專利名稱：：檢測(cè)和治療視網(wǎng)膜疾病的方法和組合物的制作方法專利說(shuō)明檢測(cè)和治療視網(wǎng)膜疾病的方法和組合物
背景技術(shù)：
：年齡相關(guān)黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)為年齡超過(guò)60歲的高齡人群中第一致盲原因。該病為破壞性疾病，破壞患病個(gè)體的中央視覺(jué)(centralvision)，剝奪他們完成日常生活所必需的活動(dòng)例如閱讀和駕車的能力(Bressler等人，1988；Evans，2001；Gottlicb，2002)。一項(xiàng)研究中已報(bào)道AMD在75歲或75歲以上人群中的患病率為7.8％(Klein等人，1992)。AMD為慢性進(jìn)行性疾病，涉及外層視網(wǎng)膜層(包括光感受器和支持該光感受器的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinalpigmentepithelial，RPE))以及已知為脈絡(luò)膜的眼相鄰血管層(adjacentvascularlayer)中的細(xì)胞。黃斑變性的特征為黃斑(macula)的衰退，所述黃斑為中央視網(wǎng)膜負(fù)責(zé)高敏度視覺(jué)的一小部分(直徑約2毫米)。遲發(fā)性黃斑變性(即AMD)通常被確定為不是“干”就是“濕”。所述濕的(“滲出性的”)新生血管型(neovascular)AMD影響大約10％患有該疾病的患者，特征為異常血管從脈絡(luò)膜毛細(xì)血管層(choriocapillaris)經(jīng)過(guò)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞長(zhǎng)出，一般引起出血、滲出作用、瘢痕化和/或漿液性視網(wǎng)膜脫離(serousretinaldetachment)。大約90％的AMD病人為非新生血管型的干燥類型，特征為視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞萎縮以及喪失黃斑感受器。AMD的臨床標(biāo)志之一是存在碎屑樣(debris-like)物質(zhì)的沉著物，術(shù)語(yǔ)稱“脈絡(luò)膜小疣(drusen)”，積聚在布魯赫膜(Bruch’smembrane)上，所述布魯赫膜為將RPE(最外層視網(wǎng)膜)與下面的脈絡(luò)膜分開(kāi)的細(xì)胞外基質(zhì)組分的多層復(fù)合物。脈絡(luò)膜小疣能通過(guò)眼底鏡眼檢查觀察到。所述沉著物已在患有AMD病人捐獻(xiàn)的眼的微觀研究中得到廣泛表征(Sarks等人，1988)。根據(jù)包括沉著物的相對(duì)大小、豐度和形狀在內(nèi)的幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，在臨床檢查的活體眼中觀察到的沉著物可以分為軟脈絡(luò)膜小疣或硬脈絡(luò)膜小疣(參考例如Abdelsalam等人，1999)。組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究已表明脈絡(luò)膜小疣包括多種脂類、多糖、氨基葡聚糖和蛋白質(zhì)(Abdelsalam等人，1999；Hagerman等人，1999，2001)。AMD目前還沒(méi)有治愈方法。幾種類型的療法可用，用激光光凝固濕型AMD異常血管的方法成為標(biāo)準(zhǔn)療法(Gottlieb，2002；Algvere和Seregard，2002)。這種療法的局限在于只有描繪清楚的新生血管的損害才能用此法治療，50％的病人會(huì)遭受血管泄漏的復(fù)發(fā)(Fine等人，2000)。由于所述治療所需的激光的能量，受治療區(qū)域內(nèi)的光感受器也將死亡，病人也經(jīng)常遭受治療后立刻中樞性失明。新的新生血管損害最終將發(fā)展，需要重復(fù)治療。結(jié)合用光敏試劑激活的低能量激光的光動(dòng)力療法成為激光治療方法的有用的補(bǔ)充(Bressler，2001)。在此方法中，使用對(duì)異常新生血管具有親和力的光敏試劑即維替泊芬(verteporfin)。所述血管的選擇性靶向作用(selectivetargeting)可以被非熱激光激活產(chǎn)生能破壞異常血管的活性氧。在研究組中，只有33％接受使用維替泊芬的光動(dòng)力療法的受試者具有實(shí)質(zhì)性視覺(jué)喪失，相比之下61％的受試者沒(méi)有接受維替泊芬。然而前述療法只對(duì)患有典型脈絡(luò)膜新生血管膜的病人有益。這種新治療模式的全部長(zhǎng)期的益處仍有待確定。盡管有上述優(yōu)點(diǎn)，然而所述治療方法不能避免隨后形成新的新生血管損害。另一種可用的濕型AMD的治療方法包括黃斑下的外科手術(shù)和外線束(external-beam)放射療法。包括視網(wǎng)膜易位(translocation)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor)的抑制的研究正在進(jìn)行(Algvere和Seregard，2002)。為阻止進(jìn)展到晚期AMD，使用包括維生素C和E、β-胡蘿卜素和鋅在內(nèi)的抗氧化劑的治療顯示是有用的，預(yù)防性激光治療也正在進(jìn)行研究(Gottlieb，2002)。盡管有上述進(jìn)展，但是應(yīng)該認(rèn)識(shí)到現(xiàn)有AMD的治療方法主要治標(biāo)(Algvere和Seregard，2002)。沒(méi)有進(jìn)攻該疾病未知根本原因的可用的治療方法。因此所述疾病在治療后仍能繼續(xù)進(jìn)展，出現(xiàn)新生血管形成的再發(fā)展和黃斑的破壞。因此仍然迫切需要了解所述疾病的分子機(jī)制，從而治療學(xué)治療或治愈方法能針對(duì)其根本原因。已清楚地認(rèn)識(shí)到遺傳因素在AMD病因?qū)W中起重要作用。例如，已報(bào)道有AMD家族史的人和AMD病人的同胞具有較高危險(xiǎn)發(fā)生AMD(Evans，2001)。單卵雙胞胎與異卵雙胞胎相比，表現(xiàn)出更高的AMD臨床特征同病率(concordancerate)(Klein等人，1994)。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)患有AMD的單卵雙胞胎AMD全部一致，而只有42％的異卵雙胞胎一致(Meyers等人，1995)。因此，一種了解AMD病因?qū)W的主要方法為尋找AMD相關(guān)基因。例如，諸如大家族中的連鎖分析(linkageanalysis)、同胞配對(duì)(sibpair)中的等位基因共有性分析(allelesharinganalysis)以及人群中相關(guān)性研究(associationstudy)的方法已經(jīng)用于嘗試鑒定與AMD線關(guān)基因(Guymer，2001)。大型AMD家族中報(bào)道了連鎖染色體區(qū)域1q(Klein等人，1988)。等位基因共有性分析結(jié)果未產(chǎn)生新的候選基因(Week等人，2000)。在一個(gè)大家族中的人染色體1q的家族型年齡相關(guān)黃斑變性基因定位中已經(jīng)報(bào)道了海米生丁-1(Hemicentin-1)中的相關(guān)突變(Schultz等人，2003)。用于AMD的另一遺傳策略為測(cè)試引起其他類型遺傳性黃斑變性的基因作為假定AMD的成因基因(“候選基因”)。表型類似AMD的幾種具有清楚遺傳性模式(hereditarypattern)遺傳特性的黃斑疾病(所謂“孟德?tīng)柺宵S斑疾病”)已得到描述。所述疾病的實(shí)例包括索斯比氏眼底營(yíng)養(yǎng)不良(Sorsby’sfundusdystrophy)、斯塔加特氏病(Stargardt′sdisease)、貝斯特病(Bestdisease)和多英氏蜂窩狀視網(wǎng)膜營(yíng)養(yǎng)不良(Doyne′shoneycombretinaldystrophy)(Guymer，2001)。這些疾病的成因基因已經(jīng)被分析作為AMD的候選基因。然而至今尚未清楚地證明它們中任何一個(gè)與AMD有病因關(guān)系。例如，發(fā)現(xiàn)三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子基因(ATP-bindingcassettetransportergene，ABCR)為退行性斯塔加特氏病的致病基因(Hutchinson等人，1997)。提出ABCR為AMD的候選基因，在一項(xiàng)研究中，16％患有AMD的病人最初顯示出具有該基因的突變(Allikmet等人，1997)。然而該結(jié)果已出現(xiàn)異議(Stone等人，1998)。不能通過(guò)如染色體基因定位(chromosomalmapping)、遺傳連鎖分析和候選基因分析的經(jīng)典遺傳方法找到AMD基因的最可能的原因?yàn)?，AMD為“多基因”或“綜合”遺傳疾病。綜合遺傳疾病被認(rèn)為是那些多重基因變化引起的疾病。所述疾病表現(xiàn)特有的綜合遺傳模式(Heiba等人，1994；Klein等人，1994)。就老年疾病AMD而言，通常認(rèn)為疾病的病程不僅受到上述多重遺傳因素結(jié)合的影響，還受到環(huán)境危險(xiǎn)因素的一定影響。針對(duì)發(fā)現(xiàn)AMD成因基因的第二大途徑已經(jīng)為針對(duì)闡明該疾病的機(jī)理的基于假設(shè)研究，次要目的為鑒定該機(jī)制有關(guān)基因。關(guān)于AMD致病機(jī)理的很多假說(shuō)已經(jīng)被提出并且經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)，在此課題上結(jié)果出現(xiàn)多篇文獻(xiàn)。氧化損傷作為AMD假定機(jī)制已經(jīng)成為一個(gè)主要課題(Winkler等人，1999；Evans，2001；Husain等人，2002)。公知視網(wǎng)膜具有極高的氧消耗量，并且光感受器和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞存在于非常富氧環(huán)境中。RPE位置緊鄰脈絡(luò)膜毛細(xì)血管層，富含毛細(xì)血管叢具有高氧合血。所述視網(wǎng)膜為光敏感器官，其中在光照射的時(shí)間內(nèi)光敏化信號(hào)持續(xù)產(chǎn)生，導(dǎo)致尤其是反應(yīng)性氧種(oxygenspecies)的產(chǎn)生。氧化損傷假說(shuō)的主要證明中，已報(bào)道抗氧化劑在臨床研究測(cè)試中具有減緩嚴(yán)重AMD進(jìn)程的適度有益效果(Hyman和Neborsky，2002)，但是幾項(xiàng)研究的結(jié)果相反(Flood等人，2002)。吸煙能降低抗氧化劑的血漿水平，已與AMD增加的風(fēng)險(xiǎn)相聯(lián)系(Mitchell等人，2002)。氧化損傷理論附加的證明為最近脈絡(luò)膜小疣的蛋白質(zhì)組分析，表明在所述沉著物中存在幾種氧化修飾的產(chǎn)物(Crabb等人，2002)。已經(jīng)提出RPE中的功能障礙是AMD的主要發(fā)病機(jī)理，能夠?qū)е旅}絡(luò)膜小疣形成(Hogan，1972)。RPE功能障礙的最早可知癥狀是脂褐素(lipofuscin)積聚，可能導(dǎo)致在布魯赫膜特征性增厚、脈絡(luò)膜小疣形成以及在濕型AMD中觀察到的脈絡(luò)膜新生血管化(Gass等人，1985；Sarks等人，1988；Green，1999)。脂褐素由多數(shù)得自光感受器外節(jié)(outersegment，OS)的吞噬膜(phagocytosedmembrane)的氧化的聚合分子組成(Katz，1989；Kennedy等人，1995)。公知OS膜富含多不飽和脂肪酸，為過(guò)氧化作用的極好底物(Katz，1989)。公認(rèn)所述分子不能被降解，因此開(kāi)始在RPE細(xì)胞中作為脂褐素積聚。至少脂褐素的一種組分即熒光基團(tuán)A2E(fluorophoreA2E)——吡啶二類視黃醛(pyridiniumbisretinoid)已被證明有毒，引起膜失去穩(wěn)定性(De和Sakemar，2002)并且抑制培養(yǎng)的豬及人的RPE細(xì)胞中的細(xì)胞色素C氧化酶和細(xì)胞凋亡(Shaban等人，2002)。因此RPE中的A2E和脂褐素積聚被認(rèn)為是直接與所述細(xì)胞隨年齡的功能障礙和死亡有關(guān)。氧化損傷、脂褐素積聚以及脈絡(luò)膜小疣形成的病變不限于AMD，在所有高齡個(gè)體中都有一定程度的發(fā)生。因此根本問(wèn)題仍然沒(méi)有解決，為什么所述病變?cè)谀承┤酥斜仍谄渌酥袝?huì)更嚴(yán)重地導(dǎo)致AMD。在開(kāi)發(fā)靶向AMD根本原因的新療法的進(jìn)程中，將要求更多促進(jìn)觀察病理學(xué)的關(guān)于光感受器、RPE和脈絡(luò)膜細(xì)胞中主要細(xì)胞代謝途徑的具體基因靶標(biāo)的知識(shí)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了用于篩選和治療包括年齡相關(guān)的黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)在內(nèi)的視網(wǎng)膜變性狀態(tài)的方法和組合物，以及用于測(cè)試治療化合物和方法的動(dòng)物模型。本發(fā)明為基因探索策略的成果，最終得到1)患有AMD的眼組織與正常眼組織比較2)在RPE細(xì)胞外節(jié)(outersegment，OS)吞噬作用過(guò)程中表現(xiàn)出差異表達(dá)的基因的分離。OS吞噬作用為RPE細(xì)胞的重要功能，包括多步復(fù)雜過(guò)程，其副產(chǎn)品促成反應(yīng)性氧種的產(chǎn)生以及RPE細(xì)胞內(nèi)脂褐素的積聚。用一種稱為基因表達(dá)的比較雜交分析(comparativeHybridizationAnalysisofGeneExpression，CHANGE)的表達(dá)克隆新策略，分離出了至少200個(gè)AMD相關(guān)基因和至少60個(gè)在RPE細(xì)胞中表達(dá)的吞噬作用相關(guān)基因。五個(gè)以前未表征的基因通過(guò)所述策略鑒定出來(lái)并且證明與AMD和/或RPE吞噬作用相關(guān)。編碼所述基因產(chǎn)物的cDNA核苷酸序列這里列為SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17。這里還描述了稱為“AMD/吞噬基因”或“AMDP基因”的六個(gè)基因的子集，符合AMD和RPE吞噬作用的雙重親緣關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)。所述基因中的三個(gè)基因即前列腺素D2合酶(SEQIDNO2)、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1(matrixmetalloproteinase，membrane-type1，MT1-MMP)(SEQIDNO15)和未知RPE-表達(dá)cDNAAMDP-3(SEQIDNO17)都證實(shí)在AMD中的上游調(diào)控。在AMD中受下游調(diào)控的AMDP基因包括酪蛋白激酶1ε(caseinkinase1epsilon)(SEQIDNO9)、鐵蛋白重多肽1(ferritinheavypolypeptidel)(SEQIDNO10)和SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白(SEQIDNO16)。這里公開(kāi)的其他先前未知與RPE吞噬作用功能相關(guān)的基因包括未知PHG-1(SEQIDNO1)、髓磷脂堿蛋白(SEQIDNO3)、未知PHG-4(SEQIDNO4)、未知PHG-5(SEQIDNO5)、花生樣2/分隔蛋白(septin)4(SEQIDNO6)、毛狀蛋白樣1(coactosin-like1)(SEQIDNO7)、叢生蛋白(clusterin)(SEQIDNO8)、metargidin(SEQIDNO11)、未知PHG-13(SEQIDNO12)、視黃醛結(jié)合蛋白1(SEQIDNO13)和肌動(dòng)蛋白γ1(actingamma1)(SEQIDNO14)。通過(guò)上述策略發(fā)現(xiàn)的典型的AMDP基因?yàn)槟ば突|(zhì)金屬蛋白酶1(membrane-typematrixmetalloproteinase1，MT1-MMP)(SEQIDNO15)。MT1-MMP為編碼關(guān)于細(xì)胞外基質(zhì)再造的蛋白酶的基因，例如通過(guò)特異性激活明膠酶原A。明膠酶A為負(fù)責(zé)特異性斷裂基底膜主要結(jié)構(gòu)成分IV型膠原的主要金屬蛋白酶。MT1-MMP還表現(xiàn)出抗其他細(xì)胞外基質(zhì)的活性。基于以下發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)證明MT1-MMP為篩選和治療AMD和其他視網(wǎng)膜病變的非常吸引人的治療靶標(biāo)1)MT1-MMP在患有AMD的病人的眼中、AMD的猴模型中以及關(guān)于OS中RPE吞噬作用缺陷的視網(wǎng)膜變性模型RCS大鼠中的RPE和光感受器內(nèi)受上游調(diào)控；2)MT1-MMP與RPE細(xì)胞吞噬作用機(jī)制直接相關(guān)；3)通過(guò)用抗MT1-MMP抗體在視網(wǎng)膜下空間中阻斷激活MT1-MMP的存在，顯著減緩RCS大鼠中視網(wǎng)膜變性的進(jìn)程；4)發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生mRNA剪接變體得到截短蛋白(truncatedprotein)的MT1-MMP的同義多態(tài)性(synonymouspolymorphism)(即P259P)和影響蛋白催化結(jié)構(gòu)域的MT1-MMP的錯(cuò)義多態(tài)性(missensepolymorphism)(即D273N)，在患有AMD病人(54.8％對(duì)31.6％)和家族性黃斑病病人(68.2％對(duì)31.6％)的DNA中具有較高發(fā)生頻率?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種延遲或逆轉(zhuǎn)受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的方法。所述方法包括用調(diào)節(jié)AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因的表達(dá)或活性的試劑接觸具有或者處在即將發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)危險(xiǎn)中的受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜細(xì)胞。AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)的基因可以是人未知PHG-1、前列腺素D2合酶、髓磷脂堿蛋白、人未知PHG-4、人未知PHG-5、花生樣2/分隔蛋白4、毛狀蛋白樣1、叢生蛋白、酪蛋白激酶1ε、鐵蛋白重多肽1、metargidin、人未知PHG-13、視黃醛結(jié)合蛋白1、肌動(dòng)蛋白γ1、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1(matrixmetalloproteinase，membrane-associated1，MT1-MMP)、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白和人未知AMDP-3。這里確定的上述AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)的基因的核苷酸序列分別為SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO11、SEQIDNO12、SEQIDNO13、SEQIDNO14、SEQIDNO15、SEQIDNO16和SEQIDNO17。優(yōu)選的靶向用于調(diào)節(jié)表達(dá)或活性的基因?yàn)榍傲邢偎谼2合酶、MT1-MMP和未知基因AMDP-3，鑒于在AMD中表現(xiàn)受上游調(diào)控。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述試劑針對(duì)MT1-MMP核苷酸或蛋白。所述視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)可以為AMD。所述方法可以為治療遭受AMD痛苦或者處在發(fā)展成AMD的危險(xiǎn)中的受試者。所述方法可以延遲視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)，或者可以逆轉(zhuǎn)所述疾病或狀態(tài)。所述方法實(shí)施中接觸的細(xì)胞類型可以是光感受器、RPE細(xì)胞或米勒細(xì)胞(Mullercell)，或者是包括內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、黑素細(xì)胞或成纖維細(xì)胞在內(nèi)的脈絡(luò)膜細(xì)胞類型。在所述方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，其中AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)的基因是MT1-MMP，所述MT1-MMP可以位于細(xì)胞內(nèi)或者例如感光器間基質(zhì)的細(xì)胞外基質(zhì)中。在所述方法的一些實(shí)施方式中，所述試劑下游調(diào)控核苷酸的表達(dá)或者AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)的基因氨基酸序列。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述靶向基因包括MT1-MMP、前列腺素D2合酶和AMDP-3，這里所述基因在AMD中表現(xiàn)出過(guò)度表達(dá)。所述試劑可以是寡聚核苷酸，例如核酶、反義RNA、干擾RNA(RNAi)分子或三股螺旋形式分子。所述試劑還可以為特異性結(jié)合MT1-MMP、前列腺素D2合酶或者AMDP-3的蛋白或肽的抗體。優(yōu)選所述抗體可以中和蛋白質(zhì)或肽的至少一種生物學(xué)活性。例如，抗MT1-MMP的抗體可以中和明膠酶原A的激活作用或細(xì)胞外基質(zhì)組分的降解作用。在另一實(shí)施方式中，所述下游調(diào)控MT1-MMP、前列腺素D2合酶或者AMDP-3表達(dá)的試劑可以為小分子。本發(fā)明的另一目的是提供一種確定受試者處在發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的危險(xiǎn)中的方法。所述方法包括篩選受試者的核苷酸序列在至少一種吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因中存在至少一種多態(tài)性，其中所述多態(tài)性的存在表明該受試者比沒(méi)有出現(xiàn)多態(tài)性的受試者的發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的危險(xiǎn)性高。所述吞噬作用相關(guān)基因包括但不限于未知PHG-1、前列腺素D2合酶、髓磷脂堿蛋白、未知PHG-4、未知PHG-5、花生樣2/分隔蛋白4、毛狀蛋白樣1、叢生蛋白、酪蛋白激酶1ε、鐵蛋白重多肽1、metargidin、未知PHG-13、視黃醛結(jié)合蛋白1、肌動(dòng)蛋白γ1、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白和未知AMDP-3。編碼所述吞噬作用相關(guān)基因產(chǎn)物的核苷酸包括eDNA序列這里分別列在SEQIDNO1至SEQIDNO17中。此方法中篩選的所述AMDP相關(guān)基因可以包括但不限于前列腺素D2合酶、酪蛋白激酶1ε、鐵蛋白重多肽1、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白和AMDP-3。編碼所述AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的核苷酸包括cDNA序列這里分別列在SEQIDNO2、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO16和SEQIDNO17中。此方法中篩選的所述多態(tài)性可以出現(xiàn)在感興趣的基因的內(nèi)含子、外顯子或者啟動(dòng)子區(qū)域之內(nèi)。在所述篩選方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，感興趣的基因?yàn)镸T1-MMP。所述多態(tài)性可以出現(xiàn)在人MT1-MMP基因區(qū)域內(nèi)，該基因可以通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，使用具有選自由SEQIDNO18和SEQIDNO19、SEQIDNO20和SEQIDNO21、SEQIDNO22和SEQIDNO23、SEQIDNO24和SEQIDNO25、SEQIDNO26和SEQIDNO27、SEQIDNO28和SEQIDNO29、SEQIDNO30和SEQIDNO31、SEQIDNO32和SEQIDNO33、SEQIDNO34和SEQIDNO35、SEQIDNO36和SEQIDNO37、SEQIDNO38和SEQIDNO39、SEQIDNO40和SEQIDNO41、SEQIDNO42和SEQIDNO43、SEQIDNO44和SEQIDNO45、SEQIDNO46和SEQIDNO47、SEQIDNO48和SEQIDNO49、SEQIDNO50和SEQIDNO51、SEQIDNO52和SEQIDNO53、SEQIDNO54和SEQIDNO55、SEQIDNO56和SEQIDNO57以及SEQIDNO57和SEQIDNO58所組成的組中的核苷酸序列的擴(kuò)增引物對(duì)。在所述方法特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，多態(tài)性在人MT1-MMP基因的外顯子5的285堿基對(duì)片段內(nèi)。在此區(qū)域內(nèi)，所述多態(tài)性可以包括D273N錯(cuò)義多態(tài)性和P259P同義多態(tài)性。本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供一種治療受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的方法。所述方法包括用包括編碼試劑的核苷酸的載體接觸受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜細(xì)胞，所述試劑下游調(diào)控或抑制吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)mRNA或蛋白質(zhì)的表達(dá)。所述包括在載體中的試劑可以為反義RNA、核酶或干擾RNA(RNAi)分子。在優(yōu)選實(shí)施方式中，靶向所述吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因用于下游調(diào)控的是前列腺素D2合酶、MT1-MMP和AMDP-3，各自包括的核苷酸序列這里列為SEQIDNO2、SEQIDNO15和SEQIDNO17。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的方法，該方法將載體遞呈需要形式的吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物給需要治療的受試者。所述載體可以包括編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的野生型或多態(tài)變異體的核苷酸序列。本發(fā)明的另一實(shí)施方式為用于防止或治療受試者視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的組合物，該組合物包括阻斷吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的表達(dá)或活性的試劑。在一些實(shí)施方式中，所述試劑可以為反義RNA、核酶或干擾RNA(RNAi)分子。所述試劑還可以是抗體或者小分子。包括載體的用于防止或治療受試者視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的組合物也在本發(fā)明范圍內(nèi)。在多個(gè)實(shí)施方式中，所述載體可以包括編碼下游調(diào)控或抑制吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)mRNA或蛋白質(zhì)的表達(dá)的試劑的核苷酸，或者編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白的野生型或多態(tài)變異體的核苷酸。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因包括MT1-MMP、前列腺素D2合酶和AMDP-3。在特別優(yōu)選實(shí)施方式中，所述基因?yàn)镸T1-MMP。本發(fā)明還提供了幾種有用的非人類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的實(shí)施方式，例如作為AMD和其他視網(wǎng)膜變性狀態(tài)的模型。優(yōu)選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選嚙齒動(dòng)物，最優(yōu)選小鼠。在一個(gè)實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物包括分離的核苷酸構(gòu)建體，該構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型過(guò)度表達(dá)吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因。所述吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因優(yōu)選為MT1-MMP、前列腺素D2合酶或AMDP-3。優(yōu)選轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型設(shè)計(jì)在特定細(xì)胞類型中過(guò)度表達(dá)吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物，該細(xì)胞類型包括選自光感受器、RPE細(xì)胞及米勒細(xì)胞的視網(wǎng)膜細(xì)胞類型；和包括內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、黑素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的脈絡(luò)膜細(xì)胞類型。在一些實(shí)施方式中，所述感興趣基因條件性過(guò)度表達(dá)。另一個(gè)優(yōu)選AMD/視網(wǎng)膜變性動(dòng)物模型的實(shí)施方式為非人類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，該動(dòng)物包括分離的核苷酸構(gòu)建體，該構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型表達(dá)吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因和/或蛋白質(zhì)的多態(tài)變異體。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述核苷酸和/或蛋白質(zhì)為MT1-MMP、前列腺素D2合酶或AMDP-3。所述多態(tài)變異體與正常對(duì)照人群相比，可以為發(fā)病率增加的患有AMD的人群。又一優(yōu)選實(shí)施方式為非人類多轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(polytransgenicanimal)，該動(dòng)物包括至少一個(gè)第一分離的核苷酸構(gòu)建體和至少一個(gè)第二分離的核苷酸構(gòu)建體，所述第一構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型表達(dá)與AMD發(fā)病率增加相關(guān)的第一基因的多態(tài)變異體，并且所述第二構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型表達(dá)與AMD發(fā)病率增加相關(guān)或者與RPE吞噬作用相關(guān)的第二基因的多態(tài)變異體。在多轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述第一基因?yàn)镸T1-MMP，并且所述第二基因選自ABCR、載脂蛋白E(apolipoproteinE)、C-C趨化因子受體-2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、海米生丁/FIBL-6、錳超氧化歧化酶(manganesesuperoxidedismutase)、C-C趨化因子配體/單核細(xì)胞趨化蛋白1和對(duì)氧磷酶(paraoxonase)。在其他多轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的優(yōu)選具體施方式中，所述第一基因?yàn)镸T1-MMP，并且所述第二基因?yàn)橥淌勺饔孟嚓P(guān)或AMDP相關(guān)基因選自人未知PHG-1、前列腺素D2合酶、髓磷脂堿蛋白、人未知PHG-4、人未知PHG-5、人花生樣2/分隔蛋白4、毛狀蛋白樣1、叢生蛋白、酪蛋白激酶1ε、鐵蛋白重多肽1、metargidin、人未知PHG-13、視黃醛結(jié)合蛋白1、肌動(dòng)蛋白γ1、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白和人未知AMDP-3。本發(fā)明特別優(yōu)選實(shí)施方式中的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為小鼠，小鼠提供相對(duì)較短的壽命的優(yōu)勢(shì)，使它們比其他長(zhǎng)壽的動(dòng)物模型如猴更適于用于研究年齡相關(guān)疾病。再一方面，本發(fā)明提供了編碼先前未表征基因產(chǎn)物的分離的核苷酸，這里表示為吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白。編碼所述蛋白的核苷酸包括包含SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17的核苷酸序列。本發(fā)明還提供了包括大量分離的寡聚核苷酸序列的基因陣列，所述序列位于自然人AMD相關(guān)和/或吞噬作用相關(guān)基因的內(nèi)含子序列、外顯子序列或者啟動(dòng)子序列中。通過(guò)陣列中存在的所述基因通過(guò)寡聚核苷酸序列編碼cDNA，該cDNA包括這里示于SEQIDNO1-SEQIDNO17和SEQIDNO62-SEQIDNO69的核苷酸序列。在基因陣列的優(yōu)選實(shí)施方式中，至少一個(gè)基因是MT1-MMP，并且所述寡聚核苷酸序列包括P259P或D273N多態(tài)變異體的MT1-MMP編碼序列。所述MT1-MMP的變異體這里表現(xiàn)出相對(duì)于它們?cè)谡?duì)照受試者人群中的發(fā)生率而言，在患有AMD以及其他黃斑變性狀態(tài)的人群中它們的發(fā)生率增加。所述陣列還包括至少一個(gè)寡聚核苷酸序列，該序列包括除MT1-MMP外的一個(gè)或多個(gè)AMD相關(guān)基因的至少一個(gè)多態(tài)變異體。所述多態(tài)突變體序列可以包括ABCR(D217N；G1961E)、錳超氧化歧化酶(V47A)、載脂蛋白E(C130、R176C和C130R、R176)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(A25T)和對(duì)氧磷酶(Q192R、L54M)。本發(fā)明所述基因陣列用于例如從受試者中篩選DNA樣品，以檢測(cè)受試者DNA中大量AMDP相關(guān)和/或吞噬作用相關(guān)基因多態(tài)變異體的分布。與AMD多基因(綜合疾病)病因?qū)W一致，仔細(xì)考慮受試者DNA中屬于AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因特異性多肽變異體的結(jié)合分布的信息，能夠用于預(yù)測(cè)受試者處在即將發(fā)展成諸如AMD的視網(wǎng)膜紊亂危險(xiǎn)中的可能性，大于缺乏所述AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因的特異性多肽變異體結(jié)合的受試者。本發(fā)明所述特制的AMD和相關(guān)疾病的基因陣列，能夠提供方便且相對(duì)價(jià)廉的測(cè)試已知與AMD和相關(guān)疾病相關(guān)的大量多態(tài)變異體的方法。本發(fā)明的所述目的和其他目的在下列說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例里更加詳細(xì)地提出，意在詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明但并不用于限制本發(fā)明的范圍。附圖構(gòu)成本發(fā)明說(shuō)明書(shū)的一部分，還包括本發(fā)明特定方面的說(shuō)明。通過(guò)參考下列一幅或者多幅附圖，結(jié)合本發(fā)明實(shí)施方式的詳細(xì)描述可以更好地理解本發(fā)明。圖1為顯示兩份CHANGE陣列組(panel)的照片，每一組包括96個(gè)基因(點(diǎn))根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式用“+”和“-”探針(探針1和探針2)雜交；與探針1雜交和與探針2雜交相比，向上和向下的箭頭分別表示基因表達(dá)的增加或減少；圖2(上面的組)表示培養(yǎng)的RPE細(xì)胞桿體外節(jié)(rodoutersegments，ROS)吞噬作用的活性測(cè)定機(jī)理示意圖；下面的組表示根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式輸送ROS后，活BPEI-1RPE細(xì)胞進(jìn)行吞噬作用的黑白照片；當(dāng)通過(guò)熒光顯微鏡觀察時(shí)，RPE細(xì)胞中的溶酶體因硫酰羅丹明(sulforhodamine，SR)染色呈紅色并且異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)染色的ROS呈綠色；連續(xù)吞噬作用階段過(guò)程中，ROS結(jié)合在細(xì)胞表面，然后被RPE細(xì)胞攝入，第一吞噬體(phagosome)及然后被溶酶體融合的吞噬溶酶體(phagolysosome)(通過(guò)桔黃色熒光區(qū)分)；圖3為顯示根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式在輸送FTIS-ROS后，在指示的時(shí)間點(diǎn)觀察大規(guī)模培養(yǎng)活BPEI-1RPE細(xì)胞的ROS吞噬作用不同時(shí)期的系列照片；靠上的四組顯示了ROS在輸送最初的9-10個(gè)小時(shí)大量結(jié)合到細(xì)胞表面；輸入ROS后開(kāi)始大約的11個(gè)小時(shí)，靠下的四組顯示了ROS的攝入和吞噬溶酶體的形成同步；圖4為顯示根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式通過(guò)CHANGE發(fā)現(xiàn)的RPE細(xì)胞表達(dá)的16個(gè)吞噬作用相關(guān)基因(“吞噬基因(phagogene)”)的mRNA表達(dá)概況的曲線圖；體外ROS吞噬作用過(guò)程中選擇時(shí)間點(diǎn)上RPE細(xì)胞中吞噬基因表達(dá)水平的波動(dòng)；參看下文表1中提供了吞噬基因(PHG-1-16)的鑒定；圖5為顯示根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式，用于劃分人捐獻(xiàn)眼視網(wǎng)膜中AMD相關(guān)變化的分級(jí)系統(tǒng)的三張照片；等級(jí)顯示0-+1，最小限度的布魯赫膜增厚；+2-+3，多重小到中等大小的脈絡(luò)膜小疣，伴隨布魯赫膜增厚；+3-+4，大量合生脈絡(luò)膜小疣；圖6為ROS輸送后4小時(shí)和13小時(shí)，培養(yǎng)的RPE細(xì)胞吞噬作用過(guò)程中，表示MT1-MMP和肌動(dòng)蛋白mRNA表達(dá)的兩個(gè)RNA印跡和曲線圖；可見(jiàn)在4小時(shí)時(shí)表達(dá)下降，在13小時(shí)時(shí)表達(dá)上升，結(jié)果通過(guò)CHANGE得到證實(shí)；每一泳道RNA的存在量通過(guò)肌動(dòng)蛋白的雜交估計(jì)，用于MT1-MMP雜交信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)化；圖7為顯示根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，正常大鼠視網(wǎng)膜MT1-MMP的mRNA表達(dá)的波動(dòng)(晝夜)模式的曲線圖；MT1-MMP表達(dá)的最高水平出現(xiàn)在上午六點(diǎn)，在體內(nèi)光感受器(OS)脫落和吞噬作用最大的時(shí)間前的約1-2小時(shí)；圖8為顯示根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，用抗MT1-MMP抗體免疫染色的八張?jiān)谝惶觳煌瑫r(shí)間固定的正常大鼠視網(wǎng)膜免疫熒光染色的顯微照片(相差和熒光)；在OS和RPE中存在的MT1-MMP蛋白免疫熒光水平可見(jiàn)晝夜差異，上午六點(diǎn)觀察到最高的信號(hào)水平，上午十點(diǎn)稍低以及晚上十點(diǎn)沒(méi)有信號(hào)，MT1-MMP的mRNA表達(dá)水平的連續(xù)晝夜模式見(jiàn)圖7；圖9為用抗MT1-MMP抗體染色的人視網(wǎng)膜切片的熒光顯微照片，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，顯示了MT1-MMP蛋白在桿和錐光感受器OS中以及在RPE細(xì)胞內(nèi)吞噬體中的位置；圖10(A-C)為三張熒光顯微照片，顯示了根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式，抗MT1-MMP抗體在培養(yǎng)的RPE細(xì)胞的ROS吞噬作用方面的效果；未與抗體孵育的對(duì)照細(xì)胞(B)的細(xì)胞質(zhì)中以及與不相關(guān)(X-抑制蛋白(X-arrestin))抗體孵育的細(xì)胞(C)中明顯攝入輸送的ROS(熒光)，而ROS結(jié)合和吞噬作用沒(méi)有在輸送ROS前與抗MT1-MMP抗體孵育的細(xì)胞中發(fā)生(A)；圖11(A-D)為四張正常大鼠視網(wǎng)膜的蘇木精曙紅染色(H&Estained)石蠟切片的顯微照片，顯示了在外層視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)上視網(wǎng)膜下注射抗MT1-MMP抗體的效果；在抗MT1-MMP抗體注射的左眼OS中觀察到明顯延長(zhǎng)并且OS正常定向、連續(xù)抑制OS吞噬作用(A、B)；相反，在同一動(dòng)物未注射的右眼(O.D.)視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)正常(C)；視網(wǎng)膜下注射不相關(guān)(X-抑制蛋白(X-arrestin))抗體沒(méi)有效果(D)；圖12展示了患有AMD受試者(A)相對(duì)于正常對(duì)照受試者(N)在RPE/脈絡(luò)膜以及視網(wǎng)膜中MT1-MMP的mRNA表達(dá)水平的RNA印跡分析；A可見(jiàn)患病的視網(wǎng)膜中MT1-MMP的mRNA水平增加5.5倍，該受試者RPE/脈絡(luò)膜中伴隨增加1.2倍；RNA印記雜交信號(hào)關(guān)于每一泳道RNA的存在量，使用肌動(dòng)蛋白雜交作為參考標(biāo)準(zhǔn)化；圖13為顯示在患有AMD受試者視網(wǎng)膜中，MT1-MMP的mRNA水平與AMD相關(guān)病理學(xué)嚴(yán)重程度的增加(0-+4級(jí)變化)正相關(guān)；圖14顯示了包括人MT1-MMP外顯子5的285堿基對(duì)PCR產(chǎn)物的核苷酸序列；密碼子259和密碼子273的位置加了下劃線；顯示AMD和黃斑變性病人中發(fā)現(xiàn)的多態(tài)性P259P和D273N的堿基變化表示為黑體；圖15為顯示在出生后7天視網(wǎng)膜下注射抗MT1-MMP抗體、30天齡固定的RCS大鼠中遺傳性視網(wǎng)膜變性延遲的兩張顯微照片；與對(duì)比的同一動(dòng)物的未注射對(duì)照眼(B)中的中部中央?yún)^(qū)域相比，在注射眼(A)的視網(wǎng)膜外核層中保留更大數(shù)目的光感受器核(大約2倍)證明視網(wǎng)膜變性延遲。具體實(shí)施例方式基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了相關(guān)AMD和/或RPE細(xì)胞吞噬作用的新基因、檢測(cè)和治療AMD和其它黃斑變性狀態(tài)的方法和組合物，以及基于吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的、尤其是用于測(cè)試AMD的治療化合物和治療方案的有用動(dòng)物模型。下面結(jié)合附圖詳細(xì)描述適合所述組合物和方法優(yōu)選實(shí)施方式。雖然如此，從說(shuō)明書(shū)所述實(shí)施方式，基于下面提供的描述可以達(dá)到或者實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的其它方面。生物學(xué)方法這里描述關(guān)于常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)的方法。所述技術(shù)本領(lǐng)域普遍公知，在方法學(xué)論著例如MolecularCloningALaboratoryMannual，2nded.，vol.1-3ed.Sambrook等人，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.，1989；以及CurrentProtocolsinMolecularBiology，ed.Ausubel等人，GreenePublishingandWiley-Interscience，NewYork，1992(周期性更新)中的到詳細(xì)描述。例如在Innis等人，PCRProtocolsAGuidetoMethodsandApplications，AcademicPressSanDiego，1990中描述了使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction，PCR)的各種技術(shù)。例如在BeaucageandCarruthers，Tetra.Letts.221859-1862，1981，和Matteucci等人，J.Am.Chem._Soc.1033185，1981中討論了核苷酸的化學(xué)合成方法。核苷酸的化學(xué)合成可以在例如商業(yè)自動(dòng)寡聚核苷酸合成器上完成。免疫方法(例如，抗原特異性抗體的制備、免疫沉淀和免疫印跡)在例如CurrentProtocolsinImmunology，ed.Coligan等人，JohnWiley&Sons，NewYork，1991；以及MethodsoflmmunologicalAnalysis，ed.Masseyeff等人，JohnWiley&Sons，NewYork，1992中得到描述。本發(fā)明還可以選用基因轉(zhuǎn)移和基因治療的常規(guī)方法。參見(jiàn)例如，GeneTherapyPrinciplesandApplications，ed.T.Blackenstein，SpringerVerlag，1999；GeneTherapyProtocols(MethodsinMolecularMedicine)，ed.P.D.Robbins，HumanaPress，1997；以及Retro-vectorsforHumanGeneTherapy，ed.C.P.Hodgson，SpringerVerlag，1996。通過(guò)CHANGE分離的吞噬作用相關(guān)基因鑒定有關(guān)RPE細(xì)胞OS中吞噬作用的基因完成引導(dǎo)本發(fā)明的研究，當(dāng)受到干擾時(shí)，可以導(dǎo)致RPE中的應(yīng)激和機(jī)能障礙。所述應(yīng)激能導(dǎo)致一種或多種不期望出現(xiàn)的與黃斑、視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜疾病相關(guān)的變化，例如脂褐素增加積聚、脈絡(luò)膜小疣形成或新生血管膜形成。這里描述的所述基因發(fā)現(xiàn)基于RPE吞噬作用中的機(jī)能障礙是導(dǎo)致諸如AMD相關(guān)變化的重要因素的前提。RPE細(xì)胞完成維持光感受器內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要功能。所述必需的任務(wù)包括尤其是每日吞噬和消化OS膜的過(guò)程，OS膜得以更新并每日從光感受器OS末端脫落(Young和Bok，1969)。正如下面進(jìn)一步所描述，所述吞噬過(guò)程包括結(jié)合、攝入和消化OS膜的步驟。在正常環(huán)境中，RPE細(xì)胞為不分裂的細(xì)胞。因此貫穿每個(gè)個(gè)體一生時(shí)間，每日OS吞噬作用的過(guò)程不僅代表了在這些細(xì)胞上的巨大新陳代謝載荷，還代表了促成在這些細(xì)胞內(nèi)未消化物質(zhì)的積聚，特別是脂褐素、細(xì)胞內(nèi)廢物復(fù)合汞齊包括有毒光感受器衍生的物質(zhì)例如A2E。因此，一方面本發(fā)明提供了先前未知與RPE細(xì)胞吞噬作用過(guò)程功能上相關(guān)的核苷酸和蛋白序列。在本發(fā)明之前沒(méi)有系統(tǒng)尋找過(guò)RPE細(xì)胞OS吞噬作用機(jī)理有關(guān)基因，這里還命名了“吞噬作用相關(guān)基因”或“吞噬基因”縮寫(xiě)為“PHG”。與AMD為多基因疾病的認(rèn)識(shí)一致，并且RPE吞噬作用為多步細(xì)胞內(nèi)關(guān)于許多不同基因產(chǎn)物的必需過(guò)程，本發(fā)明的發(fā)明人基于對(duì)細(xì)微變化的認(rèn)識(shí)，找到確定吞噬作用相關(guān)基因，例如一個(gè)或多個(gè)吞噬作用相關(guān)基因的DNA序列中多態(tài)性，或者在吞噬作用相關(guān)基因中的多態(tài)性與其它基因多態(tài)性的結(jié)合，可能共同作用產(chǎn)生AMD中能觀察到的表現(xiàn)型。為了通過(guò)差異表達(dá)得到感興趣基因，如下面實(shí)施例進(jìn)一步描述的，開(kāi)發(fā)常規(guī)表達(dá)概略策略，稱為基因表達(dá)的比較雜交分析(comparativeHybridizationAnalysisofGeneExpression，CHANGE)。所述CHANGE陣列包括在RPE中表達(dá)的大約10000個(gè)基因，每組陣列排列包括96個(gè)cDNA(見(jiàn)圖1)。為了得到吞噬基因，RPE表達(dá)基因的CHANGE陣列用成對(duì)“+/-OS”雜交探針篩選。所述“+/-OS”雜交探針用體外OS吞噬作用過(guò)程中表達(dá)在吞噬的RPE細(xì)胞系中的總RNA(+OS探針)和沒(méi)有輸送OS的對(duì)照細(xì)胞中的總RNA制成(-OS探針)?；贠S吞噬作用過(guò)程中表現(xiàn)出的表達(dá)變化(即增加或減少)，如圖1箭頭所示，通過(guò)與+OS探針比較-OS探針雜交的雜交信號(hào)的變化證實(shí)，挑選陣列中的基因進(jìn)行進(jìn)一步分析。從大約10000個(gè)基因中篩選，基于通過(guò)CHANGE檢測(cè)的基因表達(dá)變化鑒定約60個(gè)假定吞噬作用相關(guān)基因。從這60個(gè)基因中，隨機(jī)選出16個(gè)表現(xiàn)吞噬刺激(即用+/-OS探針篩選)的雜交密度變化非常明顯的基因進(jìn)一步研究，證實(shí)它們與RPE吞噬作用功能相關(guān)。表1提供了上述隨后證實(shí)的與RPE細(xì)胞OS吞噬作用相關(guān)的吞噬基因的列表。所述基因在下面的表2中進(jìn)一步描述。還見(jiàn)圖4顯示了體外RPE細(xì)胞OS吞噬作用過(guò)程中所述基因的mRNA表達(dá)概況。表1通過(guò)CHANGE分離的人吞噬作用相關(guān)基因通過(guò)CHANGE分離的AMDP相關(guān)基因另一方面，本發(fā)明提供了先前未知與AMD相關(guān)基因的核苷酸和蛋白序列。為了獲得AMD相關(guān)基因，如上所述使用其它的“+/-”探針對(duì)反復(fù)篩選大約10000個(gè)RPE表達(dá)基因的CHANGE陣列。所述用于鑒定AMD相關(guān)基因的“+/-”探針，用取自患有AMD及未患該病的人捐獻(xiàn)的眼RPE/脈絡(luò)膜以及年齡吻合的AMD猴模型的正常及患病的眼的總RNA制成?；贏MD中相對(duì)于高齡正常對(duì)照眼中表現(xiàn)出的差異表達(dá)(即增加或減少)，選擇陣列中的基因做進(jìn)一步分析?；谕ㄟ^(guò)CHANGE測(cè)試的基因表達(dá)改變的標(biāo)準(zhǔn)，鑒定出大約200個(gè)AMD相關(guān)基因。為了鑒定AMD相關(guān)吞噬基因(“AMDP基因”)，對(duì)比從上述兩次CHANGE篩選的數(shù)據(jù)，以鑒定在RPE細(xì)胞OS吞噬作用和AMD中都差異表達(dá)的RPE基因子集。如上所述，吞噬作用CHANGE篩選產(chǎn)生了大約60個(gè)吞噬基因，并且推定AMD相關(guān)的基因數(shù)目達(dá)約200個(gè)。初步對(duì)比兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)，得到了6個(gè)基因的子集在吞噬作用和AMD中都顯示出表達(dá)變化(表2)。所述基因這里命名為“AMD相關(guān)吞噬基因”或“AMD/吞噬基因”縮寫(xiě)為“AMDP”。表2再上述列舉的基因中，CHANGE雜交分析顯示基因AMDP-1、AMDP-3和AMDP-6在AMD眼中的表達(dá)水平高于對(duì)照組，然而基因AMDP-2、AMDP-4和AMDP-5在AMD眼中的表達(dá)水平低于對(duì)照組。AMDP基因在后面實(shí)施例3中進(jìn)一步描述。編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的核算以及其多態(tài)變異體如上所述，本發(fā)明提供了關(guān)于通過(guò)差異克隆策略(CHANGE)——展示RPE吞噬作用和/或AMD中表達(dá)變化所發(fā)現(xiàn)的基因的核苷酸和氨基酸序列。一方面本發(fā)明提供了通過(guò)此策略分離的新純化的核苷酸(多核苷酸)。本發(fā)明先前未知的核苷酸包括這里鑒定為PHG-1(SEQIDNO1)、PHG-4(SEQIDNO4)、PHG-5(SEQIDNO5)、PHG-13(SEQIDNO12)和AMDP-3(SEQIDNO17)的核苷酸序列。所述核苷酸序列分別編碼具有這里鑒定為SEQIDNO71-SEQIDNO79、SEQIDNO82-SEQIDNO84、SEQIDNO85、SEQIDNO92-SEQIDNO98和SEQIDNO103-SEQIDNO121的氨基酸序列的多肽。本發(fā)明還包括先前未知的與RPE吞噬作用和/或AMD有關(guān)的特征核苷酸和多肽應(yīng)用。基于RPE吞噬作用過(guò)程中和/或AMD病人體內(nèi)的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)所述先前已經(jīng)表征的基因與吞噬作用和AMD的關(guān)系。后者的核苷酸組包括前列腺素D2合酶(SEQIDNO2)、髓磷脂堿蛋白(SEQIDNO3)、花生樣2/分隔蛋白4(SEQIDNO6)、毛狀蛋白樣1(SEQIDNO7)、叢生蛋白(SEQIDNO8)、酪蛋白激酶1ε(SEQIDNO9)、鐵蛋白重多肽1(SEQIDNO10)、metargidin(SEQIDNO11)、視黃醛結(jié)合蛋白1(SEQIDNO13)、肌動(dòng)蛋白γ1(SEQIDNO14)、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1(SEQIDNO15)、和SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白(SEQIDNO16)。本發(fā)明的核苷酸分子可以為RNA形式或DNA形式(例如cDNA、基因組DNA和合成DNA)。本發(fā)明優(yōu)選核苷酸分子為天然多核苷酸，這里所述天然核苷酸包括分別如SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO11、SEQIDNO12、SEQIDNO13、SEQIDNO14、SEQIDNO15、SEQIDNO16和SEQIDNO17所示的核苷酸序列。所述編碼天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的編碼序列可以與SEQIDNO1至SEQIDNO17所示的核苷酸序列一致。它們也可以為不同的編碼序列，由于遺傳密碼子的重復(fù)性或簡(jiǎn)并性，它們可以編碼與如SEQIDNO1至SEQIDNO17所示多核苷酸所編碼的同樣多肽。本發(fā)明范圍內(nèi)的其它核苷酸分子包括SEQIDNO1至SEQIDNO17所示序列的變異體，例如它們編碼的片段、類似物和這里描述的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的衍生物。所述衍生物可以是例如，自然發(fā)生的天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因等位基因的變異體、拼接變異體或非自然發(fā)生的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的變異體。所述變異體具有的核苷酸序列與對(duì)應(yīng)的天然SEQIDNO1至SEQIDNO17所示序列存在一個(gè)或多個(gè)堿基的差異。例如，所述變異體的核苷酸序列可以表征為天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的一個(gè)或多個(gè)核苷酸的缺失、添加或取代。在一些應(yīng)用中，變異體核苷酸分子編碼維持吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)功能活性的多肽。在另外的應(yīng)用中，變異體核苷酸分子編碼表征為吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因中的重要功能活性基因缺乏或減少的多肽。需要保留天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的功能活性的，優(yōu)選變異體核苷酸特征沉默或保守核苷酸變化。在其它應(yīng)用中，顯示出一個(gè)或幾個(gè)天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因功能活性的實(shí)質(zhì)變化的變異吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)多肽，可以通過(guò)進(jìn)行核苷酸取代產(chǎn)生，引起比被編碼多肽中小于保守變化的變化。所述核苷酸取代的實(shí)例為引起(a)多肽主鏈的結(jié)構(gòu)；(b)多肽的電荷或疏水性；(c)氨基酸側(cè)鏈體積的變化的取代。一般預(yù)期產(chǎn)生蛋白質(zhì)性質(zhì)的最大變化的核苷酸取代為密碼子的非保守變化?？赡軐?dǎo)致蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的較大變化的密碼子變化的實(shí)例包括引起(a)例如絲氨酸、蘇氨酸的親水性殘基，例如亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸或丙氨酸的疏水性殘基；(b)具有其它任意殘基的半胱氨酸或脯氨酸；(c)例如賴氨酸、精氨酸或組氨酸的具有帶正電側(cè)鏈的殘基，例如谷氨酸或天冬氨酸的具有帶負(fù)電側(cè)鏈的殘基；或者(d)例如酪氨酸具有大側(cè)鏈的殘基，例如甘氨酸的美歐側(cè)鏈的殘基的取代。本發(fā)明范圍內(nèi)自然發(fā)生天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因等位基因變異體為與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因至少具有75％(例如76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％)序列同源性的核苷酸，并且其編碼的多肽和具有天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因至少一種相同的功能活性。本發(fā)明范圍內(nèi)天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因同系物為分離自非人類物種的、與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因至少具有75％(例如76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％)序列同源性的核苷酸，并且其編碼的多肽和具有天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因至少一種相同的功能活性。自然發(fā)生的天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因等位基因變異體和天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因同系物可以使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)，通過(guò)篩選天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的天然功能活性(例如，明膠酶原A的激活、MT1-MMP的情況)分離。所述同系物和等位基因變異體的核苷酸序列可以通過(guò)常規(guī)DNA測(cè)序方法測(cè)定。可選地，公共或非專屬性(non-proprietary)核苷酸數(shù)據(jù)庫(kù)可以用于尋找鑒定其它具有與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因高百分率同源序列非的核苷酸分子。非自然發(fā)生的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的變異體為自然不發(fā)生、與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因至少具有75％(例如76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％)序列同源性的核苷酸。非天然自然發(fā)生的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)的核苷酸的實(shí)例為編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白片段的核苷酸、與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因雜交的核苷酸、或者在嚴(yán)格條件下與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因互補(bǔ)的核苷酸、與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因共有至少65％序列同源性的核苷酸、或與天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的互補(bǔ)的核苷酸以及編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因融合蛋白的核苷酸序列。本發(fā)明范圍內(nèi)編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因片段的核苷酸為分別編碼例如2、5、10、25、50、100、150、200、250、300或者更多吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白的氨基酸殘基的核苷酸。較短寡聚核苷酸(例如6、12、20、30、50、100、125、150或200的堿基長(zhǎng)度)編碼或雜交編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因片段的核苷酸，可以用作探針、啟動(dòng)子或反義分子。較長(zhǎng)的多核苷酸(例如300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000或者更多堿基例如4000、5000、6000、7000、8000和9000堿基)編碼或雜交編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因片段的核苷酸，當(dāng)希望調(diào)整吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的功能活性時(shí)，可以用于代替天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因。編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因片段的核苷酸可以通過(guò)酶消化(例如使用限制性酶)、化學(xué)降解吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因及其變異體的全長(zhǎng)序列制備。在嚴(yán)格條件下雜交如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸或者與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸互補(bǔ)的核苷酸也在本發(fā)明范圍內(nèi)。例如，所述核苷酸在低嚴(yán)格條件、中等嚴(yán)格條件或者高等嚴(yán)格條件下與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸雜交或者與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸互補(bǔ)。優(yōu)選所述核苷酸具有核苷酸序列與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸全部或者部分互補(bǔ)。其它本發(fā)明范圍內(nèi)的如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸的變種為與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸共有至少65％(例如65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％)序列同源性的核苷酸、或與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸互補(bǔ)的核苷酸。在嚴(yán)格條件下雜交的核苷酸，或者與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸共有至少65％序列同源性的核苷酸，或者與如SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示核苷酸互補(bǔ)的核苷酸可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的技術(shù)得到。編碼天然吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的融合蛋白的核苷酸分子，例如編碼如這里SEQIDNO1至SEQIDNO17所示核苷酸的核苷酸分子也在本發(fā)明范圍內(nèi)。所述核苷酸可以通過(guò)制備當(dāng)導(dǎo)入合適宿主時(shí)表達(dá)吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)的融合蛋白的構(gòu)建體(例如表達(dá)載體)制備。例如所述構(gòu)建體可以通過(guò)連接編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白(例如MT1-MMP)的第一多核苷酸，在閱讀框(frame)中融合編碼其它蛋白的第二多核苷酸制備，這樣構(gòu)建體在合適表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)產(chǎn)生融合蛋白。本發(fā)明包括如上所述編碼能與吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)多肽的核苷酸雜交的標(biāo)記的核苷酸探針。所述本發(fā)明的核苷酸分子允許本領(lǐng)域技術(shù)人員構(gòu)建核苷酸探針用于檢測(cè)生物材料中的本發(fā)明核苷酸序列。所述探針可以用于檢測(cè)吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的雜交。所述技術(shù)一般包括與本發(fā)明探針在適合核苷酸中互補(bǔ)序列與探針特定復(fù)性條件下，接觸和孵育得自病人或其它細(xì)胞來(lái)源樣品的核苷酸(例如mRNA分子)。孵育后，移除未復(fù)性的核苷酸，并且如果存在已與探針雜交的核苷酸，進(jìn)行檢測(cè)。所述檢測(cè)本發(fā)明核苷酸分子可以包括使用擴(kuò)增方法(例如PCR)擴(kuò)增特異性基因，然后用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)分析擴(kuò)增分子。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以繼續(xù)設(shè)計(jì)合適的引物。例如可以用商業(yè)提供軟件例如OLIGO4.06引物分析軟件(NationalBiosciences，PlymouthMinn)或者其它適合的程序設(shè)計(jì)引物，引物長(zhǎng)度大約為22至30個(gè)核苷酸，具有GC含量約50％或以上，并且與模板退火溫度約為60℃至72℃。這里所述的雜交和擴(kuò)增技術(shù)可以用于定量和定性方面檢測(cè)吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因表達(dá)。例如，可以從一種細(xì)胞類型或者組織中分離出已知表達(dá)吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的RNA，例如具有SEQIDNO1至SEQIDNO17所示核苷酸的基因，以及檢測(cè)應(yīng)用雜交(例如標(biāo)準(zhǔn)RNA印跡分析)或PCR技術(shù)這里作為參考。可以用到例如，檢測(cè)可能導(dǎo)致正常或異常選擇性剪接的轉(zhuǎn)錄子大小差異的技術(shù)。所述技術(shù)也可以用于定量檢測(cè)正常個(gè)體相對(duì)于表現(xiàn)出疾病癥狀的個(gè)體之間的全長(zhǎng)和/或選擇性剪接的轉(zhuǎn)錄子水平差異。所述引物和探針可以使用上述的原位方法，即直接在得自活組織檢查的病人組織、切除術(shù)或者眼庫(kù)的組織切片上(固定和/或冷凍)。本發(fā)明特別應(yīng)用的探針和引物在下面的實(shí)實(shí)例中進(jìn)一步描述。吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸的遺傳篩選另一方面本發(fā)明提供了檢測(cè)處在即將發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜疾病或變性狀態(tài)危險(xiǎn)中的受試者的方法。這里所用的“視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜疾病或變性狀態(tài)”包括但不限于下列任何眼視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜的狀態(tài)導(dǎo)致光感受器、RPE細(xì)胞或視網(wǎng)膜其他細(xì)胞類型損傷或死亡、或者包括但不限于內(nèi)皮細(xì)胞、黑素細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、單核細(xì)胞和肥大細(xì)胞的脈絡(luò)膜細(xì)胞類型損傷、死亡或異常增生。影響視網(wǎng)膜和/或脈絡(luò)膜的變性的條件包括年齡相關(guān)和其他黃斑病變，包括但不限于年齡相關(guān)黃斑變性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)、遺傳性和早期發(fā)病性黃斑變性(“家族性AMD”)例如斯塔加特氏病/眼底營(yíng)養(yǎng)不良、貝斯特病/卵黃狀變性、先天性彌漫性脈絡(luò)膜小疣/多英氏蜂窩狀視網(wǎng)膜營(yíng)養(yǎng)不良、范型營(yíng)養(yǎng)不良(patterndystrophies)、索斯比氏黃斑營(yíng)養(yǎng)不良、近中心凹毛細(xì)血管擴(kuò)張(juxtafovealtelangiectasia)、脈絡(luò)膜萎縮、顯性脈絡(luò)膜小疣(dominantdrusen)、晶體蛋白小疣(crystallindrusen)、環(huán)狀黃斑營(yíng)養(yǎng)不良(annularmaculardystrophy)、隱性脈絡(luò)膜新生血管膜(occultchorodialneovascularmembrane)、無(wú)脈絡(luò)膜(choroideremia)、特發(fā)性牛眼樣黃斑病變(idiopathicbull′s-eyemaculopathies)、回旋形萎縮(gyrateatrophy)以及各種類型的遺傳性視網(wǎng)膜色素變性情況。其他疾病或視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜變性情況包括中毒性視網(wǎng)膜病(toxicmaculopathies)，例如，如硫酸羥氯喹制劑中毒(Plaqueniltoxicity)的藥物引起的黃斑變性，包括視網(wǎng)膜剝離(retinaldetachment)、光視網(wǎng)膜病變(photicretinaopathies)的視網(wǎng)膜紊亂，由外科手術(shù)引起的視網(wǎng)膜病，中毒性視網(wǎng)膜病，妊娠性視網(wǎng)膜病(retinopathyofpregnancy)，諸如巨細(xì)胞病毒(CMV)或艾滋病相關(guān)的人類免疫缺陷病毒(HIV)視網(wǎng)膜病的嚴(yán)重視網(wǎng)膜病，色素層炎，由于靜脈或者動(dòng)脈閉塞或者其他血管紊亂導(dǎo)致的局部缺血視網(wǎng)膜病，由于眼外傷或穿透性損傷引起的視網(wǎng)膜病，外周玻璃體視網(wǎng)膜病以及諸如視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、脈絡(luò)膜黑素瘤(choriodalmelanoma)影響眼的癌癥。所述檢測(cè)危險(xiǎn)性的方法包括篩選受試者的核苷酸吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因多態(tài)的存在，其中，所述存在多態(tài)表明與沒(méi)有多態(tài)性的對(duì)照受試者相比，具有多態(tài)的受試者處在即將發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜疾病或變性紊亂的較大危險(xiǎn)中。這里用的“正?！被颉耙吧汀焙塑账崾侵甘茉囌叩腄NA中特定位置的堿基位于已知普通人群中該主要堿基的特定位置。“多態(tài)”、“多態(tài)變異體”或“多態(tài)堿基或核苷酸”為天然產(chǎn)生的與普通人群中“野生型”代表的堿基相比以較低頻率發(fā)生的堿基變化。這里所用“多態(tài)”可以包括稱為“變異”的堿基變化。本發(fā)明吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸，其本身或者與其他一個(gè)或多個(gè)核苷酸結(jié)合可以用于雜交、擴(kuò)增和篩選分析生物樣品以檢測(cè)包括點(diǎn)突變、插入、缺失和染色體重排的異常。遺傳篩選方法在分子藥物領(lǐng)域中公知?？梢允褂美?，用基因組DNA、直接測(cè)序法、單鏈構(gòu)象多態(tài)分析、異源雙鏈分析(heteroduplex、analysis)、變性梯度凝膠電泳法、化學(xué)錯(cuò)配裂解法和寡聚核苷酸雜交(包括在基因陣列中與寡聚核苷酸雜交)。一般而言，基因組DNA樣品得自受試者，例如得自受試者的外周血、或得自從捐獻(xiàn)的組織例如眼庫(kù)中制備的生物樣品。所述用于擴(kuò)增特異性基因序列的DNA、例如感興趣的特定外顯子、內(nèi)含子或啟動(dòng)子序列。為了檢測(cè)受試者DNA中多態(tài)的存在，可以應(yīng)用單鏈構(gòu)象多態(tài)分析(singlestrandconformationpolymorphism，SSCP)、異源雙鏈體分子以及它們的自動(dòng)模式(automatedversion)，然后DNA序列分析檢測(cè)特定堿基變化。所述方法還可以用于證實(shí)報(bào)道的多態(tài)，例如人類基因組單鏈核苷酸多態(tài)數(shù)據(jù)庫(kù)(SingleNucleotidePolymorphism)中可用的多態(tài)。本發(fā)明提供了篩選受試者RPE吞噬作用相關(guān)和/或AMD相關(guān)多態(tài)突變體基因的方法。在一個(gè)優(yōu)選的方法中，基于感興趣基因核苷酸序列和該基因中用于擴(kuò)增的一個(gè)或多個(gè)外顯子、內(nèi)含子或啟動(dòng)子序列，設(shè)計(jì)了正義和反義的引物(擴(kuò)增引物)對(duì)。一個(gè)優(yōu)選的用于篩選患有AMD和其他黃斑疾病的病人的變異體和多態(tài)基因的組，包括先前未知這里表現(xiàn)與吞噬作用相關(guān)和/或AMD相關(guān)的基因、這里鑒定為SEQIDNO1、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO12和SEQIDNO17所示的cDNA序列。這里還公開(kāi)了與吞噬作用相關(guān)和/或AMD相關(guān)的其他優(yōu)選的基因，具有這里如SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO11、SEQIDNO13、SEQIDNO14、SEQIDNO15和SEQIDNO16所示的核苷酸(cDNA)序列(見(jiàn)上文表1和表2)。正如這里所示的，典型的與AMD和吞噬作用有關(guān)的基因?yàn)镸T1-MMP(SEQIDNO15)。這里公開(kāi)的任何適合于擴(kuò)增吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的外顯子、內(nèi)含子或啟動(dòng)子序列的擴(kuò)增引物可以由分子生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員設(shè)計(jì)，用于篩選變異和/或多態(tài)DNA樣品。作為例子，適于擴(kuò)增人MT1-MMP基因的外顯子1-10、內(nèi)含子1-9和啟動(dòng)子區(qū)域的特異擴(kuò)增引物對(duì)在后面表3中公開(kāi)。本發(fā)明所述核苷酸還可以用于陣列中多重基因的篩選。任何得自本發(fā)明核苷酸分子的寡聚核苷酸或者較長(zhǎng)片段可以用作基因陣列比如微點(diǎn)陣(microarray)的靶標(biāo)。所述陣列中的基因靶標(biāo)可以包括例如得自任何這里公開(kāi)的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因(即SEQIDNO1至SEQIDNO17)的組合核苷酸，以及任何先前描述的核苷酸，例如先前與RPE吞噬作用和/或AMD相關(guān)的核苷酸，包括但不限于得自序列這里鑒定為SEQIDNO62至SEQIDNO69的核苷酸。在所述陣列中包括的寡聚核苷酸序列可以得自位于感興趣自然人類基因的內(nèi)含子、外顯子或啟動(dòng)子序列之內(nèi)的序列。優(yōu)選所述陣列包括含有感興趣基因的所有已知多態(tài)變異體的寡聚核苷酸序列。更優(yōu)選適合于例如篩選患有諸如AMD的眼病病人的DNA的常規(guī)陣列，包括所有已知的、相對(duì)于正常受試者對(duì)照人群，在患有AMD以及其他相關(guān)紊亂的病人人群中呈示特異性多態(tài)變異體表現(xiàn)發(fā)生率增加的多態(tài)變異體。參見(jiàn)下文表5列舉了先前報(bào)道的與AMD有關(guān)的多態(tài)或變異的基因。因此本發(fā)明用作AMD篩選適合于包括在常規(guī)陣列中的基因以及在AMD中(表示在括號(hào)中)顯示發(fā)生率上升的相關(guān)多態(tài)變異體，可以包括但不限于MT1-MMP(P259P；D273N)、ABCR(D217N；G1961E)、錳超氧化歧化酶(V47A)、載脂蛋白E(C130、R176C和C130R、R176)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(A25T)和對(duì)氧磷酶(Q192R、L54M)。本發(fā)明所述基因陣列可以用于例如同時(shí)監(jiān)測(cè)大量基因的表達(dá)水平，以及鑒定大量基因中的遺傳變異體、突變和多態(tài)。所述得自病人DNA樣品與陣列的雜交分析信息可以被用于例如檢測(cè)基因功能、理解紊亂的遺傳基礎(chǔ)、診斷或預(yù)測(cè)疾病發(fā)展的可能性，或者開(kāi)發(fā)和檢測(cè)治療試劑的活性。所述基因陣列包括微點(diǎn)陣的制備、使用以及分析為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知。參見(jiàn)例如Brennan，T.M.等人(1995)US5474796；Schena，等人(1996)Proc.Nail.Aca.Sci.9310614-10619；Baldeschweiler等人(1995)PCT申請(qǐng)WO95/251116；Shalon，D.等人(1995)PCT申請(qǐng)WO95/35505；Heller，R._A.等人(1997)Proc.Nail.Acad.Sci.942150-2155；以及Hetler，M.J.等人(1997)US5605662和Cronin，M.等人(2003)US6632605。調(diào)整吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的表達(dá)或活性的試劑另一方面，本發(fā)明提供了調(diào)整吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的mRNA或蛋白表達(dá)水平的試劑。優(yōu)選的作為下游調(diào)控靶標(biāo)的基因/蛋白質(zhì)為在AMD和相關(guān)紊亂中出現(xiàn)表達(dá)增加的基因/蛋白質(zhì)如這里所證明包括前列腺素D2合酶(prostaglandinD2synthase，PD2S)(對(duì)應(yīng)的核苷酸和氨基酸序列SEQIDNO2和SEQIDNO80)、MT1-MMP(SEQIDNO15和SEQIDNO101)以及AMDP-3(SEQIDNO17和SEQIDNO103-SEQIDNO121)。優(yōu)選的作為上游調(diào)控靶標(biāo)的基因/蛋白質(zhì)為在AMD和相關(guān)紊亂中出現(xiàn)表達(dá)增加的基因/蛋白質(zhì)如這里所證明包括SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白(SEQIDNO16和SEQIDNO102)、酪蛋白激酶1ε(SEQIDNO9和SEQIDNO89)以及鐵蛋白重多肽1(SEQIDNO10和SEQIDNO101)。所述AMDP相關(guān)和/或吞噬作用相關(guān)mRNA或蛋白質(zhì)可以為天然物即“野生型”例如，天然MT1-MMP。在另一實(shí)施方式中，靶向AMD相關(guān)和/或吞噬作用相關(guān)基因多態(tài)變異體，例如導(dǎo)致表達(dá)的mRNA或蛋白功能變化的變異體。當(dāng)野生型完整mRNA或蛋白允許表達(dá)時(shí)，所述變化的mRNA或蛋白受抑制。所述用于下游調(diào)控表達(dá)的抑制劑可以包括例如反義RNA分子、核酶、小干擾RNA(RNAi)分子和三股螺旋結(jié)構(gòu)。所示試劑的優(yōu)選實(shí)施方式是直接對(duì)抗PD2S(SEQIDNO2)、MT1-MMP(SEQIDNO15)和AMDP-3(SEQIDNO17)或者它們的變異體。所述抑制劑還可以包括選擇性結(jié)合如PD2S、MT1-MMP和AMDP-3的過(guò)度表達(dá)的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)的蛋白抗體分子。本發(fā)明中的反義核苷酸分子在細(xì)胞環(huán)境中與細(xì)胞內(nèi)編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白的mRNA和/或基因組DNA特異性雜交(例如結(jié)合)，所述雜交某種程度上抑制吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白的表達(dá)，例如，抑制轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。所述結(jié)合可以是常規(guī)的堿基對(duì)互補(bǔ)，或者例如通過(guò)在雙螺旋大溝中的特異性相互作用結(jié)合DNA雙鏈體的情況。設(shè)計(jì)反義分子的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知。構(gòu)建低聚體用于反義治療的一般方法參考例如VanderKrol等人(1988)Bioteclmlques6958-976；Stein等人(1988)CancerRes482659-2668以及Naraymaan，R.和AKtar，S.(1996)Antisensetherapy.Curt.Opin.Oncol.8(6)509-15。作為非限制性實(shí)施例，反義寡聚核苷酸可以靶向雜交下列區(qū)域mRNA帽子區(qū)域；翻譯起始位點(diǎn)、翻譯終止位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)、多腺苷酸化信號(hào)、3’非翻譯區(qū)、5’非翻譯區(qū)、5’編碼區(qū)、中間編碼區(qū)和3’編碼區(qū)。反義構(gòu)建體例如可以被表達(dá)質(zhì)粒輸送，在細(xì)胞內(nèi)被轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生RNA，該RNA互補(bǔ)于細(xì)胞內(nèi)編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的mRNA的至少一個(gè)單一部分?？蛇x地，所述反義構(gòu)建體可以以寡聚核苷酸探針的形式離體產(chǎn)生，當(dāng)被導(dǎo)入到吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因表達(dá)的細(xì)胞中時(shí)，通過(guò)與編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的mRNA和/或基因組序列雜交，引起對(duì)應(yīng)基因的選擇性表達(dá)抑制。所述寡聚核苷酸探針優(yōu)選修飾的寡聚核苷酸，可以抵御內(nèi)源核酸酶例如外切核酸酶和/或內(nèi)切核酸酶，因此在體內(nèi)更穩(wěn)定。用作反義寡聚核苷酸的典型的核苷酸分子為氨基磷酸酯(phosphoramidate)、硫基磷酸酯(phosphothioate)甲基膦酸酯DNA類似物(見(jiàn)例如US5176996、US5264564和US5256775)。優(yōu)選關(guān)于反義DNA，得自翻譯起始位點(diǎn)的寡聚脫氧核苷酸，例如在吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的-10到+10區(qū)域編碼核苷酸序列。反義方法包括設(shè)計(jì)與吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)mRNA互補(bǔ)的寡聚核苷酸(DNA或者RNA)。所述寡聚核苷酸將結(jié)合吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的mRNA轉(zhuǎn)錄子并阻止翻譯。絕對(duì)的互補(bǔ)雖然最優(yōu)選但是不必要。所述雜交的能力將取決于互補(bǔ)的程度和反義核苷酸的長(zhǎng)度。通常雜交的核苷酸越長(zhǎng)，與mRNA錯(cuò)配的堿基越多，可能包括并仍然形成穩(wěn)定的雙鏈(或者三鏈，視情況而定)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定雜交復(fù)合物的解鏈溫度(meltingpoint)，確定錯(cuò)配的容忍程度。與5’末端信息互補(bǔ)的寡聚核苷酸，例如上至5’非翻譯序列以及包括AUG起始密碼子，一般起作用最有效抑制翻譯。然而，與mRNA3’非翻譯序列互補(bǔ)的序列也已表現(xiàn)出有效抑制mRNA翻譯。(參見(jiàn)例如Wagner，R.(1994)Nature372333)因此，寡聚核苷酸無(wú)論與吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的5’還是3’非翻譯非編碼區(qū)域互補(bǔ)都能用于反義方法阻止吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的內(nèi)生mRNA翻譯。與mRNA的5’非翻譯區(qū)互補(bǔ)的寡聚核苷酸應(yīng)當(dāng)包括與AUG起始密碼子互補(bǔ)。與編碼區(qū)域的mRNA互補(bǔ)的反義寡聚核苷酸為較低效的抑制翻譯的抑制子，但是也可以依照本發(fā)明應(yīng)用。不管設(shè)計(jì)與吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的mRNA的5’、3’或者編碼區(qū)域雜交，反義核苷酸都應(yīng)當(dāng)至少為六個(gè)核苷酸長(zhǎng)度，并且優(yōu)選短于100個(gè)核苷酸，更優(yōu)選低于約50個(gè)、25個(gè)、17個(gè)或10個(gè)核苷酸長(zhǎng)度。不考慮靶序列的選擇，體外研究?jī)?yōu)選首先達(dá)到反義寡聚核苷酸定量抑制基因表達(dá)的能力。所述研究更優(yōu)選使用對(duì)照區(qū)分反義基因抑制和寡聚核苷酸的非特異性生物效應(yīng)。優(yōu)選所述對(duì)照寡聚核苷酸為與待測(cè)寡聚核苷酸長(zhǎng)度大致相同，并且所述對(duì)照寡聚核苷酸的核苷酸序列至少與反義序列的序列不同，并且必須避免與靶序列特異性雜交。所述研究還優(yōu)選比較靶RNA或蛋白和內(nèi)標(biāo)對(duì)照RNA或蛋白的水平。本發(fā)明的反義寡聚核苷酸可以包括至少一個(gè)修飾堿基部分，該部分選自包括但不限于5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5-(羧基羥乙基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨甲基-2-硫尿核苷、5-羧基甲基氨甲基尿嘧啶、二羥尿苷(dihydrouricil)、β-D-半乳糖基核苷(beta-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-異戊烯腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-甲基鳥(niǎo)嘌呤(2，2-idimethylguanine)、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥(niǎo)嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胸腺嘧啶、N6-氨基嘌呤、7-甲基鳥(niǎo)嘌呤、5-甲胺基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨甲基-2-硫脲嘧啶、β-D-甘露糖基核苷(beta-D-mannosylqueosine)、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基脲嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-乙醇酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、queosine、2-巰基胞嘧啶、5-甲基-2-硫脲嘧啶、4-硫脲嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-乙醇酸甲酯、尿嘧啶-5-乙醇酸(v)、5-甲基-2-硫脲嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、3-(3-氨基-3-羧基-丙基)尿苷((acp3)w)和2，6-二氨基嘌呤的組。本發(fā)明的反義寡聚核苷酸還可以包括至少一個(gè)修飾的糖基部分選自包括但不限于阿拉伯糖、2-氟阿拉伯糖、木酮糖和己糖；還可以另外包括至少一個(gè)修飾的磷酸主鏈選自由磷硫酰、二硫代磷酸酯、氨基硫基磷酸酯(phosphoramidothioate)、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、烷基磷酸三酯以及formacetal或它們的類似物所組成的組中。本發(fā)明的寡聚核苷酸可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法合成，例如，通過(guò)使用DNA自動(dòng)合成儀。作為實(shí)例，硫基磷酸酯寡聚核苷酸可以通過(guò)Stein等人(1998)Nucl.AcidsRes.163209的方法合成，并且甲基膦酸酯可以通過(guò)例如使用受控孔玻璃聚合物支持物(controlledporeglasspolymersupports)(Sarin等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.857448-7451)制備。反義分子能被輸送到表達(dá)吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的活體細(xì)胞內(nèi)。已經(jīng)開(kāi)發(fā)出一些用于向細(xì)胞內(nèi)輸送反義DNA或RNA的方法，所述方法為本領(lǐng)域公知。因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)要達(dá)到的足以抑制內(nèi)生mRNA翻譯的反義核苷酸濃度經(jīng)常不同，因此優(yōu)選方法使用重組DNA構(gòu)建體，其中所述反義寡聚核苷酸位于強(qiáng)啟動(dòng)子控制下。優(yōu)選應(yīng)用所述構(gòu)建體轉(zhuǎn)染受試者內(nèi)的靶細(xì)胞，結(jié)果其轉(zhuǎn)錄的足夠阻止相應(yīng)mRNA翻譯的量的單鏈RNA將與編碼感興趣基因產(chǎn)物的內(nèi)生轉(zhuǎn)錄本雜交。例如，載體可以被導(dǎo)入體內(nèi)，這樣可以被細(xì)胞吸收并直接轉(zhuǎn)錄出反義RNA。所述載體可以保留游離或者可以進(jìn)行染色體整合，只要該載體可以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生出需要的反義RNA。所述載體可以通過(guò)本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)方法構(gòu)建，在后面進(jìn)一步描述。載體可以為質(zhì)粒、病毒或者其他本領(lǐng)域公知的用在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中復(fù)制和表達(dá)的載體。編碼反義RNA序列可以通過(guò)任何本領(lǐng)域公知的在哺乳動(dòng)物細(xì)胞，優(yōu)選人類細(xì)胞中起作用的啟動(dòng)子進(jìn)行表達(dá)。所述啟動(dòng)子可以為誘導(dǎo)型的或者組成型的。所述啟動(dòng)子可以包括但不限于SV40早期啟動(dòng)子區(qū)域(Bernoist和Chambon，1981，Nature290304-310)、含有勞氏肉瘤病毒3’長(zhǎng)末端重復(fù)序列的啟動(dòng)子(Yamanoto等人，1980，Cell22787-797)、皰疹胸苷激酶啟動(dòng)子(Wagner等人，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.781441-1445)以及金屬硫蛋白基因調(diào)控序列(Brinster等人，1982，Nature29639-42)。啟動(dòng)子用作組織或者細(xì)胞特異性表達(dá)，例如在光感受器、RPE細(xì)胞或諸如內(nèi)皮細(xì)胞或黑素細(xì)胞的脈絡(luò)膜類型，也為本領(lǐng)域公知，在后面實(shí)施例7中進(jìn)行進(jìn)一步描述。核酶為又一種能下游調(diào)控吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物表達(dá)的試劑的優(yōu)選實(shí)施方式。核酶分子設(shè)計(jì)以催化感興趣基因轉(zhuǎn)錄本的斷裂，阻止其反義成多肽。(參見(jiàn)例如，Sarver等人.(1990)Science2471222-1225以及US5093246)。一般而言，核酶催化位點(diǎn)特異性斷裂或RNA中磷酸二酯鍵的連接。然而能在特異位點(diǎn)識(shí)別序列斷裂mRNA各種類型的核酶，可以用于破壞吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)mRNA，優(yōu)選應(yīng)用錘頭狀核酶。錘頭狀和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的核酶為RNA分子通過(guò)堿基與互補(bǔ)RNA靶序列配對(duì)起作用，并且完成在特定位點(diǎn)斷裂反應(yīng)。在錘頭狀核酶的情況下，所述核酶在UX二核苷酸后斷裂，其中X可以為除了鳥(niǎo)嘌呤之外的任意核糖核苷酸，雖然如果X為胞嘧啶斷裂率最高。所述催化效率還受核苷酸在前的尿嘧啶影響。實(shí)際上，靶mRNA中需要有NUX(代表GUC、CUC或UUC)。所述靶用于設(shè)計(jì)環(huán)繞該位點(diǎn)的大約12或13個(gè)核苷酸的反義RNA，但是跳過(guò)C，C不能與所述核酶形成常規(guī)堿基堿基對(duì)。設(shè)計(jì)合成錘頭狀核酶可以通過(guò)選擇性結(jié)合和斷裂互補(bǔ)的mRNA分子，然后釋放片段、用高效蛋白酶重復(fù)此過(guò)程。這樣表現(xiàn)出明顯的益處例如，不具催化活性的反義寡聚核苷酸，也是可化學(xué)計(jì)量的，與靶序列形成11的復(fù)合物。本發(fā)明所述錘頭狀核酶可以命名為6-4-5莖-環(huán)-莖構(gòu)型，或者其它任意的適合目的構(gòu)型。一般而言，因?yàn)榛瘜W(xué)斷裂步驟很快并且釋放步驟為限速步驟，如果所述雜交的核酶的“臂”(單環(huán)I和III)相對(duì)較短，例如短大約5或6個(gè)核苷酸，速度和特異性都能得到提高。特異性構(gòu)型設(shè)計(jì)的適合度可以用各種本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。錘頭狀核酶的構(gòu)建和制備為本領(lǐng)域公知得到詳細(xì)全面的描述，比如在Haseloff和Gerlach(1988)Nature334585-591中。天然吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的核苷酸序列中存在大量潛在的錘頭狀核酶斷裂位點(diǎn)，例如，SEQIDNO1至SEQIDNO17的編碼。優(yōu)選設(shè)計(jì)所述核酶使所述斷裂識(shí)別位點(diǎn)位于接近吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)mRNA的5’末端，以提高效率并且減少細(xì)胞內(nèi)無(wú)功能mRNA轉(zhuǎn)錄本的積聚。本發(fā)明中的核酶可以通過(guò)下述的載體輸送到細(xì)胞。本發(fā)明所述核酶還包括RNA核糖核酸內(nèi)切酶(下文“Cech-型核酶”)例如天然發(fā)生于嗜熱四膜蟲(chóng)(Tetrahymenathermophila)的核酶(稱為IVS或L-19IVSRNA)以及已經(jīng)被ThomasCech及其合作者廣泛描述的核酶(參見(jiàn)例如Zaug等人，(1984)，Science，224574-578；Been和Cech，(1986)，Cell，47207-216)。所述Cech-型核酶具有八個(gè)堿基對(duì)活性位點(diǎn)，該位點(diǎn)與靶RNA序列雜交，然后發(fā)生靶RNA斷裂。本發(fā)明包括靶向八個(gè)堿基對(duì)活性位點(diǎn)序列的所述Cech-型核酶，所述活性位點(diǎn)序列出現(xiàn)在mRNA，中并對(duì)本發(fā)明感興趣的蛋白和多肽具特異性。本發(fā)明另一優(yōu)選的試劑為RNA介導(dǎo)的干擾(RNA-mediatedinterference，RNAi)分子，下游調(diào)控吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的表達(dá)。所述RNAi機(jī)制包括用雙鏈RNA(double-strandedRNA，dsRNA)觸發(fā)序列中與dsRNA高度同源的基因沉默。RNAi為一種進(jìn)化保守現(xiàn)象，不同種的生物體比如植物、線蟲(chóng)(秀麗隱桿線蟲(chóng)(Caenorhabiditiselegans))、果蠅(果蠅屬(Drosophila))、兩棲動(dòng)物及哺乳動(dòng)物中普遍存在。認(rèn)為進(jìn)化保護(hù)基因組對(duì)抗可動(dòng)的遺傳因子例如轉(zhuǎn)座子和病毒的入侵。在多步過(guò)程中，通過(guò)核酸內(nèi)切酶核糖核酸酶III的作用，活性小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)分子在體內(nèi)產(chǎn)生，稱為Dicer。結(jié)果21到23個(gè)核苷酸的siRNA分子介導(dǎo)降解互補(bǔ)的同源RNA(Zamore等人，2000；Grishok等人，2000)。非天然產(chǎn)生的RNAi分子可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法合成，有利于用于感興趣基因的表達(dá)沉默。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，dsRNA長(zhǎng)于30個(gè)核苷酸已知激活抗病毒應(yīng)答，導(dǎo)致非特異性RNA轉(zhuǎn)錄本降解及宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)翻譯普遍迅速停止。然而哺乳動(dòng)物細(xì)胞中基因特異性抑制可以通過(guò)體外合成大約21個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的siRNA完成。所述分子足夠長(zhǎng)可以誘導(dǎo)基因特異性抑制，但又足夠短避免宿主的干擾素應(yīng)答(Elbashir，S.M.等人，2001)。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)可用電腦程序設(shè)計(jì)出直接針對(duì)特異性mRNA靶序列的RNAi分子。抑制性RNA小分子通過(guò)結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的蛋白復(fù)合物起作用，被稱為RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNAinducedsilencingcomplex)，具有解螺旋酶和內(nèi)切核酸酶活性。所述內(nèi)切核酸酶活性解開(kāi)雙鏈RNA分子的螺旋，允許siRNA反義鏈結(jié)合到靶RNA分子上(Zamore等人，2002；Vicker等人，2003)。所述內(nèi)切核酸酶活性水解靶RNA結(jié)合反義鏈的位點(diǎn)。RNAi策略可以與基于載體的方法成功結(jié)合，達(dá)到在例如RNA聚合酶III(PolIII)啟動(dòng)子控制下，于轉(zhuǎn)染細(xì)胞中從DNA模板合成小RNA。使用PolIII有利直接合成小非編碼轉(zhuǎn)錄本，該轉(zhuǎn)錄本3’末端通過(guò)在4-5個(gè)胸腺嘧啶(Ts)范圍內(nèi)終止延伸而確定。所述特性使用DNA模板體內(nèi)合成與所發(fā)現(xiàn)的需要體外合成的活性siRNA結(jié)構(gòu)特征近似的小RNA成為可能。應(yīng)用所述模板，靶向選擇的感興趣mRNA的小RNA已經(jīng)在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中得到表達(dá)，并且表現(xiàn)出能夠高效特異性抑制相應(yīng)蛋白的合成(Sui等人，2002)。為了抑制顯性取得功能突變(gain-of-mutation)，或者不需要與野生型序列只存在一個(gè)堿基變化的吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的mRNA多態(tài)變異體(例如這里所述的一個(gè)MT1-MMP的AMD相關(guān)變異體)，需要選擇性沉默異常mRNA的表達(dá)允許正常的等位基因表達(dá)。RNAi技術(shù)的一個(gè)高度有益的特點(diǎn)在于具有單核苷酸特異性能夠選擇性沉默突變。這種方法的克星性已經(jīng)得到證實(shí)，用RNAi抑制Cu、Zn超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD1)基因的引起肌萎縮性側(cè)索硬化癥(amyotrophiclateralizingsclerosis，ALS)的變異等位基因的表達(dá)，可以使正常完整等位基因表達(dá)(Ding等人，2003)。RNAi體內(nèi)給藥的有效率最近已經(jīng)在幾個(gè)自身免疫性肝炎的小鼠模型體內(nèi)得到證實(shí)。Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(Fas-mediatedapoptosis)揭示了肝臟疾病的更廣范圍。靶向編碼Fas受體的Fas基因的siRNA雙鏈體體內(nèi)剪接的效果顯示為在所述模型中保護(hù)小鼠不發(fā)生肝衰竭和纖維化。靜脈注射Fas的siRNA特異性減少Fas的mRNA水平和Fas蛋白在小鼠肝細(xì)胞中的表達(dá)，并且所述效果沒(méi)有降低維持了10天。通過(guò)注射Fas-特異性抗體誘導(dǎo)的暴發(fā)型肝炎中，用siRNA治療的小鼠82％有效沉默了Fas觀察存活了10天，而所有對(duì)照組的小鼠在3天內(nèi)死亡(Song等人，2003)。相似的基于RNAi策略擬定用于靶向或下游調(diào)控AMD病人異?；蜻^(guò)度表達(dá)的基因。可選地，吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的表達(dá)可以通過(guò)靶向與吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因調(diào)控區(qū)域(即吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子)互補(bǔ)的脫氧核糖核苷酸序列，以形成三股螺旋結(jié)構(gòu)，阻止靶細(xì)胞中吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄而減少。(一般參見(jiàn)Helene，C.(1991)AnticancerDrugDes.6(6)569-84；Helene，C.等人(1992)Ann.N.Y.Acad.Sci.66027-36；以及Maher，L.J.(1992)Bioassays14(12)807-15)。用于形成三股螺旋抑制轉(zhuǎn)錄本形成的核苷酸分子優(yōu)選單鏈并由脫氧核糖核苷酸組成。所述寡聚核苷酸的堿基組成應(yīng)當(dāng)通過(guò)Hoogsteen堿基配對(duì)原則，啟動(dòng)三股螺旋形成，其中一般要求延伸的嘌呤或者嘧啶的大小以形成單鏈雙鏈體。核苷酸序列可以為嘧啶基的，會(huì)導(dǎo)致TAT和CGC三聯(lián)體交叉三個(gè)相關(guān)的鏈形成三股螺旋。所述富含嘧啶的分子提供了與雙螺旋中的一條鏈在該鏈平行方向上富含嘌呤的區(qū)域的堿基互補(bǔ)性。此外，核苷酸分子可以選擇富含嘌呤的，例如，包括G殘基延伸。所述分子將與富含GC對(duì)的DNA形成三股螺旋，其中大多數(shù)嘌呤殘基位于靶向雙鏈的一條單鏈上，結(jié)果在CGC三聯(lián)體中交叉三鏈中的三條鏈。所述能靶向形成三股螺旋的可選潛在序列可以通過(guò)創(chuàng)造所謂“回轉(zhuǎn)(switchback)”核苷酸分子而增加。回轉(zhuǎn)分子合成可以選擇3’-5’、5’-3’方式，這樣它們雙鏈體的第一鏈堿基配對(duì)，然后其它鏈，減少了雙鏈體中一條鏈上存在相當(dāng)大嘌呤或嘧啶的延伸必要。本發(fā)明的反義RNA、核酶、RNAi和三股螺旋分子可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的合成所述分子的任何方法制備。包括本領(lǐng)域公知的化學(xué)合成寡聚脫氧核糖核苷酸、寡聚核糖核苷酸技術(shù)，例如固相氨基磷酸酯化學(xué)合成?？蛇x地，RNA分子可以通過(guò)體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)錄編碼反義RNA分子的DNA產(chǎn)生。所述DNA序列可以為摻入多種普遍的載體，所述載體摻入了合適的RNA聚合酶啟動(dòng)子?？蛇x地，可使用反義cDNA構(gòu)建體合成反以RNA，其組成型或誘導(dǎo)型取決于使用的啟動(dòng)子。此外多種公知的核苷酸分子修飾可以作為增加細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性和半衰期的方法引入?？赡艿男揎棸ǖ幌抻诤颂呛塑账峄蛎撗鹾颂呛塑账岱肿?’和/或3’末端空白序列的加入，或者如上所述在寡聚脫氧核糖核苷酸中應(yīng)用硫基磷酸酯或2’O-甲基而不是磷酸二酯鍵連接。可以下游調(diào)控表達(dá)或中和本發(fā)明吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因生物活性的其它實(shí)施方式的試劑基于蛋白。能調(diào)控表達(dá)和/或中和吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物生物功能的蛋白的實(shí)例為特異性結(jié)合吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)多肽或肽的抗體。優(yōu)選多肽，因?yàn)檫@里所示的AMD中檢測(cè)到的mRNA水平，包括由具有SEQIDNO2、SEQIDNO15和SEQIDNO17所示的核苷酸序列編碼的核苷酸，即這里分別鑒定具有SEQIDNO80、SEQIDNO101和SEQIDNO103至SEQIDNO121所示氨基酸序列的多肽。本發(fā)明所述抗體可以用于干擾吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白與一個(gè)或多個(gè)結(jié)合或者相互作用于吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白分子的相互作用。例如，直接抗MT1-MMP蛋白的抗體被認(rèn)為中和所述蛋白激活明膠酶原A的能力。這里描述的研究結(jié)果用直接抗MT1-MMP的抗體，顯示出延遲基于以MT1-MMP過(guò)度表達(dá)為特征的RPE疾病的大鼠模型中視網(wǎng)膜的變性。因此，用抗MT1-MMP抗體，抑制MT1-MMP在光感受器間基質(zhì)中的過(guò)度產(chǎn)生，可能用在患有AMD病人眼中減少基質(zhì)破壞和改善吞噬作用。由本發(fā)明核苷酸編碼的蛋白質(zhì)(例如SEQIDNO1至SEQIDNO17、或者它們的免疫源片段或類似物以及最優(yōu)選發(fā)現(xiàn)在AMD中上游調(diào)控的核苷酸序列編碼(即SEQIDNO2、SEQIDNO15和SEQIDNO17))可以用于提高本發(fā)明抗體作用。所述蛋白質(zhì)可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的從細(xì)胞/組織中純化、重組技術(shù)或化學(xué)合成制備。用于本發(fā)明的抗體可以包括多克隆抗體、單克隆抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab’)2片段和用Fab表達(dá)庫(kù)制備的分子。參見(jiàn)Kohler等人，Nature256495，1975；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6511，1976；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6292，1976；Hammerling等人，”MonoclonalAntibodiesandTCellHybridomas，”Elsevier，N.Y.，1981；Ausubel等人，supra；US4376110、US4704692和US4946778；Kosbor等人，ImmunologyToday472，1983；Cole等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA802026，1983；Cole等人，“MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy，”AlanRLiss，Inc，PP.77-96，1983；以及Huse等人，Science2461275，1989。能調(diào)整吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白的表達(dá)或活性的其它基于蛋白質(zhì)的試劑包括吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白變異體能與相應(yīng)的天然蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合配體，例如天然產(chǎn)生的結(jié)合前列腺素D2合酶(SEQIDNO2)、MT1-MMP(SEQIDNO15)和未知基因AMDP-3(SEQIDNO17)的配體。所述蛋白變異體可以通過(guò)多種本領(lǐng)域公知的各種技術(shù)產(chǎn)生。例如吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白變異體可以通過(guò)誘變制得、例如個(gè)別的點(diǎn)突變誘導(dǎo)或者平截(truncation)。所述突變可以使吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性變異體，或者只是天然吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白的功能活性亞類?？蛇x地，蛋白的拮抗形式可以產(chǎn)生并能夠抑制所述蛋白自然發(fā)生形式的功能，例如競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合另一與吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白相互作用的分子。此外，對(duì)抗(超級(jí)對(duì)抗)形式的蛋白可以產(chǎn)生組成型表達(dá)一個(gè)或多個(gè)吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白的功能活性。其它吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白變異體可以產(chǎn)生包括抵抗蛋白水解斷裂的變異體，例如，由于變異變化蛋白酶的靶序列。不管肽的氨基酸序列變化，導(dǎo)致吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白變異體具有一種或多種吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白功能活性，能很容易通過(guò)測(cè)試吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白變異體的功能活性檢測(cè)(例如，結(jié)合受體或其它配體、或誘導(dǎo)諸如吞噬作用的細(xì)胞內(nèi)應(yīng)答)。另一種能調(diào)整吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的表達(dá)或活性的試劑為吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的非肽模擬物或化學(xué)修飾形式，瓦解吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白與其它蛋白或與天然吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物相互作用的分子的結(jié)合。參見(jiàn)例如Freidinger等人，inPeptidesChemistryandBiology，G.R.Marshalled.ESCOMPublisherLeiden，Netherlands.1988。所述分子的實(shí)例包括氮雜卓(azepine)(例如參見(jiàn)Huffiman等人，inPeptidesChemistryandBiology，G.RMarshalled，ESCOMPublisherLeiden，Netherlands.1988)，γ取代的內(nèi)酰胺環(huán)(Garvey等人，inPeptidesChemistryandBiology，G.RMarshalled，ESCOMPublisherLeiden，Netherlands.1988)1988)，南五味子酮假肽(Ewenson等人，(1986)J.Med.Chem.29295；和Eweson等人，inPeptidesStructureandFunction(Proceedingsofthe9thAmericanPeptideSymposium)PierceChemicalCo.RecklandIII1985)，β-回轉(zhuǎn)二肽核心(beta-turndipeptidecore)(Nagai(1985)TetrahedronLett26647；和Sato等人(1986)J.Chem.Soc.Perkin.Trans.11231)以及β-氨基醇(Gordon等人.(1985)Biochem.Biophys.Recs.Commun.126419；以及BiochemBiophys.Res.Commun13471)。吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白還可以進(jìn)行化學(xué)修飾創(chuàng)造與諸如糖基基團(tuán)、脂類、磷酸酯、乙?；鹊幕瘜W(xué)部分共價(jià)或聚合結(jié)合的衍生蛋白。共價(jià)衍生吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白可以通過(guò)連接將化學(xué)部分與蛋白的氨基酸側(cè)鏈上功能基團(tuán)或者多肽的N-末端和C-末端連接制備。其他能調(diào)整吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物的表達(dá)或活性的試劑的實(shí)施方式為小分子。來(lái)自大范圍化學(xué)分類的小分子能干擾吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白的活性，例如通過(guò)結(jié)合蛋白質(zhì)并鈍化其活性，或者選擇性地結(jié)合到吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白的靶標(biāo)上，因此干擾蛋白與其靶標(biāo)的相互作用。根據(jù)感興趣基因/蛋白質(zhì)的性質(zhì)，抑制性小分子可以設(shè)計(jì)達(dá)到各種目的，例如1)占據(jù)底物或者靶相互作用蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，2)結(jié)合到吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)蛋白上從而改變其三位構(gòu)象，因此抑制其活性，3)結(jié)合到吞噬/AMDP蛋白的靶分子上，因此阻止該蛋白與正常靶的相互作用。例如，已知MT1-MMP蛋白(SEQIDNO100)的小分子抑制劑，諸如可以從綠茶中提取出的多酚類(即表沒(méi)食子兒茶精3-O-沒(méi)食子酸酯(Epigallocatechin3-O-gallate，EGCG)、(-)-表沒(méi)食子兒茶精3，5-二-O-沒(méi)食子酸酯以及epitheaflagallin3-O-沒(méi)食子酸酯)具有有力明顯的對(duì)所述蛋白的抑制活性(OkuN.等人，BiolPharmBull.(2003)Sep；26(9)1235-8)。其他金屬蛋白酶經(jīng)典抑制劑大體上也得到描述，比如inBeckett，R等人(2001)US6310084。基于吞噬作用相關(guān)和AMD相關(guān)基因的AMD和其他視網(wǎng)膜變性狀態(tài)的基因療法另一方面，本發(fā)明提供了天然或者合成的編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因、或者調(diào)整改基因表達(dá)或活性試劑輸送方法?！盎虔煼ā倍x為通過(guò)在細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入和表達(dá)遺傳信息治療遺傳或者獲得性疾病。這里描述了有關(guān)基因療法載體的方法和組合物。所述技術(shù)為本領(lǐng)域公知，在方法學(xué)參考書(shū)中描述，例如，ViralVectors，eds.YakovGluzman和StephenH.Hughes，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.，1988；Retroviruses，ColdSpringHarborLaboratoryPress，Plainview，NY，2000；GeneTherapyProtocols(MethodsinMolecularMedicine)，ed.JeffreyR.Morgan，HumanaPress，Totawa，NJ，2001。在多個(gè)實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明所述核苷酸摻入重組核苷酸構(gòu)建體，典型的DNA構(gòu)建體能夠?qū)胨拗骷?xì)胞并復(fù)制。所述構(gòu)建體優(yōu)選載體包括復(fù)制系統(tǒng)和能夠在給定的宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和翻譯編碼多肽的序列的序列。用于本發(fā)明制備和使用可用載體和宿主細(xì)胞的常規(guī)組合物和方法，正如在Sambrook等人，supra或Ausubel等人，supra.所述。根據(jù)基因治療方法的目的用于本發(fā)明實(shí)踐中有用的載體包括各種野生型。一些實(shí)施方式為包括編碼試劑調(diào)整(例如下游調(diào)控)AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)mRNA或蛋白表達(dá)的載體。其他實(shí)施例的載體包括本發(fā)明野生型或需要的吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的多態(tài)變異體。在前者類型的各種模式的載體中，表達(dá)可以受下游調(diào)控例如通過(guò)表達(dá)反義RNA、核酶、RNAi分子或三股螺旋分子直接對(duì)抗過(guò)表達(dá)的mRNA，例如PD2S(SEQIDNO2)、MT1-MMP(SEQIDNO15)或AMDP-3(SEQIDNO17)過(guò)表達(dá)的mRNA。其他實(shí)施方式的載體直接表達(dá)需要的AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因的多態(tài)變異體，無(wú)論為野生型還是變異體類型。例如在一個(gè)實(shí)施方式中，核苷酸編碼正常類型(野生型)的MT1-MMP(例如SEQIDNO15)。野生型類型的輸送用于例如，受試者不表達(dá)正常變異體，但是純合體表達(dá)需要的多態(tài)類型(例如這里所需要的MT1-MMP錯(cuò)義多態(tài)D273N)，或者雜合體表達(dá)兩種不同的非所需要的等位基因類型(例如錯(cuò)義多態(tài)D273N和同義/剪接變異體多態(tài)P259P)。根據(jù)本發(fā)明天然或者合成的核苷酸，包括cDNA、反義核苷酸、核酶和RNAi分子，可以摻入重組核苷酸構(gòu)建體、典型的DNA構(gòu)建體能夠?qū)胨拗骷?xì)胞并復(fù)制。用于本發(fā)明制備和使用可用載體和宿主細(xì)胞的常規(guī)組合物和方法，正如在Sambrook等人，supra或Ausubel等人，supra.所述。這里所用“表達(dá)載體”為能夠表達(dá)DNA分子(編碼cDNA、反義核苷酸、核酶或RNAi分子)載體(由于存在合適的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯控制序列)能夠克隆到該載體中并因此產(chǎn)生RNA或多肽/蛋白質(zhì)。當(dāng)所述表達(dá)載體導(dǎo)入合適的宿主細(xì)胞內(nèi)，克隆序列產(chǎn)生表達(dá)?；虮磉_(dá)所需的調(diào)控區(qū)域的精確性可能在有機(jī)體之間大不相同，加上根據(jù)克隆序列的性質(zhì)和在細(xì)胞中表達(dá)該序列目的，但是一般來(lái)說(shuō)所述元件包括啟動(dòng)子直接起始RNA的轉(zhuǎn)錄。所述區(qū)域可以包括與轉(zhuǎn)錄起始有關(guān)的5’非編碼序列，例如TATA盒。所述啟動(dòng)子可以為組成型的或者可調(diào)節(jié)型的。組成型啟動(dòng)子本質(zhì)上一直引起可操作連接的基因表達(dá)?？烧{(diào)節(jié)型的啟動(dòng)子可以被激活或鈍化。所述可調(diào)節(jié)型的啟動(dòng)子包括通?！瓣P(guān)”但是可以誘導(dǎo)打“開(kāi)”的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，以及通?！伴_(kāi)”但是可以“關(guān)”的“可抑制”啟動(dòng)子。公知許多不同的調(diào)控子，包括溫度、激素、重金屬和調(diào)控蛋白。所述劃分并非絕對(duì)；組成型啟動(dòng)子某種程度上可以調(diào)節(jié)。所述啟動(dòng)子可以為“遍在”啟動(dòng)子在宿主有機(jī)體的所有細(xì)胞都有實(shí)質(zhì)活性，例如β-肌動(dòng)蛋白或optomegalovirus啟動(dòng)子，或者可以為其表達(dá)或多或少對(duì)靶細(xì)胞或組織特異性的啟動(dòng)子。如下面的實(shí)施例所述，適用細(xì)胞特異性的啟動(dòng)子(例如光感受器特異性、RPE特異性和黑素細(xì)胞特異性)在眼中表達(dá)，并且誘導(dǎo)型啟動(dòng)子用于在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物特定年齡起始轉(zhuǎn)基因表達(dá)。公知一些適于動(dòng)物細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的載體或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的建立。參見(jiàn)例如Pouwels等人，CloningVectorsALaboratoryManual，1985，Supp.1987。通常動(dòng)物表達(dá)載體包括(1)一個(gè)或多個(gè)在5’和3’調(diào)控序列轉(zhuǎn)錄控制下的克隆動(dòng)物基因和(2)顯性選擇標(biāo)記。所述動(dòng)物表達(dá)載體如果需要可以包括啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域(例如控制誘導(dǎo)型或組成型的、環(huán)境調(diào)控或者發(fā)育調(diào)控的，或者細(xì)胞或組織特異性表達(dá)的調(diào)控區(qū)域)、轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、核酶結(jié)合位點(diǎn)、RNA加工信號(hào)、轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)和/或多聚腺苷酸化信號(hào)。本發(fā)明中動(dòng)物表達(dá)載體優(yōu)選包括用于鑒定細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)化的選擇性標(biāo)記基因。適合動(dòng)物系統(tǒng)的選擇性標(biāo)記基因包括編碼產(chǎn)生抗生物素抗性酶的基因(例如抗性參照均霉素、卡那霉素、爭(zhēng)光霉素、G418或鏈霉素)。根據(jù)本發(fā)明能用于表達(dá)基因的有用啟動(dòng)子的實(shí)例為細(xì)胞巨化病毒(cytomegalovirus，CMV)立即早期啟動(dòng)子(CMVIE)(Xu等人，Gene272149-156，2001)。所述啟動(dòng)子在大多數(shù)動(dòng)物組織中表現(xiàn)高水平表達(dá)，并且通常不依賴帶表達(dá)的特定編碼蛋白。作為實(shí)例，在大多數(shù)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物組織中，所述CMVIE啟動(dòng)子為強(qiáng)啟動(dòng)子。用于本發(fā)明的其他啟動(dòng)子的實(shí)例包括SV40早期啟動(dòng)子、勞氏肉瘤病毒啟動(dòng)子、腺病毒主要晚期啟動(dòng)子(majorlatepromoter，MLP)、單純性皰疹病毒啟動(dòng)子、小鼠乳腺瘤病毒LTR啟動(dòng)子、人類免疫缺陷病毒長(zhǎng)末端重復(fù)(longterminalrepeat，LTR)啟動(dòng)子、β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子(Genbank#K00790)或者鼠金屬硫蛋白啟動(dòng)子(StratageneSanDiegoCA)。合成啟動(dòng)子、雜交啟動(dòng)子等都可以用于本發(fā)明且為本領(lǐng)域公知。動(dòng)物表達(dá)載體還可以包括RNA加工信號(hào)例如內(nèi)含子已經(jīng)表現(xiàn)增加基因表達(dá)(Yu等人，(2002)81155-163以及Gough等人(2001)Immunology103351-361)。RNA剪接序列的定位可以影響動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的表達(dá)水平。由此來(lái)看，內(nèi)含子可以在轉(zhuǎn)基因中吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)多肽編碼基因的定位上游或下游調(diào)整基因表達(dá)水平。本發(fā)明中表達(dá)載體還可以包括調(diào)控對(duì)照區(qū)域通常存在于動(dòng)物基因的5’區(qū)域。此外，表達(dá)載體中可以包括3’末端區(qū)域增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性。參見(jiàn)例如Jacobson等人，(1996)Annu.Rev.Biochem.65693-739以及Rajagopalan等人，(1997)Prog.NucleicAcidRes.Mol.Biol.56257-286。腺病毒載體已經(jīng)表現(xiàn)出能夠在靶細(xì)胞中高效基因表達(dá)，并且允許用于大編碼容量的異源DNA。“異源DNA”在上下文中可以定義為任何非腺病毒天然的核苷酸序類或基因。應(yīng)用重組腺病毒作為基因治療載體的方法已有討論，例如W.C.Russell，JournalofGeneralVirology812573-2604，2000以及Bramson等人，Curr.Opin.Biotechnol.6590-595，1995。重組腺病毒的優(yōu)選類型為“無(wú)膽量(gutless)”、“高容量”或“輔助依賴”腺病毒，這幾種類型都已刪除病毒編碼的序列，并包括病毒反向末端重復(fù)(invertedterminalrepeats，ITRs)、治療基因(包括編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因、或者調(diào)控吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因表達(dá)的試劑的天然或合成的核苷酸，可達(dá)28-32千堿基對(duì))以及病毒DNA包裝序列。所述重組腺病毒的變異體例如包括組織特異性增強(qiáng)子及啟動(dòng)子可行連接于編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因、或者調(diào)控吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因表達(dá)的試劑的天然或合成的核苷酸也在本發(fā)明范圍內(nèi)。一個(gè)在體中可以存在多于一個(gè)的啟動(dòng)子。因此多于一個(gè)的外源基因可以通過(guò)一個(gè)載體表達(dá)。本發(fā)明的病毒表達(dá)載體還包括腺伴隨病毒(Adeno-AssociatedVirus，AAV)載體。AAV表現(xiàn)出靶細(xì)胞高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，并能以位點(diǎn)專一方式整合到宿主基因組中。使用重組AAV載體的方法已有討論，例如Tal，J.，J.Biomed.Sci.7279-291，2000以及MonahanandSamulski，GeneTherapy724-30，2000。細(xì)胞特異性靶向優(yōu)選含有一對(duì)反向末端重復(fù)AAV載體，其側(cè)翼至少一個(gè)盒(cassette)包括直接細(xì)胞特異性(例如光感受器、RPE或黑素細(xì)胞)表達(dá)的啟動(dòng)子可行連接于感興趣基因。使用該載體，所述AAV載體的DNA序列包括ITRs，所述啟動(dòng)子和編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因、或者調(diào)控吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因表達(dá)的試劑的天然或合成核苷酸可以整合到宿主基因組中。另一種用于本發(fā)明的優(yōu)選的載體為單純皰疹病毒(herpessimplexvirus，HSV)載體。使用重組HSV載體的方法已有討論，例如Cotter和Robertson，Curr.Opin.Mol.Ther.1633-644，1999。HSV載體刪除了一個(gè)或多個(gè)立即早期基因(immediateearlygene，IE)，方便無(wú)毒，在宿主細(xì)胞中以類似潛伏的狀態(tài)存留并且提供高效細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)。重組HSV載體允許大約30千堿基的編碼容量。優(yōu)選的HSV載體由I型HSV設(shè)計(jì)得到，刪除了IE基因。根據(jù)本發(fā)明還可以使用HSV擴(kuò)增子載體。通常HSV擴(kuò)增子載體長(zhǎng)度大約15千堿基，具有一個(gè)病毒復(fù)制起始區(qū)和包裝序列。該載體中可以存在多于一個(gè)的啟動(dòng)子。因此可以通過(guò)該載體表達(dá)多于一個(gè)的異源基因。此外，該載體可以包括序列編碼信號(hào)肽或其他部分利于從宿主細(xì)胞中分泌基因產(chǎn)物。本發(fā)明的病毒載體還可以包括復(fù)制缺陷慢病毒載體，包括人類免疫缺陷病毒。使用慢病毒載體的方法已有討論，例如Vigna和Naldini，J.GeneMed.5308-316，2000以及Miyoshi等人，J.Virol.728150-8157，1998。慢病毒載體能感染分裂和不分裂的細(xì)胞并在人上皮組織中高效轉(zhuǎn)導(dǎo)。根據(jù)本發(fā)明慢病毒載體可以得自人類或非人類(包括猴免疫缺陷病毒(SimianImmunodeficiencyViruses，SIV))的慢病毒。所述載體可以包括病毒的LTRs、引物結(jié)合位點(diǎn)、聚嘌呤區(qū)、att位點(diǎn)和殼體化位點(diǎn)。所述慢病毒載體可以包裝在任何合適的慢病毒衣殼中。所述被來(lái)自不同病毒粒蛋白取代粒蛋白稱為“假型化”。所述載體衣殼可以包括來(lái)自其他病毒的病毒包膜蛋白，包括鼠白血病病毒(MurineLeukemiaVirus，MLV)或水泡性口膜炎病毒(VesicularStomatitisVirus，VSV)。使用VSVG-蛋白產(chǎn)生高載體滴度和得到高穩(wěn)定性載體病毒粒子。所述慢病毒載體中可以存在多于一個(gè)的啟動(dòng)子。因此可以通過(guò)該載體表達(dá)多于一個(gè)的異源基因。本發(fā)明還提供了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包括鼠白血病病毒的用法。使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的方法已有討論，例如Hu和Pathak，Pharmacol.Rev.52493-511，2000以及Fong等人，Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.171-60，2000。根據(jù)本發(fā)明，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以包括高達(dá)8千堿基對(duì)的異源(治療)基因，取代病毒基因。異源在上下文中定義為不是逆轉(zhuǎn)錄病毒天然的任何核苷酸或基因。所述異源DNA可以包括如上所述的組織或細(xì)胞特異性啟動(dòng)子，以及吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因。所述逆轉(zhuǎn)錄病毒粒子可以為假模標(biāo)本(pseudotype)，并且含有得自其他病毒的病毒包裝糖蛋白，代替天然逆轉(zhuǎn)錄病毒糖蛋白。本發(fā)明所述逆轉(zhuǎn)錄載體可以整合到宿主細(xì)胞基因組中。所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中可以存在多于一個(gè)的啟動(dòng)子。因此可以通過(guò)該載體表達(dá)多于一個(gè)的異源基因。結(jié)合兩種病毒載體系統(tǒng)優(yōu)勢(shì)特征，雜交病毒載體可以用于向靶組織中輸送吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因，或者調(diào)控所述基因表達(dá)的試劑。構(gòu)建雜交載體的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知。所述技術(shù)已被發(fā)現(xiàn)例如Sambrook等人，InMolecularCloningALaboratoryManual.ColdSpringHarbor，NY；或者任何數(shù)量討論重組DNA技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)。在腺病毒衣殼內(nèi)的雙鏈AAV基因組包括AAV和腺病毒ITRs的結(jié)合可以用于轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞。在其他變異體中AAV載體可以被“無(wú)膽量”、“高容量”或“輔助依賴”的腺病毒載體代替。腺病毒/AAV雜交載體的方法已有討論，例如Lieber等人，J.Virol.739314，1999。逆轉(zhuǎn)錄病毒/腺病毒雜交載體的方法已有討論，例如Zheng等人，NatureBiotechnol.18176-186，2000。其中含有腺病毒的逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組可以整合到宿主細(xì)胞的基因組中，并且有效穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因表達(dá)。所述雜交病毒載體中可以存在多于一個(gè)的啟動(dòng)子。因此可以通過(guò)該載體表達(dá)多于一個(gè)的異源基因。與本發(fā)明一致，可以進(jìn)一步考慮利于吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因表達(dá)、或者調(diào)控所述基因表達(dá)和活性的試劑、以及所述載體的克隆的其他核苷酸序列元件。例如啟動(dòng)子上游的增強(qiáng)子、或編碼區(qū)域下游的終止子的存在有利于表達(dá)。公知一些非病毒方法，用于導(dǎo)入吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸、或調(diào)整細(xì)胞內(nèi)所述核苷酸的表達(dá)或活性的試劑?？疾旆遣《痉椒▍⒁?jiàn)例如Nishikawa和Huang，HumanGeneTher.12861-870，2001。根據(jù)本發(fā)明可以提供各種應(yīng)用質(zhì)粒DNA技術(shù)，將吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸，或者在細(xì)胞內(nèi)被表達(dá)的調(diào)控吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)核苷酸表達(dá)的試劑導(dǎo)入細(xì)胞。所述技術(shù)為本領(lǐng)域普遍公知，在參考文獻(xiàn)中得到描述例如Ilan，Y.，Curr.Opin.Mol.Ther.1116-120(1999)以及Wolff，J.A.，NeuromuscularDisord.7314-318(1997)。將吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸、或者在細(xì)胞內(nèi)調(diào)整所述核苷酸表達(dá)的試劑導(dǎo)入宿主細(xì)胞的有關(guān)物理技術(shù)導(dǎo)入的方法可以選擇用在本發(fā)明中?？梢詰?yīng)用細(xì)胞電通透作用(也稱細(xì)胞電穿孔術(shù))輸送選擇的核苷酸進(jìn)入細(xì)胞。所述技術(shù)在Preat，V.，Ann.Pharm.Fr.59239-244(2001)中得到討論，并且涉及對(duì)細(xì)胞施用脈沖電場(chǎng)提高細(xì)胞滲透性，致使外源多核苷酸運(yùn)輸通過(guò)細(xì)胞膜?？蛇x地基因轉(zhuǎn)移的粒子轟擊方法涉及Accell裝置(基因槍)加速DNA包被的微觀金顆粒進(jìn)入靶組織。該方法學(xué)在例如Yang等人，Mol.Med.Today2476-481(1996)以及Davidson等人，Rev.WoundRepairRegen.6452-459(2000)中得到描述。為了構(gòu)建本發(fā)明實(shí)施方式的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，公知的幾種標(biāo)準(zhǔn)方法用于導(dǎo)入重組遺傳物質(zhì)卵母細(xì)胞以繁殖轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。所述方法的實(shí)例包括1)粒子輸送系統(tǒng)(參見(jiàn)例如NovakovicS等人(1999)JExpClinCancerRes18531-6、Tanigawa等人.(2000)CancerImmunolImmunother48635-43)；2)顯微注射方法(參見(jiàn)例如Krisher等人，(1994)TransgenicRes.3226-231、RobinettCC和DunawayM(1999)，ModelingtranscriptionalregulationusingmicroinjectionintoXenopusoocytes.InMethodsACompaniontoMethodsinEnzymology17151-160或者PinkertCA和TrounceIA(2002)，Methods26348-57)；3)聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)方法(參見(jiàn)例如MeyerO等人，(1998)J.Biol.Chem.27315621-7或者Park等人(2002)BioconjChem，13232-239)；4)脂質(zhì)體介導(dǎo)的脫氧核糖核酸攝取(參見(jiàn)例如HoflandHEJ和SullivanSM(1997)J.LiposomeRes.7187-205或者HuiSW等人(1996)Biophys.J.71590-599)；以及5)如上所述的電穿孔法。根據(jù)本發(fā)明合成基因轉(zhuǎn)移分子可以設(shè)計(jì)形成具有質(zhì)粒DNA(包括編碼吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸、或者調(diào)整細(xì)胞內(nèi)所述核苷酸表達(dá)或活性的試劑、可行連接啟動(dòng)子)的多分子聚合物，并將所得粒子結(jié)合到靶細(xì)胞表面，通過(guò)這種方式激發(fā)內(nèi)吞作用以及胞內(nèi)膜瓦解。聚合體的DNA-結(jié)合陽(yáng)離子(PolymericDNA-bindingcation)(包括多聚賴氨酸、魚(yú)精蛋白以及陽(yáng)離子化的白蛋白)能夠連接到細(xì)胞靶向配體激發(fā)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用。關(guān)于聚合體的DNA-結(jié)合陽(yáng)離子的方法參見(jiàn)例如Guy等人，Mol.Biotechnol.3237-248(1995)和Garnett，M.C.，Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.16147-207(1999)。陽(yáng)離子的兩親化合物(Cationicamphiphile)包括脂聚胺(lipopolyamine)和陽(yáng)離子類脂可以提供受體-非依賴基因轉(zhuǎn)移吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸、或者編碼調(diào)控吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因表達(dá)或活性的試劑的核苷酸到靶細(xì)胞。形成的陽(yáng)離子脂質(zhì)體或陽(yáng)離子類脂可以與質(zhì)粒DNA混合產(chǎn)生細(xì)胞轉(zhuǎn)染復(fù)合物。關(guān)于陽(yáng)離子類脂形成的方法可以參見(jiàn)例如Felgner等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.772126-139(1995)和LasicandTempleton，Adv.DrugDeliveryRev.20221-266(1996)。合適的方法還可以包括使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為介導(dǎo)DNA或蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的試劑。為了輸送治療基因，DNA也可以與兩親陽(yáng)離子肽結(jié)合(Fominaya等人，J.GeneMed.2455-464，2000)。根據(jù)本發(fā)明，關(guān)于基于病毒和非病毒組分的方法都可以應(yīng)用?；谫|(zhì)粒用于治療基因輸送的EB病毒(EpsteinBarrVirus，EBV)在Cui等人，GeneTherapy81508-1513，2001.中得到描述。在Curiel，D.T.，Nat.Immun.13141-164(1994)中描述了關(guān)于DNA/配體/聚陽(yáng)離子輔助偶聯(lián)腺病毒。蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)用于輸送治療蛋白到靶細(xì)胞中為基因治療提供了另一選擇，并且蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法在本發(fā)明范圍內(nèi)。蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)為蛋白從外界環(huán)境到宿主細(xì)胞內(nèi)化作用。內(nèi)化進(jìn)程取決于蛋白或肽能穿透細(xì)胞膜。所述蛋白或肽的轉(zhuǎn)導(dǎo)特性可以通過(guò)作為融合蛋白表達(dá)的蛋白(例如吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)蛋白)賦予。通常使用蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)載體包括控制觸角的基因的肽(antennapediapeptide)、HIV的TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和單純皰疹病毒V22蛋白。所述載體參見(jiàn)例如Ford等人，GeneTher.81-4(2001)。本發(fā)明的核苷酸可以在宿主細(xì)胞內(nèi)以任意適合長(zhǎng)度的時(shí)間表達(dá)，包括瞬時(shí)表達(dá)和穩(wěn)定長(zhǎng)期表達(dá)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸、或者調(diào)劑所述核苷酸在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和活性的試劑將在適合的并且確定的長(zhǎng)度的時(shí)間表達(dá)治療量。這里描述了輸送完成瞬時(shí)或者長(zhǎng)期表達(dá)轉(zhuǎn)基因的方法。游離的復(fù)制型載體通常在細(xì)胞中維持居間到高拷貝數(shù)，促進(jìn)高水平表達(dá)插入的DNA。一些載體作為游離基因存留，并且所述載體表現(xiàn)為自主單位在宿主細(xì)胞中的復(fù)制不依賴宿主的染色體。DNA輸送通過(guò)質(zhì)粒或者基于病毒的載體，例如包括腺病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)以游離狀態(tài)存在，并且以瞬時(shí)方式表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明載體可以包括有利于將DNA整合到宿主染色體中的核苷酸序列元件。大多數(shù)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞整合耐受性好，而且是優(yōu)選保證新轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的遺傳信息的穩(wěn)定性。整合包括吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)核苷酸、或者調(diào)整細(xì)胞內(nèi)吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因產(chǎn)物表達(dá)或活性的試劑的載體，可以通過(guò)隨機(jī)或者位點(diǎn)特異性的方式發(fā)生。允許整合到宿主細(xì)胞基因組的基于病毒的載體包括那些得自AAV、逆轉(zhuǎn)錄病毒和某些AAV/腺病毒雜合體。本發(fā)明所述包括核苷酸分子(包括基因治療載體)的組合物可以以任何合適的技術(shù)給予哺乳動(dòng)物受試者。例如各種公知技術(shù)用病毒載體導(dǎo)入編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的天然或合成的核苷酸、或者另一方面，導(dǎo)入調(diào)控天然或合成的編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的核苷酸的表達(dá)或活性的試劑。病毒是天然進(jìn)化的載體高效輸送它們的基因到宿主細(xì)胞中，因此成為想要的治療基因的載體系統(tǒng)。優(yōu)選病毒載體表現(xiàn)出對(duì)宿主細(xì)胞低毒性并且產(chǎn)生治療量的編碼吞噬作用相關(guān)或AMDP相關(guān)基因的天然或合成的核苷酸，或者調(diào)控所述基因的表達(dá)或活性的試劑，例如以組織特異性的方式。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知各種方法，包括眼內(nèi)注射可以用于輸送本發(fā)明的載體入眼。MT1-MMP與AMD以及其他視網(wǎng)膜變性的聯(lián)系本發(fā)明一些實(shí)施方式為篩選方法、視網(wǎng)膜變性動(dòng)物模型及治療方法基于膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)(SEQIDNO15)。上面所列的AMDP基因中一個(gè)基因即MT1-MMP(這里也命名為PHG-16和AMDP-6)，為最初選擇的作為AMD治療的候補(bǔ)靶進(jìn)一步評(píng)價(jià)。正如下面實(shí)施例所示，結(jié)果各種確定的分析清楚證實(shí)MT1-MMP為吞噬基因，由1)晝夜模式表達(dá)，峰值在早晨，該時(shí)間體內(nèi)OS脫落及吞噬作用最大(圖7)；2)人和大鼠眼中OS頂端局部化(圖8、圖9)；以及3)由抗MT1-MMP抗體抑制的OS吞噬作用體外(圖10)和體內(nèi)，然后在大鼠眼中視網(wǎng)膜下注射(圖11)的證明。MT1-MMP和AMD的關(guān)系通過(guò)1)在人捐獻(xiàn)眼中mRNA表達(dá)增加程度和AMD相關(guān)變化的嚴(yán)重程度的相互關(guān)系(圖12和圖13)；2)AMD猴模型中光感受器間基質(zhì)中MT1-MMP抗體免疫定位增強(qiáng)；以及3)在MT1-MMP催化結(jié)構(gòu)域中錯(cuò)義變異體(即D273N)人黃斑變性疾病包括AMD發(fā)病率增加，并且MT1-MMP中同義突變體(即P259P)黃斑變性AMD病人中發(fā)病率增加證明(參見(jiàn)后文實(shí)施例5中表4)。另一項(xiàng)MT1-MMP研究提供了證據(jù)，該基因的過(guò)度表達(dá)為除AMD外至少一種類型遺傳的視網(wǎng)膜變性的普遍特征，在RPE中的原發(fā)病因即皇家外科醫(yī)師學(xué)會(huì)(RoyalCollegeofSurgeons，RCS)大鼠的原發(fā)病因。所述RCS大鼠為本領(lǐng)域公知的遺傳性視網(wǎng)膜變性疾病的動(dòng)物模型，其中光感受器變性是由于RPE細(xì)胞的吞噬缺陷造成(Bok和Hall，1971)。此模型的病因基因?yàn)樽儺惖腗ERTK(D′Cruz等人，2000)。這里所述的研究中MT1-MMP表現(xiàn)出在RCS大鼠突變體的視網(wǎng)膜和RPE中過(guò)度表達(dá)。重要地，然后注射抗MTI-MMP抗體(2微升體積)到7天齡RCS大鼠視網(wǎng)膜下的空間。相對(duì)于對(duì)照，光感受器的變性率在注射抗MTI-MMP抗體動(dòng)物在30天齡和60天觀察齡顯著減慢，但是對(duì)照抗體和假注射的沒(méi)有作用(圖14)。所述結(jié)果提供了證據(jù)，直接針對(duì)存在于視網(wǎng)膜外部的MTI-MMP蛋白的試劑，例如在視網(wǎng)膜下間隙光感受器間基質(zhì)里，可以提供有益效果，例如減慢或逆轉(zhuǎn)視網(wǎng)膜變性狀態(tài)。先前公認(rèn)MT1-MMP的功能是在入侵瘤細(xì)胞表達(dá)，包括激活明膠酶原A，并消化多種細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)成分(Sato等人，1994；Cao等人，1995；PeiandWeiss，1996)。基于這里所述的發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在很明顯所述基因提供了一種吸引人的新候補(bǔ)基因靶向治療AMD和其他視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜變性疾病。基于吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的AMD動(dòng)物模型在另一方面，本發(fā)明包括非人類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)適于用作AMD以及其他視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜變性狀態(tài)動(dòng)物模型。迄今為止，缺少合適的短壽命AMD動(dòng)物模型，該模型隨年齡變化能可行追蹤，阻礙測(cè)試AMD治療化合物和治療方法?；谠贏MD眼中至少三個(gè)AMD/吞噬基因即PD2S(SEQIDNO2)、MT1-MMP(SEQIDNO15)和AMDP-3(SEQIDNO17)過(guò)度表達(dá)的發(fā)現(xiàn)，證明了患有AMD人類、患有AMD的猴以及患有遺傳性視網(wǎng)膜變性的RCS大鼠在視網(wǎng)膜中過(guò)度表達(dá)MT1-MMPmRNA和蛋白。本發(fā)明作為優(yōu)選實(shí)施方式的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物過(guò)度表達(dá)PD2S、MT1-MMP和AMDP-3。一些轉(zhuǎn)基因模型設(shè)計(jì)為條件過(guò)度表達(dá)轉(zhuǎn)基因，只在條件外源刺激附加時(shí)，例如強(qiáng)力霉素。因此在所述動(dòng)物中可以通過(guò)給予強(qiáng)力霉素控制轉(zhuǎn)基因表達(dá)的起始。作為例子，轉(zhuǎn)基因表達(dá)可以在一生的特定時(shí)間被激發(fā)，例如視網(wǎng)膜在完成產(chǎn)后發(fā)育激發(fā)(在小鼠大約30天齡發(fā)生)。誘導(dǎo)性表達(dá)的特征是特別有益于基因例如MT1-MMP，當(dāng)在胚胎期或者出生后早期過(guò)度表達(dá)可以預(yù)測(cè)導(dǎo)致動(dòng)物中的發(fā)育異常。其他轉(zhuǎn)基因?qū)嵤┓绞竭x擇性在特定細(xì)胞類型如光感受器、RPE細(xì)胞或者脈絡(luò)膜細(xì)胞類型中過(guò)度表達(dá)諸如MT1-MMP、PD2S或AMDP-3的轉(zhuǎn)基因。然而其他AMD/視網(wǎng)膜和/或脈絡(luò)膜變性動(dòng)物模型的優(yōu)選實(shí)施方式結(jié)合AMDP相關(guān)或吞噬作用相關(guān)多態(tài)變異體，包括這里發(fā)現(xiàn)和描述的。所述模型反映了AMD的復(fù)雜基因遺傳模式。單一遺傳缺陷，例如MTI-MMP存在多態(tài)，也許不能引起單獨(dú)的疾病。然而幾個(gè)基因多態(tài)變異體的特定組合、合適的環(huán)境因素以及時(shí)間的消耗都可能促成并發(fā)機(jī)能障礙足以達(dá)到一定規(guī)模，最終導(dǎo)致AMD或者其他類型視網(wǎng)膜、黃斑或脈絡(luò)膜變性。例如，其他AMDP基因可能與MT1-MMP多態(tài)變異體共同作用產(chǎn)生全光譜AMD。因此一些AMD和其他視網(wǎng)膜及脈絡(luò)膜變性的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的實(shí)施方式表達(dá)一個(gè)或幾個(gè)與AMD和/或RPE細(xì)胞吞噬作用有關(guān)的基因多態(tài)變異體。不同的優(yōu)選實(shí)施方式為多轉(zhuǎn)基因模型表達(dá)MT1-MMP變異體，例如組合一個(gè)或幾個(gè)其他AMD相關(guān)基因的多態(tài)變異體，包括這里公開(kāi)的AMDP基因(例如具有野生型cDNA序列的基因這里展示為SEQIDNO2、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO16和SEQIDNO17)，并且AMD相關(guān)基因具有先前描述于AMD有關(guān)的多態(tài)變異體(例如SEQIDNO62、SEQIDNO63、SEQIDNO64、SEQIDNO65、SEQIDNO66、SEQIDNO67、SEQIDNO68和SEQIDNO69)。在其他多轉(zhuǎn)基因模型優(yōu)選實(shí)施方式中，MT1-MMP多態(tài)變異體與其他吞噬作用相關(guān)基因的多態(tài)變異體結(jié)合得到表達(dá)(例如，這里具有野生型cDNA序列的基因?yàn)镾EQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO11、SEQIDNO12、SEQIDNO13和SEQIDNO14)。實(shí)施例本發(fā)明還通過(guò)下列特殊實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，無(wú)論如何不應(yīng)解釋為對(duì)本發(fā)明范圍和內(nèi)容的限制。實(shí)施例1——分離吞噬作用相關(guān)和/或AMDP相關(guān)基因的研究工具下面描述了在本發(fā)明過(guò)程中開(kāi)發(fā)的研究工具包括1)通過(guò)雜交同時(shí)計(jì)量大量基因表達(dá)的簡(jiǎn)單并支付得起的方法；以及2)基于吞噬性RPE細(xì)胞系和吞噬作用活力檢測(cè)，鑒定吞噬作用相關(guān)基因的工具。CHANE陣列系統(tǒng)參見(jiàn)圖1，開(kāi)發(fā)了一種稱為基因表達(dá)的比較雜交分析(comparativeHybridizationAnalysisofGeneExpression，CHANGE)的微點(diǎn)陣技術(shù)。用分子生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)從大鼠RPE/脈絡(luò)膜RNA以及人視網(wǎng)膜RNA構(gòu)建λgtllcDNA文庫(kù)。用于文庫(kù)的大鼠RNA得自大約2-3月齡動(dòng)物的RPE/脈絡(luò)膜，周期光(12小時(shí)明亮；12小時(shí)黑暗)飼養(yǎng)，并且在整個(gè)晝夜周期的不同時(shí)間處死。自該文庫(kù)逐個(gè)挑選大約一萬(wàn)個(gè)克隆，在板上擴(kuò)增并轉(zhuǎn)移點(diǎn)作為陣列。從大鼠和人來(lái)源的總RNA用作球形表達(dá)雜交探針，隨后反轉(zhuǎn)錄為cDNA，通過(guò)PCR擴(kuò)增，并測(cè)試其對(duì)檢測(cè)點(diǎn)陣中特異性基因的表達(dá)有用。初步比較一些基因的表達(dá)通過(guò)CHANGE和RNA印跡分析證實(shí)準(zhǔn)確性并證明mRNA表達(dá)差異很小為大約15-20％可以用CHANGE方法檢測(cè)。很明顯結(jié)合生物學(xué)相關(guān)探針內(nèi)能夠容易地完成反復(fù)分析(例如相關(guān)探針基于功能、現(xiàn)象或病理)，為此策略最有力的方面。吞噬作用基因發(fā)現(xiàn)工具鑒定與體內(nèi)RPE吞噬作用相關(guān)的基因的優(yōu)選方法為在體外系統(tǒng)分析RPE基因表達(dá)，以同步方式完成外節(jié)(outersegment，OS)吞噬作用功能，正如其在體內(nèi)發(fā)生的一樣。嚙齒類和其他哺乳動(dòng)物中外節(jié)的脫落和吞噬伴隨晝夜節(jié)律。光感受器脫落峰值和RPE細(xì)胞攝入的最大規(guī)模已知就在光起始前開(kāi)始發(fā)生幾小時(shí)的一個(gè)周期(LaVail，1976)。為了在OS吞噬作用過(guò)程中連續(xù)鑒定基于培養(yǎng)的RPE細(xì)胞中不同表達(dá)的吞噬基因，優(yōu)選與培養(yǎng)一致的吞噬過(guò)程動(dòng)力學(xué)，尤其是最小化來(lái)自細(xì)胞周圍的不同步吞噬作用的“噪音”。初級(jí)RPE培養(yǎng)為普通不合此目的的培養(yǎng)，由于RPE細(xì)胞在初級(jí)培養(yǎng)中顯著的表現(xiàn)型遺傳，不同表現(xiàn)型細(xì)胞顯示相應(yīng)吞噬作用動(dòng)力學(xué)異質(zhì)性(McLaren，1996)。所述異質(zhì)性的問(wèn)題可以通過(guò)應(yīng)用RPE細(xì)胞永生系防止發(fā)生，體內(nèi)相似的RPE，培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)鵝卵石形態(tài)，能夠吞噬輸送的OS同步結(jié)合并攝入。從嚙齒類和人類來(lái)源制備RPE細(xì)胞永生系的方法為本領(lǐng)域公知。表現(xiàn)出想要的吞噬特征典型的細(xì)胞系為BPEI-1RPE細(xì)胞系(McLaren等人，1993b)。BPEI-1培養(yǎng)物顯示出與后面“1型”初級(jí)RPE細(xì)胞同樣的OS吞噬作用動(dòng)力學(xué)，最接近類似體內(nèi)的RPE(McLaren等人，1993a；McLaren，1996)。優(yōu)選使用所述細(xì)胞系分離吞噬作用相關(guān)基因完成大規(guī)模吞噬作用分析具有足夠的細(xì)胞以產(chǎn)生滿足兩種探針制備和RNA印跡所需的RNA量(大約10-30微克)。因此合適RPE細(xì)胞系的細(xì)胞例如BPEI-1高濃度(例如6孔多孔板每孔大約106個(gè)細(xì)胞)存放，并培養(yǎng)1-2天，例如在先前描述的培養(yǎng)基中(McLaren等人，1993c；McLaren，1996)為了制備代表不同特定吞噬作用分期的用于CHANGE分析的探針(“分期特異性”探針)，能有利在或RPE細(xì)胞培養(yǎng)物中跟隨OS吞噬作用，允許分離在吞噬過(guò)程中不同的有記載的特異性分期的RNA。為了與此方便，可以使用任何合適的病毒檢測(cè)OS吞噬作用，例如McLaren等人，(1993c)先前描述的雙熒光檢測(cè)。參考圖2，在此檢測(cè)中RPE細(xì)胞溶酶體用活體染料硫酰羅丹明(紅色熒光)染色，而輸送到細(xì)胞的OS事先用熒光素(異硫氰酸熒光素(FITC))(綠色熒光)標(biāo)記。所述檢測(cè)可以用在所有吞噬作用分期(即OS結(jié)合、攝入和消化)然后用熒光顯微鏡活體培養(yǎng)。圖3顯示了在輸送用FITC染色的OS給細(xì)胞后，OS在活體BPEI-1細(xì)胞培養(yǎng)物中通常觀察到的不同時(shí)期同步結(jié)合、攝入和細(xì)胞內(nèi)加工處理過(guò)程。用CHANE分離吞噬基因?yàn)榱朔蛛x在不同吞噬作用分期表達(dá)的吞噬基因，用從在輸送OS后不同時(shí)期(例如0、1、6、12、18和30小時(shí))提取自RPE細(xì)胞培養(yǎng)物中的總RNA制備分期特異性探針，并且同時(shí)指出未輸送OS的對(duì)照培養(yǎng)物。然后通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄總RNA制備“+/-OS”吞噬作用探針，例如正如這里公開(kāi)的大約1000個(gè)RPE表達(dá)基因陣列，鑒定那些在OS被RPE細(xì)胞吞噬作用過(guò)程中差異表達(dá)的基因。在OS吞噬作用過(guò)程中表現(xiàn)出表達(dá)變化的基因，隨后被DNA序列分析用標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)鑒定，并與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列比較。實(shí)施例2—RPE細(xì)胞中吞噬作用相關(guān)基因的分離和確定本實(shí)施例描述了用上述方法，對(duì)在RPE吞噬過(guò)程中表現(xiàn)表達(dá)變化的基因的分離。從CHANGE分析中用“+/-OS”探針篩選的含有大約1000個(gè)RPE衍生cDNA的陣列，初步得到大約60個(gè)推定為差異表達(dá)基因。進(jìn)一步仔細(xì)分析，包括用RNA印跡分析確定差異表達(dá)，提供16個(gè)確定的吞噬作用相關(guān)的起始子集選擇進(jìn)行進(jìn)一步研究。前文表1提供了如這里所述通過(guò)CHANGE技術(shù)確定分離的吞噬基因的鑒定列表和序列表編號(hào)(即核苷酸SEQIDNO1-SEQIDNO15以及氨基酸SEQIDNO71-SEQIDNO101)。這些基因在體外吞噬作用過(guò)程中表達(dá)模式的詳細(xì)分析，給細(xì)胞輸送OS后的不同時(shí)期從BPEI培養(yǎng)物提取總RNA，通過(guò)RNA印跡檢查。在活細(xì)胞中觀察到的所述吞噬作用的特定分期，在提取RNA之前立即用照像攝影記載。如圖4所示，16個(gè)吞噬基因的表達(dá)模式為根據(jù)在吞噬過(guò)程中不同時(shí)期表達(dá)的峰值分組叢生，即早期、早中期、中期和晚期。實(shí)施例3—RPE表達(dá)基因在AMD中表現(xiàn)表達(dá)差異的分離和確定這里描述通過(guò)CHANGE用于推定AMD基因的分離的方法，以及確定它們與AMD關(guān)系的方法。與實(shí)施例2中所述的方法類似，應(yīng)用CHANGE技術(shù)鑒定與AMD相關(guān)基因，基于假設(shè)在AMD病理中起重要作用的基因在疾病過(guò)程中表現(xiàn)表達(dá)變化。人捐獻(xiàn)眼得自當(dāng)?shù)匮蹘?kù)。通常，接受的眼是在死亡3小時(shí)內(nèi)剜出的并且在12小時(shí)內(nèi)加工處理可用。加工處理前不管死亡時(shí)間和處理前逝去的時(shí)間，組織真實(shí)的質(zhì)量通過(guò)一些標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)，包括大體的外觀檢查、組織切片的顯微鏡評(píng)價(jià)以及所得RNA的量和質(zhì)通過(guò)RNA印跡分析和反轉(zhuǎn)錄PCR評(píng)價(jià)。如圖5所示，每個(gè)眼的AMD相關(guān)變化用顯微鏡分級(jí)，與AMD增加的嚴(yán)重程度成比例在0到+5間變化，視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜帶大約3-4毫米寬，沿一側(cè)邊緣到另一側(cè)邊緣經(jīng)過(guò)視神經(jīng)乳頭和黃斑?？紤]在形態(tài)學(xué)上若干標(biāo)準(zhǔn)指定每個(gè)眼的級(jí)別，所述標(biāo)準(zhǔn)包括1)布魯赫氏膜增厚的程度；2)脈絡(luò)膜小疣的數(shù)量、大小和位置；3)是否存在新生血管化或者脈絡(luò)膜上新生血管(choridalneovascular，CNV)膜；4)RPE/光感受器是否有萎縮。從每只眼的視網(wǎng)膜以及RPE/脈絡(luò)膜分離RNA、DNA和蛋白質(zhì)。為制備“+AMD”探針，從人捐獻(xiàn)眼的RPE/脈絡(luò)膜提取總RNA，然后混合多個(gè)AMD變化+3到+5(中等到嚴(yán)重)的眼?；旌系米訰PE/脈絡(luò)膜RNA年齡相近、未患病眼用于制備“-AMD”探針。若上文所述，所得+/-探針用于通過(guò)CHANGE鑒定差異表達(dá)基因。最初鑒定出患有AMD的受試者與未患個(gè)體相比表現(xiàn)差異表達(dá)的大約200個(gè)RPE表達(dá)基因。然后為了獲得吞噬作用相關(guān)的基因在AMD中差異表達(dá)的基因(即“AMDP基因”)，所述結(jié)果用CHANGE篩選吞噬作用相關(guān)基因(上述實(shí)施例2)并用CHANGE篩選AMD相關(guān)基因(此實(shí)施例)相比較，鑒定出在CHANGE板(panel)上證實(shí)的在吞噬作用和AMD都差異表達(dá)RPE基因。所述分析結(jié)果產(chǎn)生了6個(gè)基因的子集符合雙重標(biāo)準(zhǔn)，即前列腺素D2合酶(SEQIDNO2)、酪蛋白激酶1ε(SEQIDNO9)、鐵蛋白重多肽1(SEQIDNO10)、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1(SEQIDNO15)、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白(SEQIDNO16)和人類未知cDNAAMDP-3(SEQIDNO17)(見(jiàn)上文表2)。實(shí)施例4—MT1-MMP作為AMD相關(guān)和吞噬作用相關(guān)(AMDP)基因的分離和表征本實(shí)施例描述MT1-MMP(SEQIDNO15)的鑒定，該典型基因是通過(guò)CHANGE發(fā)現(xiàn)的在吞噬作用和AMD中都表達(dá)差異的基因(即“AMD差異吞噬基因”或“AMDP基因”)。為了鑒定相關(guān)AMD和OS吞噬作用都相關(guān)的基因，結(jié)果如上所述對(duì)比兩次CHANGE的分析。在兩次篩選都差異表達(dá)的候選基因中，克隆90-40突出，作為相對(duì)新的金屬蛋白酶即MT1-MMP(Sato等人，1994)具有合理滿足基因疑似有關(guān)AMD要求的功能。所述功能包括在OS吞噬作用中起作用(如這里所述)及激活明膠酶原A和對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)多種成分的降解活性(Sato等人，1994；Cao等人，1995；Pei和Weiss，1996)。RNA印跡分析各種組織中MT1-MMP的表達(dá)證明在RPE、脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜中表達(dá)水平最高，其次是肺和腎上腺?；谄湓隗w外OS吞噬作用過(guò)程中通過(guò)CHANGE檢測(cè)的差異表達(dá)，假定指定MT1-MMP作為吞噬基因。為了證實(shí)功能，該基因的表達(dá)模式通過(guò)RNA印跡分析OS吞噬作用非依賴檢測(cè)。參考圖6，結(jié)果證實(shí)MT1-MMP在初始吞噬作用后13個(gè)小時(shí)表達(dá)增加，通過(guò)CHANGE在同時(shí)檢測(cè)到增加。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)MT1-MMP的mRNA表達(dá)在RPE和視網(wǎng)膜中都隨晝夜模式在早晨六點(diǎn)達(dá)到峰值，比最大脫落值和體內(nèi)OS吞噬作用最大值早大約1-2小時(shí)(圖7)，強(qiáng)有力支持了關(guān)于MT1-MMP在白天限制體內(nèi)OS吞噬作用。現(xiàn)在參考圖8免疫熒光定位MT1-MMP大鼠視網(wǎng)膜在整個(gè)晝夜循環(huán)中的幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)，證實(shí)光感受器中OS和視網(wǎng)膜中RPE最強(qiáng)信號(hào)固定在上午6點(diǎn)。人類視網(wǎng)膜MT1-MMP蛋白的免疫定位證實(shí)信號(hào)在桿的頂端、特別是錐、外節(jié)，與光感受器OS膜和RPE頂突接觸面的活性一致，也許在制備脫落的OS頂端和RPE吞噬作用中起重要作用。為了得到關(guān)于MT1-MMP在OS吞噬作用中功能的證實(shí)，抗MT1-MMP的抗體(ChemiconInternational，Temecula，CA)用于測(cè)試其體外抑制BPEI-1細(xì)胞的OS吞噬作用的能力。如圖10所示，所得結(jié)果清楚證實(shí)OS吞噬作用被此抗體抑制，但是不相關(guān)抗體(X-arrestin)不抑制OS吞噬作用，證實(shí)MT1-MMP用于OS吞噬作用過(guò)程的功能要求。此外，在體內(nèi)功能測(cè)試中，視網(wǎng)膜下注射抗MT1-MMP的抗體，但是不注射X-arrestin抗體到正常大鼠眼中，倒是顯著結(jié)構(gòu)破壞和OS長(zhǎng)達(dá)4天延遲，符合干擾每日吞噬過(guò)程(圖11A、B)。因此豐度證據(jù)指出關(guān)于MT1-MMP在RPE細(xì)胞的OS吞噬作用中的關(guān)系。基于AMD的差異表達(dá)(即增加)，MT1-MMP通過(guò)CHANGE也被鑒定為AMD基因。所述基因表達(dá)通過(guò)RNA印跡分析檢查獨(dú)立得自患有AMD的病人和正常人捐獻(xiàn)眼的RPE/脈絡(luò)膜以及視網(wǎng)膜的RNA。結(jié)果證實(shí)增加，并且表現(xiàn)出在視網(wǎng)膜中的增加比在RPE中的增加更顯著(圖12)。如圖13所示，測(cè)試取自各種嚴(yán)重程度不同的AMD相關(guān)變化的眼的一系列RNA樣品，觀察到視網(wǎng)膜中MT1-MMP表達(dá)增加與眼中病理增加正相關(guān)(圖13)。此外，當(dāng)測(cè)試猴AMD模型時(shí)也表現(xiàn)出了通過(guò)RNA印跡分析的MT1-MMP表達(dá)增加，MT1-MMP被發(fā)現(xiàn)定位于在高度分裂的OS中光感受器間基質(zhì)(interphotoreceptormatrix，IPM)內(nèi)。由于已經(jīng)發(fā)現(xiàn)MT1-MMP在晝夜調(diào)節(jié)OS吞噬作用中起重要作用，本發(fā)明的發(fā)明人接著測(cè)試了在最大脫離和吞噬作用時(shí)間點(diǎn)AMD中是否發(fā)生表達(dá)增加。在AMD變化的人眼中觀察到MT1-MMP表達(dá)增加，不支持上述可能，死亡后一天不同的許多次得到的眼中都存在增加。此結(jié)果比較合理的解釋是MT1-MMP表達(dá)失調(diào)，正常峰值只出現(xiàn)在大約早晨六點(diǎn)，但是在AMD中也許活性在其他時(shí)間也高。所述MT1-MMP表達(dá)失調(diào)的功能后果是緊密控制晝夜過(guò)程的OS脫離和吞噬作用深深有害超時(shí)。實(shí)施例5—在患有AMD和黃斑變性狀態(tài)的受試者中遺傳篩選MT1-MMP本實(shí)施例描述在患有AMD和黃斑變性的病人以及正常對(duì)照人群中遺傳分析MT1-MMP的方法，顯示結(jié)果發(fā)現(xiàn)MT1-MMP的多態(tài)與黃斑變性包括AMD相關(guān)。收集患有AMD以及其他黃斑疾病的老年病人以及正常老年受試者的外周血。從白細(xì)胞中提取DNA。DNA也可以從當(dāng)?shù)匮蹘?kù)捐獻(xiàn)的眼視網(wǎng)膜和RPE/脈絡(luò)膜中。在所述捐獻(xiàn)眼中拍攝眼底照片記錄病理程度，并用實(shí)施例3種所述的標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡下分級(jí)。為能篩選MT1-MMP的多態(tài)，從公開(kāi)的小鼠基因結(jié)構(gòu)(Apte等人1997)測(cè)得的人MT1-MMP中的所有10個(gè)外顯子，并用人的外顯子特異性擴(kuò)增引物(即SEQIDNO18-SEQIDNO37)PCR擴(kuò)增，結(jié)果見(jiàn)下表3。表3擴(kuò)增人MT1-MMP外顯子、內(nèi)含子和啟動(dòng)子序列的DNA引物(擴(kuò)增引物)外顯子1SEQIDNO189140ex1s5’-GCCTACCGAAGACAAAGGCG-3′SEQIDNO199140ex1a5′-TAGAGGCTGTCCCCTAGGAG-3′外顯子2SEQIDNO209140ex2s5′-AGAGGCACCCTATGGGCCAG-3’SEQIDNO219140ex2a5’-CATCTCTGGCGCTGGCATTG-3′外顯子3SEQIDNO229140ex3s5′-GCACTGATCCCAATCCTCGC-3′SEQIDNO239140ex3a5’-CCCTGCATAAGCACAATGGG-3’外顯子4SEQIDNO249140ex4s5’-GGGAAGGAGAATGTTGCCCC-3′SEQIDNO259140ex4a5’-GAGGAGGGAACCACCCCTAC-3′外顯子5SEQIDNO269140ex5s5’-GGGAGGCTGAGGGAAGGGAC-3’SEQIDNO279140ex5a5’-GGGGAAATGCGTAGACCAGG-3’外顯子6SEQIDNO289140ex6s5’-CCCGCCTCCTCCTAAGTCTG-3′SEQIDNO299140ex6a5′-CAGCATGAGCCACCATGCCC-3”外顯子7SEQIDNO309140ex7s5′-GAACCAGAGACCTAGGCCGC-3′SEQIDNO319140ex7a5′-CAGCTCCTCTAGGGAGACCC-3’外顯子8SEQIDNO329140ex8s5′-CTAGAGCCTAAGTTGAACCC-3′SEQIDNO339140ex8a5’-GTGGTGGTGGTTTATGAGGC-3′外顯子9SEQIDNO349140ex9s5′-TAGGACATGCCCATGTCCGC-3′SEQIDNO359140ex9a5’-TCCGCTCTTCCTCAACTCCC-3’外顯子10SEQIDNO369140ex10s5′-CTCTTTGGGTCTTCCCTTCC-3′SEQIDNO379140ex10s5′-CTCTTTGGGTCTTCCCTTC-′內(nèi)含子1SEQIDNO389140int1s5′CTCGGCTCGGCCCAAAGCAG3′SEQIDNO399140int1a5′GTAGGTCCCCGGGAGGCAGG3′內(nèi)含子2SEQIDNO409140int2s5′GTTTTACGGCTTGCAAGTAAC3′SEQIDNO419140int2a5′CCAAACTTGTCTGGAACACC3’內(nèi)含子3SEQIDNO429140int3s5′CCAGGGTCTCAAATGGCAAC3′SEQIDNO439140int3a5’ATGTGGCATACTCGCCCACC3′內(nèi)含子4SEQIDNO449140int4s5′CTCTGCCGAGCCTTGGACTG3′SEQIDNO459140int4a5’GCATGGCCCAGCTCGTGCAC3’內(nèi)含子5SEQIDNO469140int5s5′TGCCCGATGATGACCGCCGG3’SEQIDNO479140int5a5′GGGTTGAGGGGGCATCTTGG3’內(nèi)含子6SEQIDNO489140int6s5′CACCGTGGCCATGCTCCGAG3’SEQIDNO499140int6a5′CCATCACTTGGTTATTCCTC3′內(nèi)含子7SEQIDNO509140int7s5’CCTACGAGAGGAAGGATGGC3’SEQIDNO519140int7a5′GGTTCCAGGGACGCCTCATC3′內(nèi)含子8SEQIDNO529140int855′GGATGCCCAATGGAAAGACC3′SEQIDNO539140intga5′CGCTATCCACTGCCCTGAGC3′內(nèi)含子9SEQIDNO549140int9s5′GGGATCCCTGAGTCTCCCAG3′SEQIDNO559140int9a5′TGTTGAATTTCCAGTATTTG3’啟動(dòng)子1(-1至-480)SEQIDNO569140pro5s-15’-TATTAGTAAACTGGCCCTTC-3’SEQIDNO579140pro3a5’-ATCTTTCTTCTGCTTAGTCG-3’啟動(dòng)子2(-1至-790)SEQIDNO589140pro5s-25’-TAGAGGTGGAACTAAACCCC-3’SEQIDNO579140pro3a5’-ATCTTTCTTCTGCTTAGTCG-3’作為實(shí)例，人MT1-MMP基因外顯子5用具有這里SEQIDNO26和SEQIDNO27所示的核苷酸序列的擴(kuò)增引物通過(guò)PCR擴(kuò)增，得到285堿基的野生型PCR產(chǎn)物具有圖15所示的DNA序列(SEQIDNO59)。得到上述產(chǎn)物合適的PCR擴(kuò)增方案如下95℃3分鐘，然后在95℃1分鐘、62℃30秒、72℃30秒重復(fù)30個(gè)循環(huán)，最后72℃5分鐘。所述258堿基的PCR產(chǎn)物用凝膠電泳純化提取，然后進(jìn)行DNA測(cè)序。用表3所述的擴(kuò)增引物，篩選得自患有AMD和家族性黃斑疾病的病人以及未患病正常受試者的DNA突變體或多態(tài)MT1-MMP基因。篩選通過(guò)使用得自三組黃斑變性受試者的DNA完成1)56名臨床記載的AMD患者見(jiàn)于局部臨床診斷；2)22名彌散性及家族性黃斑變性病人見(jiàn)于眼遺傳的臨床診斷；3)得自六個(gè)眼庫(kù)捐獻(xiàn)者的眼，所述眼AMD相關(guān)變化范圍+2-+5。臨床疾病診斷家族性黃斑疾病的包括家族性黃斑營(yíng)養(yǎng)不良、卵黃形變性黃斑營(yíng)養(yǎng)不良、近中心凹毛細(xì)血管擴(kuò)張、顯性脈絡(luò)膜小疣、晶體蛋白小疣、環(huán)狀黃斑營(yíng)養(yǎng)不良和脈絡(luò)膜萎縮。得自正常和患有黃斑變性病人的DNA中篩選的結(jié)果揭示了一個(gè)“熱點(diǎn)”幾種多態(tài)變異體在MT1-MMP外顯子5種。鑒定的第一個(gè)變異體即同義變異體這里命名為P259P，在MT1-MMP的cDNA序列中密碼子259的C和G核苷酸不同(即CCC脯氨酸對(duì)CCG脯氨酸)。如圖14所示，所述P259P變異體變異堿基在外顯子5的285堿基片段中的第143堿基位置上。參考圖14，密碼子259位置上用下劃線標(biāo)出，并且在該位置P259P多態(tài)變異體堿基用黑體標(biāo)出。通過(guò)PCR用上述列于SEQIDNO59的引物對(duì)得到人MT1-MMP外顯子5的野生型DNA序列產(chǎn)物，含有P259P變異體的外顯子5序列列于SEQIDNO60。分析人MT1-MMP基因序列潛在剪接供體(GT)和剪接受體(AG)位點(diǎn)揭示P259P多態(tài)可以引起MT1-MMP的剪接變體mRNA。正常剪接從野生型基因序列中移除內(nèi)含子得到582氨基酸全長(zhǎng)MT1-MMP蛋白產(chǎn)物(SEQIDNO100)包括外顯子5編碼的53個(gè)氨基酸(這里示于SEQIDNO121)。通過(guò)比較，P259P變異體可以在密碼子259處創(chuàng)出新的剪接受體位點(diǎn)，跳過(guò)可選的受體位點(diǎn)。再參考圖14，鑒定的第二變異體這里命名為D273N，為MT1-MMP中密碼子273的錯(cuò)義多態(tài)，G和A核苷酸不同(GAT天冬氨酸對(duì)AAT天冬酰胺)。該多態(tài)位于第183堿基位置在285堿基的外顯子5內(nèi)(圖14密碼子273下劃線，變異體堿基黑體)。所述D273N錯(cuò)義變異體改變野生型帶電荷氨基酸(即天冬氨酸)為不帶電荷(即天冬酰胺)。通過(guò)PCR受試者D273N變態(tài)得到人MT1-MMP外顯子5核苷酸序列產(chǎn)物這里列于SEQIDNO61，并且相應(yīng)的外顯子5預(yù)測(cè)變異體蛋白的產(chǎn)物列于SEQIDNO123。現(xiàn)在參考4，MT1-MMP篩選分析的結(jié)果為突變體P259P同義多態(tài)在所有患有黃斑疾病的病人中的發(fā)生頻率為27.4％，與此相反正常人群的發(fā)生頻率為10.5％。表4黃斑疾病中MT1-MMP多態(tài)變異體的頻率D273N錯(cuò)義多態(tài)在所有黃斑病人中發(fā)現(xiàn)的發(fā)生頻率更高(即31％)，對(duì)比未患病個(gè)體(21.1％)。具有兩種MT1-MMP多態(tài)變異體的一個(gè)的受試者總數(shù)，相對(duì)于在各自位置的野生型堿基，黃斑疾病受試者(58.3％)比正常人群高(31％；p＝0.043)一些AMD相對(duì)于家族性黃斑疾病分析，揭示了在AMD和家族類型黃斑病變中MT1-MMP多態(tài)變異種發(fā)生頻率都增加(表4)。在AMD受試者中，發(fā)現(xiàn)兩種MT1-MMP多態(tài)變異種中的一種的發(fā)生頻率為54.8％，而在一般人群中所述發(fā)生率為31.6％。含有家族性黃斑病的受試者該百分率甚至更高(68.2％；p＝0.029)。所述結(jié)果強(qiáng)有力地揭示了MT1-MMP多態(tài)變異種的存在與處在即將發(fā)展成包括AMD的黃斑病的危險(xiǎn)相互關(guān)聯(lián)。需要注意的4.8％黃斑疾病的受試者為純合子D273N錯(cuò)義多態(tài)，但是沒(méi)有對(duì)照(表4)。實(shí)施例6—通過(guò)結(jié)合MT1-MMP多肽的試劑延遲視網(wǎng)膜變性本實(shí)施例描述研究證明，使用中和MT1-MMP蛋白的試劑，動(dòng)物(大鼠)模型中遺傳性視網(wǎng)膜變性速度減緩。上述實(shí)施例4所述，發(fā)現(xiàn)患有AMD的人眼中、AMD猴模型中、以及RCS大鼠中，基于RPE的遺傳性視網(wǎng)膜變性的動(dòng)物模型中MT1-MMP過(guò)度表達(dá)。RCS大鼠突變表型中，由于MERTK基因突變，其特征為RPE細(xì)胞吞噬作用攝入相缺陷。在一些研究中，MT1-MMP在CHANGE分析中再次分離出來(lái)，其中從視網(wǎng)膜RNA突變體和年齡相一致的對(duì)照RCS大鼠的制備+/-探針。RNA印跡分析在RCS大鼠視網(wǎng)膜中MT1-MMP表達(dá)揭示在該模型中MT1-MMPmRNA隨視網(wǎng)膜變性進(jìn)展而增加。該結(jié)果表明MT1-MMP坑仔多型視網(wǎng)膜變性發(fā)病機(jī)理中起普遍作用，特別是那些基于認(rèn)為缺陷影響基本RPE細(xì)胞。為了測(cè)試MT1-MMP在RCS大鼠中視網(wǎng)膜變性發(fā)病機(jī)理中功能相關(guān)，2微升體積(供應(yīng)商提供)抗MT1-MMP抗體(Chemicon，Temecula，CA)視網(wǎng)膜下注射到未成熟RCS大鼠(7天)眼中。然后隨后兩個(gè)月為視網(wǎng)膜變性過(guò)程。參考圖15，結(jié)果顯示顯著延遲高達(dá)50％視網(wǎng)膜變性，通過(guò)觀察注射后一個(gè)月，測(cè)量外核層厚度。假注射或不相關(guān)注射(即X-arrestin)沒(méi)有產(chǎn)生效果。所述結(jié)果進(jìn)一步補(bǔ)充了MT1-MMP在視網(wǎng)膜變性發(fā)病機(jī)理中的相關(guān)性，使之成為引人注意的治療關(guān)于MT1-MMP過(guò)度表達(dá)的視網(wǎng)膜變性狀態(tài)的靶點(diǎn)。實(shí)施例7—AMD中過(guò)度表達(dá)上游調(diào)控基因的AMD動(dòng)物模型AMD發(fā)病機(jī)理的研究由于缺乏合適的、實(shí)用的動(dòng)物模型例如測(cè)試候選化合物和方案而受阻。本實(shí)施例描述在小鼠中構(gòu)建動(dòng)物模型，過(guò)度表達(dá)這里已經(jīng)證實(shí)在AMD中上游調(diào)控的基因。在優(yōu)選實(shí)施例中，所述過(guò)度表達(dá)的基因是前列腺素D2合酶(prostaglandinD2synthase，PD2S)、MT1-MMP和AMDP-3，包括各自的cDNA序列這里鑒定為SEQIDNO2、SEQIDNO15和SEQIDNO17。在一些實(shí)施方式中，所述基因?yàn)闂l件過(guò)度表達(dá)型，在一些模式中只在動(dòng)物光感受器、RPE細(xì)胞和/或脈絡(luò)膜細(xì)胞。如上實(shí)施例所述，在患有AMD的人眼中、患有AMD的猴眼中以及基于RPE遺傳視網(wǎng)膜變性的RCS大鼠中觀察到MT1-MMP的過(guò)度表達(dá)或者過(guò)度活性。為建立在實(shí)驗(yàn)室小型嚙齒類例如小鼠中制造過(guò)度表達(dá)表型，轉(zhuǎn)基因小鼠過(guò)度表達(dá)例如組成結(jié)構(gòu)的MT1-MMP。特別優(yōu)選實(shí)施方式為轉(zhuǎn)基因小鼠模型，特點(diǎn)為條件過(guò)表達(dá)MT1-MMP、完全發(fā)育(fully-developed)并且所述動(dòng)物的視網(wǎng)膜老化，可以有利避免在發(fā)育期的胚胎期或者出生早期就產(chǎn)生MT1-MMP過(guò)度表達(dá)的有害作用。為了構(gòu)建一種過(guò)度條件表達(dá)MT1-MMP的動(dòng)物模型，可以使用條件表達(dá)系統(tǒng)，例如Tet基因表達(dá)系統(tǒng)(BDBiosciences，PaloAlto，CA)。已報(bào)道該系統(tǒng)在用強(qiáng)力霉素激活的幾個(gè)小時(shí)內(nèi)，可以過(guò)度表達(dá)1000倍或者更多(Gossen等人，1995)。條件表達(dá)系統(tǒng)有利于時(shí)序控制基因表達(dá)，例如過(guò)度表達(dá)MT1-MMP，引起表達(dá)的MT1-MMP轉(zhuǎn)基因開(kāi)始選擇動(dòng)物生命的時(shí)間點(diǎn)，例如成年視網(wǎng)膜完全發(fā)育。用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建，過(guò)度表達(dá)例如人或小鼠的MT1-MMP。可以使用任何合適的過(guò)度表達(dá)。使用Tet系統(tǒng)的實(shí)施例中，轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建表達(dá)嵌合四環(huán)素調(diào)控的反式作用子rtTA(Tet-On)從適合的啟動(dòng)子，以及第二轉(zhuǎn)基因包括例如人或小鼠的MT1-MMPcDNA連接到Tet響應(yīng)元件沉默啟動(dòng)子，該元件響應(yīng)所述反式作用子。對(duì)雙轉(zhuǎn)基因的小鼠給予強(qiáng)力霉素，因此構(gòu)建導(dǎo)致所述基因的過(guò)度表達(dá)，例如MT1-MMP，通過(guò)用強(qiáng)力霉素激活反式作用子，并且隨后結(jié)合激活沉默啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)基因小鼠過(guò)度表達(dá)的感興趣基因例如PD2S，MT1-MMP和AMDP-3，轉(zhuǎn)基因的表達(dá)限于表達(dá)的細(xì)胞或組織類型。正如分子生物學(xué)領(lǐng)域公知的，轉(zhuǎn)基因表達(dá)的細(xì)胞位點(diǎn)可以通過(guò)選擇組織或細(xì)胞特異性的啟動(dòng)子控制。因此一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，轉(zhuǎn)基因模型以光感受器特異性的方式過(guò)度表達(dá)MT1-MMP轉(zhuǎn)基因。為達(dá)到此目的啟動(dòng)子的例子為牛視紫紅質(zhì)啟動(dòng)子(Zack等人，1991)，例如展示在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中適合光感受器特異性表達(dá)的HRG4(UNC119)(Kobayashi等人，2000)。其它轉(zhuǎn)基因小鼠選擇過(guò)表達(dá)基因的實(shí)施方式，例如，RPE細(xì)胞中的MT1-MMP、PD2S或AMDP-3。RPE細(xì)胞特異性表達(dá)是直接的，例如，通過(guò)RPE細(xì)胞特異性啟動(dòng)子例如得自編碼RPE65基因的啟動(dòng)子區(qū)域的啟動(dòng)子(Boulanger等人，2000)，或者細(xì)胞視黃醛結(jié)合蛋白(Kennedy等人，1998)。然而其它實(shí)施方式設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)基因選擇表達(dá)脈絡(luò)膜細(xì)胞類型，例如在內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)用內(nèi)皮細(xì)胞特異性啟動(dòng)子(Cho等人，2003)，或者在黑素細(xì)胞和RPE細(xì)胞中用啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)在色素細(xì)胞類型中的酪氨酸酶表達(dá)(Giraldo等人，2003)?？梢杂梅肿由飳W(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)，通過(guò)卵母細(xì)胞注射含有轉(zhuǎn)基因的載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因小鼠(參見(jiàn)例如，Kobayashi等人，2000)。所述選擇的轉(zhuǎn)基因的過(guò)度表達(dá)應(yīng)確定在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的適合的組織或細(xì)胞內(nèi)(例如在視網(wǎng)膜、或尤其在光感受器或RPE細(xì)胞中，或者在一種或幾種脈絡(luò)膜細(xì)胞類型中)。使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)如上面的實(shí)例證實(shí)，例如使用對(duì)轉(zhuǎn)基因特異性的合適探針或引物RNA印跡分析、反轉(zhuǎn)錄PCR、用合適的抗體通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析蛋白質(zhì)，以及用多種免疫定位技術(shù)。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中發(fā)展的病理學(xué)，例如在所述動(dòng)物的視網(wǎng)膜和/或RPE/脈絡(luò)膜中，使用很多已知技術(shù)評(píng)價(jià)包括例如通過(guò)眼底鏡檢查檢測(cè)視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜電描記法(electroretinographic，ERG)測(cè)試以及光學(xué)和電子顯微鏡檢查貫穿挑選的所述動(dòng)物個(gè)體一生、通過(guò)給予強(qiáng)力霉素激活轉(zhuǎn)基因之前和之后，例如在5、10、15、20、25和30日齡(用強(qiáng)力霉素在30日齡給藥)以及在用強(qiáng)力霉素激活后的第1、2、5、10、20、30、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580、600、620、640、660、680和700天。AMD相關(guān)病理，例如脈絡(luò)膜小疣形成、新生血管化、CNW膜形成、光感受器/RPE萎縮或脈絡(luò)膜萎縮可以同過(guò)本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)檢測(cè)。實(shí)施例8—表達(dá)吞噬作用相關(guān)和/或AMD相關(guān)基因多態(tài)變異體的AMD動(dòng)物模型本實(shí)施例描述小鼠AMD和其它表達(dá)一個(gè)或多個(gè)吞噬作用相關(guān)或AMD相關(guān)基因的多態(tài)變異體視網(wǎng)膜變性模型的構(gòu)建。如上面所示，在患有AMD病人的DNA發(fā)現(xiàn)特定基因包括MT1-MMP的多態(tài)變異體具有更高的發(fā)生率。為了模擬人類狀態(tài)，表達(dá)人多態(tài)和野生型基因例如MT1-MMP的轉(zhuǎn)基因模型小鼠按照如下方法構(gòu)建。第一，優(yōu)選測(cè)定小鼠體內(nèi)MT1-MMP基因的基本狀態(tài)。例如已經(jīng)測(cè)定位于人D273N多態(tài)MT1-MMPDNA序列中的野生型氨基酸殘基在人和小鼠中都保守。在所述殘基上的多態(tài)還沒(méi)有在鼠上得到證實(shí)(鼠基因組計(jì)劃)。野生型殘基在用于轉(zhuǎn)基因構(gòu)建的鼠中的存在可以使用尾生物組織活檢、DNA分離和基因分型證實(shí)。為了構(gòu)建多態(tài)和對(duì)照(野生型)轉(zhuǎn)基因小鼠模型，分別表達(dá)人感興趣基因的多態(tài)和野生型，例如MT1-MMP、包括人多態(tài)變異體和野生型MT1-MMP殘基的cDNA連接到適合驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)基因在期望組織活細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子序列。為從頭到尾表達(dá)轉(zhuǎn)基因，啟動(dòng)子序列實(shí)例為，例如，385堿基人MT1-MMP啟動(dòng)子序列，通過(guò)PCR從人基因組DNA中擴(kuò)增制備，并事先確定驅(qū)動(dòng)基因有力的表達(dá)(Lohi等人，2000)。為了輔助識(shí)別轉(zhuǎn)基因，在一些實(shí)施方式中，MT1-MMP基因和綠色熒光蛋白作為融合蛋白表達(dá)，用合適的載體構(gòu)建，例如BioSignal載體(InVitrogen，Carlsbad，CA)。其它具體實(shí)施方式選擇在特定組織或細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因，由組織或者細(xì)胞特異性啟動(dòng)子按照上述描述驅(qū)動(dòng)。使用公知技術(shù)，轉(zhuǎn)基因小鼠通過(guò)向卵母細(xì)胞注射載體構(gòu)建。在轉(zhuǎn)基因中確定人多態(tài)和野生型變異體(例如MT1-MMP)的表達(dá)，諸如通過(guò)具有等位基因特異性的反轉(zhuǎn)錄PCR、以及表達(dá)綠色熒光蛋白融合蛋白的模式，通過(guò)檢測(cè)綠色熒光蛋白的表達(dá)，例如通過(guò)熒光顯微鏡、蛋白印跡分析、或者免疫檢測(cè)。所述轉(zhuǎn)基因分析AMD相關(guān)藥理學(xué)存在如實(shí)施例7所述。其它AMD和其它視網(wǎng)膜變性的實(shí)施方式為多轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)至少兩個(gè)已知與AMD有關(guān)的基因的多態(tài)變異體。在優(yōu)選實(shí)施例中，所述動(dòng)物表達(dá)MT1-MMP多態(tài)變異體結(jié)合至少一個(gè)其它顯示與吞噬作用和/或AMD相關(guān)的多態(tài)基因變異體。所述動(dòng)物模型的多轉(zhuǎn)基因模式為基于復(fù)合體、AMD多基因理論、假設(shè)一定數(shù)目的基因微突變、通常稱“多態(tài)”聯(lián)合作用引起或創(chuàng)造對(duì)疾病的易感性。因此，完整表現(xiàn)型AMD可能要求至少兩個(gè)聯(lián)合作用，也許更多，病源基因?qū)W用合適的多態(tài)的結(jié)合。成因基因也許對(duì)于AMD發(fā)展有附加規(guī)模作用，通過(guò)促成“共同的”(例如，如果功能相同相關(guān)，例如關(guān)于OS吞噬作用途徑)，或者“累積的”例如，如果功能不相關(guān)，但是各自關(guān)于獨(dú)立方面致病途徑導(dǎo)致AMD。優(yōu)選的多轉(zhuǎn)基因AMD模型實(shí)施方式為多轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，共表達(dá)第一MT1-MMP多態(tài)變異體和至少一個(gè)第二多態(tài)變異體，給多態(tài)變異體為至少一個(gè)其它吞噬作用相關(guān)和/或AMD相關(guān)基因。任何其他第二或更多表現(xiàn)與AMD多態(tài)變異體相關(guān)的基因可以結(jié)合任意一個(gè)MT1-MMP的多態(tài)變異體。目前已報(bào)道與AMD相互關(guān)聯(lián)的基因列于表5中。表5報(bào)道的與AMD多態(tài)性或變異有相互關(guān)系的基因因此，在一種形式的優(yōu)選實(shí)施例中，多態(tài)形式的MT1-MMP結(jié)合多態(tài)形式的至少一種其它基因，包括ABCR、載脂蛋白E(apolipoproteinE)、C-C趨化因子受體-2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、海米生丁/FIBL-6、錳超氧化歧化酶(manganesesuperoxidedismutase)、C-C趨化因子配體/單核細(xì)胞趨化蛋白1和對(duì)氧磷酶(paraoxonase)。類似地，AMD的多轉(zhuǎn)基因模型反映“集合的”病因?qū)W理論，多態(tài)變異體基因與已知的重要功能相關(guān)機(jī)制(例如OS吞噬作用)結(jié)合，以及MT1-MMP多態(tài)變異體(證明這里公開(kāi)的吞噬作用相關(guān)的基因；野生型cDNA序列SEQIDNO15；野生型氨基酸序列SEQIDNO100)。所述基因包括例如這里公開(kāi)的吞噬作用相關(guān)基因的多態(tài)變異體PHG-1至PHG-15(SEQIDNO1-14)和AMDP-2至AMDP-3(SEQIDNOS16和SEQIDNOS17)(參見(jiàn)上文表1和表2)。為了構(gòu)建所述模型，首先分離包括報(bào)道的選擇的基因的多態(tài)變異體的DNA，采用合適的擴(kuò)增引物從患有AMD的病人和未患病的年齡已知的個(gè)體的DNA中分離(例如，上述實(shí)施例5中MT1-MMP)，用報(bào)道證實(shí)存在的多態(tài)例如ABCR(D217N；G1961E)、錳超氧化歧化酶(V47A)、載脂蛋白E(C130、R176C和C130R、R176)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(A25T)和對(duì)氧磷酶(Q192R、L54M)。基因分型和突變分析使用已建立的方法完成(參見(jiàn)例如Mashima等人，1994)。證實(shí)多態(tài)與AMD的結(jié)合并且檢測(cè)AMD與之任何檢測(cè)相關(guān)性的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，例如卡方測(cè)驗(yàn)。對(duì)于那些與AMD顯示結(jié)合的多態(tài)基因，證實(shí)與它們同時(shí)出現(xiàn)的具多態(tài)MT1-MMP。首先如上所述常規(guī)構(gòu)建表達(dá)例如AMDP-3選擇基因的多態(tài)變異體的轉(zhuǎn)基因小鼠。為了構(gòu)建多轉(zhuǎn)基因小鼠，表達(dá)第一感興趣基因多態(tài)變異體的轉(zhuǎn)基因小鼠(例如MT1-MMP)與表達(dá)第二吞噬作用相關(guān)/AMD相關(guān)感興趣基因(例如AMDP-3)的多態(tài)變異體的轉(zhuǎn)基因小鼠交叉配對(duì)。通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法如RNA的等位基因特異性RT-PCR和/或感興趣的多態(tài)轉(zhuǎn)基因蛋白免疫檢測(cè)，例如，通過(guò)使用多態(tài)形式蛋白的特異性抗體，在感興趣的組織中如視網(wǎng)膜、RPE或脈絡(luò)膜中確認(rèn)了多種轉(zhuǎn)基因的表達(dá)?？蓳Q地，在其中特異性標(biāo)記蛋白序列連接到轉(zhuǎn)基因蛋白的實(shí)施方式中，使用標(biāo)記蛋白的鑒定以助于鑒定轉(zhuǎn)基因多態(tài)變異體蛋白并將其與野生型區(qū)分開(kāi)。分析多基因小鼠作為如上所述AMD相關(guān)變化的證據(jù)。引用的文獻(xiàn)為了方便起見(jiàn)，如下列出了所引用的文獻(xiàn)，因此這些文獻(xiàn)以其全部?jī)?nèi)容并入作為參考。Abdelsalam，A.，DelPriore，L.&Zarbin，M.A.Druseninage-relatedmaculardegenerationpathogenesis，naturalcourse，andlaserphotocoagulation-inducedregression.Surv.Ophthalmol.1999；441-29.AlgverePV，SeregardS.Age-relatedmaculopathypathogeneticfeaturesandnewtreatmentmodalities.ActaOphthalmolScand.2002Apr；80(2)136-43.AllikmetsR，ShroyerNF，SinghN，SeddonJM，LewisRA，BemsteinPS，PeifferA，abriskieNA，LiY，HutchinsonA，DeanM，LupskiJR，LeppertM.MutationoftheStargardtdiseasegene(ABCR)inage-relatedmaculardegeneration.Science.1997Sep19；277(5333)1805-7.AmbatiJ，AnandA，F(xiàn)ernandezS，SakuraiE，LynnBC，KuzielWA，RollinsBJandAmbatiBK.Ananimalmodelofage-relatedmaculardegenerationinsenescentCcl-2orCcr-2deficientmice.NatureMed.2003October19[Epubaheadofprint].ApteSS，F(xiàn)ukaiN，BeierDR，OlsenBR.Thematrixmetalloproteinase-14(MMP-14)geneisstructurallydistinctfromotherMMPgenesandisco-expressedwiththeTIMP-2geneduringmouseembryogenesis.JBiolChem.1997Oct10；272(41)25511-7.BerglinL，SarmanS，vanderPloegI，SteenB，MingY，ItoharaS，SeregardS，KvantaA.Reducedchoroidalneovascularmembraneformationinmatrixmetalloproteinase-2-deficientmice.InvestOphthalmolVisSci.2003Jan；44(1)403-8.BoulangerA，LiuS，HenningsgaardAA，YuS，RedmondTM.TheupstreamregionoftheRpe65geneconfersretinalpigmentepithelium-specificexpressioninvivoandinvitroandcontainscriticaloctamerandE-boxbindingsites.JBiolChem.2000Oct6；275(40)31274-82.Bok，DandHallMO.Theroleofthepigmentepitheliumintheetiologyofinheritedretinaldystrophyintherat.JCellBiol.1971Jun；49(3)664-82.BoyleD，TienLF，CooperNG，ShepherdV，McLaughlinBJ.Amannosereceptorisinvolvedinretinalphagocytosis.InvestOphthalmolVisSci.1991Apr；32(5)1464-70.BresslerNM，BresslerSB，F(xiàn)ineSL.Age-relatedmaculardegeneration.SurvOphthalmol1988May-Jun；32(6)375-413BresslerNM；TreatmentofAge-RelatedMacularDegenerationwithPhotodynamicTherapy(TAP)StudyGroup.Photodynamictherapyofsubfovealchoroidalneovascularizationinage-relatedmaculardegenerationwithverteporfintwo-yearresultsof2randomizedclinicaltrials-tapreport2.ArchOphthalmol.2001Feb；119(2)198-207.CaoJ，SatoH，TakinoT，SeikiM.TheC-terminalregionofmembranetypematrixmetalloproteinaseisafunctionaltransmembranedomainrequiredforpro-gelatinaseAactivation.JBiolChem.1995Jan13；270(2)801-5.ChoJ，LimW，JangS，LeeY.Developmentofanefficientendothelialcellspecificvectorusingpromoterand5′untranslatedsequencesfromthehumanpreproendothelin-1gene.ExpMolMed.2003Aug31；35(4)269-74.CrabbJW，MiyagiM，GuX，ShadrachK，WestKA，SakaguchiH，KameiM，HasanA，YanL，RaybornME，SalomonRG，HollyfieldJG.Drusenproteomeanalysisanapproachtotheetiologyofage-relatedmaculardegeneration.ProcNatlAcadSciUSA.2002Nov12；99(23)14682-7.D′CruzPM，YasumuraD，WeirJ，MatthesMT，AbderrahimH，LaVailMM，VollrathD.MutationofthereceptortyrosinekinasegeneMertkintheretinaldystrophicRCSrat.HumMolGenet.2000Mar1；9(4)645-51.DeS，SakmarTP.InteractionofA2Ewithmodelmembranes.Implicationstothepathogenesisofage-relatedmaculardegeneration.JGenPhysiol.2002Aug；120(2)147-57.DingH，SchwarzDS，KeeneA，AffarelB，F(xiàn)entonL，XiaX，ShiY，ZamorePD，XuZ.SelectivesilencingbyRNAiofadominantallelethatcausesamyotrophiclateralsclerosis.Cell.2003Aug；2(4)209-17.ElbashirSM，LendeckelW，TuschlT.RNAinterferenceismediatedby21-and22-nucleotideRNAs.GenesDev.2001Jan15；15(2)188-200.Evans，J.R.Riskfactorsforage-relatedmaculardegeneration.Prog.Retin.Eye.Res.20，227-253，2001.FineSL，BergerJW，MaguireMG，HoAC.Age-relatedmaculardegeneration.NEnglJMed.2000Feb17；342(7)483-92.FloodV，SmithW，WangJJ，ManziF，WebbK，MitchellP.Dietaryantioxidantintakeandincidenceofearlyage-relatedmaculopathytheBlueMountainsEyeStudy.Ophthalmology.2002Dec；109(12)2272-8.GassJD，JallowS，DavisB.Adultvitelliformmaculardetachmentoccurringinpatientswithbasallaminardrusen.AmJOphthalmol.1985Apr15；99(4)445-59.GossenM，F(xiàn)reundliebS，BenderG，MullerG，HillenW，BujardH.Transcriptionalactivationbytetracyclinesinmammaliancells.Science.1995Jun23；268(5218)1766-9.GiraldoP，RegalesL，LavadoA，TovarV，Garcia-DiazA，JimenezE，MontoliuL.IL-22Themousetyrosinasegenestructuralandfunctionalstudiesintransgenicmice.PigmentCellRes.2003Oct；16(5)582.GottliebJL.Age-relatedmaculardegeneration.JAMA2002Nov13；288(18)2233-6GreenWR.Histopathologyofage-relatedmaculardegeneration.MolVis.1999Nov3；527.GrishokA，TabaraH，MelloCC.GeneticrequirementsforinheritanceofRNAiinC.elegans.Science.2000Mar31；287(5462)2494-7.GuymerR.Thegeneticsofage-relatedmaculardegeneration.ClinExpOptom.2001Jul；84(4)182-189.HagemanGS，MullinsRF，RussellSR，JohnsonLV，AndersonDH.Vitronectinisaconstituentofoculardrusenandthevitronectingeneisexpressedinhumanretinalpigmentedepithelialcells.FASEBJ.1999Mar；13(3)477-84.Hageman，G.S.，Luthert，P.J.，Chong，N.H.V.，Johnson，L.V.，Anderson，D.H.&Mullins，R.F.Anintegratedhypothesisthatconsidersdrusenasbiomarkersofimmune-mediatedprocessesattheRPE-Bruch′smembraneinterfaceinagingandage-relatedmaculardegeneration.Prog.RetinalEyeRes.2001；20705-732.HeibaIM，ElstonRC，KleinBE，KleinR.Siblingcorrelationsandsegregationanalysisofage-relatedmaculopathytheBeaverDamEyeStudy.GenetEpidemiol.1994；11(1)51-67.HoganMJ.Roleoftheretinalpigmentepitheliuminmaculardisease.TransAmAcadOphthalmolOtolaryngol.1972Jan-Feb；76(1)64-80.HusainD，AmbatiB，AdamisAP，MillerJW.Mechanismsofage-relatedmaculardegeneration.OphthalmolClinNorthAm.2002Mar；15(1)87-91.HutchinsonA，DeanM，LupskiJR，LeppertM.MutationoftheStargardtdiseasegene(ABCR)inage-relatedmaculardegeneration.Science.1997Sep19；277(5333)1805-7.HymanL，NeborskyR.Riskfactorsforage-relatedmaculardegenerationanupdate.CurrOpinOphthalmol.2002Jun；13(3)171-5.IkedaT，ObayashiH，HasegawaG，NakamuraN，YoshikawaT，ImamuraY，KoizumiK，KinoshitaS.Paraoxonasegenepolymorphismsandplasmaoxidizedlow-densitylipoproteinlevelaspossibleriskfactorsforexudativeage-relatedmaculardegeneration.AmJOphthalmol.2001Aug；132(2)191-5.KatzML.Incompleteproteolysismaycontributetolipofuscinaccumulationintheretinalpigmentepithelium.AdvExpMedBiol.1989；266109-16.KennedyCJ，RakoczyPE，ConstableIJ.Lipofuscinoftheretinalpigmentepitheliumareview.Eye.1995；9(Pt6)763-71.KennedyBN，GoldflamS，ChangMA，CampochiaroP，DavisAA，ZackDJ，CrabbJW.Transcriptionalregulationofcellularretinaldehyde-bindingproteinintheretinalpigmentepithelium.Aroleforthephotoreceptorconsensuselement.JBiolChem.1998Mar6；273(10)5591-8.KimuraK，IsashikiY，SonodaS，Kakiuchi-MatsumotoT，OhbaN.Geneticassociationofmanganesesuperoxidedismutasewithexudativeage-relatedmaculardegeneration.AmJOphthalmol.2000Dec；130(6)769-73.KlaverCC，KliffenM，vanDuijnCM，HofmanA，CrutsM，GrobbeeDE，vanBroeckhovenC，deJongPT.GeneticassociationofapolipoproteinEwithage-relatedmaculardegeneration.AmJHumGenet.1998Jul；63(1)200-6.KleinR，KleinBE，LintonKL.Prevalenceofage-relatedmaculopathy.TheBeaverDamEyeStudy.Ophthalmology.1992Jun；99(6)933-43.KleinML，MauldinWM，StoumbosVD.Heredityandage-relatedmaculardegeneration.Observationsinmonozygotictwins.ArchOphthalmol.1994Jul；112(7)932-7.KleinML，SchultzDW，EdwardsA，MatiseTC，RustK，BerselliCB，TrzupekK，WeleberRG，OttJ，WirtzMK，AcottTS.Age-relatedmaculardegeneration.Clinicalfeaturesinalargefamilyandlinkagetochromosome1q.ArchOphthalmol.1998Aug；116(8)1082-8.KobayashiA，HigashideT，HamasakiD，KubotaS，SakumaH，AnW，F(xiàn)ujimakiT，McLarenMJ，WeleberRG，InanaG.HRG4(UNC119)mutationfoundincone-roddystrophycausesretinaldegenerationinatransgenicmodel.InvestOphthalmolVisSci.2000Oct；41(11)3268-77.LaVailMM.Rodoutersegmentdisksheddinginratretinarelationshiptocycliclighting.Science.1976Dec3；194(4269)1071-4.LinH，CleggDO.Integrinalphavbeta5participatesinthebindingofphotoreceptorrodoutersegmentsduringphagocytosisbyculturedhumanretinalpigmentepithelium.InvestOphthalmolVisSci.1998Aug；39(9)1703-12.LohiJ，LehtiK，ValtanenH，ParksWC，Keski-OjaJ.Structuralanalysisandpromotercharacterizationofthehumanmembrane-tyPematrixmetalloproteinase-1(MT1-MMP)gene.Gene.242(1-2)75-86，2000Jan25.MashimaY，ShionoT，InanaG.Rapidandefficientmolecularanalysisofgyrateatrophyusingdenaturinggradientgelelectrophoresis.InvestOphthalmolVisSci.1994Mar；35(3)1065-70.McLarenMJ，HolderbyM，InanaG.PhagocytosisofROSbyimmortalratRPEcelllines.InvestOphthalmolVisSci34A817，1993a.McLarenMJ，SasabeT，LiCY，BrownME，InanaG.Spontaneouslyarisingimmortalcelllineofratretinalpigmentedepithelialcells.ExpCellRes.1993bFeb；204(2)311-20.McLarenMJ，SasabeT，LiCY，BrownME，InanaG.Doublefluorescentvitalassayofphagocytosisbyculturedretinalpigmentepithelialcells.InvestOphthalmolVisSci.1993cFeb；34(2)317-26.McLarenMJ.Kineticsofrodoutersegmentphagocytosisbyculturedretinalpigmentepithelialcells.Relationshiptocellmorphology.InvestOphthalmolVisSci.1996Jun；37(7)1213-24.MeyersSM，GreeneT，GutmanFA.Atwinstudyofage-relatedmaculardegeneration.AmJOphthalmol.1995Dec；120(6)757-66.MiceliMV，NewsomeDA，TateDJJr.Vitronectinisresponsibleforserum-stimulateduptakeofrodoutersegmentsbyculturedretinalpigmentepithelialcells.InvestOphthalmolVisSci.1997Jul；38(8)1588-97.MitchellP，WangJJ，SmithW，LeederSR.Smokingandthe5-yearincidenceofage-relatedmaculopathytheBlueMountainsEyeStudy.ArchOphthalmol.2002Oct；120(10)1357-63.OkuN，MatsukawaM，YamakawaS，AsaiT，YaharaS，HashimotoF，AkizawaT.Inhibitoryeffectofgreenteapolyphenolsonmembrane-type1matrixmetalloproteinase，MT1-MMP.BiolPharmBull.2003Sep；26(9)1235-8.PeiD，WeissSJ.Transmembrane-deletionmutantsofthemembrane-typematrixmetalloproteinase-1processprogelatinaseAandexpressintrinsicmatrix-degradingactivity.JBiolChem.1996Apr12；271(15)9135-40.SarksJP，SarksSH，KillingsworthMC.Evolutionofgeographicatrophyoftheretinalpigmentepithelium.Eye.1988；2(Pt5)552-77.SatoH，TakinoT，OkadaY，CaoJ，ShinagawaA，YamamotoE，SeikiM.Amatrixmetalloproteinaseexpressedonthesurfaceofinvasivetumourcells.Nature.1994Jul7；370(6484)61-5.SchultzDW，Klein，ML，HumpertAJ，LuzierCW，PersunV，/schainM，MahanA，RunckelC，CasseraM，VittalV，DoyleTM，MartinTM，WeleberR，F(xiàn)rancisPJandAcottTS.AnalysisoftheARMD1locusevidencethatamutationinhemicentin-1isassociatedwithage-relatedmaculardegenerationinalargefamily.HumanMolecularGeneticsAdvanceAccess，publishedonlineOctober21，2003.ShabanH，BorrasC，VinaJ，RichterC.PhosphatidylglycerolpotentlyprotectshumanretinalpigmentepithelialcellsagainstapoptosisinducedbyA2E，acompoundsuspectedtocauseage-relatedmaculadegeneration.ExpEyeRes.2002Jul；75(1)99-108.SimonelliF，MargaglioneM，TestaF，CappucciG，ManittoMP，BrancatoR，RinaldiE.ApolipoproteinEpolymorphismsinage-relatedmaculardegenerationinanItalianpopulation.OphthalmicRes.2001Nov-Dec；33(6)325-8.SongE，LeeSK，WangJ，InceN，OuyangN，MinJ，ChenJ，ShankarP，LiebermanJ.RNAinterferencetargetingFasprotectsmicefromfulminanthepatitis.NatMed.2003Mar；9(3)347-51.Epub2003Feb10StoneEM，WebsterAR，VandenburghK，StrebLM，HockeyRR，LoteryAJ，SheffieldVC.AllelicvariationinABCRassociatedwithStargardtdiseasebutnotage-relatedSuiG，SoohooC，AffarelB，GayF，ShiY，F(xiàn)orresterWC，ShiY.ADNAvector-basedRNAitechnologytosuppressgeneexpressioninmammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA.2002Apr16；99(8)5515-20.VickersTA，KooS，BennettCF，CrookeST，DeanNM，BakerBF.EfficientreductionoftargetRNAsbysmallinterferingRNAandRNaseH-dependentantisenseagents.Acomparativeanalysis.JBiolChem.2003Feb28；278(9)7108-18.Epub2002Dec23.WeeksDE，ConleyYP，MahTS，PaulTO，MorseL，Ngo-ChangJ，DaileyJP，F(xiàn)errellRE，GorinMB.Afullgenomescanforage-relatedmaculopathy.HumMolGenet.2000May22；9(9)1329-49.WinklerBS，BoultonME，GottschJD，SternbergP.Oxidativedamageandage-relatedmaculardegeneration.MolVis.1999Nov3；532.YoungRW，BokD.Participationoftheretinalpigmentepitheliumintherodoutersegmentrenewalprocess.JCellBiol.1969Aug；42(2)392-403.ZackDJ，BennettJ，WangY，DavenportC，KlaunbergB，GearhartJ，NathansJ.Unusualtopographyofbovinerhodopsinpromoter-lacZfusiongeneexpressionintransgenicmouseretinas.Neuron.1991Feb；6(2)187-99.ZamorePD.AncientpathwaysprogrammedbysmallRNAs.Science.2002May17；296(5571)1265-9.ZurdelJ，F(xiàn)inckhU，MenzerG，NitschRM，RichardG.CST3genotypeassociatedwithexudativeagerelatedmaculardegeneration.BrJophthalmol.2002Feb；86(2)214-9.序列表<110>邁阿密大學(xué)<120>檢測(cè)和治療視網(wǎng)膜疾病的方法和組合物<130>P6910ITC<140><141>2005-02-09<150>US10/773,446<151>2004-02-09<160>131<170>PatentInversion3.2<210>1<211>2110<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>1<210>2<211>775<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>2<210>3<211>2139<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>3<210>4<211>166<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>4<210>5<211>1618<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>5<210>6<211>1669<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>6<210>7<211>1850<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>7<210>8<211>1646<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>8<210>9<211>1559<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>9<210>10<211>910<212>DNA<213>智人(Homosapiems)<400>10<210>11<211>2740<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>11<210>12<211>1476<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>12<210>13<211>1679<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>13<210>14<211>1962<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>14<210>15<211>2365<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>15<210>16<211>8595<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>16<210>17<211>3488<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>17<210>18<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>18<210>19<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>19<210>20<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>20<210>21<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>21<210>22<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>22<210>23<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>23<210>24<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>24<210>25<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>25<210>26<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>26<210>27<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>27<210>28<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>28<210>29<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>29<210>30<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>30<210>31<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>31<210>32<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>32<210>33<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>33<210>34<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>34<210>35<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>35<210>36<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>36<210>37<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>37<210>38<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>38<210>39<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>39<210>40<211>21<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>40<210>41<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>41<210>42<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>42<210>43<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>43<210>44<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>44<210>45<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>45<210>46<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>46<210>47<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>47<210>48<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>48<210>49<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>49<210>50<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>50<210>51<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>51<210>52<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>52<210>53<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>53<210>54<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>54<210>55<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>55<210>56<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>56<210>57<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>57<210>58<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>58<210>59<211>286<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>59<210>60<211>286<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>60<210>61<211>286<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>61<210>62<211>7318<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>62<210>63<211>1156<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>63<210>64<211>2273<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>64<210>65<211>818<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>65<210>66<211>18209<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>66<210>67<211>1026<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>67<210>68<211>757<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>68<210>69<211>2395<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>69<210>70<211>74<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>70<210>71<211>55<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>71<210>72<211>52<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>72<210>73<211>45<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>73<210>74<211>43<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>74<210>75<211>37<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>75<210>76<211>35<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>76<210>77<211>34<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>77<210>78<211>34<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>78<210>79<211>190<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>79<210>80<211>170<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>80<210>81<211>38<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>81<210>82<211>38<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>82<210>83<211>37<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>83<210>84<211>335<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>84<210>85<211>459<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>85<210>86<211>142<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>86<210>87<211>449<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>87<210>88<211>416<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>88<210>89<211>110<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>89<210>90<211>814<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>90<210>91<211>55<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>91<210>92<211>54<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>92<210>93<211>51<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>93<210>94<211>43<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>94<210>95<211>39<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>95<210>96<211>36<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>96<210>97<211>33<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>97<210>98<211>317<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>98<210>99<211>375<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>99<210>100<211>582<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>100<210>101<211>2285<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>101<210>102<211>88<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>102<210>103<211>69<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>103<210>104<211>65<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>104<210>105<211>61<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>105<210>106<211>58<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>106<210>107<211>55<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>107<210>108<211>50<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>108<210>109<211>49<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>109<210>110<211>48<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>110<210>111<211>48<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>111<210>112<211>45<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>112<210>113<211>45<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>113<210>114<211>44<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>114<210>115<211>41<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>115<210>116<211>39<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>116<210>117<211>39<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>117<210>118<211>39<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>118<210>119<211>34<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>119<210>120<211>33<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>120<210>121<211>53<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>121<210>122<211>260<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>122<210>123<211>53<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>123<210>124<211>2273<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>124<210>125<211>317<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>125<210>126<211>374<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>126<210>127<211>146<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>127<210>128<211>5622<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>128<210>129<211>222<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>129<210>130<211>99<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>130<210>131<211>355<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>13權(quán)利要求1、一種延遲或逆轉(zhuǎn)受試者視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括將具有視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)或者處在發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的危險(xiǎn)中的受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜細(xì)胞與調(diào)節(jié)年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因的表達(dá)或活性的試劑相接觸。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因選自由人未知吞噬基因-1、前列腺素D2合酶、髓磷脂堿蛋白、人未知吞噬基因-4、人未知吞噬基因-5、人花生樣2/分隔蛋白4、毛狀蛋白樣1、叢生蛋白、酪蛋白激酶1ε、鐵蛋白重多肽1、metargidin、人未知吞噬基因-13、視黃醛結(jié)合蛋白1、肌動(dòng)蛋白γ1、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白和人未知年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白所組成的組中；所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因包括分別鑒定為SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO3、SEQIDNO4、SEQIDNO5、SEQIDNO6、SEQIDNO7、SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO11、SEQIDNO12、SEQIDNO13、SEQIDNO14、SEQIDNO15、SEQIDNO16和SEQIDNO17的核苷酸序列。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因?yàn)槟は嚓P(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1；所述基因包括SEQIDNO15的核苷酸序列。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)為年齡相關(guān)黃斑變性。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述受試者患有年齡相關(guān)黃斑變性。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述受試者處在發(fā)展成年齡相關(guān)黃斑變性的危險(xiǎn)中。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，該方法延遲視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，該方法逆轉(zhuǎn)視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)。9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述細(xì)胞為光感受器、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞或米勒細(xì)胞，或者為選自由內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、黑素細(xì)胞或成纖維細(xì)胞所組成的組中的脈絡(luò)膜細(xì)胞類型。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因?yàn)槟は嚓P(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1，所述膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1位于所述細(xì)胞內(nèi)。11、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因?yàn)槟は嚓P(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1，所述膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1位于細(xì)胞外基質(zhì)中。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述細(xì)胞外基質(zhì)為光感受器間基質(zhì)。13、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述試劑下游調(diào)控年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因的表達(dá)，所述試劑選自由膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、前列腺素D2合酶和年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白所組成的組中。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述試劑為選自由核酶、反義RNA、干擾RNA分子和三螺旋形成分子所組成的組中的寡聚核苷酸。15、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述試劑為特異性結(jié)合膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、前列腺素D2合酶和年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白的蛋白或肽的抗體。16、根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述抗體中和膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、前列腺素D2合酶或年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白的至少一種生物學(xué)活性。17、根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因?yàn)槟は嚓P(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1，所述生物學(xué)活性為激活明膠酶A或降解細(xì)胞外基質(zhì)。18、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述試劑為小分子。19、一種確定受試者處在發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的危險(xiǎn)中的方法，該方法包括篩選受試者的核苷酸序列在至少一種吞噬作用相關(guān)或年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)基因中存在至少一種多態(tài)性，其中，所述多態(tài)性的存在表明該受試者比沒(méi)有出現(xiàn)多態(tài)性的受試者的發(fā)展成視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的危險(xiǎn)性高。20、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述吞噬作用相關(guān)基因包括選自由SEQIDNO1至SEQIDNO17所組成的組中的核苷酸序列。21、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)基因包括選自由SEQIDNO2、SEQIDNO9、SEQIDNO10、SEQIDNO16和SEQIDNO17所組成的組中的核苷酸序列。22、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述多態(tài)性在吞噬作用相關(guān)或年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)基因的內(nèi)含子序列、外顯子序列或啟動(dòng)子序列內(nèi)。23、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述多態(tài)性在人MT1-MMP基因區(qū)域內(nèi)，該基因使用擴(kuò)增引物通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增，該擴(kuò)增引物具有選自由SEQIDNO18和SEQIDNO19、SEQIDNO20和SEQIDNO21、SEQIDNO22和SEQIDNO23、SEQIDNO24和SEQIDNO25、SEQIDNO26和SEQIDNO27、SEQIDNO28和SEQIDNO29、SEQIDNO30和SEQIDNO31、SEQIDNO32和SEQIDNO33、SEQIDNO34和SEQIDNO35、SEQIDNO36和SEQIDNO37、SEQIDNO38和SEQIDNO39、SEQIDNO40和SEQIDNO41、SEQIDNO42和SEQIDNO43、SEQIDNO44和SEQIDNO45、SEQIDNO46和SEQIDNO47、SEQIDNO48和SEQIDNO49、SEQIDNO50和SEQIDNO51、SEQIDNO52和SEQIDNO53、SEQIDNO54和SEQIDNO55、SEQIDNO56和SEQIDNO57以及SEQIDNO57和SEQIDNO58所組成的組中的核苷酸序列。24、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述多態(tài)在人膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1基因的外顯子5的285堿基對(duì)片段內(nèi)。25、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述多態(tài)為D273N錯(cuò)義多態(tài)。26、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述多態(tài)為P259P同義多態(tài)。27、一種治療受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括將包括編碼試劑的核苷酸的載體與受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜細(xì)胞接觸，所述試劑下游調(diào)控或抑制年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因的mRNA或蛋白質(zhì)的表達(dá)。28、根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)基因選自由前列腺素D2合酶、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1和年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白所組成的組中；所述基因各自包括SEQIDNO2、SEQIDNO15和SEQIDNO17的核苷酸序列。29、根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述試劑選自由核酶、反義RNA或干擾RNA(RNAi)分子所組成的組中。30、一種治療受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括將包括編碼野生型或多態(tài)變異體年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)蛋白的核苷酸的載體與受試者的視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜細(xì)胞接觸。31、一種用于避免或治療受試者視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的組合物，該組合物含有阻斷年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)蛋白的表達(dá)或活性的試劑。32、根據(jù)權(quán)利要求31所述的組合物，其中，所述蛋白為膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、前列腺素D2合酶或年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白。33、一種用于防止或治療受試者視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜變性疾病或狀態(tài)的組合物，該組合物含有包括編碼野生型或多態(tài)型年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)蛋白的核苷酸的載體。34、根據(jù)權(quán)利要求33所述的組合物，其中，所述年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)蛋白為膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1。35、一種非人類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，該動(dòng)物包括分離的核苷酸構(gòu)建體，所述構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型過(guò)度表達(dá)膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、前列腺素D2合酶或年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白。36、根據(jù)權(quán)利要求35所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述過(guò)度表達(dá)受條件控制。37、根據(jù)權(quán)利要求36所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述細(xì)胞類型為選自由光感受器、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和米勒細(xì)胞所組成的組中的視網(wǎng)膜細(xì)胞類型；或者為選自由內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、黑素細(xì)胞和成纖維細(xì)胞所組成的組中的脈絡(luò)膜細(xì)胞類型。38、一種非人類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，該動(dòng)物包括分離的核苷酸構(gòu)建體，所述構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型表達(dá)年齡相關(guān)黃斑變性吞噬相關(guān)或吞噬作用相關(guān)核苷酸和/或蛋白質(zhì)的多態(tài)變異體。39、根據(jù)權(quán)利要求38所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述多態(tài)變異體與患有年齡相關(guān)黃斑變性的人群相對(duì)于正常對(duì)照人群的發(fā)病率增加相關(guān)。40、一種非人類多轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，該動(dòng)物包括至少一個(gè)第一分離的核苷酸構(gòu)建體和至少一個(gè)第二分離的核苷酸構(gòu)建體，所述第一構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型表達(dá)與患有年齡相關(guān)黃斑變性的人群相對(duì)于正常對(duì)照人群的發(fā)病率增加相關(guān)的第一基因的第一多態(tài)變異體，所述第二構(gòu)建體引起該動(dòng)物的至少一種細(xì)胞類型表達(dá)與患有年齡相關(guān)黃斑變性的人群相對(duì)于正常對(duì)照人群的發(fā)病率增加相關(guān)或者與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬作用相關(guān)的第二基因的第二多態(tài)變異體。41、根據(jù)權(quán)利要求40所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述第一基因?yàn)槟は嚓P(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1基因。42、根據(jù)權(quán)利要求41所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述第二基因選自由三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子基因、載脂蛋白E、C-C趨化因子受體-2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C、海米生丁/FIBL-6、錳超氧化歧化酶、C-C趨化因子配體/單核細(xì)胞趨化蛋白1和對(duì)氧磷酶所組成的組中。43、根據(jù)權(quán)利要求41所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述第二基因與所述視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬作用相關(guān)，選自由人未知吞噬基因-1、前列腺素D2合酶、髓磷脂堿蛋白、人未知吞噬基因-4、人未知吞噬基因-5、人花生樣2/分隔蛋白4、毛狀蛋白樣1、叢生蛋白、酪蛋白激酶1ε、鐵蛋白重多肽1、metargidin、人未知知吞噬基因-13、視黃醛結(jié)合蛋白1、肌動(dòng)蛋白γ1、膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1、SWI/SNF相關(guān)/OSA-1核蛋白和人未知年齡相關(guān)黃斑變性吞噬-3蛋白所組成的組中。44、根據(jù)權(quán)利要求35、38或40所述的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中，所述動(dòng)物為小鼠。45、一種編碼吞噬作用相關(guān)蛋白的分離的核苷酸，所述核苷酸包括SEQIDNO1。46、一種編碼吞噬作用相關(guān)蛋白的分離的核苷酸，所述核苷酸包括SEQIDNO4。47、一種編碼吞噬作用相關(guān)蛋白的分離的核苷酸，所述核苷酸包括SEQIDNO5。48、一種編碼吞噬作用相關(guān)蛋白的分離的核苷酸，所述核苷酸包括SEQIDNO12。49、一種編碼吞噬作用相關(guān)蛋白的分離的核苷酸，所述核苷酸包括SEQIDNO17。50、一種包括大量分離的寡聚核苷酸序列的基因陣列，所述序列位于自然人年齡相關(guān)黃斑變性相關(guān)和/或吞噬作用相關(guān)基因的內(nèi)含子序列、外顯子序列或者啟動(dòng)子序列中，其中，所述陣列中由所述寡聚核苷酸序列所表示的基因編碼cDNA，該cDNA包括SEQIDNO1-SEQIDNO17和SEQIDNO62-SEQIDNO69的核苷酸序列。51、根據(jù)權(quán)利要求50所述的基因陣列，其中，至少一個(gè)基因?yàn)槟は嚓P(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1，所述寡聚核苷酸序列包括膜相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶1的基因序列多態(tài)變異體P259P或D273N。52、根據(jù)權(quán)利要求51所述的基因陣列，其中，所述陣列還包括至少一個(gè)寡聚核苷酸序列，該序列包括年齡相關(guān)黃斑變性相關(guān)基因的至少一個(gè)多態(tài)變異體；所述多態(tài)突變體基因選自由三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子(D217N；G1961E)、錳超氧化歧化酶(V47A)、載脂蛋白E(C130、R176C和C130R、R176)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(A25T)和對(duì)氧磷酶(Q192R、L54M)所組成的組中。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了關(guān)于年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)和/或眼視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞吞噬作用的多重基因，以及檢測(cè)和治療AMD、基于所述吞噬作用-相關(guān)和/或AMD-相關(guān)基因的其它視網(wǎng)膜變性狀態(tài)的方法和組合物。還提供了用于測(cè)試AMD的治療化合物和治療方案的動(dòng)物模型、包括吞噬作用-相關(guān)和/或AMD-相關(guān)基因的多態(tài)變異體的基因陣列，可用于對(duì)來(lái)自受試者核苷酸樣品的遺傳篩選以在與AMD相關(guān)的多個(gè)基因中獲得多態(tài)變異體序列分布型。文檔編號(hào)A61K31/557GK101426534SQ200580012240公開(kāi)日2009年5月6日申請(qǐng)日期2005年2月9日優(yōu)先權(quán)日2004年2月9日發(fā)明者G·伊南納,M·麥克拉倫申請(qǐng)人:G·伊南納,M·麥克拉倫