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用于共同遞送抗癌藥、抗血管生成藥和多糖的組合物及方法

文檔序號(hào):1109316閱讀:536來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:用于共同遞送抗癌藥、抗血管生成藥和多糖的組合物及方法
用于共同遞送抗癌藥、抗血管生成藥和多糖的組合物及方法 相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求享有2004年6月22日提交的序號(hào)為60/581,958的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)和利益。發(fā)明領(lǐng)域本申請(qǐng)涉及用于治療惡性癌癥和血管生成的組合物及方法。特別 地,本發(fā)明涉及一種或多種已知化學(xué)治療劑與多糖一起共同給藥。發(fā)明背景多種形式的癌癥發(fā)病率預(yù)期會(huì)隨著人口老化而增加。例如,前列 腺癌為美國(guó)男性中最常被診斷出的癌癥,以及為男性癌癥死亡的主要 原因。據(jù)預(yù)測(cè)2004年美國(guó)將有約230, 110新前列腺癌病例被診斷和 38,000例前列腺癌引起的死亡。診斷為前列腺癌的患者大約50%具有 并非只是影響前列腺的疾病形式。前列腺癌能夠轉(zhuǎn)移至骨骼系統(tǒng),患 者一般死于無(wú)法抵抗的骨轉(zhuǎn)移性疾病。迄今,對(duì)于患有轉(zhuǎn)移性疾病的 患者沒(méi)有有效的治愈性治療,并且也幾乎沒(méi)有治標(biāo)的治療。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過(guò)程要求細(xì)胞脫離原發(fā)性腫瘤,侵入基底膜,從 腫瘤細(xì)胞栓子經(jīng)過(guò)血流,與靶器官的血管內(nèi)皮相互作用,外滲,并增 生形成繼發(fā)性腫瘤群體。普遍承認(rèn)轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)的許多階段涉及細(xì)胞表面成分例如糖結(jié)合蛋白 介導(dǎo)的細(xì)胞的相互作用,糖結(jié)合蛋白包括半乳糖苷結(jié)合凝集素(半乳 凝素)。靜脈內(nèi)(i.v.)注入同源小鼠尾部靜脈之前在體外用抗半乳凝素 單克隆抗體處理B16黑色素瘤和uv-2237纖維肉瘤細(xì)胞,導(dǎo)致腫瘤肺 群體發(fā)育的顯著抑制。用半乳凝素-3cDNA轉(zhuǎn)染低轉(zhuǎn)移、低半乳凝 素-3表達(dá)性u(píng)v-2237-c115纖維肉瘤細(xì)胞,導(dǎo)致轉(zhuǎn)染細(xì)胞的轉(zhuǎn)移表型增加。此外,還確立了人乳頭狀曱狀腺癌中半乳凝素-3表達(dá)的水平與胂瘤階段人結(jié)腸直腸和胃癌之間的關(guān)聯(lián)性。單糖例如曱基HX-D-乳糖苷和乳-N-丁糖也顯示出抑制B16黑色素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,而D-半乳糖和阿 拉伯半乳糖抑制L-l肉瘤細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移。然而,多數(shù)公認(rèn)的抗癌藥為細(xì)胞毒性的,這是由于藥物非特異遞 送導(dǎo)致對(duì)正常組織的毒副作用。因此,在治療癌癥中,需要能夠增強(qiáng) 公認(rèn)抗癌物質(zhì)的確立的治療特性,而減少他們不合乎需要的毒性的治 療方法。發(fā)明概述本發(fā)明涉及與一種或多種治療劑聯(lián)合的化學(xué)可溶的配基分支多 糖,其分子量為約50kD至約200 kD。 一方面,本發(fā)明涉及使用該多 糖聯(lián)合至少一種抗癌藥用于治療和預(yù)防惡性癌癥的方法。另一方面, 本發(fā)明涉及使用本發(fā)明的組合物用于治療和預(yù)防血管生成的方法。根據(jù)本發(fā)明,提供配基分支的多糖,它包含由眾多碳水化合物 單元制成的生理學(xué)上可溶解的聚合物,其中每個(gè)碳水化合物單元包括 碳水化合物主鏈。碳水化合物主鏈可以含有眾多重復(fù)單元,其中每個(gè) 重復(fù)單元具有至少一個(gè)酸性分子和至少一個(gè)中性碳水化合物分子。碳 水化合物的至少一個(gè)支鏈能夠接在主鏈上,包括多個(gè)中性碳水化合物 或碳水化合物衍生物。這種配基分支的多糖的平均分子量為約50kD至約200 kD,或者 約250至約1000個(gè)單糖。主鏈每20-25酸性分子包括約一個(gè)中性碳水 化合物分子。支鏈由一個(gè)或多個(gè)中性碳水化合物分子連接。另外,多 糖具有疏水性部分和輕微帶負(fù)電荷部分(例如糖醛酸)的組合,其能 夠與一種或多種公認(rèn)的治療藥物相互作用,有效地遞送這些藥物至轉(zhuǎn) 移癌,在其中它們發(fā)揮它們的生物活性。 一方面,多糖結(jié)構(gòu)可以具有 伸展的碳水化合物配基,其與散布在癌細(xì)胞表面上的多種多價(jià)凝集素 受體相互作用。這些配基擾亂腫瘤表面,并潛在地進(jìn)一步增強(qiáng)遞送化 學(xué)治療到腫瘤細(xì)胞中。因此,通過(guò)與可溶的分支配基多糖共同給藥,公認(rèn)的抗癌劑被更有效地遞送至受影響的患病細(xì)胞,并且受到不利影 響的健康細(xì)胞更加很少。一方面,酸性分子為鹽形式的糖醛酸,例如鉀、鈉或鎂鹽形式。 另一方面,糖醛酸包括羧酸單元并被烷基化或酯化最高達(dá)總單元的10%。例如甲基、乙?;?、癸基、或千基能夠連接到羧酸單元。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,描述了多糖,其中包括酸性分子并 包括中性碳水化合物,該酸性分子為半乳糖醛酸,該中性碳水化合物 為鼠李糖。本發(fā)明的一個(gè)方面提供多糖,其中至少一個(gè)支鏈通過(guò)鼠李 糖分子連接到碳水化合物主鏈上。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案涉及多糖,其中包括酸性分子,其為含有最高至IOO個(gè)單元的聚半乳糖醛酸,并且中性碳水化合物分子位于每個(gè)末端,為鼠李糖。 一方面提供多糖,其中至少一個(gè)支鏈通過(guò)聚半乳 糖醛酸分子和/或鼠李糖分子連接到碳水化合物主鏈上。另一個(gè)實(shí)施方案涉及治療診斷有癌癥的患者或預(yù)防診斷有癌癥高風(fēng)險(xiǎn)的患者中癌癥的方法,它包括以下步驟將治療有效量的至少一 種公認(rèn)的抗癌藥與本發(fā)明多糖結(jié)合,產(chǎn)生聯(lián)合治療;并將這種聯(lián)合遞 送給患者。另一個(gè)實(shí)施方案涉及治療診斷有肺瘤血管生成的患者或預(yù)防診斷 有血管生成高風(fēng)險(xiǎn)的患者的肺瘤血管生成的方法,它包括以下步驟 將治療有效量的至少一種公認(rèn)的抗血管生成藥與本發(fā)明可溶性分支的 多糖結(jié)合,產(chǎn)生聯(lián)合治療;并將這種聯(lián)合遞送給患者。本發(fā)明的一個(gè) 方面進(jìn)一步地包括在將這種聯(lián)合遞送給患者之前,將公認(rèn)的抗癌藥與 所述聯(lián)合結(jié)合的步驟。再另一個(gè)實(shí)施方案涉及預(yù)防癌癥的患者中腫瘤血管生成的方法, 它包括以下步驟將治療有效量的至少一種公認(rèn)的抗癌藥、治療有效 量的至少一種公認(rèn)的血管生成藥與本發(fā)明可溶性分支的配基多糖結(jié) 合,產(chǎn)生聯(lián)合治療;并將這種聯(lián)合遞送給患者。附圖簡(jiǎn)述圖l顯示20g/L美國(guó)藥典果膠與10mMH2O2、 10mM抗壞血酸、 和各為5mM的二者的組合的消化,表明消化時(shí)間和粘度計(jì)測(cè)量結(jié)果 之間線性關(guān)系;圖2顯示堿金屬硼水化物(borohydrate )中的p-消除導(dǎo)致控制的 鏈斷裂過(guò)程,提供粘度喪失和降低的膠凝性質(zhì);圖3a顯示對(duì)照"空白a"的色譜圖,圖3b顯示目標(biāo)多糖,"標(biāo)準(zhǔn)品 B3a"的色譜圖;圖4顯示商用鼠李半乳聚糖分子量的MALLS結(jié)果;以及圖5顯示鼠李半乳聚糖的Zimm圖。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及化學(xué)可溶的配基分支多糖,具有分子量約50kD至約 200 kD。本發(fā)明也涉及使用本發(fā)明多糖結(jié)合至少一種公認(rèn)的抗癌藥治 療和預(yù)防惡性癌癥的方法。本發(fā)明進(jìn)一步涉及使用本發(fā)明多糖結(jié)合至 少一種公認(rèn)的抗血管生成藥治療和預(yù)防血管生成的方法。此處使用的縮寫(xiě)為PS,多糖;EHS, Eaglebreth-Holm Swarm; DMEM,Dulbecco氏可溶的分支Eagle氏極限必需培養(yǎng)基;CMF-PBS, 無(wú)Ca"和Mg2+的磷酸鹽緩沖鹽水,pH7.2; BSA,牛血清白蛋白; galUA,吡喃半乳糖基糖醛酸,也稱為半乳糖醛酸;和gal,半乳糖; man,甘露糖;glc,葡萄糖;all,阿洛糖;alt,阿卓糖;ido,艾杜 糖;tal,》荅羅糖;gul,古洛糖;和ara,阿拉伯糖;rib,核糖;lyx, 來(lái)蘇糖;xyl,木糖;和fru,果糖;psi,阿洛酮糖;sor,山梨糖;tag, 塔格糖;和rha,鼠李糖;fuc,巖藻糖;quin,異鼠李糖;2-d-rib, 2-脫氧-核糖。當(dāng)在說(shuō)明書(shū)和附隨的權(quán)利要求書(shū)中使用時(shí),除非上下文 另外要求,下列術(shù)語(yǔ)將具有所指明的意義"給藥"指口服、或腸胃外用包括靜脈內(nèi)、皮下、局部、透皮、經(jīng) 粘膜、腹膜內(nèi)的、和肌內(nèi)。"受治療者"指動(dòng)物例如哺乳動(dòng)物,例如人類。本術(shù)語(yǔ)也包括患者。"癌癥治療,,指對(duì)有發(fā)生癌癥的高風(fēng)險(xiǎn)的受治療者以及已經(jīng)發(fā)生腫瘤的受治療者的預(yù)后治療。術(shù)語(yǔ)"治療"能適用于減少或預(yù)防異常的細(xì) 胞增殖、細(xì)胞集合和細(xì)胞分散(轉(zhuǎn)移)至繼發(fā)的位置。"癌癥,,指任何胂瘤性疾病,包括這樣的細(xì)胞病癥,例如,腎細(xì)胞 癌、卡波濟(jì)氏肉瘤、慢性白血病、乳癌、肉瘤、卵巢癌、直腸癌、咽 喉癌、黑素瘤、結(jié)腸癌、膀胱癌、肥大細(xì)胞瘤、肺癌、乳腺癌、咽鱗 狀細(xì)胞癌、和胃腸癌或胃癌。"解聚作用"指發(fā)生多糖主鏈的部分或完全水解作用,例如,當(dāng)多 糖以化學(xué)方法處理時(shí),與原始的多糖相比形成了尺寸減小的片段。"有效劑量"指改善受治療者的癥狀或延長(zhǎng)遭受癌癥或有遭受癌癥 的高風(fēng)險(xiǎn)的受治療者壽命的藥物的劑量。"糖"指任何簡(jiǎn)單的碳水化合物包括單糖、單糖衍生物、單糖類似 物、糖,包括在低聚糖或多糖中形成個(gè)體單元的那些糖。"單糖"指單個(gè)碳水化合物單元;多聚羥基醛(醛糖)或多聚羥基酮(酮醣)和其衍生物和類似物為這樣的實(shí)例。"低聚糖"指直鏈或支鏈的單糖,其包括通過(guò)糖苷鍵連接的最多約40個(gè)糖單元。"多糖"指由彼此通過(guò)半縮醛或糖苷鍵連接的約40個(gè)至約100,000 個(gè)糖單元形成的聚合物。多糖可以為直鏈、單分支的、或多分支的, 其中每個(gè)分支可以有另外的次級(jí)分支,并且單糖可以為標(biāo)準(zhǔn)的D-或 L-環(huán)狀糖,為吡喃糖(6元環(huán))或呋喃糖(5元環(huán))形式,例如分別為D-果 糖和D-半乳糖;或它們可以為環(huán)狀糖衍生物,例如,氨基糖例如D-葡糖胺、脫氧糖例如D-巖藻糖或L-鼠李糖、磷酸糖例如D-核糖-5-磷 酸、糖酸例如D-半乳糖醛酸、或多衍生糖例如N-乙酰-D-葡糖胺、N-乙酰神經(jīng)氨酸(唾液酸)、或N-硫酸根合-D-葡糖胺。"主鏈"意思是指多糖的主要鏈;或者起源于起始多糖的主要鏈的 鏈,具有通過(guò)a或(5糖苷鍵順序地連接的糖部分。主鏈可包含沿著順 序鏈在多個(gè)位置與其連接的另外的單糖部分。"酯化"指在糖的糖醛酸部分的羧酸位置存在曱基酯或其他的酯基。"單糖及其衍生物",在本發(fā)明上下文內(nèi),指任何標(biāo)準(zhǔn)的和可能的 單糖(糖)衍生物,包括但不限于,脫氧單糖、雙脫氧單糖、糖醇、 糖酸、糖酯、糖醚、卣化糖、氨基糖、磷酸糖、吡喃糖和呋喃糖環(huán)狀形式、開(kāi)環(huán)形式、糖的磺酸酯、糖苷衍生物、二醇類、glycolenes、酮 糖、二酮糖、受保護(hù)的糖、縮醛例如亞千基和縮酮例如亞異丙基、硝 基糖、N-乙酰糖、N-乙酰胞壁酸、和抗生素糖例如野艽霉素和二氫野 艽霉素。"抗癌藥",在本申請(qǐng)上下文內(nèi),指顯示有減少癌癥腫瘤或腫瘤細(xì) 胞的大小、發(fā)病率、轉(zhuǎn)移、增殖、發(fā)生、或復(fù)發(fā)的許多化合物中的任 一種,包括但不限于氨魯米特、安吖啶、阿那曲唑、門(mén)冬酰胺酶、 BCG、比卡魯胺、博來(lái)霉素、布舍瑞林、白消安、卡培他濱、卡鉑、 卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、克拉屈濱、氯膦酸鹽、環(huán)磷酰胺、環(huán) 丙孕酮、阿糖胞苷,達(dá)卡巴溱、放線菌素D、柔紅霉素、己烯雌酚、 多西他賽、多柔比星、表柔比星、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、 非格司亭、氟達(dá)拉濱、氟氫可的松、氟尿嘧啶、氟甲睪酮、氟他胺、 吉西他濱、戈舍瑞林、羥基脲、伊達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、伊馬替尼、 a干擾素、伊立替康、來(lái)曲唑、亞葉酸、亮丙立德、左旋咪唑、洛莫 司汀、氮芥、曱羥孕酮、曱地孕酮、美法侖、巰嘌呤、美司鈉、曱氨 蝶呤、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、尼魯米特、奧曲肽、奧沙利鉑、 紫杉醇、帕米膦酸鹽、噴司他丁、普卡霉素、卟吩姆、丙卡巴肼、雷 替曲塞、利妥昔單抗、鏈佐星、他莫昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睪 酮、硫鳥(niǎo)嘌呤、塞替派、托泊替康、曲妥單抗、維曱酸、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng) 春新堿、長(zhǎng)春地辛和長(zhǎng)春瑞濱。"抗血管生成藥",在本申請(qǐng)的意義內(nèi),指在有腫瘤血管生成的受 治療者中顯示抗血管生成效果的任何化合物,并且包括但不限于血 管生成素(ANG)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因 子(bFGF)、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、 腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、腫瘤生長(zhǎng)因子-a(TGF-a)和腫瘤生長(zhǎng)因子 -P(TGF-p)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGF)、血小板衍生的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(PD-ECGF)、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PIGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、 血小板活化因子(PAF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、白細(xì)胞介素-8 (IL-8) 和粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,描述了可溶解的分支的多糖,其具有 糖醛酸糖主鏈或糖醛酯糖主鏈,平均有約每?jī)蓚€(gè)主鏈單元中一個(gè)中性 單糖至每二十五個(gè)主鏈單元中一個(gè)中性單糖與主鏈連接。所獲得的多糖具有至少一個(gè)側(cè)鏈,其包含大部份中性糖類和糖衍生物,通過(guò)約二 十至二十五個(gè)中性單糖中一個(gè)連接到主鏈。本發(fā)明的某些多糖具有至 少一個(gè)糖類側(cè)鏈,其還實(shí)質(zhì)上不含有次級(jí)糖分支,末端糖包含半乳糖、 葡萄糖、阿拉伯糖、或其衍生物。在一個(gè)方面,可溶解的分支多糖可 平均少于每重復(fù)單元約1 ~ 2個(gè)次級(jí)分支。另 一個(gè)方面包括可溶解的配 基分支的多糖部分,其中次級(jí)分支平均少于每重復(fù)單元約0.5~1個(gè)。 又一個(gè)方面,可溶解的分支多糖平均少于每重復(fù)單元約0.25~0.5個(gè)次 級(jí)分支。尤其地,可溶解的分支的多糖平均少于每重復(fù)單元約0~0.25 個(gè)次級(jí)分支。本發(fā)明的其他多糖可具有至少一個(gè)糖類側(cè)鏈,其末端為 由阿魏?;种У目扇芴?。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,可溶解的分支多糖主鏈實(shí)質(zhì)上為去酯 化的產(chǎn)生帶負(fù)電荷的實(shí)體。在一個(gè)方面,將可溶解的分支多糖主鏈去 酯化至小于約1%。在另一個(gè)方面,將可溶解的分支多糖主鏈去酯化 至小于約0.5%。又一個(gè)方面,可溶解的分支多糖主鏈去酯化至小于約 0.25%。再一個(gè)方面,可溶解的分支多糖主鏈去酯化至小于約0.1%。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中,可溶解的分支多糖能由化學(xué)修飾天然 存在的聚合物而制得。化學(xué)修飾之前,天然的多糖分子量可為約40, 000 ~1, 000, 000,具有多分支的糖類,例如由l至20個(gè)單糖如葡萄 糖、阿拉伯糖、半乳糖組成的分支。這些分支通過(guò)中性單糖例如鼠李 糖連接至主鏈。這些分子可進(jìn)一步包括一個(gè)主鏈或糖醛酸糖主鏈的鏈, 其被酯化少至約2%至多達(dá)約30%。多分支自身可具有多個(gè)糖分支, 次級(jí)多分支任選地包括中性糖類和中性糖衍生物,因此產(chǎn)生主要疏水 性實(shí)體。多糖和抗癌藥/抗血管生成藥的有效劑量和劑量方案為變量的函 數(shù),例如為受治療者的年齡、體重、醫(yī)療史和其他被認(rèn)為相關(guān)的變量 的函數(shù)。劑量和劑量方案是基于可溶的分支多糖成分和抗癌藥/抗血管 生成藥的分子量(不考慮可消化的載體)。通常的方案可由每千克受治療者體重約10至約IOOO克的每日劑量組成。可溶解的分支多糖和抗癌藥/抗血管生成藥的劑量還依賴于被治療的疾病狀態(tài)或情況以及 其他的臨床因素例如患者的體重與身體健康狀況和給藥的方式。根據(jù) 特定受治療者中可溶解的分支多糖和抗癌藥/抗血管生成藥的半衰期, 可以每日數(shù)次至每周一次給予任一或兩種試劑。(應(yīng)該理解本發(fā)明具有 人用和獸用兩種應(yīng)用)。本發(fā)明方法考慮單次以及多次共同給藥,從每24小時(shí)約10 ~約1000 g/kg到每6小時(shí)約2.5~ 250g/kg,同時(shí)給予或 者在延長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)給予?;瘜W(xué)可溶的分支多糖和已知的抗癌藥/抗血管生成藥可制成用于單 獨(dú)或者共同口服給藥的制劑。給藥的其他方法包括眼的(包括玻璃體 內(nèi)的或眼內(nèi))、鼻的、局部的(包括頰的和舌下的)、皮內(nèi)的、氣管內(nèi) 的、和硬膜外的、透皮的、腹膜內(nèi)的、顱內(nèi)的、腦室內(nèi)的、大腦內(nèi)的、 陰道內(nèi)的、子宮內(nèi)的、直腸的和腸胃外的(包括靜脈內(nèi)、推管內(nèi)的、 皮下或肌內(nèi))方法??蛇x擇地,可將可溶解的分支多糖和已知的抗癌 藥/抗血管生成藥摻入植入的生物可降解的聚合物中,使得化合物持續(xù) 釋i文(Brem等,J. Neurosurg, (1991), vo1.74, pp.441畫(huà)446,在A匕引入 其全部教導(dǎo)作為參考)。聚合物被植入于期望藥物遞送的附近,例如,腫瘤位置附近;或被植入以便可溶的分支多糖緩慢地系統(tǒng)釋放。滲透 微泵也可用于提供高濃度的可溶的分支多糖通過(guò)管狀控釋至目標(biāo)部 位,例如直接進(jìn)入該腫瘤的轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)中或進(jìn)入該腫瘤的維管聯(lián)結(jié)中。制劑可以方便地以單位劑型存在并可由常規(guī)的制藥技術(shù)制得。這 樣的技術(shù)包括使活性成分和藥物載體和賦形劑結(jié)合的步驟。通常,制 劑制備如下密切地和均勻地將活性成分和液體載體,或細(xì)粉碎的固 體栽體,或兩者結(jié)合,然后,必要的話,使產(chǎn)品成型。適合的可消化的藥物載體包括明膠膠嚢,其中多糖以干燥形式裝入膠嚢;或片劑,其中多糖與羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、硬 脂酸鎂、微晶纖維素、丙二醇、硬脂酸鋅和二氧化鈦和其他適當(dāng)?shù)恼?合劑和添加劑混合。組合物也可制成液體,使用蒸餾水、調(diào)味劑和某 些糖或甜味劑作為可消化的載體,制備在受治療者使用時(shí)口味令人愉 快的組合物。持續(xù)釋放基質(zhì),當(dāng)此處使用時(shí),是由材料通常為聚合物制成的基 質(zhì),聚合物通過(guò)酶解或酸/堿水解或通過(guò)解離降解。 一旦被插體內(nèi),酶 和體液作用于該基質(zhì)。期望持續(xù)釋放基質(zhì)選自生物相容性材料例如脂 質(zhì)體,聚丙交酯(聚乳酸),聚乙交酯(羥乙酸聚合物),聚丙交酯共 -乙交酯(乳酸和羥乙酸的共聚物),聚酐,聚(原)酯,多肽,透明 質(zhì)酸,膠原,硫酸軟骨素,羧酸,脂肪酸,磷脂,多糖,核酸,多氨 基酸,氨基酸例如苯丙氨酸、酪氨酸、異亮氨酸,多核苷酸,聚乙烯 丙烯,聚乙烯吡咯烷酮和硅酮。生物可降解的基質(zhì)為下列之一的基質(zhì) 聚丙交酯、聚乙交酯、或聚丙交酯共-乙交酯(乳酸和羥乙酸的共聚物)。本發(fā)明調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移的治療組合物可以為固體、液體或氣霧劑,并可 由任何已知的給藥途徑給予。固體治療組合物的實(shí)例包括丸劑、乳青、 和可植入的劑量單位。丸劑可以口服給予;治療乳骨可以局部施用。 可植入的劑量單位可以局部施用,例如在腫瘤位置;或者可以為了治 療性血管生成調(diào)節(jié)組合物的系統(tǒng)釋放而被植入,例如皮下植入。液體 組合物的實(shí)例包括適于皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)注射的制劑,以及用于 局部和眼內(nèi)給藥的制劑。氣霧劑的實(shí)例包括用于給藥至肺的吸入制劑。適于腸胃外給藥的制劑包括水和非水的無(wú)菌的注射液,其可含有 抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和能賦予制劑與計(jì)劃的接受者血液等滲的 溶質(zhì);以及水和非水的無(wú)菌的混懸劑,其可以包括懸浮劑和增稠劑。 制劑可以存在于單位劑量或多劑量容器中,例如密封安瓿和小藥瓶中, 并可以在冷凍干燥的(凍干的)條件貯存,其僅僅要求立即使用前添 加無(wú)菌液體載體,例如注射用水。臨時(shí)的注射液和混懸液可以由先前 描述的那類無(wú)菌粉劑、顆粒劑和片劑制備??山邮艿膯挝粍┝恐苿槟切┌o藥成分的日劑量或單位、日分劑量、或其適當(dāng)?shù)牟糠值闹苿?應(yīng)當(dāng)理解,關(guān)于正在討論的制劑類 型,除成分,尤其上述提及的成分之外,本發(fā)明制劑包括本領(lǐng)域常規(guī) 的其他的試劑)。任選地,可將細(xì)胞毒性劑摻入或以其它方式與血管生 長(zhǎng)抑素蛋白質(zhì),或其生物學(xué)功能肽片段組合,提供給患者雙重治療。 用于給予本領(lǐng)域眾所周知的治療劑的其他制劑也可以被使用。 在一個(gè)方面,本發(fā)明多糖制劑與已知的癌癥藥物共同給藥,其中 已知的抗癌癥藥物的治療劑量為本領(lǐng)域已知的有效抗癌劑量。例如,5-FU可以以100 ~ 1000 mg/m2/天給予或紫杉醇可以以50 ~ 300 mg/mV天的劑量給予。當(dāng)抗癌藥,例如5-FU和紫杉醇,聯(lián)合20 ~ 300mg/m2劑量的多糖使用時(shí),在生有腫瘤的動(dòng)物中觀察到的結(jié)果最 好。特別地,在具有結(jié)腸腫瘤的嚙齒類動(dòng)物中,這種聯(lián)合治療形式與 沒(méi)有治療的對(duì)照組相比較,觀察到有最高達(dá)80%的改善。最近的證據(jù)表明,可溶的分支多糖碳水化合物結(jié)構(gòu)可能具有抗血 管生成活性,抑制血管生成因子誘導(dǎo)的血管生成,這些是使用CAM 測(cè)定法、角膜新生血管形成測(cè)定法(Gimbrone等,1974, J.Natl.Cancer Inst.52:413- 427,在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)和本領(lǐng)域已知的其他 類似的測(cè)定法所測(cè)定的。因此,可溶的分支多糖與抗血管生成因子和 抗癌藥的共同給藥具有協(xié)同作用。特別地,本方法涉及腎癌、肉瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤、慢性白血病、 乳癌、乳腺癌、卵巢癌、直腸癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、前列腺癌、黑素 瘤、肥大細(xì)胞瘤、肺癌、咽喉癌、咽鱗狀細(xì)胞癌和胃腸癌或胃癌。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解,本發(fā)明方法可以用于其他的癌癥。此處描述的是,使用控制時(shí)間、溫度和緩沖劑的條件,創(chuàng)造想得 到的多糖的化學(xué)修飾程序。程序包括過(guò)氧化物/抗壞血酸裂開(kāi)聚合物主 鏈中的糖苷鍵(參見(jiàn),實(shí)施例1),堿性還原的解聚作用(參見(jiàn),實(shí)施例 2),或控制解聚成更小的分支多糖分子(參見(jiàn),實(shí)施例3)。首先的提純 操作為用堿和/或螯合溶液提取多糖除去蛋白質(zhì)、色素和其他的雜質(zhì)。為了證明化學(xué)上可溶的分支多糖與公認(rèn)的抗癌藥共同給藥的效 力,進(jìn)行了大量的體外(參見(jiàn),實(shí)施例5)和體內(nèi)(參見(jiàn),實(shí)施例6)試驗(yàn)。通過(guò)使用癌細(xì)胞系(其在培養(yǎng)基中正常地聚集,但是在本發(fā)明多 糖存在下保持分散)顯示抑制轉(zhuǎn)移。抑制轉(zhuǎn)移也由轉(zhuǎn)移測(cè)定法得到證明,其中MLL細(xì)胞提高了其細(xì)胞表面上半乳凝素-3的水平,因?yàn)榘?乳凝素-3與腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞粘附相關(guān)。脊推動(dòng)物的半乳糖苷-結(jié)合凝集素存在于多種組織和細(xì)胞中。凝 集素根據(jù)其大小分成兩種豐富的類型。分子量約14kD凝集素被指定 為半乳凝素-1和分子量約30kD那些被指定為半乳凝素-3。半乳凝素 -3表示一系列分子,包括鼠34kD(mL-34)和人31 kD(hL-31)腫瘤相關(guān) 的半乳糖苷-結(jié)合集素,35kD成纖維細(xì)胞糖結(jié)合蛋白(CBP35), IgE 結(jié)合蛋白(cBP), 32 kD巨噬細(xì)胞非整連蛋白層粘連蛋白結(jié)合蛋白 (Mac-2),以及大鼠、小鼠和人類形式的29 kD半乳糖苷-結(jié)合凝集素 (L-29)。分子克隆研究顯示這些多肽為相同的。半乳凝素-3通過(guò)活化的巨噬細(xì)胞高度表達(dá)并在轉(zhuǎn)移細(xì)胞中致瘤性 轉(zhuǎn)化。許多癌癥細(xì)胞,包括MLL細(xì)胞,在其細(xì)胞表面上表達(dá)半乳凝 素-3,并且其表達(dá)牽涉腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移進(jìn)程。多肽表達(dá)升高與不依賴 于貼壁生長(zhǎng)、同型聚集和腫瘤細(xì)胞肺建群的能力增加相關(guān),這提示半 乳凝素-3促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在循環(huán)中形成栓塞和增強(qiáng)轉(zhuǎn)移。腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞 粘附被認(rèn)為是轉(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵事件。以高親和力與含聚-N-乙酰乳糖的碳水化合物側(cè)鏈結(jié)合。層粘連蛋白,基底膜的主要非膠原成分,為 栽有聚-N-乙酰乳糖胺序列的N-連接的糖蛋白,并涉及細(xì)胞粘附、遷 移、生長(zhǎng)、分化、侵入和轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞能通過(guò)細(xì)胞表面半乳凝素-3與糖蛋白的碳水化合物殘基 相互作用,并且這可能與其與瓊脂糖(D-半乳糖和L-無(wú)水半乳糖的聚 合物)半乳糖殘基相互作用的能力和提供該半固體培養(yǎng)基中細(xì)胞增殖 所需要的最小支持的能力相關(guān)。抗半乳凝素-3單克隆抗體能抑制瓊脂 糖中腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。此外,用小鼠半乳凝素-3cDNA轉(zhuǎn)染正常小鼠 成纖維細(xì)胞導(dǎo)致不依賴貼壁生長(zhǎng)。參考實(shí)施例l,在此報(bào)道的多糖體 內(nèi)結(jié)果與早先在人前列腺癌組織上用半乳凝素-3完成的研究(美國(guó)專利第5,895,784號(hào),在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)一致。此處描述的多糖,當(dāng)與抗癌藥聯(lián)合用于共同給藥時(shí),在人類中抗 轉(zhuǎn)移效果中提供遞送、靼向和全面正面的改善。實(shí)施例實(shí)施例1:通過(guò)過(guò)氧化物/抗壞血酸的斷裂修飾天然存在的多糖 將原始多糖用U.V.輻射處理或混懸于70%酒精中處理約48小時(shí), 以減少微生物污染。隨后的所有步驟在半無(wú)菌的條件下進(jìn)行。照射后, 將多糖慢慢溶于蒸餾水中,并通過(guò)苯酚硫酸法測(cè)定總碳水化合物的量 (Fidler等,Cancer Res., (1973), vol. 41, pp. 3642-3956,在此引入 其全部教導(dǎo)作為參考)。在蒸餾水中使用20g/L多糖,例如美國(guó)藥典果膠(Pelco)制備溶液, 并用1 M琥珀酸鈉將pH調(diào)節(jié)至pH5.5。然后將多糖溶液在固定的溫 度,例如Z0。C下孵育,并且一起加入(

圖1)或順序加入過(guò)氧化物和/ 或抗壞血酸。10 mMpH5.5的11202促進(jìn)美國(guó)藥典果膠緩慢地?cái)嗔选J固囟?動(dòng)性加倍所需求的一半時(shí)間為15士72h(圖1)。L-抗壞血酸在相同條件 和濃度下引起更快地?cái)嗔?。然而,最引人注目的效果是?mM抗壞 血酸和5mMH202的聯(lián)用產(chǎn)生的,其引起甚至更快的斷裂。向已經(jīng)含 有恰好lmMH202的多糖溶液中順序加入抗壞血酸,引起進(jìn)一步刺激 斷裂。加入的抗壞血酸劑量、11202加入后加入的時(shí)間、pH和溫度決 定斷裂的速度和程度。這些因素表明最初反應(yīng)在斷裂過(guò)程前進(jìn)行。 pH4.5產(chǎn)生最短的滯后和最大的斷裂速度。因此,抗壞血酸的增強(qiáng)效 果依賴于反應(yīng)生產(chǎn)的11202或脫氫抗壞血酸AH2 + 02 — A + H202或AH2 + H202 — A + 2H20其中,AHz為抗壞血酸;A為脫氫抗壞血酸子如Ca++、 01++或Fe"存在下可以進(jìn)一步 提高。最有可能的裂解源為Fenton反應(yīng)(Halliwell, B.和Gutteridge, J.M.C.(1990) Methods EnzymoU86, 1-85,在此引入其全部教導(dǎo)作為 參考),其產(chǎn)生離子化的OH,并要求有11202和還原形式的過(guò)渡金屬 離子。據(jù)報(bào)道Cu+比Fe"更有效60倍。Cu+ + H202 — OH+ OH + Cu2+大多數(shù)多糖樣品包含可測(cè)量痕量的ppm水平的Fe、 Cu和Zn。 數(shù)種商業(yè)多糖中的Cu和Fe的含量相似(如同在他們的A之C中報(bào) 道),相似分析等級(jí)的抗壞血酸含有低ppm痕量的Cu和Fe。因此, 當(dāng)沒(méi)有故意加入過(guò)渡金屬時(shí),F(xiàn)enton反應(yīng)仍然是可行的。實(shí)施例2:通過(guò)堿性還原解聚作用修飾天然存在的多糖用例如3NNaOH將多糖溶液的pH增加到pH 10。在5 50。C下 短期孵育30~60分鐘后,加入10至20 %乙醇,將純化過(guò)的多糖沉淀。 這除去了伴隨多糖的蛋白質(zhì)和色素。然后將多糖溶解為20g/L并加入 酸。例如,終濃度0.01 ~ 1.0 M三氟醋酸證明了產(chǎn)生控制的解聚作用。 其他的酸或它們的組合,例如硫酸、HCI、醋酸、丙酸、或曱磺酸, 可以用于縮短水解時(shí)間和提高期望結(jié)構(gòu)的分支多糖的產(chǎn)率而沒(méi)有氧 化。適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔后,例如,時(shí)間過(guò)程從10分鐘至48小時(shí),在溫 度15。C至121。C下,將溶液中和至pH3 5,冷卻至4。C并離心除去任 何不溶解的物質(zhì)。然后將上清液用1NNaOH(例如)中和至最終pH 約6.0~8.0,并加入20%乙醇以回收可溶的多糖。選擇多糖與酸的比 例、酸的類型、濃度、pH、溫度和時(shí)間間隔,產(chǎn)生可溶的分支多糖, 其分子量為50kD、 60kD、 75kD、 90 kD、 105 kD、 125 kD、 150 kD、 175 kD、和最高達(dá)200 kD。所獲得的可溶的分支多糖產(chǎn)物可以進(jìn)一步用70%乙醇或用100%丙酮洗滌,得到最終干燥的粉末。此后,將可溶的分支多糖重溶于水中,至按重量計(jì)約5~ 15%的終濃度,用于分析鑒別、功效、和/或毒 理學(xué)研究??扇艿姆种Ф嗵强梢赃M(jìn)一步稀釋,用于根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方 案使用,其中可以提供給細(xì)胞0.01~10%濃度,取決于期望可溶的分 支多糖組成和分子量。實(shí)施例3:通過(guò)控制的解聚作用修飾天然存在的多糖將多糖溶液的pH用例如3NNaOH增加到pH 9。在5 50。C下短 期孵育30~60分鐘后,加入10%乙醇,將純化過(guò)的多糖沉淀。這除 去了伴隨多糖的蛋白質(zhì)和色素。然后加入還原劑,例如氫硼化鈉、硼 水化鋰、氰基硼氫化鈉、三乙酰氧基硼氫化鈉或其他的硼水化鹽,以 通過(guò)糖苷鍵的堿還原機(jī)理產(chǎn)生斷裂。這形成大小相當(dāng)于重復(fù)的子單元 的片段(美國(guó)專利第5,554,386號(hào),在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)。改變溫度和時(shí)間可以縮短水解時(shí)間和提高多糖的產(chǎn)率。適當(dāng)?shù)臅r(shí) 間間隔后,例如,時(shí)間過(guò)程從30分鐘至24小時(shí),在溫度25r至75。C 下,將溶液冷卻至4'C并離心除去任何不溶解的物質(zhì)。然后將上清液 用1NHC1(例如)中和至最終pH約6.0,并加入20%乙醇以回收可 溶的多糖。選擇多糖與還原劑的比例、試劑的類型、濃度、pH、溫度 和時(shí)間間隔,產(chǎn)生可溶的分支多糖,其分子量為50 kD、 60 kD、 75 kD、 90kD、 105 kD、 125 kD、 150 kD、 175 kD、和最高達(dá)200 kD。所獲得的可溶的分支多糖產(chǎn)物可以進(jìn)一步用20~70%乙醇和最后 用100。/。丙酮分級(jí)分離,得到最終干燥的粉末。此后,可溶的分支多 糖重溶于水中,至按重量計(jì)約5~15%的終濃度,用于分析鑒別、功 效或毒理學(xué)研究??扇艿姆种Ф嗵强梢赃M(jìn)一步稀釋,供根據(jù)本發(fā)明實(shí) 施方案使用,其中可以提供給細(xì)胞0.01~10%濃度。依期望可溶的分 支多糖組成和分子量。當(dāng)溫度(或pH)增加時(shí),所謂的p-消除開(kāi)始(圖2)。堿金屬硼水化 物的(5-消除導(dǎo)致控制的鏈斷裂過(guò)程,提供粘度和膠凝性質(zhì)喪失,其用 來(lái)監(jiān)測(cè)反應(yīng)。實(shí)施例4:通過(guò)HPLC/IR-MALLS定量和分子量使用多糖HPLC洗脫圖的雙重監(jiān)測(cè)提供多糖的兩個(gè)重要化學(xué)技術(shù)指標(biāo)由折光率信號(hào)進(jìn)行定量測(cè)量和由多角度激光散射(MALLS)檢測(cè)器確定絕對(duì)分子量。圖3顯示兩個(gè)色譜圖,用于比較的目的。"空白a"為對(duì)照;"標(biāo)準(zhǔn)品B3a"顯示目標(biāo)多糖。以8 mg/mL注入30jU,使用的系統(tǒng)如下柱Phenomenex, Polysep GFC,和50mM醋酸鹽、0.1 MNaCl、 pH5.0的流動(dòng)相,流速lmL/min。此外,這些色謙圖可提供關(guān)于多糖分子穩(wěn)定性和斷裂衍生物的數(shù)據(jù)。使用凝膠滲透色譜法(GPC)分離技術(shù)(也稱大小排阻色i普法-SEC)的高效液相色譜法(HPLC)為表征聚合物的已建立完善的技術(shù)。GPC聯(lián)合多角度激光散射(MALLS)和折光率(R1)檢測(cè)為強(qiáng)有力的測(cè)定聚含碳水化合物絕對(duì)分子量的工具。光散射檢測(cè)的應(yīng)用消去GPC系統(tǒng)耗時(shí)的構(gòu)象依賴校準(zhǔn)的必需性。GPC-MALLS相對(duì)于經(jīng)典GPC的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)為除分子量之外,還可跟蹤關(guān)于輻射線和溶液中構(gòu)象的附加信 每GPC-MALLS方法的原理是基于大分子比小分子使光線產(chǎn)生更強(qiáng) 的散射。色譜法運(yùn)行期間,MALLS檢測(cè)器用位于十五不同角度檢測(cè) 器測(cè)量激光束的光散射程度。光散射檢測(cè)器的輸出量與大分子的濃度 和分子量的乘法成比例。因此,光散射峰的形狀是不對(duì)稱的。此外, 它與RI峰不一致,因?yàn)镽I檢測(cè)器信號(hào)只與濃度成比例(圖3)。在任 何洗脫時(shí)間,從柱中洗脫出的聚合物分子量可以由MALLS和RI信 號(hào)的商計(jì)算。制得分子量對(duì)洗脫體積的曲線圖,并且可以計(jì)算(平均) 分子量和分子量分布。Pro-Pharmaceuticals和他們的合約GMP i殳施已經(jīng)適應(yīng)了 GPC /IR-MALLS技術(shù),以在整個(gè)R&D和擴(kuò)大規(guī)模階段中定量藥品物質(zhì)和 表征分子量平均數(shù)和分布;并最終將它摻入藥品物質(zhì)結(jié)構(gòu)證據(jù)中,作 為藥品分析操作規(guī)程證明書(shū)的 一部分。使用MALLS對(duì)多糖進(jìn)行分析消除了許多"經(jīng)典GPC,,干擾MW估算值的因素。GPC分離是基于流體力學(xué)體積的不同而不是分子量的不 同。分子構(gòu)象的不同,例如葡聚糖的分支,可以強(qiáng)烈地影響流體力學(xué) 體積。其次,帶正電荷或帶負(fù)電荷的聚合物的GPC洗脫可能是非理 想的,因?yàn)楣潭ㄏ嗟某饬蛭?。相反地,GPC-MALLS的結(jié)果不 受這些色譜法缺點(diǎn)的影響,并能夠獲得絕對(duì)分子量。如果聚合物傾向 于聚集,在多糖的不同濃度下使用多次測(cè)量能夠估計(jì)絕對(duì)分子量。圖 4顯示商業(yè)鼠李半乳聚糖分子量的MALLS結(jié)果。圖5顯示鼠李半乳 聚糖的Zimm圖。實(shí)施例5:體外試驗(yàn)-多糖同抗癌藥或進(jìn)一步聯(lián)合抗血管生成藥 除非另外說(shuō)明,以下試驗(yàn)均使用本發(fā)明可溶的分支多糖進(jìn)行。測(cè) 試了不同大小的分子,從50kD、 60kD、 75 kD、 90kD、 105 kD、 125 kD、 150 kD、 175 kD直到200 kD。生理溶劑中以w/v計(jì)的可溶的分 支多糖的量在O.Ol %~1% w/v變化。對(duì)照包括單用多糖,不含另外 試劑、不溶的分支多糖;半乳糖-、阿拉伯糖-或阿魏酰基-取代的單糖; 和單用抗癌藥,單用抗血管生成藥;抗癌藥和可溶的分支多糖;抗血 管生成藥和可溶的分支多糖;和在沒(méi)有可溶的分支多糖存在下抗癌藥 同抗血管生成藥。進(jìn)行CAM試驗(yàn)、角膜新生血管形成測(cè)定和本領(lǐng)域 已知的適當(dāng)測(cè)定(Gimbrone等,1974, J. Natl.Cancer Inst.52:413-427, 在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)。 層粘連蛋白粘附試驗(yàn)已經(jīng)建立了腫瘤細(xì)胞體外經(jīng)歷同型聚集的傾向與它們體內(nèi)轉(zhuǎn)移的 潛在性之間相關(guān)性。i.v.注射后B16黑色素瘤細(xì)胞簇比單細(xì)胞產(chǎn)生更多 的肺群體。而且,抗-半乳凝素-3抗體已經(jīng)顯示抑制無(wú)唾液酸胎球蛋白 誘導(dǎo)的同型聚集(Fidler, I.J., (1970) J. Natl. Cancer Inst., 45:77,在 此引入其全部教導(dǎo)作為參考),提示細(xì)胞表面半乳凝素-3多肽在它們與 糖蛋白側(cè)鏈相互作用后產(chǎn)生了同型聚集物生成。在B16-F1鼠黑色素瘤細(xì)胞粘附試驗(yàn)中,在抗癌藥存在下,測(cè)試了 可溶的分支多糖控制細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用的能力,這包括測(cè)量細(xì)胞粘附到涂布基質(zhì)的層粘連蛋白的變化和無(wú)唾液酸胎球蛋白誘導(dǎo)的牽涉半乳凝素-3的同型聚集的抑制。B16-F1系(低肺建群的發(fā)生 率)來(lái)自靜脈內(nèi)注射B16黑色素瘤細(xì)胞引起的肺轉(zhuǎn)移(Lotan, R.等, Int.J.Cancer, (1994), vo1.56, pp.l-20,在此引入其全部教導(dǎo)作為參 考)。可試驗(yàn)的其他細(xì)胞系包括UV-2237-10-3鼠纖維肉瘤細(xì)胞、HT 1080人纖維肉瘤細(xì)胞和A375人黑色素瘤細(xì)胞。細(xì)胞以單層生長(zhǎng)在Dulbecco,s氏可溶的分支Eagle氏極限必需培 養(yǎng)基(DMEM)中的塑料上,其補(bǔ)充了谷氨酰胺、必需氨基酸、維生 素、抗生素和10%熱滅活胎牛血清(FCS 10%)。細(xì)胞維持在37。C增 濕的7%<:02、 93%空氣的氣氛中。為確??芍噩F(xiàn)性,所有的實(shí)驗(yàn)應(yīng) 該用原種回收后生長(zhǎng)不超過(guò)六個(gè)星期的培養(yǎng)物進(jìn)行。層粘連蛋白(EHS層粘連蛋白)可購(gòu)自Sigma, St丄ouis, Missouri, 并且根據(jù)本發(fā)明可溶的分支多糖依照上述的操作制備。無(wú)唾液酸胎球 蛋白可由胎球蛋白制備,胎球蛋白可由Gibco實(shí)驗(yàn)室得到。依照Spire; Grand Island Biological Co., Grand Island.N.Y.的方法,在80。C下4吏 用0.05NH2S04使胎球蛋白經(jīng)受緩和的酸水解作用一個(gè)小時(shí)。通過(guò)透 析將釋放的唾液酸從胎球蛋白中除去。在4。C下在pH 7.2無(wú)Ca"+和Mg2+的磷酸鹽緩沖鹽水(CMF-PBS) 中用EHS層粘連蛋白(2 g/孔),將96-孔板的組織培養(yǎng)孔預(yù)先涂漬過(guò)夜, 并在室溫下用CMF-PBS中的10/。牛血清白蛋白(BSA)將剩余的蛋白結(jié) 合位置封閉2小時(shí)。用CMF-PBS中的0.02% EDTA采集細(xì)胞并用無(wú) 血清的DMEM將細(xì)胞懸浮。將總計(jì)5xl0"細(xì)胞加至的DMEM中的每 個(gè)孔,DMEM含或不含:1)可溶的分支多糖和抗癌藥;2)不同濃度的可 溶的分支多糖與不變劑量的抗癌藥;或3)不變濃度的可溶的分支多糖 與不同劑量的抗癌藥。在37。C孵育2小時(shí)15分鐘后,用CMF-PBS 將非粘附細(xì)胞洗掉,用甲醇和將粘附細(xì)胞固定并照相,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序 測(cè)定粘附細(xì)胞的相對(duì)數(shù)(Zollner, T.等,Anti-cancer Research, (1993), vol.13, pp.923-930,在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)。用亞甲藍(lán)將細(xì) 胞染色,接著加入HCI-乙醇以釋放染料,然后由板閱讀器測(cè)量光學(xué)密度(650 m)。用CMF-PBS中的0.02% EDTA將細(xì)胞分離并以lx106細(xì)胞/mL 的濃度將其混懸于CMF-PBS中,CMF-PBS含或不含20 g/mL無(wú)唾液 酸胎球蛋白和0%~0.5%可溶的分支多糖或0%~0.5%可溶的分支 多糖。然后將含0.5 mL細(xì)胞懸液的等分試樣置于硅化玻璃管中并在 37。C以80rpm攪動(dòng)60分鐘。然后用含1%曱醛的CMF-PBS固定細(xì) 胞使聚集終止。樣品被用于計(jì)算單細(xì)胞數(shù)目,根據(jù)以下方程式計(jì)算所 獲得的聚集(1-Nt/Ne)xl00,其中Nt和Ne分別表示在測(cè)試化合物存 在下和在對(duì)照緩沖液(CMF-PBS)中的單細(xì)胞的數(shù)目。結(jié)合半乳凝素-3的多糖通過(guò)無(wú)唾液酸胎球蛋白親和性柱由一步純化也可以從細(xì)菌細(xì)胞中 提取重組半乳凝素-3。使用前將由乳糖洗脫的重組半乳凝素-3用 CMF-PBS深入透析。辣根過(guò)氧化物酶(HRP)-綴合兔抗大鼠IgG+IgM 和2,2,-連氮基-雙(3-乙基苯并噢唑啉磺酸,ABTS)底物試劑盒可以購(gòu) 自Zymed, South San Francisco, CA。如上所述的,B16-F1鼠黑色 素瘤細(xì)胞作為培養(yǎng)物生長(zhǎng)在Dulbecco氏可溶的分支Eagle氏極限必需 培養(yǎng)基(DMEM)中。用含0.5% MCP和1% BSA的CMF-PBS涂漬96-孔板的組織培 養(yǎng)孔并干燥過(guò)夜。加入用含0.5% BSA和0.05%吐溫20的 CMF-PBS(溶液A),在50 mM乳糖存在或缺失下,連續(xù)稀釋的重組半 乳凝素-3,并孵育120分鐘,此后將孔引流并用含0.1% BSA和0.05% 吐溫20的CMF-PBS(溶液B)洗滌。將溶液A中的大鼠抗半乳凝素-3 加入并孵育60分鐘,隨后用溶液B洗滌并用溶液A中的HRP-綴合兔 抗大鼠IgG+IgM孵育30分鐘。洗滌后,通過(guò)加入ABTS確定每個(gè)孔 中綴合的結(jié)合酶的相對(duì)量。在405 n測(cè)量水解程度。用CMF-PBS中的0.02% EDTA將細(xì)胞分離并以lx103細(xì)胞/mL 將其混懸于完全DMEM中,DMEM含或不含:l)可溶的分支多糖和抗 癌藥;2)不同濃度的可溶的分支多糖與不變劑量的抗癌藥;或3)不變濃度的可溶的分支多糖與不同劑量的抗癌藥。在37。C將細(xì)胞孵育30 分鐘,然后以l:l(v/v)與45""C下預(yù)熱的1%瓊脂糖的蒸餾水-完全的 DMEM(1:4, v/v)的溶液混合。然后將混合物的2-L等分試樣置于直 徑為6-cm孤中的1%瓊脂糖預(yù)制層上面。在37。C將細(xì)胞孵育14天, 并在加入2.6%戊二醛(gluteraldehyde )的CMF-PBS固定后,使用 反相顯微鏡測(cè)定形成群體的數(shù)目。也可以進(jìn)行利用可溶的重組半乳凝素-3和抗-Mac-2單克隆抗體 的竟?fàn)幮越Y(jié)合試驗(yàn),以比較它們(或缺少它們的)對(duì)細(xì)胞粘附至層粘連 蛋白的影響,因此提供部分洞察可溶的分支多糖聯(lián)合抗癌藥在這點(diǎn)上 是如何能起作用的。半乳凝素-3異型的聚集轉(zhuǎn)移試驗(yàn)MAT-LyLu (MLL)亞系為快速生長(zhǎng)的不良分化的腺癌細(xì)胞系。研 究了在可溶的分支多糖存在或缺失下鉻標(biāo)記的MLL細(xì)胞對(duì)大鼠主動(dòng) 脈內(nèi)皮(RAE)細(xì)胞的匯合單層的粘附。首先,將MLL和RAE細(xì)胞生 長(zhǎng)于用10%胎牛血清補(bǔ)充的RPMI 1640培養(yǎng)基中。使RAE細(xì)胞在組 織培養(yǎng)孔中生長(zhǎng)到匯合。在37。C下將總計(jì)2.4xl06MLL細(xì)胞與5 CiNa5Cr04在2 mL含0.5%牛血清白蛋白(BSA)的無(wú)血清培養(yǎng)基中 孵育30分鐘。廣泛地洗滌后,將每孔lxl03MLL細(xì)胞一式四份加至 RAE細(xì)月包單層。在4。C下在缺失或存在獨(dú)立改變濃度的組合可溶的分支多糖和抗 癌藥下MLL細(xì)胞附著90分鐘,然后將其評(píng)價(jià)如下。在冷磷酸鹽緩沖 鹽水中將細(xì)胞洗3次,除去非結(jié)合的細(xì)胞,然后在37。C用0.1 NNaOH 溶解30分鐘,此時(shí)使用P-射線計(jì)數(shù)器測(cè)定每個(gè)孔中的放射性。監(jiān)測(cè) 在缺失或存在獨(dú)立改變濃度的可溶的分支多糖聯(lián)合抗癌藥下,MLL細(xì) 胞與RAE細(xì)胞的匯合單層附著的時(shí)間過(guò)程??蛇x擇地,在本試驗(yàn)的另一種變體中,通過(guò)熒光法監(jiān)測(cè)MLL細(xì)胞 對(duì)RAE細(xì)月包的粘附。首先,為了熒光標(biāo)記細(xì)胞,將lxl0SMLL在0.1% FITC中孵育30分鐘。廣泛地洗滌后,將細(xì)胞加至含RAE細(xì)胞單層的0.5% BSA中。添加獨(dú)立改變濃度的可溶的分支多糖和抗癌藥的聯(lián) 合物達(dá)30或60分鐘。然后將培養(yǎng)物洗滌,除去非粘附細(xì)胞,并以熒 光測(cè)量結(jié)果為基礎(chǔ)評(píng)價(jià)粘附水平或非粘附。為了處理可溶的分支多糖與半乳凝素-3的結(jié)合,應(yīng)用了酶聯(lián)免疫 吸附測(cè)定法。這確定了重組半乳凝素-3是否能夠以劑量依賴性方式結(jié) 合被固定的可溶的分支多糖,以及結(jié)合(如果它發(fā)生)是否能夠被乳 糖阻斷。如此測(cè)定法的結(jié)果可用于評(píng)價(jià)根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合抗癌藥共同 給予的可溶的分支多糖對(duì)同型聚集的抑制效果。為了測(cè)定與抗癌藥聯(lián)合的可溶分支多糖對(duì)在0.5%瓊脂糖上的 MLL集落生成的效果,首先用含0.02% EDTA的無(wú)Ca"和Mg2+的 (CMF)-PBS將MLL細(xì)胞從培養(yǎng)單層中分離,并以4xl03細(xì)胞/mL將 其混懸于完全的RPMI中-含或不含不同濃度的可溶的分支多糖。在 37。C將細(xì)胞孵育30分鐘,然后以l:l(v/v)與預(yù)熱至45。C的含1%瓊脂 糖的RPMI l:4(v/v)的溶液混合。其次,將該混合物的2-mL等分試樣 置于直徑為6-cm的皿中的1%瓊脂糖預(yù)制層上面。在37。C將細(xì)胞孵育 8天,固定,計(jì)數(shù)并照相。相差顯微照片被制得,用來(lái)展現(xiàn)在有或沒(méi) 有0.1% (w/v)可溶的分支多糖與抗癌藥的組合下MLL細(xì)胞生長(zhǎng)。在體外可以進(jìn)行類似的實(shí)驗(yàn),以研究可溶的分支多糖聯(lián)合抗癌藥 對(duì)培養(yǎng)單層中MLL細(xì)胞生長(zhǎng)速率的影響,并且結(jié)果可以與體內(nèi)實(shí)驗(yàn) 獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。以這種方式,也可以得到關(guān)于可溶的分支多糖/ 抗癌藥共同治療是否導(dǎo)致細(xì)胞毒性的信息。也可以研究在軟瓊脂中在 可溶的分支多糖和抗癌藥存在下,其他的肺瘤細(xì)胞形成集落的能力, 其他的腫瘤細(xì)胞包括B16-F黑素瘤,UV-2237纖維肉瘤,HT 1080人 纖維肉瘤和A375人黑素瘤。實(shí)驗(yàn)可以用類似于上面關(guān)于MLL細(xì)胞所 述的方法實(shí)現(xiàn)。實(shí)施例6:體內(nèi)試驗(yàn)-多糖同抗癌藥或進(jìn)一步聯(lián)合抗血管生成藥 前列腺癌的Dunning(R3327)大鼠前列腺腺癌模型是Dunning從在 雄性大鼠中發(fā)現(xiàn)的自發(fā)存在的腺癌發(fā)展的(Dunning, W., Natl. CancerInst. Mono., (1963), vol. 12, pp.351-369,在此引入其全部教導(dǎo)作為 參考)。由原發(fā)腫瘤發(fā)展了幾個(gè)亞系,其具有不同的分化和轉(zhuǎn)移性質(zhì) (Isaacs, J.等,Cancer Res., (1978), vol.38, pp.4353-4359,在jt匕引 入其全部教導(dǎo)作為參考)。將lxl(^MLL細(xì)胞注入大鼠大腿內(nèi),導(dǎo)致 動(dòng)物在約25天內(nèi)續(xù)發(fā)于壓倒性的原發(fā)腫瘤負(fù)擔(dān)而死亡(Isaacs, J.等, The Prostate, (1986), vol.9, pp.261-281;和Pienta, K.,等,The Prostate, (1992), vol.20, pp.233-241,在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)。 在腫瘤細(xì)胞接種后約12天原發(fā)的MLL腫瘤開(kāi)始轉(zhuǎn)移;在這個(gè)時(shí)間之 前通過(guò)切肢除去原發(fā)性胂瘤導(dǎo)致動(dòng)物治愈。如果在12天后進(jìn)行切除 術(shù),大多數(shù)的動(dòng)物在40天內(nèi)死于肺和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤(Isaacs, J.等,The Prostate, (1986), vol.9, pp.261-281,在此引入其全部教導(dǎo)作為參考)。 為了研究對(duì)這些腫瘤的自發(fā)轉(zhuǎn)移瘤的影響,在長(zhǎng)期的基礎(chǔ)上,在 飲用水中口服給予大鼠可溶的分支多糖,聯(lián)合已知的抗癌藥。在第0 天首先將lxl06MLL細(xì)胞射入大鼠后肢。在第4天,當(dāng)原發(fā)性腫瘤達(dá) 到大約lcm3大小時(shí),在連續(xù)的基礎(chǔ)上將0.01%, 0.1%,或1.0%(w:v) 可溶的分支多糖和抗癌藥加至大鼠的飲用水中。在第14天,將大鼠麻 醉并通過(guò)切除后肢除去原發(fā)性胂瘤。然后跟蹤觀察大鼠至第30天,此 時(shí)處死所有組的大鼠并解剖分析。監(jiān)測(cè)對(duì)照和治療動(dòng)物的可觀察的毒 性。在第30天,將肺取出,用水清洗并在布安氏液中固定過(guò)夜。比較 患肺轉(zhuǎn)移瘤的大鼠數(shù)目與對(duì)照組中患肺轉(zhuǎn)移瘤的大鼠數(shù)目并記錄。通 過(guò)在解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)測(cè)定MLL腫瘤群體的數(shù)目。也監(jiān)測(cè)了可溶的 分支多糖/抗癌藥共同治療的效果,其為飲用水中濃度的函數(shù)。整個(gè)研究中,監(jiān)測(cè)治療動(dòng)物的明顯毒性和體重增加,并將結(jié)果與 沒(méi)接受多糖的對(duì)照組比較。對(duì)照和治療組的每日攝水均保持在30±4 ml/大鼠。也監(jiān)測(cè)并記錄了整個(gè)治療期中治療動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物的毛發(fā)質(zhì) 地、總體行為和糞便顏色。對(duì)照和治療動(dòng)物適當(dāng)?shù)卦黾恿梭w重,并與單用抗癌藥對(duì)照治療相 比,可溶的分支多糖/抗癌藥治療動(dòng)物中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)可觀察的另外毒性。當(dāng)與單用抗癌藥、單用多糖、單獨(dú)的單糖殘基、或無(wú)多糖或無(wú)抗癌藥 的治療的動(dòng)物相比時(shí),喂以如上所述的可溶的分支多糖聯(lián)合抗癌藥的 動(dòng)物減少了患肺轉(zhuǎn)移瘤的大鼠數(shù)目。關(guān)于淋巴結(jié)疾病,可以觀察相似 類型的效果。在類似的實(shí)驗(yàn)中,在其飲用水中口服給予大鼠抗癌藥、抗血管生 成藥和可溶的分支多糖的聯(lián)合物。除了需要另外的對(duì)照(例如可溶的分支多糖和抗癌藥;可溶的分支多糖和抗血管生成藥;在可溶的分支多 糖缺失下抗癌藥和抗血管生成藥;單獨(dú)抗癌藥;單獨(dú)抗血管生成藥; 和單獨(dú)的可溶分支多糖)之外,實(shí)驗(yàn)方案和操作與上面關(guān)于只有抗癌藥 和多糖的給藥所述的類似。對(duì)照和共同治療的動(dòng)物適當(dāng)?shù)卦黾恿梭w重,并且與單用抗癌藥或 單用抗血管生成藥的對(duì)照治療相比,可溶的分支多糖/抗癌藥/抗血管 生成藥治療動(dòng)物中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)可觀察的另外毒性。當(dāng)與單用已知抗癌藥、 單用抗血管生成藥、單用多糖、單獨(dú)的單糖殘基或無(wú)多糖、或什么也 沒(méi)有的治療的動(dòng)物相比時(shí),在喂以可溶的分支多糖聯(lián)合已知抗癌藥和 抗血管生成藥的動(dòng)物中減少了患肺轉(zhuǎn)移瘤和顯示血管生成跡象的大鼠 數(shù)目。關(guān)于淋巴結(jié)疾病,可以觀察相似類型的效果。設(shè)計(jì)本實(shí)例治療以顯示治療動(dòng)物的改良方法,其使用無(wú)毒的口服給藥的可溶的分支多糖聯(lián)合公認(rèn)的抗癌藥,或聯(lián)合抗癌藥和公認(rèn)的抗 血管生成藥,用于預(yù)防自發(fā)的癌癥轉(zhuǎn)移和相關(guān)的血管生成。
權(quán)利要求
1. 藥物組合物,它包含多糖和化學(xué)治療劑的組合,其中所述多糖的主鏈具有眾多重復(fù)碳水化合物單元,其中每個(gè)重復(fù)單元包括至少一個(gè)酸性和至少一個(gè)中性碳水化合物,并且其中所述主鏈具有至少一個(gè)懸掛在其上的分支側(cè)鏈。
2. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的多糖具有約50kDa至約200 kDa的分子量。
3. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的主鏈每二十個(gè)酸性碳水化合 物包括約 一個(gè)中性碳水化合物。
4. 權(quán)利要求3的組合物,其中所述的中性碳水化合物為鼠李糖。
5. 權(quán)利要求l的組合物,其中所述的酸性碳水化合物為糖醛酸。
6. 權(quán)利要求5的組合物,其中所述的糖醛酸為半乳糖醛酸。
7. 權(quán)利要求6的組合物,其中所述的糖醛酸包括羧酸部分。
8. 權(quán)利要求7的組合物,其中所述的羧酸部分為烷基化或酯化的。
9. 權(quán)利要求8的組合物,其中所述的羧酸部分包括選自以下的有 機(jī)基團(tuán)曱基、乙?;⒐锘颓Щ?。
10. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的分支側(cè)鏈通過(guò)所述的中性 碳水化合物連接到所述的主鏈。
11. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的多糖還含有一個(gè)或多個(gè)疏 水性碳水化合物部分。
12. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的多糖包含聚半乳糖醛酸和 鼠李糖主鏈,其中至少一個(gè)分支側(cè)鏈懸掛在至少一個(gè)鼠李糖上。
13. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的化學(xué)治療劑選自氨魯米特、 安吖啶、阿那曲唑、門(mén)冬酰胺酶、BCG、比卡魯胺、博來(lái)霉素、布舍 瑞林、白消安、卡培他濱、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、克 拉屈濱、氯膦酸鹽、環(huán)磷酰胺、環(huán)丙孕酮、阿糖胞苷、達(dá)卡巴溱、放 線菌素D、柔紅霉素、己烯雌酚、多西他賽、多柔比星、表柔比星、 雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟達(dá)拉濱、氟氫可的松、 氟尿嘧啶、氟曱睪酮、氟他胺、吉西他濱、戈舍瑞林、羥基脲、伊達(dá) 比星、異環(huán)磷酰胺、伊馬替尼、a干擾素、伊立替康、來(lái)曲唑、亞葉 酸、亮丙立德、左旋咪唑、洛莫司汀、氮芥、曱羥孕酮、甲地孕酮、 美法侖、巰嘌呤、美司鈉、曱氨蝶呤、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、 尼魯米特、奧曲肽、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米膦酸鹽、噴司他丁、普 卡霉素、卟吩姆、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔單抗、鏈佐星、他莫 昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睪酮、硫鳥(niǎo)嘌呤、塞替派、托泊替康、 曲妥單抗、維甲酸、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛和長(zhǎng)春瑞濱等。
14. 權(quán)利要求l的組合物,其中所述的分支側(cè)鏈沒(méi)有次級(jí)側(cè)鏈。
15. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的分支側(cè)鏈末端為選自半乳 糖、葡萄糖、阿拉伯糖和它們的衍生物的碳水化合物。
16. 權(quán)利要求l的組合物,其中所述的主鏈實(shí)質(zhì)上為去酯化的。
17. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的主鏈去酯化至小于約1%。
18. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的主鏈去酯化至小于約0.5%。
19. 權(quán)利要求1的組合物,其中所述的主鏈去酯化至小于約 0.25%。
20. 權(quán)利要求l的組合物,其中所述的主鏈去酯化至小于約0.1%。
21. 權(quán)利要求1的組合物,它還含有次級(jí)分支,其中所述的次級(jí) 分支產(chǎn)生疏水性環(huán)境。
22. 權(quán)利要求l的組合物,其中所述的多糖結(jié)合到半乳凝素受體。
23. 權(quán)利要求22的組合物,其中所述的半乳凝素受體為半乳凝素-3。
24. 治療受治療者中癌癥的方法,它包括給予需要它的受治療者 有效量的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包含多糖和化學(xué)治療劑, 其中所述多糖的主鏈具有眾多重復(fù)碳水化合物單元,其中每個(gè)重復(fù)單 元包括至少一個(gè)酸性和至少一個(gè)中性碳水化合物,并且其中所述主鏈 具有至少一個(gè)懸掛在其上的分支側(cè)鏈。
25. 權(quán)利要求24的方法,其中所述的癌癥選自腎細(xì)胞癌、卡波濟(jì) 氏肉瘤、慢性白血病、乳癌、肉瘤、卵巢癌、直腸癌、咽喉癌、黑素 瘤、結(jié)腸癌、膀胱癌、肥大細(xì)胞瘤、肺癌、乳腺癌、咽鱗狀細(xì)胞癌、 胃腸癌、和胃癌等。
26. 治療受治療者中血管生成的方法,它包括給予需要它的受治 療者有效量的藥物組合物,其中所述的藥物組合物包含多糖和抗血管生成藥,其中所述多糖的主鏈具有眾多重復(fù)碳水化合物單元,其中每 個(gè)重復(fù)單元包括至少 一個(gè)酸性和至少 一個(gè)中性碳水化合物,并且其中 所述主鏈具有至少一個(gè)懸掛在其上的分支側(cè)鏈。
27.權(quán)利要求26的方法,其中所述的抗血管生成藥選自血管生成 素(ANG)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (bFGF)、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、腫 瘤壞死因子-a(TNF-a)、腫瘤生長(zhǎng)因子-a (TGF-a)、和腫瘤生長(zhǎng)因子-卩 (TGF-p)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGF)、血小板衍生的內(nèi)皮細(xì)胞生 長(zhǎng)因子(PD-ECGF)、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PIGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、 血小板活化因子(P AF)、胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)、白細(xì)胞介素-8 (IL-8) 和粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)等。
28,權(quán)利要求26的方法,其中所述的藥物組合物還包含腫瘤消融劑。
29.權(quán)利要求28的方法,其中所述的腫瘤消融劑選自氨魯米特、 安吖啶、阿那曲唑、門(mén)冬酰胺酶、BCG、比卡魯胺、博來(lái)霉素、布舍 瑞林、白消安、卡培他濱、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、克 拉屈濱、氯膦酸鹽、環(huán)磷酰胺、環(huán)丙孕酮、阿糖胞苷,達(dá)卡巴溱、放 線菌素D、柔紅霉素、己烯雌酚、多西他賽、多柔比星、表柔比星、 雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟達(dá)拉濱、氟氫可的松、氟尿嘧啶、氟甲睪酮、氟他胺、吉西他濱、戈舍瑞林、羥基脲、伊達(dá) 比星、異環(huán)磷酰胺、伊馬替尼、a干擾素、伊立替康、來(lái)曲唑、亞葉 酸、亮丙立德、左旋咪唑、洛莫司汀、氮芥、甲羥孕酮、甲地孕酮、 美法侖、巰嘌呤、美司鈉、曱氨蝶呤、絲裂霉素、米托坦、米托蒽醌、 尼魯米特、奧曲肽、奧沙利鉑、紫杉醇、帕米膦酸鹽、噴司他丁、普 卡霉素、卟吩姆、丙卡巴肼、雷替曲塞、利妥昔單抗、鏈佐星、他莫 昔芬、替莫唑胺、替尼泊苷、睪酮、疏鳥(niǎo)嘌呤、塞替派、托泊替康、曲妥單抗、維曱酸、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛和長(zhǎng)春瑞濱等。
全文摘要
本申請(qǐng)公開(kāi)了與一種或多種治療藥聯(lián)合的化學(xué)可溶的配基分支多糖,其分子量為約50kD至約200kD。還公開(kāi)了使用該多糖聯(lián)合至少一種抗癌藥用于治療和預(yù)防惡性癌癥的方法。另外公開(kāi)了使用該組合物用于治療和預(yù)防血管生成的方法。
文檔編號(hào)A61K31/715GK101267828SQ200580020707
公開(kāi)日2008年9月17日 申請(qǐng)日期2005年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月22日
發(fā)明者A·科爾約瑟夫, D·普拉特, E·佐默 申請(qǐng)人:普羅醫(yī)藥公司
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