專利名稱：用順鉑和egfr－抑制劑治療的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及意欲治療癌癥的組合物和制備藥物的方法。本發(fā)明特別涉及用于制備含有順鉑和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)激酶抑制劑的藥物的方法。
癌癥是各種各樣的細(xì)胞惡性腫瘤的通用名，其特征為生長(zhǎng)失控、缺少分化、和能夠侵襲局部組織并轉(zhuǎn)移的能力。這些惡性腫瘤以不同的發(fā)病率影響體內(nèi)的每種組織和器官。
在過去的幾十年中已經(jīng)開發(fā)了多種用于治療各種類型癌癥的治療劑。最常用的抗癌劑類型包括DNA烷化劑(例如環(huán)磷酰胺，異環(huán)磷酰胺)，抗代謝物(例如氨甲蝶呤，葉酸拮抗劑，和5-氟尿嘧啶，嘧啶拮抗劑)，微管破壞劑(例如長(zhǎng)春新堿，長(zhǎng)春堿，紫杉醇)，DNA插入劑(例如阿霉素，柔紅霉素，順鉑)和激素療法(例如他莫昔芬，氟他胺)。
根據(jù)國(guó)家癌癥協(xié)會(huì)的信息，在美國(guó)肺癌是癌癥死亡的唯一最大原因，并且在國(guó)家中造成近乎30％癌癥死亡。根據(jù)世界健康組織的信息，每年全世界存在多于一百二十萬(wàn)病例的肺癌和支氣管癌，導(dǎo)致每年約一百一十萬(wàn)死亡。NSCLC是肺癌最普遍的形式，占所有病例的約80％。對(duì)肺癌的治療選擇方案是外科手術(shù)，放射療法和化學(xué)療法，單獨(dú)使用或組合使用，這取決于癌癥的形式和階段。對(duì)于晚期NSCLC，已經(jīng)顯示有效的藥劑包括順鉑(Cisp；如platinol)，卡鉑，紫杉醇，多西他賽，托泊替康，伊立替康，長(zhǎng)春瑞濱，吉西他濱和EGFR激酶抑制劑gefitinib和埃洛替尼(erlotinib)。含順鉑和含卡鉑的組合化學(xué)療法方案已經(jīng)顯示產(chǎn)生目標(biāo)應(yīng)答率，其比用單一藥劑化學(xué)療法獲得的要高(Weick，J.K等(1991)J.Clin.Oncol.9(7)1157-1162)。已經(jīng)報(bào)道紫杉醇在IV期患者中具有單一藥劑活性，應(yīng)答率在21％-24％(Murphy W.L.等(1993)J.Natl.Cancer Inst.85(5)384-388)。紫杉醇組合已經(jīng)顯示相對(duì)高的應(yīng)答率，顯著的1年存活和肺癌癥狀的減輕(Johnson D.H.等(1996)J.Clin.Oncol.14(7)2054-2060)。利用紫杉醇加上卡鉑療法，應(yīng)答率在27％-53％，32％-54％的1年存活率。然而，這種治療的效力是這樣的以致于目前沒有特定的療法可以被認(rèn)為是標(biāo)準(zhǔn)療法。
表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)激酶或其配體TGF-α的過表達(dá)與許多癌癥時(shí)常相關(guān)，所述癌癥包括乳腺癌、肺癌、直腸結(jié)腸癌和頭頸癌(SalomonD.S.，等(1995)Crit.Rev.Oncol.Hematol.19183-232；Wells，A.(2000)Signal，14-11)，并且據(jù)信其還對(duì)這些腫瘤的惡性生長(zhǎng)起作用。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在EGFR基因中的特定缺失-突變?cè)黾恿思?xì)胞致瘤性(Halatsch，M-E.等(2000)J.Neurosurg.92297-305；Archer，G.E.等(1999)Clin.Cancer Res.52646-2652)。EGFR刺激的信號(hào)途徑的活化促進(jìn)了多個(gè)可能促進(jìn)癌癥的進(jìn)程，例如增殖，血管生成，細(xì)胞遷移和侵襲，減少的細(xì)胞凋亡，和誘導(dǎo)藥物抗性。將直接抑制EGFR激酶活性的化合物用作抗腫瘤制劑的開發(fā)，以及將通過阻斷EGFR活化而降低EGFR激酶活性的抗體用作抗腫瘤制劑，是研究的熱點(diǎn)(de Bono J.S.和Rowinsky，E.K.(2002)Trends in Mol.Medicine 8S19-S26；Dancey，J.和Sausville，E.A.(2003)Nature Rev.DrugDiscovery 292-313)。一些研究已經(jīng)證實(shí)或者公開當(dāng)與某些其它抗癌劑或者化療劑或治療并用的時(shí)候，一些EGFR激酶抑制劑可以改善殺傷腫瘤細(xì)胞或者瘤。(例如Raben，D.等(2002)Semin.Oncol.2937-46；Herbst，R.S.等(2001)Expert Opin.Biol.Ther.1719-732；Magne，N等(2003)Clin.Can.Res.94735-4732；Magne，N.等(2002)British Journal of Cancer86819-827；Torrance，C.J.等(2000)Nature Med.61024-1028；Gupta，R.A.和DuBois，R.N.(2000)Nature Med.6974-975；Tortora，等(2003)Clin.Cancer Res.91566-1572；Solomon，B.等(2003)Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.55713-723；Krishnan，S.等(2003)Frontiers in Bioscience 8，el-13；Huang，S等(1999)Cancer Res.591935-1940；Contessa，J.N.等(1999)Clin.Cancer Res.5405-411；Li，M.等Clin.(2002)Cancer Res.83570-3578；Ciardiello，F(xiàn).等(2003)Clin.Cancer Res.91546-1556；Ciardiello，F(xiàn).等(2000)Clin.Cancer Res.63739-3747；Grunwald，V.和Hidalgo，M.(2003)J.Nat.Cancer Inst.95851-867；Seymour L.(2003)Current Opin.Investig.Drugs 4(6)658-666；Khalil，M.Y.等(2003)Expert Rev.AnticancerTher.3367-380；Bulgaru，A.M.等(2003)Expert Rev.AnticancerTher.3269-279；Dancey，J.和Sausville，E.A.(2003)Nature Rev.DrugDiscovery 292-313；Kim，E.S.等(2001)Current Opinion Oncol.13506-513；Arteaga，C.L.和Johnson，D.H.(2001)Current Opinion Oncol.13491-498；Ciardiello，F(xiàn).等(2000)Clin.Cancer Res.62053-2063；專利公開號(hào)US2003/0108545；US 2002/0076408；和US 2003/0157104；以及國(guó)際專利公開號(hào)WO 99/60023；WO01/12227；WO 02/055106；WO 03/088971；WO01/34574；WO 01/76586；WO 02/05791；和WO 02/089842)。
抗瘤藥物應(yīng)該理想地選擇性殺傷癌細(xì)胞，具有相對(duì)于其對(duì)非惡性腫瘤細(xì)胞毒性而言更為寬泛的治療指數(shù)。即使延長(zhǎng)暴露于該藥物，其同樣保留針對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的效力。遺憾的是，沒有一種目前的化療具有這種理想的特性。相反，多數(shù)具有非常窄的治療指數(shù)。此外，癌細(xì)胞暴露于輕微亞致死濃度的化療劑通常會(huì)形成對(duì)該藥劑的抗性，形成對(duì)一些其它抗瘤制劑的交叉抗性也是很常見的。
因此，需要治療瘤形成和其它增生疾病的更有效的療法。用于提高目前藥物治療效力的策略涉及改變它們的給藥時(shí)間表，以及與其它抗癌劑或者生化調(diào)節(jié)劑結(jié)合使用。眾所周知的聯(lián)合治療是一種這樣的方法其可以產(chǎn)生相對(duì)于單獨(dú)使用每一種治療性相關(guān)劑量的制劑更好的效力和減少的副作用。在一些情況下，藥物組合的效力是加成性的(組合的效力基本上等于每種藥物單獨(dú)效力的總和)，但在其他情形中，效力是增效性的(組合的效力大于每種藥物單獨(dú)給藥的效力的總和)。
然而，仍急需對(duì)肺癌和其它癌癥的改善治療。本發(fā)明提供了抗癌組合療法，其降低了效力所需的每種組分的劑量，從而降低了與每種藥劑相關(guān)的副作用，而同時(shí)保持或者增加了治療價(jià)值。在此描述的本發(fā)明提供了新的藥物組合，和使用該藥物組合來(lái)治療肺癌和其它癌癥的方法。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明提供了一種用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用EGFR激酶抑制劑和順鉑。優(yōu)選地，意欲同時(shí)或者先后給予患者治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑的組合，并使用或者不使用另外的藥劑或者療法，例如其它的抗癌藥物或者放射療法。
本發(fā)明還包括藥物組合物，其包括結(jié)合有藥用載體的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合。
可用于實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選EGFR激酶抑制劑實(shí)例是化合物鹽酸埃洛替尼(erlotinib HCl)(也稱為TarcevaTM)。


圖1隨時(shí)間的埃洛替尼的血漿濃度(A)劑量依賴的血漿濃度(B)腫瘤藥物濃度和血漿藥物濃度之間的關(guān)系。對(duì)具有腫瘤的小鼠每日給予0、6.3、12.5、25.0、100.0或150.0mg/kg口服劑量的埃洛替尼，持續(xù)21天。在腫瘤植入后的第28天，在給藥后的第1和第6小時(shí)收集血液(來(lái)自后眼窩竇(retro-orbital sinus))和腫瘤樣品。利用LC-MS/MS確定埃洛替尼的濃度。數(shù)值是平均值±SD，n＝5。
圖2在H460a NSCLC異種移植模型中埃洛替尼對(duì)平均腫瘤體積的影響。將H460a NSCLC細(xì)胞植入小鼠。當(dāng)建立可觸知的腫瘤時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)化以使得每組具有100-150mm3的平均起始腫瘤體積。對(duì)小鼠每日給予0、6.3、12.5、25或100mg/kg口服劑量的埃洛替尼，持續(xù)21天。每周測(cè)量腫瘤大小三次。數(shù)值是平均值，n＝10。
圖320mg/kg和100mg/kg埃洛替尼在不具有腫瘤的雌性nu/nu無(wú)胸腺小鼠中的單一劑量藥代動(dòng)力學(xué)。
圖4埃洛替尼和順鉑單獨(dú)使用和組合使用對(duì)H460a NSCLC異種移植模型中平均腫瘤體積的影響。將H460a NSCLC細(xì)胞植入小鼠。當(dāng)建立可觸知腫瘤時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)化以使得每組具有100-150mm3的平均起始腫瘤體積。用賦形劑處理小鼠，單獨(dú)口服給藥埃洛替尼25或100mg/kg/天，持續(xù)3周，每六天單獨(dú)腹膜內(nèi)給藥順鉑1.5或6mg/kg，持續(xù)3周，或?qū)?5mg/kg/天埃洛替尼與1.5mg/kg/每6天順鉑聯(lián)合給藥。每周測(cè)量3次腫瘤大小。數(shù)值是平均值，n＝10。
圖5在處理14天的不具有腫瘤的無(wú)胸腺裸鼠(n＝5)中評(píng)估最大耐受劑量。
圖6埃洛替尼和順鉑單獨(dú)使用或組合使用對(duì)A549 NSCLC異種移植模型中平均腫瘤體積的影響。將A549 NSCLC細(xì)胞植入小鼠。當(dāng)建立可觸知腫瘤時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)化以使得每組具有100-150mm3的平均起始腫瘤體積。用賦形劑處理小鼠，單獨(dú)口服給藥埃洛替尼25或100mg/kg/天，持續(xù)3周，每六天單獨(dú)腹膜內(nèi)給藥順鉑1.5或6mg/kg，持續(xù)3周，或?qū)?5mg/kg/天埃洛替尼與1.5mg/kg/每6天順鉑聯(lián)合給藥。每周測(cè)量3次腫瘤大小。數(shù)值是平均值，n＝10。
圖5在給藥埃洛替尼的小鼠中的皮膚損傷。在驗(yàn)尸時(shí)，將皮膚樣品固定在10％緩沖的福爾馬林中，包埋在石蠟中，以5μ切片，并用蘇木精和伊紅染色。在給藥21天100mg/kg/天埃洛替尼的小鼠中，皮膚損傷整體表現(xiàn)為變紅和易脫落的。在組織學(xué)上，損傷包括彌散，輕度至中度表皮棘層增厚，表皮角化，局部焦痂(escharosis)和大多數(shù)急性炎性細(xì)胞在真皮中的浸潤(rùn)。損傷是暫時(shí)的并且隨著持續(xù)治療而消散。
圖6在異種移植模型中NSCLC的免疫組織化學(xué)染色的光學(xué)顯微照片。對(duì)于抗原Ki67將來(lái)自裸鼠的腫瘤切片染色以檢測(cè)在對(duì)照小鼠(A)和用100mg/kg/天埃洛替尼處理12天的小鼠(B)中細(xì)胞增殖情況。黑色區(qū)域表示Ki67染色，表明增殖活性。
表格簡(jiǎn)述表1在無(wú)腫瘤的雌性nu/nu無(wú)胸腺小鼠中20和100mg/kg埃洛替尼的單劑量藥代動(dòng)力學(xué)(第36頁(yè))。
表2對(duì)無(wú)腫瘤的無(wú)胸腺裸鼠(n＝5)治療14天的最大耐受劑量評(píng)估(第37頁(yè))。
發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)“癌”在動(dòng)物中指的是存在這樣的細(xì)胞，該細(xì)胞具有致癌細(xì)胞的典型特性，例如增殖失控，永生化，轉(zhuǎn)移潛能，快速生長(zhǎng)和增殖率，和某些形態(tài)學(xué)特性。通常，癌細(xì)胞的形式是腫瘤，但是這樣的細(xì)胞可以單獨(dú)存在于動(dòng)物中，或者作為獨(dú)立的細(xì)胞在血液中循環(huán)，如白血病細(xì)胞。
除非其它指明，本發(fā)明使用的“不正常細(xì)胞生長(zhǎng)”指的是細(xì)胞生長(zhǎng)獨(dú)立于正常的調(diào)控機(jī)制(例如喪失接觸抑制)。其包括下列情況的不正常生長(zhǎng)1.腫瘤細(xì)胞(腫瘤)，其通過表達(dá)突變的酪氨酸激酶或者過表達(dá)酪氨酸激酶受體而增殖；2.其它增殖疾病的良性和惡性細(xì)胞，其中發(fā)生異常的酪氨酸激酶活化；4.任何通過受體酪氨酸激酶而增殖的腫瘤；5.任何通過異常絲氨酸/蘇氨酸激酶活化而增殖的腫瘤；和6.其它增殖疾病的良性和惡性細(xì)胞，其中發(fā)生異常的絲氨酸/蘇氨酸激酶活化。
除非其它指明，本發(fā)明使用的本語(yǔ)“治療”表示在患者中部分或者全部逆轉(zhuǎn)、減輕、抑制進(jìn)程、或者預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤轉(zhuǎn)移或者其它致癌細(xì)胞或致腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)“治療”，除非其它指明，指的是治療的行為。
當(dāng)短語(yǔ)“治療方法”或其等效語(yǔ)應(yīng)用于例如癌癥時(shí)，其指的這樣的行動(dòng)的步驟或者過程，該行動(dòng)經(jīng)過設(shè)計(jì)以在動(dòng)物中降低或者消除癌細(xì)胞的數(shù)量，或者緩解癌癥的癥狀。癌癥或者其它增殖疾病的“治療方法”不必定意味著所述的癌細(xì)胞或者其它疾病事實(shí)上會(huì)被消除了；所述細(xì)胞的數(shù)量或者疾病事實(shí)上會(huì)被降低；或者癌癥或者其它疾病的癥狀事實(shí)上會(huì)被緩解。通常，即使成功可能很小，也會(huì)進(jìn)行癌癥的治療方法，然而考慮到動(dòng)物的用藥史和預(yù)計(jì)的生存期，所述方法就其總體的作用過程來(lái)說(shuō)對(duì)該動(dòng)物是有益的。
術(shù)語(yǔ)“治療有效的藥劑”指的是這樣的組合物，其將會(huì)誘導(dǎo)被研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)師所研究的組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人的生物或者醫(yī)學(xué)應(yīng)答。
術(shù)語(yǔ)“制備藥物的方法”涉及制備用于如本文所述的適應(yīng)癥、特別是用于腫瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移或通常的癌癥的藥物。該術(shù)語(yǔ)涉及在指定的適應(yīng)癥中的所謂的“瑞士類型”的權(quán)利要求形式。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”或者“有效量”指的是將會(huì)誘導(dǎo)被研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)師所研究的組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人的生物或者醫(yī)學(xué)應(yīng)答的受試化合物或者組合的量。
以下實(shí)施例中給出的數(shù)據(jù)證實(shí)共同給藥順鉑和EGFR激酶抑制劑對(duì)于治療晚期癌癥如結(jié)腸直腸癌有效。因此，本發(fā)明提供了一種制備用于在患者中治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合。優(yōu)選地，該組合意欲同時(shí)或者先后給藥于患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的要被治療的腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移是結(jié)腸直腸腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移。
優(yōu)選地，意欲將這些物質(zhì)同時(shí)或者先后給藥于患者。因此，本發(fā)明還提供了一種用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者。優(yōu)選地，此外，使用一種或者多種其它細(xì)胞毒性的、化療的或者抗癌劑，或者使用增強(qiáng)這些藥劑效果的化合物。
在本發(fā)明的上下文中，額外的其它細(xì)胞毒性的、化療的或者抗癌藥劑或者增強(qiáng)這些藥劑效果的化合物包括，例如烷化劑或者具有烷化作用的制劑如環(huán)磷酰胺(CTX；如cytoxan)，苯丁酸氮芥(CHL；如leukeran)，白消安(如myleran)，美法侖，卡莫昔汀(BCNU)，鏈脲霉素，曲他胺(TEM)，絲裂霉素C等；抗代謝物類，例如甲氨蝶呤(MTX)，依托泊苷(VP16；如vepesid)，6-巰嘌呤(6MP)，6-thiocguanine(6TG)，阿糖胞苷(Ara-C)，5-氟尿嘧啶(5-FU)，卡培他濱(如Xeloda)，達(dá)卡巴嗪(DTIC)，等等；抗生素類例如放線菌素D，多柔比星(DXR；如adriamycin)，柔紅霉素(daunomycin)，博來(lái)霉素，普卡霉素等等；生物堿類，例如長(zhǎng)春花生物堿類例如長(zhǎng)春新堿(VCR)，長(zhǎng)春堿，等等；和其它抗腫瘤藥劑例如紫杉醇(如taxol)和紫杉醇衍生物，細(xì)胞增殖抑制劑(cytostatic agents)，糖皮質(zhì)激素如地塞米松(DEX；如decadron)和皮質(zhì)甾類例如波尼松，核苷酶抑制劑例如羥基脲，氨基酸耗竭酶(amino aciddepleting enzymes)例如天冬酰胺酶，甲酰四氫葉酸(leucovorin)，亞葉酸(folinic acid)，和其它葉酸衍生物，和類似的不同的抗腫瘤劑。還可以將下列藥劑用作附加藥劑arnifostine(如ethyol)，放線菌素D，mechlorethamine(氮芥)，鏈佐星，環(huán)磷酰胺，lornustine(CCNU)，多柔比星脂(如doxil)，吉西他賓(如gemzar)，柔紅霉素脂(如daunoxome)，丙卡巴肼，絲裂霉素，多西他賽(如taxotere)，阿地白介素，卡鉑，克拉屈濱，喜樹堿，CPT11(伊立替康)，10-羥基7-乙基-喜樹堿(SN38)，氟尿苷，氟達(dá)拉濱，異環(huán)磷酰胺，伊達(dá)比星，美鈉，干擾素α，干擾素β，米托蒽醌，托泊替康，亮丙立德，甲地孕酮，美法侖，巰嘌呤，普卡霉素，米托坦，培門冬酶，噴司他丁，哌泊溴烷，普卡霉素，他莫昔芬，替尼泊苷，睪內(nèi)酯，硫鳥嘌呤，塞替派，尿嘧啶氮芥，長(zhǎng)春瑞濱，苯丁酸氮芥。
同樣更優(yōu)選的是一種用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將該組合同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種抗-激素劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗-激素劑”包括天然的或者合成的有機(jī)或者肽化合物，其調(diào)節(jié)或者抑制激素對(duì)腫瘤的作用。
抗激素劑包括例如類固醇受體拮抗劑，抗雌激素類例如他莫昔芬，雷洛昔芬，芳香酶抑制4(5)-咪唑，其它芳香酶抑制劑，42-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬，keoxifene，LY 117018，奧那斯酮，和托瑞米芬(如Fareston)；抗雄激素類例如氟他胺，尼魯米特，比卡魯胺，亮丙立德，和戈舍瑞林；以及上述任何制劑的藥用鹽、酸或者衍生物；糖蛋白激素的激動(dòng)劑和/或拮抗劑例如促卵泡激素(FSH)，促甲狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH)和LHRH(促黃體激素釋放激素)；LHRH激動(dòng)劑戈舍瑞林醋酸酯，可作為Zoladex(AstraZeneca)商購(gòu)；LHRH拮抗劑D-丙氨酰胺N-乙酰基-3-(2-萘基)-D-丙氨酰-4-氯-D-苯丙氨酰-3-(3-吡啶基)-D-丙氨酰-L-絲氨酰-N6-(3-吡啶基羰基)-L-賴氨酰-N6-(3-吡啶基羰基)-D-賴氨酰-L-亮氨酰-N6-(1-甲基乙基)-L-賴氨酰-L-脯氨酸(如Antide，Ares-Serono)；LHRH拮抗劑醋酸加尼瑞克；甾體抗雄激素類醋酸環(huán)丙孕酮(CPA)和醋酸甲地孕酮，可以作為Megace(Bristol-Myers Oncology)商購(gòu)；非甾體抗雄激素氟他胺(2-甲基-N-[4，20-硝基-3-(三氟甲基)苯丙酰胺]，可以作為Eulexin(Schering Corp.)商購(gòu)；非甾體抗雄激素尼魯米特，(5，5-二甲基-3-[4-硝基-3-(三氟甲基-4′-硝基苯基)-4，4-二甲基-咪唑烷-二酮]；和其它非許可受體的拮抗劑，例如RAR，RXR，TR，VDR等等的拮抗劑。
化療方案中使用上述細(xì)胞毒性和其它抗癌劑在癌癥治療領(lǐng)域已經(jīng)被很好的表征，并且其在這里的應(yīng)用也要考慮對(duì)耐藥性和效果的監(jiān)測(cè)以及考慮對(duì)給藥途徑和劑量的控制，進(jìn)行一定程度的調(diào)節(jié)。例如，細(xì)胞毒性劑的實(shí)際劑量可以是變化的，這要取決于通過使用組織培養(yǎng)方法確定的患者的培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)答。通常，相比于在沒有額外其它制劑時(shí)使用的量，所述的劑量將減少。
有效細(xì)胞毒性制劑的典型的劑量可以在制備商推薦的范圍內(nèi)，并且當(dāng)通過體外應(yīng)答或者動(dòng)物模型中的應(yīng)答表明時(shí)，其可以被降低達(dá)大約一個(gè)數(shù)量級(jí)的濃度或者量。因此，實(shí)際的劑量將取決于醫(yī)師的判斷，患者的情況，和治療方法的效果，所述的治療方法基于初級(jí)培養(yǎng)的惡性腫瘤細(xì)胞或者組織培養(yǎng)的組織樣品的體外應(yīng)答，或者在適當(dāng)動(dòng)物模型中觀察到的應(yīng)答。
在本發(fā)明的上下文中，在上述的另外細(xì)胞毒性的、化療的或者抗癌劑中，優(yōu)選化合物吉西他濱，泰索帝和長(zhǎng)春瑞濱。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種血管生成抑制劑。
抗血管生成制劑包括例如VEGFR抑制劑如SU-5416和SU-6668(Sugen Inc.of South San Francisco，Calif.，USA)，或者如這里所描述的例如國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朩O 99/24440，WO 99/62890，WO 95/21613，WO 99/61422，WO 98/50356，WO 99/10349，WO 97/32856，WO 97/22596，WO 98/54093，WO 98/02438，WO 99/16755，和WO 98/02437，和美國(guó)專利號(hào)5,883,113，5,886,020，5,792,783，5,834,504和6,235,764；VEGF抑制劑例如IM862(Cytran Inc.of Kirkland，Wash.，USA)；angiozyme，一種來(lái)自核酶的合成的核酶(Boulder，Colo.)；和VEGF的抗體，例如貝伐單抗(如AvastinTMGenentech，South San Francisco，CA)，VEGF的重組人源化抗體；整合蛋白受體拮抗劑和整合蛋白拮抗劑，例如αvβ3，αvβ5和αvβ6整合蛋白，及其亞型，例如西侖吉肽(EMD 121974)，或者抗整合蛋白抗體例如諸如αvβ3特異的人源化抗體(如Vitaxin)；因子如IFN-α(美國(guó)專利號(hào)41530,901，4,503,035，和5,231,176)；血管抑素(angiostatin)和纖維蛋白溶酶原片段(例如kringle 1-4，kringle 5，kringle 1-3(O’Reilly，M.S.等(1994)Cell 79315-328；Cao等(1996)J.Biol.Chem.27129461-29467；Cao等(1997)J.Biol.Chem.27222924-22928)；內(nèi)皮他丁(O’Reilly，M.S.等(1997)Cell 88277；和國(guó)際專利公開號(hào).WO 97/15666)；血小板反應(yīng)蛋白(TSP-1；Frazier，(1991)Curr.Opin.Cell Biol.3792)；血小板因子4(PF4)；纖維蛋白溶酶原激活劑/尿激酶抑制劑；尿激酶受體拮抗劑；肝素酶；煙曲霉素類似物如TNP-4701；蘇拉明和蘇拉明類似物；血管抑素類固醇；bFGF拮抗劑；flk-1和flt-1拮抗劑；抗血管生成劑如MMP-2(基質(zhì)-金屬蛋白酶2)抑制劑和MMP-9(基質(zhì)-金屬蛋白酶9)抑制劑。有用的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的實(shí)例描述在國(guó)際專利公開號(hào)WO 96/33172，WO 96/27583，WO98/07697，WO 98/03516，WO 98/34918，WO 98/34915，WO 98/33768，WO98/30566，WO 90/05719，WO 99/52910，WO 99/52889，WO 99/29667，和WO 99/07675，歐洲專利公開號(hào)818,442，780,386，1,004,578，606,046，和931,788；英國(guó)專利公開號(hào)9912961，和美國(guó)專利號(hào)5,863,949和5,861,510中。優(yōu)選的MMP-2和MMP-9抑制劑是具有很少或者沒有MMP-1抑制活性的那些。更優(yōu)選地，是相對(duì)于其它基質(zhì)-金屬蛋白酶(即MMP-1，MMP-3，MMP-4，MMP-5，MMP-6，MMP-7，MMP-8，MMP-10，MMP-11，MMP-12，和MMP-13)選擇性抑制MMP-2和/或MMP-9的那些。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種腫瘤細(xì)胞促凋亡劑或者凋亡刺激制劑。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑。
信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑包括如erbB2受體抑制劑，例如有機(jī)分子，或者結(jié)合到erbB2受體的抗體如曲妥單抗(如Herceptin)；其它蛋白酪氨酸激酶抑制劑如imitinib(如Gleevec)；ras抑制劑；raf抑制劑；MEK抑制劑；mTOR抑制劑；周期素依賴性蛋白激酶抑制劑；蛋白激酶C抑制劑；和PDK-1抑制劑(見Dancey，J.和Sausville，E.A.(2003)Nature Rev.DrugDiscovery 292-313，描述了這些抑制劑的一些實(shí)例，和它們?cè)谥委煱┌Y的臨床試驗(yàn)中的應(yīng)用)。
ErbB2受體抑制劑包括例如ErbB2受體抑制劑諸如GW-282974(Glaxo Wellcome plc)，單克隆抗體例如AR-209(Aronex PharmaceuticalsInc.of The Woodlands，Tex.，USA)，和描述在以下國(guó)際公開號(hào)中的erbB2抑制劑WO 98/02434，WO 99/35146，WO 99/35132，WO 98/02437，WO97/13760，和WO 95/19970，以及美國(guó)專利號(hào)5,587,458，5,877,305，6,465,449和6,541,481。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用抗HER2抗體或者其免疫治療活性片段。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種額外的抗增殖劑。
額外的抗增殖劑包括例如酶法呢基(farnesyl)蛋白轉(zhuǎn)移酶的抑制劑和受體酪氨酸激酶PDGFR的抑制劑，包括在美國(guó)專利號(hào)6,080,769，6,194,438，6,258,824，6,586,447，6,071,935，6,495,564，6,150,377，6,596,735和6,479,513，以及國(guó)際專利公開WO01/40217中公開和要求保護(hù)的那些。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用COX II(環(huán)加氧酶II)抑制劑。有用的COX-II抑制劑的實(shí)例包括alecoxib(如CelebrexTM)，伐地考昔，和羅非考昔。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用放射性藥物?；蛘吡硗獾?，不是增加放射性藥物，而是進(jìn)行輻射治療。
輻射源對(duì)被治療患者來(lái)說(shuō)可以是外部或者內(nèi)部的。當(dāng)輻射源對(duì)患者是外部的時(shí)候，該治療被稱為外部光束放射療法(EBRT)。當(dāng)輻射源對(duì)患者是內(nèi)部時(shí)，該治療被稱為近距放射治療法(BT)。在本發(fā)明上下文中使用的放射性原子可以選自包含但不僅限于下列物質(zhì)的組鐳，銫-137，銥-192，镅-241，金-198，鈷-57，銅-67，锝-99，碘-123，碘-131，和銦-111。當(dāng)本發(fā)明的EGFR激酶抑制劑為抗體時(shí)，用這樣的放射性同位素標(biāo)記該抗體也是可能的。
放射療法是用于控制無(wú)法切除或者不宜手術(shù)的腫瘤和/或腫瘤轉(zhuǎn)移的標(biāo)準(zhǔn)治療。當(dāng)將放療與化療聯(lián)合時(shí)已經(jīng)觀察到了改善的結(jié)果。放療基于這樣的原理將高劑量的放射遞送到靶區(qū)域會(huì)導(dǎo)致腫瘤和正常組織中繁殖細(xì)胞的死亡。放射劑量方案通常以放射吸收劑量(Gy)、時(shí)間和分級(jí)來(lái)定義，并且必須由腫瘤學(xué)家仔細(xì)定義?；颊呓邮艿姆派淞咳Q于不同的考慮，但是最重要的兩個(gè)考慮是腫瘤相對(duì)于其它身體重要結(jié)構(gòu)和器官的位置，和腫瘤擴(kuò)展的程度?；颊咚?jīng)歷的放射治療的典型療程為在1周-6周時(shí)間的治療計(jì)劃，給予的患者全部劑量為10-80Gy，每一天為約1.8-2.0Gy的單一部分，一周5天。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)用本發(fā)明的治療與放射治療聯(lián)合治療人類患者的腫瘤的時(shí)候，會(huì)產(chǎn)生協(xié)同效果。換句話說(shuō)，當(dāng)聯(lián)合放射療法，任選另外聯(lián)合化學(xué)或抗癌劑，通過含有本發(fā)明組合的藥劑增強(qiáng)了對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制。輔助放射治療的參數(shù)在，例如，國(guó)際專利公開WO99/60023中。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其同時(shí)或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種能夠增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的藥劑。
能夠增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的藥劑包括例如CTLA4(細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞抗原4)抗體(如MDX-CTLA4)，和其它能夠阻斷CTLA4的藥劑。具體能應(yīng)用于本發(fā)明的CTLA4抗體包括美國(guó)專利號(hào)6,682,736中描述的那些。
同樣更優(yōu)選的是制備用于降低由治療腫瘤或者腫瘤轉(zhuǎn)移所引起的副作用的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合并且意欲將其以這樣的劑量同時(shí)或者先后給藥于患者，所述劑量有效產(chǎn)生加成的、或者超加成的或協(xié)同抗腫瘤效果，并有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。
本發(fā)明還提供了一種治療癌癥的方法，包括給予需要這種治療的患者以i.第一個(gè)有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和ii.第二個(gè)有效量的順鉑。
本發(fā)明還提供了一種治療癌癥的方法，包括給予需要這種治療的患者以i.第一個(gè)低于治療(sub-therapeutic)量的EGFR激酶抑制劑埃洛替尼，或其藥用鹽；和ii.第二個(gè)低于治療量的順鉑。
另外，本發(fā)明提供了藥用載體中的含有EGFR抑制劑和順鉑的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了特別用于癌癥的藥物組合物，其包含i.第一個(gè)有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和ii.第二個(gè)有效量的順鉑。該組合物任選地含有藥用載體和/或賦形劑。
本發(fā)明還提供了特別用于癌癥的藥物組合物，其包含i.第一個(gè)低于治療量的EGFR激酶抑制劑埃洛替尼，或其藥用鹽；和ii.第二個(gè)低于治療量的順鉑。該組合物任選地含有藥用載體和/或賦形劑。
優(yōu)選地，所述的EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)“患者”優(yōu)選指的是因任何目的需要EGFR激酶抑制劑治療的人，更優(yōu)選需要該治療來(lái)治療癌癥、或者癌前狀態(tài)或者損害的人。但是，該術(shù)語(yǔ)“患者”也可以指非人動(dòng)物，其中，優(yōu)選哺乳動(dòng)物如狗，貓，馬，牛，豬，綿羊，以及非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物，這些動(dòng)物需要EGFR激酶抑制劑治療。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者是需要治療癌癥，或者前癌病癥或損傷的人。所述的癌癥優(yōu)選是任何可通過給予EGFR激酶抑制劑部分或者全部治療的癌癥。所述的癌癥可以是例如肺癌，非小細(xì)胞肺(NSCL)癌，支氣管細(xì)胞肺癌(bronchioloalviolar cell lung cancer)，骨癌，胰腺癌，皮膚癌，頭或頸癌，皮膚或者眼球內(nèi)黑素瘤，子宮癌，卵巢癌，直腸癌，肛門區(qū)癌，胃癌，腸癌，結(jié)腸癌，乳腺癌，子宮癌，輸卵管癌，子宮內(nèi)膜癌，宮頸癌，陰道癌，外陰癌，霍奇金病，食道癌，小腸癌，內(nèi)分泌系統(tǒng)癌，甲狀腺癌，甲狀旁腺癌，腎上腺癌，軟組織癌，尿道癌，陰莖癌，前列腺癌，膀胱癌，腎或輸尿管癌，腎細(xì)胞癌，腎盂癌，間皮瘤，肝細(xì)胞癌，膽管癌(biliary cancer)，慢性或者急性白血病，淋巴細(xì)胞淋巴瘤，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)瘤，脊椎瘤，腦干膠質(zhì)瘤，多形性成神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤，星形細(xì)胞瘤，schwanomas，室管膜細(xì)胞瘤，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，腦脊膜瘤，鱗狀細(xì)胞癌，垂體腺瘤，包括任何上述癌癥的頑疾，或一種或者多種上述癌癥的組合。癌前病癥或者損傷包括例如由下列組成的組口腔白斑，光化性角化病(日光性角化病)，結(jié)腸或者直腸的癌前息肉，胃上皮發(fā)育不良，腺瘤發(fā)育不良，遺傳性息肉結(jié)腸癌綜合征(HNPCC)，巴雷特食管，膀胱發(fā)育不良，和前癌頸病(precancerous cervical conditions)。優(yōu)選地，所述的癌癥是結(jié)腸癌，并且最優(yōu)選為結(jié)腸直腸癌。還優(yōu)選地，所述癌癥是肺癌，最優(yōu)選非小細(xì)胞肺癌(NSCL)。
在本發(fā)明中“共給藥”和“共給予”順鉑和EGFR激酶抑制劑(此后將這兩種組分稱為兩種活性劑)指的是當(dāng)將所述兩種活性劑作為被設(shè)計(jì)以獲得組合治療療效的合適劑量方案的一部分，上述兩種活性劑分開或者一起地任一種地給予。因此，可以將這兩種活性劑或者作為相同藥物組合物的部分或者作為分開的藥物組合物給予。順鉑可以先于、同時(shí)或者后于EGFR激酶抑制劑的給予，或者以其某種組合給予。當(dāng)以重復(fù)的間隔將EGFR激酶抑制劑給予患者時(shí)，例如在一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)療程中，可以將順鉑先于、同時(shí)、或者后于EGFR激酶抑制劑的每次給予，或者以其某種組合，或者以相對(duì)于EGFR激酶抑制劑治療的不同間隔，或者以單一劑量先于、在期間的任何時(shí)間、或者后于EGFR激酶抑制劑療程給予。
通常將EGFR激酶抑制劑以這樣的劑量方案給予患者，該方案提供了對(duì)待治療患者最有效的癌癥的治療(同時(shí)從效力和安全角度考慮)，如本領(lǐng)域已知的和例如國(guó)際專利公開號(hào)WO01/34574所公開。在進(jìn)行本發(fā)明治療方法的時(shí)候，EGFR激酶抑制劑可以以任何本領(lǐng)域已知的有效方式進(jìn)行給予，例如經(jīng)口，局部，靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，肌肉內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，皮下，鼻內(nèi)，眼內(nèi)，陰道，直腸或者真皮內(nèi)途徑，這取決于所要治療癌癥的種類，所使用EGFR激酶抑制劑的類型(例如小分子，抗體，RNAi，或者反義構(gòu)建體)，處方醫(yī)生的醫(yī)學(xué)判斷依據(jù)，如基于，例如，已經(jīng)公開的臨床研究結(jié)果。
給予的EGFR激酶抑制劑和給予EGFR激酶抑制劑的時(shí)機(jī)取決于被治療患者的類型(種類，性別，年齡，重量，等等)和狀態(tài)，被治療疾病或者病癥的嚴(yán)重度，和給藥途徑。例如，可以以劑量范圍0.001-100mg/kg體重每天或者每周以單獨(dú)或者分開的劑量，或者通過連續(xù)輸液將小分子EGFR激酶抑制劑給予患者(見例如國(guó)際專利公開號(hào)WO01/34574)。特別是，可以以5-200mg每天或者100-1600mg每周的單獨(dú)或者分開的劑量范圍，或者通過連續(xù)輸液將鹽酸埃洛替尼給予患者。優(yōu)選劑量是150mg/天?？梢砸?.1-100mg/kg體重每天/或者每周的單獨(dú)或者分開的劑量范圍，或者通過連續(xù)輸液將基于抗體EGFR激酶抑制劑，或者反義、RNAi或者核酶構(gòu)建體給予患者。在一些情況下，低于前述劑量范圍下限的劑量水平可以是足夠的，而在另一些情況下，可以使用更大的劑量而不引起任何有害的副作用，條件是這些更大的劑量在全天給予前首先被分成幾個(gè)小劑量。
EGFR激酶抑制劑和順鉑可以分別或者同時(shí)以相同或者不同的路徑、以廣泛種類的各種劑型給予。例如EGFR激酶抑制劑優(yōu)選口服或者腸胃外給予，而順鉑優(yōu)選腸胃外給予。當(dāng)EGFR激酶抑制劑是鹽酸埃洛替尼(TarcevaTM)的時(shí)候，優(yōu)選口服給予。
EGFR激酶抑制劑可以與多種藥用惰性載體以下列形式給予片劑、膠囊、糖錠、錠劑、硬糖、粉末、噴霧劑、乳膏劑、油膏、栓劑、膠凍、凝膠、糊劑、洗劑、軟膏、酏劑、糖漿等等。這些劑型的給予可以以單一或多個(gè)劑量進(jìn)行。載體包括固體稀釋劑或者填充劑，無(wú)菌水性介質(zhì)和各種非毒性有機(jī)溶劑等等?？诜幬锝M合物可以是適當(dāng)甜化和/或者增香化的。
EGFR激酶抑制劑和順鉑可以連同各種藥用惰性載體以下列各種形式結(jié)合噴霧劑、乳膏劑、油膏、栓劑、膠凍、凝膠、糊劑、洗劑、軟膏等等。這樣的劑型可以以單個(gè)或者多個(gè)劑量給予。載體包括固體稀釋劑或者填充劑，無(wú)菌水性介質(zhì)和各種非毒性有機(jī)溶劑等等。
應(yīng)該對(duì)所有含有蛋白EGFR激酶抑制劑的制劑進(jìn)行選擇以避免所述抑制劑變性和/或降解和喪失生物活性。
制備包含EGFR激酶抑制劑的藥物組合物的方法在本領(lǐng)域是已知的，并描述在例如國(guó)際專利公開號(hào)WO01/34574。制備包含順鉑的藥物組合物的方法在本領(lǐng)域也是已知的。鑒于本發(fā)明的教導(dǎo)，從上述引用的出版物和從其他已知的參考文獻(xiàn)的教導(dǎo)，如Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第18版(1990)，制備包含EGRF激酶抑制劑和順鉑的藥物組合物的方法是明顯的。
對(duì)于口服給予EGFR激酶抑制劑，含有一種或者全部所述活性劑的片劑與各種賦形劑結(jié)合，賦形劑例如微晶纖維素，檸檬酸鈉，碳酸鈣，磷酸氫鈣和甘氨酸，以及各種崩解劑例如淀粉(并且優(yōu)選玉米、馬鈴薯或者木薯淀粉)，藻酸和某些復(fù)合硅酸鹽，以及?；澈蟿├缇垡蚁┻量┩橥?，蔗糖，明膠和阿拉伯膠。另外，潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂，月桂硫酸鈉，和滑石通常對(duì)于片劑化目的是有用的。類似類型的固體組合物還可以被用作明膠膠囊的填充劑；在這一點(diǎn)，優(yōu)選的材料還包括半乳糖或者乳糖以及高分子量的聚乙二醇。當(dāng)口服給予需要水性懸液和/或酏劑的時(shí)候，EGFR激酶抑制劑可以與多種甜化或者增香化制劑，著色物質(zhì)或者染料結(jié)合使用，如果需要，也有乳化和/或懸浮劑，連同稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油和其各種可能的組合。
對(duì)于腸胃外給予任何一種或者全部所述的活性劑，可以使用芝麻油或者花生油中的溶液，或者使用水性丙二醇中的溶液，以及含有所述活性劑或其相應(yīng)的水溶性鹽的無(wú)菌水性溶液。該無(wú)菌水性溶液被優(yōu)選適當(dāng)?shù)鼐彌_并還優(yōu)選賦予等滲，例如，用充足的鹽水或者葡萄糖。這些特別的水性溶液特別適于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下和腹膜內(nèi)注射用。油性溶液適用于關(guān)節(jié)內(nèi)、肌肉內(nèi)和皮下注射用。所有這些溶液在無(wú)菌條件下的制備通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)制藥技術(shù)可以很容易地實(shí)現(xiàn)。應(yīng)該對(duì)任何給予蛋白EGFR激酶抑制劑的腸胃外制劑進(jìn)行選擇以避免所述抑制劑變性和喪失生物活性。
另外，依照標(biāo)準(zhǔn)制藥實(shí)踐，可以通過以下方式局部給予一種或者全部所述的活性劑例如乳膏劑、洗劑、膠凍、凝膠、糊劑、油膏、軟膏等等。例如，可以制備含有大約0.1％(w/v)-大約5％(w/v)濃度的EGFR激酶抑制劑或者順鉑的局部制劑。
為獸醫(yī)用途，可以將所述的活性劑以上述任何形式和任何途徑分別或者一起給予動(dòng)物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，以膠囊、丸劑、片劑，浸液的形式通過注射或者作為植入物給予EGFR激酶抑制劑。作為備選，可以將EGFR激酶抑制劑與動(dòng)物飼料一起給予，為此目的，可以制備濃縮的飼料添加劑或者預(yù)混和物以用于正常動(dòng)物飼養(yǎng)。順鉑優(yōu)選通過注射或者作為植入物以浸液(liquid drench)形式給予。依照標(biāo)準(zhǔn)的獸醫(yī)實(shí)踐，以常規(guī)方法制備這樣的制劑。
本發(fā)明還提供了含有單一容器的試劑盒，所述容器包含EGFR激酶抑制劑和順鉑兩者。本發(fā)明還提供了這樣的試劑盒，其含有第一容器和第二容器，所述第一容器包含EGFR激酶抑制劑，所述第二容器含有順鉑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的試劑盒容器還可以進(jìn)一步包括藥用載體。該試劑盒還可以包含無(wú)菌稀釋劑，其被優(yōu)選儲(chǔ)存在一個(gè)單獨(dú)的附加容器中。所述試劑盒還可以包括一個(gè)包裝說(shuō)明書，其包含打印的說(shuō)明書，用于指導(dǎo)將組合治療用作治療癌癥的方法。
本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)“EGFR激酶抑制劑”指的是任何目前在本領(lǐng)域熟知的或者將來(lái)會(huì)被鑒定的EGFR激酶抑制劑，并且包括任何在給藥于患者時(shí)導(dǎo)致患者中與EGF受體活化相關(guān)的生物活性抑制的化學(xué)個(gè)體，其包括任何另外產(chǎn)生自其天然配體結(jié)合EGFR的下游生物學(xué)效應(yīng)。這樣的EGFR激酶抑制劑包括任何可以阻斷EGFR活化的試劑或者任何與在患者中治療癌癥相關(guān)的EGFR活化的下游生物學(xué)效應(yīng)。這樣的抑制劑可以通過直接結(jié)合到受體的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域和抑制其激酶活性而發(fā)揮作用?；蛘?，這樣的抑制劑可以通過占據(jù)EGFR受體的配體結(jié)合位點(diǎn)或者部分、從而使得受體難以接近其天然配體從而阻止或者降低了其正常生物學(xué)活性而發(fā)揮作用。或者，該抑制劑可以通過調(diào)節(jié)EGFR多肽的二聚化、EGFR多肽與其它蛋白質(zhì)的相互作用、或者增強(qiáng)EGFR的泛化作用和細(xì)胞內(nèi)降解而起作用。EGFR激酶抑制劑包括但不限于低分子量抑制劑、抗體或者抗體片段、反義構(gòu)建體、小抑制性RNAs(即dsRNA的RNA干擾；RNAi)，和核酶。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，EGFR激酶抑制劑是特異結(jié)合到人EGFR的小的有機(jī)分子或者抗體。
EGFR激酶抑制劑包括例如喹唑啉EGFR激酶抑制劑，吡啶并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，嘧啶并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，吡咯并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，吡唑并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，苯基氨基-嘧啶EGFR激酶抑制劑，羥吲哚EGFR激酶抑制劑，吲哚并咔唑EGFR激酶抑制劑，酞嗪EGFR激酶抑制劑，異黃酮EGFR激酶抑制劑，quinalone EGFR激酶抑制劑和tyrphostin EGFR激酶抑制劑，如描述在下述專利出版物中的那些，和它們的所有藥用鹽和溶劑化物國(guó)際專利公開號(hào)WO 96/33980，WO96/30347，WO 97/30034，WO 97/30044，WO 97/38994，WO 97/49688，WO 98/02434，WO 97/38983，WO 95/19774，WO 95/19970，WO 97/13771，WO 98/02437，WO 98/02438，WO 97/32881，WO 98/33798，WO 97/32880，WO 97/3288，WO 97/02266，WO 97/27199，WO 98/07726，WO 97/34895，WO 96/31510，WO 98/14449，WO 98/14450，WO 98/14451，WO 95/09847，WO 97/19065，WO 98/17662，WO 99/35146，WO 99/35132，WO 99/07701，和WO 92/20642；歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P 520722，EP 566226，EP 787772，EP 837063，和EP 682027；美國(guó)專利號(hào)5,747,498，5,789,427，5,650,415，和5,656,643；以及德國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)朌E 19629652。其它低分子量EGFR激酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括Traxler，P.，1998，Exp.Opin.Ther.Patents8(12)1599-1625中描述的那些。
具體優(yōu)選的、可以依照本發(fā)明使用的低分子量EGFR激酶抑制劑的實(shí)例包括[6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉-4-基]-(3-乙炔基苯基)胺(也叫做OSI-774，埃洛替尼，或者TarcevaTM(鹽酸埃洛替尼)；OSIPharmaceuticals/Genentech/Roche)(美國(guó)專利號(hào)5,747,498；國(guó)際專利公開號(hào)WO 01/34574，和Moyer，J.D.等(1997)Cancer Res.574838-4848)；CI-1033(先前已知為PD183805；Pfizer)(Sherwood等，1999，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.40723)；PD-158780(Pfizer)；AG-1478(University ofCalifornia)；CGP-59326(Novartis)；PKI-166(Novartis)；EKB-569(Wyeth)；GW-2016(也叫作GW-572016或者lapatinib ditosylate；GSK)；和gefitinib(也叫作ZD1839或者IressaTM；Astrazeneca)(Woodburn等，1997，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.38633)?？梢砸勒毡景l(fā)明使用的特別優(yōu)選的低分子量EGFR激酶抑制劑是[6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉-4-基]-(3-乙炔基苯基)胺(即埃洛替尼)，其鹽酸鹽(即鹽酸埃洛替尼，TarcevaTM)，或者其它鹽形式(例如甲磺酸埃洛替尼)。
基于抗體的EGFR激酶抑制劑包括任何能夠部分或者全部阻斷EGFR被其天然配體活化的抗EGFR抗體或者抗體片段?；诳贵w的EGFR激酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括在Modjtahedi，H.，等，1993，Br.J.Cancer 67247-253；Teramoto，T.，等，1996，Cancer 77639-645；Goldstein等，1995，Clin.Cancer Res.11311-1318；Huang，S.M.，等，1999，Cancer Res.1559(8)1935-40；和Yang，X.，等，1999，Cancer Res.591236-1243.中描述的那些。因此EGFR激酶抑制劑可以是單克隆抗體Mab E7.6.3(Yang，X.D.等(1999)Cancer Res.591236-43)，或者M(jìn)ab C225(ATCC登記號(hào)HB-8508)，或者其具有結(jié)合特異性的抗體或者抗體片段。合適的單克隆抗體EGFR激酶抑制劑包括但不限于，IMC-C225(也叫作cetuximab或者ErbituxTM；Imclone Systems)，ABX-EGF(Abgenix)，EMD 72000(Merck KgaA，Darmstadt)，RH3(York Medical Bioscience Inc.)，和MDX-447(Medarex/Merck KgaA)。
額外的基于抗體的EGFR激酶抑制劑可以通過將適當(dāng)抗原或者表位給予宿主動(dòng)物而根據(jù)已知的方法而產(chǎn)生，所述的宿主動(dòng)物選自例如豬，牛，馬，兔，山羊，綿羊，和小鼠及其他。各種本領(lǐng)域已知的佐劑可以被用于提高抗體生產(chǎn)。
盡管實(shí)踐本發(fā)明的有用抗體可以是多克隆的，優(yōu)選單克隆抗體。針對(duì)EGFR的單克隆抗體可以使用任何技術(shù)制備和分離，所述的技術(shù)通過連續(xù)細(xì)胞系培養(yǎng)提供抗體分子制備。用于制備和分離的技術(shù)包括但不限于最初由Kohler和Milstein(Nature，1975，256495-497)描述的雜交瘤技術(shù)；人B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kosbor等，1983，Immunology Today 472；Cote等，1983，Proc.Nati.Acad.Sci.USA 802026-2030)；和EBV雜交瘤技術(shù)(Cole等，1985，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。
或者，描述單鏈抗體生產(chǎn)的技術(shù)(見例如美國(guó)專利號(hào)4,946,778)可以被修改來(lái)生產(chǎn)抗EGFR單鏈抗體。在實(shí)踐本發(fā)明中有用的基于抗體的EGFR激酶抑制劑還包括抗EGFR抗體片段，包括但不限于F(ab′)2片段，其是由胃蛋白酶消化完整的抗體分子產(chǎn)生的，和Fab片段，其是通過還原F(ab′)2片段的二硫橋而產(chǎn)生的?；蛘呖梢詷?gòu)建Fab和/或scFv表達(dá)文庫(kù)(見例如，Huse等，1989，Science 2461275-1281)以容許快速鑒定對(duì)EGFR具有所需特異性的片段。
用于制備和分離單克隆抗體和抗體片段的技術(shù)在本領(lǐng)域?yàn)槿耸熘⑶颐枋鲈贖arlow和Lane，1988，AntibodiesA Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory，和在J.W.Goding，1986，Monoclonal AntibodiesPrinciples and Practice，Academic Press，London.中。人源化抗EGFR抗體和抗體片段也可以通過已知的技術(shù)制備，所述技術(shù)如那些描述在Vaughn，T.J.等，1998，Nature Biotech.16535-539及其引用的文獻(xiàn)中的那些，并且這些抗體或其片段在本發(fā)明實(shí)踐中同樣有用。
本發(fā)明使用的EGFR激酶抑制劑可備選地基于反義寡核苷酸構(gòu)建體。包括反義RNA分子和反義DNA分子的反義寡核苷酸可以通過結(jié)合其上來(lái)直接阻斷EGFR mRNA的翻譯，并從而防止蛋白翻譯或者增加mRNA降解，因而減少了EGFR激酶蛋白質(zhì)水平，和因此減少其在細(xì)胞內(nèi)的活性。例如可以通過如傳統(tǒng)的磷酸二酯鍵技術(shù)合成至少約15個(gè)堿基的反義寡核苷酸，其互補(bǔ)于編碼EGFR的mRNA轉(zhuǎn)錄序列的獨(dú)特區(qū)域，通過例如靜脈內(nèi)注射或者輸液給藥。使用反義技術(shù)用來(lái)特異抑制其序列已知的基因的基因表達(dá)的技術(shù)為本領(lǐng)域熟知。(例如見美國(guó)專利號(hào)6,566,135；6,566,131；6,365,354；6,410,323；6,107,091；6,046,321；和5,981,732)。
小抑制性RNAs(siRNAs)也可以作為EGFR激酶抑制劑用于本發(fā)明。EGFR基因表達(dá)可以通過用小雙鏈RNA(dsRNA)、或者引起小雙鏈RNA產(chǎn)生的載體或構(gòu)建體來(lái)接觸腫瘤、受試者或者細(xì)胞而降低，從而EGFR的表達(dá)被特別地抑制(即RNA干擾或者RNAi)。對(duì)于序列已知的基因，選擇合適dsRNA或者dsRNA-編碼載體的方法在本領(lǐng)域?yàn)槿耸熘?例如見Tuschi，T.，等(1999)Genes Dev.13(24)3191-3197；Elbashir，S.M.等(2001)Nature 411494-498；Hannon，G.J.(2002)Nature 418244-251；McManus，M.T.和Sharp，P.A.(2002)Nature Reviews Genetics 3737-747；Bremmelkamp，T.R.等(2002)Science 296550-553；美國(guó)專利號(hào)6,573,099和6,506,559；和國(guó)際專利公開號(hào)WO 01/36646，WO 99/32619，和WO01/68836)。
核酶也可以作為EGFR激酶抑制劑用于本發(fā)明。核酶是能夠催化RNA特異切割的酶RNA分子。核酶作用的機(jī)理涉及核酶分子與互補(bǔ)靶RNA的序列特異性雜交，而后被核酸內(nèi)解切割。特異并有效地催化EGFRmRNA序列的核酸內(nèi)解切割的工程化的錘頭基序核酶分子因此在本發(fā)明的范圍內(nèi)有用。任何可能RNA靶中的特殊核酶切割位點(diǎn)通過掃描靶分子找尋核酶切割位點(diǎn)而被最初鑒定，其通常包括下列序列GUA，GUU，和GUC。一旦鑒定出來(lái)后，可以評(píng)價(jià)相應(yīng)于含有切割位點(diǎn)的靶基因區(qū)域的大約15-20個(gè)核糖核苷酸的短RNA序列的預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)特征，例如二級(jí)結(jié)構(gòu)，這可以導(dǎo)致寡核苷酸序列不合適。也可以通過測(cè)試其與互補(bǔ)寡核苷酸的雜交可接近性來(lái)評(píng)價(jià)候選靶的合適性，例如使用核酶保護(hù)測(cè)試。
可以通過已知的方法來(lái)制備用作EGFR激酶抑制劑的反義寡核苷酸和核酶。這些包括用于化學(xué)合成的技術(shù)例如諸如固相phosphoramatide化學(xué)合成。或者，可以通過體外或者體內(nèi)轉(zhuǎn)錄編碼RNA分子的DNA序列來(lái)產(chǎn)生反義RNA分子。這樣的DNA序列可以被整合到各種各樣的載體內(nèi)，所述載體整合合適RNA聚合酶啟動(dòng)子如T7或者SP6聚合酶啟動(dòng)子。作為一種增加細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性和半衰期的手段，可以引入對(duì)本發(fā)明寡核苷酸的多種修飾。可能的修飾包括但不限于將核糖核苷酸或者脫氧核糖核苷酸的側(cè)翼序列加到所述分子的5’和/或3’末端，或者在寡核苷酸骨架中使用硫代磷酸酯(phosphorothioate)或者2′-O-甲基而不是磷酸二酯酶鍵。
本發(fā)明還包含藥物組合物，其含有結(jié)合有藥用載體的EGFR激酶抑制劑和順鉑組合。
優(yōu)選的所述組合物含有藥用載體和非毒性的治療有效量的EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)。
此外，在該優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括用于治療疾病的藥物組合物，該組合物的使用產(chǎn)生對(duì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、良性或者惡性腫瘤，或者轉(zhuǎn)移的抑制，其包含藥用載體和非毒性的治療有效量的EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)。
術(shù)語(yǔ)“藥用鹽”指的是從藥用非毒性的堿或者酸制備出的鹽。當(dāng)本發(fā)明的化合物是酸性的時(shí)候，其相應(yīng)的鹽可以從藥用非毒性堿中方便地制備，包括無(wú)機(jī)堿和有機(jī)堿。從這樣的無(wú)機(jī)堿衍生的鹽包括鋁、銨、鈣、銅(銅和亞銅)、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳(錳和亞錳)，鉀、鈉、鋅等鹽。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥用有機(jī)非毒性堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，以及環(huán)胺和取代的胺如天然存在的和合成取代的胺的鹽。其它可以形成鹽的藥用有機(jī)非毒性堿包括離子交換樹例如諸如精氨酸，甜菜堿，咖啡堿，膽堿，N′，N′-二芐乙二胺，二乙胺，2-二乙氨基乙醇，2-二甲氨基乙醇，乙醇胺，二乙胺，N-乙基嗎啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，氨基葡糖，組氨酸，哈胺(hydrabamine)，異丙胺，賴氨酸，甲基葡糖胺，嗎啉，哌嗪，哌啶，聚胺樹脂，普魯卡因，嘌呤，可可堿，triethylameine，三甲胺，三丙胺，氨基丁三醇(tromethamine)等等。
當(dāng)本發(fā)明的化合物是堿性時(shí)，其相應(yīng)的鹽可以很方便地從藥用非毒性酸來(lái)制備，所述酸包括無(wú)機(jī)和有機(jī)酸。這樣的酸包括例如乙酸，苯磺酸，安息香酸，樟腦磺酸，檸檬酸，乙磺酸，富馬酸，葡糖酸，谷氨酸，氫溴酸，氫氯酸，羥乙磺酸，乳酸，馬來(lái)酸，蘋果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘酸，硝酸，pamoic，泛酸，磷酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，p-甲苯磺酸等等。特別優(yōu)選的是檸檬酸，氫溴酸，氫氯酸，馬來(lái)酸，磷酸，硫酸和酒石酸。
本發(fā)明的藥物組合物含有作為活性成分的EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)，藥用載體，和任選的其它治療組分或者助劑。其它的治療劑可以包括如上列出的那些細(xì)胞毒性的、化療的或者抗癌劑，或者提高這些藥劑的效果的試劑。所述的組合物包括適用于口服、直腸、局部和腸胃外給藥(包括皮下、肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))的組合物，盡管任何給定情況中最合適的途徑將取決于特定的宿主，以及活性成分將被給藥針對(duì)的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度。所述的藥物組合物可以以單位劑型方便地給出，并且以制藥領(lǐng)域所熟知的任何方法制備。
在實(shí)踐中，依照常規(guī)藥物組合技術(shù)，可以將本發(fā)明的由EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)代表的化合物作為活性組分與藥物載體緊密摻合。該載體可以采取廣泛種類的形式，這取決于需要給藥的制劑的類型，例如經(jīng)口或者腸胃外(包括靜脈內(nèi))。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以呈現(xiàn)為適于口服的離散單位如膠囊，扁囊劑或者片劑，每種都含有預(yù)定量的活性成分。此外，所述的組合物可以呈現(xiàn)為粉末、顆粒、溶液、水性液體中的懸液、非水性液體，水包油乳劑，或者油包水液體乳劑。除了上面舉出的常規(guī)劑型外，EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)還可以通過緩釋方式和/或者遞送裝置給藥?？梢酝ㄟ^任何一種藥學(xué)方法制備組合組合物。通常，這樣的方法包括將活性成分與組成一種或者多種必需組分的載體相關(guān)聯(lián)的步驟。通常，通過均勻化和緊密摻合活性組分與液體載體或細(xì)碎固體載體或兩者來(lái)制備所述的組合物。隨后可以將產(chǎn)品方便地定型成所需的形式。
因此，本發(fā)明的藥物組合物可以含有藥用載體和EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)。EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)也可以與一種或者多種其它治療活性化合物被包含在藥物組合物中。其它的治療活性化合物可以包括如上面列出的那些細(xì)胞毒性的、化療的或者抗癌劑，或者增強(qiáng)這些藥劑效果的制劑。
因此本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物可以含有組合以抗癌劑的EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑，其中所述的抗癌劑是一種選自由下列各項(xiàng)組成的組的成員烷基化劑，抗代謝物，微管抑制劑，鬼臼毒素，抗生素，亞硝基脲，激素治療，激酶抑制劑，腫瘤細(xì)胞凋亡活化劑，和抗血管生成劑。
使用的藥物載體可以是例如固體、液體、或者氣體。固體的實(shí)例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、和硬脂酸。液體載體的實(shí)例是糖漿、花生油、橄欖油和水。氣體載體的實(shí)例包括二氧化碳和氮?dú)狻?br> 在制備用于口服劑型的組合物中，可以使用任何方便的藥物介質(zhì)。例如水，二元醇，油，醇類，增香劑，防腐劑，著色劑等等可以被用于形成口服液體制劑例如懸液，酏劑和溶液，而載體例如淀粉，糖，微晶纖維素，稀釋劑，?；瘎瑵?rùn)滑劑，粘合劑，崩解劑等可以被用于形成口服固體制劑例如粉末、膠囊和片劑。因?yàn)槠淙菀捉o藥，片劑和膠囊是優(yōu)選的口服劑型，從而使用固體藥物載體。任選地，片劑可以用標(biāo)準(zhǔn)的水性或者非水性技術(shù)包衣。
含有本發(fā)明組合物的片劑可以任選地與一種或者多種附屬組分或者助劑通過壓制或者成型來(lái)制備。壓縮片劑可以通過用合適的機(jī)器通過壓縮制備，其活性組分為自由流動(dòng)形式如粉末或顆粒，任選地與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、表面活性成分或者分散劑混和。成型片劑可以通過在合適的機(jī)器中成型，粉化化合物的混合物用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)。每種片劑優(yōu)選含有大約0.05mg到大約5g的活性組分，并且每個(gè)扁囊劑或者膠囊優(yōu)選含有大約0.05mg到大約5g的活性組分。
例如，用于口服給藥于人的制劑可以含有大約0.5mg到5g的活性劑，與合適的和便捷量的、可能從大約5％-大約95％全部組合物變化的載體物質(zhì)混合。單位劑型通常含有從大約1mg到大約2g的活性組分，通常為25mg，50mg，100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，800mg，或者1000mg。
本發(fā)明適用于腸胃外給藥的藥物組合物可以被制備為在水中的活性化合物的溶液或者懸液。可以包括合適的表面活性劑例如諸如羥丙基纖維素。分散體也可以在甘油、液體聚乙二醇、及其在油中的混和物中來(lái)制備。另外，防腐劑可以被加入其中以防止微生物的有害生長(zhǎng)。
本發(fā)明的適合注射用的藥物組合物包括無(wú)菌的水性溶液或者分散體。此外，所述的組合物可以以無(wú)菌粉末的形式用于臨時(shí)制備這樣的無(wú)菌可注射溶液或者分散體。在所有情況下，最終的可注射形式必須是無(wú)菌的并且必須是有效的流體以方便注射。所述的藥物組合物必須在制備和儲(chǔ)存條件下是穩(wěn)定的；因此，其優(yōu)選應(yīng)該以防止微生物如細(xì)菌和真菌的污染作用的方式保存。所述的載體可以是溶劑或者分散介質(zhì)，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油，丙二醇和液體聚乙二醇)，植物油及其適當(dāng)?shù)幕旌衔铩?br> 本發(fā)明的藥物組合物可以以適用于局部使用的方式存在，例如諸如氣溶膠，乳膏劑，油膏，洗劑，撒粉，等。此外，所述的組合物可以是適用于經(jīng)皮裝置的形式。這些制劑可以利用本發(fā)明的EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)，經(jīng)由傳統(tǒng)方法制備。作為實(shí)例，通過混和親水物質(zhì)和水，以及大約5重量％到大約10重量％的所述化合物來(lái)制備乳膏劑或者油膏，以制備具有所需稠度的乳膏劑或者油膏。
本發(fā)明的藥物組合物可以是適于直腸給藥的形式，其中的載體是固體。優(yōu)選混和物形成單位劑量栓劑。合適的載體包括可可脂和其它本領(lǐng)域常用的物質(zhì)。所述的栓劑可以通過首先將所述組合物與軟化的或者融化的載體混和并在模具中冷卻和成型來(lái)方便地形成。
除了上述的載體組分外，上面描述的藥物制劑，如果合適，可以包含一種或者多種另外的載體組分例如稀釋劑、緩沖劑，增香劑，粘合劑，表面活性劑，增稠劑，潤(rùn)滑劑，防腐劑(包括抗氧化物)等等。另外，可以包括其它的助劑來(lái)使得所述制劑與目的受體的血液等滲。含有EGFR激酶抑制劑化合物和順鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)的組合物也可以制備成粉末或者液體濃縮形式。
本發(fā)明組合的化合物劑量水平可以近似地如本文所述，也可以如本領(lǐng)域?qū)@些化合物的描述那樣。但是應(yīng)該理解的是，對(duì)于任何具體患者的特定劑量水平將取決于許多因素，包括年齡、體重、綜合健康、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥路徑、排泄率、藥物組合以及受治療的具體疾病的嚴(yán)重性。
經(jīng)過以下的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)將會(huì)更好的理解本發(fā)明。但是，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該清楚的理解所討論的具體的方法和結(jié)果僅僅是為了闡述本發(fā)明，而后附的權(quán)利要求會(huì)更完全地概括本發(fā)明，這些實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)不能被認(rèn)為以任何方式限制了本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)介紹癌細(xì)胞特異性的表皮生長(zhǎng)因子受體(HER1/EGFR)是在癌癥治療中有價(jià)值的分子靶目標(biāo)(Ciardiello，F(xiàn)和Tortora G.(2002)Expert Opin.Investig.Drugs 11755-768)。很多癌癥過表達(dá)HER1/EGFR頭和頸鱗狀細(xì)胞癌(70-100％)，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)(50-90％)，前列腺癌(40-70％)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤(10-50％)，胃癌(30-60％)，乳腺癌(35-70％)，結(jié)腸直腸癌(45-80％)，胰腺癌(30-50％)和卵巢癌(35-60％)(Ciardiello，F(xiàn)和Tortora G.(2002)Expert Opin.Investig.Drugs 11755-768)；SalomonD.S.，等(1995)Crit.Rev.Oncol.Hematol.19183-232)。Salomon等還強(qiáng)調(diào)過表達(dá)HER1/EGFR與具有晚期疾病、轉(zhuǎn)移和較差預(yù)后的患者之間的關(guān)系。
NSCLC是最常見的肺癌。依照疾病的程度，治療方案是不同的。對(duì)于疾病早期，外科手術(shù)是唯一的治愈方式，以化學(xué)/放射療法處理的多峰方案可產(chǎn)生改善的效果。在疾病晚期，化學(xué)療法是主要的選擇，其在整體存活方面提供較小的改善。因此，在NSCLC的情形中，在醫(yī)學(xué)方面高度需要尋找更有效并更耐受的方案。已經(jīng)使用許多傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性劑在NSCLC中用作單一療法，包括長(zhǎng)春地辛，卡鉑，依托泊苷，異環(huán)磷酰胺，環(huán)磷酰胺，長(zhǎng)春新堿和絲裂霉素和順鉑(Rajkumar S.V.，和Adjei AA.(1998)Cancer Treat Rev.2435-53)。用這些藥物的單一療法僅產(chǎn)生了很小的改善，但用順鉑的組合療法在隨機(jī)實(shí)驗(yàn)中減輕了患者的疾病，并且改善了他們的生命質(zhì)量(Bunn P.A.Jr，和Kelly K.(1998)Clin Cancer Res.4(5)1087-1100)。
吉西他濱于1990年被開發(fā)，其抑制核糖核酸酶還原酶。吉西他濱單一療法具有比標(biāo)準(zhǔn)的順鉑/依托泊苷化學(xué)療法更大的腫瘤應(yīng)答可能性，并且改善了患者的生命質(zhì)量(在減少的頭發(fā)損失、惡心和嘔吐，和食欲減少方面)(ten Bokkel W.W.，等(1999)Lung Cancer 26(2)85-94)。
研究和治療癌癥的歐洲組織(EORTC)進(jìn)行了組合試驗(yàn)以比較順鉑和替尼泊苷與順鉑和紫杉醇的療效(Giaccone G，等，(1998)J Clin.Oncol.162133-2141)。由于后種組合對(duì)晚期NSCLC提供更好的減輕作用(即使未出現(xiàn)明確的存活益處)，對(duì)于晚期NSCLC患者，其已被推薦作為一種標(biāo)準(zhǔn)的治療方案。另外，吉西他濱和順鉑的組合已經(jīng)顯示在體外協(xié)同作用，并且至少在體內(nèi)是累加的(Peters G.J.等(1995)Semin.Oncol.22(4Suppl.11)72-79)。在II期試驗(yàn)階段，對(duì)吉西他濱和順鉑的應(yīng)答率是47％，平均存活57周，1年的存活率是48％(Bunn P.A.Jr和Kelly K.(1998)Clin Cancer Res.4(5)1087-1100)。
對(duì)于癌癥的新治療方案采取癌細(xì)胞特異性方案，其保證比較老的細(xì)胞毒性藥物更少的毒性。由于癌細(xì)胞特異性靶目標(biāo)僅僅是疾病病原的一部分，結(jié)合靶藥物和常規(guī)藥物的治療可能具有協(xié)同效應(yīng)。最佳的NSCLC治療可能是包括結(jié)合傳統(tǒng)化學(xué)療法的EGFR抑制劑。
埃洛替尼(TarcevaTM，OSI-774)是一種選擇性的、可口服利用的HER1/EGFR酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的小分子抑制劑。其在頭和頸以及外陰癌癥的臨床前動(dòng)物模型中具有有效的抗腫瘤活性(Pollack V.A.，等，(1999)J.Pharmacol.Exp.Ther.291739-48)。埃洛替尼誘導(dǎo)體外細(xì)胞凋亡，并且在體內(nèi)有效對(duì)抗各種表達(dá)EGFR的人腫瘤異種移植物(Moyer J.D.等(1997)Cancer Res.574838-4848)。在公開的標(biāo)記(open-label)中，對(duì)基于鉑的化學(xué)療法失敗的NSCLC患者的II期研究中(Perez-Soler R.等(2001)Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.20310a(摘要1235)，埃洛替尼具有鼓舞人心的活性。
在該研究中，我們研究了是否埃洛替尼組合順鉑或吉西他濱在具有NSCLC異種移植物模型的無(wú)胸腺裸鼠中對(duì)于抑制腫瘤生長(zhǎng)以協(xié)同或?qū)沟姆绞狡鹱饔?。選自H460a和A549NSCLC腫瘤模型，原因在于它們明確地表達(dá)EGFR，每個(gè)細(xì)胞具有約70,000-80,000個(gè)結(jié)合位點(diǎn)(Bianco，C.等(2002)Clin.Cancer Res.8(10)3250-3258；Lee，M.等(1992)J Natl.Cancer Inst.Monogr.(13)117-123)。A549緩慢生長(zhǎng)，H460a更具有侵襲性并且更快生長(zhǎng)。
材料和方法動(dòng)物雌性、無(wú)胸腺，nu/nu-nuBR裸鼠(Charles River Lab，Wilmington，USA)，年齡約為10-12周，使用時(shí)重量為23-25克。每天通過觀察和分析取自置于共用隔板架上的標(biāo)記動(dòng)物(sentinel animal)的血液樣品來(lái)確定小鼠的健康情況。容許所有動(dòng)物一周的時(shí)間從運(yùn)輸相關(guān)的緊張中適應(yīng)和緩解。
隨意提供高壓滅菌水和輻射處理的食物(5058-ms Pico Lab(小鼠)breed chow，Purina，Mills，Richmond，IN)，而且將動(dòng)物保持在12小時(shí)的白天夜間循環(huán)中?；\子、草墊和水瓶使用前高壓滅菌并每周更換。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依照Roche Animal Care and Use Committee認(rèn)可的方案實(shí)施。
細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物研究將H460a細(xì)胞(由Dr Jack Roth，MD，Anderson提供)培養(yǎng)在補(bǔ)充以10％胎牛血清(FBS)的Dulbecco’s Modified Eagle Media(DMEM)。將A549細(xì)胞(American Type Culture Collection[Manassas，VA]培養(yǎng)在Rosewll ParkMemorial Institue medium(RPMI)1640+10％FBS中。對(duì)于移植物而言細(xì)胞的濃度是1×107細(xì)胞/0.2ml的H460a和7.5×106細(xì)胞/0.2ml的A549。
將細(xì)胞懸浮在磷酸鹽緩沖液中，并皮下移植到每只小鼠的右側(cè)。一旦建立可觸知的腫瘤，將動(dòng)物隨機(jī)化以使得所有的組具有100-150mm3的相似的起始平均腫瘤體積。每周三次測(cè)量腫瘤和小鼠重量。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中單個(gè)監(jiān)測(cè)動(dòng)物。
測(cè)試制劑和藥物治療將埃洛替尼(OSI Pharmaceuticals，Uniondale，NY)與羧甲基纖維素鈉和吐溫80在水中配制成微懸浮液用于注射。用1ml注射器和18規(guī)格管飼針經(jīng)口給藥埃洛替尼(0.2ml/動(dòng)物)。每日處理所有的組，持續(xù)3周。
以1mg/ml的存儲(chǔ)無(wú)菌鹽水溶液提供順鉑(Platinol-AQTM，Bristol-Myers Squibb)。對(duì)每個(gè)劑量組取等份試樣的存儲(chǔ)瓶溶液，其由整個(gè)研究所需藥物所組成，并用無(wú)菌鹽水進(jìn)一步稀釋，以得到用于每只動(dòng)物的0.5ml劑量體積的溶液。利用3ml注射器和26規(guī)格針將順鉑靜脈內(nèi)給藥。每6天處理所有組，持續(xù)3周(總共3次注射)。
計(jì)算和統(tǒng)計(jì)分析使用下面的公式，將重量減輕計(jì)算為平均組體重的百分變化((W-W0)/W0)×100其中‘W’代表在特定一天被治療組的平均體重?！甒0’代表在治療初始時(shí)相同組的平均體重。最大重量減輕也可以使用上面的公式計(jì)算，并且表明對(duì)于特定的組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中的任何時(shí)間的最大百分比體重減輕。通過腫瘤生長(zhǎng)抑制來(lái)評(píng)估治療效力。使用下面的公式，將治療組的腫瘤體積表示為對(duì)照組腫瘤體積的百分比(％T/C)100×((T-T0)/(C-C0))其中’T’代表在實(shí)驗(yàn)期間的特定一天被治療組的平均腫瘤體積。‘T0’代表在治療第一天時(shí)相同組的平均腫瘤體積，C代表實(shí)驗(yàn)的特定一天的對(duì)照組的腫瘤體積，C0表述在治療第一天時(shí)相同組的平均腫瘤體積。
使用下述公式計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制100-％T/C使用橢球公式(ellipsoid formula)計(jì)算腫瘤體積(mm3)(D×(d2))/2其中‘D’代表腫瘤的大直徑，‘d’代表小直徑。在一些情況下，使用下面的公式計(jì)算腫瘤消退和/或腫瘤體積的百分變化((T-T0)/T0)×100其中‘T’代表在特定一天被治療組的平均腫瘤體積，‘T0’代表在治療初始時(shí)相同被治療組的平均腫瘤體積。
通過秩和檢驗(yàn)和單向變量分析(ANOVA)和post-hoc Bonferroni t-檢驗(yàn)(SigmaStat，version 2.03，Jandel Scientific，San Francisco，CA)來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。當(dāng)p≤0.05時(shí)為顯著水平。
藥代動(dòng)力學(xué)分析對(duì)于單一劑量藥代動(dòng)力學(xué)(PK)，通過心臟穿刺在給藥后5，15，30，60分鐘和2，4，8，16，24小時(shí)的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集三只小鼠的血液樣品。對(duì)于長(zhǎng)期治療的動(dòng)物，通過后眼窩竇在1和6小時(shí)的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集2或3只小鼠的血液樣品。收集管含有乙二胺四乙酸(EDTA)作為抗凝劑。將樣品保存在-70℃。利用液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜分析(LC-MS/MS)方法以1ng/mL的定量界線確定埃洛替尼的血漿濃度。利用PK評(píng)估程序WinNonlin PRO，3.1版本(Pharsight Inc)通過非區(qū)室分析評(píng)估PK參數(shù)。在一個(gè)研究中，利用選擇性LC-MS/MS方法，以1ng/g組織的定量界線確定埃洛替尼腫瘤(H460a)濃度。
病理學(xué)/尸檢在研究的結(jié)尾，從所有的剩余組中對(duì)5只小鼠/治療進(jìn)行完全尸檢。同樣從這些小鼠中收集全血用于血液學(xué)和臨床化學(xué)。
通過浸漬在10％鋅福爾馬林中固定腫瘤樣品，并隨后在Tissue-TekVIP(Sakura)中處理，并包埋入石蠟。將用于免疫組織化學(xué)的切片切割成5μ。將免疫前的兔或山羊血清(Dako Ltd)用作陰性對(duì)照。將切片浸漬在Target Retrieval溶液(Dako Ltd)中并在蒸籠(Black &Decker)中加熱至94℃，持續(xù)20分鐘。用6％H2O2的甲醇溶液對(duì)內(nèi)源性過氧化酶活性進(jìn)行淬滅15分鐘。
為了阻斷非特異的組織結(jié)合位點(diǎn)，用來(lái)自產(chǎn)生第二抗體的物種的10％正常血清封閉切片。將切片在室溫于在Ultra-V(Lab Vision)中制備的血清中溫育20分鐘。
對(duì)于血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(PECAM-1，CD31)抗原和EGFR抗原，將切片于室溫與在抗體稀釋劑(Dako Ltd)中稀釋1∶800的多克隆山羊抗PECAM-1 IgG(Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA)或與在抗體稀釋劑(Dako Ltd)中稀釋1∶50的多克隆兔抗EGFR IgG(BioGenex，San Ramon，CA)過夜溫育。將切片與Vectastain Elite ABC-過氧化物酶(Vector Laboratories)于室溫溫育45分鐘。
對(duì)于Ki-67抗原，將切片與在抗體稀釋劑(Dako Ltd)中稀釋1∶2000的多克隆抗Ki-67IgG(NeoMarkers，F(xiàn)remont，CA)于室溫溫育1小時(shí)，接著加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉抗生物素蛋白復(fù)合物30分鐘。
為了檢測(cè)細(xì)胞凋亡，依照制造廠商的推薦使用TUNEL TdT-FragELTMDNA片段化檢測(cè)試劑盒(Oncogene Research Products，San Diego，CA)。對(duì)于所有四種抗原，載體Nova Red(Vector Laboratories)是最終的色原和蘇木精進(jìn)行核復(fù)染。
結(jié)果和討論結(jié)果在NSCLC異種移植物中EGFR免疫組織化學(xué)染色通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)H460a和A549腫瘤中EGFR表達(dá)圖譜。兩種細(xì)胞系具有相似的EGFR膜染色圖譜(數(shù)據(jù)未顯示)。這證實(shí)過去顯示EGFR在這兩種腫瘤系中的同等表達(dá)的結(jié)果(Bianco，C.等(2002)Clin.Cancer Res.8(10)3250-3258；Lee，M.等(1992)J Natl.Cancer Inst.Monogr.(13)117-123)。
在無(wú)胸腺的裸鼠中埃洛替尼的單一和長(zhǎng)期給藥PK評(píng)估在無(wú)腫瘤的小鼠中通過管飼法對(duì)雌性、nu/nu無(wú)胸腺小鼠給予20和100mg/kg埃洛替尼。該劑量指具有91.5％活性藥物(游離堿)含量的鹽酸鹽。制劑是分別含2.5mg/ml和12.5mg/ml埃洛替尼的羧甲基纖維素鈉混懸液。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)三只動(dòng)物評(píng)估PK數(shù)據(jù)(參見圖3)。
給予100mg/kg的小鼠被高度地全身性暴露于埃洛替尼，AUClast值約為196000h*ng/ml。給予20mg/kg的AUClast值約為33500h*ng/ml。暴露(AUC)是與劑量成比例的。在給予100mg/kg后的平均最大血漿濃度約為24000ng/ml，給予20mg/kg后為9100ng/ml。給藥后最大血漿濃度為0.5-1.0小時(shí)。平均表觀末端半衰期(apparent terminal half-life)是約4小時(shí)，平均殘留時(shí)間是約7小時(shí)。
在具有腫瘤的小鼠中將6.3、12.5、25.0、100.0和150.0mg/kg埃洛替尼口服給予nu/nu無(wú)胸腺小鼠后，在給藥后1小時(shí)和6小時(shí)后血漿濃度分別高達(dá)16700ng/ml和8870ng/ml(圖1a)。在相同時(shí)間點(diǎn)取樣作為血漿樣品，在口服給予150mg/kg后各自的平均腫瘤濃度是4800和3090ng/g組織。
血漿濃度的個(gè)體間變化是適度的，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)是約35-40％(范圍5.2-120％)。所述暴露是劑量依賴性的，并且升高劑量導(dǎo)致超過劑量-成比例的。在本研究中腫瘤濃度也與血漿濃度充分相關(guān)(圖1b)。在無(wú)胸腺的裸鼠中確定最大耐受劑量(MTD)埃洛替尼MTD埃洛替尼的MTD是100mg/kg(圖5)。顯示毒性跡象的小鼠全部具有相似的損傷。在皮膚和胃腸道中發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的毒性。在400mg/kg組中的一只小鼠死亡。在該組中的其余動(dòng)物由于發(fā)病而被安樂死。給予200mg/kg的小鼠表現(xiàn)顯著的體重減輕，并且全部被安樂死。然而，我們先前的功效研究已經(jīng)顯示在該制劑中150mg/kg的埃洛替尼也被充分耐受3周(作者，未公開的報(bào)告)。
順鉑MTD在該研究中MTD是6mg/kg/6天，3次腹膜內(nèi)注射(表2)。存在利用腹膜內(nèi)(i.p.)或(i.v.)途徑，關(guān)于順鉑在小鼠中各種MTD的報(bào)道，包括4mg/kg/6天，2次i.v.注射于裸鼠中(Perez-Soler R.等(2001)Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.20310a(摘要1235))，6mg/kg/6天，3次i.p.注射于C57/B16小鼠(van Moorsel C.J.，等(1999)Eur.J.Cancer 35(5)808-814)和4mg/kg/4天，3次i.v.注射于裸鼠中(Riccardi，A.，(2001)CancerChemother.Pharmacol.47(6)498-504)。
以從3mg/kg-12mg/kg增加的劑量腹膜內(nèi)給藥于小鼠順鉑。順鉑療法的典型毒性副作用是腎、胃腸道和神經(jīng)毒性(Perez-Soler R.等(2001)Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.20310a(摘要1235)。在兩組中的小鼠(對(duì)9mg/kg組，更小范圍)具有清楚的胃腸道毒性跡象。未進(jìn)行完全的驗(yàn)尸，因此不了解是否在這些小鼠或在那些較低劑量組中的小鼠的腎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)或胃腸道中存在組織學(xué)損傷。但在任何劑量組中無(wú)嚴(yán)重的中毒性腎損害跡象，或行為或神經(jīng)毒性的體位跡象。
埃洛替尼對(duì)建立的NSCLC異種移植物的影響在H460a中進(jìn)行劑量應(yīng)答研究在H460a NSCLC異種移植物的研究結(jié)尾(腫瘤移植后28天)，埃洛替尼，作為單一療法，具有顯著的劑量依賴性效力。在100mg/kg組，存在61％的生長(zhǎng)抑制(p≤0.001，相對(duì)于賦形劑對(duì)照)。
其它組具有下述的生長(zhǎng)抑制25mg/kg46％(p≤0.001，相對(duì)于賦形劑對(duì)照)；12.5mg/kg36％(p＝0.003，相對(duì)于賦形劑對(duì)照)；6.25mg/kg28％(p＝0.014，相對(duì)于賦形劑對(duì)照)(圖2)。不存在部分或全部的消退。
在H460a中埃洛替尼和順鉑的組合活性6mg/kg順鉑顯著抑制81％腫瘤生長(zhǎng)(p≤0.001)(圖4)。1.5mg/kg順鉑抑制42％腫瘤生長(zhǎng)(p＝0.014)。6mg/kg順鉑和100mg/kg埃洛替尼的組合是致死的，在腫瘤移植后5天具有毒性跡象。所有小鼠在腫瘤移植后23天死亡(處理的第13天)。
1.5mg/kg順鉑和25mg/kg埃洛替尼的組合被充分耐受，并抑制35％腫瘤生長(zhǎng)(p＝0.003，相對(duì)于賦形劑)。不存在部分或全部的消退。該腫瘤生長(zhǎng)抑制不是加成性的，原因在于其并未顯著好于以25％MTD給予的單一順鉑或埃洛替尼。該組合也未顯著好于100mg/kg埃洛替尼或120mg/kg順鉑。
在A549中埃洛替尼和順鉑的組合活性在該研究的結(jié)尾(腫瘤移植后47天，處理的第19天)，100mg/kg埃洛替尼顯著抑制93％腫瘤生長(zhǎng)(p≤0.001)(圖6)。存在一個(gè)部分消退(2％)。25mg/kg埃洛替尼抑制25％腫瘤生長(zhǎng)。6mg/kg順鉑顯著抑制88％腫瘤生長(zhǎng)(p≤0.001)，有一個(gè)部分消退(2％)。1.5mg/kg順鉑抑制30％腫瘤生長(zhǎng)，盡管是非顯著的。
由于在先前研究中的毒性，不以高劑量組合順鉑和埃洛替尼。組合1.5mg/kg順鉑和25mg/kg埃洛替尼被所有小鼠充分耐受，沒有顯著的體重減輕或毒性的整體跡象。該組合顯著抑制98％腫瘤生長(zhǎng)(p≤0.001，相對(duì)于賦形劑對(duì)照)，具有5個(gè)部分消退(范圍2％-28％)。這種腫瘤生長(zhǎng)抑制是協(xié)同的，原因在于其顯著好于以25％MTD給予的順鉑(p≤0.05)或埃洛替尼(p≤0.05)。該組合未顯著好于100mg/kg埃洛替尼和6mg/kg順鉑。
對(duì)正常和腫瘤組織的治療相關(guān)影響在給予單一療法的動(dòng)物中驗(yàn)尸在給予埃洛替尼單一療法的動(dòng)物中，在血液學(xué)參數(shù)或臨床化學(xué)參數(shù)中未發(fā)生變化(數(shù)據(jù)未顯示)。在皮膚中存在治療相關(guān)的肉眼可見的變化。小鼠具有口鼻皮膚相當(dāng)大的變紅和結(jié)痂癥狀(圖7)，這是由于在皮膚中高水平表達(dá)EGFR。這些損傷是暫時(shí)的，并且隨著持續(xù)的治療而消散。治療相關(guān)的抗腫瘤作用包括在兩種NSCLC異種移植物腫瘤模型中100mg/kg埃洛替尼情形中Ki-67增殖指數(shù)適度減少(圖8)。在被治療的異種移植物中腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡頻率無(wú)顯著差別，如通過對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記CD31進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的微血管密度(MVD)所測(cè)量的那樣發(fā)現(xiàn)對(duì)血管發(fā)生無(wú)顯著影響。
在給予埃洛替尼/順鉑組合的動(dòng)物中驗(yàn)尸在單獨(dú)給予順鉑和組合給予順鉑的組中，腎的嚴(yán)重的微觀損傷是劑量依賴性的。最初的損傷是管壞死和管嗜堿性(數(shù)據(jù)未顯示)。對(duì)血液學(xué)和血清化學(xué)參數(shù)的治療相關(guān)影響是最小的。順鉑是腎毒素，導(dǎo)致最接近的和遠(yuǎn)端的管細(xì)胞損傷(Klaassen，和Curtis，D.，(Editor).Casarett and Doull′sToxicologyThe Basic Science of Poisons.6th Ed.McGraw-Hill，紐約(2001)，pp.399-401，496，497，500，503，506，511，695，852和853)。基于病理學(xué)數(shù)據(jù)，25mg/kg埃洛替尼和1.5mg/kg順鉑的組合還具有確定的抗瘤作用，此外，毒性未明顯增加。在組合組中對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響近似于高劑量埃洛替尼單一療法的那些(圖8b)。
討論這些結(jié)果顯示埃洛替尼，一種有效的、可口服利用和HER1/EGFR的選擇性小分子抑制劑，作為單一療法和與常規(guī)的化學(xué)療法組合使用，在表達(dá)HER1/EGFR的近似成員的人NSCLC異種移植物模型中具有強(qiáng)效的抗腫瘤活性。
在異種移植物模型H460a中，其具有杰出的劑量-應(yīng)答關(guān)系，并且腫瘤濃度與血漿濃度充分相關(guān)。
兩種人NSCLC細(xì)胞系，當(dāng)在無(wú)胸腺小鼠中作為皮下腫瘤生長(zhǎng)時(shí)，具有不同的腫瘤生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)，對(duì)H460a有5天的倍增時(shí)間，對(duì)A549有10的倍增時(shí)間。埃洛替尼單一療法在100mg/kg時(shí)顯著抑制H460a異種移植物模型中的腫瘤生長(zhǎng)。
在緩慢生長(zhǎng)A549腫瘤中，以25％MTD給予，順鉑/埃洛替尼組合具有顯著的腫瘤生長(zhǎng)抑制和部分緩和(90％)。用埃洛替尼組合順鉑進(jìn)行的腫瘤生長(zhǎng)抑制與用埃洛替尼單一療法相比顯著增加(p≤0.05)。在更快生長(zhǎng)的H460a腫瘤中，使用四分之一MTD的任一種化合物，用順鉑/埃洛替尼組合產(chǎn)生了相當(dāng)大的腫瘤生長(zhǎng)抑制(53％)。然而，用該組合的腫瘤生長(zhǎng)抑制未顯著不同于用單一療法。A549緩慢生長(zhǎng)，因此，設(shè)想更依賴于血管發(fā)生。認(rèn)為埃洛替尼是間接的抗血管發(fā)生劑(Kerbel，R，和Folkman，J.(2002)Nat.Rev.Cancer 2(10)727-39)，因此不驚訝其對(duì)A549具有更好的功效。埃洛替尼抑制腺苷三磷酸(ATP)結(jié)合HER1/EGFR的胞內(nèi)細(xì)胞酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，阻斷受體磷酸化和相關(guān)的下游信號(hào)傳輸(Moyer J.D.等(1997)Cancer Res.574838-4848)。結(jié)果是抑制與腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展相關(guān)的細(xì)胞過程，如增殖，血管生成，轉(zhuǎn)移和免于凋亡(Moyer J.D.等(1997)Cancer Res.574838-4848)。不幸地，在用埃洛替尼治療的腫瘤中未通過MVD檢測(cè)到抗血管發(fā)生作用，可能是由于檢測(cè)不夠靈敏。
在NSCLC模型中，順鉑(1.5mg/kg)與埃洛替尼(25mg/kg)，以四分之一MTD給予，被充分耐受，通過維持具有最小副作用風(fēng)險(xiǎn)的功效，導(dǎo)致不具有或具有不顯著的體重減輕，提示對(duì)于患者而言可能顯著的生命益處的品質(zhì)。相反，在各自最大耐受劑量時(shí)，高劑量組合埃洛替尼和常規(guī)藥劑未被耐受。這可能是與在臨床前不能使用維持療法的事實(shí)相關(guān)。
埃洛替尼組合吉西他濱和順鉑，或者組合卡鉑和紫杉醇在具有NSCLC的人中的III期實(shí)驗(yàn)是令人失望的，原因在于未證實(shí)結(jié)論性的存活益處。然而，此處報(bào)道的臨床前研究已明確顯示埃洛替尼組合順鉑對(duì)抑制腫瘤生長(zhǎng)具有加成性作用。這些發(fā)現(xiàn)支持需要進(jìn)一步檢驗(yàn)埃洛替尼在各種臨床環(huán)境如其與其它化療劑的順序使用，和在選擇的患者種群中的影響。另外，HER1/EGFR在多數(shù)癌癥中過表達(dá)，包括頭頸癌，前列腺癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，胃癌，乳腺癌，宮頸癌，胰腺癌和卵巢癌(Ciardiello，F(xiàn)和TortoraG.(2002)Expert Opin.Investig.Drugs 11755-768)；Salomon DS，等(1995)Crit.Rev.Oncol.Hematol.19183-232)。因此，埃洛替尼組合順鉑在具有HER1/EGFR表達(dá)的實(shí)體細(xì)胞腫瘤的其它癌癥中可以具有功效益處。
總之，在NSCLC中，埃洛替尼作為單一療法或組合順鉑在具有EGFR表達(dá)相似水平的異種移植物腫瘤中的抗腫瘤活性是強(qiáng)固的。需要進(jìn)一步的研究以在癌癥治療中完全評(píng)估這種有前途的新方法。
通過參考結(jié)合所有的專利、公開的專利申請(qǐng)和本文公開的其它文獻(xiàn)都通過參考特別結(jié)合于此。
等價(jià)物本領(lǐng)域的技術(shù)人員使用不過是常規(guī)的實(shí)驗(yàn)就會(huì)認(rèn)識(shí)到或者能夠確定許多于此處具體描述的本發(fā)明的具體實(shí)施方案的等價(jià)物。下面的權(quán)利要求意欲將這些等價(jià)物包含其中。
表1.在無(wú)腫瘤的雌性nu/nu無(wú)胸腺小鼠中20和100mg/kg erlotinib的單劑量藥代動(dòng)力學(xué)

Cmax＝峰值血漿濃度；Tmax＝到峰值血漿濃度的時(shí)間；Tlast＝最后的可測(cè)量濃度的時(shí)間；AUC last＝從零時(shí)至最后可測(cè)量濃度的時(shí)間的血漿濃度-時(shí)間曲線下面積；CL/F＝表觀清除率(apparent clearance)；λz＝消除速率常數(shù)；T1/2＝血漿末端半衰期；MRT＝平均停留時(shí)間；Vz/F＝分布的表觀體積(apparent volume of distribution)。
表2.對(duì)無(wú)腫瘤的無(wú)胸腺裸鼠(n＝5)治療14天的最大忍耐劑量評(píng)估


權(quán)利要求
1.藥物組合物，特別用于癌癥，其在藥用載體中包含EGFR激酶抑制劑和順鉑。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中埃洛替尼在組合物中以鹽酸鹽的形式存在。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的藥物組合物，其另外包含一種或多種其它抗癌劑。
5.一種制備治療腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用EGFR激酶抑制劑和順鉑。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述藥物用于癌癥。
7.權(quán)利要求5或6的方法，其中EGFR激酶抑制劑和順鉑被包含在相同制劑中。
8.權(quán)利要求5或6的方法，其中EGFR激酶抑制劑和順鉑被包含在不同制劑中。
9.權(quán)利要求5-8任一項(xiàng)的方法，其中EGFR激酶抑制劑和順鉑是通過相同的途徑被給藥于患者。
10.權(quán)利要求5-9任一項(xiàng)的方法，其中EGFR激酶抑制劑和順鉑是通過不同的途徑被給藥于患者。
11.權(quán)利要求5-10任一項(xiàng)的方法，其中使用EGFR激酶抑制劑埃洛替尼。
12.權(quán)利要求5-11任一項(xiàng)的方法，其中埃洛替尼是通過胃腸外或口腹給藥的方式被給藥于患者。
13.權(quán)利要求5-12任一項(xiàng)的方法，其中順鉑是通過胃腸外給藥的方式被給藥于患者。
14.權(quán)利要求5-13任一項(xiàng)的方法，其另外包含一種或多種其它抗癌劑。
15.權(quán)利要求5-14任一項(xiàng)的方法，其中所述其它抗癌劑選自烷化劑，環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，順鉑，白消安，美法侖，卡莫昔汀，鏈脲霉素，曲他胺，絲裂霉素C，抗代謝物，甲氨蝶呤，依托泊苷，6-巰嘌呤，6-thiocguanine，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶，卡培他濱，達(dá)卡巴嗪，抗生素類，放線菌素D，多柔比星，柔紅霉素，博來(lái)霉素，普卡霉素，生物堿，長(zhǎng)春堿，紫杉醇，糖皮質(zhì)激素，地塞米松，皮質(zhì)甾類，波尼松，核苷酶抑制劑，羥基脲，氨基酸耗竭酶，天冬酰胺酶，甲酰四氫葉酸和葉酸衍生物。
16.一種制備用于治療患者腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物組合物的方法，其包含將順鉑和EGFR激酶抑制劑結(jié)合。
17.依照權(quán)利要求16的方法，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
18.權(quán)利要求17的方法，其還包含將藥用載體與順鉑和埃洛替尼結(jié)合。
19.一種試劑盒，其包含容器，所述容器包含順鉑和EGFR激酶抑制劑。
20.權(quán)利要求19的試劑盒，還包含無(wú)菌稀釋劑。
21.權(quán)利要求19的試劑盒，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
22.權(quán)利要求19-21任一項(xiàng)的試劑盒，其還包含包裝說(shuō)明書，所述包裝說(shuō)明書包含打印的說(shuō)明書，其指導(dǎo)將順鉑和埃洛替尼的聯(lián)合治療應(yīng)用于患者以作為治療患者的腫瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移或其它癌癥的方法。
23.依照權(quán)利要求1的組合物，其另外包含一種或多種其它抗癌劑。
24.依照權(quán)利要求23的組合物，其中所述其它抗癌劑是選自由下述各項(xiàng)組成的組的成員抗代謝物，微管抑制劑，鬼臼毒素，抗生素，亞硝基脲，激素治療，激酶抑制劑，腫瘤細(xì)胞凋亡活化劑，和抗血管生成劑。
25.一種治療癌癥的方法，其包含對(duì)需要這種治療的受試者給予(i)第一個(gè)有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個(gè)有效量的順鉑。
26.一種治療癌癥的方法，其包含對(duì)需要這種治療的受試者給予(i)第一個(gè)低于治療量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個(gè)低于治療量的順鉑。
27.依照權(quán)利要求25或26的治療癌癥的方法，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
28.權(quán)利要求5的方法，其中待治療的腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移是結(jié)腸直腸腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移。
29.一種藥物組合物，特別用于癌癥，其包含(i)第一個(gè)有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個(gè)有效量的順鉑。
30.一種藥物組合物，特別用于癌癥，其包含(i)第一個(gè)低于治療量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個(gè)低于治療量的順鉑。
31.依照權(quán)利要求29或30的藥物組合物，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
32.EGFR激酶抑制劑和順鉑，用作藥物，特別用于癌癥。
33.埃洛替尼和順鉑，用作藥物，特別用于癌癥。
34.EGFR激酶抑制劑和順鉑在制備治療腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
35.依照權(quán)利要求34的應(yīng)用，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
36.如此處所描述的新化合物、工藝、藥物組合物，方法和用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于制備治療腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和順鉑，同時(shí)使用或不使用另外的藥劑或療法，如其它抗癌藥或放射療法。本發(fā)明還涵蓋藥物組合物，其包含EGFR激酶抑制劑和順鉑組合，結(jié)合以藥用載體?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的優(yōu)選的EGFR激酶抑制劑實(shí)例是化合物鹽酸埃洛替尼(也已知為Tarceva
文檔編號(hào)A61K31/496GK1968706SQ200580017897
公開日2007年5月23日 申請(qǐng)日期2005年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月3日
發(fā)明者B·希金斯, K·科林斯基 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司