專利名稱：治療腫瘤和轉(zhuǎn)移性疾病的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請涉及使用抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白治療患有牽涉α4整聯(lián)蛋白表達的惡性腫瘤和/或轉(zhuǎn)移性疾病的方法。還提供藥物制劑用于抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移性進展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的用途。
背景技術(shù)：
已知良性的和惡性的腫瘤都是以在正常細胞中未發(fā)現(xiàn)的模式表達蛋白質(zhì)。腫瘤或惡性細胞表達的蛋白質(zhì)模式可以反映疾病的進展(即，初期階段或轉(zhuǎn)移性疾病)。隨著惡性腫瘤進展，細胞傾向于越來越不同于它們來源的組織。隨著癌癥進展變得更加未分化的，無論用于確定癌癥進展的階段格式(staging schema)如何，細胞變得更可能轉(zhuǎn)移和/或更難通過常規(guī)療法控制。癌癥治療可包括以下治療的一種或多種化療、手術(shù)、放療、高熱、免疫治療、骨髓移植、激素治療、和生物治療。
整聯(lián)蛋白為涉及細胞粘合、免疫細胞遷移和活化的細胞表面糖蛋白家族。α-4整聯(lián)蛋白由除嗜中性粒細胞之外的所有循環(huán)白細胞表達，并且與β-1(β1)或β-7(β7)整聯(lián)蛋白亞單位結(jié)合形成雜二聚型受體。α-4β-1(α4β1)整聯(lián)蛋白和α-4β-7(α4β7)整聯(lián)蛋白兩者都在白細胞穿過血管內(nèi)皮的遷移(Springer等人，Cell，1994，76301-14；Butcher等人，Science，1996，27260-6)和促進實質(zhì)內(nèi)的細胞活化和存活(Damle等人，J.Immunol.，1993，1512368-79；Koopman等人，J.Immunol.，1994，1523760-7；Leussink等人，Acta Neuropathol.，2002，103131-136)中起作用。α4β1整聯(lián)蛋白在淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、肥大細胞、嗜堿性粒細胞、和嗜酸性粒細胞上進行結(jié)構(gòu)表達。
α-4β-1(又名極遲抗原-4、VLA-4)結(jié)合于血管細胞粘著分子-1(VCAM-1)(Lobb等人，J.Clin.Invest.，1994，941722-8)，其由慢性炎癥的許多部位的血管內(nèi)皮表達(Bevilacqua等人，1993，Annu.Rev.Immunol.，11767-804；Postigo等人，1993，Res.Immunol.，144723-35)。α4β1整聯(lián)蛋白具有其它的配體，包括粘連蛋白和其它細胞外基質(zhì)(ECM)組分。
α-4β-7整聯(lián)蛋白與粘膜地址素細胞粘著分子(MAdCAM-1)相互作用，并且介導淋巴細胞到內(nèi)臟的歸巢(Farstad等人，1997，Am.J.Pathol.，150187-99；Issekutz，1991，J.Immunol.1474178-84)。因此，需要抑制癌生長和轉(zhuǎn)移的新的藥物、組合物、和使用這些藥物和組合物的方法，其可單獨使用或與其它藥物組合使用，用于治療癌癥，特別是晚期腫瘤，其典型地涉及轉(zhuǎn)移。
發(fā)明簡述本發(fā)明提供用于治療腫瘤和/或轉(zhuǎn)移性疾病和/或抑制腫瘤生長的新的方法、組合物、和聯(lián)合療法。優(yōu)選所述方法、組合物和聯(lián)合療法涉及治療表達α4的癌癥如淋巴瘤、白血病、黑素瘤、前列腺癌，以及治療任何表達α4的原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移性疾病。
因此，本發(fā)明的一個方面提供抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)移性擴散的方法，所述方法包括對有需要的主體給藥抑制腫瘤生長、和/或轉(zhuǎn)移灶和/或轉(zhuǎn)移性擴散的足夠量的抗-α4免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白。優(yōu)選抗-α抗體結(jié)合于α4β1整聯(lián)蛋白和/或α4β7整聯(lián)蛋白，更優(yōu)選免疫球蛋白為單克隆抗體(如，那他珠他單抗(natalizumab))。
本發(fā)明的另一方面為治療的腫瘤為實體瘤或軟組織瘤?？紤]用所示方法、聯(lián)合療法、和抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體的免疫球蛋白治療的實質(zhì)組織瘤包括但不限于黑素瘤(如，皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、或眼內(nèi)黑素瘤)、前列腺癌、和其它原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移灶。
本發(fā)明的另一方面考慮了待治療的腫瘤為軟組織瘤如骨瘤、白血病(如，慢性髓性白血病、急性髓性白血病、成年急性淋巴母細胞性白血病、急性髓性白血病、成熟B細胞急性淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞性白血病、或毛細胞白血病)、或淋巴瘤(如，非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、或何杰金氏病)。
本發(fā)明的另一個實施方案考慮了對主體給藥約1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重(及該范圍內(nèi)的任何整數(shù)值)的量的抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白。更優(yōu)選地，將抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白以約1mg/kg主體體重到約10mg/kg主體體重的量對主體給藥。優(yōu)選地，免疫球蛋白為那他珠他單抗。
在本發(fā)明的另一個方面中，免疫球蛋白可以單獨給藥或在多模態(tài)形式中與其它癌癥治療模式組合使用。例如，如果腫瘤為黑素瘤，則可以在已經(jīng)通過手術(shù)除去黑素瘤之后對主體給藥那他珠他單抗。如果腫瘤為黑素瘤，則上述方法可以另外結(jié)合癌癥治療模式，如隔離肢體灌注、區(qū)域性化療輸注、系統(tǒng)性化療、或用第二抗體(如，抗-GM2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、抗-GD2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、抗-GD3神經(jīng)節(jié)苷脂抗體)、或抗血清的免疫治療?；焺┛蔀橐韵碌囊环N或多種達卡巴嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、?；悄就　⒏Ｄ就?、司莫司汀、順鉑、卡鉑、長春新堿、長春堿、長春地辛、紫杉醇、二溴衛(wèi)矛醇、地托比星(detorubicin)、吡曲克辛、和干擾素(如，干擾素-α2)。
本發(fā)明的另一個方面考慮了治療向腦、肺、肝、或骨轉(zhuǎn)移的方法。
本發(fā)明的又一個方面考慮了使用抗α4整聯(lián)蛋白或其配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白與其它淋巴瘤治療模式組合用于治療淋巴瘤的方法。
本發(fā)明的另一個方面考慮了其中將抗α4整聯(lián)蛋白或其配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白與本領(lǐng)域已知的其它腫瘤治療模式組合的聯(lián)合療法。本發(fā)明的另一個方面提供藥物制劑在對有需要的主體給藥時抑制腫瘤生長、和/或抑制轉(zhuǎn)移、和/或抑制或延緩疾病進展的應用，藥物制劑包括抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白。
本發(fā)明的另一個方面考慮了藥物制劑在對有需要的主體給藥時抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移性進展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的應用，藥物制劑包括抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白。優(yōu)選地，主體另外用化療、免疫治療、手術(shù)、放療、高熱、或改善癌癥治療的副作用的藥物進行治療。優(yōu)選地，腫瘤為黑素瘤、白血病、前列腺癌、或淋巴瘤。


圖1表示在形成腫瘤之后給藥對照、紫杉醇、IgG4或那他珠他單抗時，MOLT-4異種移植的原發(fā)腫瘤生長圖。將SCID小鼠用鹽水(N＝20)、那他珠他單抗(N＝20)、IgG4(N＝20)、或紫杉醇(N＝20)處理。鹽水、那他珠他單抗和IgG4在第-7、-4、0、3、7、10、14、17、21、24、28、31、35、38、42、和45天給藥。在第0天將MOLT-4白血病異種移植物皮下植入。紫杉醇在第1-5天靜脈給藥。每周兩次測量腫瘤。
發(fā)明的詳細說明1.定義和縮寫根據(jù)本詳細說明，使用以下縮寫和定義。需要指出的是，如本文中使用的，除非另外說明，單數(shù)形式“一(a)”“一個(an)”和“該(the)”包括復數(shù)。因此，例如，“抗體”包括多個這種抗體，“劑量”包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的一個或多個劑量及其等價物，等等。
提供的在本文所討論的公開僅用于它們在本申請?zhí)峤蝗罩暗墓_。不應將本文中的任何引用看作是本發(fā)明根據(jù)在先發(fā)明而無權(quán)先于這種公開的承認。另外，提供的
公開日期可能不同于實際的出版日期，其可能需要獨立確認。
1.1定義如本文中使用的，術(shù)語“主體”或“患者”是指包括哺乳動物。哺乳動物可為犬科動物、貓科動物、靈長類動物、牛類、綿羊類、豬類、駱駝類、山羊類、嚙齒動物、或馬類。優(yōu)選地，哺乳動物為人。
“那他珠他單抗”或“Tysabri”是指如美國專利5,840,299和6,033,665中所述的抗VLA-4的人源化抗體，所述專利被全文并入本文作為參考。本文還考慮了其它VLA-4特異性抗體。這種抗-VLA-4抗體和免疫球蛋白包括但不限于在美國專利6,602,503和6,551,593、公開的美國專利申請20020197233(Relton等人)中所述的那些免疫球蛋白?？贵w可以通過在這些專利和申請中公開的方法，通過哺乳動物細胞表達、或通過轉(zhuǎn)基因動物表達系統(tǒng)(如，山羊)制備。
如本文中使用的，術(shù)語“效力”是指具體治療方案的有效性。效力可以根據(jù)各特征(但不限于這些特征)如腫瘤生長的抑制、腫瘤質(zhì)量的降低、通過例如放射性成像評價的轉(zhuǎn)移灶的減少、腫瘤生長減慢、不存在可檢測到的腫瘤相關(guān)抗原等進行測量。評價腫瘤進展的另外的方法在本文中討論，并且為治療醫(yī)生和診斷醫(yī)生已知的。
術(shù)語“可藥用載體”和“可藥用賦形劑”是指用于形成制劑的一部分并且只起到作為載體的作用(即本身不具有生物活性)的任何化合物?？伤幱幂d體或賦形劑通常是安全的、無毒的，且既沒有生物學方面又沒有其它方面的不希望的作用。如本文中使用的，可藥用載體或賦形劑包括一種和一種以上的所述載體或賦形劑。
術(shù)語“治療(treating)”和“治療(treatment)”等在本文中通常是指得到所需的藥理學和生理學效果。更具體地，用于治療患有腫瘤和轉(zhuǎn)移性疾病的主體的本文所述的試劑通常以治療有效量提供，以實現(xiàn)以下的一項或多項效果腫瘤生長抑制、腫瘤質(zhì)量降低、轉(zhuǎn)移灶消失、治療開始后新的轉(zhuǎn)移灶的發(fā)展得到抑制、或腫瘤減少，從而沒有可檢測到的疾病(通過如放射性成像、生物流體分析、細胞遺傳學、熒光原位雜交、免疫細胞化學、集落試驗、多參數(shù)流式細胞術(shù)、或聚合酶鏈式反應評價)。如本文中使用的，術(shù)語“治療”包括對哺乳動物特別是人的疾病的任何治療。
“治療有效量”是指當對哺乳動物給藥時足以有效對抗腫瘤的本文公開的藥物、試劑、化合物、組合物、或試劑組合的量。
術(shù)語“腫瘤”包括良性和惡性生長或癌癥。因此，除非另外說明，術(shù)語“癌癥”可以包括良性和惡性生長。優(yōu)選地，腫瘤為惡性的。腫瘤可為實體組織瘤如黑素瘤，或軟組織瘤如淋巴瘤、白血病、或骨癌。
術(shù)語“原發(fā)腫瘤”是指原發(fā)贅生物而不是位于患者體內(nèi)其它組織或器官中的轉(zhuǎn)移灶。術(shù)語“轉(zhuǎn)移性疾病”、“轉(zhuǎn)移灶”、和“轉(zhuǎn)移性灶”是指已經(jīng)遷移到相對于原發(fā)腫瘤較遠位置的一組細胞。
1.2縮寫以下縮寫通常用于相關(guān)術(shù)語，并且是本領(lǐng)域中已知的。
α4β1α-4β-1α4β7α-4β-7Ab抗體ABDIC 多柔比星、博來霉素、達卡巴嗪、洛莫司汀、和潑尼松ALL 急性淋巴細胞性白血病
AML 急性髓性白血病BMT 骨髓移植CAF 環(huán)磷酰胺、阿霉素、和5-氟尿嘧啶CAMP 洛莫司汀、米托蒽醌、阿糖胞苷、和潑尼松CAVP 洛莫司汀、美法侖、依托泊苷、和潑尼松CBVD 洛莫司汀、博來霉素、長春堿、地塞米松CCNU 洛莫司汀CEFF(B) 環(huán)磷酰胺、依托泊苷、丙卡巴肼、潑尼松、和博來霉素CEM 洛莫司汀、依托泊苷、和甲氨蝶呤CEP 洛莫司汀、依托泊苷、和潑尼莫司汀CEVD 洛莫司汀、依托泊苷、長春地辛、和地塞米松CHOP 環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、和潑尼松CLL 慢性淋巴細胞性白血病CMF 環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和5-氟尿嘧啶CML 慢性髓性白血病CNS 中樞神經(jīng)系統(tǒng)CTCL 皮膚T細胞淋巴瘤DHAP 地塞米松、高劑量阿糖胞苷、和順鉑ECM 細胞外基質(zhì)EPOCH依托泊苷、長春新堿、多柔比星、環(huán)磷酰胺、和潑尼松ESHAP依托泊苷、甲潑尼龍、高劑量(HD)阿糖胞苷、和順鉑EVA 依托泊苷、長春堿、和多柔比星EVAP 依托泊苷、長春堿、阿糖胞苷、和順鉑GAP-BOP 環(huán)磷酰胺、多柔比星、丙卡巴肼、博來霉素、長春新堿、和潑尼松HD 高劑量3H-FUDR 3H-氟尿苷IFN 干擾素IFN-α2 干擾素-α2IFNβ-1a 干擾素β-1aIHC 免疫組織化學
i.m. 肌內(nèi)IMVP-16 異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷i.p. 腹膜內(nèi)i.v. 血管內(nèi)m-BACOD 甲氨蝶呤、博來霉素、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春新堿、地塞米松、和亞葉酸MAb 單克隆抗體MACOP-B 甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春新堿、潑尼松、博來霉素、和亞葉酸MadCAM-1 粘膜地址素細胞粘著分子1(又名CD106)MeCCNU司莫司汀或甲基CCNUMF蕈樣真菌病MIME 甲基-gag、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷MINE 米托胍腙(mitoquazone)、異環(huán)磷酰胺、長春瑞濱、和依托泊苷MOPLACE 環(huán)磷酰胺、依托泊苷、潑尼松、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、和長春新堿MOPP 氮芥、長春新堿、丙卡巴肼、和潑尼松MS多發(fā)性硬化MTX 甲氨蝶呤MTX-CHOP 甲氨蝶呤和CHOPNAT 那他珠他單抗(Tysabri)PBMC 周圍血液單核細胞PCVP 長春堿、丙卡巴肼、環(huán)磷酰胺、和潑尼松p.o. 口服給藥(經(jīng)口)ProMACE-MOPP 具有標準MOPP的潑尼松、甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、亞葉酸s.c. 皮下SDS-PAGE 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳SCID 重度聯(lián)合免疫缺損TNM 腫瘤、結(jié)點、和轉(zhuǎn)移灶為American Joint Commission onCancer的階段分類
VABCD 長春堿、多柔比星、達卡巴嗪、洛莫司汀、和博來霉素VCAM-1 血管細胞粘著分子1(又名CD106和INCAM-110)VLA-4 極遲抗原4(又名α-4β-1、α4β1整聯(lián)蛋白、VLA-4a、和CD49d)2.疾病在本發(fā)明的一個方面中，本文公開的方法和組合物可用于抑制或延緩惡性腫瘤的進展。這些惡性腫瘤可為實體組織瘤或軟組織瘤。軟組織瘤包括骨癌、淋巴瘤、和白血病。本發(fā)明的另一個方面為所述方法和組合物抑制或預防轉(zhuǎn)移灶或轉(zhuǎn)移性進展的應用。
因此，本發(fā)明的一方面為用免疫球蛋白治療腫瘤或轉(zhuǎn)移性疾病。這種免疫球蛋白可以靶向α4并優(yōu)選α4β1整聯(lián)蛋白和/或α4β7整聯(lián)蛋白?；蛘?，免疫球蛋白可以靶向α4的配體(如VCAM-1、MadCAM-1)。這些免疫球蛋白可單獨使用、彼此組合使用、與其它癌癥治療模式組合使用，其它癌癥治療模式例如但不限于化療、手術(shù)、放療、高熱、免疫治療、激素治療、生物學治療(如，引起細胞破壞的免疫效應物機理、細胞因子、免疫治療、干擾素、白細胞介素-2、癌癥疫苗療法、和過繼療法)、和用于改善這種癌癥治療模式的不良副作用的藥物。
2.1癌癥治療術(shù)語癌癥包含由許多亞類組成的各個器官的各種癌癥的惡性腫瘤的集合。典型地，在癌癥診斷時，“癌癥”實際上包括具有不同的遺傳學、生物化學、免疫學、和生物學特征的細胞的多個亞群體。
通過本發(fā)明的組合物和方法治療的癌癥類型為表達α4整聯(lián)蛋白(即，α4β1和/或α4β7)或其配體(如，VCAM-1和/或MadCAM-1)的那些。優(yōu)選的癌癥包括但不限于黑素瘤(如，皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、和眼內(nèi)黑素瘤)、前列腺癌、淋巴瘤(如，皮膚T細胞淋巴瘤、蕈樣真菌病、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤、和原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤)、白血病(如，前B細胞急性淋巴母細胞性白血病、慢性和急性淋巴細胞性白血病、慢性和急性髓性白血病、成年急性淋巴母細胞性白血病、成熟B細胞急性淋巴母細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、和T細胞慢性淋巴細胞性白血病)、和在細胞表面上表達這些蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移性瘤。需要指出的是，雖然蕈樣真菌病(MF)、Sézary綜合癥、皮膚的網(wǎng)狀細胞肉瘤和幾種其它的皮膚淋巴細胞性惡液質(zhì)曾經(jīng)被認為是單獨的病況，但是它們現(xiàn)在被認為是皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)的不同臨床表現(xiàn)，因此包括在該術(shù)語中。參見Lynn D.Wilson等人，″Cutaneous T-CellLymphomas，″在CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2220-2232(Vincent T.DeVita，Jr.等人，編者，第5版，1997)；Bank等人，1999，J.Cutan.Pathol.，26(2)65-71。
2.2轉(zhuǎn)移性疾病一旦患者被診斷為患有腫瘤，第一個問題是腫瘤是否進展并擴散到區(qū)域性淋巴結(jié)和遠處器官。最后，大多數(shù)癌癥死亡源于對常規(guī)的癌癥療法具有耐受性的轉(zhuǎn)移灶。轉(zhuǎn)移灶可以位于不同的器官內(nèi)和同一器官的不同區(qū)域內(nèi)，使得通過手術(shù)、輻射、藥物、和/或生物治療幾乎不可能完全根除。
還考慮了使用本文的方法、聯(lián)合療法、和組合物的治療用于轉(zhuǎn)移性癌癥的治療。癌癥通常只在原發(fā)組織的一個位置中開始生長。隨著癌癥進展，癌癥可轉(zhuǎn)移到患者體內(nèi)的遠處位置。例如，在前列腺中開始的癌癥可能轉(zhuǎn)移到肺。轉(zhuǎn)移性疾病常見的和本文考慮的其它位置包括轉(zhuǎn)移性癌癥移向腦、肺、肝、和骨。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，幾種整聯(lián)蛋白亞單位(即，α2、α4、和β3)在轉(zhuǎn)移灶中比在正常的前列腺組織和正常的黑素細胞中的表達增加。Hartstein等人，1997，Ophthal.Plast.Reconstr.Surg.，13(4)227-38。
在所有腫瘤中轉(zhuǎn)移灶的形成有必需的步驟。這些步驟包括以下(1)在腫瘤性轉(zhuǎn)化之后，由腫瘤所處的器官/組織環(huán)境支持的腫瘤性細胞的進行性增生。
(2)腫瘤的新血管生成(Neovascularization)或血管生成，以進一步生長使直徑超過1到2mm。
(3)粘著分子的表達的負調(diào)節(jié)，其中細胞具有增加的運動性或從原發(fā)性病灶脫離的能力。
(4)單一腫瘤細胞或細胞聚集物的分離和栓化(embolization)，這些細胞的大多數(shù)被迅速地破壞。
(5)一旦腫瘤細胞經(jīng)受住分離和栓化步驟而存活，它們必須在血管內(nèi)腔內(nèi)繼續(xù)增殖。然后細胞繼續(xù)通過類似于在侵入過程中起作用的機制溢出進入器官實質(zhì)中。
(6)具有適當?shù)募毎砻媸荏w的腫瘤細胞可以對旁分泌生長因子作出反應，從而在器官實質(zhì)中增殖。
(7)腫瘤細胞逃避宿主的防御(特異性免疫反應和非特異性免疫反應)。
(8)為了使轉(zhuǎn)移灶增殖超過直徑1到2mm，轉(zhuǎn)移灶必須形成血管網(wǎng)絡。
因此，如果原發(fā)腫瘤有充分的時間進行這些步驟，其可在原發(fā)腫瘤位置或遠離原發(fā)腫瘤的位置形成轉(zhuǎn)移灶。本文公開的試劑、方法、和聯(lián)合療法抑制或預防上述轉(zhuǎn)移性過程中的一個或多個步驟。對于腫瘤轉(zhuǎn)移的機理和病理學的附加細節(jié)，參見Isaiah J.Fidler，″MolecularBiology of CancerInvasion and Metastasis，″，CANCERPRINCIPLES& PRACTICE OF ONCOLOGY 135-152(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
因此，本發(fā)明的一個方面提供使用抗α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或者靶向α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的方法和包括抗α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或者靶向α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的組合物。優(yōu)選的抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白為抗-VLA-4抗體如那他珠他單抗。這些免疫球蛋白可單獨使用或與預防轉(zhuǎn)移灶或抑制轉(zhuǎn)移灶進展的其它藥物或癌癥治療模式組合使用。因此，所述組合物和方法可用于治療表達α4整聯(lián)蛋白或α4整聯(lián)蛋白的配體的任何原發(fā)腫瘤的任何轉(zhuǎn)移灶。
3.免疫球蛋白療法考慮了用于治療上述癌癥的免疫球蛋白包括抑制α4β1和/或α4β7結(jié)合于其同源配體如VCAM-1或MAdCAM-1的抗-α4整聯(lián)蛋白抗體。還考慮了對抗該配體的免疫球蛋白。這些免疫球蛋白可為抗體(即，單克隆抗體、靈長動物化(primatized)抗體、人源化抗體、或人抗體、以及嵌合抗體、和雙特異性抗體)。免疫球蛋白也可為抗體的免疫原片段(如，F(xiàn)ab、scFv、Fab′、F(ab′)2、Fab″、Fabc、或重組合成的片段)或重組產(chǎn)生的免疫球蛋白。優(yōu)選的抗-α4抗體為那他珠他單抗。然而，還考慮了其它抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白，包括可以區(qū)分α4β1和α4β7的免疫球蛋白。如果患者為人，則優(yōu)選的免疫球蛋白為單克隆抗體，更優(yōu)選的免疫球蛋白為人源化或靈長動物化抗體。
這些抗體可單獨使用或與其它抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或?qū)功?整聯(lián)蛋白配體的免疫球蛋白組合使用。本發(fā)明的另一個方面考慮了抗-α4抗體以聯(lián)合療法的形式與其它常規(guī)的癌癥治療模式組合的應用。
4.聯(lián)合療法對于癌癥，現(xiàn)有許多治療。用于治療癌癥的具體的癌癥治療或療法組合在很大程度上取決于癌癥的類型、其階段、患者(如，體重、性別、年齡、健康狀態(tài)、先前的癌癥等)、和患者所處的治療時期(如，首次治療、暴發(fā)危象(in blast crisis)、對首次治療的反射(refractiveto initial treatments)、癌癥復發(fā)、或可能由數(shù)月或數(shù)年以前治療第一癌癥誘導的第二癌癥)。因此，醫(yī)生經(jīng)常必須將最適于患者抵御該疾病和患者自我決定生活質(zhì)量的需要的各種治療模式組合。治療模式包括但不限于手術(shù)、放療、化療、生物學治療(如，細胞因子、免疫治療、和干擾素)、激素治療、和高熱。
常規(guī)的化療可以進一步分為激素治療(如，抗雌激素藥、芳香酶抑制劑、促性腺激素釋放激素類似物、和抗雄性激素)、抗腫瘤烷化劑(如，氮芥、亞硝基脲、四嗪、和氮丙啶)、順鉑及其類似物、抗代謝物(如，甲氨蝶呤、抗葉酸物、5-氟嘧啶、阿糖胞苷、阿扎胞苷、吉西他濱、6-巰基嘌呤、和羥基脲)、拓撲異構(gòu)酶相互作用藥、抗微管藥物(如，長春花生物堿、紫杉烷(taxanes)、和雌莫司汀)、分化藥物(如，類維生素A、維生素D3、極性-非極性化合物、丁酸酯和苯乙酸酯、細胞毒類藥物、細胞因子、及其組合)、和其它化療劑如氟達拉濱、2-氯脫氧腺苷、2′-脫氧助間型霉素、高三尖杉酯堿(HHT)、蘇拉明、博來霉素、和L-天冬酰胺酶。
4.1治療淋巴瘤的聯(lián)合療法本發(fā)明的一個方面考慮了抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或結(jié)合于α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白在治療淋巴瘤中的應用。考慮了使用本文公開的聯(lián)合療法治療表達α4整聯(lián)蛋白或α4整聯(lián)蛋白配體的任何淋巴瘤細胞。
考慮了通過這些聯(lián)合療法治療的淋巴瘤包括T細胞淋巴瘤，例如但不限于皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、T細胞非何杰金氏淋巴瘤、外周T細胞淋巴瘤、間變性大細胞淋巴瘤、抗免疫母細胞淋巴瘤、和前體T-LBL。淋巴瘤的治療也取決于治療的主體、疾病的類型及其階段。用于白血病和淋巴瘤的現(xiàn)有治療模式的一般描述參見CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。還考慮了治療B細胞淋巴瘤(如，濾泡性淋巴瘤、彌散性大B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、B-CLL/SLL、免疫細胞瘤/Waldenstrom′s、和MALT型/單核細胞樣B細胞淋巴瘤)。還考慮治療兒科淋巴瘤如伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、彌散性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、前體B-LBL、前體T-LBL、間變性大細胞淋巴瘤、和外周T細胞淋巴瘤。
用于治療淋巴瘤的常見的藥物組合包括但不限于CHOP(即，環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、和潑尼松)、GAP-BOP(即，環(huán)磷酰胺、多柔比星、丙卡巴肼、博來霉素、長春新堿、和潑尼松)、m-BACOD(即，甲氨蝶呤、博來霉素、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春新堿、地塞米松、和亞葉酸)、ProMACE-MOPP(即，與標準MOPP組合的潑尼松、甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、亞葉酸)、ProMACE-CytaBOM(潑尼松、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、阿糖胞苷、博來霉素、長春新堿、甲氨蝶呤、和亞葉酸)、和MACOP-B(甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春新堿、潑尼松、博來霉素、和亞葉酸)。對于復發(fā)的攻擊性非何杰金氏淋巴瘤，可將以下化療藥物組合與本文所述的抗體和藥物組合使用IMVP-16(即，異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、MIME(即，甲基-gag、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、DHAP(即，地塞米松、高劑量阿糖胞苷、和順鉑)、ESHAP(即，依托泊苷、甲基潑尼松、高劑量阿糖胞苷、和順鉑)、CEFF(B)(即，環(huán)磷酰胺、依托泊苷、丙卡巴肼、潑尼松、和博來霉素)、和CAMP(即，洛莫司汀、米托蒽醌、阿糖胞苷、和潑尼松)。參見Margaret A.Shipp，等人，″Non-Hodgkin′sLymphomas，″，CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY 2165-2220(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997) 。
用于某些淋巴瘤如復發(fā)的抗藥性何杰金氏病的搶救性化療治療包括但不限于VABCD(即，長春堿、多柔比星、達卡巴嗪、洛莫司汀、和博來霉素)、ABDIC(即，多柔比星、博來霉素、達卡巴嗪、洛莫司汀、和潑尼松)、CBVD(即，洛莫司汀、博來霉素、長春堿、地塞米松)、PCVP(即，長春堿、丙卡巴肼、環(huán)磷酰胺、和潑尼松)、CEP(即，洛莫司汀、依托泊苷和潑尼莫司汀)、EVA(即，依托泊苷、長春堿、和多柔比星)、MOPLACE(即，環(huán)磷酰胺、依托泊苷、潑尼松、甲氨蝶呤、cytaravine、和長春新堿)、MIME(即，甲基-gag、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、MINE(即，mitoquazone、異環(huán)磷酰胺、長春瑞濱、和依托泊苷)、MTX-CHOP(即，甲氨蝶呤和CHOP)、CEM(即，洛莫司汀、依托泊苷、和甲氨蝶呤)、CEVD(即，洛莫司汀、依托泊苷、長春地辛、和地塞米松)、CAVP(即，洛莫司汀、美法侖、依托泊苷、和潑尼松)、EVAP(即，依托泊苷、長春堿、阿糖胞苷、和順鉑)、和EPOCH(即，依托泊苷、長春新堿、多柔比星、環(huán)磷酰胺、和潑尼松)。參見例如Vincent T.DeVita等人，″Hodgkin′s Disease，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY 2242-2283(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
對于CTCL，常規(guī)療法取決于患者的評價。因此，根據(jù)TNM進展，患者可進行區(qū)域性化療、補骨脂素紫外線治療、局部外束放療、體外光化療、干擾素(IFN)、用核苷酸衍生物的系統(tǒng)性化療、或光子輻射與本文公開的方法和組合物的組合進行治療。另外的治療模式為本領(lǐng)域中已知的。一般參見，CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
因此，本發(fā)明的一個方面考慮了抗-α4免疫球蛋白或者對抗α4、α4β1和α4β7的配體的免疫球蛋白在抑制主體中的淋巴瘤進展和/或淋巴瘤的轉(zhuǎn)移中的應用。試劑可單獨使用，或與本文中討論的其它淋巴瘤治療組合使用。
4.2黑素瘤的聯(lián)合治療本發(fā)明的另一方面考慮了抑制黑素瘤生長和/或抑制黑素瘤轉(zhuǎn)移灶的生長或擴散。抗-α4整聯(lián)蛋白(即，α4β1和α4β7)免疫球蛋白或識別α4整聯(lián)蛋白的配體的免疫球蛋白可單獨使用或與其它癌癥治療模式組合使用，用于治療黑素瘤?？紤]了所述方法和組合物用于但不限于治療皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤和眼內(nèi)黑素瘤。治療這些黑素瘤的常規(guī)療法為本領(lǐng)域中已知的。參見例如Anthony P.Albino等人，″Molecular Biology ofCutaneous Malignant Melanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY 1935-1947(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)；CharlesM.Balch等人，″CutaneousMelanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY，1947-1994；和Jose A.Sahel等人，″IntraocularMelanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY，1995-2012。
例如，對于轉(zhuǎn)移性黑素瘤的治療，手術(shù)、隔離肢體灌注、區(qū)域性化療輸注(用例如，decarbazine或順鉑)、放療、免疫治療(如，用抗GD2和GD3神經(jīng)節(jié)苷脂的抗體治療)、病灶內(nèi)免疫治療、系統(tǒng)性化療、高熱、系統(tǒng)免疫治療、腫瘤疫苗、或其組合的應用可另外與抗-α4免疫球蛋白或?qū)功?、α4β1、和α4β7的配體的免疫球蛋白組合。
4.3治療白血病的聯(lián)合療法本發(fā)明的另一個方面提供使用抗α4免疫球蛋白或?qū)功?配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白與用于在治療白血病的常規(guī)療法模式組合來治療某些白血病。
用于急性髓性白血病(AML)的常規(guī)療法包括但不限于基于小紅莓類(anthracycline)/阿糖胞苷的誘導方案、癥狀緩解后的加強療法諸如骨髓移植(BMT)或高劑量(HD)阿糖胞苷。
用于急性早幼粒細胞性白血病的常規(guī)療法包括但不限于視黃酸和基于小紅莓類/阿糖胞苷的治療。也可對患者給藥冷凝蛋白質(zhì)或新鮮冷凍血漿，以維持纖維蛋白原水平大于100mg/dL。輸入血小板也可能必要，以維持人體中＞50,000/μL的每日血小板計數(shù)。
用于急性淋巴母細胞性白血病(ALL)的常規(guī)治療模式包括使用小紅莓類、環(huán)磷酰胺、天冬酰胺酶或加上長春新堿和潑尼松的組合的四或五種藥物誘導方案?；蛘撸t(yī)生可選擇使用基于阿糖胞苷與小紅莓類、epidophillotoxins的組合；或抗代謝物與本文所述的免疫球蛋白組合物的組合的加強鞏固療法。又一個方面可為使用口服甲氨蝶呤與巰嘌呤的組合和本發(fā)明的免疫球蛋白用于延長的維持治療的應用。另一個方案考慮了用于CNS預防的預防性鞘內(nèi)化療(有或者沒有顱側(cè)放療)與本發(fā)明的免疫球蛋白組合的應用。對于可用于與本發(fā)明組合的治療白血病的治療模式的另外的信息，參見Issa Khouri等人，″Molecular Biology of Leukemias，″in CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OF ONCOLOGY 2285-2293(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)；David A.Scheinberg等人，″Acute Leukemias，″in CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2293-2321；和Albert B.Deisseroth等人，″Chronic Leukemias，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOF ONCOLOGY 2321-2343。
4.4用于治療轉(zhuǎn)移性疾病的聯(lián)合療法轉(zhuǎn)移灶的治療取決于轉(zhuǎn)移灶的位置和產(chǎn)生轉(zhuǎn)移灶的原發(fā)腫瘤的位置可使用單獨的本文中所述的組合物、聯(lián)合療法、和方法，或其與其它癌癥治療模式的組合進行。腫瘤轉(zhuǎn)移的最常見位置為腦、肺、肝、骨、惡性胸膜和心包腔積液、和惡性腹水。
4.4.1腦轉(zhuǎn)移灶當起源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)之外的組織的腫瘤細胞繼發(fā)性地擴散以直接牽涉腦時形成腦轉(zhuǎn)移灶。顱內(nèi)轉(zhuǎn)移灶可牽涉腦實質(zhì)、腦神經(jīng)、血管(包括硬模竇)、硬膜、柔腦膜、和頭骨的內(nèi)板。對于顱內(nèi)轉(zhuǎn)移灶，最常見的是實質(zhì)內(nèi)(intraparenchymal)轉(zhuǎn)移灶。由原發(fā)腫瘤形成腦轉(zhuǎn)移灶的頻率為肺腫瘤(48％)、乳房腫瘤(15％)、黑素瘤(9％)、結(jié)腸腫瘤(5％)、其它已知的原發(fā)腫瘤(13％)、和其它未知的原發(fā)腫瘤(11％)。參見Jay S.Loeffler，等人，″Metastatic Brain Cancer，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2523-2536(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。與腦轉(zhuǎn)移灶有關(guān)的癥狀包括精神狀態(tài)改變、輕偏癱、半部知覺(hemisensory)喪失、視神經(jīng)乳頭水腫、和步態(tài)共濟失調(diào)。因此，經(jīng)常對新診斷為患有腦轉(zhuǎn)移灶的患者采取長期的抗驚厥藥預防和皮質(zhì)類固醇。這種藥物包括苯妥英鈉和苯巴比妥。
如果腦轉(zhuǎn)移灶容易觸及，它們可以通過手術(shù)切除轉(zhuǎn)移灶而進行治療。通過事先成像和定位技術(shù)，與手術(shù)除去腦轉(zhuǎn)移灶有關(guān)的致病率已經(jīng)降低。然而，仍然存在危險。因此，放療為治療腦轉(zhuǎn)移灶患者的主要依賴性療法。放療可作為手術(shù)的輔佐療法與手術(shù)組合?；蛘?，可使用放射外科學。放射外科學為使用多會聚性電子束對小體積遞送高的單劑量輻射的外部輻射技術(shù)。放療可與其它化療劑如甲基-CCNU或ACNU組合給藥，或放療、甲基-CCNU、ACNU、和替加氟(口服給藥的5-氟尿嘧啶)組合。
化療也可用于腦轉(zhuǎn)移灶。取決于原發(fā)腫瘤，可對患者給藥以下藥物的任一種或其組合環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、長春新堿、甲氨蝶呤、多柔比星、潑尼松、和阿霉素(如，CAF或CMF的組合)。
可將本文中公開的抗體組合物和抗體用法與本文所述的或本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)治療模式組合(參見例如Jay S.Loeffler等人，1997)用于腦轉(zhuǎn)移灶。
4.4.2肺轉(zhuǎn)移灶肺為轉(zhuǎn)移性疾病的第二常見部位。在解剖學上，肺是富含血管的位置并且是循環(huán)腫瘤細胞在它們離開其原發(fā)腫瘤的靜脈引流系統(tǒng)后遇到的第一個毛細血管床。因此，肺起到最初的過濾位置的作用，其中擴散的腫瘤細胞被機械地捕獲。然而，被捕獲在其中并且繼續(xù)增殖和形成轉(zhuǎn)移灶的細胞主要取決于它們所由來的最初的原發(fā)腫瘤。肺轉(zhuǎn)移灶的這種血原性過程是最常見的方式，但是肺轉(zhuǎn)移灶又可以通過淋巴系統(tǒng)發(fā)生。參見Harvey I.Pass等人，″Metastatic Cancer to the Lung，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2536-2551(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
發(fā)展為肺轉(zhuǎn)移灶的最常見的原發(fā)腫瘤包括軟組織肉瘤、結(jié)腸癌、生殖細胞瘤、骨肉瘤、某些兒科腫瘤(如，橫紋肌肉瘤、尤因氏肉瘤、腎母細胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、蜂窩狀肉瘤、滑膜肉瘤、纖維肉瘤、神經(jīng)原性肉瘤、和上皮肉瘤)、黑素瘤、腎細胞癌、和乳癌。大部分源于這些原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移灶通過手術(shù)治療。然而，一些人推薦與化療組合的手術(shù)。例如，轉(zhuǎn)移到肺的生殖細胞瘤通過手術(shù)切除術(shù)，隨后進行基于治療性順鉑的組合化療。
肺轉(zhuǎn)移灶的治療經(jīng)常涉及轉(zhuǎn)移灶切除術(shù)(即，肺轉(zhuǎn)移灶的手術(shù)去除)。因此，本發(fā)明的一個方面考慮了公開的抗體與本文所討論的或本領(lǐng)域已知的常規(guī)療法組合用于治療肺轉(zhuǎn)移灶的應用。對于另外的治療模式，參見例如Harvey I.Pass等人，1997。
因此，本發(fā)明的一方面考慮了將抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或識別并且結(jié)合于α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白與用于治療肺轉(zhuǎn)移灶的任何可用的治療模式組合及其用法。
4.4.3肝轉(zhuǎn)移灶肝的轉(zhuǎn)移性疾病可以從許多原發(fā)腫瘤部位發(fā)生。由于解剖學的靜脈引流，胃腸道腫瘤優(yōu)先擴散到肝，使得許多患者最初診斷為在肝中具有癌癥。對于轉(zhuǎn)移到肝的大多數(shù)胃腸道腫瘤，確診后的存活率極低。但是，結(jié)腸直腸到肝的轉(zhuǎn)移灶可以在切除療法之后進行治療。
系統(tǒng)性化療是肝轉(zhuǎn)移灶最常使用的治療模式。對系統(tǒng)性化療的響應根據(jù)原發(fā)腫瘤而定。另一種選擇的治療模式為肝動脈化療。肝轉(zhuǎn)移灶幾乎只由肝動脈灌注，而正常肝細胞從門靜脈和肝動脈得到它們的血液。因此，肝動脈化療，其中將3H-氟尿苷(3H-FUDR)(或其它一種或多種化療劑)注入到肝動脈中，引起轉(zhuǎn)移灶中藥物濃度比正常肝組織顯著增加(15倍)。通過肝動脈給藥的另外的藥物包括但不限于氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶-2-脫氧尿苷、雙氯乙基亞硝基脲、絲裂霉素C、順鉑、和多柔比星。
對于肝轉(zhuǎn)移灶，治療模式可以包括系統(tǒng)性化療(使用例如3H-氟尿苷)、肝內(nèi)治療、肝動脈結(jié)扎或栓塞、化學栓塞(chemoembolization)、放療、醇注射、和冷凍手術(shù)。對于化學栓塞，可使用以下藥物方案(1)DSM和絲裂霉素C；(2)膠原蛋白、順鉑、多柔比星、和絲裂霉素C；(3)氟尿嘧啶、絲裂霉素C、乙碘油、和明膠；(4)血管抑素(或抑制新血管生成或血管生成的其它藥物)、順鉑、多柔比星、和絲裂霉素C；(5)碘化油(cipiodol)和多柔比星；(6)凝膠泡沫、多柔比星、絲裂霉素C、和順鉑；(7)多柔比星、絲裂霉素C、和碘化油；和(8)聚乙烯、醇、氟尿嘧啶、和干擾素。對于另外的治療和細節(jié)，參見John M.Daly等人，″Metastatic Cancer to the Liver，″inCANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY，2551-2569(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
對于肝轉(zhuǎn)移灶，可將任何可用的治療模式與包括本發(fā)明的免疫球蛋白的方法和組合物組合使用。
4.4.4骨轉(zhuǎn)移灶骨轉(zhuǎn)移灶的治療最好使用多模態(tài)方法學進行。骨的一個問題是骨折的發(fā)生和骨愈合。骨腫瘤的腫塊可以通過手術(shù)進行并且可以包括截肢。除手術(shù)治療之外，輻射可用于骨骼轉(zhuǎn)移灶。可以考慮局部外輻射、hemibody輻射、或系統(tǒng)放射性核治療用于廣泛擴散的骨病。提倡使用親骨同位素如89Sr，因為它們比高能量同位素32P-正磷酸鹽更易耐受。對于治療骨轉(zhuǎn)移灶的另外的治療模式和細節(jié)，參見例如John H.Healy，″Metastatic Cancer to the Bone，″CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OFONCOLOGY 2570-2586(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
對于骨轉(zhuǎn)移灶，可將任何可用的治療模式與使用抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或?qū)菇Y(jié)合于α4整聯(lián)蛋白的配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的抗體的方法和組合物組合使用。
4.5用于改善與癌癥治療有關(guān)的狀況的聯(lián)合療法通常，使用輻射或化療的初始癌癥治療模式背后的想法是使比正常細胞增殖更快的癌細胞中毒，使得它們更易受化療和輻射的影響。然而，用輻射和化療乃至一些更新的癌癥治療模式治療患者對被治療的患者有不良副作用。因此，本發(fā)明的一個方面考慮了改善由治療患者所使用的治療模式的組合產(chǎn)生的消極作用的化合物和組合物的應用。例如，可將藥物與可能治療各副作用如但不限于惡心、嘔吐、粘膜炎和其它口腔并發(fā)癥、膀胱炎、肺毒性、心臟毒性、脫發(fā)、和性腺生成障礙的抗癌療法協(xié)同對患者給藥。雖然這些試劑中的一些可表現(xiàn)為純粹的表面作用(如，抑制脫發(fā))，研究已經(jīng)表明，對癌癥治療保持積極的態(tài)度和預防抑郁癥可有助于被治療患者的全面的治療響應。因此，本文中討論的試劑和組合治療可以進一步與改善這些副作用的藥物療法組合，以及與任何常規(guī)的癌癥治療模式組合。對于與改善癌癥療法副作用的方法有關(guān)的細節(jié)，通常參見CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OF ONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
5.免疫球蛋白制劑和給藥方法本發(fā)明的一個方面考慮了抗-α4免疫球蛋白或結(jié)合于α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的應用。這種免疫球蛋白可為完整的抗體、抗體片段、或識別并且結(jié)合于這些多肽的重組產(chǎn)生的免疫球蛋白。
優(yōu)選上述討論的感興趣的抗體或免疫球蛋白在生理學可接受的載體中對主體給藥?？贵w可通過多種方法給藥，包括但不限于腸胃外給藥，包括皮下(s.c.)、硬膜下、靜脈內(nèi)(i.v.)、肌內(nèi)(i.m.)、鞘內(nèi)、腹膜內(nèi)(i.p.)、腦內(nèi)、動脈內(nèi)、或病灶內(nèi)(intralesional)的給藥途徑、局部給藥(如，手術(shù)施加或外科栓劑)、和經(jīng)肺給藥(如，氣霧劑、吸入、或粉末)和如以下進一步描述的。優(yōu)選地，抗-α4免疫球蛋白或抗α4的配體的免疫球蛋白進行靜脈內(nèi)或皮下給藥。
取決于引入的方式，免疫球蛋白可以多種方式配制。制劑(即，在給藥時對主體為治療有效的制劑)中治療活性的免疫球蛋白的濃度可為約0.01mg/mL到1g/mL優(yōu)選地，在對有需要的主體給藥時，免疫球蛋白組合物在給藥主體的血液中達到約10μg/mL或更高的濃度。
優(yōu)選地，免疫球蛋白配制為在適當?shù)亩栊暂d體如無菌生理鹽水中，用于腸胃外給藥。例如，載體溶液中免疫球蛋白的濃度典型地為約1-150mg/mL。給藥劑量由給藥途徑?jīng)Q定。優(yōu)選的給藥途徑包括腸胃外、皮下、或靜脈內(nèi)給藥。
對于腸胃外給藥，本發(fā)明的免疫球蛋白可以與可藥用載體作為在生理學可接受的稀釋劑中的溶液或懸浮液的可注射劑型給藥，生理學可接受的稀釋劑可為加入或未加入表面活性劑的無菌液體如水和油類。其它可接受的稀釋劑包括動物油、植物油、或合成來源油，例如花生油、豆油、和礦物油。通常，二醇如丙二醇或聚乙二醇(PEG)為優(yōu)選的液體載體，特別用于可注射溶液。本發(fā)明的抗體和免疫球蛋白可作為可以配制為使得允許活性成分持續(xù)釋放的儲庫型注射劑或植入制劑的形式給藥。優(yōu)選的組合物包括在包含50mM L-組氨酸、150mM NaCl(用HCl調(diào)節(jié)到pH 6.0)的含水緩沖液中配制的20mg/mL的單克隆抗體。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，識別并且結(jié)合于α4、α4二聚體、或與α4(或其二聚體)結(jié)合的配體的免疫球蛋白可單獨給藥，或與以上討論的用于治療和/改善腫瘤的其它藥物組合給藥。這些試劑也可在用于治療患者的醫(yī)藥制劑中使用。其它癌癥治療劑的給藥可以在給藥免疫球蛋白之前、同時、或之后進行。本發(fā)明的免疫球蛋白的給藥可以在外科治療、放療、激素治療、免疫治療、高熱、或其它癌癥治療模式之前、過程中、或之后進行。本發(fā)明的免疫球蛋白的給藥可以根據(jù)需要每天、每周、或每月進行。優(yōu)選地，免疫球蛋白每周給藥，持續(xù)進行一周或多周。
將免疫球蛋白的治療用制劑制備為凍干餅或水溶液的形式用于儲存，通過將具有所需純度的免疫球蛋白與非必要的生理學可接受的載體、賦形劑、防腐劑、或穩(wěn)定劑混合(REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第16版，A.Osol，Ed.，1980和最近的版本)?？山邮艿拿庖咔虻鞍纵d體、賦形劑或穩(wěn)定劑為在采用的劑量和濃度下對接受者無毒的、無治療作用和/或無免疫原性的，其包括緩沖劑如磷酸鹽、檸檬酸鹽、和其它有機酸；抗氧化劑包括抗壞血酸；低分子量(小于約10個殘基)的多肽；蛋白質(zhì)如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸、或賴氨酸；單糖、二糖、和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑如乙二胺四乙酸鹽(EDTA)；糖醇如甘露醇或山梨醇；成鹽的平衡離子如鈉；和/或非離子型表面活性劑如吐溫、Pluronics、或聚乙二醇(PEG)。載體分子的具體例子包括但不限于糖胺聚糖(如，硫酸肝素)、透明質(zhì)酸、硫酸角質(zhì)素、軟骨素4-硫酸鹽、軟骨素6-硫酸鹽、硫酸乙酰肝素、硫酸dermatin、基底膜聚糖、和pentopolysulfate。
如果需要，包括免疫球蛋白的藥物組合物還可以包括可藥用的、無毒的載體或稀釋劑，其為通常用于配制動物或人給藥用藥物組合物的介質(zhì)。選擇稀釋劑使得其不影響所述組合的生物活性。其例子包括但不限于蒸餾水、生理學磷酸緩沖鹽溶液、林格溶液、葡萄糖溶液、Hank′s溶液。
本發(fā)明的藥物可以配制為注射用制劑，通過將它們在水性或非水溶劑中溶解、懸浮、或乳化制劑，非水溶劑如植物油或其它類似的油類、合成的脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸的酯或丙二醇。制劑也可包含常規(guī)的添加劑，如增溶劑、等滲劑、助懸劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。
免疫球蛋白也以氣霧劑形式使用，以通過吸入或經(jīng)肺遞送給藥。本發(fā)明的藥物可以配制在加壓的可接受的推進劑如二氯二氟甲烷、丙烷、氮氣等中。
免疫球蛋白也可通過例如凝聚技術(shù)或通過界面聚合(如，羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚甲基丙烯酸甲酯微膠囊))包封在微膠囊中、在膠態(tài)給藥系統(tǒng)(如，脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納米粒子和毫微囊劑)、或在粗乳劑(macroemulsion)中。這種技術(shù)在REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES(同上)中公開。
用于體內(nèi)給藥的免疫球蛋白必須是無菌的。這通過在冷凍干燥和重構(gòu)之前或之后經(jīng)無菌過濾膜過濾容易地實現(xiàn)。免疫球蛋白通常以凍干形式保存或保存在溶液中。
通常將治療用免疫球蛋白組合物置于具有無菌入口的容器如靜脈內(nèi)溶液袋中、或具有可由皮下注射針頭或類似的銳利工具刺穿的塞子的小瓶中。
持續(xù)釋放制劑的適當?shù)睦影ò鞍踪|(zhì)的固體疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì)，該基質(zhì)為成形制品如薄膜或微膠囊的形式。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯；水凝膠(如，聚(甲基丙烯酸-2-羥乙酯))，如Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.15167-277(1981)和Langer，Chem.Tech.1298-105(1982)描述的；或聚(乙烯醇))；聚交酯(美國專利3,773,919)；L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等人，Biopolymers，22547-556，1983)不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯(Langer等人，同上)；可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(即，由乳酸-羥基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)；和聚-D-(-)-3-羥基丁酸(EP 133,988)。
雖然聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羥基乙酸能夠在100天內(nèi)釋放分子，某些水凝膠在較短時間內(nèi)釋放蛋白質(zhì)。當包封的抗體長時間保留在體內(nèi)時，它們可能由于在37℃暴露于潮氣下而變性或聚集，引起生物活性損失和可能的免疫原性改變?？梢愿鶕?jù)涉及的機制設(shè)計合理的策略使免疫球蛋白穩(wěn)定。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機制為通過巰基-二硫化物互換的分子間S-S鍵形成，則可以通過修飾巰基殘基、從酸性溶液凍干、控制含水量、使用適當?shù)奶砑觿⑿纬删唧w的聚合物基質(zhì)組合物等而實現(xiàn)穩(wěn)定化。
持續(xù)釋放免疫球蛋白組合物還包括脂質(zhì)體包封的免疫球蛋白。包含免疫球蛋白的脂質(zhì)體通過本身已知的方法制備。參見例如，Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 823688-92(1985)；Hwang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 774030-4(1980)；美國專利4,485,045；4,544,545；6,139,869；和6,027,726。通常，脂質(zhì)體為其中脂質(zhì)含量大于約30摩爾％(mol％)膽固醇的小型(約200到約800埃)的單層類型；調(diào)節(jié)選擇比用于免疫球蛋白治療。
本發(fā)明的免疫球蛋白可以持續(xù)釋放形式給藥，如可以配制為允許活性成分持續(xù)釋放的儲庫型注射劑、植入制劑、或滲透泵形式。用于釋放制劑的植入物為本領(lǐng)域公知的。植入物配制為具有生物可降解型或生物不可降解型聚合物的微球、小片等。例如，乳酸和/或羥基乙酸的聚合物形成宿主耐受性良好的可侵蝕型聚合物。將植入物置于例如實體瘤的附近，使得在該位置的活性劑的局部濃度相對于身體的其余位置增加。
典型的免疫球蛋白的日劑量為約1μg/kg主體體重到最多約200mg/kg主體體重，更優(yōu)選約0.01mg/kg主體體重到約150mg/kg主體體重，更優(yōu)選約0.1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重，更優(yōu)選約1mg/kg主體體重到約75mg/kg主體體重(和這些數(shù)值之間的每個整數(shù)值)，取決于本文中提及的各因素。典型地，臨床醫(yī)生可給藥免疫球蛋白，直到達到獲得預期效果的劑量。這種治療的進展可以容易地通過常規(guī)試驗進行監(jiān)控。
“穩(wěn)定的”免疫球蛋白、抗體、或抗體片段制劑為其中在儲存時其中的蛋白質(zhì)基本上保持其物理穩(wěn)定性和/或化學穩(wěn)定性和/或生物活性的制劑。本領(lǐng)域中有用于測量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的多種分析技術(shù)并在例如Peptide and Protein Drug Delivery，247-301(Vincent Lee Ed.，MarcelDekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.1991)和A.Jones，Adv.DrugDelivery Rev.1029-90(1993)中綜述。穩(wěn)定性可以在選定溫度下在選定的時間段內(nèi)進行測量。優(yōu)選地，制劑在室溫(約30℃)或40℃下在至少1個月內(nèi)是穩(wěn)定的，和/或在約-2-8℃下在至少2年內(nèi)是穩(wěn)定的。此外，制劑可在制劑的冷凍(到例如-70℃)和解凍時是穩(wěn)定的。
例如，如果根據(jù)抗原-結(jié)合試驗確定的在給定時間內(nèi)免疫球蛋白的生物活性在藥用制劑制備時表現(xiàn)出來的生物活性的約10％(在的誤差內(nèi))內(nèi)，則藥用制劑中的免疫球蛋白“保持其生物活性”。
雖然已經(jīng)參考以下實施例詳細描述了本發(fā)明，但是應該理解，可進行多種修飾而不脫離本發(fā)明的精神實質(zhì)，并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地已知的。
實施例實施例1那他珠他單抗在體外對腫瘤細胞增殖的影響為了評價那他珠他單抗誘導或抑制可能引起腫瘤形成的轉(zhuǎn)化細胞和克隆擴張的潛力，進行各實驗以測定那他珠他單抗在體外刺激表達受體的惡性細胞生長的能力，并且各研究在動物腫瘤模型中進行。
使用3H-胸苷結(jié)合試驗評價對腫瘤細胞系增殖的陽性或陰性結(jié)果。使用腫瘤異種移植體裸鼠/SCID小鼠模型評價人腫瘤細胞生長和/或轉(zhuǎn)移的抑制或促進。篩選三十二個腫瘤細胞系。在三十二個腫瘤細胞系中，十二個為結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸腺癌、結(jié)腸腺癌、或結(jié)腸癌細胞系；七個是黑素瘤或無黑色素性黑素瘤；六個是膀胱轉(zhuǎn)移細胞癌或膀胱癌；三個是白血??；兩個是淋巴瘤；兩個是前列腺癌。
進行免疫組織化學法(IHC)和熒光活化細胞分選法(FACS)以測試α4表達。通過IHC評價二十六個細胞系中的五個呈陽性。通過免疫組織化學法(IHC)認為是陰性的或可疑的二十一個細胞系中的四個通過FACS分析呈強陽性(＞85％)。由IHC分析為陰性的或可疑的兩個細胞系通過FACS分析呈弱到中等陽性(22.5和77.6％)。六個細胞系沒有通過IHC評價。只有一個細胞系通過FACS分析(68.4％)呈中等陽性。
還進行了VCAM-1結(jié)合的粘合試驗。評價的十一個細胞系中有七個呈陽性。在初步細胞增殖試驗中，評價的九個細胞系全部都沒有細胞毒或增生作用。將AS283、HT-29、MOLT-4、和UM-UC-3細胞系用Tysabri(那他珠他單抗)治療。測量氚化胸腺嘧啶攝取。在暴露于八個不同濃度(0.001-100mg/mL)下的第1、2、3、4和5天，沒有觀察到細胞毒或增生作用的證據(jù)。
實施例2那他珠他單抗對SCID小鼠皮下植入的人MOLT-4異種移植物的作用該研究的目的是測定用那他珠他單抗治療在雌性SCID小鼠皮下植入的人MOLT-4急性淋巴母細胞性白血病異種移植物的生長的作用。
材料和方法活體(In-life)實驗工作從第0天開始，并且在第80天終止。從Taconic Farms，Inc.(Germantown，NY)購得五到六周大的雌性SCID小鼠并且在實驗之前在實驗室中適應一周。將動物圈養(yǎng)在micro-isolator籠中沒有病原體的屏蔽設(shè)施中，每籠五只動物，處在12-小時照明/黑暗循環(huán)下。動物接受經(jīng)過濾的伯明翰城市用水和無菌的嚙齒動物食品。對小鼠喂食可滅菌的嚙齒動物餐(Harlan-Teklad TD8656)。鼠籠每周更換兩次。每天觀察動物并且記錄臨床征象。
使用12號套管針針頭將MOLT-4人白血病的三十到四十毫克片段植入在小鼠的接近右腹側(cè)區(qū)域(right auxillary area)內(nèi)并允許其生長。腫瘤片段植入的當天標為實驗的第0天。允許腫瘤達到75-114mg重量(75-144mm3大小)，然后開始治療。為足夠數(shù)目的小鼠植入，使得在開始治療時(腫瘤植入之后的第14天)選擇盡可能窄的重量范圍用于試驗。將選擇的具有適當尺寸范圍的動物隨機分為試驗組。治療第一天的平均腫瘤重量為84或96mg；在第14天的中值腫瘤重量為75或88mg。
在腫瘤片段植入的當天收獲一個供體腫瘤并將其切成兩半。將腫瘤的一半在O.C.T.化合物中冷凍，腫瘤的另一半在10％經(jīng)緩沖的福爾馬林中固定。冷凍的和用福爾馬林固定的半份腫瘤都運送到BiogenIdec Inc.進行分析。將用于小鼠植入的每個供體腫瘤的一個片段置于具有乙醇酸鹽培養(yǎng)基的試管中并在+37℃培養(yǎng)24小時。
從Biogen Idec Inc.得到那他珠他單抗(20mg/mL溶液，GensiaSicor Pharmaceuticals Inc.，批號F23014和G23004)和稀釋液(Placebofor Tysabri，Gensia Sicor Pharmaceuticals Inc.，批號F85002)并在收到時在+2-8℃儲存。具有0.97mg/mL人免疫球蛋白(IgG4)溶液的小瓶由Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，批號122K9159)提供，并且在收到時在-84℃儲存。購買Taxol(紫杉醇(placlitael))的臨床制劑(6.0mg/mL，在50％cremophor-EL/50％乙醇中，Bristol-MyersSquibb Company，Princeton，NJ；批號2L57296)并在收到時冷藏。鹽水(0.9％鹽水溶液，只用于動物)購自Phoenix Pharmaceutical，Inc.(St.Joseph，MO，批號262053F、206205F、208281F)并在室溫下儲存。一瓶新的鹽水只用于每一天的制劑。
在第14天，將20mg/mL的那他珠他單抗溶液用Tysabri用安慰劑稀釋到1.0mg/mL。在隨后的注射日，通過用Tysabri用安慰劑稀釋20mg/mL原液配制0.5mg/mL的那他珠他單抗溶液。注意不要搖動裝有那他珠他單抗的小瓶，將小瓶反轉(zhuǎn)進行混合。每天的制劑使用新的那他珠他單抗和Tysabri用安慰劑的小瓶。在第14天，將提供的0.97mg/mL的IgG4原液解凍并注射到小鼠中。在隨后的注射日，通過用0.9％鹽水溶液稀釋0.97mg/mL原液配制0.5mg/mL的IgG4溶液。每天的制劑使用新的IgG4小瓶。在每個注射日，用0.9％鹽水溶液稀釋市售的配制好的Taxol在50％ cremophor-EL/50％乙醇中的6mg/mL溶液等分試樣以制備在12.5％cremophor-EL/12.5％乙醇/75％鹽水中的1.5mg/mL溶液。所有的給用溶液在配制的2到3小時內(nèi)注射。
在第14、17、24、31、38、和45天，在制劑配制完之后，立即從給用瓶抽出第1組(鹽水)和第2組(那他珠他單抗)的給用溶液的兩個1mL等分試樣。將那他珠他單抗和鹽水的每個1mL等分試樣分配在標有研究名稱、組號、化合物名稱、劑量、給藥途徑、注射量、研究日、和單詞“Prep.Lab.”的小瓶中，并將小瓶立即冷藏。在每個組開始注射之前，將鹽水和那他珠他單抗的相同劑量溶液的另外兩個1mL等分試樣抽取到每組兩個注射器中(1mL/注射器)，并使注射器在對組中所有二十只動物劑量給藥過程中處在室溫下。在處理完成之后，將每個注射器的內(nèi)容物分配在標有研究編號、組號、化合物名稱、劑量、給藥途徑、注射量、研究日、和單詞“Animal Lab”的小瓶中，并將小瓶立即冷藏。在實驗完成之后，將這些等分試樣運輸?shù)紺ovanceLaboratories，Inc.進行分析。
藥物治療將動物隨機地分成六個組(每組20只動物)，和一個組(30只動物)。將兩個組(第1和5組)用0.9％鹽水溶液(鹽水)處理。第2、6、和7組的動物用那他珠他單抗處理。第3組的動物用IgG4處理(同型對照)。第4組的動物用Taxol處理(陽性對照)。用鹽水、那他珠他單抗、和IgG4處理(第1、2、3、5、和6組)在第14、17、21、24、28、31、35、38、42、和45天(Q3D×2，進行五周，星期五-星期一時間表)IP給藥。在第7組(30只小鼠的組)用那他珠他單抗處理在第14、17、21、24、28、31、35、和38天給藥(Q3D×2，四周)。在第14天，那他珠他單抗以10mg/kg的劑量給藥，隨后進一步用5mg/kg/劑量的劑量處理。在第14天，IgG4以9.7mg/kg的劑量給藥，隨后進一步用5mg/kg/劑量的劑量處理。Taxol從第14天開始以15mg/kg/劑量的劑量靜脈內(nèi)(IV)給藥，一天一次，連續(xù)進行5天(Q1D×5)。所有的試驗化合物根據(jù)確切的個體動物體重在處理日以0.1mL/10g體重的介質(zhì)量給藥。
在第14天開始的給藥處理的每天都將動物稱重并且測量皮下的(SC)腫瘤，除了有兩次測量是在注射的一天之前(第24和41天)進行之外。在處理完成之后，每周兩次收集腫瘤和體重數(shù)據(jù)。通過卡尺測量(mm)和橢球球體公式L×W2/2＝mm3測定腫瘤體積，其中L和W是指在每次測量時收集的較大和較小的垂直尺寸。這個公式還用于計算腫瘤重量，假定單位密度(1mm3＝1mg)。
在處理過程中收集第7組動物的血液。動物編號1-5在第14天注射之后的8小時采血。五只動物在第21天(動物編號6-10)、第28天(動物編號11-15)、第35天(動物編號16-20)、和第38天(動物編號21-25)的注射之前采血。動物編號26-30在第38天的注射8小時之后采血。在CO2/O2麻醉下通過眼窩后穿刺收集血液。使用無涂層的毛細管對動物采血血液的最大量(末端流血)并允許血液在室溫下凝結(jié)30分鐘，從每個采血時間點的最后一只動物開始。然后將血樣在+4℃下以10,000rpm離心10分鐘，分離血清并在干冰上冷凍。所有的血清樣品儲存在-84℃，直至運輸?shù)紹iogen Idec進行分析。
在第28天(第5組的中值腫瘤重量達到466mg一天后)將第5和6組的動物的原發(fā)腫瘤通過手術(shù)切除。麻醉劑的給藥和手術(shù)/術(shù)后恢復過程根據(jù)批準的標準實驗室方法進行。簡要地，將每只動物麻醉并用抗菌溶液準備切口位置。產(chǎn)生沿腫瘤一側(cè)外周的切口(至多比腫瘤直徑長3-4mm)，將皮膚翻過來并將腫瘤通過切口翻轉(zhuǎn)。將腫瘤從皮膚和肌肉剖開。用4.0mm創(chuàng)緣夾將切口關(guān)閉。將每個切除的腫瘤切成兩半，一半腫瘤在O.C.T.化合物中冷凍，另一半腫瘤保存在10％緩沖的福爾馬林中。每周兩次對切除位置監(jiān)控腫瘤再生長，并且在形成新的實體瘤時記錄其尺寸。
第1-4組的動物編號1-10在腫瘤植入之后的第47天(2003年5月16日)無痛處死；第1-4組的動物編號11-20在腫瘤植入之后的第48天(2003年5月17日)無痛處死。第5和6組的所有生存動物(除了第5組的動物編號12和第6組的動物編號8之外，參見以下說明)在腫瘤植入之后的第80天(2003年5月19日)無痛處死。第5組的動物編號12由于過大的腫瘤重量(＞4,000mg)而在第73天處死。第6組的動物編號8由于腫瘤潰瘍而在第73天處死。第7組的五只動物在第14、21、28、35天無痛處死，十只動物在第38天無痛處死。將在第47、48、和80天存活的所有動物的尸體提交到the Safety AssessmentDepartment of Southern Research Institute進行尸檢，隨后進行全面的組織病理學評價。第7組的動物沒有進行尸檢和全面的組織病理學評價。對于第1-6組的動物，在第0天進行腫瘤植入(皮下)。在第14天開始處理，并在第45天停止處理。在第5和6組中，在植入后的第28天進行原發(fā)腫瘤切除。動物在第80天處死。未切除組的動物在第47-48天處死。
表1

對于第7-10組的動物，在第0天進行腫瘤植入(皮下)。在第-7天開始處理，并在第45天停止處理。動物在第46-47天處死。
表2

對于第11組的動物，腫瘤植入(皮下)在第0天進行。在第14天開始處理，并在第45天停止處理。在第1、7、14、21、24、24天處死每組五只動物。這個組用于檢驗那他珠他單抗的血清水平。
表2

在規(guī)定的研究日開始以10mg/kg的負荷劑量進行那他珠他單抗給藥。隨后的劑量每周兩次給藥(即，每3-4天)。根據(jù)單一劑量之后的藥代動力學模型、和驗證性多劑量藥代動力學研究中的谷血清濃度選擇劑量水平。選擇劑量水平用于在多劑量給藥時提供20ml/mL的最低血清濃度。
在建立MOLT-4腫瘤之后的那他珠他單抗處理在切除組中引起腫瘤生長緩慢，并且切除組中的一些動物在處理后沒再有腫瘤。在MOLT-4腫瘤植入之前開始的那他珠他單抗處理引起腫瘤生長的顯著減少。那他珠他單抗處理不會不利地影響動物的健康狀態(tài)，如在處理過程中體重增加所證明的。
測定非特異性死亡的數(shù)目、部分和全面腫瘤退化的數(shù)目、沒再有腫瘤的幸存者數(shù)目、和個體動物達到評價尺寸的時間(達到四個腫瘤塊加倍的時間)。個體動物達到四個腫瘤塊加倍的時間用于計算中值腫瘤生長的總時延(T-C)。在所有的計算中，第1組(鹽水處理的動物)用作對照組(C)。在數(shù)據(jù)收集的每天從每個組計算中值腫瘤重量、平均腫瘤重量和標準偏差、和試驗組(T)的中值和平均腫瘤重量與對照組(C)的中值和平均腫瘤重量的比較(分別為，MEDIAN T/C＝中值T/中值C×100％，平均T/C＝平均T/平均C×100％)(數(shù)值在表8-2到8-8中表示)。在數(shù)據(jù)收集的每天從每個組計算平均體重和標準偏差(數(shù)值在表8-9到8-15中表示)。
在第47天收獲第1、2、3、和4組的動物編號1-10的腫瘤。在第48天收獲第1、2、3、和4組的動物編號11-20的腫瘤。第5和6組的動物編號1-20的原發(fā)腫瘤在第28天通過手術(shù)切除。在第80天收獲第5和6組中所有生存的動物的繼發(fā)瘤(在原發(fā)腫瘤的位置再生長的)。第6組的動物編號1和15在第80天的尸檢時沒有繼發(fā)瘤。(第5組的動物編號4和第6組的動物編號3在手術(shù)后恢復過程中在第28天死亡，因此沒有繼發(fā)瘤。在第47天發(fā)現(xiàn)死亡的第5組的動物編號19進行死后尸檢。第5組的動物編號12由于過大的腫瘤重量(4224mg)而被從實驗中排除。第6組的動物編號8由于腫瘤潰瘍而被從實驗排除。第5組的動物編號10、17、和20在第73天發(fā)現(xiàn)死亡，由于顯著的自溶而沒有進行尸檢。)將稱重超過100mg的每個腫瘤切成兩半，每個腫瘤的一半使用干冰/乙醇冰凌在O.C.T.化合物中冷凍并且儲存在-84℃下。稱重小于100mg的腫瘤(第4組中動物編號1、3、7、9、11、12、14-18、和20的腫瘤)全部在O.C.T.中冷凍。稱重小于100mg的第4組的動物編號2、4、5、6、8、13、和19的腫瘤全部保存在10％緩沖的福爾馬林中。在實驗完成之后，將在O.C.T.化合物中冷凍的所有腫瘤樣品(總共145個腫瘤)運輸?shù)絊ierra Biomedical，Division of Charles RiverLaboratories，通過免疫組織化學檢查以驗證MOLT-4在體內(nèi)表達VLA-4，因此是用于這項研究的有效的腫瘤模型。
使用市售的抗-CD49d抗體和得自各個試驗組的動物子集的MOLT-4腫瘤的冷凍部分進行免疫組織化學。將每個腫瘤的第二半，如果存在，在10％緩沖的福爾馬林中固定并送交Safety AssessmentDepartment Southern Research Institute進行組織病理學評價。
數(shù)據(jù)分析收集個體的腫瘤測量和體重并使用Southern Research Institute開發(fā)的軟件ADAS(Automated Data Acquisition System)進行處理。然后將數(shù)據(jù)輸出到MS Excel中用于報告。使用SigmaPlotTM圖解表示原始數(shù)據(jù)。使用終止前最后一次測量當天(第1-4組為第47天，第5和6組為第80天)的個體動物的腫瘤重量作為端點，以便統(tǒng)計學比較組間的生長數(shù)據(jù)。
使用SigmaStatTM軟件進行學生t檢驗。當數(shù)據(jù)集沒有通過常態(tài)或等方差檢驗(equal variance test)時，使用Mann-Whitney秩和檢驗代替t檢驗。為這個報告附上統(tǒng)計分析結(jié)果的復本。
劑量溶液分析兩個劑量溶液(MP-21520和MP-21522)或多或少地超過目標濃度±15％，分別為+16％和+19％偏差。這些差別歸于存在于鹽水劑量溶液和稀釋液中0.01-0.04單位的280nm吸光度。這種吸光度歸于鹽水可在樣品容器塞子中萃取。
SC MOLT-4白血病異種移植的生長在其中在腫瘤片段植入日放置腫瘤片段并且在+37℃培養(yǎng)24小時的具有硫基乙酸鹽培養(yǎng)基的任何試管中都沒有觀察到生長。在對照、鹽水處理組(第1組)中有95％腫瘤異種移植獲得比例，在二十個中只有一個異種移植沒能生長(未獲得)。沒有獲得腫瘤的第1組的動物編號20被從所有的計算排除。腫瘤生長和鹽水的給藥得到耐受，沒有體重損失。中值腫瘤重量在第47天達到1764mg并且在30.2天實現(xiàn)四個腫瘤塊加倍。
第5組中所有的二十只用鹽水處理的動物的腫瘤在植入之后逐漸生長。在第28天通過手術(shù)切除腫瘤。在手術(shù)后恢復過程中有一只動物死亡(動物編號4)。在手術(shù)之后動物體重立即減輕(最大的平均體重損失為2g[10％])但是后來體重再增加并且繼續(xù)生長。觀察到的體重可以歸于麻醉劑的給藥以及切除的腫瘤的重量的凈損失。在實驗過程中有四只動物死亡動物編號19在第47天死亡；動物編號10、17、和20在第73天死亡。在切除之后，所有動物的腫瘤在原發(fā)腫瘤的位置再生長。中值腫瘤重量在第80天達到2363mg，中值腫瘤在第60.9天達到四個腫瘤塊加倍。
那他珠他單抗的作用那他珠他單抗的給藥(第2組)得到很好的耐受，沒有死亡，在處理的第一周過程中產(chǎn)生1g(5％)的體重波動。在實驗過程中所有的二十個腫瘤都生長。中值腫瘤重量在第47天達到1240mg，中值腫瘤在第33.5天達到四個腫瘤塊加倍。對在第47天的對照、鹽水處理組(第1組)和那他珠他單抗處理組(第2組)的個體腫瘤重量的比較顯示，與鹽水處理組的腫瘤重量相比較，那他珠他單抗處理組的腫瘤重量沒有統(tǒng)計學差異(p＝0.1032，Mann-Whitney秩和檢驗)，表明兩個組的腫瘤以類似的速率生長。
第6組中所有的二十只用那他珠他單抗處理的動物的腫瘤在植入之后逐漸生長。在第28天通過手術(shù)切除腫瘤。在手術(shù)后恢復過程中有一只動物死亡(動物編號3)。動物在腫瘤切除手術(shù)之后立即經(jīng)歷最小的體重損失(最大平均體重損失1g[5％])，但是隨后繼續(xù)增加體重。在切除之后，十九只動物中有十七只的腫瘤在原發(fā)腫瘤的位置再生長，兩只動物在研究終止的當天(第80天)保持沒有再發(fā)生腫瘤。在第80天，中值腫瘤重量達到1006mg，中值腫瘤沒有達到四個腫瘤塊加倍(＞66.0天)。對鹽水處理組(第5組)和那他珠他單抗處理組(第6組)的個體動物體重的比較顯示，那他珠他單抗處理組的腫瘤生長統(tǒng)計上不同于鹽水處理組中的腫瘤生長(P＝0.0189，t檢驗)，表明那他珠他單抗處理的腫瘤的再成長速率比鹽水處理組的腫瘤更慢。在第7組中所有的三十只那他珠他單抗處理的動物的腫瘤生長。由于定期從研究除去動物用于終端血液收集，沒有評價腫瘤的生長。
IgG4的作用IgG4的給藥(第3組)得到良好的耐受，沒有死亡或體重損失。在實驗的結(jié)束時所有的二十只動物都有腫瘤。中值腫瘤重量在第47天達到1731mg，中值腫瘤在第31.7天達到四個腫瘤塊加倍。對在第47天的對照、鹽水處理組和IgG4處理組的個體腫瘤重量的比較顯示，與對照組的腫瘤重量相比較，IgG4處理組的腫瘤重量沒有統(tǒng)計學差異(p＝0.8004，Mann-Whitney秩和檢驗)，表明兩個組的腫瘤以類似的速率生長。
Taxol的作用Taxol的給藥(第4組)得到良好的耐受，沒有死亡或持續(xù)的體重損失。在處理結(jié)束之后(第17和21天)觀察到5％(1g)的平均最大體重損失，這是預期的，因為Taxol作為胞毒劑以接近最大允許劑量給藥。Taxol處理非常有效地抑制MOLT-4腫瘤異種移植生長。二十只動物中的十二只在實驗結(jié)束時沒有可測量的腫瘤，在八只具有可測量腫瘤的動物中只有三只在實驗過程中腫瘤加倍一次。Taxol處理的腫瘤的生長統(tǒng)計上不同于介質(zhì)處理的、對照組中的腫瘤生長(p＜0.0001，Mann-Whitney秩和檢驗)，表明Taxol處理抑制腫瘤生長。
對組織病理學評價結(jié)果的總結(jié)總起來說，在不同的處理組中隨機地觀察到涉及子宮、卵巢、淋巴結(jié)、肺、肝、和脾增大的肉眼損害，但是沒有一個研究結(jié)果被認為是處理相關(guān)的。在來自不同試驗組的小鼠隨機地發(fā)生的微觀的病灶包括脾和肝中的骨髓外造血、肝中的局灶性壞死和炎癥、腸系膜中的炎癥、和心的心外膜的礦化。所這些改變被認為是偶然的或自發(fā)的，與所有試驗制品的給藥無關(guān)。異種移植生長的增強在任何試驗組中都不明顯。在來自第5和6組的四只小鼠的腹部(腹股溝)皮膚中發(fā)現(xiàn)異種移植生長的擴散。在第5組的小鼠的區(qū)域淋巴結(jié)(腋窩、腹股溝、髂骨、下頜骨、和縱隔)中和第6組小鼠的腹股溝淋巴結(jié)中觀察到異種移植的轉(zhuǎn)移或擴散。在第5和6組中各觀察到一只小鼠的胸腺轉(zhuǎn)移灶。沒有證據(jù)表明繼發(fā)性人急性淋巴母細胞性白血病的生長或轉(zhuǎn)移的惡化是由于用那他珠他單抗處理的結(jié)果。
對腫瘤的免疫組織學分析的總結(jié)通過免疫組織化學檢查腫瘤部分以驗證MOLT-4在體內(nèi)表達VLA-4，并且因此是用于這項研究的有效的腫瘤模型。使用市售的抗-CD49d抗體和得自各個試驗組的動物子集的MOLT-4腫瘤的冷凍部分進行免疫組織化學。MOLT-4細胞的CD49d-特異性免疫正性的特征在于穩(wěn)固的、顆粒狀到小束狀、擴散細胞質(zhì)和細胞表面染色。擴散細胞質(zhì)染色顯示，胞質(zhì)內(nèi)的、以及細胞表面CD49d結(jié)合于抗-CD49d抗體。得自鹽水對照組和IgG4對照組的動物的腫瘤部分具有穩(wěn)固的染色，并且被給予3到4的免疫組織化學染色評分(分別為“集束的細胞、密集的分布(Clustered，closely spaced)”到“稠密地堆積的細胞(Denselypacked cells)”)。在尸檢之前經(jīng)過延長的未處理時間的得自那他珠他單抗處理組的動物(第6組)的腫瘤部分還具有穩(wěn)固的染色并且被給予3到4的免疫組織化學染色評分。在用那他珠他單抗處理并且在處理結(jié)束時處死的動物中，CD49d的免疫組織化學染色大大減少為不存在的并且腫瘤部分被給予0到2的免疫組織化學評分(分別為“沒標記的細胞(No labeled cells)”到“散布的單獨的細胞，密集的分布(Scattered individual cells，closely spaced)”)。用腫瘤溶解藥物Taxol處理的小鼠經(jīng)常在處理之后沒有充分的參與腫瘤塊用于評價免疫組織化學染色。這些數(shù)據(jù)證實，MOLT-4人白血病細胞系在這些研究的實驗條件下確實在體內(nèi)表達CD49d。
結(jié)論
SC植入的MOLT-4人急性淋巴母細胞性白血病異種移植的生長沒有被給藥那他珠他單抗抑制。然而，實體瘤在原發(fā)腫瘤切除位置的再生長受到給藥那他珠他單抗的抑制。給藥IgG4對于異種移植的生長沒有影響。用Taxol處理抑制原發(fā)腫瘤生長，產(chǎn)生在實驗結(jié)束時在二十只動物中有十二只沒有可測量的腫瘤。動物的組織病理學評價顯示，沒有證據(jù)表明人急性淋巴母細胞性白血病的生長或轉(zhuǎn)移的惡化是由于用那他珠他單抗或IgG4處理的結(jié)果。在所有的試驗組只發(fā)生隨機分布模式的多種肉眼可見的和微觀的病灶。然而，所有的病灶結(jié)果被認為是自發(fā)的或偶然的，與用鹽水、那他珠他單抗、IgG4或Taxol處理無關(guān)。
上述引用的所有參考文獻都被全文并入本文作為參考。該申請涉及2004年2月6日提交的美國專利臨時申請60/541,946，其被全文并入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移性進展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的方法，所述方法包括對有需要的主體給藥足以抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的量的抗-α4免疫球蛋白。
2.權(quán)利要求1的方法，其中抗-α4抗體結(jié)合于α4β1整聯(lián)蛋白和/或α4β7整聯(lián)蛋白。
3.權(quán)利要求1的方法，其中抗-α4免疫球蛋白為那他珠他單抗。
4.權(quán)利要求1的方法，其中腫瘤為黑素瘤、前列腺癌、白血病、或淋巴瘤。
5.權(quán)利要求4的方法，其中黑素瘤為皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、或眼內(nèi)黑素瘤。
6.權(quán)利要求4的方法，其中淋巴瘤為非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、或何杰金氏病。
7.權(quán)利要求4的方法，其中白血病為慢性髓性白血病、急性髓性白血病、成年急性淋巴母細胞性白血病、成熟B細胞急性淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、幼淋巴細胞白血病、或毛細胞白血病。
8.權(quán)利要求3的方法，其中對主體給藥約1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重的量的那他珠他單抗。
9.權(quán)利要求8的方法，其中對主體給藥約1mg/kg主體體重到約10mg/kg主體體重的量的那他珠他單抗。
10.權(quán)利要求8的方法，其中那他珠他單抗以約1mg/kg主體體重到約20mg/kg主體體重的量給藥。
11.權(quán)利要求4的方法，其中腫瘤為黑素瘤，并且主體在手術(shù)切除黑素瘤之后給藥那他珠他單抗。
12.權(quán)利要求4的方法，其中腫瘤為黑素瘤并且主體另外經(jīng)歷手術(shù)、隔離肢體灌注、區(qū)域性化療輸注、系統(tǒng)性化療、或使用第二抗體或抗血清的免疫治療從而治療黑素瘤。
13.權(quán)利要求12的方法，其中第二抗體為抗-GM2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、抗-GD2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、或抗-GD3神經(jīng)節(jié)苷脂抗體。
14.權(quán)利要求12的方法，其中區(qū)域性化療輸注或系統(tǒng)性化療包括選自以下的至少一種化療劑達卡巴嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、?；悄就?、福莫司汀、司莫司汀、順鉑、卡鉑、長春新堿、長春堿、長春地辛、紫杉醇、二溴衛(wèi)矛醇、地托比星、吡曲克辛、和干擾素。
15.權(quán)利要求14的方法，其中干擾素為干擾素-α2。
16.權(quán)利要求1的方法，其中轉(zhuǎn)移灶為轉(zhuǎn)移到腦、肺、肝、或骨骼的轉(zhuǎn)移灶。
17.權(quán)利要求16的方法，其中轉(zhuǎn)移灶為轉(zhuǎn)移到肺的轉(zhuǎn)移灶，并且腫瘤為黑素瘤。
18.權(quán)利要求1的方法，其中腫瘤為淋巴瘤并且主體另外用一種或多種化療劑和/或放療進行治療。
19.用于抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移性進展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的聯(lián)合療法，包括給予抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體的免疫球蛋白，和化療、免疫治療、和/或放療。
20.權(quán)利要求19的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白為抗-α4β1整聯(lián)蛋白抗體或抗-α4β7整聯(lián)蛋白抗體。
21.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白為那他珠他單抗。
22.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白通過靜脈內(nèi)、鞘內(nèi)、或皮下對有需要的主體給藥。
23.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白為那他珠他單抗，并且以約1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重的量給藥。
24.權(quán)利要求23的聯(lián)合療法，其中那他珠他單抗以約10mg/kg主體體重到約30mg/kg主體體重的量給藥。
25.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白每天、每周、或每月給藥。
26.權(quán)利要求25的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白每周給藥。
27.包括抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白的藥物制劑在對有需要的主體給藥時用于抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移性進展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的應用。
28.權(quán)利要求27的應用，其中主體另外用化療、免疫治療、手術(shù)、放療、高熱、或改善癌癥治療的副作用的藥物進行治療。
29.權(quán)利要求27的應用，其中腫瘤為黑素瘤、白血病、前列腺癌、或淋巴瘤。
全文摘要
提供了用于治療淋巴瘤、白血病、黑素瘤、前列腺癌和轉(zhuǎn)移性疾病的組合物、方法、和組合治療。具體地，公開了包括抗α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或結(jié)合于α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM－1和VCAM－1)的免疫球蛋白的組合物，用于抑制腫瘤的生長和進展、和抑制轉(zhuǎn)移灶。用于治療腫瘤和轉(zhuǎn)移灶優(yōu)選的免疫球蛋白為那他珠他單抗。使用這些免疫球蛋白的組合物和方法可單獨使用或與其它試劑和癌癥治療模式組合使用。
文檔編號A61K39/395GK1946407SQ200580012148
公開日2007年4月11日 申請日期2005年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月6日
發(fā)明者N·維納 申請人:伊蘭藥品公司