專利名稱：用于治療和預(yù)防與免疫系統(tǒng)缺陷有關(guān)的疾病的含鱷梨肽提取物的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含鱷梨肽提取物的藥物，其有利地用于治療和/或預(yù)防與免疫缺陷有關(guān)的疾病，特別是與天然免疫退化有關(guān)的疾病。
背景技術(shù)：
所有動(dòng)物物種日常會(huì)接觸許多微生物，例如細(xì)菌、真菌、寄生物或病毒，這些可能影響動(dòng)物的健康或甚至它們的生命。兩種防御系統(tǒng)對抗這些微生物一種被稱作天然免疫并且是包括人類在內(nèi)的所有動(dòng)物所共有的，另一種免疫系統(tǒng)稱作適應(yīng)性或特異性免疫系統(tǒng)，其是與潛在攻擊者接觸后通過免疫細(xì)胞和介質(zhì)獲得的。
在對所述微生物的識(shí)別機(jī)制中可以發(fā)現(xiàn)天然或適應(yīng)性免疫反應(yīng)之間的區(qū)別。在天然免疫中，受體的特異性自出生起就由遺傳決定，并且是不可改變的。這些受體表達(dá)在諸如一些上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞、樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中。天然免疫受體識(shí)別出的所有結(jié)構(gòu)是由非常多微生物所共有的。與適應(yīng)性免疫反應(yīng)相反，天然免疫反應(yīng)機(jī)制(吞噬作用、抗菌肽，等等)早在感染一開始時(shí)就被激活，它們幾乎能立即控制侵襲宿主的病原體的增殖。適應(yīng)性免疫反應(yīng)隨后發(fā)生。
在植物和動(dòng)物界均發(fā)現(xiàn)了抗菌肽，從昆蟲到人類，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過500種不同的抗菌肽?？咕氖切》肿?10-50個(gè)氨基酸)并能夠通過使微生物細(xì)胞膜可透來破壞多種微生物(革蘭氏陽性或革蘭氏陰性細(xì)菌、真菌、病毒、轉(zhuǎn)化細(xì)胞)。此外，這些抗菌肽中的一些能夠通過化學(xué)趨化(hemo-attractive)性能復(fù)原參與適應(yīng)性免疫的細(xì)胞，例如樹突細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞。已經(jīng)在胎兒皮脂和羊水中，以及在新生兒皮膚中發(fā)現(xiàn)了許多抗菌肽，這表明它們在分娩時(shí)以及在生命開始時(shí)(此時(shí)獲得性免疫仍然不成熟)的抗菌防御中的關(guān)鍵作用。
大多數(shù)生物體在它們的各種上皮中合成了數(shù)種抗菌肽以得到廣譜活性。在哺乳動(dòng)物中，已經(jīng)描述了主要的兩類抗菌肽組織蛋白酶抑制素(cathelicidins)和防御素，它們在與微生物接觸過程中誘生。
人類組織蛋白酶抑制素(LL-37)最初是從骨髓細(xì)胞中分離出的。LL-37顯著表達(dá)在人類皮膚中，在指甲區(qū)域以及在健康和發(fā)炎的滑膜中，對關(guān)節(jié)病患者尤為如此。LL-37具有廣譜活性并似乎與其它抗菌肽(特別是防御素)協(xié)同作用。LL-37也具有化學(xué)趨化性能，這使其能夠復(fù)原適應(yīng)性免疫細(xì)胞。
防御素本身根據(jù)其二級結(jié)構(gòu)分成兩類，或α和β。A-防御素(迄今已知6種)主要位于特化細(xì)胞(例如嗜中性白細(xì)胞)或腸潘氏細(xì)胞的儲(chǔ)存顆粒中，而β-防御素是上皮組織特有的特征。除了它們在天然免疫中的作用外，防御素的促有絲分裂性能也是已知的，這意味著它們可以參與愈合過程。
在人類中，迄今已經(jīng)識(shí)別出4種β-防御素(在我們的基因組中似乎存在超過20種為抗菌肽編碼的基因)。人類β-防御素1(hBD-1)通常以構(gòu)成方式產(chǎn)生，并大量表達(dá)在腎臟中，并相對較低程度地表達(dá)在胰腺、唾液腺、氣道上皮、女性泌尿生殖系統(tǒng)、健康滑膜以及胎盤中。hBD-1也表達(dá)在皮膚中。B-防御素的其它形式，hBD-2、3和4是可誘生的。hBD-3在發(fā)炎的滑膜中誘生，例如在關(guān)節(jié)病中。hBD-2的表達(dá)迄今已經(jīng)經(jīng)證明在皮膚、泌尿生殖道、汗腺和毛囊皮脂腺單位中。
在皮膚中，其它肽或蛋白質(zhì)，例如腎上腺髓質(zhì)素、胱抑素(彈性蛋白酶/SKALP/彈力素(elafin)的特異性抑制劑)似乎具有抗菌活性。更近來，表皮素(dermicidine)(具有廣譜活性)已經(jīng)被表征為對皮膚具有特異性的抗菌肽，其似乎在分泌汗腺中產(chǎn)生，其與汗液的同時(shí)分泌似乎構(gòu)成了對抗局部和全身感染的天然防御系統(tǒng)的重要部分。hBD-2首次是在牛皮癬鱗屑中表征的。hBD-2以及LL-37的表達(dá)在牛皮癬病變中增加，這解釋了具有該病狀的患者具有更高抗感染性的原因。相反，在特應(yīng)性皮炎(慢性損害和芽殖損傷(budding lesions))中，LL-37和hBD-2的表達(dá)由于白細(xì)胞介素(IL-4)和白細(xì)胞介素-13(IL-13)(它們是遺傳性過敏癥的介體)的影響而降低。這種缺失可以解釋特應(yīng)性皮炎患者具有提高的對感染的敏感性的原因。在痤瘡中，作為對P痤瘡增殖的反應(yīng)，β-防御素(hBD-1和2)的表達(dá)增加。此外，據(jù)推測，痤瘡患者的抗菌肽一開始失調(diào)，這造成細(xì)菌增殖。而這些細(xì)菌又反過來刺激了天然免疫防御。
因此炎癥似乎是抗菌肽誘發(fā)中的主要因素。由此還已經(jīng)表明，白細(xì)胞介素-1、TNF-α(腫瘤壞死因子α)和紫外線照射刺激了hBD-2的生成。hBD-2的表達(dá)還與角化細(xì)胞的分化階段有關(guān)。因此，在防御素族中刺激抗菌肽，特別是hBD-2的生成可以提高和/或恢復(fù)天然免疫性，尤其是在眼睛和上皮(表皮、陰道、鼻部和耳粘膜和氣道)中。
口腔始終暴露在多種微生物(細(xì)菌、病毒、真菌)中。已經(jīng)充分證實(shí)的是，在眾多因素中，放線桿菌、伴放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌之類的細(xì)菌是導(dǎo)致牙周病(齒齦炎和牙周炎)加劇的關(guān)鍵因子。齒齦上皮是對抗口腔內(nèi)存在的各種病原體的第一堡壘。因?yàn)檫@些齒齦角化細(xì)胞產(chǎn)生了多種抗菌肽，hBD-1、-2、-3、LL-37。這些肽也在口腔粘膜中產(chǎn)生以及通過唾液腺產(chǎn)生。
更特別地，抗菌肽的刺激可以在新生兒和兒童(其免疫性通常不足)的健康或患病皮膚以及在成年人或老人的皮膚(無論是健康的還是不健康的(免疫抑制的))中提高和/或恢復(fù)天然免疫力。這種刺激由此可以有利地補(bǔ)充由角質(zhì)層(角質(zhì)細(xì)胞+胞間粘合質(zhì))構(gòu)成的皮膚的被動(dòng)防御系統(tǒng)，并為新生兒、兒童、成年人和老人(無論是否健康)中的適應(yīng)性免疫反應(yīng)作好準(zhǔn)備。以相同方式，這種刺激可以加速愈合。
以令人驚奇的方式，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，包含鱷梨肽提取物的組合物可以提高抗菌肽，有利地為hBD-2的產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
由此，本發(fā)明的目標(biāo)是包含鱷梨肽提取物的藥物，其包括占所述肽提取物干物質(zhì)重量2-10wt％的α-胺化氮，和適當(dāng)?shù)馁x形劑。
在本發(fā)明中，術(shù)語“α-胺化氮(alpha-amined nitrogen)”是指游離α-胺化基團(tuán)形式的肽中的氮含量。肽中的α-胺化氮含量的測量使人可以估測蛋白質(zhì)的水解程度以及肽的平均分子量。
鱷梨肽提取物可以直接獲自鱷梨或鱷梨樹的任何部分，例如果實(shí)、表皮、果核、葉子或樹根。人們還可以由鱷梨加工工業(yè)的副產(chǎn)物獲得鱷梨肽提取物，其中尤其可以提到新鮮鱷梨果肉、速凍或脫水果肉、來自提油法(將預(yù)先脫水的果實(shí)進(jìn)行機(jī)械和/或溶劑提取)的鱷梨餅、來自濕法提油工藝(所謂的離心法)的經(jīng)脫油的固體物質(zhì)、來自酶促鱷梨油提取法的經(jīng)脫油的固體物質(zhì)、粗搗碎鱷梨(鱷梨調(diào)味醬)、來自工廠加工這些搗碎產(chǎn)品的固體廢料。提取物有利地獲自新鮮鱷梨樹果實(shí)。果實(shí)可以選自Hass、Fuerte、Ettinger、Bacon、Nabal、Anaheim、Lula、Reed、Zutano、Queen、Criola Selva、Mexicana Canta、RegionDschang、Hall、Booth、Peterson和Collinson Red亞種。更有利地為Hass、Fuerte和Red亞種。優(yōu)選保留Hass、Fuerte、Ettinger和Bacon亞種，最優(yōu)選為Hass和Fuerte亞種。
鱷梨樹果實(shí)主要由水、果肉、油和核構(gòu)成。和所有天然產(chǎn)品的情況一樣，這些各種成分的比例極其不定。然而，人們通常假定下列平均組成(表示為新鮮果實(shí)的百分比)，并顯示在下表1中表1

相對于果肉，鱷梨蛋白質(zhì)占1.5-2.5％(J.P.Gaillard，L’Avocatier，Edition G.P.Maisonneuve et Larose，1987，頁266-67)。以相對于氨基酸總重量的重量百分比表示，氨基酸分布顯示在下表2中表2


主要氨基酸是谷氨酸、天冬氨酸和亮氨酸。
與傳統(tǒng)的產(chǎn)油(oleoproteaceous)植物例如大豆、向日葵或油菜籽相比，鱷梨的蛋白質(zhì)含量明顯更低。而且，果實(shí)具有相對較高的纖維含量，這些蛋白質(zhì)極其難以通過傳統(tǒng)的化學(xué)或生化途徑獲得。更有甚者，這些天然大分子幾乎不水溶，因此人們往往嘗試制造這些蛋白質(zhì)的水解片段(肽)，這些片段是高度水溶的并更容易實(shí)現(xiàn)生物利用性。由此也可以消除它們的致過敏力。因此，本發(fā)明還涉及通過不會(huì)使水解肽變性的溫和合成途徑制備鱷梨肽提取物。
更特別地，所述鱷梨肽提取物可以通過包括下列步驟的方法獲得-通過干燥和油提取，有利地由鱷梨果實(shí)獲得鱷梨餅；然后-在低溫下研磨所述餅(低溫研磨)并完全脫脂化(delipidated)，然后使其沉降、離心并收集；然后-在葡聚糖酶存在下進(jìn)行一次水解，接著進(jìn)行離心并除去可溶組分；-在一種或多種蛋白酶存在下進(jìn)行二次水解，然后進(jìn)行離心并除去殘?jiān)?；然?通過納米過濾濃縮肽相；-在活性炭存在下進(jìn)行脫色，接著經(jīng)例如簡單過濾(10μm)，然后超濾(截流限10kD)；最后-如果需要，進(jìn)行最終消毒微濾(0.2μm)，加入防腐劑并進(jìn)行包裝操作。
按照本發(fā)明的有利變化形式，該方法的第一步驟包括將果實(shí)干燥，然后脫油。由此在將果實(shí)切成小片之后，可以通過技術(shù)專家已知的任何技術(shù)將其干燥，其中可以提到熱風(fēng)干燥、凍干或滲透干燥。無論使用哪種技術(shù)，該干燥步驟中的溫度通常有利地保持低于或等于80℃。在該方法中，出于易于實(shí)施和成本原因，優(yōu)選在通風(fēng)干燥器中以薄層形式并在溫度為70-75℃的熱空氣流下進(jìn)行干燥。這種操作可以持續(xù)5至72小時(shí)。
隨后如下方法提取干燥果實(shí)中的脂質(zhì)在蝸桿壓機(jī)中經(jīng)機(jī)械提取，或在索格利特型提取器或De Smet_型連續(xù)帶式提取器中通過己烷之類的溶劑進(jìn)行化學(xué)提取，優(yōu)選按照如法國申請F(tuán)R 2 843 027中所述的方法，或通過使用超臨界CO2的方法進(jìn)行提取。機(jī)械脂質(zhì)提取這種方法的主要益處是油副產(chǎn)物是可以容易地被直接再循環(huán)的物質(zhì)。因此，優(yōu)選機(jī)械脂質(zhì)提取。
經(jīng)干燥和經(jīng)脫油的果實(shí)，也稱作餅，隨后可以進(jìn)行下列步驟-低溫研磨，-完全脫脂化，特別是用乙醇和/或丙酮之類的無毒食品級溶劑進(jìn)行，-潷析并用水洗滌餅，-離心并收集餅，-在一種或數(shù)種葡聚糖酶存在下的一次水解，-離心并棄置可溶組分；-在一種或數(shù)種蛋白酶存在下的二次水解，-離心并棄置殘?jiān)?通過納米過濾濃縮；-在活性炭存在下的脫色，-簡單過濾(10μm)，然后超濾(截流限10kD)；-添加防腐劑，最終消毒微濾(0.2μm)，并包裝。
最終水提物可以含有1-60wt％干物質(zhì)，或3-20％的干物質(zhì)，優(yōu)選5-6％干物質(zhì)。相對于干物質(zhì)重量，α-胺化氮的質(zhì)量含量可以為2-10％，優(yōu)選5-7％。1.2wt％的干提物水溶液的pH值通常為3-6，更有利地為4-5。通過上述方法獲得的1.2wt％的干提物水溶液的平均分析數(shù)據(jù)顯示在下表3中表3

1N×6.25相當(dāng)于樣品的總氮(N)劑量乘以受試蛋白質(zhì)特有的系數(shù)。當(dāng)受試蛋白質(zhì)的系數(shù)不是精確已知時(shí)，則根據(jù)慣例使用的系數(shù)為6.25。
下表4顯示了通過本發(fā)明的方法獲得的肽提取物的平均氨基酸組成，其中這些值表示為占受試氨基酸總重量的wt％。
天冬氨酸和谷氨酸的值也分別包括天冬酰胺和谷酰胺的含量。
表4


色氨酸未測驗(yàn)可以將所得提取物凍干以獲得固體粉末(干提物)，但是其相對于原始鱷梨蛋白質(zhì)來說完全是水溶性的。
按照本發(fā)明的有利變化形式，肽提取物的至少50％是由10-30個(gè)氨基酸序列構(gòu)成的。因此，這些肽的尺寸與鱷梨天然蛋白質(zhì)相比要小得多。因此，這些肽具有更好的生物利用率，特別是在皮膚上。
本發(fā)明的藥物特別適合通過提高屬于組織蛋白酶抑制素和/或β-防御素族，優(yōu)選為hBD-2的抗菌肽的生成而治療和/或預(yù)防與天然和/或獲得性免疫的變化有關(guān)的疾病。在本發(fā)明中，“變化”可以指提高或降低。
本發(fā)明的藥物還特別適合通過刺激特異性彈性蛋白酶抑制劑，特別是彈力素(SKALP)之類的抗菌肽而治療和/或預(yù)防與天然和/或獲得性免疫的變化有關(guān)的疾病。
本發(fā)明的藥物可以有利地刺激和/或補(bǔ)充天然和/或獲得性免疫。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述疾病通常與微生物，特別是革蘭氏陽性和/或革蘭氏陰性細(xì)菌、真菌或病毒的存在有關(guān)。
更特別地，所述疾病可以是視覺和聽覺器官、非角化上皮(陰道、腸內(nèi)、齒齦、鼻部、肺部、呼吸道、肛門和尿道粘膜)和角化上皮(例如皮膚)的感染。所述疾病還可以是外皮或皮膚phanerae(頭發(fā)、指甲、汗腺、皮脂腺)的感染。因此，所述疾病可以是毛囊炎、癤子、膿瘡、膿皰病或甲溝炎之類的病狀。
所述疾病可以是頭皮病狀，例如頭皮屑，更廣義上，是與過皮脂溢(hyperseborrhoea)有關(guān)的癥狀。
所述疾病可以是與Th1/Th2平衡變化有關(guān)的病狀，例如特應(yīng)性皮炎。
所述疾病可以是與細(xì)胞因子(cytokins)，例如IL-4和/或IL-13合成的變化有關(guān)的病狀，特別是在特應(yīng)性皮炎的框架內(nèi)。
所述疾病還可以是炎性皮膚病，例如特應(yīng)性皮炎、特應(yīng)性濕疹和/或接觸性皮炎、牛皮癬、痤瘡和瘙癢皮炎。
所述疾病還可以是燒傷，特別是一度或二度燒傷。
所述疾病還可以是與皮膚屏障缺陷有關(guān)的病狀。由此，本發(fā)明的藥物可用于治療過度反應(yīng)性皮膚(敏感、刺激、過敏)、特應(yīng)性、干燥或老化皮膚。所述疾病還可以是與因環(huán)境侵襲(特別是由于寒冷、污染、壓力、煙草或日照)變得脆弱的皮膚有關(guān)的病狀。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述藥物還適用于保護(hù)新生兒和兒童的不成熟的健康或病態(tài)皮膚。實(shí)際上，其可以在免疫不足時(shí)增強(qiáng)兒童表皮的天然防御。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述藥物還適用于保護(hù)成年人或老人(特別是免疫抑制人群)的健康或病態(tài)皮膚。
本發(fā)明的藥物還適用于增進(jìn)愈合過程，無論是正常還是病理的，例如潰瘍或褥瘡。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述藥物還用于治療和/或預(yù)防牙周疾病、炎性關(guān)節(jié)病狀(例如關(guān)節(jié)病)、粘膜感染，特別是陰道、腸內(nèi)、呼吸、鼻或耳粘膜，或視覺器官感染。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述藥物包含占所述藥物總重量的0.1-20干重％的鱷梨肽提取物，更有利地為0.1-15干重％的鱷梨肽提取物，更有利地為0.5-10干重％的鱷梨肽提取物，更有利地為0.7-8干重％的鱷梨肽提取物，更有利地為1-5干重％的鱷梨肽提取物。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述藥物還含有D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(C7糖)或它們的一種化學(xué)衍生物，其有利地占藥物總重量的0.001-30干重％，更有利地為0.01-20干重％，更有利地為0.1-10干重％，更有利地為0.5-5干重％。
然后有利地觀察到協(xié)同效應(yīng)。
D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇來源有利地為來自鱷梨或其它植物的水溶性糖提取物?；蛘?，甘露庚酮糖和/或甘露庚糖來源是普通市售的(合成來源)。
按照本發(fā)明的有利變化形式，D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇來源是包含占提取物干物質(zhì)總重量至少50wt％的C7糖的鱷梨糖水溶性提取物。
鱷梨糖水溶性提取物可以通過包括下列步驟順序的方法獲得-通過將鱷梨干燥和提取脂質(zhì)(油)而有利地由鱷梨果實(shí)獲得鱷梨餅；然后-將所述餅低溫研磨并完全脫脂化，然后沉降并離心以收集具有高C7糖含量的可溶組分(棄置餅)；-將前述步驟獲得的所述可溶組分在離子樹脂上脫礦質(zhì)；然后-以10,000道爾頓超濾；-如果需要，通過真空氣化進(jìn)行濃縮，加入防腐劑，通過微濾(0.2μm)消毒，并包裝。
按照本發(fā)明的優(yōu)選變化形式，有利地，用與獲得鱷梨肽提取物和鱷梨糖相同的方式來獲得鱷梨餅和提取脂質(zhì)。
經(jīng)干燥和脫油的果實(shí)(也稱作餅)隨后可以進(jìn)行下列步驟-低溫研磨，-完全脫脂化(delipidation)，有利地用乙醇和/或丙酮進(jìn)行，-沉降并用水洗滌餅，-離心并收集可溶組分(棄置餅)，-在離子交換樹脂上流過以脫礦質(zhì)，-以10kD的截流限(cut-offlimit)進(jìn)行超濾，-真空濃縮，添加防腐劑并包裝。
最終的水提物通常可以含有0.1-10wt％的干物質(zhì)，有利地為1-7％的干物質(zhì)，更有利地為3-5％的干物質(zhì)。相對于干物質(zhì)總重量，干物質(zhì)中的C7糖(即D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇)含量有利地高于50wt％，更有利為65-90wt％。
鱷梨水溶性提取物的相對糖組成(以相對于提取物干物質(zhì)總重量的重量表示)有利地符合下列標(biāo)準(zhǔn)(通過HPLC-測定的相對組成)-D-甘露庚酮糖5-80％-甘露庚糖醇 5-80％
-蔗糖＜10％-葡萄糖 ＜10％-果糖＜10％鱷梨糖水溶性提取物有利地包含，占干物質(zhì)總重量1-99wt％的D-甘露庚酮糖，更優(yōu)選5-80wt％的D-甘露庚酮糖，更有利地為10-80wt％的D-甘露庚酮糖。鱷梨糖水溶性提取物有利地包含，占干物質(zhì)總重量20-80wt％的甘露庚糖醇，更有利地為25-70wt％的甘露庚糖醇。
優(yōu)選地，水溶性提取物的相對糖組成(以相對于提取物干物質(zhì)總重量的重量表示)符合下列標(biāo)準(zhǔn)(通過HPLC測定的相對組成)-D-甘露庚酮糖25-60％-甘露庚糖醇 25-60％-蔗糖＜10％-葡萄糖 ＜10％-果糖＜10％如果需要，所得提取物可以凍干以獲得完全水溶性的固體粉末(干提物)。
按照本發(fā)明的有利變化形式，本發(fā)明的藥物還含有羽扇豆肽提取物，有利地，按質(zhì)量計(jì)，為藥物總重量的0.001-30干重％，更有利0.01-10干重％。本發(fā)明的組合物中添加的羽扇豆肽提取物包含占該肽提取物干物質(zhì)重量至少70wt％的肽，有利地至少80wt％。然后有利地觀察到協(xié)同效應(yīng)。
特別地，羽扇豆肽提取物可以通過包含下列步驟的方法獲得-制備磨碎的羽扇豆餅或微粉化的羽扇豆粉餅；-然后通過溶劑萃取進(jìn)行脫脂；-提取可溶蛋白質(zhì)和糖苷(osidic)組分，或使蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)沉淀；-如果需要，分離蛋白質(zhì)組分；-蛋白質(zhì)組分的酶促水解，并收集(可能在過濾之后收集)肽提取物。
在Expanscience Laboratories提交的法國專利公開號FR 2 792 202中描述了肽提取物的制備方法。
本發(fā)明的藥物還可以包含至少一種選自下列的物質(zhì)潤膚劑、加濕活性物質(zhì)、角蛋白合成活化劑、角質(zhì)調(diào)節(jié)劑(keratoregulators)、角質(zhì)軟化劑、皮膚屏障的重構(gòu)劑(restructuring agents for skin barrier)(皮膚脂質(zhì)合成活化劑、PPARs或過氧化物酶體增殖體激活的受體激動(dòng)劑)、角化細(xì)胞分化中的活化劑(類維生素A、Calcidone_、鈣)、抗生素、抗菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、皮脂調(diào)節(jié)劑(seboregulators)(例如5-α還原酶抑制劑，尤其是Expanscience Laboratories出售的活性物質(zhì)5-αAvocuta_)、免疫調(diào)節(jié)藥(例如他克莫司、吡美莫司、噁唑啉)、防腐劑、抗搔癢劑、鎮(zhèn)靜劑、濾光劑和遮光劑、抗氧化劑、生長因子、愈合劑或富營養(yǎng)分子、抗炎藥和抗炎劑、以及含有植物油不可皂化物的化合物。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的角蛋白合成活化劑有利地為類維生素A、羽扇豆肽(如Silab Company出售的)、角質(zhì)層或粒層(角蛋白)的主要蛋白質(zhì)。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的抗生素有利地為梭鏈孢酸(fucidic acid)、青霉素、四環(huán)素、原始霉素(pristamycin)、紅霉素、氯林肯霉素、莫匹羅星、米諾環(huán)素、和強(qiáng)力霉素?？梢栽诒景l(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的抗病毒劑有利地為阿昔洛韋和伐昔洛韋?？梢栽诒景l(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的抗搔癢劑有利地為甘氨酸、羽扇豆糖和/或肽、Cycloceramide_。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的鎮(zhèn)靜劑有利地為α紅沒藥醇、甘草衍生物?？梢栽诒景l(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的角質(zhì)調(diào)節(jié)劑(keratoregulators)有利地為α羥酸及其衍生物?？梢栽诒景l(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的角質(zhì)軟化物質(zhì)優(yōu)選是水楊酸及其衍生物?？梢栽诒景l(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的抗氧化劑有利地為維生素(C、E)、微量元素(銅、鋅、硒)?？梢栽诒景l(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的生長因子有利地為becaplermine和TGFβ(轉(zhuǎn)化生長因子β)。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的愈合劑有利地為維生素A、泛酰醇、Aocadofurane_、氧化鋅、鎂、硅、羥基積雪草酸或積雪草酸。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的藥物有利地為適合經(jīng)局部給藥或口服給藥傳遞的用于預(yù)防和/或治療遺傳性過敏癥(類皮質(zhì)激素、潤膚劑)、痤瘡(抗生素、過氧化苯甲酰、類維生素A、壬二酸、維生素PP、鋅、cyclines)、濕疹(免疫調(diào)節(jié)藥、潤膚劑、鮭魚油、琉璃苣油、益生元)或牛皮癬(類皮質(zhì)激素、鈣泊三醇、鈣三醇、tazarotene、杜松油、acitretin、PUVA療法)的藥物。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的抗炎藥有利地為類固醇類抗炎藥(AIS)，例如類皮質(zhì)激素，或非類固醇類抗炎藥(AINS)?？梢源碳け砥ぶ兄饕|(zhì)合成的并可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地具有協(xié)同效應(yīng))使用的皮膚屏障重構(gòu)劑，有利地為向日葵濃縮物，更有利地為亞油酸向日葵濃縮物，例如Expanscience Laboratories出售的活性藥物，Soline_(參看國際申請WO 01/21150)；植物油不可皂化物，例如Avocadofurane_(參看國際申請WO 01/21150)、PPARs激動(dòng)劑(羅格列酮、吡格列酮)。重構(gòu)劑有利地以占藥物總重量0.001至30wt％的比例存在。可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的抗真菌劑有利地為益康唑和酮康唑。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的殺菌防腐劑是，例如，三氯生、氯己定、季氨。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合使用的免疫調(diào)節(jié)劑有利地為他克莫司、吡美莫司和噁唑啉。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地以協(xié)同效應(yīng))使用的噁唑啉有利地為選自下列材料的噁唑啉類物質(zhì)2-十一烷基-4-羥甲基-4-甲基-1，3-噁唑啉、2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉、(E)-4，4-二甲基-2-十七碳-8-烯基-1，3-噁唑啉、4-羥甲基-4-甲基-2-十七烷基-1，3-噁唑啉、(E)-4-羥甲基-4-甲基-2-十七碳-8-烯基-1，3-噁唑啉或2-十一烷基-4-乙基-4-羥甲基-1，3-噁唑啉。以更有利的方式，所述噁唑啉是名為OX-100或Cycloceramide_的2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉。
含有植物油不可皂化物的并可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地以協(xié)同效應(yīng))使用的物質(zhì)優(yōu)選自鱷梨呋喃(furane)脂質(zhì)、鱷梨和大豆不可皂化物、羽扇豆油濃縮物、向日葵油濃縮物、或它們的混合物。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地以協(xié)同效應(yīng))使用的鱷梨呋喃脂質(zhì)優(yōu)選為天然2-烷基呋喃類，特別是ExpanscienceLaboratories出售的活性物質(zhì)Avocadofurane_，其可以通過如國際申請WO 01/21605中所述的方法獲得。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地以協(xié)同效應(yīng))使用的鱷梨和大豆不可皂化物優(yōu)選為呋喃鱷梨不可皂化物與大豆不可皂化物各自以大約1/3-2/3的比率制成的混合物。鱷梨和大豆不可皂化物更有利地為Expanscience Laboratories出售的Piasclédine_。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地以協(xié)同效應(yīng))使用的羽扇豆油濃縮物有利地為通過羽扇豆油，有利地為甘白(sweetwhite)羽扇豆油的分子蒸餾獲得的濃縮物，例如國際申請WO 98/47479中描述的那些。它們有利地含有大約60wt％的不可皂化物。
可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)與鱷梨肽提取物結(jié)合(有利地以協(xié)同效應(yīng))使用的向日葵油濃縮物有利地為亞油酸向日葵油濃縮物，例如Expanscience Laboratories出售的活性物質(zhì)，Soline_(參看國際申請WO 01/21150)。
本發(fā)明的藥物旨在治療和/或預(yù)防可能侵襲人類和/或動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物的疾病。本發(fā)明的藥物可以配制成適合局部給藥、口服、直腸、陰道、經(jīng)鼻、耳朵或支氣管給藥、腸道外給藥的各種制劑形式。優(yōu)選地，所述各種制劑適用于局部給藥并包括乳霜、軟膏、洗液、油劑、藥膏、噴劑，或任何其它用于外部給藥的產(chǎn)品。本發(fā)明化合物和組合物的給藥途徑、最佳劑量和藥物形式可以根據(jù)在針對患者或動(dòng)物確定藥物治療(特別是在皮膚病學(xué)或獸藥領(lǐng)域)時(shí)通?？紤]的標(biāo)準(zhǔn)來確定，例如患者或動(dòng)物的年齡或體重、癥狀的嚴(yán)重程度、針對特定治療的耐受性、觀察到的副作用、和皮膚類型。根據(jù)找出的給藥類型，本發(fā)明的藥物和/或活性物質(zhì)還可以包含制藥上合適的，特別是皮膚病學(xué)上合適的至少一種賦形劑。人們優(yōu)選使用適合局部外部給藥的賦形劑。本發(fā)明的藥物還可以包含至少一種制藥上已知(如對于技術(shù)專家而言制藥上已知的)的添加劑，該添加劑選自增稠劑、防腐劑、香料、著色劑、化學(xué)濾毒劑或礦物、加濕劑、熱水等。
本發(fā)明還涉及包含鱷梨肽提取物和適合美容用的適當(dāng)賦形劑的美容性組合物。所述鱷梨肽提取物有利地包含占該肽提取物干物質(zhì)重量2-10wt％的α-胺化氮。
本發(fā)明的美容性組合物有利地包含占所述組合物總重量0.001-30干重％的鱷梨肽提取物，更有利地為0.01-10干重％的鱷梨肽提取物。按照本發(fā)明的一種優(yōu)選形式，所述鱷梨肽提取物可以按照如上所述的方法獲得。
按照本發(fā)明的一種有利形式，該組合物還包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(協(xié)同效應(yīng))，采用的量有利地為組合物總重量的0.001-30干重％，更有利地為0.01-5干重％。所述D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇源有利地為水溶性鱷梨糖提取物，其C7糖含量——即D-甘露庚酮糖和甘露庚糖醇含量——按干物質(zhì)計(jì)，有利地為干物質(zhì)總重量的65-90wt％。這些庚糖醇型糖還可以獲自另一植物源或通過合成獲得。
按照本發(fā)明的一種有利變化形式，所述組合物還包含羽扇豆肽提取物(協(xié)同效應(yīng))，其采用的量有利地為組合物總重量的0.001-30wt％。本發(fā)明的組合物中添加的羽扇豆肽提取物包含占該肽提取物干物質(zhì)重量至少70wt％，有利地至少80％的肽。其可以按照如上所述的方法獲得。
所述組合物還可以含有至少一種選自如上所述的皮膚屏障重構(gòu)劑或含植物油不可皂化物的物質(zhì)。特別地，所述美容性組合物可以含有選自Expanscience Laboratories出售的Soline_、Avocadofurane_或Piasclédine_的活性物質(zhì)。
本發(fā)明的美容性組合物有利地包含占組合物總重量0.001-30wt％的至少一種皮膚屏障重構(gòu)劑。
本發(fā)明的美容性組合物可以配制成適合局部給藥、口服、直腸或陰道給藥或腸道外給藥的各種制劑形式。優(yōu)選地，所述各種制劑適用于局部給藥并包括乳霜、軟膏、洗液、油劑、藥膏、噴劑，或任何其它用于外部給藥的產(chǎn)品。根據(jù)采用的給藥類型，本發(fā)明的組合物和/或活性化合物還可以包括至少一種適合美容品的賦形劑。本發(fā)明的美容性組合物還可以包含至少一種本領(lǐng)域技術(shù)專家已知的添加劑，該添加劑選自增稠劑、防腐劑、香料、著色劑、化學(xué)濾毒劑或礦物、加濕劑、熱水等。
本發(fā)明還涉及美容性處理敏感、刺激、不耐受的皮膚和/或粘膜的方法，這些情況下的皮膚和/或粘膜表現(xiàn)為皮膚發(fā)紅或非病理免疫失調(diào)，該方法的特征在于其包括在皮膚和/或粘膜上施用本發(fā)明的美容性組合物。
本發(fā)明最后涉及包含鱷梨肽提取物和如果需要包含合適的適當(dāng)賦形劑的營養(yǎng)性(nutraceutic)組合物。所述鱷梨肽有利地包含占該肽提取物干物質(zhì)重量2-10wt％的α-胺化氮。
本發(fā)明的營養(yǎng)性組合物有利地包含占所述組合物總重量0.001-30wt％的鱷梨肽提取物，更有利地為0.01-10wt％的鱷梨肽提取物。按照本發(fā)明的有利變化形式，鱷梨肽提取物可以按照如上所述的方法獲得。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述營養(yǎng)性組合物還包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇(協(xié)同效應(yīng))，采用的量有利地為組合物總重量的0.001-30干重％。D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇源有利地為鱷梨糖水溶性提取物，其C7糖含量——即D-甘露庚酮糖和甘露庚糖醇含量——按干物質(zhì)計(jì)，有利地為干物質(zhì)總重量的65-90wt％。
按照本發(fā)明的有利變化形式，所述營養(yǎng)性組合物包含至少一種羽扇豆肽提取物(協(xié)同效應(yīng))，采用的量有利地為組合物總重量的0.001-30干重％。在本發(fā)明的組合物中添加的羽扇豆肽提取物包含占該肽提取物干物質(zhì)重量的至少70wt％，有利地為至少80％的肽。其可以按照如上所述的方法獲得。
下列非限制性實(shí)施例闡明了本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1鱷梨肽提取物的制備用盤式切割機(jī)將50千克新鮮鱷梨，Hass亞種，切成薄片，2-5毫米厚，含核。干燥裝置是熱空氣流調(diào)溫爐。一經(jīng)切割，就將鱷梨在層層排開的托盤上分放成4-5厘米厚的層。干燥溫度設(shè)定為80℃，總持續(xù)時(shí)間為48小時(shí)。一經(jīng)干燥，就對水果進(jìn)行冷壓。這一操作在小型Komet_實(shí)驗(yàn)室壓機(jī)上進(jìn)行。
然后在低溫下將4千克脫脂化水果塊(餅)弄碎，然后在25升乙醇存在下回流萃取。然后在布氏漏斗上過濾收集已抽除脂質(zhì)的粉末，并在50℃烘箱中干燥5小時(shí)。
然后將所得的餅用軟化水(10升)洗滌，然后離心分離。在水溶液中提取固體組分，用HCl酸化(pH值設(shè)為5)，然后與2％纖維素酶(相對于干物質(zhì))接觸。水解持續(xù)時(shí)間設(shè)為6小時(shí)。
然后將混合物在添加劑(2.5％p/v)存在下以2,000g離心。然后在8.0的pH值、在0.5％蛋白酶存在下、在55℃的溫度經(jīng)過2小時(shí)對收集的殘?jiān)M(jìn)行二次水解。通過連續(xù)添加2M氫氧化鈉將水解調(diào)節(jié)在恒定pH值下。最后在85℃加熱10分鐘使蛋白酶變性。
將所得混合物離心并通過7.5μm膜過濾上清液。然后在具有10kD截流限的膜上超濾。
在存在1％活性炭的情況下使含有20％干物質(zhì)的粗制肽提取物脫色，然后再通過7.5μm膜過濾。然后將脫色的提取物微濾(0.2μm)，將其titter調(diào)節(jié)至5％干物質(zhì)，然后補(bǔ)充加入防腐劑并最后在消毒過濾后包裝(0.2μm)。
通過該方法獲得的可水解鱷梨肽提取物(5％干物質(zhì))的表征數(shù)據(jù)顯示在下表5中表5

在下表6中，給出通過該方法獲得的鱷梨肽提取物的分子量分布
表6

(1)質(zhì)量＜10000克/摩爾可以觀察到，提取物中至少27％的肽是由至少9個(gè)氨基酸序列構(gòu)成的。因此，提取物中肽的尺寸與鱷梨中的天然蛋白質(zhì)的尺寸相比非常小。因此，這些肽具有高得多的生物利用率，特別是在皮膚上。
實(shí)施例2鱷梨糖水溶性提取物的制備用盤式切割機(jī)將50千克新鮮鱷梨，Hass亞種，切成薄片，2-5毫米厚，含核。干燥裝置是熱空氣流調(diào)溫爐。一經(jīng)切割，就將鱷梨在層層排開的托盤上分放成4-5厘米厚的層。干燥溫度設(shè)定為80℃，總持續(xù)時(shí)間為48小時(shí)。一經(jīng)干燥，就對水果進(jìn)行冷壓。這一操作在小型Komet_實(shí)驗(yàn)室壓機(jī)上進(jìn)行。
然后在低溫下將4千克脫脂化水果塊(餅)磨碎，然后在25升乙醇存在下回流萃取。然后在布氏漏斗上過濾收集已抽除脂質(zhì)的粉末，并在50℃烘箱中干燥5小時(shí)。
然后將濾餅用軟化水(10升)洗滌，然后離心分離。按照下列方法提取可溶組分(液體)以提純并濃縮●用離子交換樹脂脫礦質(zhì)通過流經(jīng)OH-，然后H+樹脂而將庚糖醇脫礦質(zhì)。
●在10,000Da上超濾使用配有截流限為10kDa的4個(gè)膜的系統(tǒng)進(jìn)行超濾。
●真空濃縮用真空蒸發(fā)器對經(jīng)純化的提取物進(jìn)行濃縮直至獲得大約4％的干物質(zhì)。
●包裝將提取物的濃度調(diào)節(jié)為5％干物質(zhì)，并加入防腐劑，然后用0.2μm截流限的膜進(jìn)行消毒過濾，并包裝產(chǎn)品。
下表7顯示了按照上述方法制成的具有5％干物質(zhì)含量的C7鱷梨糖提取物的組成表7

實(shí)施例3鱷梨肽提取物對β-防御素-2的誘導(dǎo)細(xì)胞接種(J0)如以前在公開出版物’Human β-Defensin-2 production inkeratinocytes is regulated by Interleukin-1、Bacteria、and the State ofDifferentiation’，Alice Y.Liu等人，The Society for InvestigativeDermatology，卷118，No 2，2002年2月，第275-281頁中所述，將正常人類角化細(xì)胞接種到存在富含鈣(最終濃度1.3mM)的特定培養(yǎng)基的96孔板(大約20,000細(xì)胞/孔)中。
細(xì)胞處理(J1)在37℃，5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)后＝＞用200微升/孔PBS(在鹽水溶液中的磷酸鹽緩沖劑)漂洗2次＝＞用200微升/孔(在Ca++增補(bǔ)的培養(yǎng)基中)刺激細(xì)胞●濃度分別為3、1和0.3％，或干物質(zhì)含量為0.15，0.05和0.015％的鱷梨肽提取物●濃度為100納克/毫升的I1-1β(用于hBD-2的正誘導(dǎo)檢驗(yàn))處理結(jié)束(J2)ELISA在培養(yǎng)24小時(shí)后，通過使用了特異性抗體(goat polyclonal tohuman BD2；Abcam；ab9871)的ELISA技術(shù)評定hBD-2的誘生。
所得結(jié)果概括在下表8中表8

可以相當(dāng)意外地觀察到，本發(fā)明的鱷梨肽提取物可以提高h(yuǎn)BD-2的生成量。
實(shí)施例4為hBD-2和抗菌類肽(彈性蛋白酶特異性抑制劑)編碼的mRNAs的誘導(dǎo)使用“cDNA 微檢定”法研究鱷梨肽提取物對為可能與皮膚生理有關(guān)的結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)編碼的基因表達(dá)的影響。這種方法允許人們經(jīng)單個(gè)步驟中檢驗(yàn)產(chǎn)品的影響或在給定生物系統(tǒng)中該處理對基因表達(dá)的影響，并獲得該處理效果的“特征標(biāo)”。
培養(yǎng)物和受試產(chǎn)品的狀況通過本發(fā)明的方法獲得的濃度分別為3、1和0.3％的或干物質(zhì)含量為0.15、0.05和0.015％的鱷梨肽提取物直接在用于重構(gòu)表皮的培養(yǎng)基，Skinethic_中培養(yǎng)24小時(shí)。
基因分化表達(dá)的分析Clontech(Palo Alto，USA)推薦的所用方法包括●完全RNA萃取和提純步驟
●根據(jù)AtlasPure規(guī)程(Clontech)進(jìn)行的信使RNA提純步驟●使用反轉(zhuǎn)錄，用P32進(jìn)行的DNA探針標(biāo)記●通過排阻柱色譜法對所標(biāo)記的探針進(jìn)行提純，并通過液體閃爍計(jì)數(shù)檢測質(zhì)量和數(shù)目●用放射性同位素標(biāo)記的探針進(jìn)行膜(Custon ATLASBIOAlternative)的雜化(68℃，過夜)結(jié)果對為抗菌肽(hBD-2)和抗菌類肽(彈性蛋白酶特異性抑制劑/SKALP/彈力素)編碼的mRNAs的合成的影響顯示在下表9中表9

實(shí)施例5基于鱷梨肽提取物的美容制劑抗痤瘡面霜No 1水QSP 100％異壬酸異壬酯 7.000二-C12-13蘋果酸酯 7.000硬脂酸異十六烷基酯5.000丁二醇3.000稻米粉(Oryza sativa) 2.500鱷梨肽提取物 2.000二辛酰基醚2.000硅烷二醇水楊酸酯 2.000二十烷醇 1.650緩血酸胺 1.180十六醇1.000
水楊酸1.000維生素C(Ascorbyl)葡糖苷 1.000甘氨酸1.000維生素E(Tocopheryl)酸酯 1.000二十二醇 0.900角鯊?fù)?.790檸檬酸鈉 0.660PPG-12/SMDI共聚物 0.500二十烷醇(Arachidyl)葡糖苷 0.450香水 0.400菌核膠0.160十六硬脂酸酯(Cetearyl alcohol)0.130檸檬酸0.110Sepigel 305*0.100防腐體系 QS*Seppic公司出售的產(chǎn)品。
抗痤瘡面霜No 2水QSP 100％異壬酸異壬酯 7.000二-C12-13蘋果酸酯 7.000硬脂酸異十六烷基酯5.000丁二醇3.000稻米粉2.500鱷梨肽提取物 2.000C7糖(庚糖醇) 1.000二辛酰基醚2.000硅烷二醇水楊酸酯 2.000二十烷醇 1.650緩血酸胺 1.180十六醇1.000
水楊酸1.000維生素C葡糖苷 1.000甘氨酸1.000維生素E乙酸酯 1.000二十二醇 0.900角鯊?fù)?.790檸檬酸鈉 0.660PPG-12/SMDI共聚物 0.500二十烷醇葡糖苷0.450香水 0.400菌核膠0.160十六硬脂酸酯(Cetearyl alcohol)0.130檸檬酸0.110Sepigel 305*0.100防腐體系 QS*Seppic公司出售的產(chǎn)品。
用于清洗過敏性皮膚的發(fā)泡乳液水QSP 100Arlatone duo*20.00000椰油基葡糖苷 12.00000羥丙基瓜耳膠 2.00000鱷梨肽提取物 2.000PEG-200氫化甘油棕櫚油酸酯 1.10000PEG-7甘油椰油酯 1.10000硅烷二醇水楊酸酯 1.00000椰子酰胺DEA 1.00000辛?；拾彼?Caprylol Glycine)0.50000山梨酸鉀 0.50000聚季銨鹽100.40000香水 0.40000
檸檬酸0.30000鋅PCA 0.20000*Quimasso公司出售的產(chǎn)品。
個(gè)人衛(wèi)生用清洗&發(fā)泡乳液水QSP 100Arlatone duo*20.00000椰油基葡糖苷 12.00000羥丙基瓜耳膠 2.00000鱷梨肽提取物 3.00000鱷梨糖1.00羽扇豆肽 2.00PEG-200氫化甘油棕櫚油酸酯 1.10000PEG-7甘油椰油酯 1.10000硅烷二醇水楊酸酯 1.00000椰子酰胺DEA 1.00000辛酰基甘氨酸(Caprylol Glycine)0.50000山梨酸鉀 0.50000聚季銨鹽100.40000香水 0.40000檸檬酸0.30000鋅PCA 0.20000*Quimasso公司出售的產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種包含鱷梨肽提取物的藥物，其含有占肽提取物干物質(zhì)重量2-10wt％的α-胺化氮，和適當(dāng)?shù)馁x形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于所述鱷梨肽提取物可以通過包括下列步驟的方法獲得-通過干燥和油提取，有利地由鱷梨果實(shí)獲得鱷梨餅；然后-將所述餅低溫研磨和完全脫脂化，然后潷析、離心并收集餅；此后-在葡聚糖酶存在下進(jìn)行一次水解，然后離心并棄置可溶組分；-在一種或數(shù)種蛋白酶存在下進(jìn)行二次水解，然后離心并棄置殘?jiān)?；然?通過納米過濾濃縮肽相，且如果需要，在活性炭存在下脫色；然后-簡單過濾(10微米)，然后超濾(截流限10kD)；最后-如果需要，加入防腐劑、最終消毒微濾(0.2微米)，并包裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物，其特征在于鱷梨肽提取物具有下列氨基酸組成，按相對于氨基酸總重量的重量百分比計(jì)
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于提取物中50％的肽由10-30個(gè)氨基酸構(gòu)成。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的藥物，其通過提高來自組織蛋白酶抑制素和/或β-防御素族的抗菌肽，有利地為hBD-2的生成而用于治療和/或預(yù)防與天然和/或獲得性免疫的變化有關(guān)的疾病。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的藥物，其通過刺激抗菌樣肽如特異性彈性蛋白酶抑制劑，特別是彈力素(SKALP)而用于治療和/或預(yù)防與天然和/或獲得性免疫的變化有關(guān)的疾病。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物，其特征在于所述疾病與微生物，例如革蘭氏陽性和/或革蘭氏陰性細(xì)菌、真菌或病毒的存在有關(guān)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于所述疾病選自-皮膚和phanerae感染，特別選自毛囊炎、癤、膿瘡、膿皰病或甲溝炎的疾??；-炎性皮膚病，例如特應(yīng)性皮炎、接觸性和/或特應(yīng)性皮炎、牛皮癬、痤瘡、瘙癢皮炎；-與Th1/Th2平衡變化有關(guān)的疾?。?與細(xì)胞因子，例如IL-4和/或IL-13的合成變化有關(guān)的疾病；或-燒傷。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物，其特征在于所述疾病是與皮膚屏障缺陷有關(guān)的病狀，例如過度反應(yīng)性、特應(yīng)性、干燥或老化的皮膚，或與因環(huán)境侵襲而變脆弱的皮膚有關(guān)的病狀。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物，其適用于保護(hù)如下皮膚-新生兒或兒童的不成熟皮膚；-新生兒或兒童的病態(tài)不成熟皮膚；-成年人或老人的健康或病態(tài)皮膚。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物，其用于在正常或病理例如潰瘍或褥瘡愈合中增進(jìn)愈合過程。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物，其用于治療和/或預(yù)防牙周疾病。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物，用于治療和/或預(yù)防炎性關(guān)節(jié)病癥，例如關(guān)節(jié)病。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物，用于治療和/或預(yù)防粘膜感染，特別是陰道、腸內(nèi)、呼吸、鼻或耳粘膜。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物，用于治療和/或預(yù)防視覺器官感染。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的藥物，該藥物進(jìn)一步包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇，有利地，D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的來源是水溶性鱷梨糖提取物。
17.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的藥物，用于預(yù)防和/或治療可能影響人類和/或動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物的疾病。
18.一種包含鱷梨肽提取物的美容性或營養(yǎng)性組合物，其有利地含有占肽提取物干物質(zhì)重量2-10wt％的α-胺化氮，和適當(dāng)?shù)馁x形劑，該賦形劑分別是適用于美容的賦形劑或食品級賦形劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的化妝品或營養(yǎng)性組合物，其特征在于其進(jìn)一步包含D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇，有利地，D-甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇的來源是鱷梨糖水溶性提取物。
20.一種美容性處理敏感、發(fā)炎、過敏、干燥、老化、不耐受的皮膚和/或粘膜的方法，該狀況下的皮膚具有皮膚屏障缺陷、因環(huán)境侵襲而變脆弱、具有發(fā)紅或具有非病理免疫失調(diào)，該方法特征在于包括在皮膚和/或粘膜上施用根據(jù)權(quán)利要求18-19任一項(xiàng)所述的美容性組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含鱷梨肽提取物的藥物，該藥物也可包含含有D－甘露庚酮糖和/或甘露庚糖醇，如鱷梨糖的水可溶性提取物的組合物，和/或羽扇豆肽提取物。本發(fā)明的藥物通過增加抗菌肽的生成，優(yōu)選hBD－2的生成來治療和/或預(yù)防與天然和/或獲得性免疫改變有關(guān)的疾病，而不誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)、刺激或過敏。
文檔編號A61P17/02GK1968708SQ200580020030
公開日2007年5月23日 申請日期2005年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月30日
發(fā)明者A·皮奇里利, N·皮卡爾迪, P·姆西卡, F·保羅, S·布雷迪夫 申請人:科學(xué)發(fā)展實(shí)驗(yàn)室