專利名稱：作為β－分泌酶抑制劑的二苯基咪唑并嘧啶胺和二苯基咪唑并咪唑胺的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
無
背景技術(shù)：
主要與老化相關(guān)的腦部進(jìn)行性退化疾病阿茲海默氏病(Alzheimer′s disease(AD))是一種嚴(yán)重的健康問題。AD在臨床上的特征為記憶、認(rèn)知力、推理、判斷和定向能力的喪失。隨著疾病的發(fā)展，運(yùn)動(dòng)、感知和語言能力也受到影響，直至出現(xiàn)多種認(rèn)知功能的全部損傷。這些認(rèn)知力的喪失是逐漸發(fā)生的，但通常在4-12年內(nèi)導(dǎo)致嚴(yán)重?fù)p傷且最終導(dǎo)致死亡。罹患AD的患者在腦部和腦血管中顯示出特有的β淀粉樣沉積物(β淀粉樣血管病)以及神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangle)。淀粉樣斑塊和血管淀粉樣血管病也表現(xiàn)罹患21三體癥(Trisomy 21)(唐氏綜合癥(Down′s Syndrome))、遺傳性腦出血伴Dutch型淀粉樣變性病(HCHWA-D)和其他神經(jīng)退化性病癥的患者的腦部的特征。神經(jīng)原纖維纏結(jié)也出現(xiàn)于其他誘發(fā)癡呆的病癥中。
人們認(rèn)為稱作β淀粉樣蛋白的蛋白家族是引起阿茲海默氏病的病理和隨后認(rèn)知力減退的原因。淀粉樣前體蛋白(APP)的蛋白水解加工產(chǎn)生淀粉樣β(A-β)肽；詳細(xì)說來，A-β是通過由β分泌酶裂解APP的N末端且由一種或一種以上γ分泌酶裂解其C末端而產(chǎn)生。天冬氨酰蛋白酶或β分泌酶(BACE)的活性直接與自APP產(chǎn)生A-β肽相關(guān)(Sinha等人，Nature，1999.402，537-540)。越來越多的研究表明抑制β分泌酶將抑制A-β肽的產(chǎn)生。β分泌酶的抑制和隨后A-β肽的減少可導(dǎo)致腦中β淀粉樣沉積物和腦血管中β淀粉樣蛋白含量的降低，且有效治療由此引起的疾病或病癥。
因此，本發(fā)明的目的是提供作為β分泌酶抑制劑且可用作治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的治療劑的化合物。
本發(fā)明的另一目的是提供可用于治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的治療方法和醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的特征在于，所提供的化合物也可用于進(jìn)一步研究和闡明β分泌酶。
本發(fā)明的這些和其他目的和特征將由于下文陳述的詳細(xì)描述而變得更加明顯。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種式I的咪唑并嘧啶或咪唑并咪唑胺 其中X為N、NO或CR19；Y為N、NO或CR11；Z為N、NO或CR20，其限制條件為X、Y或Z中不超過兩者可為N或NO；R1和R2各自獨(dú)立地為H、CN或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基；R3和R4各自獨(dú)立地為H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，或R3和R4可合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的3元至7元環(huán)，或R3可與其所連接的原子和相鄰碳原子合起來形成一雙鍵；R5和R6各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR13、NR14R15，或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，或當(dāng)連接至相鄰碳原子時(shí)，R5和R6可與其所連接的原子合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的視情況經(jīng)取代的5元至7元環(huán)；R7、R8、R9、R10、R11、R19和R20各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR16、NR17R18，或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基；m為0或1；n為0、1、2或3； 為單鍵或雙鍵，其限制條件為當(dāng)m為0時(shí)，則 必須為單鍵；R12、R13和R16各自獨(dú)立地為H或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基或芳基；且R14、R15、R17和R18各自獨(dú)立地為H或C1-C4烷基；或其互變異構(gòu)體、其立體異構(gòu)體或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明也提供可用于治療、預(yù)防或改善患者以增加的β淀粉樣沉積物或增加的β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的治療方法和醫(yī)藥組合物。


無
具體實(shí)施例方式
阿茲海默氏病(AD)是一種主要的腦部退化性疾病，其在臨床上表現(xiàn)為記憶力、認(rèn)知、推理、判斷和情緒穩(wěn)定性的進(jìn)行性喪失，且逐漸導(dǎo)致極重度心智衰退和死亡。引起AD的確切原因尚未明晰，但越來越多的證據(jù)表明淀粉樣β肽(A-β)在疾病的發(fā)病機(jī)理中起到重要作用(D.B.Schenk、R.E.Rydel等人，Journal of Medicinal Chemistry，1995.21，4141和P.J.Selkoe.Physiology Review.2001.81.741)。罹患AD的患者顯示出特有的神經(jīng)病理性標(biāo)記，諸如在尸體解剖時(shí)在腦中檢測(cè)到神經(jīng)炎斑(且在β淀粉樣血管病中為腦血管中的沉積物)以及神經(jīng)原纖維纏結(jié)。A-β為AD腦中神經(jīng)炎斑的主要組份。此外，β-淀粉樣沉積物和血管β淀粉樣血管病也表現(xiàn)罹患唐氏綜合癥、遺傳性腦出血伴Dutch型淀粉樣變性病和其他神經(jīng)退化性病癥和誘發(fā)癡呆的病癥的個(gè)體的特征。淀粉樣前體蛋白(APP)的過度表達(dá)、APP裂解成A-β的改變或自患者腦部清除A-β的減少可增加腦中可溶或原纖維(fibrullar)形式的A-β的含量。APPβ位點(diǎn)裂解酶BACE1(也稱為memapsin-2或Asp-2)已在1999年經(jīng)識(shí)別(R.Vassar、B.D.Bennett，等人，Nature，1999.402，537)。BACE1是具有β分泌酶的所有已知功能特性和特征的膜結(jié)合天冬氨酸蛋白酶。與BACE1相似，已發(fā)現(xiàn)名為BACE2的第二種同源天冬氨酰蛋白酶在活體外具有β分泌酶活性。迫切地尋求BACE1或β分泌酶的與底物無關(guān)的低分子量、非肽抑制劑作為對(duì)β分泌酶研究的輔助且作為潛在治療劑。
意外的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)式I的二苯基咪唑并嘧啶胺或二苯基咪唑并咪唑胺化合物經(jīng)證實(shí)抑制β分泌酶且選擇性抑制BACE1。所述嘧啶胺或咪唑胺化合物可有利地用作治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的有效治療劑。因此，本發(fā)明提供一種式I的咪唑并嘧啶或咪唑并咪唑胺化合物
其中X為N、NO或CR19；Y為N、NO或CR11；Z為N、NO或CR20，其限制條件為X、Y或Z中不超過兩者可為N或NO；R1和R2各自獨(dú)立地為H、CN或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基；R3和R4各自獨(dú)立地為H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，或R3和R4可合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的3元至7元環(huán)，或R3可與其所連接的原子和相鄰碳原子合起來形成雙鍵；R5和R6各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR13、NR14R15，或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，或當(dāng)連接至相鄰碳原子時(shí)，R5和R6可與其所連接的原子合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的視情況經(jīng)取代的5元至7元環(huán)；R7、R8、R9、R10、R11、R19和R20各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR16、NR17R18，或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基；m為0或1；n為0、1、2或3； 為單鍵或雙鍵，其限制條件為當(dāng)m為0時(shí)，則 必須為單鍵；R12、R13和R16各自獨(dú)立地為H或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基或芳基；且R14、R15、R17和R18各自獨(dú)立地為H或C1-C4烷基；或其互變異構(gòu)體、其立體異構(gòu)體或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
X為N、NO或CR19；優(yōu)選N或CR19，更優(yōu)選N。Y為N、NO或CR11；優(yōu)選CR11。Z為N、NO或CR20，優(yōu)選CR20。符號(hào)m為0或1，優(yōu)選1。R7、R8、R9、R10、R11、R19和R20各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR16、NR17R18，或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基；優(yōu)選H或鹵素。 為單鍵或雙鍵，優(yōu)選雙鍵。含有X、Y和Z的環(huán)取代苯基，優(yōu)選在其3位上進(jìn)行取代。連接至苯基的含有X、Y和Z的環(huán)的環(huán)成員優(yōu)選為連接至Y和Z的碳原子。
R1和R2各自獨(dú)立地為H、-CN或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，優(yōu)選H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，更優(yōu)選H、C1-C4烷基或經(jīng)鹵素取代的經(jīng)取代C1-C4烷基，有利地為H。
R3和R4各自獨(dú)立地為H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，或R3和R4可合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的3元至7元環(huán)，或R3可與其所連接的原子和相鄰碳原子合起來形成雙鍵。R3和R4優(yōu)選各自獨(dú)立地為H或C1-C4烷基，或當(dāng)與其所連接的碳原子合起來時(shí)形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的3元至7元環(huán)(有利地為3元至5元環(huán))。所述環(huán)更優(yōu)選為碳環(huán)或含有一個(gè)選自O(shè)、N或S(有利地為O)的雜原子。有利地，R3和R4各自獨(dú)立地為H，或當(dāng)與其所連接的碳原子合起來時(shí)形成上述環(huán)。符號(hào)n為0、1、2或3，優(yōu)選0、1或2，有利地為1。
R5和R6優(yōu)選各自獨(dú)立地為H、鹵素、CN、OR13，或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基或C3-C8環(huán)烷基，或當(dāng)連接至相鄰碳原子時(shí)，R5和R6可與所述相鄰碳原子合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的視情況經(jīng)取代的5元至7元環(huán)，所述環(huán)優(yōu)選含有兩個(gè)氧原子作為雜原子。R5和R6更優(yōu)選各自獨(dú)立地為H、鹵素、CN、OR13或C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基或C3-C8環(huán)烷基，或當(dāng)連接至相鄰碳原子時(shí)，R5和R6可與所述相鄰碳原子合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的5元至7元環(huán)，所述環(huán)視情況經(jīng)1、2或3個(gè)鹵素原子取代。有利地，R5和R6的至少一者為OR13，或當(dāng)R5和R6合起來時(shí)表示視情況經(jīng)一個(gè)或一個(gè)以上鹵素原子取代的二價(jià)基團(tuán)，即亞甲基二氧基或亞乙基二氧基。R13為H或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基或芳基，優(yōu)選經(jīng)0、1、2或3個(gè)獨(dú)立地選自下列基團(tuán)的取代基取代的C1-C6烷基鹵素原子、硝基、氰基、硫代氰氧基、氰氧基、羥基、烷基、鹵烷基、烷氧基、鹵烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、甲酰基、烷氧羰基、羧基、烷氧羰基、烷?；?、烷酰氧基、烷硫基、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、氨甲?；⑼榛０坊?、苯基、苯氧基、苯甲基、苯甲氧基、雜環(huán)基和環(huán)烷基。
如本說明書和權(quán)利要求所使用的術(shù)語鹵素指示F、Cl、Br或I，且術(shù)語環(huán)雜烷基指示含有一或兩個(gè)選自N、O或S的可相同或不同的雜原子且視情況含有一個(gè)雙鍵的五元至七元環(huán)烷基環(huán)系統(tǒng)。如本文所述的術(shù)語中所包括的例示性環(huán)雜烷基環(huán)系統(tǒng)為下述環(huán)，其中X1為NR、O或S且R為H或下文所述的可選取代基 類似地，如本說明書和權(quán)利要求中所使用的術(shù)語雜芳基指示含有1、2或3個(gè)選自N、O或S的可相同或不同的雜原子的五元至十元芳環(huán)系統(tǒng)。所述雜芳基環(huán)系統(tǒng)包括吡咯基、唑基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并異噁唑基或其類似基團(tuán)。術(shù)語芳基指示碳環(huán)芳環(huán)系統(tǒng)，諸如苯基、萘基、蒽基或其類似基團(tuán)。術(shù)語芳基(C1-C4)烷基指示如上文所定義的連接至可為直鏈或支鏈的C1-C4烷基的芳基。所述芳基(C1-C4)烷基包括苯甲基、苯乙基、萘基甲基或其類似基團(tuán)。如本文所使用的術(shù)語鹵烷基指示具有1至2n+1個(gè)可相同或不同的鹵素原子的CnH2n+1基團(tuán)，且如本文所使用的術(shù)語鹵烷氧基指示具有1至2n+1個(gè)可相同或不同的鹵素原子的OCnH2n+1基團(tuán)。術(shù)語鹵烷基優(yōu)選指示CF3且術(shù)語鹵烷氧基優(yōu)0選指示OCF3。
在本說明書和權(quán)利要求中，當(dāng)指示術(shù)語C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、環(huán)雜烷基、芳基、芳基(C1-C4)烷基或雜芳基視情況經(jīng)取代且其中指示通過將R5和R6與R5和R6連接的原子合起來所形成的5元至7元環(huán)視情況經(jīng)取代時(shí)，視情況存在的取代基可為通常用于研發(fā)醫(yī)藥化合物或改質(zhì)所述化合物以影響其結(jié)構(gòu)/活性、持續(xù)性、吸收、穩(wěn)定性或其他有益特性的一種或一種以上取代基。所述取代基的特定實(shí)例包括鹵素原子、硝基、氰基、硫代氰氧基、氰氧基、羥基、烷基、鹵烷基、烷氧基、鹵烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、甲酰基、烷氧羰基、羧基、烷?；⑼榱蚧?、烷基亞磺?；?、烷基磺?；?、氨甲酰基、烷基酰胺基、苯基、苯氧基、苯甲基、苯甲氧基、雜環(huán)基或環(huán)烷基，優(yōu)選鹵素原子或低碳烷基或低碳烷氧基。通常可存在0至3個(gè)取代基。當(dāng)任一前述取代基表示或含有烷基取代基時(shí)，其可為直鏈或支鏈，且可含有多達(dá)12個(gè)、優(yōu)選多達(dá)6個(gè)、更優(yōu)選多達(dá)4個(gè)碳原子。
醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽可為任何由式I的化合物與醫(yī)藥學(xué)上可接受的酸(例如磷酸、硫酸、氫氯酸、氫溴酸、檸檬酸、順丁烯二酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、反丁烯二酸、乙酸、乳酸、硝酸、磺酸、對(duì)甲苯磺酸、甲烷磺酸或其類似酸)所形成的酸加成鹽。
本發(fā)明的化合物包括酯、氨基甲酸酯或其他常規(guī)前藥形式，其一般為本發(fā)明化合物的官能性衍生物且其易于在活體內(nèi)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的活性部分。因此，本發(fā)明的方法包括用式I的化合物或未特別揭示但投藥后在活體內(nèi)轉(zhuǎn)化成式I化合物的化合物治療上文所述的各種病況。也包括定義為將這些化合物引入生物系統(tǒng)中后所產(chǎn)生的活性物質(zhì)的本發(fā)明化合物的代謝物。
本發(fā)明的化合物可以一種或一種以上互變異構(gòu)體的形式存在。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到式I的化合物也可以如下所示的互變異構(gòu)體It存在。
互變異構(gòu)體通常以彼此之間的平衡存在。當(dāng)這些互變異構(gòu)體在環(huán)境和生理學(xué)條件下互相轉(zhuǎn)化時(shí)，其提供相同有用的生物作用。本發(fā)明包括所述互變異構(gòu)體的混合物以及式I和式It的個(gè)別互變異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物可含有一個(gè)或一個(gè)以上的不對(duì)稱碳原子或一個(gè)或一個(gè)以上的不對(duì)稱(手性)中心，且因此可產(chǎn)生光學(xué)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體。因此，本發(fā)明包括所述光學(xué)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體，以及外消旋和已解析的對(duì)映異構(gòu)純立體異構(gòu)體，以及R和S立體異構(gòu)體的其他混合物。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將了解，當(dāng)相對(duì)于另一種(其他)立體異構(gòu)富含體一種立體異構(gòu)體時(shí)或當(dāng)一種立體異構(gòu)體與另一種(其他)立體異構(gòu)體分離時(shí)，其可更具活性或可顯示出有益作用。此外，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員了解如何分離、富集或選擇性制備所述立體異構(gòu)體。因此，本發(fā)明包含式I的化合物、其立體異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體及其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明的化合物可以立體異構(gòu)體的混合物、個(gè)別立體異構(gòu)體或光學(xué)活性或?qū)τ钞悩?gòu)純的形式存在。
本發(fā)明的立體異構(gòu)體包括其中式I為式IA的化合物和其中式I為式IB的化合物。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物為那些R1和R2為H的式I的化合物。本發(fā)明的另一組優(yōu)選化合物為那些m和n為1的式I的化合物。也優(yōu)選那些X為N的式I的化合物。本發(fā)明的又一組優(yōu)選化合物為那些含氮5元或6元雜芳環(huán)以連接苯環(huán)3位的方式連接至苯環(huán)的式I的化合物；所述優(yōu)選組的式I化合物在本說明書和權(quán)利要求中稱為式Ia。式Ia的化合物如下所示。
本發(fā)明的更優(yōu)選化合物為那些含氮雜芳基環(huán)為6元環(huán)且以連接所述雜芳基環(huán)3位的方式連接至苯環(huán)的式Ia的化合物，所述更優(yōu)選組的式I化合物在本說明書和權(quán)利要求中稱為式Ib。式Ib如下所示。
本發(fā)明的另一組更優(yōu)選化合物為那些R1和R2為H的式Ib的化合物。本發(fā)明的又一組更優(yōu)選化合物為那些Y為CR11且R1和R2為H的式Ib的化合物。
式I的優(yōu)選化合物的實(shí)例包括8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；7-(3-嘧啶-5-基苯基)-7-[4-(三氟甲氧基)苯基]-7H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-胺；8-[4-氟-3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(5-氯吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8S)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8R)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8R)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8S)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；
8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(4-甲氧基苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-(4-甲氧基苯基)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-(4-氟-3-嘧啶-5-基苯基)-8-(4-甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[4-氟-3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(4-甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-(4-氟-3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[4-氟-3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[4-氟-3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；其互變異構(gòu)體、其立體異構(gòu)體或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
有利地，本發(fā)明提供一種制備式I的化合物的方法，其包含使其中Hal為Cl或Br的式II的化合物與其中W為B(OH)2、Sn(Bu)3或Sn(CH3)3的式III的化合物在鈀催化劑和無機(jī)堿存在下視情況在溶劑存在下反應(yīng)。所述方法顯示于流程圖I中，其中Hal和W如上文所定義。
流程圖I 適用于本發(fā)明的方法中的鈀催化劑包括Pd(O)或Pd(II)催化劑，諸如二氯雙(三-鄰甲苯基膦)鈀(II)、Pd(OCOCH3)2/三-鄰甲苯基膦、肆(三苯基膦)鈀(O)、三(二亞苯甲基丙酮)二鈀(O)三苯基膦或其類似物。
適用于本發(fā)明的方法中的無機(jī)堿包括鈉或鉀的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，優(yōu)選Na2CO3或K2CO3。
適用于本發(fā)明的方法中的溶劑包括極性或非極性有機(jī)溶劑，諸如甲苯、二乙氧基乙基醚、二噁烷、乙二醇二甲醚，或能夠溶解式II或式III的化合物的任何非反應(yīng)性有機(jī)溶劑。
式II的化合物可使用常規(guī)合成方法和(若需要)標(biāo)準(zhǔn)分離或離析技術(shù)來制備。舉例而言，其中R1和R2為H的式II的化合物(IIa)可通過以下步驟制備使式IV的酮與式V的苯基溴化鎂在催化劑(諸如CuI)存在下反應(yīng)以得到式VI的1，1，1-三取代甲醇化合物；使所述式VI的甲醇繼續(xù)與亞硫酰氯和氨反應(yīng)以得到相應(yīng)的式VII的甲胺；且使所述式VII的胺與溴化氰在乙腈存在下反應(yīng)以得到所需式IIa產(chǎn)物。反應(yīng)顯示于流程圖II中，其中Hal為Cl或Br。
流程圖II 式IV的酮可使用常規(guī)技術(shù)制備，例如通過使式VIII的苯甲?；u化物與式IX的咪唑或四氫嘧啶在堿(諸如NaOH)存在下反應(yīng)來制備，或通過用氧化劑(MnO2)氧化式X的適當(dāng)甲醇化合物來制備。所述反應(yīng)顯示于流程圖III中。
流程圖III 式X的化合物可通過以下步驟制備使式XI的苯甲醛與NaHSO3和NaCN反應(yīng)以得到相應(yīng)的式XII的氰基甲醇；使所述式XII的化合物與乙醇和HCl反應(yīng)以得到式XIII的亞胺酯；且使所述式XIII的化合物與式XIV的二胺反應(yīng)以得到所需的式X的甲醇衍生物。反應(yīng)展示于流程圖IV中，其中Hal為Cl或Br。
流程圖IV
可使用上文流程圖I中所述的程序?qū)⑹絀Ia的化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的式I的化合物，其中R1和R2為H。
可使用標(biāo)準(zhǔn)烷基化技術(shù)制備其中R1和R2不為H的式I的化合物，諸如使其中R1和R2為H的式I的化合物與烷基鹵化物R1-Hal反應(yīng)得到其中R2為H的式I的化合物(Id)，且視情況使所述式Id的化合物與第二烷基鹵化物R2-Hal反應(yīng)得到所需的其中R1和R2不為H的式I的化合物。
有利地，本發(fā)明的化合物可用于治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥，所述疾病或病癥包括阿茲海默氏病、唐氏綜合癥、遺傳性腦出血伴Dutch型淀粉樣變性病或其他神經(jīng)退化性病癥或誘發(fā)癡呆的病癥。因此，本發(fā)明提供一種用于治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的方法，所述方法包含向所述患者提供治療有效量的如上文所述的式I的化合物。所述化合物可通過經(jīng)口或非經(jīng)腸投藥或以已知將治療劑有效投與有此需要的患者的任何常用方式提供。
如本文關(guān)于提供本發(fā)明所包括的化合物或物質(zhì)所使用的術(shù)語“提供”指示直接投與所述化合物或物質(zhì)或投與在體內(nèi)形成等量所述化合物或物質(zhì)的前藥、衍生物或類似物。
為治療特定CNS病癥所提供的治療有效量可根據(jù)治療的特定病況、患者的體格、年齡和反應(yīng)模式、病癥的嚴(yán)重程度、主治醫(yī)生的判斷及其類似因素而變化。一般說來，每日經(jīng)口投藥的有效量可為約0.01至1,000mg/kg，優(yōu)選為約0.5至500mg/kg，且非經(jīng)腸投藥有效量可為約0.1至100mg/kg，優(yōu)選為約0.5至50mg/kg。
在實(shí)際實(shí)踐中，本發(fā)明的化合物是通過投與純的或與一種或一種以上常規(guī)醫(yī)藥載劑或賦形劑組合的固體或液體形式的化合物或其前體來提供。因此，本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和有效量的如上文所述的式I的化合物。
適用于本發(fā)明的組合物中的固體載劑包括也可充當(dāng)調(diào)味劑、潤(rùn)滑劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、助流劑、壓縮助劑、粘合劑、片劑崩解劑或膠囊密封材料的一種或一種以上物質(zhì)。在粉劑中，載劑可為磨碎的固體，其存在于與磨碎的式I的化合物的混合物中。在片劑中，式I化合物可與具有所需壓縮特性的載劑以適當(dāng)比例混合并壓實(shí)成所需的形狀和尺寸。所述粉劑和片劑可含有高達(dá)99重量％式I的化合物。適用于本發(fā)明的組合物中的固體載劑包括磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹脂。
適于制備溶液、懸浮液、乳液、糖漿和酒劑的任何醫(yī)藥學(xué)上可接受的液體載劑都可用于本發(fā)明的組合物中。式I的化合物可溶解或懸浮于醫(yī)藥學(xué)上可接受的液體載劑(諸如水、有機(jī)溶劑或醫(yī)藥學(xué)上可接受的油或脂肪，或其混合物)中。所述液體組合物可含有其他適當(dāng)?shù)尼t(yī)藥添加劑，諸如增溶劑、乳化劑、緩沖液、防腐劑、甜味劑、調(diào)味劑、懸浮劑、增稠劑、著色劑、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、滲透調(diào)節(jié)劑或其類似物。適于經(jīng)口和非經(jīng)腸投藥的液體載劑的實(shí)例包括水(尤其含有如上所述的添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如甘油)或其衍生物，或油(例如經(jīng)分餾的椰子油和花生油)。就非經(jīng)腸投藥而言，載劑也可為油狀酯，例如油酸乙酯或十四烷酸異丙酯。
本發(fā)明的組合物的無菌溶液或懸浮液適于肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下注射。無菌溶液也可經(jīng)靜脈內(nèi)投與。適于經(jīng)口投與的本發(fā)明的組合物可為液體或固體組合物的形式。
另外，可能需要使用持續(xù)傳遞裝置以避免患者每日服藥的必要性?！俺掷m(xù)傳遞”的定義為延緩活性劑(亦即本發(fā)明的化合物)的釋放直至放置于傳遞環(huán)境中后接著在一稍后的時(shí)間持續(xù)釋放藥劑。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員了解適當(dāng)?shù)某掷m(xù)傳遞裝置。適當(dāng)?shù)某掷m(xù)傳遞裝置的實(shí)例包括(例如)水凝膠(例如參見美國(guó)專利第5,266,325號(hào)、第4,959,217號(hào)和第5,292,515號(hào))、滲透泵(諸如Alza(美國(guó)專利第4,295,987號(hào)和第5,273,752號(hào))或Merck(歐洲專利第314,206號(hào))所述)、疏水膜材料(諸如甲基丙烯酸乙二酯(EMA)和乙烯乙酸乙二酯(EVA))、生物可再吸收聚合物系統(tǒng)(例如參見國(guó)際專利公開案第WO98/44964號(hào)(Bioxid和Cellomeda)、美國(guó)專利第5,756,127號(hào)和第5,854,388號(hào))；也已描述其他生物可再吸收植入裝置是由(例如)聚酯、聚酐或乳酸/乙醇酸共聚物(例如參見美國(guó)專利第5,817,343號(hào)(Alkermes Inc.))構(gòu)成。為用于所述持續(xù)傳遞裝置中，可如本文所述調(diào)配本發(fā)明的化合物。
另一方面，本發(fā)明提供一種用于傳遞產(chǎn)品的醫(yī)藥試劑盒。所述試劑盒適當(dāng)?shù)睾芯哂姓{(diào)配用于所需傳遞路徑的化合物的包裝或容器。舉例而言，如果試劑盒是設(shè)計(jì)用于通過吸入投藥，則其可含有懸浮液，所述懸浮液含有調(diào)配用于通過吸入由氣霧劑或噴霧傳遞的預(yù)定劑量的本發(fā)明化合物。試劑盒適當(dāng)?shù)睾嘘P(guān)于給藥的說明和有關(guān)活性劑的插頁(yè)。試劑盒可視情況另外含有有關(guān)監(jiān)測(cè)用于進(jìn)行包括(例如)試劑、孔板、容器、標(biāo)記或標(biāo)簽及其類似物的此類檢定的產(chǎn)品和材料的循環(huán)量的說明。所述試劑盒易于以適于治療所需的適應(yīng)癥的方式包裝。舉例而言，試劑盒也可含有有關(guān)使用噴霧泵或其他傳遞裝置的說明。
考慮到所需的適應(yīng)癥和傳遞路徑，所述試劑盒的其他適當(dāng)組件將為所屬領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見?？擅咳?、每周或每月重復(fù)劑量持續(xù)一段預(yù)定或如處方所示的時(shí)間長(zhǎng)度。
為更清晰了解且更清晰說明本發(fā)明，下文將描述本發(fā)明的特定實(shí)例。以下實(shí)例僅為說明且不應(yīng)將其理解為以任何方式限制本發(fā)明的范疇和基本原理。實(shí)際上，除本文所示和所述者外，本發(fā)明的各種修改也會(huì)因下文所述的實(shí)例和上文描述而對(duì)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員變得顯而易見。所述修改也意欲處于隨附權(quán)利要求的范疇內(nèi)。
除非另外說明，否則所有份數(shù)為重量份。術(shù)語NMR指示核磁共振。術(shù)語THF和DMF分別指示四氫呋喃和二甲基甲酰胺。
實(shí)例12-(3-溴苯甲?；?-1H-咪唑的制備 用3-溴苯甲酰氯(17.5g，79.9mmol)處理處于0℃的咪唑(2.66g，39.1mmol)和三乙胺(Et3N)(8.03g，79.4mmol)在吡啶中的溶液，攪拌5min，將其溫至室溫歷時(shí)45min，用氫氧化鈉水溶液(7.5N，20mL，150mmol)加以處理，回流溫度下加熱2h，將其冷卻至室溫，用水稀釋，用冰浴進(jìn)一步冷卻1h并過濾。用水洗滌濾餅，并在真空中于50℃下干燥整夜以提供呈淺茶色固體狀的標(biāo)題化合物4.89g(產(chǎn)率50％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ10.58(br s，1H)，8.73(t，J＝1.8Hz，1H)，8.61(dt，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.75-7.72(m，1H)，7.42-7.38(m，2H)，7.32(s，1H)；ESI MS m/z 250[C10H7BrN2O+H]+。
實(shí)例21-(3-溴苯基)-1-(咪唑-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)-苯基]-甲醇的制備
用1-溴-4-(三氟甲氧基)苯(6.32g，26.2mmol)在THF中的溶液逐滴處理處于50℃的鎂(0.644g，87.7mmol)在THF(13mL)中的混合物，歷時(shí)5min時(shí)期，在50℃下再攪拌1.5h，將其冷卻至室溫，用碘化銅(I)(0.041g，0.215mmol)和2-(3-溴苯甲?；?-1H-咪唑(2.60g，10.4mmol)在THF中的溶液加以處理，65℃下加熱整夜，將其冷卻至室溫并用1∶1∶1的乙酸乙酯、水和飽和氯化銨水溶液的混合物稀釋。分離相，并用乙酸乙酯萃取水相。用硫酸鈉干燥已合并的有機(jī)萃取液，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，85∶15至75∶25的己烷/乙酸乙酯作為洗脫液)純化所得殘余物得到呈黃色固體狀的標(biāo)題化合物3.47g(產(chǎn)率81％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.98(br s，1H)，7.55(t，J＝1.6Hz，1H)，7.45(dt，J＝8.1，1.9Hz，1H)，7.37-7.34(m，2H)，7.24-7.20(m，2H)，7.18(d，J＝8.1Hz，2H)，7.07(brs，1H)，6.98(brs，1H)，4.30(brs，1H)；ESIMS m/z 412[C17H12BrF3N2O2+H]+。
實(shí)例31-(3-溴苯基)-1-(咪唑-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)苯基]甲胺的制備 80℃下，加熱1-(3-溴苯基)-1-(咪唑-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)-苯基]甲醇(1.89g，4.57mmol)和亞硫酰氯(2.13g，17.9mmol)在苯中的混合物3h，將其冷卻至室溫，并在真空中濃縮至干。使此橙色固體殘余物分散于異丙醇中，在冰浴溫度下用氨氣鼓泡直至溶液飽和。在密封管中，在35℃下加熱此氨飽和溶液整夜，將其冷卻至室溫，濃縮并使其在氯仿(50mL)與1 N HCl(50mL)之間分溶。分離相，并用額外的1 N HCl洗滌有機(jī)相。將合并的HCl洗滌液冷卻至0℃，通過加入固體氫氧化鈉將其堿化至pH＞10，并用氯仿萃取。用硫酸鈉干燥已合并的氯仿萃取液，過濾并濃縮得到呈淺黃色固體狀的標(biāo)題化合物1.68g(產(chǎn)率89％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CDCI3)δ9.12(br s，1H)，7.51(t，J＝1.2Hz，1H)，7.44-7.41(m，1H)，7.35-7.31(m，2H)，7.22-7.19(m，2H)，7.18-7.15(m，2H)，7.15(t，J＝1.5Hz，1H)，6.97(t，J＝1.7Hz，1H)，2.48(brs，2H)；ESIMS m/z 412[C17H13BrF3N3O+H]+。
實(shí)例47-(3-(溴苯基)-7-[4-(三氟甲氧基)苯基]-7H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺的制備 在密封管中，在100℃下加熱1-(3-溴苯基)-1-(咪唑-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)-苯基]甲胺(1.67g，4.05mmol)和溴化氰(1.75g，16.5mmol)在乙腈中的混合物整夜，將其冷卻至室溫并濃縮。通過快速色譜法(硅石，96∶4∶0.5的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨，隨后85∶15至50∶50的己烷/乙酸乙酯作為洗脫液)純化所得殘余物兩次得到呈黃色固體狀的標(biāo)題化合物0.671g(產(chǎn)率38％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CDCI3)δ7.61(t，J＝1.6Hz，1H)，7.53-7.48(m，2H)，7.46-7.41(m，3H)，7.27-7.22(m，4H)；ESI MSm/z 437[C18H12BrF3N4O+H]+。
實(shí)例57-[(3-(嘧啶-5-基)苯基)-7-[4-(三氟甲氧基)苯基]-7H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺的制備 在100℃下，加熱7-(3-(溴苯基)-7-[4-(三氟甲氧基)苯基]-7H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺(0.201g，0.460mmol)、5-嘧啶硼酸(0.073g，0.587mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.016g，0.0232mmol)、三苯基膦(0.012g，0.047mmol)和碳酸鉀(0.189g，1.37mmol)在5∶1的二噁烷/水中的混合物3.5h，將其冷卻至室溫并濃縮。通過快速色譜法(硅石，96∶4∶0.5的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨作為洗脫液)純化所得殘余物得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題化合物0.037g(產(chǎn)率19％)，熔點(diǎn)120℃-130℃，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CD3OD)9.12(s，1H)，9.02(s，2H)，7.81(s，1H)，7.67-7.62(m，2H)，7.56-7.51(m，3H)，7.47(d，J＝1.1Hz，1H)，7.27(d，J＝1.5Hz，1H)，7.23(d，J＝8.3Hz，2H)；IR(ATR)3143，1672，1505，1443，1414，1253，1216，1159，791，723cm″1；ESI MS m/z 437[C22H15F3N6O+H]+。
實(shí)例61-(3-溴-4-氟苯基)-1-氰基甲醇的制備 用3-溴-4-氟苯甲醛(45.8g，225mmol)處理處于50℃的亞硫酸氫鈉(28.3g，271mmol)水溶液，在50℃下攪拌2h，用冰浴冷卻，用乙醚稀釋，用氰化鈉(12.2g，248mmol)水溶液逐滴加以處理歷時(shí)30min時(shí)期，并在室溫下攪拌整夜。分離反應(yīng)混合物，且用乙醚萃取水相。使萃取液與有機(jī)相組合，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮至干，得到呈澄清油狀的標(biāo)題化合物47.6g(產(chǎn)率92％)，通過NMR分析加以識(shí)別。1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.75(m，1H)，7.47(m，1H)，7.23(m，1H)，5.54(m，1H)，3.19(m 1H)。
實(shí)例72-(3-溴-4-氟苯基)-2-羥基乙烷亞氨酸乙酯鹽酸鹽的制備 用冰浴冷卻1-(3-溴-4-氟苯基)-1-氰基甲醇(47.5g，206mmol)和乙醇(10.9g，237mmol)在乙醚中的溶液，并用HCl(258mL的1.0M于乙醚中的溶液，258mmol)逐滴處理歷時(shí)40min時(shí)期，在冰浴溫度下攪拌2h，在0℃下存儲(chǔ)6天，溫至室溫，用己烷稀釋并過濾。干燥濾餅得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物39.8g(產(chǎn)率62％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。標(biāo)題化合物為E和Z型異構(gòu)體的混合物。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.78(m，1H)，7.49(m，1H)，7.28(m，1H)，5.54和5.17(2m，1H)，4.45和4.15(2m，2H)，1.38和1.20(2t，3H)；ESI MS m/z 261[C10H11BrFNO2+H]4。
實(shí)例81-(3溴-4-氟苯基)-1-(2-四氫嘧啶基)甲醇的制備 在密封管中，在120℃下加熱2-(3-溴-4-氟苯基)-2-羥基乙烷亞氨酸乙酯鹽酸鹽(39.8g，127mmol)和1，3-二氨基丙烷(9.43g，127mmol)在乙醇中的混合物整夜，將其冷卻至室溫，濃縮以移除溶劑，用水稀釋，用力攪拌1h并過濾。用冰浴冷卻濾液，用1 N NaOH使其呈強(qiáng)堿性，在冰浴中冷卻1h并過濾。干燥濾餅得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物23.4g(產(chǎn)率64％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.59(m，1H)，7.30(m，1H)，7.10(t，J＝8.4Hz，1H)，4.79(s，1H)，3.35(m，4H)，1.76(m，2H)；ESI MS m/z287[C11H12BrFN2O+H]+。
實(shí)例92-(3-溴-4-氟苯甲?；?-2.3，4，5-四氫嘧啶的制備 在室溫下，攪拌1-(3-溴-4-氟苯基)-1-(2-四氫嘧啶基)甲醇(23.4 g，81.5mmol)和二氧化錳(70.8g，815mmol)在二氯甲烷中的混合物3天，并通過硅藻土過濾。用氯仿洗滌濾餅。合并濾液，并濃縮至干以得到呈黃綠色固體狀的標(biāo)題化合物18.9g(產(chǎn)率81％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CDCI3)δ8.51(m，1H)，8.23(m，1H)，7.15(t，J＝8.4Hz，1H)，6.10(br s，1H)，3.65(br s，2H)，3.41(br s，2H)，1.83(m，2H)；ESI MSm/z284[C11H10BrFN2O+H]+。
實(shí)例101-(3-溴-4-氟苯基)-1-(四氫嘧啶-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)苯基]甲醇的制備 用1-溴-4-(三氟甲氧基)苯(21.1g，87.7mmol)在THF中的溶液逐滴處理處于50℃的鎂(2.13g，87.7mmol)在THF中的混合物歷時(shí)20min時(shí)期，在50℃下再攪拌1.5h，將其冷卻至室溫，用碘化銅(I)(0.13g，0.70mmol)和2-(3-溴-4-氟苯甲?；?-2，3，4，5-四氫嘧啶(10.0g，14.9mmol)在THF中的溶液加以處理，在65℃下加熱整夜，將其冷卻至室溫并用乙酸乙酯和飽和氯化銨水溶液稀釋。分離相。用水和鹽水連續(xù)洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，并濃縮以得到18.5g褐色油狀物。通過快速色譜法(硅石，90∶10∶0.5的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨作為洗脫液)純化所述油狀物得到呈黃色油狀的標(biāo)題化合物10.0g(產(chǎn)率64％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.60(dd，J＝6.4，2.3Hz，1H)，7.41(dd，J＝6.9，2.0Hz，2H)，7.28-7.20(m，3H)，7.10(t，J-8.3Hz，1H)，3.50(m，6H)，1.96(m，2H)；ESI MS m/z447[C18H15BrF4N2O2+H]+。
實(shí)例111-(3-溴-4-氧苯基)-1-(四氧嘧啶-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)苯基]甲胺的制備 在110℃下，加熱1-(3-溴-4-氟苯基)-1-(四氫嘧啶-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)苯基]甲醇(4.60g，10.3mmol)和亞硫酰氯(12.2g，103mmol)在甲苯中的混合物整夜，將其冷卻至室溫，并濃縮至干得到茶色固體狀殘余物。將殘余物分散于異丙醇中，并用氨氣鼓泡通過所述殘余物直至混合物中氨飽和。在密封管中，在45℃下加熱飽和混合物整夜，將其冷卻至室溫并濃縮。使所得殘余物在氯仿與1 N NaOH之間分溶。分離水相，并用氯仿萃取。使萃取液與有機(jī)相組合，用碳酸鉀干燥并濃縮得到呈深色油狀的標(biāo)題化合物0.89g(＞100％，純度約為80％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.65(m，1H)，7.41-7.303(m，36H)，3.41(brs，4H)，2.32(brs，2H)，1.77(m，2H)；ESI MS m/z446[C18H16BrF4N3O+H]+。
實(shí)例128-(3-溴-4-氟苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備 在室溫下，攪拌1-(3-溴-4-氟苯基)-1-(四氫嘧啶-2-基)-1-[4-(三氟甲氧基)苯基]甲胺(0.85g，純度約為80％，約1.52mmol)和溴化氰(0.81g，7.62mmol)在乙腈中的混合物45min，在密封管中于100℃下加熱整夜，將其冷卻至室溫并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨作為洗脫液)純化所得殘余物得到呈茶色固體狀的標(biāo)題化合物0.26g(產(chǎn)率36％)，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(300MHz，CDC！3)δ7.74(dd，J＝6.7，2.3Hz，1H)，7.49(dd，J＝6.7，2.1Hz，2H)，7.38(m，1H)，7.13(d，J＝8.1Hz，2H)，7.03(t，J＝8.5Hz，1H)，3.58(m，4H)，1.86(m，2H)；ESI MS m/z 471[C19H15BrF4N4O]+。
實(shí)例138-{[(4-氟-3-嘧啶-5-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}胺的制備
在100℃下，加熱8-(3-溴-4-氟苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺(0.26g，0.552mmol)、5-嘧啶硼酸(0.082g，0.662mmol)、肆(三苯基膦基)鈀(0)(0.032g，0.0276mmol)和碳酸鉀(0.23g，1.65mmol)在5∶1的二噁烷/水中的混合物1h，用額外肆(三苯基膦基)鈀(0)(0.032g，0.0276mmol)處理，在100℃下加熱3.5h，將其冷卻至室溫并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨作為洗脫液)純化所得殘余物得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題化合物0.079g(產(chǎn)率30％)，熔點(diǎn)105℃-115℃，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ9.14(s，1H)，8.97(s，2H)，7.55(m，2H)，7.43(dd，J＝6.8，2.1Hz，2H)，7.21-7.31(m，3H)，3.69(m，2H)，3.50(m，2H)，1.87(m，2H)；ESI MS m/z 471[C23H18F4N6O+H]+。
實(shí)例14{8-[4-氟-3-(5-氟嘧啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}胺的制備 使8-(3-溴-4-氟苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺(0.075g，0.159mmol)、3-氟-5-(三丁基錫烷基)吡啶(0.092g，0.239mmol)和二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(0.006g，0.008mmol)在DMF中的混合物脫氣，在密封管中于150℃下加熱1.5h，將其冷卻至室溫并用乙酸乙酯(50mL)和5％LiCl水溶液稀釋。分離反應(yīng)混合物。用5％LiCl水溶液洗滌有機(jī)相，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨作為洗脫液)純化所得殘余物得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.043g(產(chǎn)率56％)，熔點(diǎn)94-105℃，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.56(d，J≈1.3Hz，1H)，8.47(d，J＝2.6Hz，1H)，7.83(d，J＝9.7Hz，1H)，7.54-7.44(m，4H)，7.41-7.21(m，3H)，3.69(m，2H)，3.50(m，2H)，1.87(m，2H)；ESI MSm/z488[C24H18F5N5O+H]+。
實(shí)例15-28二苯基咪唑并嘧啶基胺衍生物的制備

使用與上述實(shí)例5、13和14中所述程序基本相同的程序且使用適當(dāng)?shù)s環(huán)試劑(其中W為B(OH)2或Sn(正丁基)3)，獲得表I中的化合物，并通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。
表I



實(shí)例298-(3-嘧啶-5-基-苯基)-8-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基-氰胺的制備

在氮?dú)鈿夥障?，攪拌乙二醇二甲醚、?二亞苯甲基丙酮)-二鈀(O)(0.014g，16.0μmol)、三苯基膦(0.008g，32.0μmol)的混合物5min，用2(0.153g，0.320mmol)、嘧啶-5-硼酸(0.047g，0.380mmol)、碳酸鈉(0.101g，0.96mmol)和水(2mL)加以處理，在85℃下加熱1h，將其冷卻至室溫并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97.5∶2.5∶0.5的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨作為洗脫液)純化所得殘余物得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物0.130g(產(chǎn)率85％)，熔點(diǎn)227-231℃，通過NMR和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ9.13(s，1H)，9.02(s，2H)，7.77(d，J＝7.5Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.62{66，J＝7.9，7.6Hz，1H)7.57(d，J＝8.0Hz，1H)，7.50(d，J-8.9Hz，2H)，7.33(d，J＝8.3Hz，2H)，3.70(m，2H)，3.58(m，2H)，1.89(m，2H)；IR(ATR)3106，2187，1622，1500，1412，1256，1218，1159cm″1；ESI MS m/z 478[C24H18F3N7O+H]+。
實(shí)例30(8R)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(A)和(8S)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(B)的制備
將8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺的外消旋混合物(0.740g，1.57mmol)放置于Chiralpak AD 5×50cm管柱(以90∶10∶0.1的庚烷/乙醇/二乙胺作為洗脫液)中。收集第二個(gè)洗脫峰(tR＝26min)并將其濃縮成淺黃色油狀物。將油狀殘余物再溶解于極少量二氯甲烷中，用己烷濕磨并過濾。真空干燥濾餅24h得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物A0.299g，熔點(diǎn)126-131℃；[α]25D-11.6°(于MeOH中c＝0.5)；通過NMR、紅外和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16(dd，J＝4.8，1.1Hz，1H)，8.03-7.98(m，1H)，7.58(s，1H)，7.55-7.52(m，1H)，7.49-7.45(m，3H)，7.44-7.41(m，1H)，7.40-7.37(m，1H)，7.23(d，J＝8.2Hz，2H)，3.70(t，J＝6.0Hz，2H)，3.49(t，J＝5.4Hz，2H)，1.90-1.85(m，2H)；IR(ATR)3062，2954，1654，1602，1504，1434，1251，1216，1159，791cm-1；ESI MS m/z470[C24H19F4N5O+H]+；收集第一個(gè)洗脫峰(tR＝19min)并將其濃縮成淺黃色油狀物。將油狀殘余物再溶解于極少量二氯甲烷中，用己烷濕磨并過濾。真空干燥濾餅24h得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物B 0.315g，熔點(diǎn)124-128℃；[α]25D+12.6°(于MeOH中c＝0.5)；通過NMR、紅外和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16(dd，J＝4.8，1.1Hz，1H)，8.03-7.98(m，1H)，7.58(s，1H)，7.55-7.52(m，1H)，7.49-7.45(m，3H)，7.44-7.41(m，1H)，7.40-7.37(m，1H)，7.23(d，J＝8.2Hz，2H)，3.70(t，J＝6.0Hz，2H)，3.49(t，J＝5.4Hz，2H)，1.90-1.85(m，2H)；IR(ATR)3064，2947，1653，1602，1504，1434，1251，1216，1158，791cm-1；ESI MS m/z 470[C24H19F4N5O+H]。
實(shí)例31(8R)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(A)和(8S)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺(B)的制備 將8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺的外消旋混合物(2.0g，1.57mmol)放置于Chiralpak AD 5×50cm管柱(以90∶10∶0.1的庚烷/乙醇/二乙胺作為洗脫液)中。收集第一個(gè)洗脫峰(tR＝34min)并濃縮以得到淺黃色油狀物。將所述油狀物再溶解于極少量二氯甲烷中，用己烷濕磨并過濾。真空干燥濾餅24h得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題化合物A 0.815g，熔點(diǎn)178-186℃；[α]25D-14.7°(于MeOH中c＝0.50)；通過NMR、紅外和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ9.12(s，1H)，9.02(s，2H)，7.70-7.67(m，2H)，7.57-7.51(m，2H)，7.48-7.44(m，2H)，7.26(d，J＝8.7Hz，2H)，3.73(t，J＝6.3Hz，2H)，3.55-3.52(m，2H)，1.92-1.88(m，2H)；IR(ATR)3040，2956，2859，1655，1504，1413，1253，1160，786cm-1；ESI MS m/z453[C23H19F3N5O+H]+；收集第二個(gè)洗脫峰(tR＝46min)并濃縮以得到淺黃色油狀物。將油狀殘余物再溶解于極少量二氯甲烷中，且隨后用己烷濕磨并過濾。真空干燥濾餅24h得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題化合物B 0.798g，熔點(diǎn)180-186℃；[α]25D+9.7°(于MeOH中c＝0.51)；通過NMR、紅外和質(zhì)譜分析加以識(shí)別。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ9.13(s，1H)，9.02(s，2H)，7.73-7.69(m，2H)，7.58-7.51(m，2H)，7.49-7.46(m，2H)，7.29-7.26(m，2H)，3.76(t，J＝6.3Hz，2H)，3.57-3.55(m，2H)，1.93-1.90(m，2H)；IR(ATR)3040，2955，1655，1553，1505，1413，1253，1201，1162，786cm-1；ESI MS m/z 453[C23H19F3N5O+H]+。
實(shí)例32(8S)-8-[3-(5-氯吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺[A]和(8R)-8-[3-(5-氯吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺[B]的制備 使用Chiralpak AD 5×50cm管柱(90∶10∶0.1的庚烷/乙醇/二乙胺)將8-[3-(5-氯吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺的外消旋混合物(1.73g)分離成其對(duì)映異構(gòu)體，得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題S型異構(gòu)體(A)，熔點(diǎn)104-116℃；[α]25D-8.6°(于MeOH中c＝0.51％)；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.69(d，J＝1.9Hz，1H)，8.53(d，J＝2.2Hz，1H)，8.11(t，J＝2.1Hz，1H)，7.69-7.67(m，1H)，7.65(t，J＝1.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.6Hz，1H)，7.51-7.45(m，3H)，7.29(d，J＝8.3Hz，2H)，3.77(t，J＝5.9Hz，2H)，3.58-3.55(m，2H)，1.97-1.92(m，2H)；ESI MS m/z 486[C24H19CIF3N5O+H]+；和呈灰白色固體狀的標(biāo)題R型異構(gòu)體(B)，熔點(diǎn)114-118℃；[α]25D+13.3°(于MeOH中c＝0.53％)；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.69(d，J＝1.9Hz，1H)，8.54(d，J＝2.3Hz，1H)，8.11(t，J＝2.1Hz，1H)，7.70-7.67(m，1H)，7.65(t，J＝1.6Hz，1H)，7.55(t，J＝7.7Hz，1H)，7.52-7.46(m，3H)，7.29(d，J＝8.2Hz，2H)，3.77(t，J＝6.0Hz，2H)，3.59-3.56(m，2H)，1.95-1.90(m，2H)；ESI MS m/z 486[C24H19CIF3N5O+H]+。
實(shí)例33(8S)-8-[3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺[A]和(8R)-8-[3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺[B]的制備 使用Chiralpak AD 5×50cm管柱(93∶7∶0.1的庚烷/乙醇/二乙胺)將8-[3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺的外消旋混合物(1.89g)分離成其對(duì)映異構(gòu)體，得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題S型異構(gòu)體(A)(0.755g)，熔點(diǎn)171℃；[α]25D+10.6°(于MeOH中c＝0.5％)；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.63(d，J＝10.0Hz，1H)，8.52(dd，J＝7.3，5.7Hz，1H)，7.57-7.52(m，2H)，7，51-7.45(m，4H)，7.32(dd，J＝10.3，5.7Hz，1H)，7.24(d，J＝8.1Hz，2H)，3.71(t，J＝5.9Hz，2H)，3.50(t，J＝5.5Hz，2H)，1.90-1.85(m，2H)；ESI MS m/z 470[C24H19F4N5O+H]+；和呈灰白色固體狀的標(biāo)題R型異構(gòu)體(B)(0.675g)，熔點(diǎn)115-116℃；[α]25D-10.9°(于MeOH中c＝0.5％)；1H NMR(500MHz，CD3OD)D 8.63(d，J＝10.1Hz，1H)，8.53(dd，J＝7.3，5.7Hz，1H)，7.57-7.54(m，2H)，7.53-7.45(m，4H)，7.32(dd，J＝10.3，5.7Hz，1H)，7.26(d，J＝8.2Hz，2H)，3.73(t，J＝6.0Hz，2H)，3.52(t，J＝5.7Hz，2H)，1.90(五重峰，J＝6.3Hz，2H；ESI MS m/z470[C24H19F4N5O+H]+。
實(shí)例348-[3-(2-氟-1-氧基-吡啶-3-基)-苯基]-8-(4-三氟甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備
步驟a)化合物2的制備在室溫下，攪拌1(0.580g，1.24mmol)、二碳酸二-叔丁酯(0.670g，3.10mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.151g，1.24mmol)在四氫呋喃(15mL)中的混合物1h。隨后，用二氯甲烷(75mL)稀釋所述混合物，用1M檸檬酸(25mL)、水(25mL)和鹽水(25mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到呈無色油狀的2(0.74 g，89％)1H NMR(500MHz，CDCI3)δ8.17(d，J＝7.1Hz，1H)，7.84(m，1H)，7.73(s，1H)，7.60-7.55(m，3H)，7.51-7.47(m，1H)，7.42(t，J＝7.8Hz，1H)，7.26-7.22(m，1H)，7.17(d，J＝8.1Hz，2H)，3.66-3.61(m，2H)，3.50(t，J＝6.0Hz，2H)，1.88-1.83(m，2H)，1.33(s，18H)；ESI MS m/z670[C34H35F4N5O5+H]+。
步驟b)化合物3的制備在0℃下，將三氟乙酸酐(0.365g，1.74mmol)逐滴加入經(jīng)攪拌的尿素-過氧化氫復(fù)合物(0.169g，1.80mmol)在二氯甲烷(15mL)中的懸浮液中。攪拌混合物5min，且隨后逐滴加入2(0.200g，0.29mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。將反應(yīng)溫至室溫，且隨后在40℃下加熱45min。此后，將反應(yīng)冷卻至室溫，用二氯甲烷(50mL)稀釋并用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×20mL)和鹽水(20mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97.5∶2.5至95∶5的二氯甲烷/甲醇)純化得到呈無色油狀的3(0.086g，41％)1H NMR(300MHz，CDCi3)δ8.25(dt，J＝6.3，1.5Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.68-7.62(m，1H)，7.57(d，J＝6.9Hz，2H)，7.49-7.43(m，2H)，7.40-7.33(m，1H)，7.20-7.13(m，3H)，3.64(t，J＝5.4Hz，2H)，3.50(t，J＝5.8Hz，2H)，1.90-1.81(m，2H)，1.45(s，18H)；ESI MS m/z 686[C34H35F4N5O6+H]+。
步驟c)8-[3-(2-氟-1-氧基-吡啶-3-基)-苯基]-8-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備在室溫下，攪拌3(0.08g，0.11mmol)和4 M HCl/二噁烷(5mL)的混合物20h。蒸發(fā)溶劑并用飽和碳酸氫鈉水溶液(15mL)和二氯甲烷(20mL)稀釋殘余物。分離層，并用鹽水(10mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過制備型HPLC純化粗產(chǎn)物。合并適當(dāng)?shù)酿s分，濃縮，隨后用飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)中和，并用二氯甲烷(3×10mL)萃取。用鹽水(10mL)洗滌已合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。由乙腈/水(8mL，1∶1)冷凍干燥殘余物得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.018g(產(chǎn)率32％)，1H NMR(300MHz，CDCI3)δ8.24(dt，J＝6.3，1.6Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.62-7.53(m，3H)，7.48-7.32(m，3H)，7.20-7.12(m，3H)，3.66(t，J＝5.9Hz，2H)，3.60(t，J＝5.5Hz，2H)，1.88(t，J＝5.7Hz，2H)；ESI MS m/z 486[C24H19F4N5O2+H]+。
實(shí)例357-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-7-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，7-二氧-3H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺的制備
步驟a)化合物2的制備將鎂(0.60g，24.7mmol)在THF(6mL)中的混合物加熱至50℃，并用1-溴-4-(三氟甲氧基)-苯(5.96g，24.7mmol)在THF(18mL)中的溶液逐滴處理歷時(shí)10min時(shí)期。在50℃下再攪拌1.5h后，將混合物冷卻至室溫，并用1(3.0g，16.5mmol)在THF(12mL)中的溶液加以處理。隨后，將混合物再加熱至65℃歷時(shí)1h。此后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并在-15℃下將其傾注至飽和氯化銨水溶液(20mL)和濃氫氧化銨(20mL)的溶液中，并攪拌5min。隨后，使此混合物與乙醚(100mL)一起濾過硅藻土521墊。分離濾液中的有機(jī)層，用鹽水(50mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮以得到呈琥珀色油狀的亞胺粗產(chǎn)物(3.90g，68％)。用冰浴冷卻此亞胺粗產(chǎn)物(3.90g，11.3mmol)在MeOH(20mL)中的溶液，用硼氫化鈉(0.86g，22.7mmol)加以處理。移除冷卻浴，并在室溫下攪拌混合物3h。此后，濃縮混合物并使其在1 N NaOH(100mL)與二氯甲烷(100mL)之間分溶。分離有機(jī)層，并用鹽水(100mL)洗滌，用碳酸鉀干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，1∶4的乙酸乙酯/己烷)純化得到2(1.98g，兩步驟34％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.56(t，J＝1.7Hz，1H)，7.40-7.15(m，7H)，5.19(s，1H)；ESIMS m/z 329[C18H15BrF4N2O2-NH2+H]+。
步驟b)化合物3的制備用冰浴冷卻2(0.66g，1.91mmol)在二氯甲烷(2mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(2mL)中的混合物，用二氯硫化碳(0.24g，2.10mmol)處理并用力攪拌30min。分離有機(jī)層，用鹽水(2mL)洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮得到呈黃色油狀的3(0.74g，100％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.49-7.22(m，8H)，5.97(s，1H)。
步驟c)化合物4的制備在-78℃下，向叔丁氧化鉀(0.070g，0.623mmol)在四氫呋喃(2mL)中的混合物中逐滴加入3(0.220g，0.567mmol)和二硫化碳(0.065g，0.850mmol)在四氫呋喃(3mL)中的溶液。在-78℃下攪拌反應(yīng)0.5h，隨后將其緩慢溫至室溫，并在室溫下攪拌整夜。接著，用乙酸乙酯(50mL)和水(10mL)稀釋反應(yīng)。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌(10mL)，用硫酸鈉干燥并濃縮，得到呈澄清油狀的4(0.26g，99％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.86-7.10(m，8H)，3.70(s，br，1H)。
步驟d)化合物5的制備在70℃下，加熱4(0.850g，1.83mmol)和乙二胺(0.330g，5.49mmol)在乙醇(15mL)中的溶液整夜。將反應(yīng)冷卻至室溫，并濃縮。通過快速色譜法(硅石，1∶4的乙酸乙酯/己烷)純化得到呈白色固體狀的5(0.45g，54％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ8.50(s，1H)，7.59-7.19(m，8H)，4.46(t，J＝8.5Hz，2H)，3.87(t，J＝8.5Hz，2H)；ESI MS m/z 456[C18H13BrF3N3OS+H]+。
步驟e)化合物6的制備在室溫下，攪拌5(0.200g，0.438mmol)和叔丁基過氧化氫(0.79g的70％水溶液，8.80mmol)在甲醇(20mL)和濃氫氧化銨水溶液(4mL)中的混合物整夜。隨后，濃縮反應(yīng)。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化得到呈白色固體狀的6(0.156g，81％)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.58(t，J＝1.5Hz，1H)，7.49-7.44(m，3H)，7.36(dt，J＝7.8，1.5Hz，1H)，7.29-7.23(m，3H)，4.41(t，J＝8.7Hz，2H)，3.75(t，J＝8.7Hz，2H)；ESI MS m/z 440[C18H14BrF3N4O+H]+。
步驟f)7-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-7-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，7-二氫-3H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺的制備使6(0.070g，0.159mmol)、三苯基膦(0.004g，0.016mmol)、雙(二亞苯甲基丙酮)鈀(O)(0.007g，0.008mmol)、碳酸鈉(0.051g，0.478mmol)和2-氟-3-硼酸(0.040g，0.287mmol)在乙二醇二甲醚(6mL)和水(2mL)中的混合物脫氣，并在80℃下加熱2.5h。將混合物冷卻至室溫，并用乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)稀釋。分離有機(jī)層，用鹽水(20mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，93∶7∶0.25的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)且隨后通過制備型HPLC純化得到起始材料和產(chǎn)物的混合物。使所述材料(0.032g，0.073mmol)、三苯基膦(0.002g，0.007mmol)、雙(二亞苯甲基丙酮)鈀(O)(0.003g，0.004mmol)、碳酸鈉(0.023g，0.220mmol)和2-氟-3-硼酸(0.019g，0.131mmol)在乙二醇二甲醚(6mL)和水(2mL)中的混合物脫氣并在80℃下加熱整夜。分離有機(jī)層，用鹽水(20mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25的二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.030g(產(chǎn)率41％)，熔點(diǎn)95-100℃；1H NMR(500MHz，CD3OD)8.17(dt，J＝4.5，1.0Hz，1H)，8.02(ddd，J＝7.5，2.0，2.0Hz，1H)，7.64-7.38(m，9H)，7.26(d，J＝8.0Hz，2H)，4.43(d，J＝9.0Hz，2H)，3.78(d，J＝9.0Hz，2H)；IR(ATR)2925，1644，1601，1504，1450，1434，1400，1250，1211，1157，1010，966，791cm-1；ESI MS m/z 456[C23H17F4N5O+H]+。
實(shí)例369-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-9-(4-三氟甲氧基-苯基)-2，4，5，9-四氫-3H-咪唑并[1，5-a][1，3]二氮呼-7-基胺的制備
步驟a)化合物2的制備在70℃下加熱1(0.50g，1.08mmol)和1，4-二氨基丙烷(0.28g，3.23mmol)在乙醇中的溶液18h，將其冷卻至室溫，并在真空中濃縮。使?jié)饪s物在乙酸乙酯與水之間分溶。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，1∶4的乙酸乙酯/己烷)純化所得殘余物得到呈白色泡沫狀的2(0.22g，42％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.47(m，2H)，7.33(d，J＝8.9Hz，2H)，7.25-7.18(m，4H)，4.15(m，2H)，3.81(m，2H)，1.99(m，4H)；ESI MS m/z 484[C2oH17BrF3N3OS+H]+。
步驟b)化合物3的制備在室溫下，攪拌2(0.22g，0.454mmol)和叔丁基過氧化氫(1.17g的70％水溶液，9.08mmol)在甲醇和濃氫氧化銨水溶液(4.4mL)中的混合物整夜，用10％硫代硫酸鈉水溶液(30mL)處理并濃縮以移除大部分甲醇。用二氯甲烷萃取剩余混合物水溶液。合并二氯甲烷萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化所得殘余物得到呈白色泡沫狀的3(0.136g，65％)1HNMR(300MHz，CDCI3)δ7.63(t，J＝1.7Hz，1H)，7.46(dd，J＝6.8，2.0Hz，2H)，7.39-7.33(m，2H)，7.19-7.12(m，3H)，3.73(m，2H)，3.57(m，2H)，1.93(m，4H)；ESI MS m/z 467[C20H18BrF3N4O+H]+。
步驟c)9-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-9-(4-三氟甲氧基苯基)-2，4，5，9-四氫-3H-咪唑并[1，5-a][1，3]二氮呼-7-基胺的制備在回流溫度下，加熱3(0.065g，0.139mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.035g，0.250mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.0049g，0.007mmol)、三苯基膦(0.0036g，0.014mmol)和碳酸鈉(0.044g，0.417mmol)在3∶1 DME/水中的混合物1h，將其冷卻至室溫，并用乙酸乙酯和水稀釋。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化所得殘余物得到0.049g白色泡沫。由2∶1乙腈/水冷凍干燥所述材料得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.041g(產(chǎn)率62％)，熔點(diǎn)88-97℃；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16(d，J＝4.3Hz，1H)，8.00(m，1H)，7.59-7.37(m，7H)，7.22(d，J＝8.7Hz，2H)，3.73-3.64(m，4H)，1.96(m，4H)；ESI MS m/z 484[C25H21F4N5O+H]+。
實(shí)例371-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-1-(4-三氟甲氧基苯基)-1，4，5，6，7，8-六氫-2，3a，9-三氮-環(huán)戊環(huán)辛烯-3-基胺的制備 步驟a)化合物2的制備在70℃下加熱1(0.50g，1.08mmol)和1，5-二氨基戊烷(0.33g，3.23rnmol)在乙醇中的溶液5h，隨后在100℃下加熱17h且最后在120℃下加熱6h。將反應(yīng)冷卻至室溫，濃縮且使?jié)饪s物在乙酸乙酯與水之間分溶。分離有機(jī)層，洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，1∶4乙酸乙酯/己烷)純化所得殘余物得到呈白色泡沫狀的2(0.153g，28％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.54(t，J＝1.7Hz，1H))，7.50-7.19(m，7H)，4.45(t，J＝6.6Hz，2H)，4.01(t，J＝6.6Hz，2H)，1.96-1.86(m，4H)，1.48-1.44(m，2H)；ESI MS m/z498。
步驟b)化合物3的制備在室溫下，攪拌2(0.15g，0.301mmol)和叔丁基過氧化氫(0.77g的70％水溶液，6.02mmol)在甲醇和濃氫氧化銨水溶液(3mL)中的混合物整夜，用10％硫代硫酸鈉水溶液(20mL)處理并濃縮以移除大部分甲醇。用二氯甲烷萃取剩余混合物水溶液。合并二氯甲烷萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化所得殘余物得到呈白色泡沫狀的3(0.073g，52％)1HNMR(300MHz，CDCI3)δ7.63(t，J＝1.8Hz，1H)，7.49(dd，J＝6.8，2.0Hz，2H)，7.49-7.37(m，2H)，7.20-7.13(m，3H)，3.96(m，4H)，1.90(m，4H)，1.56(m，2H)；ESI MS m/z482[C21H2oBrF3N40+H]+。
步驟c)1-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-1-(4-三氟甲氧基苯基)-1，4，5，6，7，8-六氫-2，3a，9-三氮-環(huán)戊環(huán)辛烯-3-基胺的制備在回流溫度下，加熱3(0.065g，0.135mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.034g，0.243mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.0047g，0.0068mmol)、三苯基膦(0.0035g，0.014mmol)和碳酸鈉(0.043g，0.405mmol)在3∶1 DME/水(2.0mL)中的混合物1.5h，將其冷卻至室溫，并用乙酸乙酯和水稀釋。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97∶3∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化所得殘余物得到0.041g白色泡沫。由2∶1乙腈/水冷凍干燥所述材料得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.033g(產(chǎn)率49％)，熔點(diǎn)95-99℃；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16(m，1H)，8.00(m，1H)，7.62(d，J＝1.4 Hz，1H)，7.55-7.37(m，6H)，7.23(d，J＝8.1Hz，2H)，4.07(m，2H)，3.96-3.89(m，2H)，1.93-1.82(m，4H)，1.55(m，2H)；IR(ATR)1649，1433，1251，1214，1155cm-1；ESI MS m/z498。
實(shí)例388-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-8-(4-三氟甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備
步驟a)化合物2的制備用氫化鈉(1.10g在油中的60％分散液，27.7mmol)逐份處理處于0℃的4-溴苯酚(4.00g，23.1mmol)在乙腈(100mL)中的混合物。攪拌混合物5min，隨后將其溫至室溫且再攪拌15min。逐滴加入氯甲基甲醚(2.23g，27.7mmol)，并攪拌混合物20min。蒸發(fā)溶劑，且使殘余物在乙酸乙酯與水之間分溶。分離層，并用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到呈無色油狀的2(5.30g，106％)1H NMR(500MHz，CDCI3)δ7.38(d，J＝8.9Hz，2H)，6.92(d，J＝8.9Hz，2H)，5.14(s，2H)，3.46(s，3H)。
步驟b)化合物3的制備將小塊碘晶體加入經(jīng)攪拌的鎂(0.197g，8.20mmol)在四氫呋喃中的混合物中，且隨后將其加熱至50℃。逐滴加入2(1.78g，8.20mmol)在四氫呋喃中的溶液，并攪拌混合物45min。將混合物冷卻至室溫，并緩慢加入3-溴苯甲腈(1.00g，5.49mmol)在四氫呋喃中的溶液。隨后，在65℃下加熱混合物16h。將反應(yīng)冷卻至室溫，加入無水乙醇，并攪拌混合物45min。將混合物冷卻至0℃并逐份加入硼氫化鈉(0.415g，10.98mmol)。移除冷卻浴且攪拌混合物3hr。加入飽和氯化銨(10mL)，在減壓下移除大部分甲醇和THF。用二氯甲烷萃取剩余殘余物水溶液。用硫酸鈉干燥已合并的有機(jī)層，并濃縮。通過快速色譜法(硅石，4∶1至1∶1己烷/乙酸乙酯)純化所得殘余物得到呈無色油狀的3(0.89g，50％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.55(br s，1H)，7.39-7.23(m，4H)，7.15(t，J＝7.8Hz，1H)，6.98(d，J＝8.7Hz，2H，5.15(s，2H)，5.14(s，1H)，3.46(s，3H)；ESI MS m/z305[(C15H16BrNO2-NH2)+H]+。
步驟c)化合物4的制備用冰浴冷卻3(0.89g，2.76mmol)在二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉水溶液中的混合物，用二氯硫化碳(0.35g，3.03mmol)處理并用力攪拌40min。分離相并用二氯甲烷萃取水相。用鹽水洗滌已合并的有機(jī)相，用硫酸鈉干燥并濃縮以得到呈黃色油狀的4(0.80g，80％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ 7.47-7.42(m，2H)，7.28-7.18(m，4H)，7.04(d，J＝8.8Hz，2H)，5.92(s，1H)，5.17(s，2H)，3.46(s，3H)。
步驟d)化合物5的制備向-78℃下叔丁氧化鉀(0.27g，2.41mmol)在四氫呋喃中的混合物中逐滴加入4(0.80g，0.2.19mmol)和二硫化碳(0.25g，3.28mmol)在四氫呋喃中的溶液。在-78℃下攪拌反應(yīng)0.5h。隨后將其緩慢溫至室溫并在室溫下攪拌1.5h。此后，TLC分析表明反應(yīng)尚不完全，因此將混合物冷卻至-78℃，并加入二硫化碳(0.06g，0.83mmol)，隨后加入叔丁氧化鉀(0.05g，0.44mmol)在四氫呋喃中的溶液。在-78℃下攪拌反應(yīng)30min，隨后將其溫至室溫并攪拌45min。接著，用乙酸乙酯和水和鹽水稀釋反應(yīng)。分離有機(jī)層，且用乙酸乙酯萃取水層。用鹽水洗滌已合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥并濃縮以得到呈紅色半固體狀的5(1.1g，115％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.48(t，J＝1.8Hz，1H)，7.43(d，J＝7.8Hz，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.20(d，J＝8.8Hz，2H)，7.14(t，J＝7.9Hz，1H)，6.94(d，J＝8.8Hz，2H)，5.11(s，2H)，3.42(s，3H)。
步驟e)化合物6的制備在70℃下，加熱5(1.10g，2.18mmol)和1，3-二氨基丙烷(0.484g，6.54mmol)在乙醇中的混合物1h，將其冷卻至室溫，并在真空中濃縮。用乙酸乙酯稀釋所得殘余物，用水和鹽水連續(xù)洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，4∶1至3∶1己烷/乙酸乙酯)純化此殘余物得到呈無色油狀的6(0.70g，72％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.53(t，J＝1.7Hz，1H)，7.47(dt，J＝7.7，1.4Hz，1H)，7.30-7.17(m，3H)，7.06-6.97(m，3H)，5.17(s，2H)，3.89(t，J＝6.0Hz，2H)，3.50(t，J＝5.5Hz，2H)，3.47(s，3H)，1.91(t，J＝5.4Hz，2H)；ESI MS m/z446[C2oH2oBrN3O2S+H]+。
步驟f)化合物7的制備在室溫下，攪拌6(0.630g，1.40mmol)和叔丁基過氧化氫(3.6g的70％水溶液，28mmol)在甲醇和濃氫氧化銨水溶液(18mL)中的混合物24h，用10％硫代硫酸鈉水溶液(10mL)處理并濃縮以移除大部分甲醇。用二氯甲烷萃取剩余混合物水溶液。合并二氯甲烷萃取液，用水和鹽水連續(xù)洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化此殘余物得到呈灰白色固體狀的7(0.400g，67％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.66(t，J＝1.8Hz，1H)，7.40-7.32(m，4H)，7.16(t，J＝7.9Hz，1H)，6.97(d，J＝8.9Hz，2H)，5.15(s，2H)，3.62-3.55(m，4H)，3.45(s，3H)，1.86(t，J＝5.5Hz，2H)；ESI MS m/z429[C2oH21BrN4O2+H]+。
步驟g)8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-8-(4-甲氧基甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備在80℃下，加熱7(0.370g，0.860mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.243g，1.72mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.030g，0.043mmol)、三苯基膦(0.022g，0.086mmol)和碳酸鈉(0.273g，2.58mmol)在3∶1 DME/水(16mL)中的混合物1h，將其冷卻至室溫，并用乙酸乙酯和水稀釋。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，96∶4∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化所得殘余物得到0.300g(產(chǎn)率78％)淺黃色固體。將0.030g此固體樣本溶解于乙腈和水中并冷凍干燥得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.023g，熔點(diǎn)95-105℃；1H NMR(300MHz，CDCI3)δ8.16(dt，J＝5.0，1.7Hz，1H)，7.88-7.80(m，1H)，7J1-7.67(m，1H)，7.53-7.44(m，2H)，7.41(d，J＝7.6Hz，1H)，7.37(d，J＝8.8Hz，2H)，7.27-7.20(m，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，2H)，5.15(s，2H)，3.68-3.54(m，4H)，3.45(s，3H)，1.85(t，J＝5.6Hz，2H)；ESI MS m/z446[C25H24FN5O2+H]+。
實(shí)例398-(2，3-二氫-苯并[1，4]二氧己環(huán)-6-基)-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備 使用與實(shí)例38步驟a-g中所述的程序基本相同的程序，并使用化合物1作為起始材料獲得呈灰白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物，熔點(diǎn)125-140℃，1H NMR(300MHz，CDCI3)δ8.16(m，1H)，7.87-7.80(m，1H)，7.72(d，J＝1.4Hz，1H)，7.56-7.37(m，3H)，7.25-7.21(m，1H)，6.98(d，J＝2.1Hz，1H)，6.89-6.77(m，2H)，4.22(s，4H)，3.62-3.55(m，4H)，2.95(brs，2H)，1.88-1.84(m，2H)；ESI MS m/z 444[C25H22FN5O2+H]+。
實(shí)例408-苯并[1，3]二氧雜戊烯-5-基-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氧-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備 使用與實(shí)例38步驟a-g中所述的程序基本相同的程序，并使用化合物1作為起始材料獲得呈灰白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物，熔點(diǎn)106-119℃，1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.17-8.14(m，1H)，8.04-7.98(m，1H)，7.56(d，J＝1.2Hz，1H)，7.53-7.36(m，4H)，6.87(dd，J＝8.2，1.8Hz，1H)，6.81(d，J＝1.7Hz，1H)，6.75(d，J＝8.2Hz，1H)，5.92(s，2H)，3.68(t，J＝5.9Hz，2H)，3.47(t，J＝5.4Hz，2H)，1.88-1.84(m，2H)；ESI MS m/z 430[C24H20FN5O2+H]+。
實(shí)例418-(4-二氟甲氧基苯基)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備
在室溫下，攪拌8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(4-甲氧基甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺(1.10g，2.46mmol)和3N鹽酸(60mL)在甲醇中的混合物16h，用氫氧化鈉水溶液中和，并在真空中濃縮。用乙醇濕磨所獲得的殘余物，通過過濾移除固體且濃縮濾液。通過快速色譜法(硅石，90∶10二氯甲烷/甲醇)純化濃縮物得到白色固體(0.70g，70％)。通過半制備型液相色譜進(jìn)一步純化0.040g此固體的樣本，得到呈白色固體狀的4-{6-氨基-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基}-苯酚(0.0073g)，熔點(diǎn)164-181℃，1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.15(d，J＝5.0Hz，1H)，8.03-7.97(m，1H)，7.57(brs，1H)，7.54-7.48(m，1H)，7.46-7.41(m，2H)，7.40-7.36(m，1H)，7.16(d，J＝8.7Hz，2H)，6.73(d，J＝8.7Hz，2H)，3.69(t，J＝6.0Hz，2H)，3.50-3.44(m，2H)，1.90-1.83(m，2H)；ESI MS m/z 402[C23H20FN5O+H]+。
在室溫下，攪拌4-{6-氨基-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-8-基}-苯酚(0.285g，0.710mmol)和氫氧化鉀(0.396g，7.10mmol)在2-丙醇中的混合物10min，將其冷卻至-45℃，用FREON 22(6.7g，77.0mmol)鼓泡并將其密封。將密封的反應(yīng)混合物溫至室溫，逐漸溫至50℃，在50℃下攪拌90min，將其冷卻至室溫，將其打開并通過小心地將反應(yīng)混合物加入水中中止反應(yīng)。用二氯甲烷稀釋混合物水溶液，并分離層。用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化此殘余物得到灰白色固體(0.055g，17％)。通過半制備型LC進(jìn)一步純化此固體，得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物(0.033g)，熔點(diǎn)104-114℃；1HNMR(500MHz，CDCI3)δ8.16＜dt.J＝4.7，1.3Hz，1H)，7.85-7.80(m，1H)，7.69(d，J＝1.4Hz，1H)，7.53-7.45(m，4H)，7.40(t，J＝7.7Hz，1H)，7.25-7.21(m，1H)，7.05(d，J＝8.7Hz，2H)，6.47(t，J＝74.0Hz，1H)，3.63-3.55(m，4H)，1.91-1.84(m，2H)；ESI MS m/z 452[C24H2oF3N5O+H]+。
實(shí)例427-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2，2-二甲基-7-(4-三氟甲氧基苯基)-2，7-二氫-3H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺的制備 步驟a)化合物2的制備用2-甲基丙烷-1，2-二胺(0.144g，1.62mmol)處理處于0℃的1(0.250g，0.54mmol)在乙醇中的溶液，在0℃下攪拌3h，隨后在室溫下攪拌45分鐘，將其加熱至40℃歷時(shí)2h，并在真空中濃縮。使所得殘余物在乙酸乙酯與水之間分溶。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，梯度100％己烷至1∶9乙酸乙酯/己烷)純化此殘余物得到呈白色固體狀的2，1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.73(s，1H)，7.56(t，J＝1.8Hz，1H)，7.49(dt，J＝7.7，1.3Hz，1H)，7.43(t，J＝3.0Hz，1H)，7.40(t，J＝2.2Hz，1H)，7.34-7.21(m，4H)，3.60(s，2H)，1.44(s，3H)，1.43(s，3H)；ESI MS m/z 484[C2oH17BrF3N3OS+H]+。
步驟b)化合物3的制備在室溫下，攪拌2(0.201g，0.42mmol)和叔丁基過氧化氫(0.75g的70％水溶液，8.30mmol)在甲醇和濃氫氧化銨水溶液(5mL)中的混合物整夜，用10％硫代硫酸鈉水溶液(30mL)處理并濃縮以移除大部分甲醇。用二氯甲烷萃取剩余混合物水溶液。合并二氯甲烷萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97∶2.5∶0.5二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化殘余物得到呈白色固體狀的3(0.134g，68％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.71(t，J＝1.7Hz，1H)，7.54(d，J＝8.8Hz，2H)，7.43-7.37(m，2H)，7.19-7.13(m，3H)，3.36(s，2H)，1.42(s，6H)；ESI MS m/z 467[C2oH18BrF3N4O+H]+。
步驟c)7-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2，2-二甲基-7-(4-三氟甲氧基苯基)-2，7-二氫-3H-咪唑并[1，5-a]咪唑-5-基胺的制備在80℃下，加熱3(0.134g，0.29mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.081g，0.57mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.010g，0.015mmol)、三苯基膦(0.008g，0.029mmol)和碳酸鈉(0.092g，0.87mmol)在3∶1 DME/水(8.0mL)中的混合物5h，將其冷卻至室溫，并用乙酸乙酯和水稀釋。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97∶2.5∶0.5二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化所得殘余物得到0.020g灰白色固體。由2∶1乙腈/水(6mL)冷凍干燥此材料得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.0189g(產(chǎn)率14％)，熔點(diǎn)89-97℃；1H NMR(300MHz，CDCI3)δ8.18-8.17(m，1H)，7.84-7.78(m，2H)，7.62-7.54(m，3H)，7.48-7.42(m，2H)，7.27(m，1H)，7.16(d，J＝8.2Hz，2H)，3.39(d，J＝2.2Hz，2H)，1.44(s，3H)，1.42(s，3H)；ESI MS m/z 484[C15H21F4N5O2H]+。
實(shí)例438-(2，-2-二氟-苯并[1，3]二氧雜戊烯-5-基)-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備
步驟a)化合物3的制備在-78℃下，將1(2.00g，8.44mmol)在乙醚(16mL)中的溶液逐滴加入叔丁基鋰(4.96mL的1.7M戊烷溶液，8.44mmol)在乙醚(20mL)中的混合物中，并在此溫度下攪拌25min。在-78℃下，向其中加入乙醚(20mL)中的3-溴苯甲腈(0.731g，4.02mmol)，并在-78℃下再攪拌反應(yīng)混合物1.5h。隨后，將反應(yīng)溫至0℃并加入甲醇(60mL)，隨后逐份加入硼氫化鈉(0.319g，8.43mmol)。移除冷卻浴且隨后于室溫下攪拌混合物2h。加入飽和氯化銨水溶液(10mL)，在減壓下移除大部分甲醇和乙醚，且用二氯甲烷(200mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)稀釋所獲得的殘余物水溶液。分離有機(jī)層，并用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，9∶1己烷/乙酸乙酯)純化得到呈無色糖漿狀的3(0.237g，18％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.54(t，J＝1.6Hz，1H)，7.38(dt，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.29-7.04(m，4H)，6.98(d，J＝8.2Hz，1H)，5.17(s，1H)；ESI MS m/z 327[(C14H10BrF2NO2-NH2)+H]+。
步驟b)化合物4的制備用冰浴冷卻3(0.416g，1.22mmol)在二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉水溶液(6mL)中的混合物，用二氯硫化碳(0.154g，1.34mmol)處理，并用力攪拌45分鐘。分離有機(jī)層，用鹽水(15mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮以得到呈黃色糖漿狀的4(0.405g，87％)1H NMR(500MHz，CDCI3)δ7.48(dt，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.43(t，J＝6.3Hz，1H)，7.11-7.04(m，2H)，6.99(t，J＝0.6Hz，1H)，5.95(s，1H)；ESI MS m/z 325[(C15H8BrF2NO2S-NCS)+H]+。
步驟c)化合物5的制備向-78℃下叔丁氧化鉀(0.130g，1.16mmol)在四氫呋喃中的混合物中逐滴加入4(0.405g，1.05mmol)和二硫化碳(0.120g，1.58mmol)在四氫呋喃中的溶液，歷時(shí)5min時(shí)段。在-78℃下攪拌反應(yīng)0.5h，隨后將其緩慢溫至室溫并在室溫下攪拌整夜。隨后，濃縮反應(yīng)以移除大部分四氫呋喃，且用乙酸乙酯、水和鹽水稀釋殘余物。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，9∶1己烷/乙酸乙酯)純化得到呈紅色糖漿狀的5(0.323g，67％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.59-7.56(m，1H)，7.52-7.51(m，1H)，7.35-7.30(m，3H)，7.15(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)，7.08(d，J＝1.5Hz，1H)。
步驟d)化合物6的制備在70℃下，加熱5(0.323g，0.702mmol)和1，3-二氨基丙烷(0.156g，2.11mmol)在乙醇中的混合物1h，且隨后將其冷卻至室溫。蒸發(fā)溶劑，并用乙酸乙酯稀釋殘余物，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，4∶1己烷/乙酸乙酯)純化得到呈白色泡沫狀的6(0.303g，93％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.51-7.48(m，2H)，7.25(d，J＝1.7Hz，2H)，7.08-7.04(m，3H)，3.88(t，J＝6.0Hz，2H)，3.61(t，J＝1.9Hz，2H)，1.93-1.89(m，2H)；ESI MS m/z466[C19H14BrF2N3O2S+H]+。
步驟e)化合物7的制備在室溫下，攪拌6(0.303g，0.65mmol)和叔丁基過氧化氫(1.18g的70％水溶液，12.9mmol)在甲醇和濃氫氧化銨水溶液(6.0mL)中的混合物整夜。此后，加入10％硫代硫酸鈉水溶液(40mL)；濃縮混合物以移除大部分甲醇，且隨后用二氯甲烷萃取混合物水溶液。合并二氯甲烷萃取液，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥、過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97∶2.5∶0.5二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化得到呈白色固體狀的7(0.208g，71％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.63(t，J＝1.8Hz，1H)，7.36(dd，J＝8.0，1.9Hz，2H)，7.24-7.13(m，3H)，6.95(dd，J＝7.4，1.7Hz，1H)，3.58(t，J＝5.8Hz，4H)，1.89-1.82(m，2H)；ESI MS m/z449[C19H15BrF2N4O2+H]+。
步驟f)8-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧雜戊烯-5-基)-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的制備在80℃下，加熱7(0.208g，0.46mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.131g，0.93mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.016g，0.023mmol)、三苯基膦(0.012g，0.046mmol)和碳酸鈉(0.146g，1.38mmol)在3∶1 DME/水中的混合物2h，隨后在室溫下攪拌整夜。用乙酸乙酯和水稀釋混合物。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97∶2.5∶0.5二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化得到無色油狀物(0.180g(84％))。通過半制備型LC進(jìn)一步純化油狀物得到呈灰白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物0.045g，熔點(diǎn)95-99℃；1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16-8.15(m，1H)，8.03-7.99(m，1H)，7.56(d，J＝1.5Hz，1H)，7.53-7.52(m，1H)，7.46(t，J＝7.8Hz，1H)，7.42-7.37(m，2H)，7.23-7.19(m，2H)，7.13(d，J＝8.3Hz，1H)，3.69(t，J＝5.9Hz，2H)，3.49(t，J＝5.8Hz，2H)，1.89-1.84(m，2H)；ESI MS m/z466[C24H18BrF3N5O2+H]+。
實(shí)例448′-[4-(二氟甲氧基)苯基]-8′-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2′，8′-二氫螺[環(huán)丙烷-1，3′-咪唑并[1，5-a]嘧啶]-6′-胺的制備
使用與實(shí)例42所述的程序基本相同的程序并使用1，1-二(氨基甲基)丙烷(2)作為反應(yīng)物，獲得呈茶色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物，熔點(diǎn)98-108℃；1H NMR(500MHz，CDCI3)δ8.16(m，1H)，7.83(m，1H)，7.71(m，1H)，7.47(m，4H)，7.40(t，J＝7.7Hz，1H)，7.24(m，1H)，7.05(d，J＝6.9Hz，2H)，6.49(t，J＝74Hz，1H)，3.20-3.45(m，4H)，0.57-0.67(m，4H)；ESIMS m/z 478[C26H22F3N5O+H]+。
實(shí)例45(8R)-8-(4-二氟甲氧基-苯基)-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺(A)和(8S)-8-(4-二氟甲氧基-苯基)-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺(B)的制備 使用Chiralpak AD 5×50cm管柱(90∶10∶0.1的庚烷/乙醇/二乙胺)將8-(4-二氟甲氧基-苯基)-8-[3-(2-氟-吡啶-3-基)-苯基]-2，3，4，8-四氫-咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-基胺的外消旋混合物分離成其對(duì)映異構(gòu)體，得到呈白色固體狀的標(biāo)題R型異構(gòu)體(A)，熔點(diǎn)97-109℃；[α]25D+7.8°(0.48％，在MeOH中)；1H NMR(500MHz，CDCI3)δ8.16(dt，J＝4.8，1.5Hz，1H)，7.86-7.81(m，1H)，7.69(d，J＝1.5Hz，1H)，7.52-7.46(m，4H)，7.40(t，J＝7.7Hz，1H)，7.26-7.22(m，1H)，7.05(d，J＝8.7Hz，2H)，6.48(t，J＝74.0Hz，1H)，3.62(t，J＝6.0Hz，2H)，3.60-3.56(m，2H)，1.87(五重峰，J＝5.8Hz，2H)；ESI MS m/z 452[C24H20F3N5O+H]+，和呈白色固體狀的標(biāo)題S型異構(gòu)體(B)，熔點(diǎn)97-110℃，[α]D25-3.2°(0.47％，在MeOH中)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ8.16(m，1H)，7.87-7.80(m，1H)，7.69(brs，1H)，7.51-7.38(m，5H)，7.26-7.22(m，1H)，7.05(d，J＝8.7Hz，2H)，6.48(t，J＝74.0Hz，1H)，3.65-3.57(m，4H)，1.89-1.85(m，2H)；ESI MS m/z 452[C24H2oF3N5O+H]+。
實(shí)例468-[4-(二氟甲氧基)苯基]-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2，8-二氫螺[咪唑并[1，5-a]嘧啶-3，3′-環(huán)氧丙烷]-6-胺的制備 步驟a)化合物2的制備回流下，加熱1(1.0g，5.22mmol)和氫氧化鉀(0.345g，85％，5.22mmol)在乙醇(2mL)中的混合物3h。將反應(yīng)冷卻至室溫，用乙酸乙酯(10mL)稀釋并通過過濾移除所形成的固體。濃縮濾液得到呈無色液體狀的2(0.65g，80％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.47(s，4H)，3.95(s，4H)。
步驟b)化合物3的制備在65℃下，加熱2(0.63g，4.06mmol)和疊氮化鈉(0.66g，10.2mmol)在DMSO中的混合物整夜。將反應(yīng)冷卻至室溫，用水稀釋并將其萃取至二氯甲烷中。用水洗滌已合并的二氯甲烷萃取液，用硫酸鈉干燥，過濾且于室溫下將其濃縮至2mL的體積，并用THF稀釋。隨后，用THF中的三苯基膦(2.56g，9.75mmol)處理此溶液，并在室溫下攪拌10min，用水(0.29g，16.2mmol)處理并在室溫下攪拌整夜。隨后，濃縮混合物，用二氯甲烷稀釋并用10％HCl水溶液萃取。用二氯甲烷洗滌已合并的萃取液水溶液，并濃縮得到呈白色固體狀的3(0.51g，66％)1H NMR(500MHz，D2O)δ4.49(s，4H)，3.42(s，4H)。
步驟c)化合物5的制備在70℃下，加熱4(0.50g，1.12mmol)、3(0.50g，2.64mmol)和三乙胺(0.57g，5.60mmol)在乙醇中的混合物3h，將其冷卻至室溫，濃縮并使其在乙酸乙酯與水之間分溶。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，1∶4乙酸乙酯/己烷)純化得到呈白色泡沫狀的5(0.389g，70％)1H NMR(500MHz，CDCI3)δ7.61(s，1H)，7.49(dt，J＝7.5，1.5Hz，1H)，7.47-7.44(m，1H)，7.33-7.19(m，4H)，7.11(d，J＝8.8Hz，2H)，6.52(t，J＝73.4Hz，1H)，4.52-4.47(m，4H)，4.14-4.06(m，2H)，3.87-3.77(m，2H)；ESI MS m/z 494[C21H18BrF2N3O2S+H]+。
步驟c)化合物6的制備在室溫下，攪拌5(0.389g，0.79mmol)和叔丁基過氧化氫(1.42g的70％水溶液，15.8mmol)在甲醇和濃氫氧化銨水溶液(5.0mL)中的混合物7h，用10％硫代硫酸鈉水溶液(30mL)處理并濃縮以移除大部分甲醇。用二氯甲烷萃取所得混合物水溶液。合并二氯甲烷萃取液并用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，95∶5∶0.25二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化此殘余物得到呈白色泡沫狀的6(0.179g，47％)1H NMR(300MHz，CDCI3)δ7.56(t，J＝1.7Hz，1H)，7.40-7.37(m，1H)，7.38(d，J＝8.8Hz，2H)，7.29-7.26(m，1H)，7.15(t，J＝7.9Hz，1H)，7.04(d，J＝8.7Hz，2H)，6.48(t，J＝73.9Hz，1H)，4.57-4.53(m，2H)，4.46^.42(m，2H)，3.79(s，4H)；ESI MS m/z 477[C21H19BrF2N4O2+H]+。
步驟d)8-[4-(二氟甲氧基)苯基]-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2，8-二氫螺[咪唑并[1，5-a]嘧啶-3，3′-環(huán)氧丙烷]-6-胺的制備在回流溫度下，加熱6(0.10g，0.21mmol)、2-氟吡啶-3-硼酸(0.035g，0.250mmol)、雙(三苯基膦基)氯化鈀(II)(0.0073g，0.11mmol)、三苯基膦(0.0055g，0.021mmol)和碳酸鈉(0.066g，0.63mmol)在3∶1 DME/水中的混合物2h，將其冷卻至室溫并用乙酸乙酯和水稀釋。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮。通過快速色譜法(硅石，97∶2.5∶0.5二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨)純化此殘余物得到黃色泡沫(0.089g，85％)。通過半制備型LC進(jìn)一步純化此泡沫，得到呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物，熔點(diǎn)96-107℃；1H NMR(500MHz，CD3OD)□8.17-8.16(m，1H)，8.02-7.98(m，1H)，7.52-7.51(m，2H)，7.45(t，J＝7.9Hz，1H)，7.40-7.34(m，4H)，7.09(d，J＝8.8Hz，2H)，6.01(t，J＝74.1Hz，1H)，4.50-4.47(m，4H)，3.97-3.89(m，2H)，3.76-3.69(m，2H)；ESI MS m/z496[C26H22F3N5O2+H]+。
實(shí)例478′-[4-(二氟甲氧基)苯基]-8′-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-2′，8′-二氫螺[環(huán)丁烷-1，3′-咪唑并[1，5-a]嘧啶]-6′-胺的制備 使用與實(shí)例44中所述的程序基本相同的程序并使用1，1-二(氨基甲基)環(huán)丁烷作為起始材料，獲得呈白色固體狀的標(biāo)題產(chǎn)物，熔點(diǎn)220-226℃；1H NMR(500MHz，CD3OD)□8.16-8.15(m，1H)，8.01-7.97(m，1H)，7.54-7.51(m，2H)，7.44(t，J＝7.8Hz，1H)，7.40-7.37(m，4H)，7.08(d，J＝8.8Hz，2H)，6.80(t，J＝74.1Hz，1H)，3.65-3.58(m，2H)，3.46-3.39(m，2H)，2.09-2.01(m，2H)，1.92-1.87(m，4H)；ESI MS m/z 492[C27H24F3N5O+H]+。
實(shí)例48測(cè)試化合物的酶活性和測(cè)試化合物對(duì)hBACE1、MuBACE1和hBACE2的抑制作用的評(píng)估檢定條件10nM人BACE1(或10nM鼠BACE1、1.5nM人BACE2)，25μM底物(WABC-6，MW 1549.6，來自AnaSpec)；最終緩沖條件50mM乙酸鈉，pH4.5，0.05％CHAPS，25％PBS；溫度室溫；試劑信息乙酸鈉Aldrich，目錄號(hào)24，124-5，CHAPSResearch Organics，目錄號(hào)1304C，1X PBSMediatech(Cellgro)，目錄號(hào)21-031-CV；肽底物AbzSEVNLDAEFRDpaAnaSpec，肽名稱WABC-6；底物儲(chǔ)備液(AbzSEVNLDAEFRDpa)濃度的測(cè)定二甲亞砜(DMSO)中的25mM儲(chǔ)備溶液是使用肽重量和MW制備并稀釋至25μM。所述濃度是使用18172M-1cm-1的消光系數(shù)ε在354nm吸光率下測(cè)定。底物儲(chǔ)備液是分成小份等分試樣，存儲(chǔ)于-80℃下。[底物儲(chǔ)備液]＝ABS354nm×106/18172(nm)。
酶儲(chǔ)備液濃度的測(cè)定在pH6的6M鹽酸胍(來自Research Organics，目錄號(hào)5134G-2)中，使用對(duì)于hBACE1和MuBACE1而言為64150M-1cm-1、對(duì)于hBACE2而言為62870M-1cm-1的ε，通過ABS在280nm下測(cè)定每一種酶的儲(chǔ)備液濃度。
(每一種酶的消光系數(shù)ε280nm都是基于已知的氨基酸組成和已發(fā)表的Trp(5.69M-1cm-1)和Tyr(1.28M-1cm-1)殘基的消光系數(shù)(Anal.Biochem.182，319-326)進(jìn)行計(jì)算。)稀釋和混合步驟總反應(yīng)體積100μL1.制備緩沖液A(66.7mM乙酸鈉，pH4.5，0.0667％CHAPS)中的2X抑制劑稀釋液；2.制備緩沖液A(66.7mM乙酸鈉，pH4.5，0.0667％CHAPS)中的4X酶稀釋液；3.制備1X PBS中的100μM底物稀釋液；4.將50μL 2X抑制劑和25μL 100μM底物加入96孔板(來自DYNEX Technologies，VWR#11311-046)的每一孔中，迅速將25μL 4X酶加入抑制劑和底物混合器中，起始熒光讀數(shù)。
熒光讀數(shù)在室溫下，每40秒取得λex320nm和λem420nm時(shí)的讀數(shù)歷時(shí)30min，以確定底物分解速率(vi)的直線斜率。
抑制％的計(jì)算抑制％＝100×(1-vi/vo)(vi＝抑制劑存在時(shí)的底物分解速率，vo＝不存在抑制劑時(shí)的底物分解速率)IC50測(cè)定法抑制％＝[(B×IC50n)+(100×Ion)]/(IC50n+Ion)。
人重組BACE2的熒光動(dòng)力學(xué)檢定此檢定是用于提供用于分析所測(cè)試的化合物的動(dòng)力學(xué)和選擇性參數(shù)。
材料和方法最終檢定條件10nM人BACE1(或10nM鼠BACE1，1.5nM人BACE2)，25μM底物(WABC-6，MW 1549.6，來自AnaSpec)。最終緩沖條件50mM乙酸鈉，pH4.5，0.05％CHAPS，25％PBS。溫度室溫。試劑信息乙酸鈉Aldrich，目錄號(hào)24，124-5，CHAPSResearch Organics，目錄號(hào)1304C，1X PBSMediatech(Cellgro)，目錄號(hào)21-031-CV；肽底物AbzSEVNLDAEFRDpaAnaSpec，肽名稱WABC-6。
底物(AbzSEVNLDAEFRDpa)儲(chǔ)備液濃度的測(cè)定使用肽重量和MW制備DMSO中的25mM儲(chǔ)備溶液，并將其稀釋至25μM。所述濃度是使用18172M-1cm-1的消光系數(shù)ε在354nm吸光率下測(cè)定。底物儲(chǔ)備液是分成小份等分試樣，存儲(chǔ)于-80℃下。[底物儲(chǔ)備液]＝ABS354nm×106/18172(nm)。
酶儲(chǔ)備液濃度的測(cè)定在PH6的6M鹽酸胍(來自Research Organics，目錄號(hào)5134G-2)中，使用對(duì)于hBACE1和MuBACE1而言為64150M-1cm-1、對(duì)于hBACE2而言為62870M-1cm-1的ε，通過ABS于280nm下測(cè)定每一種酶的儲(chǔ)備液濃度。(每一種酶的消光系數(shù)ε280nm都是基于已知的氨基酸組成和已發(fā)表的Trp(5.69M-1cm-1)和Tyr(1.28M-1cm-1)殘基的消光系數(shù)(Anal.Biochem.182，319-326)進(jìn)行計(jì)算。)稀釋和混合步驟總反應(yīng)體積100μL1.制備緩沖液A(66.7mM乙酸鈉，pH4.5，0.0667％CHAPS)中的2X抑制劑稀釋液；2.制備緩沖液A(66.7mM乙酸鈉，pH4.5，0.0667％CHAPS)中的4X酶稀釋液；3.將1X PBS中的100μM底物稀釋液、50μL 2X抑制劑和25μL 100μM底物加入96孔板(來自DYNEX Technologies，VWR#11311-046)的每一孔中，隨后迅速將25μL4X酶加入抑制劑和底物混合器中，并起始熒光讀數(shù)。
熒光讀數(shù)在室溫下，每40秒取得λex320nm、λem420nm時(shí)的讀數(shù)歷時(shí)30min，以確定底物分解速率(vi)的直線斜率。
對(duì)抑制％計(jì)算的分析抑制％＝100×(1-vi/vo)(vi＝抑制劑存在時(shí)的底物分解速率，vo＝不存在抑制劑時(shí)的底物分解速率)IC50測(cè)定法抑制％＝[(B×IC50n)+(100×Ion)]/(IC50n+Ion)。
所獲得的數(shù)據(jù)展示于下表II中。除非另作說明，否則IC50值表示100％抑制作用時(shí)獲得的值。
表II

表II，續(xù)表

表II，續(xù)表

結(jié)果和討論由上述表II所示的數(shù)據(jù)可看出，本發(fā)明的化合物為BACE1的有效和選擇性抑制劑。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物 其中X為N、NO或CR19；Y為N、NO或CR11；Z為N、NO或CR20，其限制條件為X、Y或Z中不超過兩者可為N或NO；R1和R2各自獨(dú)立地為H、CN或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基；R3和R4各自獨(dú)立地為H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，或R3和R4可合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的3元至7元環(huán)，或R3可與其所連接的原子和相鄰碳原子合起來形成雙鍵；R5和R6各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR13、NR14R15或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，或當(dāng)連接至相鄰碳原子時(shí)，R5和R6可與其所連接的原子合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的視情況經(jīng)取代的5元至7元環(huán)；R7、R8、R9、R10、R11、R19和R20各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR16、NR17R18或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基；m為0或1；n為0、1、2或3；_為單鍵或雙鍵，其限制條件為當(dāng)m為0時(shí)，則_必須為單鍵；R12、R13和R16各自獨(dú)立地為H或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基或芳基；且R14、R15、R17和R18各自獨(dú)立地為H或C1-C4烷基；或其互變異構(gòu)體、其立體異構(gòu)體或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1和R2為H。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一權(quán)利要求所述的化合物，其中m和n為1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2和3中任一權(quán)利要求所述的化合物，其中式I具有結(jié)構(gòu)Ia
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其中式I具有結(jié)構(gòu)Ib
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中R1和R2為H。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中X為N。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的化合物，其中n為1。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其選自由下列各物組成的群組8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；7-(3-嘧啶-5-基苯基)-7-[4-(三氟甲氧基)苯基]-7H-咪唑并[1，5-a]咪唑5-胺；8-[4-氟-3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(5-氯吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8S)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8R)-8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8R)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；(8S)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(4-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(4-甲氧基苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-(4-甲氧基苯基)-8-(3-嘧啶-5-基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-(4-氟-3-嘧啶-5-基苯基)-8-(4-甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[4-氟-3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-(4-甲氧基苯基)-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-(4-氟-3-嘧啶-5-基苯基)-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[4-氟-3-(5-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；8-[4-氟-3-(2-氟吡啶-3-基)苯基]-8-[4-(三氟甲氧基)苯基]-2，3，4，8-四氫咪唑并[1，5-a]嘧啶-6-胺；其互變異構(gòu)體；其立體異構(gòu)體；和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。
10.一種用于治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的方法，其包含向所述患者提供治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一權(quán)利要求所述的化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述疾病或病癥是選自由下列疾病組成的群組阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、輕度認(rèn)知障礙、唐氏綜合癥(Down’s syndrome)、遺傳性腦出血伴Dutch型淀粉樣變性病、腦淀粉樣血管病和退化性癡呆。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述疾病為阿茲海默氏病。
13.一種醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一權(quán)利要求所述的化合物。
14.一種用于制備式I化合物的方法 其中X為N、NO或CR19；Y為N、NO或CR11；Z為N、NO或CR20，其限制條件為X、Y或Z中不超過兩者可為N或NO；R1和R2各自獨(dú)立地為H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基；R3和R4各自獨(dú)立地為H或視情況經(jīng)取代的C1-C4烷基，或R3和R4可合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的3元至7元環(huán)，或R3可與其所連接的原子和相鄰碳原子合起來形成雙鍵；R5和R6各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR13、NR14R15或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基，或當(dāng)連接至相鄰碳原子時(shí)，R5和R6可與其所連接的原子合起來形成視情況含有一或兩個(gè)選自O(shè)、N或S的雜原子的視情況經(jīng)取代的5元至7元環(huán)；R7、R8、R9、R10、R11、R19和R20各自獨(dú)立地為H、鹵素、NO2、CN、OR16、NR17R18或各自視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環(huán)烷基；m為0或1；n為0、1、2或3；_為一單鍵或一雙鍵，其限制條件為當(dāng)m為0時(shí)，則_必須為一單鍵；R12、R13和R16各自獨(dú)立地為H或各視情況經(jīng)取代的C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基或芳基；且R14、R15、R17和R18各自獨(dú)立地為H或C1-C4烷基；所述方法包含使式II的化合物 (其中Hal為Cl或Br且R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和n如上文關(guān)于式I所述)與式III的化合物 (其中W為B(OH)2、Sn(正丁基)3或Sn(CH3)3且X、Y、Z、R9、R10、m和_如上文關(guān)于式I所述)在鈀催化劑存在下視情況于溶劑存在下反應(yīng)。
15.一種根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一權(quán)利要求所述的化合物的用途，其是用于制造用于治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種式(I)的化合物及其用于治療性治療、預(yù)防或改善患者以升高的β淀粉樣沉積物或β淀粉樣蛋白含量表征的疾病或病癥的用途。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1997646SQ200580019450
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2005年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月16日
發(fā)明者邁克爾·索蒂里奧斯·馬拉馬斯, 詹姆斯·約瑟夫·艾爾代伊, 伊萬·蘇萬迪·古納萬, 基思·道格拉斯·巴恩斯, 馬修·羅伯特·約翰遜, 惠鈺 申請(qǐng)人:惠氏公司