專利名稱：用于治療癌癥的包含存活蛋白寡核苷酸及吉西他濱的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用抗癌劑治療癌癥的方法。具體地，其涉及治療性針對存活蛋白的反義寡核苷酸與化療劑組合來增強化療劑效力的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
存活蛋白是調(diào)節(jié)程序性細胞死亡和胞質(zhì)分裂的程序性細胞死亡抑制劑(IAP)家族的蛋白質(zhì)。存活蛋白通常在多種癌癥中過量表達，但是在正常的相鄰組織中極度缺乏。表達水平一般與腫瘤中程序性細胞死亡的減少相關(guān)。迄今，已經(jīng)在肺腫瘤、結(jié)腸腫瘤、胰腺腫瘤、前列腺腫瘤、乳腺腫瘤、胃腫瘤、非霍奇金淋巴瘤和成神經(jīng)細胞瘤中檢測到存活蛋白的過量表達(Altieri，Nature Cancer Rev.，346-54(2002)；Adida等人.，Lancet351882-883(1998)；Ambrosini等人.，Nat.Med.3917-921(1997)；Lu等人.，Cancer Res.581808-1812(1998))。
在本文中全文引用的美國專利6,077,709和6,165,788公開了反義化合物，特別是反義寡核苷酸(ASO)，以及調(diào)節(jié)存活蛋白的表達或過量表達的方法。這些化合物可用于治療癌癥，所述癌癥包括但不限于胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、成神經(jīng)細胞瘤、非霍奇金淋巴瘤，以及涉及角質(zhì)形成細胞或成纖維細胞的癌癥。本文中全文引用的美國專利6,335,194公開了針對存活蛋白的反義寡核苷酸和化療劑組合的應(yīng)用，所述化療劑的作用機制完全不同與反義機制。
用針對存活蛋白的反義寡核苷酸阻止存活蛋白的表達將恢復(fù)默認的細胞死亡限制點，并且其本身或與化學(xué)療法組合可選擇性消滅癌細胞并改善臨床效果。
本發(fā)明描述了通過使用存活蛋白反義核苷酸與其他抗癌劑的組合治療以有利的或更好的方式治療易感腫瘤(susceptible neoplasm)的發(fā)現(xiàn)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了可用于治療癌癥的方法，所述癌癥包括但不限于肝細胞癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌、胃癌、成神經(jīng)細胞瘤、非霍奇金淋巴瘤，以及涉及角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞的癌癥。本發(fā)明的方法包括使用阻止存活蛋白的表達或過量表達的反義寡核苷酸及描述于美國專利5,464,826中的鹽酸吉西他濱(gemcitabine HCl)。本發(fā)明也包括使用阻止存活蛋白的表達或過量表達的反義寡核苷酸及紫杉醇。本發(fā)明也包括使用阻止存活蛋白的表達或過量表達的反義寡核苷酸及鹽酸阿霉素(doxorubicin HCl)。
令人驚訝地，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抑制存活蛋白表達或過量表達的反義寡核苷酸與某種其他抗癌劑的組合導(dǎo)致與其中一種制劑單獨治療的腫瘤體積抑制之和更大的抑制。
可以用本發(fā)明的組合物和方法治療的腫瘤類型包括下列中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤多形性成膠質(zhì)細胞瘤、星細胞瘤、少突膠質(zhì)細胞腫瘤、室管膜和脈絡(luò)叢腫瘤、松果體腫瘤、神經(jīng)元腫瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、施旺細胞瘤、腦膜瘤、腦膜性肉瘤；眼腫瘤基底細胞癌、鱗狀細胞癌、黑素瘤、橫紋肌肉瘤、成視網(wǎng)膜細胞瘤；內(nèi)分泌腺腫瘤垂體腫瘤、甲狀腺腫瘤、腎上腺皮質(zhì)腫瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤、胃腸胰內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤、生殖腺腫瘤；頭和頸腫瘤頭頸癌、口腔腫瘤、咽腫瘤、喉腫瘤、牙源性腫瘤；胸部腫瘤大細胞肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胸腔腫瘤、惡性間皮瘤、胸腺瘤、胸原發(fā)生殖細胞腫瘤；消化道腫瘤食道腫瘤、胃腫瘤、肝腫瘤、膽囊腫瘤、外分泌胰腺腫瘤、小腸腫瘤、不同型闌尾和腹膜腫瘤、結(jié)腸和直腸腺瘤、肛門腫瘤；泌尿生殖道腫瘤腎細胞癌、腎盂和輸尿管腫瘤、膀胱腫瘤、尿道腫瘤、前列腺腫瘤、陰莖腫瘤、睪丸腫瘤；女性生殖器官腫瘤外陰和陰道腫瘤、子宮頸腫瘤、子宮本體腺癌、卵巢癌、婦科學(xué)肉瘤、乳腺腫瘤；皮膚腫瘤基底細胞癌、鱗狀細胞癌、皮膚纖維肉瘤、梅克爾細胞腫瘤、惡性黑素瘤；骨和軟組織腫瘤成骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤文肉瘤、原始神經(jīng)外胚層瘤、血管肉瘤；造血系統(tǒng)腫瘤骨髓增生異常綜合征、急性粒細胞白血病、慢性粒細胞白血病、急性淋巴細胞白血病、HTLV-1和T細胞白血病/淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、多毛細胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、肥大細胞白血??；和兒童腫瘤急性淋巴細胞白血病、急性粒細胞白血病、成神經(jīng)細胞瘤、骨腫瘤、橫紋肌肉瘤、淋巴瘤、腎腫瘤。
如上所述的胰腺癌、結(jié)直腸癌、肝細胞癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌以及淋巴瘤(如非霍奇金淋巴瘤)是本發(fā)明的組合物和方法優(yōu)選治療的疾病。本發(fā)明的組合物和方法更優(yōu)選用于治療肝細胞癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌和非霍奇金淋巴瘤。本發(fā)明的組合物和方法尤其可用于治療肝細胞癌。
因此，本發(fā)明涉及治療易感腫瘤的方法，其包括分別施用存活蛋白ASO和其他的抗癌劑。
在另一個的實施方案中，本發(fā)明涉及治療易感腫瘤的方法，其包括同時施用存活蛋白ASO和其他的抗癌劑。
也就是說，本發(fā)明提供了施用存活蛋白ASO和其他的抗癌劑來治療易感腫瘤。
在另一個方面，本發(fā)明提供了存活蛋白ASO和其他的抗癌劑在制備通過上述方法治療易感腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
因此，在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含存活蛋白ASO和其他抗癌劑的藥物組合物。也就是說，本發(fā)明提供了用于治療的包含存活蛋白ASO和其他的抗癌劑的組合物。
發(fā)明詳述在本發(fā)明的方法中，靶標RNA、靶標基因或其他靶標基因組多核苷酸區(qū)域是存活蛋白的靶標RNA、靶標基因或其他靶標基因組多核苷酸區(qū)域。本文使用的術(shù)語“靶標核苷酸”和“編碼存活蛋白的核苷酸”包括存活蛋白的編碼DNA、轉(zhuǎn)錄自該DNA的RNA(包括前-mRNA和mRNA或其部分)以及源于該RNA的cDNA。寡聚化合物與其靶標核苷酸的特異性雜交干擾了該核苷酸的正常功能。這種與靶標核酸特異雜交的化合物對靶標核酸功能的調(diào)節(jié)通常稱為“反義”。
術(shù)語“存活蛋白反義寡核苷酸(存活蛋白ASO)”指的是修飾的或未修飾的化合物，其與下列序列具有至少70％的同源性5’-TGTGCTATTCTGTGAATT-3’。優(yōu)選地，該修飾的或未修飾的化合物與下列序列具有至少80％的同源性5’-TGTGCTATTCTGTGAATT-3’。進一步優(yōu)選地該修飾的或未修飾的化合物與下列序列具有至少90％，或更優(yōu)選地，95％的同源性5’-TGTGCTATTCTGTGAATT-3’。最優(yōu)選地，該修飾的或未修飾的化合物與下列序列具有至少99％的同源性5’-TGTGCTATTCTGTGAATT-3’。更特別地，術(shù)語“存活蛋白ASO”指的是與上述序列具有至少80％、90％、95％，或99％同源性的修飾化合物，其中每個核苷間連鍵為硫代磷酸酯鍵。尤其特別地，該修飾的化合物是與上述序列具有至少80％、90％、95％，或99％的同源性，其中每個核苷間連鍵為硫代磷酸酯鍵，其在5’末端的4個堿基和3’末端的4個堿基上進一步包括2’-O-甲氧基乙基(2’-甲氧基乙氧基)修飾。尤其特別地，該修飾化合物的胞苷殘基包括5-甲基修飾。術(shù)語“存活蛋白ASO”最特別地是指下列序列5’-TGTGCTATTCTGTGAATT-3’的化合物，其中每個核苷間連鍵為硫代磷酸酯鍵，5’末端的4個堿基包括2’-O-甲氧基乙基修飾，3’末端的4個堿基包括2’-O-甲氧基乙基修飾，并且第5位和第10位的胞苷殘基包括5-甲基修飾。進一步特別地，術(shù)語“存活蛋白ASO”指的是上述修飾化合物的鈉鹽。最優(yōu)選地，術(shù)語“存活蛋白ASO”指的是下列化合物。
紫杉醇是分離自太平洋紫杉樹Taxis Brevifolia的化療劑，是萜類的taxane家族的成員(Wani等人.(1971)J.Am.Chem.Soc.932325)。紫杉醇衍生物的合成和抗癌活性的綜述可見于Kingston等人.，Studies inOrganic Chemistry，第26卷，“New Trends in Natural ProductsChemistry 1986，”Attaur-Rahman和Le Quesne編著(Elsevier，Amsterdam，1986)第219-235頁。
鹽酸吉西他濱，具有抗腫瘤活性的核苷類似物，是2’-脫氧-2’，2’-二氟胞苷一氫氯化物(β-異構(gòu)體)，也稱為2’，2’-二氟-2’-脫氧胞苷一氫氯化物或稱為1-(4-氨基-2-氧代-1H-嘧啶-1-基)-2-脫氧-2’，2’-二氟核糖。在其結(jié)構(gòu)式描述如下 鹽酸吉西他濱描述于美國專利5,464,826，其制備化合物的方法、配制化合物的方法和用該化合物治療癌癥的方法的公開在此引為參考。
鹽酸阿霉素是廣泛用作抗腫瘤劑的蒽環(huán)霉素抗生素。它分離自真菌波賽鏈霉菌青灰變種(Streptomyces peucetius var.caesius.)。鹽酸阿霉素也可以通過本領(lǐng)域熟知的方法合成。文獻參考包括Henry，D.W.，ACSSymposium Series，No.30，Cancer Chemotherapy，American ChemicalSociety(1976)第15-57頁；和Arcamone，F(xiàn).，Doxorubicin AnticancerAntibiotics(1981)New YorkAcademic Press.
術(shù)語“活性成分”指的是在本文中描述的存活蛋白ASO化合物。“活性成分”也指的是存活蛋白和其他的抗癌劑的組合。這種其他的抗癌劑的實例包括，但不限于紫杉醇、鹽酸阿霉素和鹽酸吉西他濱。因此，“活性成分”也指的是存活蛋白ASO和紫杉醇的組合、或存活蛋白ASO和鹽酸吉西他濱的組合、或存活蛋白ASO和鹽酸阿霉素的組合。
本文使用的術(shù)語“患者”指患有一種或多種與存活蛋白表達或過量表達相關(guān)的疾病的哺乳動物?？衫斫鉃樽顑?yōu)選的患者是人，也可以理解本發(fā)明特別涉及抑制哺乳動物存活蛋白表達或過量表達。
本文使用的術(shù)語“可藥用鹽”是指本文中描述的化合物的鹽。應(yīng)當了解的是形成本發(fā)明任何鹽的部分的具體反荷離子通常不是嚴格天然的，只要該鹽作為整體是可藥用的并且只要該反荷離子對整體的鹽不起不利的作用即可。
術(shù)語“治療(treatment，treating)”是指所有的過程，其中可以是減緩、中斷、抑制、控制或終止本文描述的疾病的發(fā)展，但是不必是完全消除所有癥狀。
本文使用的術(shù)語“有效量”是指單劑量或多劑量施用的化合物的量或劑，其單獨的或與其他抗癌劑組合，可有效治療本文所述的疾病。
術(shù)語“治療有效間隔”是一段時間，其開始于(a)存活蛋白ASO或(b)其他的抗癌劑給予患者，結(jié)束于(a)和(b)組合的抗癌有益效果的極限。
本發(fā)明實施中使用的術(shù)語“治療有效組合”是指以任何順序同時或分開施用(a)存活蛋白ASO和(b)其他的抗癌劑。因此，術(shù)語“治療有效組合”指的是以任何順序同時或分開施用(a)存活蛋白ASO和(b)鹽酸吉西他濱。因此，術(shù)語“治療有效組合”還指以任何順序同時或分別施用(a)存活蛋白ASO和(b)紫杉醇。術(shù)語“治療有效組合”還指以任何順序同時或分別施用(a)存活蛋白ASO和(b)鹽酸阿霉素。
當分別施用時，存活蛋白ASO和其他的抗癌劑可以以不同的時間表施用。只要在兩次施用之間的時間屬于治療有效間隔，一種就可以在另一種之前施用。存活蛋白ASO和其他的抗癌劑的施用方法可以不同。因此，一種制劑可以口服，而另一種可以靜脈內(nèi)施用。一種產(chǎn)品以連續(xù)輸注施用而另一種以分立劑型提供是可能的。特別重要的是抗癌藥可以用已知的使其性能最優(yōu)的方式給藥。
抗癌劑一般與載體相混合，載體可作為稀釋劑或賦形劑?？拱﹦┛梢砸韵铝行问绞┯闷瑒?、丸劑、散劑、錠劑、香囊、扁囊劑、酏劑、混懸液、乳劑、溶液劑、糖漿劑或氣溶劑。也可使用無菌注射溶液。
在本發(fā)明的組合物和方法中使用的存活蛋白ASO和其他的抗癌劑通常有利地以鹽的衍生物的形式使用，這是本發(fā)明的另一個方面。當本發(fā)明的化合物具有酸性基團或其他活性基團時，可形成比其在酸性形式中的母體化合物更易溶于水和/或生理上更適合的鹽。代表性的可藥用的鹽包括，但不限于堿或堿土鹽，例如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋁等。
鈉鹽為本文所述的存活蛋白ASO化合物的特別優(yōu)選形式。通過在溶液中用堿處理酸的形式或使酸暴露于離子交換樹脂可以方便的從游離酸制備鹽。優(yōu)選的，存活蛋白ASO最初作為銨鹽在溶液中制備。之后通過離子交換或反相層析，和/或通過與鈉鹽在超濾膜上進行滲濾進行銨鹽到鈉鹽的轉(zhuǎn)化。
包括在可藥用鹽定義中的是本發(fā)明化合物的相對無毒的、無機的或有機的堿加成鹽，例如，銨、季銨和來自充足堿度的含氮堿的胺陽離子形成本發(fā)明化合物的鹽(例如參見，S.M.Berge等人.，“Pharmaceutical Salts，”J.Phar.Sci.，661-19(1977))。本發(fā)明的某些化合物可具有一個或多個手性中心并因此以旋光體存在。所有這種立體異構(gòu)體與其混合物均希望包括在本發(fā)明內(nèi)。如果需要特定的立體異構(gòu)體，其可通過本領(lǐng)域熟知的方法制備，例如，通過與含有不對稱中心且已分離(resolve)的原材料進行立體特異性反應(yīng)，或者通過產(chǎn)生立體異構(gòu)體混合物和隨后用已知方法分離的方法。例如，外消旋混合物可以與某些其他化合物單一對映異構(gòu)體反應(yīng)。這將外消旋形式轉(zhuǎn)變成非對映異構(gòu)體的混合物。然后，因為非對映異構(gòu)體具有不同的熔點、不同的沸點及不同的溶解度，它們可以通過常規(guī)的方法分離，如結(jié)晶。
本發(fā)明的組合物包含本文所述的治療有效量的存活蛋白ASO和本文中提及的抗癌劑的組合。該組合物可以通過多種途徑施用。在患有本文所述疾病的患者的有效治療中，本發(fā)明的組合物可以以任何使有效量的活性成分是生物可利用的形式或方式施用，包括口服和胃腸道外途徑。例如，本發(fā)明的組合物可以口服，通過吸入法或通過皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮、鼻內(nèi)、直腸、眼(occular)、局部、舌下、頰或其他途徑施用?？诜ǔτ诒疚乃龅募膊≈委熓莾?yōu)選的。但是，口服并不是唯一優(yōu)選的途徑。例如，靜脈內(nèi)途徑可優(yōu)選作為方便的或避免口服相關(guān)的潛在并發(fā)癥的方式。當組合物通過靜脈內(nèi)途徑施用時，靜脈內(nèi)大丸劑和緩慢輸注是優(yōu)選的。
活性成分的有效量可由是本領(lǐng)域技術(shù)人員的主治診斷者，通過使用已知技術(shù)和觀察類似情況下的結(jié)果來容易地確定。在確定施用化合物的有效量或劑量時，主治診斷者需要考慮許多因素，其包括但不限于哺乳動物的物種；其大小、年齡和全身健康狀況；涉及的具體腫瘤；腫瘤的程度、影響或嚴重性；個體患者的反應(yīng)；施用的具體化合物；施用方式；施用制劑的生物利用率特點；選擇的劑量方案；相伴藥物的應(yīng)用；和其他相關(guān)情況。
最適劑量可根據(jù)活性成分的相對效力而不同。通常，劑量范圍從每千克體重0.01μg到100g，并且可以每天、每星期、每月或每年一次或多次施用?；跍y量的停留時間和活性成分在體液或組織中的濃度，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以確定給藥的重復(fù)率。在單劑量治療后，可期望讓患者接受支持治療，其中活性成以每千克體重0.01μg到100g范圍的維持劑量施用，并且可以每天、每星期、每月或每年一次或多次施用。
下列實施例說明了本發(fā)明的方法以及用來證明本發(fā)明原理的化合物和組合物。試劑和原材料是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易獲得的。這些實施例僅僅為了說明，而不解釋為任何方式來限制本發(fā)明的范圍。
實施例實施例1下列化合物代表了可用于本發(fā)明方法和組合物的存活蛋白ASO化合物和其他的抗癌劑。這些組合物僅僅為了說明，而不在任何情況解釋為任何方式來限制本發(fā)明的方法。
化合物I(存活蛋白ASO) 化合物I是用于抑制存活蛋白表達或過量表達的存活蛋白ASO。化合物I可以通過下列在美國專利第6,077,709號；第6,165,788號和第6,335,194號中描述的已知常規(guī)步驟制備，上述專利的全部內(nèi)容在此全部引為參考。
化合物II(鹽酸吉西他濱)2’-脫氧-2’，2’-二氟胞苷一氫氯化物(β-異構(gòu)體)；或2’，2’-二氟-2’-脫氧胞苷一氫氯化物；或1-(4-氨基-2-氧代-1H-嘧啶-1-基)-2-脫氧-2’，2’-二氟核糖
鹽酸吉西他濱描述于美國專利第5,464,826號，其制備化合物的方法、配制化合物的方法及用該化合物治療癌癥的方法的公開在此引為參考。
化合物III(紫杉醇)5β，20-環(huán)氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紫杉烷(hexhydroxytax)-11-烯-9-酮4，10-二乙酸酯2-苯甲酸酯與(2R，3S)-N-苯甲酰-3-苯基異絲氨酸的13-酯紫杉醇公開于美國專利第5,496,804號、第5,641,803號、第5,670,537號和第6,510,398號中，所述專利中合成、配制和使用紫杉醇治療易感腫瘤的方法在此引為參考。紫杉醇也可購自Sigma-Aldrich Co。
化合物IV(鹽酸阿霉素)5，12-并四苯二酮，10-[(3-氨基-2，3，6-三脫氧-α-L-來蘇己吡喃基)氧]-7，8，9，10-四氫-6，8，11-三羥基-8-(羥乙?；?-1-甲氧基-氫氯化物鹽酸阿霉素可通過本領(lǐng)域熟知的方法制備。鹽酸阿霉素也可購自Sigma-Aldrich Co。
檢測實施例1在此描述的基于細胞的胱天蛋白酶3檢測通常用來測定抗癌劑，并且在前已有描述(參見Carrasco等人.，Bio Technique(2003)341064-1067)。該檢測如下進行。
方法HeLa細胞獲自ATCC，Manassas，VA且培養(yǎng)在補充了10％胎牛血清(Hyclone)、0.1mM非必需氨基酸和1mM丙酮酸鈉(Gibco/Invitrogen)，含L-谷胺酰胺培養(yǎng)基(Gibco/Invitrogen)的DMEM中。為了檢測胱天蛋白酶3，用1×104細胞/孔鋪96孔板。脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑(GIBCO/Invitrogen)以3μL/ml OPTIMEM減少血清的培養(yǎng)基(Gibco/Invitrogen)/100nM化合物I的濃度使用。在加入化合物I之前將脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑與OPTIMEM培養(yǎng)基孵育30分鐘。加入50nM化合物I或其錯配對照(MM對照)寡核苷酸并混合。細胞用1×磷酸緩沖鹽溶液洗滌兩次，然后用OPTIMEM中的化合物I/脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑混合物處理。培養(yǎng)4小時后，用完全生長培養(yǎng)基替換OPTIMEM培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染24小時后，加入10nM鹽酸吉西他濱或1.25nM紫杉醇再培養(yǎng)48小時。在培養(yǎng)結(jié)束時，每孔中加入含有150μM胱天蛋白酶3底物Ac-DEVD-AMC(Biomol)的3×裂解緩沖液(150mMHEPES pH7.4、150mM HEPES pH 7.4、450mM NaCl、150mM KCl、30mM MgCl2、1.2mM EGTA、1.5％ NP40、0.3％ CHAPS、30％蔗糖、30mM DTT和3.0mM PMSF)(50μL/孔)，并在37℃下孵育1小時。胱天蛋白酶3的活性通過使用平板讀出熒光計(plate-reading flurometer)，在激發(fā)(波長)360nm和散發(fā)(波長)460nm下讀出Ac-DEVD-AMC底物蛋白水解釋放的熒光來測量。在減去平板背景后，比較相對熒光單位(RFU)與未處理的對照，表示為在胱天蛋白酶3活性增加百分數(shù)。
結(jié)果為了研究存活蛋白表達的下調(diào)是否使HeLa細胞對化療敏感，測定用化合物I和鹽酸吉西他濱、鹽酸阿霉素或紫杉醇之一的組合治療。HeLa細胞用化合物I或MM對照寡核苷酸轉(zhuǎn)染24小時并用10nM鹽酸吉西他濱或1.25nM紫杉醇再處理48小時。在孵育期末測量胱天蛋白酶3的活性。表1中的數(shù)據(jù)顯示，用化合物I與鹽酸吉西他濱或紫杉醇組合處理的腫瘤細胞產(chǎn)生了比每個單獨制劑的胱天蛋白酶3的酶促活性之和更大的胱天蛋白酶3的酶促活性。數(shù)據(jù)表示為與未處理的對照相比的胱天蛋白酶3活性百分比?！癝.E.M”指的是平均數(shù)的標準誤差。MM對照寡核苷酸處理未使腫瘤細胞對鹽酸吉西他濱或紫杉醇敏感。
表1

檢測實施例2人異種移植腫瘤模型的使用之前已有描述，在本領(lǐng)域中是已知的。下列腫瘤類型可用于進行下文描述的檢測。U-87MG人成膠質(zhì)細胞瘤獲得自ATCC(Manasas，VA，美國)(Kiaris等人.，Neoplasia(2000)2(3)242-50)。
方法對于異種移植研究，就在移植前照射動物(450TBI(全身照射))，且細胞與matrigel混合(1∶1)。0.2mL體積的6×106U-87MG腫瘤細胞全部皮下(s.c.)注射到左后腰。當腫瘤體積達到約100mg時，用首次負荷劑量為50mg/kg的化合物I或MM對照寡核苷酸開始處理。在其他天施用化合物I或MM對照寡核苷酸的所有隨后靜脈內(nèi)劑量(25mg/kg)。在負荷劑量一天后，開始用鹽酸吉西他濱、鹽酸阿霉素或紫杉醇的次最優(yōu)劑量處理。鹽酸吉西他濱每三天以2.5mg/kg腹膜內(nèi)施用，共四劑。紫杉醇每四天以1mg/kg靜脈內(nèi)施用，共四劑。
每周兩次進行二維測量，根據(jù)下列公式計算腫瘤體積(腫瘤體積)＝[(長度)(寬度2)(II/6)]。腫瘤體積數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成對數(shù)比例以平衡時間和處理組的差異。數(shù)據(jù)使用SAS PROC MIXED軟件(SAS Institute，Inc.，Cary，N.C.)，以時間和處理差異的雙向分析來分析。對于重復(fù)測量的優(yōu)選相關(guān)模型是AR(順序1自動回歸(Auto Regressive of order 1))。
在每個時間點比較處理組。以每個處理組的平均數(shù)和標準誤差對時間的數(shù)據(jù)作圖。組合治療中協(xié)同的存在以腫瘤生長延遲(TGD)度來評定。測定每個動物達到特定腫瘤尺寸(在此研究中為1500或2000或2500mg)的時間。沒有達到那個尺寸的腫瘤包括在作為右刪失值(right-censoredvalue)的分析中。假定為Weibull分布的最大似然分析用于計算每個處理組的平均時間和標準偏差。腫瘤生長延遲是每個處理組和對照組之間平均時間的差。如果組合治療TGD顯著高于個體治療TGD的總和，則認為組合治療具有協(xié)同作用。
結(jié)果表2中的數(shù)據(jù)顯示化合物I和鹽酸吉西他濱組合的效果。與任一化合物單獨相比，組合產(chǎn)生統(tǒng)計上顯著的(p＝0.0092)腫瘤生長延遲。因此，化合物I和鹽酸吉西他濱的組合導(dǎo)致比腫瘤生長延遲之和多3到4.6天。
表2

序列表<110>伊萊利利公司<120>治療癌癥的組合療法<130>X-16613<150>60/564540<151>2004-04-22<160>1<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>合成的構(gòu)建體<400>1tgtgctattc tgtgaatt18
權(quán)利要求
1.一種包含有效量的存活蛋白反義寡核苷酸和有效量的鹽酸吉西他濱的藥物組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述存活蛋白反義寡核苷酸是化合物I。
3.包含存活蛋白反義寡核苷酸和鹽酸吉西他濱的組合物在制備用于治療癌癥患者的藥物中的應(yīng)用。
4.一種治療癌癥患者的方法，其包括給予所述患者存活蛋白反義寡核苷酸和鹽酸吉西他濱的治療有效組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述存活蛋白反義寡核苷酸和鹽酸吉西他濱在治療有效間隔內(nèi)分別施用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述存活蛋白反義寡核苷酸是化合物I。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肝細胞癌、結(jié)直腸癌和淋巴瘤。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述癌癥是肝細胞癌。
9.一種存活蛋白反義寡核苷酸和鹽酸吉西他濱的治療有效組合在治療癌癥患者中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中所述存活蛋白反義寡核苷酸和鹽酸吉西他濱在治療有效間隔內(nèi)分別施用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其中所述存活蛋白反義寡核苷酸是化合物I。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的應(yīng)用，其中所述癌癥選自胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肝細胞癌、結(jié)直腸癌和淋巴瘤。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其中所述癌癥為肝細胞癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及在患者中治療癌癥的方法，其包括施用有效量的存活蛋白反義寡核苷酸與有效量的鹽酸吉西他濱。
文檔編號A61P35/00GK1950094SQ200580011826
公開日2007年4月18日 申請日期2005年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月22日
發(fā)明者B·K·帕特爾 申請人:伊萊利利公司