專利名稱：右旋嗎啡喃的神經(jīng)保護特性的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種神經(jīng)保護化合物。本發(fā)明還涉及一種用于治療多種神經(jīng)學病癥包括帕金森病或帕金森病癥狀、阿爾茨海默病的學習和記憶受損、對麻醉藥如可卡因、嗎啡和去氧麻黃堿中毒和或依賴癥狀的嗎啡喃化合物。本發(fā)明還涉及這種嗎啡喃化合物的藥物制劑。
背景技術：
右甲嗎喃(DM，3-甲氧基-17-甲基嗎啡喃)是一種非麻醉性嗎啡喃衍生物，廣泛用作鎮(zhèn)咳藥已差不多40年了。其由于神經(jīng)保護特性而引起注意(5，9，17-20，23，24，26，27，33，34，46，50，51)。然而，與大劑量DM攝取有關的兒童毒性事件(43，45)和苯環(huán)己哌啶(PCP)類擬精神病反應(8，12，44，53)可能歸因于右嗎喃(DX，3-羥基-17-甲基嗎啡喃)，所述右嗎喃是DM的主要代謝產(chǎn)物(50，51)。用于神經(jīng)保護作用的DM劑量(17-20，50，51)比咳嗽抑制劑量大得多。臨床上，大劑量的DM會產(chǎn)生影響精神狀態(tài)的作用(8，12，19，43-45，53)。此外，許多國家已將DM作為尋找藥物過程的目標化合物(19，43，45)。以前，有人提出DM加強可卡因引起的小鼠的精神作用(13，25)，并且DM本身可在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生精神作用(12，15，20，24，27)。而且，有人證實，長期服用DM，干擾細胞免疫反應(16)，這與PCP引起的免疫抑制作用相似(19)。在過去的十年中，研究者已經(jīng)證明DM對于神經(jīng)保護具有N-甲基D-天冬氨酸(NMDA)受體拮抗效應(5，9，19，20，50)。因此，在體內(nèi)不轉(zhuǎn)化成DX并保留其神經(jīng)保護作用的DM類似物將會是非常有用的(7，24，27，46，50，51)。
最近，為了開發(fā)精神作用可以忽略且保留抗驚厥活性/神經(jīng)保護特性的化合物，合成了一系列在嗎啡喃環(huán)體系的3位和17位改性的化合物(24)。為了減少PCP類行為副作用(24，39，46)，同時保留抗驚厥作用/神經(jīng)保護作用，制備出一系列與DM結(jié)構相似的3位和17位取代的嗎啡喃，但是與DM相比，它們既不能代謝成DX，也不能以較低的比率達到該效果(24)。
1-甲基-4-苯基-1，2，5，6-四氫吡啶(MPTP))(3，40)、脂多糖(LPS)(10，28，40)和去氧麻黃堿(MA)(21，22，29)都引起嚙齒類動物、靈長類動物以及其它物種的黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元變性和紋狀體多巴胺減少(40)。大量的證據(jù)表明DM具有體內(nèi)(14，47)和體外(33)抗帕金森病的作用。此外，DM改善左旋多巴相關的帕金森病的運動波動和運動障礙，但是DM的窄治療指數(shù)和影響精神狀態(tài)的作用限制了它的臨床應用(52)。
因此，在神經(jīng)生物學領域，需要一種基本沒有不可接受的副作用的神經(jīng)保護藥物化合物，比如，可以治療帕金森病的癥狀而不引起其它不利的心理作用的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種神經(jīng)保護化合物或者含有神經(jīng)保護化合物的組合物。一方面，本發(fā)明涉及一種治療帕金森病的藥物組合物，其包含有效抗帕金森病量的3-羥基嗎啡喃(HM)或者其中3位和17位被派生的3-羥基嗎啡喃(HM)的嗎啡喃衍生物，包括但不限于3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)和3-甲基-17-甲基-嗎啡喃(DF)，或者其生理可接受的鹽，以及藥用載體或賦形劑。所述組合物可以包含嗎啡喃化合物的混合物。具體而言，本發(fā)明涉及3-羥基嗎啡喃。所述組合物還可以包含其它神經(jīng)保護劑或任何其它藥理可接受化合物。所述組合物可以是緩釋劑型。
在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明涉及一種治療帕金森病的單位劑量制劑，以設計來為人類口腔攝取的形式包含上述嗎啡喃或其藥學可接受的鹽，其中嗎啡喃或其鹽的存在劑量使得嗎啡喃在充分減少帕金森病癥狀方面是治療有效的，而不引起不可接受的副作用。所述單位劑量制劑可以包含易消化的膠囊，所述膠囊內(nèi)裝有嗎啡喃或者其藥學可接受的鹽。在該制劑中，預期嗎啡喃的含量可以是約250毫克/天或更少。
在另一方面，本發(fā)明涉及一種治療帕金森病或帕金森病癥狀的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗帕金森病量的上述組合物。在這種治療方法中，所述組合物可以包含上述嗎啡喃化合物的混合物。具體而言，所述嗎啡喃化合物可以是3-羥基嗎啡喃。此外，在該方法中，所述組合物可以是緩釋劑型。而且，所述組合物可以包含易消化的膠囊，所述膠囊內(nèi)裝有嗎啡喃或者其藥學可接受的鹽。此外，所述組合物的施用量可以是約250毫克/天或更少。并且所述組合物可以進一步包含神經(jīng)保護劑。
在又一方面，本發(fā)明涉及一種防止對象的黑質(zhì)(substantia nigra)中多巴胺產(chǎn)生減少的方法，包括向所述對象施用保護有效量的上述組合物。
本發(fā)明還涉及一種治療或預防阿爾茨海默病癥狀的藥物組合物，其包含有效抗阿爾茨海默病量的3-羥基嗎啡喃(HM)或者其中3位和17位被派生的3-羥基嗎啡喃(HM)的嗎啡喃衍生物，包括但不限于3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)和3-甲基-17-甲基-嗎啡喃(DF)，或者其生理可接受的鹽，以及藥用載體或賦形劑。所述組合物可以包含嗎啡喃化合物的混合物。具體而言，本發(fā)明涉及3-羥基嗎啡喃。所述組合物可以進一步包含其它神經(jīng)保護劑或任何其它藥理可接受化合物。所述組合物可以是緩釋劑型。具體而言，可以治療與阿爾茨海默病相關的學習和記憶受損。在這點上，本發(fā)明還涉及治療或預防與阿爾茨海默病相關的學習和記憶受損的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗阿爾茨海默病量的上述組合物。
在另一方面，本發(fā)明還涉及用于治療麻醉藥或精神藥物中毒或依賴癥狀的藥物組合物，其包含有效抗中毒量的3-羥基嗎啡喃(HM)或者其中3位和17位被派生的3-羥基嗎啡喃(HM)的嗎啡喃衍生物，包括但不限于3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)和3-甲基-17-甲基-嗎啡喃(DF)，或者其生理可接受的鹽，以及藥用載體或賦形劑。所述組合物可以包含嗎啡喃化合物的混合物。具體而言，本發(fā)明涉及3-羥基嗎啡喃。所述組合物可以進一步包含其它神經(jīng)保護劑或任何其它藥理可接受化合物。所述組合物可以是緩釋劑型。在這點上，本發(fā)明還涉及治療麻醉藥中毒的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗中毒量的上述組合物。具體而言，其中麻醉劑可以是但不限于可卡因、嗎啡或去氧麻黃堿。
本發(fā)明還涉及一種治療麻醉藥依賴的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗依賴量的上述組合物。具體而言，麻醉藥依賴可以是但不限于可卡因、嗎啡或去氧麻黃堿依賴。
通過對本發(fā)明的下列說明、附圖和所附權利要求書，將更加充分地理解本發(fā)明的這些和其它目的。


通過下文的詳細說明和僅僅為了說明目的而給出并因此不限制本發(fā)明的附圖，將更加充分地理解本發(fā)明，其中圖1顯示作為示例的右旋嗎啡喃類似物的化學結(jié)構。
圖2A-2B顯示嗎啡喃或者苯環(huán)己哌啶(PCP)多次給藥后的運動行為變化。DM＝右甲嗎喃，DX＝右嗎喃，HM＝3-羥基嗎啡喃，AM＝3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃，CM＝3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃，DF＝二甲嗎喃。圖2A中，在最后的治療之后30min內(nèi)，測定動物在水平運動行為中“以cm計的總移動距離”。圖2B中，測定運動行為后，在3分鐘的監(jiān)控期間內(nèi)，使用自動視頻跟蹤系統(tǒng)分析“絕對轉(zhuǎn)動角度”參數(shù)，以檢測邊緣行為(marginal activity)(轉(zhuǎn)圈行為)。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水組，aP＜0.05，bP＜0.01，cP＜0.001；相對于PCP 2.5mg/kg組，dP＜0.05(ANOVA與DMR測試)。
圖3A-3H顯示代表性的運動模式描圖；A.鹽水注射，腹膜內(nèi)(i.p.)；B.苯環(huán)己哌啶(PCP)5mg/kg，i.p.；C.右甲嗎喃(DM)40mg/kg，i.p.；D.右嗎喃(DX)40mg/kg，i.p.；E.3-羥基嗎啡喃(HM)40mg/kg，i.p.；F.3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)40mg/kg，i.p.；G.3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)40mg/kg，intrapentoneal(i.p.)；H.二甲嗎喃(DF)40mg/kg，i.p.。注意到使用PCP、DX或DM治療后邊緣行為(轉(zhuǎn)圈行為)的特殊增加。
圖4顯示嗎啡喃或苯環(huán)己哌啶(PCP)多次給藥后條件位置偏好(CPP)特征的變化；DM＝右甲嗎喃，DX＝右嗎喃，HM＝3-羥基嗎啡喃，AM＝3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃，CM＝3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃，DF＝二甲嗎喃。每個數(shù)值是15只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水組，aP＜0.05，bP＜0.01，cP＜0.001；相對于相應劑量的DM組，dP＜0.05；相對于相應劑量的DX組，eP＜0.05，fP＜0.01；相對于PCP 2.5mg/kg組，gP＜0.05；相對于DX 20mg/kg組，hP＜0.05(ANOVA與DMR測試)。
圖5A-5B顯示嗎啡喃類似物對MPTP誘導的小鼠運動行為(A)和運動模式(B)的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M(A)。相對于鹽水+鹽水組，#P＜0.01；相對于鹽水+MPTP組，*P＜0.01。使用MPTP治療后動物的運動行為/模式的顯著降低在HM或者DM的存在下顯著增加。這種降低在使用HM治療的動物體內(nèi)更加明顯。
圖6A-6B.圖6A顯示嗎啡喃類似物(24mg/kg，i.p.)對使用MPTP治療的小鼠體內(nèi)黑質(zhì)(SN)多巴胺能神經(jīng)元中酪氨酸羥化酶樣免疫反應(TH-IR)的影響。放大倍數(shù)為40倍。圖6B中每個數(shù)值是15只動物的平均值±S.E.M。計算整個SN密部的TH陽性神經(jīng)元的總數(shù)目。使用配有分級目鏡的顯微鏡辨認和計算具有明顯染色體(stained somata)的TH陽性神經(jīng)元。在圖像分析系統(tǒng)(Optimas version 6.2)下通過Abercrombie法(1)修正截面厚度的神經(jīng)元總數(shù)。相對于鹽水+鹽水組，#P＜0.01；相對于鹽水+MPTP組，*P＜0.05，(Fischer LSD測試)。
圖7A-7B顯示嗎啡喃類似物對LPS誘導的小鼠運動行為(A)和運動模式(B)的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M(A)。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.05，相對于鹽水+LPS組；**P＜0.01，相對于鹽水+LPS組。使用LPS治療后動物的運動行為/模式的顯著降低在HM或者DM的存在下顯著增加。這種降低在使用HM治療的動物體內(nèi)更加明顯。
圖8A-8B.圖8A顯示嗎啡喃類似物(24mg/kg，i.p.)對使用LPS治療的小鼠體內(nèi)黑質(zhì)(SN)多巴胺能神經(jīng)元中酪氨酸羥化酶樣免疫反應(TH-IR)的影響。放大倍數(shù)為40倍。圖8B中每個數(shù)值是5只動物的平均值±S.E.M。計算整個SN密部的TH陽性神經(jīng)元的總數(shù)目。使用配有分級目鏡的顯微鏡辨認和計算具有明顯染色體(stained somata)的TH陽性神經(jīng)元。在圖像分析系統(tǒng)(Optimas version 6.2)下通過Abercrombie法(1)修正截面厚度的神經(jīng)元總數(shù)。相對于鹽水+鹽水組，#P＜0.01；相對于鹽水+MPTP組，*P＜0.05，(Fischer LSD測試)。
圖9顯示去氧麻黃堿(MA)研究的試驗表。小鼠以2h的時間間隔接受4次MA·HCl注射(7.5mg/kg，i.p.，以游離堿(free base)計)。在每次MA治療后的40min時記錄直腸溫度。每一嗎啡喃施用2次，第一次注射MA前4小時40分鐘和40分鐘。最后的MA注射3天后處死小鼠。
圖10A-10B顯示嗎啡喃對去氧麻黃堿(MA)引起的高熱的影響。在22±0.5℃的環(huán)境溫度下，小鼠以2h的時間間隔接受MA的i.p.注射(4次，每次7.5mg/kg)。在每次MA治療(箭頭＝MA注射)后的40min時記錄直腸溫度。HM在減弱MA引起的高熱方面是最有效的。每個數(shù)值是12只動物的平均值±S.E.M。#P＜0.01，相對于鹽水組；*P＜0.05，相對于MA單用組；**P＜0.01，相對于MA單用組(ANOVA進行多次測試)。
圖11A-11B顯示嗎啡喃類似物對去氧麻黃堿(MA)引起的小數(shù)運動行為(A)和運動模式(B)的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M(A)。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.01，相對于鹽水+MA組。使用MA治療后動物的運動行為/模式的顯著降低在HM或者DM的存在下顯著增加。這種降低在使用HM治療的動物體內(nèi)更加明顯。
圖12A-12B顯示嗎啡喃類似物(24mg/kg，i.p.)對使用去氧麻黃堿(MA)治療的小鼠體內(nèi)黑質(zhì)(SN)多巴胺能神經(jīng)元中酪氨酸羥化酶樣免疫反應(TH-IR)的影響。放大倍數(shù)為40倍。圖12B中，每個數(shù)值是5只動物的平均值±S.E.M。計算整個SN密部的TH陽性神經(jīng)元的總數(shù)目。使用配有分級目鏡的顯微鏡辨認和計算具有明顯染色體(stained somata)的TH陽性神經(jīng)元。在圖像分析系統(tǒng)(Optimas version 6.2)下通過Abercrombie法(1)修正截面厚度的神經(jīng)元總數(shù)。相對于鹽水+鹽水組，#P＜0.01；相對于鹽水+MA組，*P＜0.05，(Fischer LSD測試)。
圖13顯示大鼠大腦皮層膜內(nèi)CB1受體激動劑[3H]CP55,940特異結(jié)合的位移。每個數(shù)值是3個獨立試驗的平均值。
圖14顯示HM(3-羥基嗎啡喃)的CB1拮抗特性(部分激動劑)。CP＝CP55,940，選擇性CB1激動劑，AM-251＝選擇性CB1拮抗劑。
圖15A-15F顯示黑質(zhì)內(nèi)上次MPTP給藥后1周，使用酪氨酸羥化酶進行免疫標記的黑質(zhì)的代表性照片。HM的神經(jīng)保護作用受到CB1激動劑ACEA的抵觸。在每次MPTP治療前45min施用CB1激動劑或者拮抗劑，同時在每次MPTP治療前30min注射HM(20mg/kg，i.p./天，共7天)。在最后一次MPTP之后，施用化合物7天。放大倍數(shù)＝40。
圖16顯示CB1受體激動劑ACEA或CB1受體拮抗劑AM-251對HM響應脂多糖(LPS)引起的死亡率的行為的影響。雙側(cè)紋狀體內(nèi)注射LPS(一側(cè)2μg×2)后2周內(nèi)觀察死亡率。注意HM(20mg/kg)的組合治療沒有產(chǎn)生LPS誘導的死亡率。在LPS之后，HM(20mg/kg)連同或者不連同ACEA(2mg/kg)/AM-251(0.3mg/kg)一天注射一次，持續(xù)2周。第一次ACEA或者AM-251治療在LPS之后45min時進行，第一次HM治療在LPS之后30min時進行。
圖17A-17F顯示黑質(zhì)內(nèi)上次LPS施用后2周時，使用酪氨酸羥化酶進行免疫標記的黑質(zhì)的代表性照片。HM的神經(jīng)保護作用受到CB1激動劑ACEA的阻礙。放大倍數(shù)＝40。
圖18A-18F顯示黑質(zhì)內(nèi)上次去氧麻黃堿(MA)施用后3天時，使用酪氨酸羥化酶進行免疫標記的黑質(zhì)的代表性照片。HM的神經(jīng)保護作用受到CB1激動劑ACEA的阻礙。MA注射之前和之后3天施用化合物。每次ACEA(2mg/kg)或者AM-251(0.3mg/kg)治療在HM(20mg/kg)之前15min進行。藥物的第一次預處理方法如下在MA之前45min時進行ACEA或者AM-251治療，同時在MA之前30min時進行HM治療。最后一次MA后72h時處死動物。放大倍數(shù)＝40。
圖19顯示與左旋多巴連同或不連同卡比多巴的情況相比，MPTP模型內(nèi)的HM效果評估的試驗表。
圖20A-20B顯示卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴和HM對MPTP引起的小鼠運動行為(A)和運動模式(B)變化的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。*P＜0.05，相對于鹽水+MPTP組；#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組(ANOVA與DMR測試)。
圖21A-21G顯示卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴和HM對使用MPTP治療的小鼠黑質(zhì)酪氨酸羥化酶樣免疫反應性(TH-IR)的影響。每個數(shù)值是5只動物的平均值±S.E.M。計算整個黑質(zhì)密部的TH陽性神經(jīng)元的總數(shù)目。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.05，相對于鹽水+MPTP組(ANOVA與DMR測試)。放大倍數(shù)＝40。
圖22顯示與左旋多巴連同或不連同卡比多巴的情況相比，LPS模型內(nèi)的HM效果評估的試驗表。
圖23顯示卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴或者HM響應LPS引起的死亡率的影響。LPS注射后2周內(nèi)觀察死亡率。*P＜0.01，相對于鹽水+LPS組(χ2檢驗)。
圖24顯示HM、卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴對LPS引起的運動減少(hypolocomotion)的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.05，相對于鹽水+LPS組，**P＜0.01，相對于鹽水+LPS組(ANOVA與DMR測試)。
圖25顯示關于卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴和HM響應LPS的影響的小鼠的典型運動模式。
圖26A-26J顯示關于卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多或者HM對LPS引起的TH-IR減少的影響的顯微照片。放大倍數(shù)＝40。
圖27顯示卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴和HM對使用LPS治療的小鼠黑質(zhì)酪氨酸羥化酶樣免疫反應性(TH-IR)的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.05，相對于鹽水+LPS組；**P＜0.01，相對于鹽水+LPS組(ANOVA與DMR測試)。
圖28顯示關于小鼠黑質(zhì)內(nèi)F4/80標記的小膠質(zhì)細胞的感應的典型顯微照片。放大倍數(shù)＝40。
圖29顯示卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴和HM對使用LPS治療的小鼠F4/80免疫反應性的黑質(zhì)增加的影響。每個數(shù)值是6只動物的平均值±S.E.M。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.05，相對于鹽水+LPS組；**P＜0.01，相對于鹽水+LPS組(ANOVA與DMR測試)。
圖30顯示與左旋多巴連同或不連同卡比多巴的情況相比，去氧麻黃堿模型內(nèi)的HM效果評估的試驗表。
圖31A-31B顯示藥物對MA引起的高熱的影響。在22.0±0.5℃的環(huán)境溫度下，小鼠以2h的時間間隔接受MA注射。每個數(shù)值是6只動物的平均值±S.E.M。#P＜0.01，相對于鹽水組；*P＜0.01，相對于MA單用組(ANOVA進行多次測試)。
圖32顯示HM、卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴對MA引起的小鼠運動減少的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。*P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；#P＜0.05，相對于鹽水+LPS組，##P＜0.01，相對于鹽水+LPS組(ANOVA與DMR測試)。
圖33A-33G顯示卡比多巴、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴和HM對使用MA治療的小鼠黑質(zhì)酪氨酸羥化酶樣免疫反應性(TH-IR)的影響。每個數(shù)值是5只動物的平均值±S.E.M。計算整個黑質(zhì)密部的TH陽性神經(jīng)元的總數(shù)目。#P＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；*P＜0.05，相對于鹽水+MA組(ANOVA與DMR測試)。放大倍數(shù)＝40。
圖34A-34B顯示嗎啡喃對可卡因引起的小鼠活動過度的影響。在可卡因(5和20mg/kg，i.p.)之前30min施用嗎啡喃(15和30mg/kg，i.p.)。中央行為指在箱子的中央相對非特異性的運動行為。邊緣行為指轉(zhuǎn)圈行為。所有治療都進行7天。每個數(shù)值是6只動物的平均值±S.E.M。*P＜0.05，相對于鹽水組；**P＜0.01相對于鹽水組；#P＜0.05或者##P＜0.01，相對于鹽水+相應劑量的可卡因組(ANOVA與DMR測試)。
圖35A-35D顯示二甲嗎喃(DF)對可卡因引起的小鼠活動過度的影響。在可卡因(5和20mg/kg，i.p.)之前30min施用DF(20mg/kg，i.p.)。所有治療都進行7天。每個數(shù)值是6只動物的平均值±S.E.M。*P＜0.05，相對于鹽水組；**P＜0.01相對于鹽水組；#P＜0.05，相對于相應的對照組；##P＜0.01，相對于相應的對照組(ANOVA與DMR測試)。
圖36A-36F顯示小鼠大腦背外側(cè)紋狀體內(nèi)Fos相關抗原免疫反應神經(jīng)元的典型顯微鏡照片。A鹽水；BDM(20mg/kg，i.p.)+可卡因(5mg/kg，i.p.)；C可卡因(5mg/kg，i.p.)；DDF(20mg/kg，i.p.)+可卡因；EAM(20mg/kg，i.p.)+可卡因；FCM(20mg/kg，i.p.)+可卡因。放大倍數(shù)100倍。
圖37顯示大麻素CB1受體調(diào)節(jié)對響應可卡因引起的條件位置偏好的HM介導作用的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水治療組，*P＜0.05或**P＜0.01；相對于可卡因組，#P＜0.05；相對于可卡因+HM組，§P＜0.05(ANOVA與DMR測試)。
圖38顯示大麻素CB1受體調(diào)節(jié)對響應可卡因引起的行為致敏的HM介導作用的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水組，*P＜0.05或**P＜0.01；相對于可卡因單用組，#P＜0.05(ANOVA與DMR測試)。
圖39A-39D顯示嗎啡喃對MA引起的小鼠活動過度的影響。每一嗎啡喃(20mg/kg，i.p.)在MA(1mg/kg，i.p.)之前30min給藥。所有治療都進行7天。每個數(shù)值是6只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水組，*P＜0.05；相對于鹽水組，**P＜0.01；相對于鹽水+MA組，§P＜0.05(ANOVA與DMR測試)。
圖40顯示小鼠大腦背外側(cè)紋狀體內(nèi)Fos相關抗原免疫反應神經(jīng)元的典型顯微鏡照片。A鹽水；BMA(1mg/kg，i.p.)；CDM(20mg/kg，i.p.)+MA；DDF(20mg/kg，i.p.)+MA；EAM(20mg/kg，i.p.)+MA；FCM(20mg/kg，i.p.)+MA。放大倍數(shù)100倍。
圖41A-41B顯示嗎啡喃對MA引起的小鼠致敏的影響。嗎啡喃(20mg/kg，i.p.)在洗出期間的最后3天給藥。每個數(shù)值是6只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水+鹽水組，*P＜0.05；相對于鹽水+鹽水組，**P＜0.01；相對于相應劑量的鹽水+MA組，#P＜0.05(ANOVA與DMR測試)。
圖42顯示大麻素CB1受體調(diào)節(jié)對響應MA引起的條件位置偏好的HM介導作用的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水組，*P＜0.05或**P＜0.01；相對于MA單用組，#P＜0.01；相對于MA+HM組，§P＜0.01(ANOVA與DMR測試)。
圖43顯示大麻素CB1受體調(diào)節(jié)對響應MA引起的行為致敏的HM介導作用的影響。每個數(shù)值是10只動物的平均值±S.E.M。相對于鹽水組，*P＜0.02，**P＜0.01；相對于MA單用組，#P＜0.05；相對于MA+HM組，§P＜0.01(ANOVA與DMR測試)。
具體實施例方式
在本申請中，無量詞修飾用于指一個和多個目標。如此處所用，“與”一種或多種其它治療劑“組合”施用包括同時(并行)和以任何順序連續(xù)施用。
如本文所用，“有效量”是指足以達到有益的所希望的臨床或生物化學效果的量。有效量可以一次性或者分多次施用。為了本發(fā)明的目的，有效量的嗎啡喃化合物是足以減輕、改善、穩(wěn)定、逆轉(zhuǎn)、減慢或者延遲疾病狀態(tài)或病況的進程的量。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，“有效量”被定義為能預防黑質(zhì)中的多巴胺形成減少的量，以及顯著減少帕金森病的癥狀的量。其它形式的有效量可以是用于治療或預防與阿爾茨海默病相關的學習和記憶受損的量。此外，其它形式的有效量可以指有效治療麻醉藥所致的中毒癥狀的量，其中所述癥狀包括但不限于痛覺喪失，欣快癥，呼吸抑制，瞳孔縮小，鎮(zhèn)靜，煩躁不安，幻覺，精神錯亂和癲癇發(fā)作。有效量還可以指可用于顯著減輕或緩解個體對麻醉藥例如但不限于可卡因、嗎啡或去氧麻黃堿的依賴。在另一實施方案中，“有效量”被定義為嗎啡喃的神經(jīng)保護有效量。
如本文所用，“與”一種或多種其它治療劑“組合”施用包括同時(并行)和以任何順序連續(xù)施用。
如本文所用，用于治療目的的“哺乳動物”或“對象”是指歸類為哺乳動物的任何動物，包括人類，家養(yǎng)和農(nóng)場動物，還有動物園、運動場的動物或?qū)櫸铮绻?，貓，牛，馬，羊，豬等等。優(yōu)選哺乳動物是人類。
如本文所用，“神經(jīng)保護”劑指用來預防由于局部缺血、中風、驚厥或者外傷引起的大腦或者脊髓損傷的藥物或者化學試劑。一些必須在事前施用，而其它的可以是事后有效的。它們通過多種機理起作用，但是通常直接或間接地使內(nèi)生的刺激性氨基酸所產(chǎn)生的損傷最小化。神經(jīng)保護還包括針對神經(jīng)退化和神經(jīng)毒素的保護。此外，“神經(jīng)保護”是指包括減慢或中斷神經(jīng)元退化進程的干預。神經(jīng)保護還可以用于預防或推進疾病的發(fā)展，如果它可以在征兆之前的階段被確認的話。
如本文所用，“帕金森病”是指一種慢性進行性神經(jīng)疾病，主要跟晚年黑質(zhì)中的多巴胺產(chǎn)生減少有關。癥狀包括佝僂(stooped posture)，靜止性震顫，靜止性肌肉虛弱，微跛(shuffling gait)，語言障礙，運動困難和心智活動的最終延緩以及癡呆。
嗎啡喃類似物本發(fā)明中神經(jīng)保護嗎啡喃類似物或者衍生物是3位和17位取代的3-羥基嗎啡喃。這些類似物可以包括但不限于3位上被氧，氮，鹵素，烷基包括乙基，丙基等等取代的取代產(chǎn)物。17位的氮基也可以使用多種基團進行衍生。用于神經(jīng)保護目的的本發(fā)明化合物的示例如下以及如本申請的制備實施例部分中所示。
源自3-羥基嗎啡喃、保留O的衍生物的合成方案1 N，O烷基化
3位O取代化合物方案1 1)3-氨基嗎啡喃衍生物的合成方案2
2)3-鹵代嗎啡喃衍生物的合成如方案3中所示通過在3位上引入錫衍生物而合成鹵代化合物和羥甲基衍生物，收率非常低，并且不能由有限量的初始物得到所希望的化合物。
方案3
3)3-乙基嗎啡喃衍生物的合成由于不能從上述的2)中得到3-鹵代化合物，因此直接在3位加入乙烯基得到相似的衍生物。乙烯基的引入很成功，如下列方案4所示合成出了幾種衍生物。
方案4
示例性化合物列表










嗎啡喃和帕金森病大量證據(jù)表明右甲嗎喃(DM)具有體內(nèi)和體外抗帕金森作用。然而，眾所周知，DM誘導的影響精神狀態(tài)的作用會限制其臨床應用。先前合成了右旋嗎啡喃3-羥基嗎啡喃(HM)、3-烯丙氧基-17-甲基-嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)和二甲嗎喃(DF)(BioorgMed Chem Lett 2001；111651-1654，Behav.Brain Res.2004；151267-276，Br.J.Pharmacol.2005；144908-918)。它們表現(xiàn)出如DM或其主要代謝物右嗎喃(DX)中所看到的可忽略的行為副作用。本發(fā)明涉及使用右旋嗎啡喃治療或處理帕金森病的癥狀。DM，HM和CM減輕了1-甲基-4-苯基-1，2，5，6-四氫吡啶(MPTP)、脂多糖(LPS)或去氧麻黃堿(MA)引起的運動功能減退、紋狀體內(nèi)多巴胺及其代謝物水平的減少以及黑質(zhì)酪氨酸羥基激酶樣免疫反應(TH-IR)的減少。雖然AM和DF沒有顯著影響由MPTP或者LPS引起的這些毒性，但是減輕了MA引起的神經(jīng)毒性(高熱，運動功能減退，紋狀體內(nèi)多巴胺及其代謝物水平的減少，以及黑質(zhì)TH-IR的減少)。
考察了小鼠體內(nèi)右旋嗎啡喃的行為和抗帕金森效果。作為行為副作用的參數(shù)，考察PCP引起的行為特征，典型的特征是轉(zhuǎn)圈行為和條件位置偏好(CPP)(13、27、37)。有意思的是，邊緣運動模式(轉(zhuǎn)圈行為)跟前面的CPP相似(13、27)。DX的作用在性質(zhì)上跟PCP相似，跟以前的研究一致(24、27)。盡管DM引起的行為特征表現(xiàn)為不如DX明顯，但是觀察到它以與劑量相關的方式影響精神狀態(tài)的作用。更重要的是，嗎啡喃環(huán)體系的3位(和17)位經(jīng)過修飾的AM，CM，HM和DF保留神經(jīng)學活性但具有弱的行為副作用(7、24、27、46)。以前的研究認為AM，CM或者DF抗驚厥/神經(jīng)保護作用的機制可能是通過σ1受體而不是PCP位點介導(7、24、27、46)。AM，CM或者DF對PCP位點的非常低親和力顯示，作用于PCP位點可能不是嗎啡喃的抗驚厥/神經(jīng)保護作用的先決條件。雖然DM，AM，CM和DF表現(xiàn)出抗驚厥作用，但是HM沒有顯示出對于海人藻酸(kainate)(24)或者最大電擊(27)的抗驚厥作用，這表明HM的藥理學作用對于多巴胺能系統(tǒng)來說可能是特異性的。DM迅速通過O-去甲基作用代謝成PCP類化合物DX(50、51、54)。然后DX發(fā)生N-去甲基作用得到HM。DX和HM通過葡萄糖苷酸化過程消除。作為替代方案，DM首先通過N-去甲基作用得到3-甲氧基嗎啡喃來進行代謝，然后發(fā)生O-去甲基反應得到HM(54)。這些代謝過程可有利于降低多巴胺能毒性，但是應當收集更多的證據(jù)。與DM或者DX相比，推測3-甲氧基嗎啡喃和HM具有較低的CNS活性，但是要考慮嗎啡喃施用的途徑特異性效果、嗎啡喃劑量的影響，以及體內(nèi)葡萄糖苷酸化能力(54)。
雖然DM和DX具有很多共性作用，但是它們的受體結(jié)合特征和體內(nèi)藥理學不同(7、27、34、50)。DM在不同的DM識別位點和σ受體結(jié)合位點具有高結(jié)合力，但是在DX標記的位點具有相對低的親和力。相比之下，DX對于大腦DX和PCP結(jié)合位點具有高親和力，而對于DM和σ位點具有低至中等的親和力(50)。因此，高于推薦的鎮(zhèn)咳藥劑量的DM劑量應當產(chǎn)生與DX相關的類似于PCP的效應(1、2)。此外，DM可能具有混合激動劑的特性(17、19、20、50、51)，其以低劑量用作非競爭性NMDA受體拮抗劑，但是較高劑量時是部分激動劑(20、48、49)。因此，DM可以與PCP-NMDA-σ受體復合物相互作用(20、48、49、50)。
為了減少PCP樣行為副作用(24、39)，同時保留神經(jīng)保護作用，制備出和DM結(jié)構相似的一系列的3位和17位取代的嗎啡喃，但是不能預期代謝成DX，也不能預期以與DM相比減少的比率達到相同的效果?？紤]了醚的尺寸效應和水解速率(24)。
帕金森病中，紋狀體多巴胺能去神經(jīng)支配是主要的生物化學損害，主要導致以下臨床癥狀，例如運動不能，張力減退，震顫和姿勢不穩(wěn)(35)。除了開發(fā)新的多巴胺能藥物，尤其是多巴胺激動劑的多種嘗試之外，左旋多巴仍然是治療帕金森病的“金標”(35)。然而，長期使用出現(xiàn)一些副作用，比如，運動失常，行為波動，幻覺和精神錯亂(35、36)。因此，從治療的角度出發(fā)，需要以新的病理生理學研究為基礎的新策略。因此，作用于耐左旋多巴的癥狀或具有神經(jīng)保護作用的藥物將是非常有價值的。
已經(jīng)提議低親和力的NMDA打開通道的拮抗劑會是抗帕金森病藥物的良好替代品。DM具有復雜的藥理學特征，包括對于NMDA受體通道的微摩爾親和力。在2個開放性臨床試驗中，發(fā)現(xiàn)DM顯著改善一些帕金森病志愿者癥狀。而且，注射DM和氯胺酮后看到經(jīng)利血平治療的小鼠的活動的適度恢復，但是動物之間具有很大的不同(47)。
對人類施用NMDA受體拮抗劑的一個主要的問題是它們會引起不可接受的副作用。這些副作用包括精神興奮和記憶損傷，以及肌肉松弛和共濟失調(diào)。但是理論認為，對于NMDA受體相關離子通道具有低親和力的化合物可能是最有效的，并且對于可用的很多NMDA受體拮抗劑而言是最低毒性的(32)。在這些NMDA受體拮抗劑中，DM大致與這些理論模型匹配，在幾個小組的先天性帕金森患者中試驗，有成功也有失敗(47)。
早期的報道已經(jīng)顯示NMDA受體阻斷可以直接恢復帕金森類小鼠(4)和大鼠(30)的運動性，但是靈長類(6)不行。然而，不是所有實驗室都發(fā)現(xiàn)了這種現(xiàn)象，這個主題存在爭議(14)。
相比之下，本申請中公開的右甲嗎喃類似物比如HM、AM、CM和DF與NMDA受體相關的PCP位點具有很低的親和力(7、27)，表明NMDA相關的PCP位點不是它們抗帕金森作用的首要條件。此外，前面的報道表明DM、DX、HM、AM、CM和DF是σ1受體的高親和配基(7、27、46)。而且，認識到σ1受體調(diào)節(jié)谷氨酸NMDA受體功能和多巴胺的釋放(11)。已經(jīng)提議將選擇性σ1受體配基作為新一類神經(jīng)退行性疾病的治療劑的代表，盡管仍然未將其引入治療應用中(11)。近來，證實了σ1受體激動劑抑制NMDA刺激的[3H]多巴胺從大鼠和豚鼠紋狀體、前額皮質(zhì)和伏核(nucleus accumbens)的切片中的釋放(2)。此外，σ1受體在多巴胺傳遞的促進中起到重要作用(31、42)。該現(xiàn)象部分包括在多巴胺合成速率的增加中。不受理論束縛，盡管嗎啡喃通過NMDA受體拮抗作用所表現(xiàn)出來的貢獻不能被排除，但是嗎啡喃的初步作用機制，至少部分地，與σ1受體調(diào)節(jié)有關。
總之，本研究的結(jié)果顯示DM對MPTP、LPS和MA模型具有突出的抗帕金森作用，但是DM具有行為副作用。更重要的是，其它嗎啡喃不產(chǎn)生DM或DX的PCP樣行為副作用。而且，HM和CM對MPTP、LPS和MA具有顯著的抗帕金森作用。AM和DF有效抑制MA引起的神經(jīng)毒性。MA引起的多巴胺能毒性長期以來被認為是最重要的帕金森病動物模型之一。
治療制劑嗎啡喃及其混合物和/或藥學可接受的鹽可以口服或透皮或通過靜脈，肌內(nèi)，皮下，鞘內(nèi)，硬膜外或大腦室內(nèi)注射來施用。有效的劑量水平可以寬范圍變化，例如，約0.25-約250mg/天，當然，實際用量要根據(jù)所治療病人的狀態(tài)和情況決定。如本領域技術人員所認為的，治療醫(yī)師應考慮許多改變此處活性物質(zhì)的作用的因素，比如患者的年齡、體重、性別、飲食和狀態(tài)，給藥時間，給藥速率和給藥途徑，等等。對于給定系列條件的最佳劑量可以由本領域技術人員根據(jù)本文所提供的試驗數(shù)據(jù)利用傳統(tǒng)的劑量測定試驗來確定。
包含嗎啡喃、它們的混合物和/或藥學可接受的鹽的治療組合物一般由一種或者多種藥學可接受成分根據(jù)已知的實踐制備。因此，嗎啡喃，它們的混合物和/或藥學可接受的鹽可以配制成液體，粉末，酏劑，注射溶液等等。口服制劑可以提供為明膠硬膠囊，其中嗎啡喃、它們的混合物和/或藥學可接受的鹽和惰性固體稀釋劑比如碳酸鈣、磷酸鈣或者高嶺土混合，或者提供為明膠軟膠囊，其中嗎啡喃、它們的混合物和/或者藥學可接受的鹽和油性介質(zhì)例如液體石蠟或者橄欖油混合。
水性混懸液可以包含嗎啡喃，它們的混合物和/或藥學可接受的鹽和藥學可接受的賦形劑比如混懸劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或者潤濕劑比如天然磷脂，例如卵磷脂，或者堿性氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯，或者環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物，例如，十七烷基乙烯-氧化十六醇(heptadecaethylene-oxycetanol)，或者環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧化乙烯山梨糖醇一油酸酯，或者環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧化乙烯山梨糖醇酐一油酸酯。這些水性混懸液還可以包含一種或多種防腐劑，例如乙基-or-正丙基-對-羥基苯甲酸酯，一種或多種著色劑，一種或多種調(diào)味劑，以及一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或者環(huán)己氨基磺酸鈉或鈣。
適用于通過加入水來制備水性混懸液的可分散粉末和顆粒提供與分散劑或者潤濕劑、混懸劑和一種或者多種防腐劑混合的嗎啡喃、它們的混合物和/或者藥學可接受的鹽。合適的分散劑或者潤濕劑和混懸劑前面已經(jīng)例舉?？梢源嬖诹硗獾馁x形劑，例如，甜味劑，調(diào)味劑和著色劑。糖漿劑和酏劑可以與甜味劑，例如，甘油，山梨醇或蔗糖一起配制。這些制劑還可包含緩和劑，防腐劑，調(diào)味劑和著色劑。
嗎啡喃、它們的混合物和/或者藥學可接受的鹽有利地提供為緩釋劑型，其中許多種是已知的，例如，美國專利4788055、4816264、4828836、4834965、4834985、4996047、5071646和5133974中所述的那些，所述專利的內(nèi)容在此處引入作為參考。
本發(fā)明的范圍內(nèi)還有，在任何其它已知的用于處理或治療帕金森病癥狀的藥理活性物質(zhì)之前、同時或之后施用嗎啡喃、它們的混合物和/或者藥學可接受的鹽。這些藥理活性物質(zhì)包括但不限于其它神經(jīng)保護劑。
神經(jīng)保護劑試圖從不可逆損傷中挽救大腦中的缺血性神經(jīng)元。其它的神經(jīng)保護劑預防與血流回流有關的潛伏性有害事件。盡管血流回流至大腦通常與輸出量提高有關，但是再次灌注會有助于另外的腦損傷?；亓鞯难瑫枞⊙懿⑨尫哦拘援a(chǎn)物的白細胞。局部缺血導致刺激性氨基酸受體的過量激活，細胞內(nèi)鈣的積聚，以及引起細胞損傷的其它毒性產(chǎn)物。通過防止刺激性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，神經(jīng)保護劑可以降低局部缺血對于細胞的有害作用。
研究最多的神經(jīng)保護劑阻斷N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體。調(diào)節(jié)其它非-NMDA受體和通道，還可以減少刺激性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放?？拐掣娇贵w比如可以阻斷內(nèi)皮細胞間粘附分子(ICAM)的單克隆抗體可以用于防止血管壁上的白細胞粘附。因為抗ICAM抗體阻斷與再灌注相關的損傷的早期階段，所以它們顯示出有希望的保護神經(jīng)元功能的機理。其它神經(jīng)保護劑產(chǎn)生膜穩(wěn)定性能。例如，CDP-膽堿的外源形式用于膜生物合成并減少了自由基的形成。神經(jīng)元愈合藥物例如堿性成纖維細胞生長因子也可以使用。
指導說明本發(fā)明還涉及關于使用本發(fā)明的嗎啡喃治療多種神經(jīng)學病癥包括帕金森病或帕金森病癥狀、阿爾茨海默病的學習和記憶受損、對麻醉藥如可卡因、嗎啡和去氧麻黃堿中毒和或依賴癥狀的指導說明。這種指導說明可以是永久的或臨時的格式。所述指導說明可以是書面形式，例如但不限于教科書、議定書、目錄、互聯(lián)網(wǎng)址等等。這種指導說明可以通過計算機屏幕在陰極射線管、LCD、LED等上提供，只要所述指導說明能夠通過眼睛看到即可。所述指導說明還可以為音頻/視頻媒體的形式，或者作為用于治療上述各種癥狀的藥盒的一部分。
本發(fā)明并不限于這里所述的具體實施方案所限定的范圍。事實上，根據(jù)前述說明和附圖，除本文如上所述以外的對本發(fā)明的種種改進對于本領域技術人員來說將變得明顯。這些改進意于落在所述權利要求書的范圍內(nèi)。所附實施例以描述而不是限制本發(fā)明的方式提供。
實施例實施例1-制備實施例制備實施例1.1-3-羥基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃2和3-O-(叔丁氧基羰基)-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃3的制備 向3-羥基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃(200mg，0.62mmol)在干燥的二氯甲烷(3.0ml)中的溶液中，依次加入三乙胺(250μl，1.83mmol)和Boc2O(190mg，0.88mmol)，并在室溫下攪拌所述混合物。2h后，減壓除去溶劑，剩余物利用硅膠柱層析進行純化，得到化合物2(168mg，79％)和化合物3(43mg，16％)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.04～7.08(3H，m)；3.73(2H，m)；3.68(1H，m)；3.08(2H，m)；2.15(1H，m)；1.83(2H，m)；1.50～1.70(8H，m)；1.40(9H，s)(for 2)，δ7.05～6.83(3H，m)；4.30(0.50H，br)4.00(0.50H，br)；3.85(0.50H，m)；3.68(0.50H，m)；3.05～3.25(1H，m)；2.50～2.70(2H，m)；1.65～1.80(5H，br)；1.57(9H，s)；1.49(9H，s)；1.15～1.30(6H，m)(對于3而言)。
制備實施例1.2-3-O-炔丙基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃4的制備
向化合物2(22mg，0.064mmol)在干燥的DMF(2.0ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(40mg，0.29mmol)和炔丙基溴(34μl，0.384mmol)，并將混合物在60℃下回流。18h后，向所述混合物中加入氯化鈉飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物。混合的有機層經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析，得到20mg(82％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.04～6.89(3H，m)；4.70(2H，s)；4.33(0.5H，br)；4.18(0.5H，m)；3.90(0.5H，d)；3.73(0.5H，d)；3.15～3.07(1H，m)；2.59(1H，s)；2.30(1H，br)；1.83(2H，m)；1.60(2H，m)；1.44～1.47(9H，s)；1.15～1.30(8H，m)。
制備實施例1.3-3-(2-丙炔基)氧基嗎啡喃鹽酸鹽5的制備 向化合物4(22mg，0.052mmol)在干燥的DCM(1ml)中的溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷溶液(160μl)，并將混合物在室溫下攪拌6h。經(jīng)TLC而原料消失后，蒸發(fā)溶劑。得到18mg(96％)白色固體1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.04～6.89(3H，m)；4.75(2H，s)；4.33(0.5H，br)；4.18(0.5H，m)；3.90(0.5H，d)；3.73(0.5H，d)；3.15～3.07(1H，m)；2.59(1H，s)；2.30(1H，br)；1.83(2H，m)；1.60(2H，m)；1.15～1.30(8H，m).
制備實施例1.3-3-(2-丙炔基)氧基-N-(1-環(huán)丙基)甲基嗎啡喃6的制備
向化合物5(6mg，0.017mmol)在干燥的DMF(0.5ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和環(huán)丙基甲基溴(4.0μl，0.04mmol)，并將混合物在60℃下回流。6h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用DCM(3ml×2)萃取有機物質(zhì)。混合的有機層經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到4.5mg(79％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.00～6.76(3H，m)；4.70(2H，s)；3.18(2H，br)；2.75(2H，m)；2.68(1H，m)；2.48(1H，d)；2.35(2H，m)；1.56(2H，m)；1.53(1H，br)；1.44(2H，m)；1.25～1.40(6H，m)；0.95(1H，m)；0.58(2H，s)；0.25(2H，m)。
制備實施例1.4-3-(2-炔丙基)氧基-N-烯丙基嗎啡喃7的制備 向化合物5(6mg，0.017mmol)在干燥的DMF(0.5ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和烯丙基溴(3.1μl，0.036mmol)，并將混合物在室溫下回流。2h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用DCM(2ml×2)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.1mg(91％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73～7.09(3H，m)；5.90(1H，m)；5.14～5.20(2H，m)；4.64(2H，m)；3.17(2H，m)；2.94(2H，m)；2.85(1H，m)；2.55(1H，d)；2.53(2H，m)；2.00(2H，t)；1.63(2H，br)；1.2～1.48(6H，m)。
制備實施例1.5-3-(2-丙炔基)氧基-N-芐基嗎啡喃8的制備
向化合物5(6mg，0.016mmol)在干燥的DMF(0.50ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和芐基溴(5.8μl，0.048mmol)，并將混合物在60℃下回流。3h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.0mg(84％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73～7.49(8H，m)；5.30(2H，s)；3.68(2H，br)；3.05(2H，m)；2.83(1H，br)；2.55(1H，br)；2.35(1H，m)；2.23(1H，m)；1.80(1H，m)；1.13～1.60(10H，m)。
制備實施例1.6-3-甲基磺酰氧基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃9的制備 向化合物2(26mg，0.076mmol)在干燥的DCM(3.0ml)中的溶液中，依次加入三乙胺(32μl，0.23mmol)和甲基磺酰氯(7.6μl，0.098mmol)。并將混合物在60℃下回流。30min后，混合物經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到30mg(94％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.04～6.89(3H，m)；4.33(0.5H，br)；4.18(0.5H，m)；3.90(0.5H，d)；3.73(0.5H，d)；3.20(3H，s)；3.15～3.07(1H，m)；2.60(1H，m)；2.55(1H，m)；2.30(1H，m)；1.73(2H，m)；1.60(2H，br)；1.44～1.47(9H，s)；1.15～1.30(8H，m).
制備實施例1.7-3-甲基磺酰氧基嗎啡喃鹽酸鹽10的制備 向化合物9(27mg，0.019mmol)在干燥的DCM(1.0ml)中的溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷溶液(200μl)，并在室溫下攪拌該混合物12h。經(jīng)TLC而原料消失后，蒸發(fā)溶劑，得到25mg(96％)白色固體。
制備實施例1.8-3-甲基磺酰氧基-N-(甲基磺?；?嗎啡喃11的制備 向化合物10(7mg，0.020mmol)在干燥的DCM(1.0ml)中的溶液中，加入三乙胺(32μl，0.23mmol)和甲基磺酰氯(7.6μl，0.098mmol)。將混合物在60℃下回流。2h后，將其經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到7.5mg(94％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.2～6.90(3H，m)；4.03(1H，br)；3.68(1H，m)；3.30(2H，m)；3.23(3H，s)；2.82(3H，m)；2.75(3H，s)；2.60(1H，m)；2.35(1H，m)；1.68～1.80(4H，m)；1.25～1.60(6H，m)；1.15～1.20(2H，m)。
制備實施例1.9-3-甲基磺酰氧基-N-烯丙基嗎啡喃12的制備
向化合物10(7mg，0.020mmol)在干燥的DMF(0.5ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和烯丙基溴(3.0μl，0.036mmol)，并將該混合物在室溫下回流。6h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用DCM(2ml×4)萃取該混合物。混合的有機層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.0mg(70％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.85～7.19(3H，m)；5.90(1H，br)；5.14～5.20(2H，m)；3.14(2H，m)；3.07(3H，s)；2.80(2H，m)；2.40(2H，m)；2.35(1H，d)；1.60～1.90(4H，m)；1.20～1.48(8H，m).
制備實施例1.10-3-甲基磺酰氧基-N-烯丙基嗎啡喃13的制備 向化合物10(7mg，0.020mmol)在干燥的DMF(0.5ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和環(huán)丙甲基溴(4.0μl，0.04mmol)，并將該混合物在60℃下回流。6h后，向該混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用DCM(3ml×2)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.5mg(78％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.85～7.19(3H，m)；3.07(3H，s)；2.80(2H，m)；2.40～2.60(2H，m)；2.20(2H，m)；2.10(2H，s)；1.700(2H，br)；1.20～1.48(8H，m)；0.80(2H，m)；0.40(2H，m).
制備實施例1.11-3-甲基磺酰氧基-N-芐基嗎啡喃14的制備 向化合物5(7mg，0.020mmol)在干燥的DMF(0.50ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和芐基溴(5.8μl，0.048mmol)，并將該混合物在60℃下回流。12h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.9mg(74％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.73～7.49(8H，m)；3.68(2H，m)；3.05(3H，s)；2.88(2H，m)；2.65(1H，m)；2.30(1H，m)；2.13(1H，m)；2.00(2H，m)；1.80(1H，m)；1.73(2H，m)；1.40～1.70(6H，m)；1.15～1.33(2H，m).
制備實施例1.12-3-苯甲氧基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃15的制備 向3-羥基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃(20mg，0.058mmol)在干燥的DMF(0.3ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(17mg，0.12mmol)和芐基溴(10μl，0.087mmol)，并將該混合物在60℃下回流。5h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮，粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析得到22mg(88％)白色固體
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.46-7.34(5H，m)；7.00(1H，m)；6.91(1H，m)；6.80(1H，m)；5.04(2H，m)；4.37(0.55H，br)；4.18(0.45H，br)；3.73(1H，m)；3.06(1H，m)；2.65(2H，m)；2.32(1H，m)；1.63-1.08(19H，m).
制備實施例1.13-3-苯甲氧基嗎啡喃鹽酸鹽16的制備 向化合物15(22mg，0.051mmol)在干燥的THF(70μl)中的溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷溶液(110μl)，并將混合物在室溫下攪拌2h。經(jīng)TLC而原料消失后，蒸發(fā)溶劑。對粗產(chǎn)物進行簡單研磨，得到18mg(97％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.43-7.28(5H，m)；7.12(1H，br)；6.88(2H，br)；5.04(2H，m)；3.29(2H，br)；2.90(1H，br)；2.33(2H，br)；1.67-1.10(11H，m).
制備實施例1.14-3-苯甲氧基-N-(1-環(huán)丙基)甲基嗎啡喃17的制備 向化合物16(6mg，0.016mmol)在干燥的DMF(0.16ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和環(huán)丙基甲基溴(2.3μl，0.024mmol)，并將該混合物在50℃下回流。3h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到4.5mg(72％)白色固體
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.43-7.26(5H，m)；6.99(1H，m)；6.86(1H，m)；6.75(1H，m)；5.01(2H，m)；3.07(1H，br)；2.90(1H，m)；2.67-2.45(3H，m)；2.32-2.28(2H，m)；1.98(1H，m)；1.81-1.25(10H，m)；0.86(1H，br)；0.49(2H，br)；0.09(2H，br).
制備實施例1.15-3-苯甲氧基-N-烯丙基嗎啡喃18的制備 向化合物16(6mg，0.016mmol)在干燥的DMF(0.16ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和烯丙基溴(2.1μl，0.024mmol)，并將該混合物在50℃下回流。3h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.1mg(85％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.46-7.30(5H，m)；7.05(1H，m)；6.89(1H，m)；6.80(1H，m)；5.88(1H，br)；5.24-5.15(2H，m)；5.03(2H，m)；3.19(2H，br)；2.94(2H，br)；2.59(2H，m)；2.30(1H，m)；2.04(2H，br)；1.83-1.13(9H，m).
制備實施例1.16-3-苯甲氧基-N-芐基嗎啡喃19的制備 向化合物16(6mg，0.016mmol)在干燥的DMF(0.16ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和芐基溴(2.9μl，0.024mmol)，并將該混合物在50℃下回流。3h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物。混合的有機層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到6.2mg(91％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.43-7.23(10H，m)；6.87(1H，m)；6.86(1H，m)；6.77(1H，m)；5.01(2H，m)；3.73-3.58(2H，m)；2.99(1H，m)；2.83(1H，br)；2.62-2.56(1H，m)；2.43(1H，m)；2.28(1H，m)；2.12(1H，m)；1.85-1.14(10H，m).
制備實施例1.17-3-苯甲氧基-N-(甲基磺?；?嗎啡喃20的制備 向化合物16(6mg，0.016mmol)在干燥的CH2Cl2(0.16ml)中的溶液中，依次加入三乙胺(6.7μl，0.048mmol)和甲基磺酰氯(1.9μl，0.024mmol)，并將該混合物在室溫下攪拌2h。向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物。混合的有機層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.7mg(87％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.44-7.25(5H，m)；7.04(1H，m)；6.89(1H，m)；6.83(1H，m)；5.05(2H，m)；4.09(1H，m)；3.70(1H，m)；3.38-2.78(6H，m)；2.28(1H，m)；1.82-1.12(10H，m).
制備實施例1.18-3-苯甲氧基-N-(對甲苯磺?；?嗎啡喃21的制備 向化合物16(6mg，0.016mmol)在干燥的CH2Cl2(0.16ml)中的溶液中，依次加入三乙胺(6.7μl，0.048mmol)和對甲苯磺酰氯(4.6mg，0.024mmol)，并將該混合物在室溫下攪拌2h。向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到7.2mg(92％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.71-7.68(2H，m)；7.43-7.26(7H，m)；6.84(2H，m)；6.75(1H，m)；5.00(2H，m)；4.12(1H，m)；3.59(1H，m)；2.89(1H，m)；2.67(1H，m)；2.46(4H，m)；2.26(1H，m)；1.74-1.09(10H，m).
制備實施例1.19-3-(4-溴芐氧基)-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃22的制備 向3-羥基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃(20mg，0.058mmol)在干燥的DMF(0.3ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(17mg，0.12mmol)和對溴芐基溴(22mg，0.087mmol)，將該混合物在60℃下回流。5h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物。混合的有機層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到26mg(86％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.55-7.50(2H，m)；7.36-7.25(2H，m)；7.00(1H，m)；6.87(1H，m)；6.77(1H，m)；5.00(2H，m)；4.37(0.59H，br)；4.18(0.41H，br)；3.75-3.72(1H，m)；3.06(1H，m)；2.67-2.61(2H，m)；2.30(1H，m)；1.65-1.07(19H，m).
制備實施例1.20-3-(4-溴芐氧基)嗎啡喃鹽酸鹽23的制備
向化合物22(26mg，0.050mmol)在干燥的DHF(90μl)中的溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷溶液(130μl)，并將該混合物在室溫下攪拌2h。經(jīng)TLC而原料消失后，減壓除去溶劑，對粗產(chǎn)物進行簡單研磨得到18mg(96％)白色固體1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.57-7.51(2H，m)；7.41-7.35(2H，m)；7.17(1H，m)；6.92(2H，m)；5.07(2H，m)；3.26-3.10(2H，m)；2.95-2.81(1H，m)；2.78(1H，m)；2.36(1H，m)；1.73-1.19(11H，m).
制備實施例1.21-3-(4-溴芐氧基)-N-(1-環(huán)丙基)甲基嗎啡喃24的制備 向化合物23(6mg，0.016mmol)在干燥的DMF(0.16ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和環(huán)丙基甲基溴(2.3μl，0.024mmol)，并將混合物在50℃下回流。3h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到5.7mg(74％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.51-7.33(2H，m)；7.30-7.26(2H，m)；7.01(1H，m)；6.84(1H，m)；6.73(1H，m)；4.98(2H，m)；3.21(1H，br；2.95-2.85(1H，m)；2.73-2.51(3H，m)；2.32(2H，m)；1.98-1.23(11H，m)；0.75(1H，br)；0.52(2H，br)；0.12(2H，br).
制備實施例1.22-3-(對溴芐氧基)-N-烯丙基嗎啡喃25的制備 向化合物23(6mg，0.016mmol)在干燥的DMF(0.16ml)中的溶液中，依次加入碳酸鉀(6.6mg，0.048mmol)和烯丙基溴(2.1μl，0.024mmol)，并將混合物在50℃下回流。3h后，向混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物。混合的有機層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到6.3mg(87％)白色固體1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.54-7.36(2H，m)；7.31-7.25(2H，m)；7.00(1H，m)；6.82(1H，m)；6.75(1H，m)；5.79(1H，br)；5.28-5.13(2H，m)；5.01(2H，m)；3.21(2H，br)；2.90(2H，br)；2.62(2H，m)；2.27(1H，m)；2.06(2H，br)；1.85-1.21(9H，m).
制備實施例1.23-3-羥基-N-(芐氧基羰基)嗎啡喃26的制備 向3-羥基嗎啡喃(20mg，0.061mmol)和三乙胺(26μl，0.183mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的溶液中，于0℃加入氯甲酸苯甲酯(10.5μl，0.073mmol)。將該混合物攪拌2h，并向該混合物中加入NaCl飽和水溶液(2ml)，并用EtOAc(3ml×3)萃取該混合物?；旌系挠袡C層經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到12mg(51％)標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.3～7.5(5H，m)6.9(1H，t)；6.8(1H，d)；6.6(1H，t)；5.1(2H，s)；4.3(1H，dd)；3.9(1H，m)；3.1(1H，m)；2.7(2H，m)；2.3(1H，d)；1.0～1.8(10H，m).
制備實施例1.24-3-芐氧基羰氧基-N-(芐氧基羰基)嗎啡喃27的制備 向3-羥基嗎啡喃(5mg，0.015mmol)和三乙胺(13μl，0.91mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，于0℃加入氯甲酸苯甲酯(5.2μl，0.036mmol)。將該反應混合物在室溫下攪拌2h。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，進行柱層析，得到6.3mg(80％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.3～7.6(10H，m)；7.0(2H，m)；6.9(1H，m)；5.3(2H，s)；5.1(2H，s)；4.3(1H，dd)；3.9(1H，m)；3.1(1H，m)；2.7(2H，d)；2.3(1H，m)；1.0～1.8(10H，m).
制備實施例1.25-3-苯胺基羰氧基-N-苯脲基嗎啡喃28的制備 向3-羥基嗎啡喃(5mg，0.015mmol)和三乙胺(8.3μl，0.060mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，于0℃加入苯基異氰酸酯(5μl，0.046mmol)，并將混合物攪拌1h。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，進行柱層析，得到6.5mg(88％)標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.4(2H，d)；7.2(6H，m)；7.0(6H，m)；6.3(1H，s)；4.4(1H，s)；3.5(1H，d.d.)；3.1(1H，d.d.)；2.8(2H，m)；2.3(1H，m)；1.0～1.9(10H，m).
制備實施例1.26-3-苯胺基羰氧基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃29的制備 向3-羥基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃(9mg，0.026mmol)和三乙胺(10μl，0.04mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，加入苯基異氰酸酯(4μl，0.045mmol)，并將混合物攪拌1h。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，進行柱層析，得到11mg(90％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.4(2H，d)；7.3(2H，t)；7.1(3H，m)；6.9(2H，m)；4.3(1H，m)；3.8(1H，m)；3.1(1H，d.d.)；2.4～2.8(2H，m)；2.3(1H，m)；1.3(9H，s)；1.0～1.7(10H，m).
制備實施例1.27-3-苯胺基羰氧基嗎啡喃鹽酸鹽30的制備 向3-O-苯氨基甲?；?N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃D-4(10mg，0.051mmol)在干燥的二氯甲烷(0.5ml)中的溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷溶液(120μl)，并將混合物在室溫下攪拌2h。經(jīng)TLC而原料消失后，將溶劑濃縮。對粗產(chǎn)物進行簡單研磨，得到9mg(96％)白色固體1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.5(2H，d)；7.3(3H，m)；7.1(1H，d)；7.0(2H，m)；3.9(1H，m)；3.0～3.4(3H，m)；2.8(1H，m)；2.5(1H，m)；1.0～1.9(10H，m).
制備實施例1.28-N-Boc-3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃31的制備
向N-Boc-3-羥基嗎啡喃2(20mg，0.058mmol)和三乙胺(9μl，0.064mmol)在干燥的CH2Cl2(1ml)中的溶液中，于0℃緩慢加入三甲基乙酰氯(8μl，0.064mmol)，并將該混合物攪拌1h。減壓除去溶劑，將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(5∶1正己烷/EtOAc)而純化，得到無色油狀物(23mg，收率92％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.9～1.7(m，29H)；2.34(d，J＝9.9Hz，1H)；2.52～2.73(m，2H)；3.09～3.17(m，1H)；3.73～3.84(m，1H)；6.83～6.87(m，1H)；6.95(s，1H)；7.09～7.12(m，1H).
制備實施例1.29-N-(1-環(huán)丙基)甲基-3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃33的制備 向N-Boc-3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃(5mg，0.012mmol)在干燥的CH2Cl2(0.2ml)中的溶液中，加入4M的HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液(0.5ml)，于0℃攪拌2h。減壓蒸發(fā)溶劑。將3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃的粗鹽酸鹽32溶解于CH3CN(0.5ml)中，并于0℃向其中緩慢加入(溴甲基)環(huán)丙烷(2μl，0.020mmol)和TEA(9μl，0.064mmol)。攪拌10h后，減壓濃縮反應混合物。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(95∶5 CH2Cl2/MeOH)而純化，得到無色油狀物(3mg，收率65％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.43～1.58(m，24H)；2.35～2.52(m，2H)；2.69～2.73(m，1H)；2.90～2.96(m，2H)；3.16～3.35(m，2H)；3.91(s，1H)；6.92～6.96(m，1H)；6.99(s，1H)；7.17(d，J＝8.2Hz，1H).
制備實施例1.30-N-芐基-3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃34的制備 向化合物31(5mg，0.012mmol)在干燥的CH2Cl2(0.2ml)中的溶液中，加入4M的HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液(0.5ml)，并將混合物于0℃攪拌2h。減壓蒸發(fā)溶劑。將粗胺鹽32溶解于CH2Cl2(0.5ml)中，并向其中于0℃緩慢加入芐基溴(2μl，0.020mmol)和TEA(9μl，0.064mmol)。攪拌4h后，反應混合物減壓濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(3∶1正己烷/EtOAc)而純化，得到無色油狀物(4mg，收率80％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.91～1.74(m，18H)；1.89(m，J＝12.6Hz，1H)；2.07～2.21(m，1H)，2.29～2.48(m，2H)；2.63～2.69(m，1H)；2.87(s，1H)；3.09(d，J＝18.3Hz，1H)；3.68(dd，J＝13.4Hz，2H)；6.82～6.93(m，2H)；7.15(d，J＝8.3Hz，1H)；7.25～7.38(m，5H).
制備實施例1.31-N-(2-丙炔基)-3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃35的制備
向化合物31(5mg，0.012mmol)在干燥的CH2Cl2(1ml)中的溶液中，加入4M的HCl的二氧雜環(huán)己烷(0.5ml)，并于0℃將混合物攪拌2h。減壓蒸發(fā)溶劑。將粗胺鹽32溶解于CH2Cl2(0.5ml)中，并于0℃向該混合物中緩慢加入80wt％的炔丙基溴的甲苯(2μl，0.020mmol)溶液和TEA(9μl，0.064mmol)。攪拌4h后，減壓濃縮反應混合物。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(1∶1正己烷/EtOAc)而純化，得到無色油狀物(3mg，收率68％)1H NMR(300MHz，CDCl3)1.15～1.87(m，20H)；2.14～2.31(m，2H)；2.67～2.74(m，2H)；3.02(d，J＝18.6Hz，1H)；3.12～3.14(m，1H)；3.36～3.39(m，2H)；6.81～6.93(m，2H)；7.16(d，J＝8.2Hz，1H).
制備實施例1.32-N-(甲基磺酰基)-3-三甲基乙酰氧基嗎啡喃36的制備 向化合物31(5mg，0.012mmol)在干燥的CH2Cl2(0.2ml)中的溶液中，加入4M的HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液(0.5ml)，并于0℃攪拌2h。減壓蒸發(fā)溶劑。將粗胺鹽32溶解于CH2Cl2(0.5ml)中，并于0℃緩慢加入甲基磺酰氯(2μl，0.030mmol)和TEA(9μl，0.064mmol)。攪拌1h后，減壓濃縮反應混合物。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(3∶1正己烷/EtOAc)而純化，得到無色油狀物(3mg，收率82％)1H NMR(300MHz，CDCl3)1.08～1.87(m，20H)；2.36(d，J＝12.4Hz，1H)；2.77～2.92(m，5H)；3.51～3.54(m，1H)；4.10～4.15(m，1H)；6.86～6.96(m，2H)；7.13(d，J＝8.3Hz，1H).
制備實施例1.33-3-(三氟甲基磺酰氧基)嗎啡喃38的制備
在0℃向化合物2(200mg，0.58mmol)和TEA(0.32ml，2.32mmol)在干燥的CH2Cl2(5ml)中的溶液中緩慢加入PhNTf2(414mg，1.16mmol)。使反應混合物溫熱至室溫，并攪拌6h。將該溶液用CH2Cl2稀釋，用NaHCO3飽和水溶液洗滌，然后用硫酸鈉干燥。過濾并使濾液減壓濃縮得到粗產(chǎn)物37。向粗產(chǎn)物37在干燥的CH2Cl2(1ml)中的溶液中加入4M的HCl的二氧雜環(huán)己烷溶液(5ml)，將該混合物在室溫下攪拌5h。真空除去溶劑。將粗胺鹽經(jīng)硅膠柱層析(90∶5∶5的CH2Cl2/MeOH/TEA)純化，得到淡黃色油狀物(184mg，收率85％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.96～2.04(m，12H)；2.27～3.18(m，4H)；3.45(s，1H)；7.07～7.15(m，2H)；7.22(s，1H).
制備實施例1.34-N-芐基-3-(三氟甲基磺酰氧基)嗎啡喃39的制備 在0℃向化合物38(50mg，0.13mmol)和TEA(74μl，0.53mmol)在干燥的CH2Cl2(2ml)的溶液中緩慢加入芐基溴(32μl，0.27mmol)并攪拌5h。減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(90∶5的CH2Cl2/MeOH)純化，得到無色油狀物(51mg，收率84％)1H NMR(300MHz，CDCl3)1.05～1.72(m，9H)；1.74～1.85(m，1H)；1.90～1.94(m，1H)；1.96～2.05(m，1H)；2.31(d，J＝13.0Hz，1H)；2.48～2.52(m，1H)；2.88～2.91(m，1H)；3.12(d，J＝18.6Hz，1H)；3.67(dd，J＝13.4Hz，2H)；7.03～7.38(m，8H).
制備實施例1.35-N-(1-環(huán)丙基)甲基-3-(三氟甲基磺酰氧基)嗎啡喃40的制備 在0℃向化合物38(50mg，0.13mmol)和TEA(74μl，0.53mmol)在干燥的CH2Cl2(2ml)中的溶液中緩慢加入(溴甲基)環(huán)丙烷(25μl，0.26mmol)并將該混合物攪拌5h。減壓除去溶劑。將該粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(95∶5的CH2Cl2/MeOH)純化，得到白色固體(43mg，收率77％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.19～2.10(m，17H)；2.31(d，J＝13.8Hz，1H)；2.47～2.59(m，2H)；2.78～2.88(m，2H)；3.30(s，1H)；7.02～7.06(m，1H)；7.13～7.20(m，2H).
制備實施例1.36-化合物41的制備 在圓底燒瓶中裝入Pb(OAc)2(1mg，0.0045mmol)、(S)-(-)-BINAP(3mg，0.0045mmol)和CS2CO3(22mg，0.069mmol)，并用氬氣沖洗。向該混合物中加入在DMF(1ml)和二苯甲酮亞胺(13mg，0.069mmol)中的N-(1-環(huán)丙基)甲基-3-(三氟甲基磺酰氧基)嗎啡喃(40)(20mg，0.046mmol)，將該混合物在80℃加熱12h，然后在室溫下用2N HCl溶液(3ml)處理2h。減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(95∶5∶5的CH2Cl2/MeOH/TEA)純化，得到白色固體(10mg，收率73％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.15～3.24(m，25H)；6.62～6.65(m，1H)；6.75(d，J＝2.2Hz，1H)；6.94(d，J＝8.2Hz，1H)。
制備實施例1.37-化合物42的制備 在0℃向化合物41(5mg，0.017mmol)和TEA(7μl，0.051mmol)在干燥的CH2Cl2(1ml)中的溶液中，緩慢加入4-硝基苯磺酰氯(7mg，0.034mmol)，并將該混合物攪拌1h。減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(95∶5的CH2Cl2/MeOH)純化，得到無色油狀物(6mg，收率83％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.19～0.63(m，8H)；0.96～2.11(m，13H)；2.55～3.53(m，6H)；6.83～6.87(m，2H)；7.10(d，J＝8.3Hz，1H)；8.10(d，J＝8.7Hz，2H)；8.38(d，J＝8.7Hz，2H).
制備實施例1.38-化合物43的制備 在圓底燒瓶中裝入Pd(OAc)2(1mg，0.0045mmol)、(S)-(-)-BINAP(3mg，0.0045mmol)和CS2CO3(22mg，0.069mmol)，并用氬氣沖洗。加入DMF(1ml)中的三氟甲磺酸鹽(triflate)39(20mg，0.046mmol)和二苯甲酮亞胺(13mg，0.069mmol)。將該混合物在80℃下加熱12h，然后在室溫下用2N HCl水溶液(3ml)處理2h。減壓除去溶劑。向粗產(chǎn)物和TEA(17μl，0.127mmol)在干燥的CH2Cl2(1ml)中的溶液中，于0℃緩慢加入4-硝基苯磺酰氯(8mg，0.041mmol)，并攪拌1h。減壓濃縮溶劑。將粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析(2∶1的正己烷/EtOAc)純化，得到無色油狀物(6mg，收率83％)1H NMR(300MHz，CDCl3)0.89～2.06(m，12H)；2.46～2.701(m，2H)；2.87(s，1H)；3.06(d，J＝18.6Hz，1H)；3.54～4.10(m，2H)；6.76(s，1H)；6.83～6.86(m，1H)；7.12(d，J＝8.4Hz，1H)；8.04(d，J＝8.8Hz，2H).
制備實施例1.39-3-乙烯基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃44的制備 向3-O-(三氟甲基磺酰基)-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃37(18mg，0.039mmol)在干燥的1，4-二氧雜環(huán)己烷(0.8m1)中的溶液中，加入三丁基(乙烯基)錫(17μl，0.059mmol)、LiCl(17.3μl，0.117mmol)，Pd(PPh3)4(17.3μl，0.174mmol)以及少許2，6-二叔丁基-4-甲酚晶體。將所得懸浮液加熱回流。經(jīng)TLC而原料消失后，蒸發(fā)溶劑，剩余物經(jīng)硅膠柱層析，得到8mg(59％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.25～7.32(2H，m)7.05(1H，d)；6.62(1H，d.d.)；5.78(1H，d)；5.20(1H，d)；4.30(1H，m)；3.55～4.80(1H，m)；3.10(1H，m)；2.30～2.65(2H，m)；2，05(1H，m)；1.23(9H，s)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.40-3-乙基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃45的制備 向3-乙烯基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃44(10mg，0.028mmol)在干燥的甲醇(1ml)中的攪拌溶液中，加入Pd/C(4mg)，燒瓶內(nèi)通以氣球中的氫氣。經(jīng)TLC而原料消失后，蒸發(fā)溶劑，剩余物經(jīng)柱層析，得到7mg(70％)的產(chǎn)物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.06～7.36(3H，m)；4.37(0.5H，s)；4.19(0.5H，s)；3.88(1H，dd)；3.11(1H，m)；2.63(2H，m)；2.59(2H，m)；2.44(1H，m)；1.60～1.80(4H，m)；1.40～1.60(9H，d)；0.90～1.40(9H，m).
制備實施例1.41-3-乙基嗎啡喃鹽酸鹽46的制備 向3-乙基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃45(6mg，0.017mmol)在干燥的DCM(1ml)中的溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷(300μl)，并將混合物在室溫下攪拌4h。經(jīng)TLC而原料消失后，蒸發(fā)溶劑。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.13～7.46(3H，m)；3.27(2H，m)；3.19(2H，s)；2.88(1H，m)；2.81(1H，m)；2.58(2H，m)；1.10～1.80(13H，m).
制備實施例1.42-3-乙基-N-烯丙基嗎啡喃47的制備 向3-乙基嗎啡喃鹽酸鹽46(3mg，0.01mmol)在干燥的DMF(0.6ml)中的攪拌溶液中，依次加入碳酸鉀(5mg，0.036mmol)、烯丙基溴(5.0μl，0.060mmol)，并將混合物回流。2h后，混合物經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾，并濃縮。產(chǎn)物經(jīng)柱層析，得到～2mg白色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.89～7.16(3H，m)；5.80(1H，d)；5.16～5.30(2H，m)；4.00～4.30(1H，dd)；3.68(2H，t)；3.66(1H，m)；3.15(1H，br)；2.68(2H，m)；2.50(2H，m)；2.38(1H，m)；1.10～1.70(13H，m).
制備實施例1.43-3-(1’，2’-二羥乙基)-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃48的制備 向3-乙烯基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃44(10.5mg，0.03mmol)在丙酮∶水＝2∶1溶液(0.3ml)溶液中的攪拌溶液中，加入N-甲基嗎啉-N-氧化物(10μl，50wt％，水中)和四氧化鋨(一滴)，將混合物在室溫下攪拌2h。經(jīng)TLC而原料消失后，將乙酸乙酯(2ml)和Na2SO3水溶液(2ml)倒入到混合物中，分離有機層，經(jīng)MgSO4干燥，并濃縮。進行柱層析，得到10mg(87％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29～7.36(1H，m)；7.17～7.10(2H，m)；4.79(1H，d)；4.37(0.55H，br)；4.19(0.45H，br)；3.77～3.66(3H，m)；3.11(1H，m)；2.72～2.41(4H，m)；2.03(1H，m)；1.71～1.04(19H，m).
制備實施例1.44-3-苯氨基甲酰氧基-N-(3-氯丙基)嗎啡喃49的制備 向3-苯氨基甲酰氧基嗎啡喃鹽酸鹽30(2.8mg，0.007mmol)在干燥的DMF(0.15ml)中的攪拌溶液中，依次加入碳酸鉀(5.4mg，0.021mmol)、1-溴-3-氯丙烷(1.9μl，0.042mmol)，并在50℃下攪拌混合物。經(jīng)TLC而原料消失后，濃縮溶劑，并進行柱層析，得到2.1mg(70％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35(4H，m)；7.10(2H，m)；6.85(1H，d)；6.75(1H，d.d.)；6.28(1H，s)；4.38(1H，m)；4.10(2H，t)；3.80(2H，t)；3.65(1H，m)；3.14(1H，d.d.)；2.83(2H，m)；2.37(1H，m)；2.25(2H，m)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.45-3-苯氨基甲酰氧基-N-(甲基磺?；?嗎啡喃50的制備 向3-O-苯氨基甲酰氧基嗎啡喃鹽酸鹽30(2.8mg，0.007mmol)和三乙胺(5.4μl，0.042mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，加入甲基磺酰氯(1.5μl，0.021mmol)，并在室溫下攪拌混合物。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，并進行柱層析，得到2.1mg(70％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.48(2H，d)；7.31(2H，t)；7.15(3H，m)；7.04(1H，m)；6.90(1H，s)；4.11(1H，m)；3.55(1H，m)；3.18(1H，m)；2.93(3H，s)；2.84(2H，m)；2.30(1H，d)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.46-3-苯氨基甲酰氧基-N-乙酰基嗎啡喃51的制備 向3-O-苯氨基甲酰氧基嗎啡喃鹽酸鹽30(2.8mg，0.007mmol)和三乙胺(5.4μl，0.042mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，加入乙酰氯(1.4μl，0.021mmol)，并在室溫下攪拌混合物。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，并進行柱層析，得到2mg(70％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.45(2H，d)；7.30(2H，t)；7.15(3H，m)；7.03(2H，m)；4.95(1H，m)；3.55(1H，m)；3.15(1H，m)；2.90(1H，m)；2.75(1H，m)；2.30(1H，m)；2.05(3H，s)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.47-3-(3-氯丙氧基)-N-(芐氧基羰基)嗎啡喃52的制備 向3-羥基-N-(芐氧基羰基)嗎啡喃26(3.6mg，0.009mmol)在干燥的DMF(0.16ml)中的攪拌溶液中，依次加入碳酸鉀(4mg，0.028mmol)、1-溴-3-氯丙烷(2.8μl，0.028mmol)，并將混合物在50℃下攪拌。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，并進行柱層析，得到3mg(70％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.30(5H，m)；7.00(1H，t)；6.83(1H，d)；6.70(1H，d.d.)；5.10(2H，m)；4.30(1H，m)；4.05(2H，t)；3.90(1H，m)；3.79(2H，t)；3.05(1H，m)；2.75(2H，m)；2.30(1H，m)；2.15(2H，m)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.48-3-(3-氯丙基氧基)-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃53的制備 向3-羥基-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃(20mg，0.058mmol)在干燥的DMF(0.3ml)中的攪拌溶液中，依次加入碳酸鉀(24mg，0.174mmol)、1-溴-3-氯丙烷(17.3μl，0.174mmol)，并將混合物在50℃下攪拌。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，并進行柱層析，得到18mg(74％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.05(1H，m)；6.83(1H，d)；6.75(1H，d.d.)；4.28(1H，d)；4.05(2H，t)；3.90(1H，m)；3.83(3H，t)；3.15(1H，m)；2.60(2H，m)；2.30(1H，m)；2.15(1H，m)；1.30(9H，s)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.49-3-(3-氯丙基氧基)嗎啡喃鹽酸鹽54的制備 向3-(3-氯丙氧基)-N-(叔丁氧基羰基)嗎啡喃53(17mg，0.04mmol)在干燥的二氯甲烷(1.0ml)中的攪拌溶液中，加入4N的HCl的1，4-二氧雜環(huán)己烷(200μl)溶液，并將混合物在室溫下攪拌2h。經(jīng)TLC而原料消失后，濃縮溶劑。對粗產(chǎn)物進行簡單研磨，得到14mg(97％)的白色固體1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.15(1H，d)；6.80～7.10(2H，m)；4.05(2H，t)；3.78(2H，t)；3.65(2H，m)；3.30(1H，m)；3.10(2H，m)；2.78(1H，m)；2.45(1H，m)；2.18(2H，m)；1.00～2.00(10H，m).
制備實施例1.50-3-(3-氯丙氧基)-N-(甲磺酰基)嗎啡喃55的制備 向3-(3-氯丙氧基)嗎啡喃鹽酸鹽54(3mg，0.008mmol)和三乙胺(7μl，0.050mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，加入甲磺酰氯(2μl，0.025mmol)，并在室溫下攪拌混合物。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，并進行柱層析，得到3mg(88％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.01(1H，m)；6.85(1H，d)；6.70(1H，d.d)；4.05(3H，m)；3.78(2H，t)；3.56(1H，d.d.)；3.15(1H，d.d.)；2.90(3H，s)；2.83(2H，m)；2.32(1H，m)；2.20(2H，m)；1.00～1.90(10H，m).
制備實施例1.51-3-(3-氯丙氧基)-N-乙?；鶈岱揉?6的制備 向3-(3-氯丙氧基)嗎啡喃鹽酸鹽54(3mg，0.008mmol)和三乙胺(7μl，0.050mmol)在干燥的二氯甲烷(0.3ml)中的攪拌溶液中，加入乙酰氯(1.8μl，0.025mmol)，并在室溫下攪拌混合物。經(jīng)TLC而原料消失后，除去溶劑，并進行柱層析，得到2.5mg(82％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.96(1H，t)；6.83(1H，d)；6.75(1H，d.d.)；4.92(1H，m)；4.15(2H，t)；3.81(2H，t)；3.75(1H，m)；3.12(1H，m)；2.95(1H，m)；2.62(1H，m)；2.30(1H，m)；2.18(2H，m)；2.05(3H，s)；1.00～1.80(10H，m).
制備實施例1.52-3-(3-氯丙氧基)-N-芐基嗎啡喃57的制備 向3-(3-氯丙氧基)嗎啡喃鹽酸鹽54(3mg，0.008mmol)在干燥的DMF(0.15ml)中的攪拌溶液中，依次加入碳酸鉀(7mg，0.024mmol)、芐基溴(2μl，0.032mmol)，并在50℃下攪拌混合物。經(jīng)TLC而原料消失后，濃縮溶劑，并進行柱層析，得到3mg(87％)的標題化合物1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.15～7.35(5H，m)；7.05(1H，d)；6.80(1H，s)；6.73(1H，d)；4.10(2H，t)；3.55～3.85(4H，m)；3.05(1H，m)；2.80(1H，m)；2.56(1H，m)；2.40(1H，m)；2.00～2.30(4H，m)；1.00～1.90(10H，m).
試驗實施例1-嗎啡喃的神經(jīng)保護作用試驗實施例1.1-動物和藥物所有動物均嚴格按照NIH Guide for the Humane Care and Use ofLaboratory Animals(NIH Guide for the Care and Use of LaboratoryAnimals，NIH Publication No.85-23，1985)進行處理。使重約30±3g的C57BL/6雄性小鼠(Bio Genomics，Inc.，Charles River Technology，Gapyung-Gun，Gyeonggi-Do，Korea)保持12:12小時的日:夜循環(huán)，并且隨意進食。使它們適應上述條件2周，然后進行試驗。本研究所用的多巴胺能神經(jīng)毒素是1-甲基-4-苯基-1，2，5，6-四氫吡啶(MPTP，Sigma，St.Louis，MO)、脂多糖(LPS，Sigma Chem，St.Louis，MO)和去氧麻黃堿(MA；NIDA/NIH，USA)。
雄性小鼠每天接受MPTP注射(20mg游離堿/kg，s.c.)，連續(xù)7天。在最后三天(從第4天到第7天)，每一嗎啡喃在每次注射MPTP之前30min施用。最后一次MPTP治療后24h處死動物。
用水合氯醛(200mg/kg，i.p.)麻醉雄性小鼠，并將其置于小型動物立體定位器中。利用立體定位坐標進行LPS向紋狀體區(qū)域內(nèi)的注射，從前囟(Franklin和Paxinos，1997)開始測量后面+0.7mm，側(cè)面±1.0，腹面-3.4。在2min內(nèi)向紋狀體雙側(cè)注射LPS(2μg，溶于2μl PBS中)，注射針在注射后保持在原位置2min。對照動物接受PBS的紋狀體注射。使用LPS進行紋狀體內(nèi)注射之前，每一嗎啡喃兩次給藥(4小時40分鐘和40分鐘)(10，28)。
由于在藥物治療期間，通過降低周圍環(huán)境的溫度可以阻斷MA引起的高熱和神經(jīng)毒性(22，29)，因此將小鼠安置在溫度可控(22.0±0.5℃)的群居室內(nèi)，并在濾過的正壓通風條件下將濕度控制在50±5％，12小時/12小時的日夜循環(huán)，隨意進食和飲水。小鼠以2h的時間間隔接受四次MA鹽酸鹽注射(7.5mg/kg，i.p.，以游離堿計)(22，29)。每次治療后60min記錄結(jié)腸溫度。使用溫度計(Thermoscan，San Diego，CA)測量結(jié)腸溫度。在最后一次測量結(jié)腸溫度后，將動物放回原來的籠中。在最后一次注射MA后第3天處死小鼠(29)。每一嗎啡喃在第一次MA治療之前4小時40分鐘和40分鐘時兩次給藥。
試驗實施例1.2-嗎啡喃所有溶液都是利用蒸餾去離子水或者鹽水新鮮配制的。DM氫溴酸購于Sigma Chemical Co.(St.Louis，MO)。合成了右嗎喃(DX)酒石酸鹽、3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)氫溴酸鹽、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)氫溴酸鹽、和3-羥基嗎啡喃(HM)氫溴酸鹽(24)、和二甲嗎喃(DF)磷酸鹽(38，41，46)(圖1)。每一化合物以0.1ml/10g的體積進行i.p.注射。
試驗實施例1.3-運動行為和運動模式C57BL/6小鼠每天一次接受每一化合物(20或者40mg/kg，i.p./天)，持續(xù)7天。使用每一藥物進行最后一次治療之后10min，測定運動行為30min。測定運動行為之后(即最后一次藥物注射之后40min)，用自動視頻跟蹤系統(tǒng)(Noldus Information Technology，Wagenin，TheNetherlands)分析3分鐘監(jiān)控期間內(nèi)的“絕對轉(zhuǎn)動角度”，以檢測運動模式。在測試箱邊界(邊緣)處的運動促進分別定義為邊緣行為(轉(zhuǎn)圈行為)(13，25，27)。8個試驗箱(40×40×30cm高)同時用IBM電腦操作。動物在每個試驗箱中運動期間進行單獨研究，開始試驗前將動物放在試驗箱中適應10min。分析動物在水平運動行為中的移動距離，以cm計(13，25，27)。收集并分析0900-1700h之間的數(shù)據(jù)。
試驗實施例1.4-條件位置偏好(心理依賴)作為對照，C57BL/6小鼠接受鹽水的i.p.注射，之后立即進入白或黑隔間中。施用溶解于鹽水(0.1ml/10g)中的每一化合物(20或40mg/kg，i.p.)之后立即將小鼠置于白隔間中(37)。
第1天，將小鼠預先暴露在測試裝置中5min，提起隔間的閘門，讓小鼠在兩個隔間之間自由活動。第2天，在15min內(nèi)記錄每只小鼠在每個隔間中所用的時間。第3，5，7，9，11和13天，給小鼠注射每一藥物后限制于非偏好側(cè)的白隔間中，達40min。第4，6，8，10和12天，給小鼠注射鹽水后限制于偏好側(cè)的黑隔間中，達40min。第14天，提起閘門。將小鼠初始置于通道內(nèi)，并在15min內(nèi)記錄小鼠在2個隔間中所用的時間。根據(jù)試驗和試驗前階段在白隔間中所用時間的差別計算得分(13，27，37)。分析0900-1700h之間的數(shù)據(jù)。
試驗實施例1.5-多巴胺及其代謝物檢測迅速取出大腦并在冰上切成1mm的冠狀截面。用pasteur細管將紋狀體沖出(3，21，22)，并在-70℃下保存。通過HPLC電化學檢測測量DA及其代謝物3，4-二羥苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)(3，21，22)。簡言之，在0.2M的含有3，4-二羥基芐胺作為內(nèi)標(10mg濕重組織/ml)的高氯酸中均化紋狀體。將均化物離心，將20μl試樣量的上清液注入到裝配有ODS-C18柱的HPLC中。流動相由26ml乙腈、21ml四氫呋喃和960ml 0.15M的含有50mg/l EDTA和200mg/l的辛基硫酸鈉的一氯乙酸(pH3.0)組成。通過比較組織試樣與標準物的峰高比檢測DA、DOPAC和HVA的量，并以納克/100mg濕重組織表示。
試驗實施例1.6-免疫細胞化學將含有海馬狀突起的冠狀截面處理用于酪氨酸羥化酶(TH)免疫細胞化學。使用第一抗體過夜培養(yǎng)之前，將截面在0.2％Triton X-100中預先清洗15min，再用4％的標準山羊血清預先清洗20min。使用第一抗血清培養(yǎng)24h后，再將截面用第二生物素基化的抗血清(1∶800稀釋)培養(yǎng)1h。每個培養(yǎng)步驟之間總是將截面用PBS(pH 7.4)洗3次。以3，3’-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸為色原，利用抗生物素蛋白-生物素復合物法(ABC試劑盒，Vector Laboratories，Inc.)使免疫反應細胞顯象?？筎H的抗體(24-27，49，61)稀釋2,000倍。在圖像分析系統(tǒng)(Optimasversion 6.2；包括Neurolucida程序-對比校正系統(tǒng)用于以背景信號歸一化)下通過Abercrombie法(1)修正神經(jīng)元總數(shù)(3，22)。
試驗實施例1.7-統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用Fischer LSD試驗、ANOVA連同Duncan新多重試驗以及連同重復試驗進行分析。統(tǒng)計顯著性定義為p＜0.05。
結(jié)果試驗實施例1.8-嗎啡喃或苯環(huán)己哌啶(PCP)多次給藥后運動行為的變化圖2-4中總結(jié)了行為數(shù)據(jù)。注射鹽水的動物顯示基本的運動行為。DX或者DM(20或者40mg/kg)的多次給藥顯著增加運動行為。與使用DM治療的那些相比，使用DX治療的動物的這種效果看起來更加明顯。DX所導致的行為特征與PCP相當。盡管使用AM治療看起來稍微增加了運動行為，但是使用HM、CM或DF治療之后的運動行為與使用鹽水治療的相當(圖2A)。DX以劑量相關的方式(DX 20或者40mg/kg，相對于鹽水組，p＜0.01)引起邊緣行為(轉(zhuǎn)圈行為)的顯著增加。DX引起的行為效果與PCP(PCP 2.5，相對于5.0mg/kg，p＜0.05)相似。相比之下，DM也引起邊緣行為的顯著增加(DM 20或者40mg/kg對比鹽水組，P＜0.05)。然而，與鹽水組比較，HM、AM、CM和DF均沒有顯著影響邊緣行為(圖2B)。與任何其它組相比，PCP產(chǎn)生強得多的刻板動作(即轉(zhuǎn)圈行為＝邊緣行為)(圖2A和B)。
鹽水治療的動物不顯示任何明顯的運動模式。使用PCP，DM和DX治療后，運動模式明顯改變，PCP，DM和DX產(chǎn)生邊緣行為(轉(zhuǎn)圈行為)。相比之下，HM，AM，CM和DF不以任何運動模式產(chǎn)生邊緣行為(圖3)。
試驗實施例1.9-嗎啡喃或苯環(huán)己哌啶(PCP)多次給藥后的條件位置偏好(CPP)特征的變化鹽水治療的動物不顯示任何CPP效應。DX治療的動物以劑量相關的方式(DX 20或者40mg/kg對比鹽水組，p＜0.01；DX 20對比40mg/kg，p＜0.01)產(chǎn)生CPP。與DX相同，使用DM治療也產(chǎn)生CPP(DM 20mg/kg對比鹽水組，p＜0.05；DM40mg/kg對比鹽水組，p＜0.01)。PCP的CPP最為顯著(PCP 5mg/kg對比鹽水組，p＜0.001；PCP 2.5對比5.0mg/kg，p＜0.05)。相比之下，HM，CM，AM和DF治療的動物與鹽水治療的動物相比幾乎不顯示CPP效應(圖4)。
試驗實施例1.10-嗎啡喃對MPTP引起的運動減少(運動行為減少)和多巴胺損失的影響使用MPTP多次治療(每天20mg/kg，7天)顯著減少運動行為(鹽水+鹽水組對比鹽水+MPTP組，P＜0.01)。使用CM(鹽水+MPTP組對比CM 24mg/kg+MPTP組，P＜0.05)、DM(鹽水+MPTP組對比DM 12或者24mg/kg+MPTP組，P＜0.01)或者HM(鹽水+MPTP組對比HM 12或者24mg/kg+MPTP組，P＜0.01)進行預治療顯著預防MPTP引起的運動行為減少(圖5A)。它們的行為效果與它們的運動模式一致(圖5B)。然而，AM或者DF均沒有顯著影響MPTP引起的運動活動減退。
表1顯示使用MPTP治療的小鼠的紋狀體內(nèi)DA、DOPAC和HVA的水平。沒有接受MPTP的動物沒有觀察到顯著差異。MPTP治療顯著降低DA(P＜0.01)、DOPAC(P＜0.01)和HVA(P＜0.01)；使用DM(24mg/kg；DA；P＜0.05，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)、HM(24mg/kg)(DA；P＜0.01，DOPAC；P＜0.01，HVA；P＜0.01)或者CM(DA；P＜0.05，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)進行預治療顯著防止這些降低。然而，AM和DF沒有改變MPTP引起的DA、DOPAC和HVA的降低。
表-1連同或者不連同嗎啡喃使用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)治療的小鼠紋狀體內(nèi)多巴胺(DA)、3，4-二羥苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量

連續(xù)7天每天接受MPTP注射(20mg/kg，s.c.)的雄性小鼠。在最后三天，每一嗎啡喃在每次MPTP注射之前30min施用。最后一次MPTP注射后24h處死動物。每個數(shù)值是8只動物的平均值±S.E.M。aP＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；bP＜0.05，相對于鹽水+MPTP組；cP＜0.01，相對于鹽水+MPTP組(ANOVA與DMR測試)。
圖6顯示與嗎啡喃組合的MPTP治療所影響的TH樣免疫反應(TH-IR)。每只接受鹽水的動物顯示保持良好的TH-IR。使用MPTP治療顯著降低(P＜0.01)TH陽性細胞的數(shù)量。使用HM(24mg/kg)(P＜0.05)、DM(24mg/kg)(P＜0.05)或者CM(24mg/kg)(P＜0.05)進行預治療顯著削弱MPTP引起的TH陽性細胞的減少。結(jié)果顯示使用MPTP治療后紋狀體內(nèi)的DA水平與SN中的TH-IR一致。
試驗實施例1.11-嗎啡喃對脂多糖(LPS)引起的運動減少(運動行為減少)和多巴胺損失的影響雙側(cè)紋狀體內(nèi)注射LPS(20μg×2)顯著減少運動行為(鹽水+鹽水組對比鹽水+LPS組，P＜0.01)。使用CM(鹽水+LPS組對比CM 12或24mg/kg+LPS組，P＜0.05)、DM(鹽水+LPS組對比DM 12或者24mg/kg+LPS組，P＜0.05)或者HM(鹽水+LPS組對比HM 12或者24mg/kg+LPS組，P＜0.05或P＜0.01)進行預治療顯著預防LPS引起的運動行為減少(圖7A)。這些行為效果與它們的運動模式一致(圖7B)。然而，AM或者DF在削弱LPS引起的運動活動減退方面均沒有效果。
表2顯示使用LPS治療的小鼠的紋狀體內(nèi)DA、DOPAC和HVA的水平。沒有LPS的動物之間沒有觀察到顯著差異。使用LPS的紋狀體內(nèi)注射顯著減少DA(P＜0.01)、DOPAC(P＜0.01)和HVA(P＜0.01)；使用DM(24mg/kg；DA；P＜0.01，DOPAC；P＜0.02，HVA；P＜0.02)、HM(24mg/kg)(DA；P＜0.01，DOPAC；P＜0.01，HVA；P＜0.02)或者CM(24mg/kg)(DA；P＜0.05，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)進行預治療顯著防止這些減少。然而，AM和DF沒有改變LPS引起的DA、DOPAC和HVA水平的降低。
表-2連同或者不連同嗎啡喃使用脂多糖(LPS)處理的小鼠紋狀體內(nèi)多巴胺(DA)、3，4-二羥苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量

利用立體定位坐標進行LPS向紋狀體區(qū)域內(nèi)的注射，從前囟開始測量后面+0.7mm，側(cè)面±1.0mm，腹面-3.4mm。向紋狀體雙側(cè)注射LPS(2μg，溶于2μl PBS中)。每一嗎啡喃在使用LPS進行紋狀體內(nèi)注射之前4小時40分鐘和40分鐘時兩次給藥。LPS治療后3周時處死小鼠。每個數(shù)值是8只動物的平均值±S.E.M。aP＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；bP＜0.02，相對于鹽水+LPS組；cP＜0.05，相對于鹽水+LPS組，dP＜0.01，相對于鹽水+LPS組(ANOVA與DMR測試)。
圖8顯示連同或不連同嗎啡喃進行LPS治療后的TH樣免疫反應(TH-IR)。每只只接受鹽水或嗎啡喃的動物顯示保持良好的TH-IR。使用LPS治療顯著降低(P＜0.01)TH陽性細胞的數(shù)量。使用HM(24mg/kg)(P＜0.05)、DM(24mg/kg)(P＜0.05)或者CM(24mg/kg)(P＜0.05)進行預治療顯著削弱由于施用LPS引起的TH陽性細胞的減少。結(jié)果顯示使用LPS治療后紋狀體內(nèi)的DA水平與黑質(zhì)TH-IR一致。
試驗實施例1.12-嗎啡喃對去氧麻黃堿(MA)引起的高熱、運動減少和多巴胺(DA)損失的影響已經(jīng)充分認識到，MA治療之后的多巴胺能毒性與MA引起的高熱有關。本研究所用的嗎啡喃都能減弱MA引起的高熱(如直腸溫度所測定，鹽水組相對于MA組，P＜0.01)。5種嗎啡喃中(單獨使用MA相對于24mg/kg的DM、AM、CM或者DF+MA組，P＜0.05)，HM(單獨使用MA相對于24mg/kg的HM+MA組，P＜0.01)在減弱MA引起的高熱方面是最有效的(圖10)。
在最后一次使用MA治療(7.5mg/kg×4，以兩小時的時間間隔)之后第三天觀察到顯著減少的運動行為(鹽水+鹽水組相對于鹽水+MA組，P＜0.01)。使用嗎啡喃進行預治療顯著防止MA引起的運動行為的減少(圖11A)。它們的行為效果與它們的運動模式一致(圖11B)。HM似乎在防止MA治療后運動行為減少方面是最有效的(單獨使用MA對比12和24mg/kg DM(P＜0.05和P＜0.01)，HM(P＜0.05和P＜0.01)，AM(P＜0.05)，CM(P＜0.05)和DF(P＜0.05))。DM的藥理作用和HM相當。
表3顯示使用MA治療的小鼠的紋狀體內(nèi)DA、DOPAC和HVA的水平。沒有施用MA水平的動物之間沒有觀察到顯著差異。MA治療顯著降低DA(P＜0.01)、DOPAC(P＜0.01)和HVA(P＜0.01)；使用DM(24mg/kg；DA；P＜0.02，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)、HM(24mg/kg)(DA；P＜0.01，DOPAC；P＜0.01，HVA；P＜0.02)、AM(24mg/kg；DA；P＜0.05，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)、CM(24mg/kg；DA；P＜0.02，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)或者DF(24mg/kg；DA；P＜0.05，DOPAC；P＜0.05，HVA；P＜0.05)進行預治療顯著防止這些降低。
表-3連同或者不連同嗎啡喃使用去氧麻黃堿(MA)治療的紋狀體內(nèi)多巴胺(DA)、3，4-二羥苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量

雄性小鼠以2h的時間間隔接受四次MA·HCl注射(7.5mg/kg，i.p.，以游離堿計)。每一嗎啡喃在第一次MA治療之前4小時40分鐘和40分鐘時兩次給藥。在最后一次注射MA后第3天處死小鼠。每個數(shù)值是8只動物的平均值±S.E.M。aP＜0.01，相對于鹽水+鹽水組；bP＜0.05，相對于鹽水+MA組；cP＜0.02，相對于鹽水+MA組；dP＜0.01，相對于鹽水+MA組(ANOVA與DMR測試)。
圖12顯示連同或不連同嗎啡喃進行MA治療后的黑質(zhì)TH樣免疫反應(TH-IR)。每只只接受鹽水或每一嗎啡喃的動物顯示保持良好的TH-IR。使用MA治療顯著降低(P＜0.01)TH陽性細胞的數(shù)量。使用HM(24mg/kg)(P＜0.05)、DM(24mg/kg)(P＜0.05)、AM(24mg/kg)(P＜0.05)、CM(24mg/kg)(P＜0.05)或者DF(24mg/kg)(P＜0.05)進行預治療顯著削弱由MA引起的TH陽性細胞的減少。一致的是，結(jié)果顯示在存在或不存在嗎啡喃的情況下，使用MA治療后紋狀體DA水平與黑質(zhì)TH-IR一致。
試驗實施例2-嗎啡喃對大麻素CB1受體的影響試驗實施例2.1-HM對于大麻素CB1位點具有高親和性，并具有CB1受體拮抗特性由于近期研究已經(jīng)表明大麻素CB1受體的阻斷對帕金森模型顯示有益效果，因此檢測3-羥基嗎啡喃(HM)對于大麻素CB1位點是否表現(xiàn)出高親和性，所述3-羥基嗎啡喃(HM)是所檢測的右旋嗎啡喃中對于多巴胺能損傷最有效的嗎啡喃。HM對于大麻素CB1位點具有高親和性(Ki＝11.5nM)(圖13)，并且HM具有CB1受體拮抗特性。選擇性CB1激動劑CP55,940[1α，2β-(R)-5α-(-)5-(1，1-二甲基)-2-[5-羥基-2-(3-羥丙基)環(huán)己基-苯酚]100nM以約120％顯著刺激GTPγS結(jié)合，而選擇性CB1拮抗劑AM-251 100nM以約20％抑制其結(jié)合。CP55940引起的GTPγS結(jié)合刺激在存在AM 251[N-(哌啶-1-基)-5-(4-碘苯基)-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-酰胺]的情況下顯著減弱。HM 100nM以約60％抑制該結(jié)合。CP 55940引起的增加的結(jié)合通過使用HM治療而減少。AM 251減少約三分之一HM引起的結(jié)合。因此，HM是CB1受體的部分激動劑，也是CB1受體拮抗劑(圖14)。
試驗實施例2.2-HM削弱MPTP引起的小鼠黑質(zhì)內(nèi)降低的酪氨酸羥化酶樣免疫反應性(TH-IR)。
最后一次使用MPTP(20mg/kg，i.p./天×7)治療后1天，觀察到TH-IR的顯著降低。這種TH-IR降低通過使用AM 251治療而削弱。使用AM-251(0.3mg/kg，i.p.)和HM(20mg/kg，i.p.)的組合治療比單獨使用AM-251治療對于MPTP引起的TH-IR損失更有效。這種組合的效果與單獨使用HM的效果在對抗MPTP方面是等效的。然而，ACEA(花生四烯基(arachidonyl)-2-氯乙酰胺)(2mg/kg，i.p.)與HM的神經(jīng)保護作用相抵觸，表明HM，至少部分地，作為CB1受體拮抗劑起作用(圖15)。因此，HM的神經(jīng)保護作用受到CB1激動劑ACEA的抵觸。
試驗實施例2.3-HM防止LPS引起的死亡作用，并削弱LPS引起的小鼠黑質(zhì)內(nèi)降低的酪氨酸羥化酶樣免疫反應性(TH-IR)。
沒有LPS時無動物死亡。雙側(cè)紋狀體內(nèi)注射LPS(一側(cè)，2μg×2)后2周內(nèi)10只小鼠中有6只死亡。AM-251和ACEA都沒有顯著改變LPS引起的死亡率。在經(jīng)過HM預治療的使用LPS治療的小鼠中，沒有動物死亡。ACEA逆轉(zhuǎn)了HM引起的保護(抗死亡)作用。AM-251還表現(xiàn)出阻斷LPS引起的死亡率(圖16)。
ACEA沒有改變LPS引起的TH-IR降低，但是AM-251削弱這種降低。AM-251和HM的組合治療在保護LPS引起的神經(jīng)元損失方面更有效。這種對于LPS危害的神經(jīng)保護作用與單獨使用HM相當。ACEA與HM對LPS引起的TH-IR損失的保護作用相抵觸(圖17)。
試驗實施例2.4-HM防止去氧麻黃堿(MA)引起的小鼠黑質(zhì)內(nèi)酪氨酸羥化酶樣免疫反應性(TH-IR)的降低。
和上述的2種神經(jīng)毒素相似，MA引起的多巴胺能損傷是顯著的。ACEA沒有改變MA引起的TH-IR降低，但是AM-251削弱這種降低，AM-251和HM的組合治療在防止MA引起的TH-IR降低方面更有效。這種關于MA毒性的神經(jīng)保護作用和單獨使用HM相當。ACEA逆轉(zhuǎn)了HM對MA引起的TH-IR降低的保護作用(圖18)。
試驗實施例2.5-HM比左旋多巴、卡比多巴或卡比多巴+左旋多巴更有效防止MPTP引起的小鼠運動行為和黑質(zhì)TH-IR的減少。
治療帕金森患者的處方藥是左旋多巴或卡比多巴+左旋多巴。因此，比較HM與左旋多巴、卡比多巴或卡比多巴+左旋多巴的神經(jīng)保護作用。如圖19所示，小鼠接受MPTP(20mg/kg，s.c.)，一天一次，連續(xù)7天。最后一次MPTP治療后，檢測運動行為60min。最后一次MPTP給藥后24h處死小鼠。首次MPTP激發(fā)之前，施用加或者不加卡比多巴(20mg/kg，p.o.)的HM(24mg/kg，i.p.)、左旋多巴(200mg/kg，p.o.)兩周。
MPTP引起運動行為的顯著減少(P＜0.01，相對于鹽水治療組)。然而，在存在左旋多巴、卡比多巴和卡比多巴+左旋多巴的情況下，運動行為表現(xiàn)為增加。HM顯著增加(P＜0.05對比鹽水+MPTP)MPTP引起的活動減少。一致的是，MPTP引起的黑質(zhì)TH-IR損失(P＜0.01，相對于鹽水治療組)在存在卡比多巴+左旋多巴(P＜0.05對比鹽水+MPTP)或者HM(P＜0.05對比鹽水+MPTP)的情況下顯著削弱。這些結(jié)果表明HM比左旋多巴或卡比多巴+左旋多巴更有效(圖21)。
試驗實施例2.6-HM比左旋多巴、卡比多巴或卡比多巴+左旋多巴更有效防止LPS引起的小鼠死亡作用、運動行為、黑質(zhì)TH-IR的減少以及小膠質(zhì)細胞的增殖。
比較了HM與左旋多巴、卡比多巴或卡比多巴+左旋多巴對LPS引起的多巴胺能損傷的神經(jīng)保護作用。試驗表見圖22。LPS的紋狀體內(nèi)注射(2μg×4/頭)產(chǎn)生高的死亡率(LPS施用后2周內(nèi)十二只動物中有十只動物死亡)。盡管單獨使用卡比多巴、單獨使用左旋多巴或使用卡比多巴+左旋多巴進行預治療表現(xiàn)為削弱LPS引起的死亡率，但是HM的作用與單獨使用卡比多巴、單獨使用左旋多巴或使用卡比多巴+左旋多巴相比是最顯著的(鹽水+LPS相對于HM+LPS，P＜0.01，卡方試驗)(圖23)。
LPS治療后3周，檢測運動行為60min。LPS引起的運動行為的顯著減少(P＜0.01，相對于鹽水治療組)被左旋多巴(P＜0.05)、卡比多巴+左旋多巴(P＜0.05)或者HM(P＜0.01)削弱(圖24和25)。
沒有LPS時，黑質(zhì)中的TH-IR絲毫無變化。LPS引起的TH-IR損失通過卡比多巴(P＜0.05)、左旋多巴(P＜0.05)、卡比多巴+左旋多巴(P＜0.05)和HM(P＜0.01)的治療而顯著削弱。HM在削弱LPS引起的TH-IR降低方面是最有效的(圖26和27)。
在沒有LPS的情況下，觀察F/80樣免疫反應性所標記的小膠質(zhì)細胞非常小的感應。然而，與鹽水處理組對照，LPS引起的小膠質(zhì)細胞增殖顯著增強(P＜0.01)。該F4/80樣免疫反應性通過卡比多巴(P＜0.05)、左旋多巴(P＜0.05)、卡比多巴+左旋多巴(P＜0.05)和HM(P＜0.01)的治療而顯著削弱。HM在削弱LPS引起的F4/80樣免疫反應性增加方面是最有效的(圖28和29)。
試驗實施例2.7-HM比左旋多巴、卡比多巴或卡比多巴+左旋多巴更有效防止去氧麻黃堿(MA)引起的小鼠高熱、運動行為和黑質(zhì)TH-IR的減少。
圖30是MA加或者不加化合物時的試驗范例。使用MA治療(7.5mg/kg，i.p.×4次，2h的時間間隔)產(chǎn)生高熱(P＜0.01)?？ū榷喟?、左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴或者HM的治療顯著減弱MA引起的高熱(圖31)。
注射MA后3天運動行為的顯著減少(P＜0.01)通過左旋多巴、卡比多巴+左旋多巴或者HM的治療而顯著增強。HM的作用比左旋多巴或卡比多巴+左旋多巴更有效(圖32)。
明顯觀察到MA引起的黑質(zhì)TH-IR損失(鹽水處理組相對于鹽水+MA，P＜0.01)。盡管這種減少通過卡比多巴+左旋多巴的治療而顯著減弱，但是HM的作用比卡比多巴+左旋多巴更明顯(圖33)。
試驗實施例3-嗎啡喃對藥物依賴的影響考察了右旋嗎啡喃對藥物依賴的有益影響。還考察了嗎啡喃對可卡因或去氧麻黃堿(MA)引起的行為副作用的影響?？疾炝嗽谑褂每煽ㄒ蚧蛘進A的較長時間治療后，右旋嗎啡喃，尤其是右嗎喃(DM)、3-甲氧嗎啡喃(MM)、3-羥基嗎啡喃(HM)、3-烯丙氧基-17-甲氧基嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基-17-甲氧基嗎啡喃(CM)和二甲嗎喃(DF)，對運動行為、條件位置偏好(CPP)或者Fos相關抗原免疫反應性(FRA-IR)的影響。使用可卡因進行較長時間的治療(每天5或者20mg/kg，i.p.，7天)顯著增強運動行為。使用DM(15或者30mg/kg，i.p.)的組合治療削弱由高劑量可卡因(20mg/kg)引起的運動行為過多。然而，DM(30mg/kg)顯著增強低劑量可卡因(5mg/kg)引起的運動行為。相似地，盡管MM(15或者30mg/kg)削弱了高劑量可卡因變化引起的運動行為，但是MM沒有改變低劑量可卡因(5mg/kg)引起的運動行為，表明這些嗎啡喃將它們的劑量響應曲線偏移到左邊。相比之下，其它嗎啡喃(HM，AM，CM和DF)一致削弱了低劑量可卡因引起的運動行為，但是它們對于高劑量可卡因引起的運動行為的作用不一致。這4種嗎啡喃將它們的劑量響應曲線一致偏移到右邊。它們的行為效果特征與紋狀體FRA-IR類似。由于嗎啡喃(尤其是HM)對于大麻素CB1位點具有相對高的親和性，并且近期的研究表明，CB1受體的阻斷提供防止藥物依賴的新方向，因此考察CB1受體是否包括在如條件位置偏好(CPP)和行為致敏所測得的HM對于可卡因引起的心理依賴的藥理作用中。顯著觀察到可卡因引起的CPP。CB1受體激動劑ACEA(2mg/kg，i.p.)產(chǎn)生CPP。然而，HM(20mg/kg)和CB1受體拮抗劑AM251(0.3mg/kg，i.p.)都沒有表現(xiàn)出CPP。ACEA沒有改變可卡因引起的CPP，但是AM251或HM削弱了可卡因引起的CPP。與接受單劑量可卡因(10mg/kg，i.p.)的小鼠相比，在單劑量的可卡因(10mg/kg，i.p.)之前一個月時使用可卡因預治療(10mg/kg，i.p./天，共7天)的小鼠顯著增加了運動行為，表明可卡因引起的行為致敏在該試驗范例中明顯產(chǎn)生。盡管HM顯著削弱可卡因致敏，但是ACEA和AM 251都沒有顯著改變可卡因致敏。
使用MA進行較長時間的治療(每天1mg/kg，i.p.，7天)增加了運動行為。使用DM(20mg/kg，i.p.)的組合治療沒有改變MA引起的運動行為。然而，DF(20mg/kg，i.p.)、AM(20mg/kg，i.p.)或者CM(20mg/kg，i.p.)明顯減弱(P＜0.05)MA引起的運動行為。這些行為效果與小鼠紋狀體FRA-IR的特征一致。在MA(1mg/kg，i.p.×1)單次激發(fā)之前7天預治療的MA(每天1mg/kg，i.p.，7天)產(chǎn)生運動行為的顯著增加，表明發(fā)生了MA引起的行為致敏。盡管DM不影響MA致敏，但是20mg/kg的每一嗎啡喃劑量(DF、AM、CM或HM)顯著減弱(P＜0.05)MA致敏。ACEA(2mg/kg，i.p.)和AM 251(0.3mg/kg，i.p.)都不影響MA致敏。然而，ACEA與HM對MA致敏的藥理學作用顯著沖突，而AM 251沒有顯著影響HM的作用。
MA引起的CPP是顯著的。單獨使用ACEA產(chǎn)生它自己的CPP(P＜0.05，相對于鹽水治療組)。相比之下，ACEA不影響MA所產(chǎn)生的CPP。然而，AM251或HM顯著阻斷MA所產(chǎn)生的CPP。ACEA逆轉(zhuǎn)了HM對于MA所產(chǎn)生的CPP的藥理作用，但是AM 251沒有顯著影響HM的作用。
總之，嗎啡喃類似物，尤其是DF、AM、CM和HM具有對于可卡因或MA的抗精神藥物潛力。具體而言，HM介導的藥理學作用是，至少部分是由于CB1受體的阻斷。
試驗實施例3.1-動物和治療所有動物均按照NIH關于實驗室動物人道主義照料的方針來進行管理。使重約25g的C57BL/6雄性小鼠(Bio Genomics，Inc.，CharlesRiver Technology，Gapyung-Gun，Gyeonggi-Do，Korea)保持12:12小時的日:夜循環(huán)，并且隨意進食。使它們適應這些條件2周，然后進行試驗。試驗前所有的嚙齒類動物都沒有藥物和疾病發(fā)作。將可卡因(NIDA/NIH，Rockville，MD)或者去氧麻黃堿(MA；NIDA/NIH，Rockville，MD)溶解于無菌的鹽水中。
試驗實施例3.2-條件位置偏好(心理依賴)對照組小鼠接受鹽水的i.p.注射，之后立即進入白或黑隔間中。施用溶解于鹽水中的可卡因或者MA之后立即將小鼠置于白隔間中。為了檢測單獨使用可卡因或者單獨使用MA或者和例舉的嗎啡喃(DM、HM、AM、CM或者DF)合用的效果，在可卡因或鹽水注射之前2h施用每一嗎啡喃。
第1天，將小鼠預先暴露在測試裝置中5min。提起隔間的閘門，讓小鼠在兩個隔間之間自由活動。第2天，在15min內(nèi)記錄每只小鼠在每個隔間中所用的時間。第3，5，7，9，11和13天，給小鼠注射可卡因后限制于非偏好側(cè)的白隔間中，達20min。第4，6，8，10和12天，給小鼠注射鹽水后限制于偏好側(cè)的黑隔間中，達20min。第14天，提起閘門。將小鼠初始置于通道內(nèi)，并在15min內(nèi)記錄小鼠在2個隔間中所用的時間。根據(jù)試驗和試驗前階段在白隔間中所用時間的差別計算得分。
試驗實施例3.3-運動行為用自動視頻跟蹤系統(tǒng)(Noldus Information Technology，Wagenin，The Netherlands)測定運動行為。8個試驗箱(40×40×30cm高)同時用IBM電腦操作。動物在每個試驗箱中運動期間進行單獨研究，開始試驗前將動物放在試驗箱中適應5min。每個過程打印出來的數(shù)據(jù)顯示試驗箱非固定運動的模式。分析動物在水平運動行為中的移動距離，以cm計。收集并分析0900-1700h之間的數(shù)據(jù)。
試驗實施例3.4-Fos相關的抗原免疫反應(FRA-IR)最后一次注射可卡因/MA后18h，以最大水平引起紋狀體內(nèi)的FRA-IR。因此，最后一次可卡因/MA治療后18h，取出大腦并用于免疫細胞化學分析。將含有紋狀體的冠狀截面處理用于FRA-IR免疫細胞化學。使用第一抗體過夜培養(yǎng)之前，將截面在0.2％Triton X-100中預先清洗15min，再用4％的標準山羊血清預先清洗20min。使用第一抗血清培養(yǎng)24h后，再將截面用第二生物素基化的抗血清(1∶800稀釋)培養(yǎng)1h。每個培養(yǎng)步驟之間總是將截面用PBS(pH7.4)洗3次。以3，3’-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸為色原，利用抗生物素蛋白-生物素復合物法(ABC試劑盒，Vector Laboratories，Inc.)使免疫反應細胞顯象。FRA抗體以作為最佳稀釋度的1∶2,000使用。利用具有偏振片數(shù)字纖維照相機的圖像分析系統(tǒng)(Optimas version 6.2)計算紋狀體內(nèi)的FRA-IR。
試驗實施例3.5-統(tǒng)計分析配對數(shù)據(jù)采用Student的t檢驗進行顯著性分析，采用ANOVA進行重復試驗。接受小于0.05的顯著水平用于比較。
試驗實施例3.6-嗎啡喃(DM，MM，AM，CM，HM和DF)對可卡因引起的小鼠運動過多的影響單獨使用鹽水沒有顯著改變運動行為?？煽ㄒ?5或者10mg/kg)引起運動行為隨時間的增加。運動行為的增加在第7次可卡因激發(fā)之后比第一次激發(fā)之后明顯。盡管使用DM或者MM(15或者30mg/kg)治療(可卡因之前30min)削弱(任一劑量的DM或者MM加20mg/kg的可卡因相對于20mg/kg的可卡因，P＜0.05)高劑量可卡因引起的活動過度，30mg/kg的DM增強低劑量可卡因(5mg/kg，i.p.)所產(chǎn)生的運動行為。類似地，任一劑量的MM都不影響低劑量可卡因介導的運動行為。相比之下，其它嗎啡喃一致有效削弱低劑量可卡因引起的運動行為。組合地，它們將劑量響應曲線偏移到右邊，表明它們具有抗擬精神病藥的作用(圖34和35)。
試驗實施例3.7-嗎啡喃(DM，MM，AM，CM，HM和DF)對可卡因引起的小鼠紋狀體內(nèi)Fos相關抗原免疫反應(FRA-IR)的影響由精神藥物引起的神經(jīng)元適應/刺激中的重要轉(zhuǎn)錄因子之一FRA在沒有可卡因時幾乎不能表達。使用可卡因(5mg/kg)進行較長時間的治療顯著引起紋狀體內(nèi)的FRA-IR。DM和MM都不影響這種可卡因介導的FRA-IR的發(fā)生。相比之下，可卡因引起的FRA-IR通過使用DF、AM、CM或者HM治療而明顯減弱(圖36)。
試驗實施例3.8-大麻素CB1受體激動劑(ACEA)或者CB1受體拮抗劑(AM-251)對HM介導的響應可卡因引起的CPP的藥理學作用的影響鹽水、AM-251(0.3mg/kg)治療的和HM(20mg/kg)治療的動物都沒有顯示任何CPP應答。相比之下，ACEA(2mg/kg)治療的動物顯示CPP效果(P＜0.05，相對于鹽水治療的動物)?？煽ㄒ?10mg/kg)引起顯著的CPP效果(P＜0.01)。ACEA沒有改變可卡因引起的CPP效果。然而，AM251或者HM顯著減少(P＜0.05)可卡因所產(chǎn)生的CPP。AM251不影響HM對于可卡因引起的CPP的作用。相比之下，ACEA表現(xiàn)為與可卡因引起的CPP相抵觸(圖37)。
試驗實施例3.9-大麻素CB1受體激動劑(ACEA)或者CB1受體拮抗劑(AM-251)對HM介導的對于可卡因引起的行為致敏的藥理學作用的影響鹽水、AM 251(0.3mg/kg)、ACEA(2mg/kg)治療的和HM(20mg/kg)治療的動物都沒有顯示特殊的行為效果。接受單次可卡因激發(fā)的動物的可卡因引起的顯著行為致敏運動行為相對于在單次可卡因激發(fā)之前一個月時使用可卡因進行預治療(每天10mg/kg，i.p.，7天)的動物的運動行為，P＜0.01]。ACEA和AM251都不改變可卡因引起的行為致敏。然而，HM顯著降低(P＜0.05)可卡因所產(chǎn)生的行為致敏。ACEA和AM-251都不顯著改變HM對可卡因引起的致敏的作用(圖38)。
試驗實施例3.10-嗎啡喃(DM，DF，AM或者CM)對去氧麻黃堿(MA)引起的小鼠運動過多的影響單獨使用鹽水沒有顯著改變運動行為。MA(1mg/kg)引起運動行為隨時間的增加。使用DM(20mg/kg)治療(每次MA之前30min)不影響MA(每天1mg/kg，i.p.，7天)引起的活動過度。相比之下，DF、AM或者CM一致有效減弱MA引起的運動過多(圖39)。
試驗實施例3.11-嗎啡喃(DM，DF，AM或者CM)對去氧麻黃堿(MA)引起的小鼠紋狀體內(nèi)Fos相關抗原免疫反應(FRA-IR)的影響在不存在MA的情況下，幾乎觀察不到FRA-IR的發(fā)生。使用MA進行較長時間的治療(每天1mg/kg，i.p.，7天)顯著引起紋狀體內(nèi)的FRA-IR。DM不影響這種MA介導的FRA-IR的發(fā)生。相比之下，MA引起的FRA-IR通過使用DF、AM或者CM治療而明顯減弱(圖40)。
試驗實施例3.12-DM，DF，AM或者CM對去氧麻黃堿(MA)引起的行為致敏的影響鹽水治療的動物在視頻跟蹤系統(tǒng)下沒有顯示任何特殊的行為效果。MA引起顯著的行為致敏[接受單次MA激發(fā)的動物的運動行為相對于在單次MA激發(fā)之前一周時使用MA進行預治療(每天1mg/kg，i.p.，7天)的動物的運動行為，P＜0.05]。DM(20mg/kg，i.p.)沒有改變MA引起的行為致敏。然而，使用20mg/kg的DF、AM或者CM，顯著減少了MA引起的行為致敏(P＜0.05)(圖41)。
試驗實施例3.13-大麻素CB1受體激動劑(ACEA)或者CB1受體拮抗劑(AM 251)對HM介導的對于MA引起的CPP的藥理學作用的影響鹽水、AM 251(0.3mg/kg，i.p.)治療的和HM(20mg/kg)治療的動物都沒有顯示任何CPP應答。相比之下，ACEA(2mg/kg，i.p.)治療的動物顯示CPP效果(P＜0.05，相對于鹽水治療的動物)。MA產(chǎn)生顯著的CPP效果(P＜0.01)。ACEA沒有改變MA引起的CPP效果。然而，AM 251(P＜0.05)或者HM(P＜0.01)顯著減少MA產(chǎn)生的CPP。AM 251沒有顯著影響HM對于MA引起的CPP的作用。相比之下，AECA與HM對MA引起的CPP的影響顯著沖突(P＜0.01)(圖42)。
試驗實施例3.14-大麻素CB1受體激動劑(ACEA)或者CB1受體拮抗劑(AM 251)對HM介導的對于去氧麻黃堿(MA)引起的行為致敏的藥理學作用的影響鹽水、AM 251(0.3mg/kg)、ACEA(2mg/kg)治療的和HM(20mg/kg)治療的動物都沒有任何行為效果。MA引起顯著的行為致敏[接受單次MA激發(fā)的動物的運動行為相對于在單次MA激發(fā)之前一周時使用MA進行預治療(每天1mg/kg，i.p.，7天)的動物的運動行為，P＜0.01]。ACEA和AM251都不影響可卡因引起的行為致敏。然而，HM顯著減少(P＜0.05)MA引起的行為致敏。盡管ACEA顯著逆轉(zhuǎn)HM對于MA引起的致敏的影響(P＜0.05)，但是AM 251不影響MA致敏(圖43)。
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此處所引用的所有參考文獻均通過參考整體并入本文。
本領域技術人員將認識到，或者僅僅使用常規(guī)試驗就能夠確定，本文所具體描述的本發(fā)明具體實施方案的許多等價方案。這些等價方案預期包括在權利要求范圍內(nèi)。
權利要求
1.一種包含神經(jīng)保護有效量的3-羥基嗎啡喃或者3-羥基嗎啡喃的3位和17位被取代的嗎啡喃衍生物或者其生理可接受的鹽和藥用載體或賦形劑的組合物。
2.權利要求1的組合物，其為緩釋劑型。
3.根據(jù)權利要求1的組合物，其包含帕金森病癥狀治療有效量的3-羥基嗎啡喃或者嗎啡喃衍生物。
4.根據(jù)權利要求1的組合物，其中嗎啡喃衍生物是3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)或3-甲基-17-甲基-嗎啡喃(DF)。
5.根據(jù)權利要求1的組合物，其包含3-羥基嗎啡喃(HM)。
6.一種用于治療帕金森病的單位劑量制劑，其以設計來為人類口腔攝取的形式包含根據(jù)權利要求1的組合物或者其藥學可接受的鹽，其中嗎啡喃或其鹽的存在劑量使得嗎啡喃在充分減少帕金森病癥狀方面是治療有效的，而不導致不可接受的副作用。
7.權利要求6的單位劑量制劑，其包含易消化的膠囊，所述膠囊內(nèi)裝有嗎啡喃或其藥學可接受的鹽。
8.權利要求7的單位劑量制劑，其中嗎啡喃的劑量為約250毫克/天或者更少。
9.一種治療帕金森病癥狀的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗帕金森病量的根據(jù)權利要求1的組合物。
10.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述組合物包含嗎啡喃衍生物的混合物。
11.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述組合物包含3-羥基嗎啡喃。
12.權利要求9的方法，其中所述組合物是緩釋劑型。
13.權利要求9的方法，其中所述組合物還包含神經(jīng)保護劑。
14.權利要求12的方法，其中所述組合物包含易消化的膠囊，所述膠囊內(nèi)裝有嗎啡喃或其藥學可接受的鹽。
15.權利要求9的方法，其中所述組合物的施用量為約250毫克/天或更少。
16.一種防止對象的黑質(zhì)中多巴胺產(chǎn)生減少的方法，包括向所述對象施用保護有效量的根據(jù)權利要求1的組合物。
17.一種用于治療精神藥物中毒或依賴癥狀的藥物組合物，其包含有效抗中毒量的根據(jù)權利要求1的組合物。
18.根據(jù)權利要求17的藥物組合物，其中嗎啡喃衍生物是3-烯丙氧基-17-甲基嗎啡喃(AM)、3-環(huán)丙基甲氧基-17-甲基嗎啡喃(CM)或3-甲基-17-甲基-嗎啡喃(DF)或其生理可接受的鹽連同藥用載體或賦形劑。
19.一種用于治療精神藥物中毒的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗中毒量的根據(jù)權利要求18的組合物。
20.根據(jù)權利要求19的方法，其中麻醉藥是可卡因、嗎啡或去氧麻黃堿。
21.一種用于治療麻醉藥依賴的方法，包括向需要這種治療的患者或動物施用有效抗依賴量的根據(jù)權利要求17的組合物。
全文摘要
本申請公開了一種含有嗎啡喃化合物的用于治療帕金森病和精神藥物中毒/濫用潛力的藥物組合物。
文檔編號A61P25/36GK1968697SQ200580019633
公開日2007年5月23日 申請日期2005年5月13日 優(yōu)先權日2004年5月14日
發(fā)明者金瀅春 申請人:株式會社綠十字, 金瀅春