盡管未防止PLA的活化或AA的釋放，但是HMB確實(shí)可以防止蛋白激酶C的增量調(diào)節(jié)，防止所有隨后的信號(hào)傳導(dǎo)途經(jīng)的活化，也最終防止了泛蛋白-蛋白體系統(tǒng)的活化。目前令人意外和出人意料地發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)的HMB可以減緩腫瘤生長(zhǎng)率并且與亞適劑量水平的EPA聯(lián)用可以促進(jìn)抗惡病質(zhì)作用。EPA與HMB的組合通過(guò)經(jīng)下調(diào)泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途經(jīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)成分的表達(dá)增加衰減蛋白質(zhì)降解而保護(hù)了肌肉質(zhì)量。術(shù)語(yǔ)"HMB"指的是具有上述化學(xué)通式的化合物，為其游離酸和鹽形式、其代謝物和衍生物。盡管本發(fā)明上下文中可以使用HMB的任意合適的形式，但是HMB優(yōu)選自游離酸、鹽、酯和內(nèi)酯；更優(yōu)選HMB為鹽。盡管本發(fā)明上下文中可以使用HMB的任意藥物上合適的鹽，但是優(yōu)選HMB鹽為水溶性的或在患者胃或腸中變成水溶性的。更優(yōu)選HMB鹽選自鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鉻鹽和鉤鹽。最優(yōu)選HMB鹽為鉀鹽。不過(guò)，可以使用其它無(wú)毒性的鹽，諸如其它堿金屬或堿土金屬鹽。類(lèi)似地，在本發(fā)明的上下文中可以使用任意藥物上可接受的酯。理想的情況是，HMB酯被快速轉(zhuǎn)化成其游離酸形式的HMB。優(yōu)選HMB酯為甲酯或乙酯。HMB甲酯和HMB乙酯被快速轉(zhuǎn)化成HMB的游離酸形式。同樣，在本發(fā)明上下文中可以使用任意藥物上可接受的內(nèi)酯。理想的情況是，HMB內(nèi)酯被快速轉(zhuǎn)化成其游離酸形式的HMB。優(yōu)選HMB內(nèi)酯為異戊內(nèi)酯或類(lèi)似的內(nèi)酯。這類(lèi)內(nèi)酯被快速轉(zhuǎn)化成HMB的游離酸形式。生產(chǎn)HMB及其衍生物的方法在本領(lǐng)域中眾所周知。例如，可以通過(guò)氧化二丙酮醇合成HMB。一種合適的操作方法描述在Coffman等的J.Am.Chem.Soc.80:2882-2887(1958)中。正如其中所述，通過(guò)對(duì)二丙酮醇進(jìn)行堿性次氯酸鈉氧化合成HMB。以游離酸的形式回收產(chǎn)物，可以將其轉(zhuǎn)化成理想的鹽。例如，可以通過(guò)使用冷的次氯酸鹽水溶液(漂白劑)氧化由二丙酮醇(4-羥基-4-甲基戊-2-酮)合成3-羥基-3-甲基丁酸(HMBA)。在使用HC1酸化反應(yīng)混合物后，通過(guò)使用乙酸乙酯提取并且從提取混合物中分離和保留有機(jī)層來(lái)回收HMBA產(chǎn)物。通過(guò)蒸發(fā)除去乙酸乙酯并且將殘余物溶于乙醇。在添加Ca(OH)2并且冷卻后，可以通過(guò)過(guò)濾回收CaHMB晶體，用乙醇洗滌該晶體且然后干燥。或者，HMB的鈣鹽商購(gòu)自SaltLakeCity,Utah的TSI?？梢詫┌Y患者的營(yíng)養(yǎng)支持分類(lèi)為(i)支持性的，其中制定營(yíng)養(yǎng)支持以便防止滋養(yǎng)充分的患者中的營(yíng)養(yǎng)損耗或在確定的療法前使衰竭的患者恢復(fù)；(ii)輔助性的，其中營(yíng)養(yǎng)支持在治療計(jì)劃中起整合作用；和(iii)決定性的，其中強(qiáng)有力的營(yíng)養(yǎng)支持是患者生存必需的。提供營(yíng)養(yǎng)支持的途經(jīng)包括口服膳食、管喂食和周?chē)蛉改c外營(yíng)養(yǎng)。用于本發(fā)明營(yíng)養(yǎng)方法和組合物的優(yōu)選實(shí)施方案為通過(guò)口服途經(jīng)進(jìn)行。口服喂食的備選為通過(guò)鼻胃、鼻十二指腸、食管造口、胃造口或空腸造口管進(jìn)行管喂食。HMB對(duì)瘦體重患者具有有益作用可以通過(guò)許多方式來(lái)實(shí)現(xiàn)。如果需要，可以不使用載體單獨(dú)給予HMB?？梢詫MB單純?nèi)苡谒⑶矣苫颊叻?。或者，可以將HMB噴在食物上，溶于咖啡等。患者的日總劑量可以廣泛改變，但患者一般得益于消耗至少2gm/天的HMB?；蛘?，20-40mg/kg/天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以將HMB摻入丸劑、膠嚢、速熔片、錠劑等。活性成分的劑量可以廣泛改變，但一般在250mg-lgm/劑量，其中患者消耗2-8個(gè)劑量/天以便達(dá)到最低2gm/天的目標(biāo)。制備這類(lèi)劑型的方法為本領(lǐng)域眾所周知。讀者的注意力可以集中在指導(dǎo)任何制備這類(lèi)劑型的最新版RemingtonsPharmaceuticalSciences中。盡管可以將HMB作為單一本體給予，但是一般將其摻入食品并且由患者在其食用膳食或點(diǎn)心過(guò)程中服用。如果需要，患者可以單純改變他們通常通過(guò)噴在食物、溶于咖啡等中消耗的食譜。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將HMB摻入飲料、方條狀食品、餅干等，特別設(shè)計(jì)這些食品以便提高HMB的適口性并且增加備選形式的分泌，由此提高患者/消費(fèi)者的可接受性。一般來(lái)說(shuō)，將HMB摻入膳食替代物，諸如Ensure、Boost、Glucerna、Pediasure、Pedialyte等。還可以將HMB摻入膳食替代物的方條狀食品，諸如PowerBars、Glucerna方條狀食品、ChoiceDM逸方條狀食品、Ensure⑧方條狀食品和Boost⑧方條狀食品等?；蛘撸梢詫MB摻入汁、碳酸鹽飲料、瓶裝水等。另外可以將HMB摻入醫(yī)用營(yíng)養(yǎng)物，諸如ProSure、Promote,Jevity⑧和Advera,設(shè)計(jì)它們是為了救助具體的疾病狀態(tài)，諸如癌癥、HIV/AIDS、COPD、關(guān)節(jié)炎等。用于生產(chǎn)任意這類(lèi)食品的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知。下面的討論用于解釋這類(lèi)食品及其制備。大部分膳食替代產(chǎn)品(即方條裝食品或液體)從脂肪、碳水化合物和蛋白質(zhì)中提供卡路里。這些產(chǎn)品一般還含有維生素和礦物，因?yàn)樗鼈冞m合于用作營(yíng)養(yǎng)的惟一來(lái)源。盡管這些膳食替代品可以用作營(yíng)養(yǎng)的惟一來(lái)源，但是它們一般不會(huì)照此使用。個(gè)體消耗這些產(chǎn)品是為了替代每天一次或兩次的膳食或提供保健點(diǎn)心。本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品應(yīng)包括這些實(shí)施方案中的任意種。這些營(yíng)養(yǎng)組分的量可以廣泛改變，這取決于靶向的患者群體(即癌癥、HIV/AIDS、關(guān)節(jié)炎、器官感覺(jué)考慮、培養(yǎng)的選擇、應(yīng)用等)。然而，作為一般性的非顯著性指導(dǎo)，本發(fā)明的膳食替代品含有下列相對(duì)量的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物A(基于總卡路里的相對(duì)百分比)提供5-80%總卡路里含量的蛋白質(zhì)成分；提供10-70%總卡路里含量的碳水化合物成分；和提供5-50%總卡路里含量的脂質(zhì)成分。膳食替代物含有合適的碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，正如制造營(yíng)養(yǎng)制品的本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。合適的碳水化合物包括，但不限于來(lái)源于玉米、木薯、稻米或馬鈴薯的蠟或非蠟形式的水解的、完整的、天然和/或化學(xué)修飾的淀粉；和糖類(lèi)，諸如葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、高果糖玉米糖漿、玉米糖漿固體、果糖寡聚體及其混合物。合適的脂質(zhì)包括，但不限于椰子油、大豆油、玉米油、橄欖油、紅花油、高油酸紅花油、MCT油(中鏈甘油三酯類(lèi))、向日葵油、高油酸向日葵油、棕櫚油、棕櫚油精、蕓荅油、棉子油、魚(yú)油、棕櫚仁油、鯡油、大豆油、卵磷脂、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的脂質(zhì)來(lái)源及其混合物?；ㄉ南┧岷投剂┧岬闹|(zhì)來(lái)源包括，但不限于魚(yú)油、卵黃油和真菌或藻油。這些脂肪的大量商品來(lái)源易于獲得并且公知為本領(lǐng)域中可實(shí)施的一種。例如，大豆油和蕓苔油購(gòu)自Decatur,Illinois的ArcherDanielsMidland。玉米油、椰子油、棕櫚油和棕櫚仁油購(gòu)自Portland,Organ的PremierEdibleOilsCorporation。分級(jí)分離的椰子油購(gòu)自L(fǎng)aGrange，Illinois的HenkelCorporation,高油酸紅花油和高油酸向日葵油購(gòu)自Eastlake,Ohio的SVOSpecialtyProducts,魚(yú)油購(gòu)自Tokyo，Japan的MochidaInternational。橄攬油購(gòu)自NorthHumberside，UnitedKingdom的AngliaOils。向日葵油和棉子油購(gòu)自Minneapolis,Minnesota的Cargil。紅花油購(gòu)自Richmond,California的CaliforniaOilsCorporation,除這些食品級(jí)油外，如果需要，還可以將有結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)摻入食品。有結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)為本領(lǐng)域中公知的。有結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)的簡(jiǎn)要描述可以在INFORM,Vol..8，No.10，1004頁(yè)中找到；標(biāo)題為"有結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)允許制造脂肪，，(Structuredlipidsallowfattailoring)1997年10月)。另外參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利US4，871，768。有結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)主要為在相同甘油母核上含有中鏈和長(zhǎng)鏈脂肪酸混合物的三?；视皖?lèi)。有結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)及其在腸制品中的應(yīng)用還描述在美國(guó)專(zhuān)利US6，194，379和US6，160，007中?？蛇x地，o>3脂肪酸可以占油摻合物的約30%，優(yōu)選co-3脂肪酸主要由二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸組成。制備營(yíng)養(yǎng)組合物中使用的食用油一般含有甘油三酯形式的o)-3脂肪酸并且包括，但不限于蕓苔油、中鏈甘油三酯類(lèi)、魚(yú)油、大豆油、大豆卯磷脂、玉米油、紅花油、向日葵油、高油酸向日葵油、高油酸紅花油、橄欖油、琉璃苣油、黑加侖花油、月見(jiàn)草油和亞麻籽油?？蛇x地，co-6脂肪酸與co-3脂肪酸在本發(fā)明脂質(zhì)摻合物中的重量比約為0.1-3.0。每日遞送的co-3脂肪酸至少應(yīng)為450mg并且可以根據(jù)個(gè)體體重、性別、年齡和醫(yī)學(xué)情況的不同而改變。正如所述，成年人消耗需要高水平例如每天約0.5-50gmdaily,更優(yōu)逸每天約2.5-5gm。合并o-3脂肪酸與HMB的令人意外的優(yōu)點(diǎn)在于膳食替代物的味道改善。o>3脂肪酸的典型來(lái)源為魚(yú)油和藻油。每種來(lái)源均給膳食替代品帶來(lái)了令人不愉快的味道。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)通過(guò)添加HMB，甚至在產(chǎn)品中使用最適度以下或低水平的co-3脂肪酸時(shí)，也可以獲得與預(yù)防偶然體重減輕相關(guān)的相同或更好的臨床效果。因此，本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在co-3脂肪酸與HMB的水平之間存在反相關(guān)性。例如，如果co-3脂肪酸的有效劑量為在2罐膳食替代物中遞送3gm，那么在配制成在2罐中含有2gmco-3脂肪酸的產(chǎn)品并且遞送lgmHMB的產(chǎn)品或在配制成含有l(wèi)gmw-3脂肪酸和在2罐中遞送2gmHMB的產(chǎn)品中可以觀(guān)察到相同的臨床效果。品嘗出配制成僅含有l(wèi)gmco-3脂肪酸的產(chǎn)品會(huì)遠(yuǎn)優(yōu)于使用2或3gm①-3脂肪酸配制的產(chǎn)品的味道，同時(shí)獲得相同的臨床有效性。此外，由于co-3脂肪酸為公知的AA，即炎癥介體抑制劑，所以含有co-3脂肪酸和HMB的產(chǎn)品可以具有比僅含有所述組分的那些產(chǎn)品更寬泛的有益性。合適的蛋白質(zhì)來(lái)源包括，但不限于牛奶、乳清和乳清級(jí)分、大豆、稻米、肉(例如牛肉)、動(dòng)物和植物(例如豌豆、馬鈴薯)、蛋(卵清蛋白)、明膠和魚(yú)。合適的完整蛋白質(zhì)來(lái)源包括，但不限于基于大豆的產(chǎn)品、基于牛奶的產(chǎn)品、酪蛋白、乳清蛋白、稻米蛋白、牛肉膠原蛋白、豌豆蛋白、馬鈴薯蛋白及其混合物?？蛇x地，所述完整蛋白來(lái)源富含在大的中性氨基酸(LNAA)中，包括纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。一般約40%的酪蛋白、乳清和大豆蛋白來(lái)源為大的中性氨基酸。例如，酪蛋白酸鹽含有約38wt/wt%LNAA，乳清蛋白濃縮物含有約39wt/wt%LNAA且大豆蛋白分離物含有約34wt/wt%LNAA。一般來(lái)說(shuō)，使用蛋白質(zhì)來(lái)源配制膳食替代物，該替代物可遞送約1-25gm的LNAA/天，優(yōu)選約1-20gm的LNAA/天，更優(yōu)選約4-20gm的LNAA/天。作為實(shí)例，每天3次消耗的含有包括4.8gmLNAA的膳食替代物可以遞送14.4gmLNAA/天。膳食替代物優(yōu)選還含有維生素和礦物，其用量被設(shè)計(jì)為可提供或補(bǔ)充接受該制品的人的每日營(yíng)養(yǎng)需求。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為營(yíng)養(yǎng)制品通常包括某些過(guò)量的維生素和礦物以確保它們滿(mǎn)足產(chǎn)品貯存期限內(nèi)的乾水平。這些相同的個(gè)體還認(rèn)為某些微量組分可能對(duì)人具有潛在的有益作用，這取決于患者所患的任何潛在的病患或疾病。例如，癌癥患者得益于諸如P-胡蘿卜素、維生素E、維生素C和硒這類(lèi)抗氧化劑。食品優(yōu)選包括，但不限于下列維生素和礦物鈣、磷、鈉、氯化物、鎂、錳、鐵、銅、鋅、硒、碘、鉻、鉬、條件必需營(yíng)養(yǎng)物m-肌醇、肉堿和?；撬嵋约熬S生素A、C、D、E、K和B復(fù)合物及其混合物。條件必需營(yíng)養(yǎng)物肉堿為由甲硫氨酸和賴(lài)氨酸形成的天然存在的氨基酸。其主要代謝作用與長(zhǎng)鏈脂肪酸通過(guò)線(xiàn)粒體膜轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)，由此刺激這些代謝能的燃料物質(zhì)氧化。肉堿補(bǔ)充是諸如肝和腎病這類(lèi)疾病和因營(yíng)養(yǎng)不良并發(fā)的主要慢性疾病或廣泛損傷中的重要代謝手段?？蛇x地，可以用足以提供達(dá)4gm/天的肉堿的水平的肉堿補(bǔ)充膳食替代物。膳食替代物還可以含有纖維和穩(wěn)定劑。合適的纖維和/或穩(wěn)定劑來(lái)源包括，但不限于黃原膠、瓜爾膠、阿拉伯膠、印度膠、卡拉牙膠、西黃蓍膠(gumtracacanth)、瓊脂、帚叉藻聚糖、胞外多糖膠、刺槐豆膠、果膠、低和高甲氧基果膠、燕麥和大麥葡聚糖、角叉藻聚糖、歐車(chē)前、明膠、微晶纖維素、CMC(羧甲基纖維素鈉)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、DATEM(單酸甘油酯和二脂酰甘油酯的二乙?；剖狨ヮ?lèi))、葡聚糖、角叉藻聚糖、FOS(果糖寡聚體)及其混合物?？扇苄陨攀忱w維的大量商品來(lái)源為可得到的。例如，阿拉伯樹(shù)膠、水解的羧甲基纖維素、瓜爾膠、果膠和低和高甲氧基果膠購(gòu)自Belcamp，Maryland的TICGums，Inc.。燕麥和大麥葡聚糖購(gòu)自O(shè)maha,Nebraska的MountainLakeSpecialtyIngredients,Inc.。歐車(chē)前購(gòu)自NorthBergen，NewJersey的MeerCorporation,而角叉藻聚糖購(gòu)自Philadelphia,Pennsylvania的FMCCorporation。摻入的纖維還可以為不溶性的膳食纖維，其有代表性的實(shí)例包括燕麥殼纖維、大豆殼纖維、大豆子葉纖維、甜菜纖維、纖維素和玉米糠。不溶性膳食纖維的大量來(lái)源也是可獲得的。例如，玉米糠購(gòu)自Chicago,Illinois的QuakerOats;燕麥殼纖維購(gòu)自Cambridge,Minnesota的CanadianHarvest;號(hào)豆殼纖維購(gòu)自Winnipeg,Canada的WoodstoneFoods;大豆殼纖維和燕麥殼纖維購(gòu)自L(fǎng)aVale，Maryland的TheFibradGroup;大豆子葉纖維購(gòu)自St.Louis,Missouri的ProteinTechnologiesInternational;甜菜纖維購(gòu)自Minneapolis,Minnesota的DeltaFiberFoods;且纖維素購(gòu)自SaddleBrook,NewJerseyJamesRiverCorp.。纖維的實(shí)例及其摻入水平的更為詳細(xì)的討論可以在授權(quán)給Garleb等的美國(guó)專(zhuān)利US5，085，883中找到。制品中使用的纖維的量可以改變。使用的具體纖維類(lèi)型并不關(guān)鍵。適合于人消耗并且在食品基質(zhì)中穩(wěn)定的任意纖維均可以使用。除纖維外，膳食替代物還可以含有寡糖類(lèi)，諸如果糖寡聚體(FOS)或葡糖寡糖(GOS)。寡糖類(lèi)可以被居于大腸的厭氧微生物快速并且廣泛地發(fā)酵成短鏈脂肪酸。這些寡糖類(lèi)為大部分雙歧桿菌屬種類(lèi)的優(yōu)選能量來(lái)源，但無(wú)法被潛在的病原性生物利用，諸如產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfingens)、艱難梭菌或大腸埃希氏桿菌。一般來(lái)說(shuō)，F(xiàn)OS占0-5gm/份的膳食替代物，優(yōu)選1-5gm/份，更優(yōu)選2-4gm/份的膳食替代物。膳食替代物還可以含有提高其適口性的香料。可以添加人造甜味劑以便補(bǔ)充香味并且掩蔽含鹽的味道。有用的人造甜味劑包括糖精、nutrasweet、三氯半乳蔗糖、乙酰舒泛(acesulfane)-K(ace-K)等?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的技術(shù)制備膳食替代物。存在各種加工技術(shù)。一般來(lái)說(shuō)，這些技術(shù)包括由一種或多種溶液形成淤漿，它們可以含有水和下列成分中的一種或多種碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、穩(wěn)定劑、維生素和礦物。一般在加入其它礦物前將HMB添加到碳水化合物淤漿中。將該淤漿乳化、勻化并且冷卻?？梢栽诩庸で?，在加工后或同時(shí)加入各種其它溶液。然后給加工的制品滅菌并且可以稀釋以便干燥成粉末，基于立即可食使用或以濃縮液體形式包裝。當(dāng)?shù)玫降闹破分傅氖橇⒓纯墒车囊后w或濃縮液體時(shí)，在滅菌前可以加入適量的水。還可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)制備固體組合物，諸如方條形食品、餅干等。例如，可以使用本領(lǐng)域中公知的冷擠壓技術(shù)制備它們。為了制備這類(lèi)組合物，一般將所有粉狀成分彼此干燥摻合。這類(lèi)成分一般包括蛋白質(zhì)、維生素預(yù)混合物、某些碳水化合物等。然后將脂溶性成分彼此混合并且與上述粉狀預(yù)混合物混合。最終將任意液體成分混入組合物，從而形成可塑類(lèi)組合物或生面團(tuán)。上述方法用于得到可塑性的物質(zhì)團(tuán)，然后可以通過(guò)稱(chēng)作冷成形或擠壓的操作步驟使它們?cè)诓贿M(jìn)一步發(fā)生物理或化學(xué)改變的情況下成形。在該方法中，以相對(duì)低的壓力通過(guò)提供所需形狀的模頭擠壓可塑性物質(zhì)團(tuán)。然后在適當(dāng)?shù)奈恢们袛嗨玫臄D出物而得到所需重量的產(chǎn)品。如果需要，然后可以給固體產(chǎn)品包衣，以便提高適口性，并且包裝用于分配。一般來(lái)說(shuō)，包裝為最終的消費(fèi)者提供了使用說(shuō)明(即癌癥患者消耗以便有助于防止瘦型肌肉缺失等)。還可以通過(guò)烘焙應(yīng)用或加熱擠壓制備本發(fā)明的固體組合物以便產(chǎn)生加工過(guò)的谷類(lèi)食物、餅干和脆點(diǎn)心。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇適合于生產(chǎn)所需終產(chǎn)品的許多制備方法之一。如上所述，還可以將HMB摻入汁、不充二氧化碳的飲料、充二氧化碳的飲料、電解質(zhì)溶液、香味水(下文統(tǒng)稱(chēng)為"飲料")等。HMB—般占0.5-2gm/份的飲料。用于生產(chǎn)這類(lèi)飲料的方法為本領(lǐng)域眾所周知。讀者的注意力可以集中在美國(guó)專(zhuān)利US6，176，980和US5,792,502，將每篇文獻(xiàn)的內(nèi)容各自引入本文作為參考。例如，將所有組分，—包括HMB溶于適當(dāng)體積的水。然后可選地加入香料、著色劑、維生素等。隨后對(duì)該混合物進(jìn)行巴氏消毒、包裝并且貯存至出貨為止?？梢园凑毡景l(fā)明的方法治療與消瘦或炎癥相關(guān)的任意疾病，諸如心血管、外周微血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腫瘤、免疫和傳染性疾病狀態(tài)。優(yōu)選所述疾病選自癌癥、惡病質(zhì)、與年齡相關(guān)的消瘦、與長(zhǎng)期住院相關(guān)的消瘦、HIV/AIDS、關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷、肝病、克羅恩病或其它炎性腸病(IBD)、腎機(jī)能不全和COPD(慢性阻塞性肺病)。更優(yōu)選所述疾病為惡病質(zhì)。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了治療與所述疾病相關(guān)的患者，諸如哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人的消瘦的方法。該方法包括對(duì)所述患者給予上述組合物，該組合物包括足以治療與所述疾病相關(guān)的消瘦的用量的HMB，其中在對(duì)患者給予該組合物時(shí)，與所述疾病相關(guān)的消瘦得以治療?？梢园凑毡绢I(lǐng)域眾所周知的方法測(cè)定足以治療指定患者與疾病相關(guān)的消瘦的HMB的用量。當(dāng)治療患者與疾病相關(guān)的消瘦時(shí)，理想的情況是對(duì)患有與疾病相關(guān)的消痩的患者給予包括這類(lèi)用量的HMB的組合物，按照這類(lèi)方式并且在這類(lèi)時(shí)間期限內(nèi)，患者的瘠瘦組織量增加，同時(shí)不會(huì)出現(xiàn)患者脂肪量的減少。在治療與癌癥惡病質(zhì)相關(guān)的消瘦過(guò)程中的一個(gè)實(shí)例為當(dāng)每天約兩次口服給予所述組合物最少兩周時(shí)；該劑量足以提供至少2gmHMB/天。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了減緩患者，諸如哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人的腫瘤生長(zhǎng)率的方法。該方法包括對(duì)所述患者給予上述組合物，該組合物包括足以減緩腫瘤生長(zhǎng)率的用量的HMB，其中在對(duì)患者給予該組合物時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)率得以減緩?？梢园凑毡绢I(lǐng)域眾所周知的方法測(cè)定足以衰減指定患者腫瘤生長(zhǎng)的HMB的用量。當(dāng)治療患者腫瘤生長(zhǎng)時(shí)，理想的情況是對(duì)患有肺瘤生長(zhǎng)的患者給予包括這類(lèi)用量的HMB的組合物，按照這類(lèi)方式并且在這類(lèi)時(shí)間期限內(nèi)，患者的腫瘤生長(zhǎng)減緩。在治療成年人腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中的一個(gè)實(shí)例為當(dāng)每天約兩次口服給予所述組合物最少兩周時(shí)；該劑量足以提供至少2gmHMB/天。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了下調(diào)蛋白激酶C的表達(dá)和/或活性的方法。實(shí)施例I-IV表示EPA和HMB減弱了PIF-誘導(dǎo)的蛋白激酶C(PKC)活化和隨后的IkB(x降解以及核因子-kB(NF-kB)的核蓄積。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了下調(diào)核因子k-B的表達(dá)和/或活性的方法。實(shí)施例WV表示EPA和HMB減弱了PIF-誘導(dǎo)的蛋白激酶C(PKC)活化和隨后的lKBa降解以及核因子-KB(NF-KB)的核蓄積。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了下調(diào)泛蛋白綴合酶的表達(dá)和/或活性的方法。實(shí)施例I-IV表示該過(guò)程伴隨有E2"k泛蛋白-綴合酶表達(dá)的減少。EPA與HMB組合至少為有效的或比單獨(dú)治療更為有效。這些結(jié)果表明EPA和HMB均可通過(guò)減弱經(jīng)下調(diào)泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途經(jīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)成分的表達(dá)增加的蛋白質(zhì)降解保護(hù)了肌肉量。本發(fā)明在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了下調(diào)26S蛋白酶體的成分的表達(dá)和/或活性的方法。實(shí)施例I-IV表示通過(guò)'胰凝乳蛋白酶類(lèi)'酶活性確定的蛋白酶體活性被HMB弱化。20Sa或(3-亞單位的蛋白質(zhì)表達(dá)減少了至少50%,此時(shí)為ATPase亞單位MSS1和19S蛋白酶體調(diào)節(jié)亞單位的p42。實(shí)施例I患有癌癥惡病質(zhì)的動(dòng)物中體重減輕的預(yù)防和蛋白質(zhì)降解的弱化本研究評(píng)價(jià)了HMB與EPA或組合相比對(duì)MAC16腫瘤誘導(dǎo)的體重減輕的作用和涉及的機(jī)理。MAC16胂瘤誘導(dǎo)的體重減輕主要由PIF誘導(dǎo)。純品系的雄性NMRI小鼠(平均重量25g)獲自我們自己的近交集落，并且如Bibby,M.C.等在"在受體動(dòng)物中產(chǎn)生惡病質(zhì)的可植入小鼠結(jié)腸腺癌的表征，，(Characterizationofatransplantableadenocarcinomaofthemousecolonproducingcachexiainrecipientanimals.)-J.Natl.CancerInst"78:539-546，1987所述，通過(guò)套管針經(jīng)皮下將MAC16腫瘤片段植入了選自存在確定的體重減輕的供體動(dòng)物的脅腹側(cè)。使移植的動(dòng)物飼喂大鼠和小鼠祠養(yǎng)膳食(SpecialDietServices,Witham，UnitedKingdom)并且隨意飲水，且在腫瘤移植后10-12天體重減輕明顯。恰在體重減輕發(fā)生前將動(dòng)物隨機(jī)分組以便接受每日的EPA(在橄欖油中)、HMB(在PBS中)或如通過(guò)中所述通過(guò)管飼法口服給予的組合，而對(duì)照組動(dòng)物接受橄攬油或PBS。EPA(98V。作為游離酸)購(gòu)自BiomolResearchLaboratoriesInc.,PA,USA。HMB(作為鉀鹽)荻自AbbottLaboratories,Columbus,Ohio,USA。所有的組均最少包含6只小鼠。每日監(jiān)測(cè)腫瘤體積、體重以及食物和水的攝取。當(dāng)體重減輕達(dá)到25%時(shí)，通過(guò)脫頸推處死動(dòng)物，并且所有研究均按照實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物護(hù)理和應(yīng)用UKCCRGuidelines的要求進(jìn)行?？焖倨孰x比目魚(yú)肌與完整的腱并且維持在等滲水冷鹽水中，此后測(cè)定蛋白質(zhì)降解。將新近剖離的比目魚(yú)肌通過(guò)腱與鋁線(xiàn)支持物固定在腱下近似靜息長(zhǎng)度上以便防止肌肉縮短并且在含有5mM葡萄糖和0.5mM環(huán)己酰亞胺的3ml充氧的(95%氧5Y。二氧化碳)Krebs-Henseleit碳酸氫鹽緩沖液(pH7.4)中預(yù)保溫45分鐘。如Waalkes，T.P.等在"評(píng)估血漿和組織中酪氨酸的熒光法，，(Afluorimetricmethodfortheestimationoftyrosineinplasmaandtissues.)-J.Lab.Clin.Med.，50:733-736，1957中所述，根據(jù)2小時(shí)內(nèi)酪氨酸的釋放確定蛋白質(zhì)降解。按照Orino，E.等在"蛋白酶體與多蛋白成分ATP-依賴(lài)性可逆結(jié)合而形成在人HL-60細(xì)胞中降解泛蛋白化蛋白的26S復(fù)合物"(ATP-dependentreversibleassociationofproteasoneswithmultipleproteincomponentstoform26ScomplexesthatdegradeubiquitinatedproteinsinhumanHL-60cells.)-FEBSLett.,284:206-210，簡(jiǎn)中所述方法，通過(guò)測(cè)定'胰凝乳蛋白酶類(lèi)'酶活性，即蛋白酶體的P-亞單位的顯著蛋白水解活性來(lái)確定功能性蛋白酶體的活性。用冰冷的PBS沖洗肌肉，切碎并且在20mMTris.HC1，pH7.5，2mMATP，5mMMgCl2和1mMDTT中進(jìn)行聲處理。然后在4°C下將聲處理物以18，000g離心IO分鐘并且將上清液用于根據(jù)氨甲基香豆素(AMC)從熒光底物琥珀酰-LLVY-AMC中的釋放確定'胰凝乳蛋白酶類(lèi)'酶活性。在沒(méi)有和有特異性蛋白酶體抑制劑乳胞素(10^iM)存在下測(cè)定活性。僅將乳胞素可抑制活性視為蛋白酶體特異性的。為了進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡，在10%SDS-PAGE上分離獲自上述試驗(yàn)的比目魚(yú)肌胞質(zhì)蛋白(2-5g)的樣品并且轉(zhuǎn)移至已經(jīng)用在PBS中的5%Marvel封閉的0.45jnm硝化纖維膜(Hybon(FM，AmershamLifeScienceProducts,Bucks,UnitedKingdom)上。對(duì)以1:5000的稀釋度使用MSSl和p42的初級(jí)抗體，其中對(duì)20S蛋白酶體a-亞單位使用1:1500且對(duì)J3-亞單位使用1:1000，而以1:500的稀釋度使用E2嫩的抗體。以1:2000的稀釋度使用二次抗體。20S蛋白酶體亞單位ocl、2、3、5、6和7(快樂(lè)MCP231)、20S蛋白酶體亞單位p3(HC10)、19S調(diào)節(jié)物ATPase亞單位Rptl(S7，Mssl;克隆MSS1-104)和19S調(diào)節(jié)物ATPase亞單位Rpt4(S106,p42;克隆p42-23)的小鼠單克隆抗體購(gòu)自AffinitiResearchProducts,Exeter,UnitedKingdom,泛蛋白-綴合酶E2的家兔多克隆抗血清(抗-UBC2抗體)為來(lái)自Dr.SimonWing，McGillUniversity,Montreal,Quebec,Canada的贈(zèng)品。過(guò)氧4匕物酶-綴合的山羊抗-家兔和家兔抗-小鼠二次抗體來(lái)自DakoLtd"Cambridge,UnitedKingdom。在室溫下將保溫進(jìn)行2小時(shí)并且通過(guò)化學(xué)發(fā)光展開(kāi)(ECL;Amersham)。HMB對(duì)具有MAC16腫瘤的小鼠中體重減輕的劑量響應(yīng)相關(guān)性如附圖2中所示.大于0.125g/kg的HMB劑量導(dǎo)致體重減輕顯著減少(附圖2A)。與對(duì)照組的差異顯示為a，p<0.05;b，p<0.01;和c，p<0.005。體重減輕的弱化并未伴隨食物和水?dāng)z取的改變。選擇0.25g/kg的劑量水平用于所有隨后的實(shí)驗(yàn)。HMB、EPA和HMB與EPA的組合對(duì)具有MAC16惡病質(zhì)腫瘤小鼠的體重減輕的作用如附圖3中所示。與對(duì)照組的差異顯示為a，p<0.05;b，p<0.01;或c，p<0.005。選擇亞適量的EPA以便研究與HMB的相互作用。所有的治療均導(dǎo)致比目魚(yú)肌重量顯著增加(附圖4A)，并且酪氨酸釋放顯著減少(附圖4B)，表明總蛋白降解減少。與PBS對(duì)照組的差異顯示為a，p<0.05;b，p<0.01;或c，p<0.005。在選擇的劑量下，HMB與EPA同樣有效。已經(jīng)證實(shí)蛋白酶體表達(dá)在具有MAC16腫瘤的小鼠腓腸肌中升高并且已經(jīng)證實(shí)這種增加的基因表達(dá)被EPA弱化。附圖5中的結(jié)果表明如通過(guò)'胰凝乳蛋白酶類(lèi)'酶活性所確定的功能性蛋白酶體活性被HMB弱化至與在選擇劑量下的EPA相同的程度，并且HMB與EPA的組合不會(huì)產(chǎn)生活性上的進(jìn)一步阻抑。與對(duì)照組的差異顯示為c，p<0.005。通過(guò)對(duì)來(lái)自聲處理的肌肉組織的上清液進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡來(lái)分析蛋白酶體亞單位的蛋白質(zhì)表達(dá)。20S蛋白酶體a-亞單位，即蛋白酶體結(jié)構(gòu)單位的表達(dá)被HMB和EPA弱化，并且對(duì)該組合而言存在帶2的進(jìn)一步減少一些指征(附圖6A)。與對(duì)照組的差異顯示為c，p<0.001，而與HMB的差異顯示為e，p<0.01。20S蛋白酶體(3-亞單位，即蛋白酶體的催化亞單位的表達(dá)也被HMB和EPA弱化，但這種組合比單獨(dú)的活性劑更為有效(附圖6B)。與對(duì)照組的差異顯示為c，p<0.001。19S蛋白酶體調(diào)節(jié)復(fù)合物的ATPase亞單位MSS1的表達(dá)如附圖7A中所示。HMB和EPA均弱化了MSS1的表達(dá)，但這種組合看起來(lái)不會(huì)產(chǎn)生額外的減少。使用19S調(diào)節(jié)物的另一種ATPase亞單位p42獲得了類(lèi)似的結(jié)果，其中p42促進(jìn)20S蛋白酶體與19S調(diào)節(jié)物的ATP依賴(lài)性結(jié)合而形成26S蛋白酶體(附圖7B)。與對(duì)照組的差異顯示為c，p<0.001。此外，HMB和EPA看起來(lái)有效性等同，而該組合確實(shí)顯示出進(jìn)一步減少p42表達(dá)。泛蛋白-綴合酶E2,處的表達(dá)也被HMB和EPA減少，而該組合使得表達(dá)額外減少(附圖8)。與對(duì)照組的差異顯示為b，p<0.01;和c,p<0.001,而與單獨(dú)的HMB的差異顯示為d，p<0.05;和f，p<0.001。這些結(jié)果證實(shí)HMB在弱化肌肉量缺失、蛋白質(zhì)降解和下調(diào)泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途徑方面與EPA功效相同，并且這種機(jī)理看起來(lái)是導(dǎo)致具有MAC16腫瘤的惡病質(zhì)小鼠肌肉量得到保護(hù)的原因。本研究已經(jīng)證實(shí)HMB有效地弱化具有MAC16腫瘤的小鼠惡病質(zhì)或偶然體重減輕的發(fā)生并且通過(guò)下調(diào)泛蛋白-蛋白酶體途徑的表達(dá)增加對(duì)骨骼肌中的蛋白質(zhì)降解產(chǎn)生減少作用。因此，HMB在減少20S蛋白酶體a和p亞單位以及19S調(diào)節(jié)物MSSl和p42的兩種亞單位的蛋白質(zhì)表達(dá)、E2,化和蛋白酶體蛋白水解活性的表達(dá)方面與EPA功效相同。實(shí)施例II動(dòng)物腫瘤生長(zhǎng)的弱化上述實(shí)施例I中所示的動(dòng)物研究還評(píng)價(jià)了HMB對(duì)具有MAC16惡病質(zhì)肺瘤的小鼠中腫瘤生長(zhǎng)的作用。如實(shí)施例I中所述進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。單獨(dú)的HMB對(duì)具有MAC16肺瘤的小鼠中腫瘤生長(zhǎng)率的劑量響應(yīng)相關(guān)性如附圖2B中所示。與對(duì)照組的差異顯示為a，p<0.05;b,p<0.01;和c，p<0.005。大于0.125g/kg的HMB劑量導(dǎo)致胂瘤生長(zhǎng)率顯著減緩。衰減腫瘤生長(zhǎng)并不伴隨食物和水?dāng)z取的改變。實(shí)施例IH鼠肌管中蛋白質(zhì)降解的衰減本研究檢驗(yàn)了HMB對(duì)鼠肌管中PIF-誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解和信號(hào)傳導(dǎo)途徑的作用以便確定泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途徑的表達(dá)增加弱化的機(jī)理。(:2<:12肌管通常在37°C下和在空氣中10%C02氣體環(huán)境中的補(bǔ)充了10%FCS、谷氨酰胺和1%青霉素-鏈霉素的DMEM中傳代。通過(guò)使鋪滿(mǎn)培養(yǎng)物在含有2%HS的DMEM中分化而形成肌管，其中每2天改變一次培養(yǎng)基。從具有20-25%體重減輕的小鼠中切下的MAC16實(shí)體瘤中純化PIF(Todoroy，P.等"癌癥惡病質(zhì)因子的表征，，(Characterizationofacancercachecticfactor.)-Nature,379:739-742，1996.)。將腫瘤在含有0.5mM苯甲磺酰氟、0.5mMEGTA和lmM二硫蘇糖醇的pH8.0的lOmMTris-HCl中以5ml/g胂瘤的濃度勻化肺瘤。加入固體硫酸銨至40%w/v并且在除去硫酸銨后，如Todoroy,P.等在"肌肉蛋白降解的誘導(dǎo)和腫瘤產(chǎn)物導(dǎo)致的重量減輕"(Inductionofmuscleproteindegradationandweightlossbyatumorproduct.)-CancerRes.，56:1256-1261，1996所述使用與固體基質(zhì)偶聯(lián)的抗-PIF單克隆抗體對(duì)上清液進(jìn)行親合色鐠。濃縮免疫原性級(jí)分并且用于進(jìn)一步研究。在含有2%HS的2mlDMEM中用L-[2，6-3H苯丙氨酸(0.67mCi/mmole)將6-孔多平皿中的肌管標(biāo)記24小時(shí)。然后在PBS中將它們洗滌3次，隨后在37。C和不使用酚紅的條件下保溫至上清液中不再顯示出放射性。然后將這些肌管在有PIF存在下的不含盼紅的新鮮DMEM中與和不與EPA或HMB保溫24小時(shí)，以便防止計(jì)數(shù)停止，并且在有2mM冷苯丙氨酸存在下保溫24小時(shí)以便防止重新?lián)饺敕派湫?。將釋放入培養(yǎng)基中的放射性的量表示為未接觸PIF的對(duì)照培養(yǎng)物的百分比以便測(cè)定總蛋白降解。為了測(cè)定花生四烯酸的釋放，用10pM花生四烯酸(含有l(wèi)pCi卩H花生四烯酸鹽/ml)將在含有2mlDMEM與2%HS的6-孔多平皿中的肌管標(biāo)記24小時(shí)(Smith，H.等"癌癥惡病質(zhì)因子對(duì)鼠(:2(:12肌原細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成/降解的作用二十碳五烯酸的調(diào)節(jié)"(Effectofacancercachecticfactoronproteinsynthesis/degradationinmurineC2C12myoblasts:Modulationbyeicosapentaenoicacid.)-CancerRes"59:5507-5513，1999)。然后用PBS充分洗滌以便除去微量的未摻入的卩H花生四烯酸鹽并且在PIF前2小時(shí)加入EPA或HMB。再經(jīng)過(guò)24小時(shí)后，取出1ml培養(yǎng)基以便測(cè)定釋放的放射性。將蛋白酶體的(3亞單位的功能活性測(cè)定為按照'胰凝乳蛋白酶-類(lèi)'酶活性enzymeactivityobtainedfluorimetricallyaccordingtothemethodofOrino，E.等在"蛋白酶體與多蛋白成分的ATP-依賴(lài)性可逆結(jié)合形成降解人HL-60細(xì)胞中的泛蛋白化蛋白的26S復(fù)合物"(ATP-dependentreversibleassociationofproteasomeswithmultipleproteincomponentstoform26ScomplexesthatdegradeubiquitinatedproteinsinhumanHL-60cells.)-FEBSLe仏，284:206-210，1991。使肌管接觸PIF24小時(shí)，在PIF前2小時(shí)加入或不加入EPA或HMB,并且在有或沒(méi)有特異性蛋白酶體抑制劑乳胞素(l0juM)(Fenteany，G.等"乳胞素、蛋白酶體功能和細(xì)胞結(jié)局"(Lactacystin，proteasomefunctionandcellfate.)一J.Biol.Chem.，273:8545-8548，1998)存在下根據(jù)氨甲基香豆素(AMC)從琥珀酰-LLVY-AMC(O.lmM)中的釋放確定上清液級(jí)分中的酶活性(Whitehouse，A.S等"誘導(dǎo)蛋白水解的誘導(dǎo)因子(PIF)對(duì)鼠肌管中泛蛋白-蛋白酶體途徑的表達(dá)增加與轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活化有關(guān)，，(Increasedexpressionoftheubiquitin-proteasomepathwayinmurinemyotubesbyproteolysis-inducingfactor(PIF)isassociatedwithactivationofthetranscriptionfactorNF-kB.)-Br.J.Cancer,89:1116-1122，2003)。僅將乳胞素可抑制活性視為蛋白酶體活性。對(duì)樣品的蛋白質(zhì)濃度調(diào)整活性，使用Bradford試驗(yàn)(SigmaChemicalCo"Dorset,UnitedKingdom),應(yīng)用牛血清清蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定。為了進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析，在10%SDS-PAGE上分離對(duì)上述試驗(yàn)獲得的胞質(zhì)蛋白(2-5g)并且在4。C下轉(zhuǎn)移至已經(jīng)用在PBS中的5%Marvel封閉的0.45pm硝化纖維膜上過(guò)夜。以l:100(抗-肌動(dòng)蛋白和PKCa);l:500(抗-ERKl和2);1:1000(抗-20S蛋白酶體(3-亞單位和I-KBa);1:1500(抗-20S蛋白酶體a-亞單位)或l:5000(抗-p42)的稀釋度使用初級(jí)抗體，而以1:2000的稀釋度使用二次抗體。在室溫下進(jìn)行2小時(shí)保溫并且通過(guò)ECL展開(kāi)。根據(jù)肌動(dòng)蛋白濃度對(duì)裝載量進(jìn)行定量。通過(guò)Andrews,N.C.等在"從有限數(shù)量的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中提取DNA-結(jié)合蛋白的快速微量制備技術(shù)"(Arapidmicropr印arationtechniqueforextractionofDNA-bindingproteinsfromlimitingnumbersofmammaliancells.)-NucleicAcidsRes"19:2499，1991中使用的方法從肌管中提取DNA結(jié)合蛋白，該方法使用低滲裂解，隨后對(duì)核進(jìn)行高鹽提取。按照制造商的說(shuō)明進(jìn)行EMSA(電泳遷移率變動(dòng)分析)結(jié)合試驗(yàn)。由于認(rèn)為具有MAC16腫瘤的小鼠中的蛋白質(zhì)降解和泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途徑的活化由PIF介導(dǎo)，所以在用PIF處理的鼠肌管中進(jìn)行有關(guān)HMB對(duì)蛋白降解影響的機(jī)理研究。正如Gomes-Marcondes等預(yù)先在"研究蛋白水解誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)的肌肉蛋白分解代謝機(jī)理的體夕卜模型系統(tǒng)的研發(fā)，，(Developmentofanin畫(huà)vitromodelsystemtoinvestigatethemechanismofmuscleproteincatabolisminducedbyproteolysis-inducingfactor.)-Br.J.Cancer,86:1628-1633，2002中報(bào)導(dǎo)的，PIF-誘導(dǎo)的總蛋白以鐘形劑量響應(yīng)曲線(xiàn)的方式分解，其中在4nM下具有最大作用。上述已經(jīng)證實(shí)了EPA的作用(Smith，H.J.等"癌癥惡病質(zhì)因子對(duì)鼠<:2<:12肌原細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成/降解的作用二十碳五烯酸的調(diào)節(jié)"(Effectofacancercachecticfactoronproteinsynthesis/degradationinmurineC2C12myoblasts:Modulationbyeicosapentaenoicacid.)-CancerRes.，59:5507-5513，1999;Whitehouse，A.S.等"15(S)-羥基二十碳四烯酸通過(guò)增加的泛蛋白-蛋白酶體途徑的表達(dá)增加誘導(dǎo)肌管中的蛋白質(zhì)分解代謝"(Inductionofproteincatabolisminmyotubesby15(S)畫(huà)hydroxyeicosatetraenoicacidthroughincreasedexpressionoftheubiquhin-proteasomepathway.)Br.J.Cancer,89:737-745，2003;和Whitehouse,A.S.等"蛋白水解誘導(dǎo)因子(PIF)對(duì)鼠肌管中泛蛋白-蛋白酶體途徑的表達(dá)增加與轉(zhuǎn)錄因子NF漏kB的活4匕有關(guān)"(Increasedexpressionoftheubiquitin-proteasomepathwayinmurinemyotubesbyproteolysis-inducingfactorisassociatedwithactivationofthetranscriptionfactorNF曙kB.)-Br.J.Cancer,89:1116-1122，2003)為在50|nM下的有效，并且附圖9A中的數(shù)據(jù)表明在50|iiM濃度下，HMB和EPA在衰減PIF誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解中等效。在低至25|tiMHMB下也存在一定程度的弱化，但在高濃度的PIF下沒(méi)有。在沒(méi)有PIF存在下與對(duì)照組的差異顯示為a，p<0.005，而對(duì)照組與PIF(就添加HMV或EPA的組而言)的差異顯示為b，p〈0.01和c，p<0.005。上述已經(jīng)證實(shí)PIF-誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解是因泛蛋白-蛋白酶體蛋白水解途徑的調(diào)節(jié)成分的表達(dá)增加所致Lorite，M.J"Smith,H丄，Arnold,J.A.，Morris,A.，Thompson,M.G.和Tisdale，M.J."蛋白水解誘導(dǎo)因子(PIF)對(duì)體內(nèi)骨骼肌中和體外鼠肌原細(xì)胞中ATP-泛蛋白-依賴(lài)性蛋白水解的活化"(ActivationofATP-ubiquitin-dependentproteolysisinskeletalmuscleinvivoandmurinemyoblastsinvitrobyaproteolysis-inducingfactor(PIF).)-Br.J.Cancer,85:297-302，2001和Gomes國(guó)Marcondes，M.C.C.，Smith,H.J"Cooper,J.C.和Tisdale，M.J."研究蛋白水解誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)的肌肉蛋白分解代謝機(jī)理的體外模型系統(tǒng)的研發(fā)，，(Developmentofanin-vitromodelsystemtoinvestigatethemechanismofmuscleproteineatabolisminducedbyproteolysis-inducingfactor.)—Br.J.Cancer,86:1628-1633，2002。根據(jù)'胰凝乳蛋白酶類(lèi)'酶活性，即蛋白酶體p-亞單位的顯性蛋白水解活性確定這種途徑的功能活性。PIF誘導(dǎo)在4.2nM下為最大的'胰凝乳蛋白酶類(lèi)'酶活性增加。PIF的作用完全被50nMEPA以及25和50|liMHMB弱化(附圖9B，與對(duì)照組的差異顯示為a，p<0.001，而在有EPA或HMB存在下差異顯示為b，p<0.001)。對(duì)蛋白酶體20Sa亞單位、p亞單位和p42，即促進(jìn)20S蛋白酶體與19S調(diào)節(jié)物的ATP-依賴(lài)性結(jié)合而形成26S蛋白酶體的19S調(diào)節(jié)物的ATPase亞單位的表達(dá)觀(guān)察到了類(lèi)似的作用(附圖10)。在所有情況中，PIF在4.2和10nM時(shí)表達(dá)增加，并且這一結(jié)果被50|liMEPA和HMB弱化，而在25|liM下不會(huì)。這些結(jié)果證實(shí)HMB通過(guò)對(duì)泛蛋白-蛋白酶體途徑的PIF誘導(dǎo)的作用減弱了蛋白質(zhì)降解。實(shí)施例IV對(duì)炎癥和蛋白水解中信號(hào)傳導(dǎo)的介體活性的作用上述實(shí)施例HI中所述體外研究還評(píng)價(jià)了HMB對(duì)為炎癥途徑中關(guān)鍵介體的分子的作用。本實(shí)驗(yàn)如實(shí)施例III中所述進(jìn)行。已經(jīng)證實(shí)PKC的活化激活了MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑的胞外信號(hào)調(diào)節(jié)的激酶(ERK)級(jí)聯(lián)(Toker，A."通過(guò)蛋白激酶C的信號(hào)傳導(dǎo)"(SignallingthroughproteinkinaseC.)-Front.Biosci"3:1134-1147，1998;Wolf，I和Seger，R."促分裂原活化蛋白蛋白激酶級(jí)聯(lián)從工作臺(tái)到床旁，，(Themitogen-activatedproteinkinasesignallingcascade:frombenchtobedside.)-IMAJ"4:641-647)?；罨腅RKs，后活化胞質(zhì)磷脂酶A2，即涉及炎癥中會(huì)花生四烯酸釋放的途徑中的限速酶。此外，已經(jīng)證實(shí)PIF誘導(dǎo)p42/44MAPK磷酸化，而總MAPK保持不變并且涉及PIF-誘導(dǎo)的蛋白酶體表達(dá)(Smith，H.J.等"蛋白水解誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)的鼠肌管中蛋白酶體表達(dá)涉及的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)"(Signaltransductionpathwaysinvolvedinproteolysis-inducingfactorinducedproteasomeexpressionmurinemyotubes.)-Br.J.Cancer,89:1783-1788，2003)。EPA和HMB對(duì)該過(guò)程的作用如附圖12中所示。PIF誘導(dǎo)在4.2nM下最大的p42/44磷酸化增加并且這種作用完全被50|iiM的EPA和HMB弱化，但是在25|iiMHMB下時(shí)不會(huì)。TheabilityofHMB弱化ERK1/2磷酸化的能力在HMB抑制PIF-誘導(dǎo)的蛋白酶體表達(dá)中可能是重要的。使用PKC的突變體以及這種酶的抑制劑的實(shí)驗(yàn)表明它形成PIF產(chǎn)生的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的中樞介體。PKC可能涉及導(dǎo)致NF-kB的核蓄積和基因轉(zhuǎn)錄增加的I-KBa的磷酸化(和降解)。PIF刺激PKCocl從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至質(zhì)膜(附圖ll)而導(dǎo)致活化，其中因蛋白質(zhì)降解在4.2nMPIF下具有最大作用(附圖9)。該過(guò)程被50)liM的EPA和HMB有效弱化；而HMB在25|liM下有效性較低(附圖11)。這提示PIF-誘導(dǎo)的PKC刺激被HMB通過(guò)抑制PKC而弱化。如上所述，PIF誘導(dǎo)I-KBa降解并且刺激NF-kB的核蓄積，且已經(jīng)證實(shí)該過(guò)程被50)uMEPA弱化(Whitehouse，A.S.等"蛋白水解誘導(dǎo)因子(PIF)對(duì)鼠肌管中泛蛋白-蛋白酶體途徑的表達(dá)增加與轉(zhuǎn)錄因子NF-kB活化有關(guān)"(Increasedexpressionoftheubiquitin-proteasomepathwayinmurinemyobutesbyproteolysis-inducingfactor(PIF)isassociatedwithactivationofthetranscriptionfactorNF-kB.)-Br.J.Cancer,89:1116-1122，2003)。附圖13A中的結(jié)果表明50^iM的HMB在有PIF存在下有效減弱鼠肌管中的I-kBoc降解并且防止NF-kB的核蓄積(附圖13C)。與OnMPIF的差異顯示為b，p<0.01;和c，p<0.001。當(dāng)以25pM的濃度使用HMB時(shí)，僅觀(guān)察到NF-kB與DNA結(jié)合的部分抑制(附圖13B)。與OnMPIF的差異顯示為b=p<0.01和c=p<0.001。50uMHMB和PIF治療與單獨(dú)的PIF相比在相同濃度下的差異e=p<0.01且f=p<0.001。這些結(jié)果提示在防止NF-kB移入核方面HMB的總體作用與EPA的總體作用相差無(wú)幾，同時(shí)伴隨基因表達(dá)的活化。因此，HMB顯示出為治療癌癥惡病質(zhì)中細(xì)胞因子誘導(dǎo)的炎癥和肌肉萎縮中的有效活性劑。HMB顯示出通過(guò)PKC活性的抑制和產(chǎn)生的胞質(zhì)IkB/NF-kB復(fù)合物的穩(wěn)定發(fā)揮其作用。因?yàn)檫@些分子為炎癥途徑中的關(guān)鍵介體，HMB顯示出為抗炎化合物。實(shí)施例V預(yù)防偶然體重減輕的營(yíng)養(yǎng)品組合物將制備本實(shí)施例的營(yíng)養(yǎng)品的物質(zhì)的具體目錄列在表1中。當(dāng)然，在不脫離本發(fā)明范圍的情況下進(jìn)行具體組分和量的不同改變。表l:物質(zhì)目錄組分量(KG)水316痕量/痕量礦物預(yù)混合物0.06硫酸鋅0.033硫酸鎂0.0082鉬酸鈉0.00023氯化鉻0.00029亞硒酸鈉0.000098氯化鉀0.072檸檬酸鈉2.89碘化鉀0.00009檸檬酸鉀1.5玉米糖裝7.68麥芽糖糊精53.6磷酸二鎂0.26磷酸二鈣0.99氯化鎂1.2蔗糖11.9果糖寡聚體5.9中鏈甘油三酯2.6蕓苔油1.5大豆油0.8757%維生素A棕櫚酸酯0.007維生素DEK預(yù)混合物0.04維生素D0.0000088D-a-醋酸維生素E0.036葉綠醌0.00006角叉藻聚糖0.03大豆卵磷脂0.6酪蛋白酸鈉15.5酪蛋白酸釣4.2HMB铞一水合物2.6乳蛋白質(zhì)分離物14精制除臭的沙丁魚(yú)油6.9抗壞血酸0.1245%氫氧化鉀0.13?；撬?.12水溶性維生素預(yù)混合物0.11煙酰胺0.017泛酸铞0.01鹽酸氯化硫胺0.003鹽酸維生素B60.003核黃素0.002葉酸0.0004生物素0.00034維生素B120.000038棕櫚酸抗壞血酸酯0.03氯化膽堿0.25L-肉堿0.0681N&AMARSHMAIXOW1.6VANILLAN&ADULCEDELECHE0.27通過(guò)下列步驟制備本發(fā)明的液體營(yíng)養(yǎng)品制備制備三種淤漿，將它們彼此摻合，與精制除臭的沙丁魚(yú)油合并，加熱處理，標(biāo)準(zhǔn)化，包裝并且滅菌。使用來(lái)自表7的物質(zhì)目錄制備454kg(l，000磅)液體營(yíng)養(yǎng)品的方法如下詳細(xì)描述。通過(guò)首先在攪拌下將約62.6kg水加熱至約71。C-77°C的溫度下制備碳水化合物/礦物淤漿。將HMB加入到水中并且通過(guò)將所得溶液攪拌至少5分鐘而溶解。向水中加入所需量的檸檬酸鉀和超痕量/痕量礦物預(yù)混合物并且通過(guò)將所得溶液攪拌至少10分鐘而溶解。然后按照所列的順序加入下列礦物，同時(shí)高速攪拌氯化鎂、氯化鉀、種檬酸鈉、碘化鉀、磷酸鎂和磷酸三鈣。在中速攪拌下將淤漿混合至完全溶解或分散。然后向該淤漿中加入玉米糖漿、蔗糖和麥芽糖糊精，同時(shí)攪拌。加入所需量的FOS并使其混合。在約60-66。C的溫度下和高速攪拌的同時(shí)將完整的碳水化合物/礦物淤漿保持不超過(guò)8小時(shí)，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)在約32-43°C的溫度下和攪拌的同時(shí)合并和加熱中鏈甘油三酯類(lèi)(分級(jí)分離的椰子油)、蕓苔油和大豆油制備油淤漿。加入維生素DEK預(yù)混合物并且使其混合至完全分散。加入所需量的下列組分大豆卵磷脂、維生素A、抗壞血酸棕櫚酸酯和維生素E。加入角叉菜并且使其混合至完全分散。在約32-43°C的溫度和中速攪拌下將完整的油淤漿保持不超過(guò)8小時(shí)，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)在攪拌的同時(shí)首先將196.78kg水加熱至約60-63。C溫度下制備蛋白質(zhì)淤漿。使用混合設(shè)備將酪蛋白酸鈣和酪蛋白酸鈉和乳蛋白質(zhì)分離物摻入所述淤漿。在約54-60°C溫度和攪拌下將完整的蛋白質(zhì)淤漿保持不超過(guò)2小時(shí)，此后與其它淤漿摻合。在攪拌下將油與蛋白質(zhì)淤漿彼此摻合并且將所得摻合的淤漿維持在約54-66°C溫度下。在放置至少5分鐘后，在攪拌下向來(lái)自上述步驟的摻合54-66溫度下。然后在攪拌的同時(shí)向該淤漿中加入精制除臭的沙丁魚(yú)油(在最優(yōu)選的制備方法中，當(dāng)摻合物以恒定速率通過(guò)管道時(shí)，將沙丁魚(yú)油緩慢計(jì)量入產(chǎn)品)。優(yōu)選在至少5分鐘后，測(cè)定摻合的淤漿的pH。如果摻合的淤漿的pH低于6.55，那么用稀氫氧化鉀將其調(diào)整至pH6.5-6.8。在放置既不少于l分鐘，又不超過(guò)2小時(shí)的期限后，如下所述將摻合的淤漿進(jìn)行脫氣，超-高-溫(UHT)處理并且勻化使用正泵給摻合的淤漿提供這種操作步驟；將摻合的淤漿加熱至約66-71°C的溫度；將摻合的淤漿脫氣至25.4-38.1cmHg;在61-75個(gè)大氣壓下乳化摻合的淤漿；通過(guò)使摻合的淤漿通過(guò)具有約10秒保留時(shí)間的板/螺管熱交換器將其加熱至約120-122°C的溫度；使用約為5秒的保留時(shí)間將摻合的淤漿UHT加熱至約144-147°C的溫度；通過(guò)使摻合的淤漿通過(guò)瞬時(shí)冷卻器使其溫度降至約120-122°C的溫度；通過(guò)使摻合的淤漿通過(guò)具有約10秒保留時(shí)間的板/螺管熱交換器使其溫度降至71-82。C的溫度；在約265-266個(gè)大氣壓下勻化摻合的淤漿；在約74-85。C的溫度下使摻合的淤漿通過(guò)保留管至少16秒；和通過(guò)使摻合的淤漿通過(guò)大的熱交換器將其冷卻至約1-70°C的溫度。在約l-7。C溫度下，優(yōu)選在攪拌的同時(shí)貯存摻合的淤漿。優(yōu)選在此時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆治鰷y(cè)試以便質(zhì)量控制?；跍y(cè)試結(jié)果，在攪拌的同時(shí)將適量的稀釋水(10-38。C)加入到摻合的淤漿中。分別制備維生素溶液和香料溶液且然后加入到摻合的淤漿中。通過(guò)下列步驟制備維生素溶液在攪拌的同時(shí)將約3.94kg水加熱至約43-66°C的溫度，且此后按照所列順序加入下列組分抗壞血酸、45%氳氧化鉀、?；撬?、水溶性維生素預(yù)混合物、氯化膽堿和L-肉堿。然后在攪拌的同時(shí)將該維生素溶液加入到摻合的淤漿中。通過(guò)在攪拌的同時(shí)將藥用蜀葵和dulcedeleche香料加入到約7.94kg水中制備香料溶液。使用FirmenichInc.，Princeton,NewJersey,U.S.A.發(fā)布的人造藥用蜀葵香料和FirmenichInc.發(fā)布的人造dulcedeleche香料制備本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)品。然后在攪拌的同時(shí)將該香料溶液加入到摻合的淤漿中。如果必要，將稀的氫氧化鉀加入到摻合的淤漿中，使得產(chǎn)品在滅菌后具有6.4-7.0的pH。然后將完整的產(chǎn)品放入合適的容器中并且進(jìn)行滅菌。當(dāng)然，如果需要，可以使用無(wú)菌操作。實(shí)施例VI<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>WSV預(yù)混合物(每g預(yù)混合物)375mg/g煙酰胺，242mg/g泛酸鈣，8.4gm/g葉酸，62mg/g鹽酸氯化硫胺，48.4gm/g核黃素，59.6mg/g鹽酸維生素B6，165mcg/g維生素B12和7305mcg/g生物素維生素DEK預(yù)混合物(每g預(yù)混合物)8130IU/g維生素D3，838IU/g維生素E,1.42mg/g維生素K,UTM/TM預(yù)混合物(每g預(yù)混合物)45.6mg/g鋅，54mg/g鐵，15.7錳，6.39mg/g銅，222mcg/g硒，301mcg/g鉻和480mcg/g鉬通過(guò)制備彼此摻合、加熱處理、標(biāo)準(zhǔn)化、包裝和滅菌的四種淤漿生產(chǎn)本發(fā)明的糖尿病用液體營(yíng)養(yǎng)品。通過(guò)實(shí)現(xiàn)在攪拌的同時(shí)將約82kg水加熱至約65。C-約71。C的溫度制備碳水化合物/礦物淤漿。在攪拌的同時(shí)加入所需量的HMB鈣并且攪拌5分鐘。加入所需量的Kelco，DivisionofMerck和CompanyIncorporated,SanDiego，California,U.S.A.發(fā)布的檸檬酸^5和胞外多糖膠(gellengum)并且攪拌5分鐘。加入所需量的超痕量礦物/痕量礦物(UTM/TM)預(yù)混合物(Fortitech，Schnectady，NewYork分布)。該淤漿的顏色為淡黃綠色。將攪拌維持至礦物完全分散。然后在攪拌的同時(shí)加入所需量的下列礦物檸檬酸鉀、氯化鉀、氯化鉻、氯化鎂和碘化鉀。接下來(lái)在高速攪拌下向淤漿中加入第一種GrainProcessingCorporation,Muscataine，lowa，U.S.A.發(fā)布的麥芽糖糊精和果糖并且使其溶解。在攪拌的同時(shí)，加入所需量的RoquetteAmerica,Inc.,Keokuk，Iowa發(fā)布的麥芽糖醇粉末、AlGroupLonza，F(xiàn)airLawn,NewJersey分布的麥芽糖醇糖漿、GoldenTechnologiesCompany,Golden,Colorado,U.S.A.分布的果糖寡聚體和第二種MatsutaniChemicalIndustryCo"Hyogo，Japan分布的產(chǎn)品名稱(chēng)為nameFiberso儼2(E)的麥芽糖糊精并且充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?。在攪拌下向該淤漿中加入所需量的磷酸三鈣和磷酸鎂。在約65。C-約71°C和攪拌下將完整的碳水化合物/礦物淤漿保持不超過(guò)12小時(shí)，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)合并所需量的高油酸紅花油和蕓苔油并且在攪拌的同時(shí)將其加熱至約40.5。C-約49°C的溫度制備在油淤漿中的纖維。在攪拌的同時(shí)，加入所需量的來(lái)自CognisofLaGrange，Illinois的葉黃素酯類(lèi)。最少攪拌15分鐘。在攪拌的同時(shí)，向加熱的油中加入所需量的下列組分卵磷月旨(由CentralSoyaCompany,FortWayne,Indiana分布)、維生素D、E、K預(yù)混合物(由VitaminsInc.,Chicago,Illinois分布)、維生素A、維生素E和p-胡蘿卜素。將所需量的ProteinTechnologyInternational,St.Louis,Missouri分布的大豆多糖緩'Il分散入加熱的油中。將完整的油/纖維淤漿在約55。C-約65°C的溫度和中速攪拌下保持不超過(guò)12小時(shí)的期限，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)將293kg水加熱至60。C-65。C制備在水淤漿中的第一種蛋白質(zhì)。在攪拌的同時(shí)加入所需量的20%檸檬酸鉀并且保持1分鐘。在高速攪拌下加入所需量的酸性酪蛋白，隨后立即加入所需量的20%氫氧化鈉。將攪拌在高速下維持至酪蛋白溶解。在中速攪拌下將該淤漿保持在約60°C-65°C。通過(guò)首先在攪拌的同時(shí)將約77kg水加熱至約40。C的溫度下制備在水淤漿中的笫二種蛋白質(zhì)。加入酪蛋白酸鹽并且將該淤漿充分?jǐn)嚢柚晾业鞍姿猁}完全分散。在持續(xù)攪拌下，將該淤漿緩慢溫至60°C-65°C。將該淤漿保持不超過(guò)12小時(shí)，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)將344kg蛋白質(zhì)淤漿1與84kg蛋白質(zhì)淤漿2摻合組成批量。在攪拌的同時(shí)，加入37kg油/纖維淤漿。在放置至少l分鐘后，在攪拌的同時(shí)向來(lái)自上述步驟的摻合的淤漿中加入216kg碳水化合物/礦物淤漿并且將所得摻合的淤漿維持在約55。C-約60。C的溫度下。用1N氫氧化鉀將摻合批量的pH調(diào)整至pH為6.45一6.75。在放置不少于1分鐘，又不超過(guò)2小時(shí)的期限后，對(duì)該摻合物淤漿進(jìn)行脫氣、超-高-溫處理和勻化。將該摻合物淤漿加熱至約71°C-約82。C的溫度并且在真空中脫氣。然后通過(guò)單級(jí)勻化器在卯0-1100psig下乳化加熱的淤漿。乳化后，將該淤漿從約99。C加熱至約110。C且然后加熱至約146°C的溫度下約5秒。使該淤漿通過(guò)瞬時(shí)冷卻器以便將溫度降至約99。C-約110°C且然后通過(guò)板式冷卻器使溫度降至約71。C-約76。C。然后在3900-4100/400-600psig下勻化該淤漿。將該淤漿保持在約74。C-約80。C下16秒且然后冷卻至1°C-約7°C。此時(shí)，取樣用于微生物學(xué)和分析測(cè)試。將該混合物保持在攪拌下。分別制備水溶性維生素(WSV)溶液并且加入到處理的摻合淤漿中。通過(guò)在攪拌的同時(shí)將下列組分加入到9.4kg水中制備維生素溶液WSV預(yù)混合物(J.B.Laboratories,Holland,Michigan發(fā)布)，維生素C、氯化膽堿、L-肉堿、牛磺酸、肌醇、葉酸、鹽酸維生素B6和維生素B12。加入所需量的45%氫氧化鉀以使pH達(dá)到7-10?；谫|(zhì)量控制試驗(yàn)的分析結(jié)果，在攪拌的同時(shí)將適量的水加入到該批量中以便獲得所需的總固體量。另外，在攪拌下向稀釋的該批量中加入8.8kg維生素溶液。調(diào)整產(chǎn)品的pH以便獲得最佳產(chǎn)品穩(wěn)定性。然后將完整的產(chǎn)品放入合適的容器中并且進(jìn)行最終的滅菌。實(shí)施例VII兒科用營(yíng)養(yǎng)品組合物表3中提供了制備本發(fā)明771kg兒科腸用營(yíng)養(yǎng)品的物質(zhì)目錄單。其制備的詳細(xì)描述如下。表3:用于兒科香草營(yíng)養(yǎng)品的物質(zhì)目錄單<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>DEK預(yù)混合物:(每gm預(yù)混合物)12，100IU維生素D3,523IU維生素E，0.962mg維生素UTM/TM預(yù)混合物:(每gm預(yù)混合物)132mg鋅，147mg鐵，10.8mg錳，12.5mg銅，0.328mg竭，0.284mg鉬WSV預(yù)混合物:(每gm預(yù)混合物)375mg煙酰胺，242mgd-泛酸釣，8.4mg葉酸，62mg鹽酸氯化硫胺，48.4mg核黃素，59.6mg鹽酸維生素B6，165.5meg維生素B12,7305meg生物素通過(guò)將具體量的DEK預(yù)混合物稱(chēng)入大至足以裝載54g油溶性維生素的螺旋瓶蓋的避光容器制備儲(chǔ)備的油溶性維生素?fù)胶衔?osv摻合物)。使用塑料吸量管將所需量的維生素A加入到DEK等分部分中。給容器中充氮?dú)猓撕蠹由w。通過(guò)將所需量的高油酸紅花油、大豆油和MCT油加入到摻合罐中制備在脂肪淤漿中的儲(chǔ)備蛋白(PIF)。在攪拌的同時(shí)將蓋混合物加熱至40.5。C-49。C。在攪拌的同時(shí)加入所需量的來(lái)自AmericanRiverNutritionofHadley，Massachusetts的葉黃素酯類(lèi)。最少攪拌15分鐘。加入乳化劑、卵磷脂(CentralSoyaofDecatur,Indiana發(fā)布)和單酸甘油酯類(lèi)(QuestofOwingsMills,Maryland發(fā)布)并且充分混合至溶解。然后加入所有OSV摻合物。用該油摻合物將容器沖洗4-5次以確保維生素的完全轉(zhuǎn)移。加入角叉菜聚糖(FMCofRockland,Maine發(fā)布)和酪蛋白酸鹽。將該淤漿充分混合以分散蛋白質(zhì)。在60-65°C和中速攪拌下將PIF淤漿保持達(dá)6小時(shí)，直到使用為止。通過(guò)將所需量的水加入到摻合罐中制備在水淤漿中的儲(chǔ)備蛋白(PIW)。將水保持在中速攪拌下并且達(dá)到76-82°C。在高速攪拌下向水中加入所需量的酪蛋白酸鹽并且高速混合至蛋白質(zhì)完全分散。將該蛋白質(zhì)淤漿冷卻至54-60。C，此后進(jìn)行操作。一旦冷卻，就加入所需量的乳清蛋白并且充分混合至完全分散/溶解。將PIW淤漿在54一60°C下保持達(dá)2小時(shí)，直到使用為止。通過(guò)將所需量的水加入到摻合罐中制備儲(chǔ)備礦物溶液(MIN)并且加熱至60-68。C。向水中加入纖維素膠(FMCofNewark,Delaware發(fā)布)并且在中速攪拌下保持最少5分鐘，此后進(jìn)行操作。加入HMB鈣并且最少攪拌5分鐘，此后進(jìn)行操作。加入無(wú)機(jī)鹽氯化鎂、氯化鉀、檸檬酸鉀、碘化鉀和磷酸二鉀，每次添加一種，在每次添加之間進(jìn)行攪拌以確保礦物溶解。將完整的MIN溶液保持在低-中速攪拌和54-65。C下，直到使用為止。通過(guò)將具體量的PIW淤漿加入到摻合罐中制備最終的摻合物并且在攪拌下加熱至54-60°C。向罐中加入具體量的PIF淤漿并且充分混合。向該摻合物中加入具體量的MIN溶液并且充分混合。向該摻合物中加入具體量的氯化鈉并且充分混合。向該摻合物中加入具體量的蔗糖并且充分混合至溶解。向該摻合物中加入磷酸三鈣并且充分混合以便分散。向該摻合物中再加入具體量的水并且充分混合。將完整的最終摻合物保持在54-60。C和持續(xù)攪拌下。如果必要，用1NKOH將pH調(diào)整至6.45-6.8。在放置不少于1分鐘，又不超過(guò)2小時(shí)的期限后，對(duì)該摻合物淤漿進(jìn)行脫氣、超-高-溫處理和勻化。將摻合的淤漿加熱至約68。C-約74。C的溫度并且在真空中脫氣。然后在900-1100psig下乳化加熱的淤漿。乳化后，將該淤漿加熱至約120。C-約122°C且然后加熱至約149。C-約150。C的溫度下。使該淤漿通過(guò)瞬時(shí)冷卻器以便將溫度降至約120°C-約122。C且然后通過(guò)板式冷卻器使溫度降至約74°C—約79°C。然后在3900-4100/400-600psig下勻化該淤漿。將該淤漿保持在約74。C-約85。C下16秒且然后冷卻至1。C-約6°C。此時(shí)，取樣用于微生物學(xué)和分析測(cè)試。將該混合物保持在攪拌下。如下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。通過(guò)將具體量的水在摻合罐中加熱至48-60。C制備儲(chǔ)備維生素溶液(WSV)。按照所列順序向該溶液中各自加入檸檬酸鉀、UTM/TM預(yù)混合物(FortitechofSchenectady,NewYork發(fā)布)、WSV預(yù)混合物、m-肌醇、牛磺酸、L-肉堿和氯化膽堿并且使其充分混合以便溶解或分散每種組分。將14.2kg維生素溶液加入到處理的混合罐中。通過(guò)將具體量的水加入到摻合罐中制備儲(chǔ)備香草溶液。向水中加入具體量的香草(GivaudanRoureofCincinnati,Ohio發(fā)布)并且充分混合。向處理的混合罐中加入18,5kg香草溶液并且充分混合。通過(guò)將所需量的水加入到摻合罐中制備儲(chǔ)備抗壞血酸溶液。加入具體量的抗壞血酸并且充分混合至溶解。加入具體量的45%KOH并且充分混合。向混合罐中加入8.4kg抗壞血酸溶液并且充分混合。通過(guò)添加92.5kg水并且充分混合將最終的混合物稀釋至最終的總固體量。將產(chǎn)品填充入合適的容器，此后進(jìn)行最終的(蒸餾瓶)滅菌。實(shí)施例VIH完整營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑組合物表4中提供了用于制備1,000kg典型香草香精膳食替代物液體的物質(zhì)的目錄單。其制備的詳細(xì)描述如下。表4:用于香草液體營(yíng)養(yǎng)品的物質(zhì)目錄單<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>_碟化鐘_^_86gm_WSV預(yù)混合物(每g預(yù)混合物)375mg/g煙酰胺，242mg/g泛酸鉀，8.4gm/g葉酸62mg/g鹽酸氯化硫胺，48.4gm/g核黃素，59.6mg/g鹽酸維生素B6，165mcg/g維生素B12和7305mcg/g生物素維生素DEK預(yù)混合物(每g預(yù)混合物)8130IU/g維生素D3，838IU/g維生素E,1.42mg/g維生素K^UTM/TM預(yù)混合物(每g預(yù)混合物)45.6mg/g鋅，54mg/g鐵，15.7錳，6.39mg/g銅222mcg/g硒，301mcg/g鉻和480mcg/g鉬'通過(guò)制備三種彼此摻合、加熱處理、標(biāo)準(zhǔn)化、包裝和滅菌的淤漿制備本發(fā)明的液體膳食替代品。通過(guò)首先在攪拌的同時(shí)將所需量的水加熱至約65。C-約71°C的溫度下制備碳水化合物/礦物淤漿。加入所需量的HMB鈣并且最少攪拌5分鐘。在攪拌的同時(shí)加入所需量的檸檬酸鉀和超痕量的礦物/痕量礦物(UTM/TM)預(yù)混合物(Fortitech，Schnectady，NewYork發(fā)布)。該淤漿的顏色為單黃綠色。將攪拌維持至礦物完全分散。然后在攪拌的同時(shí)加入所需量的下列礦物氯化鎂、氯化鉀、氯化鈉、檸檬酸鈉、碘化鉀、磷酸鎂和磷酸三鈣。接下來(lái)在高速攪拌下向淤漿中加入GrainProcessingCorporation,Muscataine，lowa，U.S.A.發(fā)布的麥芽糖糊精、蔗糖和玉米糖漿并且使其溶解。將完整的碳水化合物/礦物淤漿保持在約65°C-71°C的溫度和攪拌下不超過(guò)8小時(shí)，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)合并所需量的高油酸紅花油和蕓莒油并且在攪拌的同時(shí)將其加熱至約40.5。C-約49。C制備在脂肪淤漿中的蛋白質(zhì)(PIF)。在攪拌的同時(shí)，加入所需量的來(lái)自KeminFoodsofDesMoines,lowa的游離葉黃素。最少攪拌15分鐘。向加熱的油中加入下列組分卵磷脂(CentralSoyaCompany,FortWayne,Indiana發(fā)布)、維生素A和維生素D、E、K預(yù)混合物(VitaminsInc.,Chicago,Illinois發(fā)布)。將所需量的角叉菜聚糖與所需量的乳清蛋白干燥摻合并且加入到攪拌的脂質(zhì)混合物中且最少攪拌10分鐘。將所需量的大豆蛋白緩慢加入到摻合物中以確保適當(dāng)混合。將完整的油/蛋白質(zhì)淤漿保持在約40。C-約43°C和中速攪拌下不超過(guò)2小時(shí)期限，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)首先在攪拌的同時(shí)將約所需量的水加熱至約40。C的。C下制備在水淤漿中的蛋白質(zhì)。加入酪蛋白酸鹽并且充分?jǐn)嚢桠}淤漿，直到酪蛋白酸鹽完全分散。通過(guò)持續(xù)攪拌將該淤漿緩慢溫至60°C-65°C。將該淤漿保持不超過(guò)12小時(shí)，直到將其與其它淤漿摻合為止。通過(guò)將所需量的蛋白質(zhì)淤漿所需量的碳水化合物/礦物淤漿摻合組成批量并且將其攪拌10分鐘。在攪拌的同時(shí)，加入37kg油/纖維淤漿。在放置至少l分鐘后，在攪拌的同時(shí)加入所需量的油/蛋白質(zhì)淤漿并且至少攪拌10分鐘。用1N氬氧化鉀將摻合批量的pH調(diào)整至pH為6.66-6.75。在放置不少于1分鐘，又不超過(guò)2小時(shí)的期限后，對(duì)該摻合物淤漿進(jìn)行脫氣、超-高-溫處理和勾化。將該摻合物淤漿加熱至約71。C-約82。C的溫度并且在真空中脫氣。然后通過(guò)單級(jí)勻化器在卯0-1100psig下乳化加熱的淤漿。乳化后，將該淤漿從約99。C加熱至約110。C且然后加熱至約146。C的溫度下約5秒。使該淤漿通過(guò)瞬時(shí)冷卻器以便將溫度降至約99。C—約110。C且然后通過(guò)板式冷卻器使溫度降至約71。C-約76。C。然后在3900-4100/400-600psig下勻化該淤漿。將該淤漿保持在約74。C-約80。C下16秒且然后冷卻至1。C—約7°C。此時(shí)，取樣用于微生物學(xué)和分析測(cè)試。將該混合物保持在攪拌下。分別制備水溶性維生素(WSV)溶液并且加入到處理的摻合淤漿中。通過(guò)在攪拌的同時(shí)將下列組分加入到9.4kg水中制備維生素溶液WSV預(yù)混合物(J,B.Laboratories,Holland,Michigan發(fā)布)，維生素C、氯化膽堿、L-肉堿、?；撬?、肌醇、葉酸、鹽酸維生素B6和維生素B12。加入所需量的45%氫氧化鉀以使pH達(dá)到7-10?；谫|(zhì)量控制試驗(yàn)的分析結(jié)果，在攪拌的同時(shí)將適量的水加入到該批量中以便獲得所需的總固體量。另外，在攪拌下向稀釋的該批量中加入8.8kg維生素溶液。調(diào)整產(chǎn)品的pH以便獲得最佳產(chǎn)品穩(wěn)定性。然后將完整的產(chǎn)品放入合適的容器中并且進(jìn)行最終的滅菌。實(shí)施例IX飲料組合物為了生產(chǎn)1000kg批量的即飲飲料，將987.31kg水放入安裝了攪拌器的容器中。在環(huán)境溫度下，加入所需量的苯甲酸鉀并且使其完全溶解。加入所需量的HMB^5并且使其完全溶解。然后按照所列的順序加入下列組分。使每種組分完全溶解，此后加入下一個(gè)種組分。表5:即飲飲料<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>加入抗壞血酸，此后立即填充入12-盎司鋁罐中。給飲料充二氧化碳，此后填充入鋁罐。給該溶液脫氣且然后轉(zhuǎn)入冷卻并且充約2.5體積二氧化碳的"碳-冷卻器"中。實(shí)施例X電解質(zhì)替代品組合物如下的實(shí)施例中解釋了如何制備即飲的再水化溶液。ORS具有表6中概括的組成。表6:即飲的再水化溶液<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>稱(chēng)量出所需量的過(guò)濾水并且加入到摻合罐中。將水加熱至43-54°C，同時(shí)中速攪拌。在維持中速攪拌時(shí)，加入HMB鈣并且將混合物最少混合5分鐘。在持續(xù)中速攪拌下加入所需量的葡萄糖。攪拌至溶解。加入所需量的果糖。攪拌至溶解。按照所列的順序?qū)⑺枇康南铝薪M分加入到葡萄糖/果糖摻合物中并且攪拌至溶解葡糖酸鋅、檸檬酸鈉、氯化鈉、檸檬酸鉀和檸檬酸。加入所需量的三氯半乳蔗糖(McNeilSpecialityProductsCompanyofNewBrunswick,NewJersey發(fā)布)和乙酰舒泛鐘(作為Simsett⑧由HoechstFoodIngredientsofSomerset,NewJersey發(fā)布)并且攪拌至溶解。向該批量中加入黃#6和果香果汁飲料香料至溶解。將該摻合物冷卻至1.1-7.2°C并且保持在低速攪拌下。填充所需數(shù)量的一升塑料瓶，對(duì)瓶口加箔加熱密封并且擰轉(zhuǎn)至食品級(jí)無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)。或者，將冷卻的摻合物包嚢在可密封冷凍包裝材料中并且諸如通過(guò)加熱密封進(jìn)行密封。將單劑量的在水化溶液包裝在密封可冷凍的藥袋中?？梢杂糜趯?shí)施本發(fā)明的，諸如用于傳統(tǒng)的冷藏充氣飲料瓶的各種類(lèi)型的包裝材料對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見(jiàn)。包裝材料優(yōu)選為能夠標(biāo)記，諸如產(chǎn)品鑒別、組分等的類(lèi)型以便置于其外表面上。在這種條件下將在水化制品裝船并且貯存，優(yōu)選在其多個(gè)單元裝置中。關(guān)注為商業(yè)化目的將多個(gè)單元裝置或冷藏充氣飲料瓶共同包裝。在給予前，冷凍液體在水化溶液的包裝。冷凍后，打開(kāi)包裝并且攝取其內(nèi)含物。由于一般在環(huán)境溫度下給予冷凍的再水化制品，所以每個(gè)包裝中包含的再水化液體的量?jī)?yōu)選為可以仍然在冷凍狀態(tài)下完全消耗的量。優(yōu)選20-35盎司，更優(yōu)逸2.0-2.5盎司/包裝。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，將2.1盎司無(wú)菌再水化溶液包嚢在矩形，例如l"x8"可冷凍的包裝材料中。優(yōu)選透明的塑料包裝材料。權(quán)利要求1.通過(guò)下調(diào)選自蛋白激酶C、核因子κ-B、泛蛋白綴合酶和26S蛋白酶體的成分的成分的表達(dá)和/或活性來(lái)預(yù)防或治療患者疾病情況的方法，包括給予HMB、其鹽、其代謝物或衍生物。2.權(quán)利要求1所述方法，其中給予HMB、其鹽、其代謝物或衍生物下調(diào)蛋白激酶C的表達(dá)和/或活性。3.權(quán)利要求1所述方法，其中給予HMB、其鹽、其代謝物或衍生物下調(diào)核因子k-B的表達(dá)和/或活性。4.權(quán)利要求1所述方法，其中給予HMB、其鹽、其代謝物或衍生物下調(diào)泛蛋白綴合酶的表達(dá)和/或活性。5.權(quán)利要求1所述方法，其中給予HMB、其鹽、其代謝物或衍生物下調(diào)26S蛋白酶體的表達(dá)和/或活性。6.權(quán)利要求1所述方法，其中聯(lián)合給予選自L(fǎng)-肉堿、富含大的中性氨基酸的基本上不含游離氨基酸的氨基-氮源、o-3脂肪酸和不消化的寡糖的成分中的至少一種與HMB或其鹽。7.權(quán)利要求l所述方法，其中所述疾病情況選自癌癥、惡病質(zhì)、與年齡相關(guān)的消瘦、與長(zhǎng)期住院治療相關(guān)的消瘦、HIV/AIDS、關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷、肝病、克羅恩病、IBD、腎機(jī)能不全和COPD。8.權(quán)利要求7所述方法，其中所述疾病為惡病質(zhì)。9.組合物，其包含a.HMB、其鹽、其代謝物或衍生物；b.肉堿；c.富含大的中性氨基酸的氨基氮源；且其中所述組合物基本上不含游離氨基酸。10.權(quán)利要求9所述組合物，其中所述HMB選自HMB鈉、HMB鉀、HMB鎂、HMB鉻、HMB釣、堿金屬HMB、堿土金屬HMB和HMB內(nèi)酯。11.權(quán)利要求9所述組合物，所述組合物還包含co-3脂肪酸。12.權(quán)利要求11所述組合物，其中所述(o-3脂肪酸選自二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。13.權(quán)利要求9所述組合物，其中所述大的中性氨基酸占氨基氮源的至少10%。14.權(quán)利要求9所述組合物，其中所述游離氨基酸占小于0.4gm/份的組合物。15.權(quán)利要求9所述組合物，其還包含小于2克/份的肉堿。16.權(quán)利要求9所述組合物，其還包含至少l克/份的FOS。17.權(quán)利要求9所述組合物，其還包含選自維生素、礦物和微量礦物的營(yíng)養(yǎng)物。18.組合物，其包含a.約2-10gm/升HMB鉀；b.至少l克/升的co-3脂肪酸；c.約1-約8g邁/升的肉堿；d.約1-約25gm/升的FOS;富含大的中性氨基酸的氨基氮源，其中所述氨基氮源包含約10-60wt/wt。/o的大的中性氨基酸；且其中所述組合物基本上不含游離氨基酸。19.權(quán)利要求9所述組合物，其中對(duì)人或動(dòng)物給予所述組合物。20.權(quán)利要求9所述組合物，其中所述組合物選自食品添加劑、膳食替代物、方條狀營(yíng)養(yǎng)食品、咀嚼物或一口食品和飲料。21.治療患者與疾病相關(guān)的消瘦的方法，包括對(duì)所述患者給予權(quán)利要求9所述組合物。全文摘要本發(fā)明涉及預(yù)防和治療慢性炎性疾病、癌癥和偶然體重減輕的方法。在本發(fā)明的實(shí)施過(guò)程中，對(duì)患者經(jīng)腸給予單獨(dú)的HMB或HMB與二十碳五烯酸(20:5w-3)、FOS、肉堿及其混合物的組合?？梢韵虬ǜ缓蟮闹行园被?，諸如亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸和苯丙氨酸并且基本上不含游離氨基酸的氨基-氮源的食品中添加HMB。文檔編號(hào)A61P1/12GK101212961SQ200580009596公開(kāi)日2008年7月2日申請(qǐng)日期2005年3月14日優(yōu)先權(quán)日2004年3月26日發(fā)明者A·C·沃斯,J·H·巴克斯特,M·J·蒂斯達(dá)爾,P·穆克爾吉申請(qǐng)人:艾博特公司