專利名稱：新化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)催產(chǎn)素受體具有有效的和選擇性的拮抗劑作用的新的二酮哌嗪衍生物、其制備方法、含有它們的藥物組合物及其在藥物中的應(yīng)用。
激素催產(chǎn)素是有效的子宮收縮劑并用于誘導(dǎo)或增強(qiáng)分娩。子宮催產(chǎn)素受體的密度在妊娠期間也顯著增加＞100倍并且在分娩時(shí)(產(chǎn)期前和期間)達(dá)到高峰。
產(chǎn)期前生產(chǎn)/分娩(在24和37周之間)導(dǎo)致大約60％的胎兒死亡率/發(fā)病率，因此抑制催產(chǎn)素的子宮作用的化合物例如催產(chǎn)素拮抗劑應(yīng)該對(duì)預(yù)產(chǎn)期前分娩的預(yù)防或控制有用。
國際專利申請(qǐng)WO99/47549公開了作為果糖1，6-二磷酸酯(FBPase)抑制劑的包括3-芐基-2，5-二酮哌嗪衍生物的二酮哌嗪衍生物。
國際專利申請(qǐng)WO03/053443公開了一類作為催產(chǎn)素受體選擇性拮抗劑的顯示特定活性有效水平的二酮哌嗪衍生物。式(A)代表本文描述的一類優(yōu)選的化合物 這樣的化合物包括下述那些其中R1為2-茚滿基，R2為C3-4烷基，R3為5或6元雜芳基，其經(jīng)由環(huán)上的碳原子連接到分子的其它部分，R4代表基團(tuán)NR5R6，其中R5和R6分別代表烷基，例如甲基，或者R5和R6與它們連接的氮原子一起形成3元至7元飽和雜環(huán)，其中該雜環(huán)可包含選自氧的另外的雜原子。
國際專利申請(qǐng)WO2005/000840公開了式(B)二酮哌嗪衍生物。
其中，R1為2-茚滿基，R2為-甲基丙基，R3為2-甲基-1，3-唑基-4-基以及R4和R5與它們連接的氮原子一起代表嗎啉代(morpholino)。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一類新的顯示出特別有益藥代動(dòng)力學(xué)特征的選擇性催產(chǎn)素受體拮抗劑。
因此，本發(fā)明提供至少一個(gè)選自式(I)化合物的化學(xué)實(shí)體(entity)及其可藥用衍生物 其中，R1為2-茚滿基，R2為1-甲基丙基，R3選自2，6-二甲基-3-吡啶基或4，6-二甲基-3-吡啶基，R4代表甲基和R5代表氫或甲基，或者R4和R5與它們連接的氮原子一起代表嗎啉。
應(yīng)當(dāng)理解式(I)化合物具有在其不對(duì)稱碳原子承載基(bearing groups)R1、R2和R3上描述的絕對(duì)立體化學(xué)，即，這些位置的立體化學(xué)總是為(R)。然而，也應(yīng)當(dāng)理解盡管這樣的化合物基本上不包含在各R1、R2和R3位置上的(S)-差向異構(gòu)體，但是每個(gè)差向異構(gòu)體可以以少量存在，例如可存在1％或更少的(S)-差向異構(gòu)體。
也應(yīng)當(dāng)理解，基團(tuán)R2包含不對(duì)稱碳原子，本發(fā)明包括其(R)-和(S)-差向異構(gòu)體。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R2為(1S)-1-甲基丙基。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，R2為(1R)-1-甲基丙基。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為在實(shí)施例1、2、3和6中特別描述其制備的化合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為在實(shí)施例1、2和3中特別描述其制備的化合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為在實(shí)施例3和6中特別描述其制備的化合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為在實(shí)施例3中特別描述其制備的化合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為在實(shí)施例1中特別描述其制備的化合物。
在一個(gè)方面，在本發(fā)明中有用的化學(xué)實(shí)體可以是選自下述的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；及其可藥用衍生物。
如本文使用的術(shù)語“可藥用的”指適于藥物學(xué)應(yīng)用的化合物。適于在藥學(xué)中應(yīng)用的本發(fā)明化合物的鹽和溶劑化物是其中抗衡離子或相關(guān)溶劑為可藥用的那些。然而，具有非可藥用抗衡離子或相關(guān)溶劑的鹽和溶劑化物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，例如，在本發(fā)明其它化合物和它們的可藥用鹽和溶劑化物制備中使用的中間體。
如本文使用的術(shù)語“可藥用衍生物”指本發(fā)明化合物的任意可藥用鹽、溶劑化物或前藥，例如酯，當(dāng)對(duì)接受者給藥時(shí)，其能夠提供(直接或間接)本發(fā)明的化合物或其活性代謝產(chǎn)物或其殘基(residue)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠識(shí)別這樣的衍生物，而不需要過度試驗(yàn)。然而，參照Burger’s Medicinal Chemistryand Drug Discovery，第5版，Vol 1Principles and Practice的教導(dǎo)進(jìn)行，將其以教導(dǎo)這樣衍生物的程度引入本文作為參考。在一方面，可藥用衍生物為鹽、溶劑化物、酯、氨基甲酸酯和磷酸酯。在另一方面，可藥用衍生物為鹽、溶劑化物和酯。在進(jìn)一步的方面，可藥用衍生物為鹽和溶劑化物。在另一方面，可藥用衍生物為生理學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明化合物的適宜生理學(xué)可接受的鹽包括與生理學(xué)可接受的無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的酸加成鹽。這樣的酸的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、硫酸、磺酸例如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸和對(duì)甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、富馬酸和馬來酸。
本發(fā)明也涉及式(I)化合物的溶劑化物，例如水合物或與可藥用溶劑的溶劑化物，所述溶劑包括，但不限于醇類例如乙醇、異丙醇，丙酮，醚，酯，例如乙酸乙酯。
本發(fā)明的化合物也可與其它治療劑組合使用。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的化合物或其可藥用衍生物與其他治療劑的組合。
當(dāng)本發(fā)明的化合物或其可藥用衍生物與第二種抗相同疾病的活性治療劑組合使用時(shí)，每種化合物的劑量可與當(dāng)每種化合物單獨(dú)使用時(shí)不同。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于理解適宜劑量。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物用于治療的需要量可根據(jù)接受治療病癥的性質(zhì)和患者年齡和狀態(tài)而改變，并最終由護(hù)理醫(yī)師或獸醫(yī)慎重考慮。本發(fā)明的化合物可與抗分挽劑或預(yù)防性藥物組合使用。這些包括，但不限于β-激動(dòng)劑，例如特布他林或利托君，鈣通道阻滯劑例如硝苯地平(nifedepine)，非甾體抗炎藥例如吲哚美辛，鎂鹽例如硫酸鎂，其它催產(chǎn)素拮抗劑例如阿托西班，和黃體酮激動(dòng)劑及制劑。此外，本發(fā)明的化合物可與下述物質(zhì)組合使用antenatal steroids，包括倍他米松和地塞米松，前體維生素(prenatal vitamins)，尤其是葉酸補(bǔ)充劑(folate supplement)，抗生素，包括但不限于氨比西林、阿莫西林/克拉維酸鹽、甲硝唑、克林霉素和抗焦慮劑。
上述組合可以按方便使用的藥物制劑形式存在，因而，包括上述定義的組合物與可藥用載體或賦形劑的藥物制劑構(gòu)成本發(fā)明的另一個(gè)方面。這樣的組合的各個(gè)成份可以按任何常規(guī)途徑順次或同時(shí)以分開的或組合的藥物制劑給藥。
當(dāng)順次給藥時(shí)，本發(fā)明的化合物或第二種治療劑可首先給藥。當(dāng)同時(shí)給藥時(shí)，該組合可以以相同或不同的藥物組合物給藥。
當(dāng)在相同制劑中組合時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解這兩種化合物必須是穩(wěn)定的，且彼此和制劑的其它組分是可相容的。當(dāng)分別制劑時(shí)，它們可以以任意方便的制劑提供，方便地以如本領(lǐng)域?qū)@種化合物已知的方式提供。
式(I)化合物對(duì)大鼠和人子宮上的催產(chǎn)素受體有高親和力，這可使用常規(guī)方法確定。例如，對(duì)大鼠子宮上催產(chǎn)素受體的親和力可通過Pettibone等人在Drug Development Research 30.129-142(1993)中的方法確定。本發(fā)明化合物也顯示出對(duì)CHO細(xì)胞的人重組體催產(chǎn)素受體的高親和力，這可使用Wyatt等人在Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2001(11)p1301-1305中描述的方法方便地證實(shí)。
本發(fā)明的化合物顯示出有利的藥動(dòng)學(xué)特征，包括良好的生物利用度和良好的水溶性。在一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物顯示出良好的效能和低固有清除率。在另一方面，本發(fā)明的化合物顯示出低固有清除率。
因此，本發(fā)明的化合物在治療或預(yù)防通過催產(chǎn)素作用介導(dǎo)的疾病和/或病癥中是有用的。這種疾病和/或病癥的實(shí)例包括預(yù)預(yù)產(chǎn)期前分娩、痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位和良性前列腺增生癥。
所述化合物也可用于推遲在擇期的剖宮產(chǎn)術(shù)或轉(zhuǎn)移患者至三級(jí)護(hù)理中心之前的分娩、治療性功能障礙(男性和女性)特別是早泄，肥胖癥，進(jìn)食障礙疾患，充血性心力衰竭，動(dòng)脈壓過高，肝硬化，腎炎或高眼壓，強(qiáng)迫觀念與行為疾病和神經(jīng)精神病(neuropsychiatric disorders)。本發(fā)明的化合物也可用于提高哺乳動(dòng)物例如農(nóng)場(chǎng)牲畜的生育率。
因此，本發(fā)明提供用于治療用途尤其是用于人和獸醫(yī)治療的選自式(I)化合物和/或其可藥用衍生物的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，特別地作為拮抗催產(chǎn)素受體上催產(chǎn)素效果的藥物使用。
本發(fā)明也提供選自式(I)化合物和/或其可藥用衍生物的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體在制備用于拮抗催產(chǎn)素受體上催產(chǎn)素效果的藥物中的用途。
根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明也提供拮抗催產(chǎn)素受體上催產(chǎn)素效果的方法，包括給藥需要的患者拮抗量的至少一種選自式(I)化合物和/或其可藥用衍生物的化學(xué)實(shí)體。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，本文中涉及的治療延伸到對(duì)確診疾病或癥狀的預(yù)防及治療。
應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步理解的是，本發(fā)明化合物用于治療的需要量可根據(jù)接受治療病癥的性質(zhì)、給藥途徑和患者的年齡和狀態(tài)而改變，并最終由護(hù)理醫(yī)師慎重考慮。然而，一般而言，用于成人治療的劑量將一般在每天2至1000mg范圍內(nèi)，取決于給藥途徑。
因此，對(duì)于腸胃外給藥而言，每日劑量將典型地為每天2至50mg，優(yōu)選5至25mg。對(duì)于口服給藥而言，每日劑量將典型地為每天10至1000mg，例如每天50至500mg。
預(yù)期劑量可方便地存在于單劑量中或作為每隔適當(dāng)間隔給藥的分劑量中，例如每天2、3、4或更多個(gè)分劑量。
雖然本發(fā)明的化合物在治療用途中可能作為原料化學(xué)藥而被使用，但是優(yōu)選使活性成份作為藥物制劑存在。
因此，本發(fā)明提供了一種藥物制劑，其包含式(I)化合物和/或其可藥用衍生物與一種或多種其可藥用載體，及任選地，其它治療和/或預(yù)防成分。該載體在與制劑的其它成份相容及對(duì)其接受者無害這一意義上必須是“可接受的”。
本發(fā)明的組合物包括那些尤其制備為口服、含服、腸胃外、吸入或吹入、植入、陰道或直腸給藥。
用于口服給藥的片劑和膠囊可含有常規(guī)賦形劑例如，粘合劑，如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、西黃蓍膠、淀粉粘膠或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，如乳糖、蔗糖、微晶纖維素，玉米淀粉、磷酸鈣或山梨醇；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，如馬鈴薯淀粉或淀粉羥乙酸鈉，或濕潤劑例如十二烷基硫酸鈉。片劑可根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的方法包衣?？诜后w制劑可為例如水性或油性混懸劑、溶液乳劑、糖漿劑或酏劑的形式，或作為使用前與水或其它適宜載體配制的干燥產(chǎn)品而存在。這種液體制劑可包含常規(guī)添加劑例如助懸劑，如山梨醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/蔗糖糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂；乳化劑，如卵磷脂、去水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水載體(可包括食用油)，如杏仁油、分餾椰子油、油脂、丙二醇或乙醇；增溶劑例如表面活性劑如聚山梨醇酯或其它試劑例如環(huán)糊精；及防腐劑，例如，對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或抗壞血酸。該組合物也可制成栓劑，例如包含常規(guī)栓劑基質(zhì)例如可可豆脂或其它甘油酯。
用于口腔給藥的組合物可為用常規(guī)方法制備的片劑或錠劑(lozenges)的形式。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可被制成用于腸胃外的注射或連續(xù)輸注給藥形式。注射制劑可以在安瓿中單劑量形式存在，或與附加防腐劑在多劑量容器中存在。該組合物可為例如在油或水性載體中的懸浮液、溶液、或乳劑的形式，并可含有配方試劑例如混懸、穩(wěn)定和/或分散劑。另外，活性成份可以為在使用前與適合的載體，例如無菌、無熱源的水組合的粉末形式。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可包含0.1-99％的活性成分，片劑和膠囊方便地為1-50％，液體制劑為3-50％。
本發(fā)明化合物的有利藥動(dòng)學(xué)特征易于使用用于測(cè)定生物活性化合物藥動(dòng)學(xué)特征的常規(guī)方法來確定。
本發(fā)明的化合物和其可藥用衍生物可通過下文描述的方法制備，所述方法構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。在下述說明中，除非另有說明，所述基團(tuán)為如本發(fā)明化合物上述的定義。
式(I)化合物可通過在用于從羧酸或其活性衍生物和胺制備酰胺的標(biāo)準(zhǔn)條件下，羧酸(II)或其活性衍生物與胺HNR4R5反應(yīng)， 其中，在羧酸(II)中，R1、R2和R3具有式(I)中定義的含義，且R3處的手性為R或S或其混合物，在胺HNR4R5中，R4和R5具有式(I)中定義的含義。
應(yīng)當(dāng)理解，從上述反應(yīng)得到的式(I)化合物的非對(duì)映體混合物可使用本領(lǐng)域眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)拆分技術(shù)分離，例如柱層析。
因此，式(I)的酰胺可通過下述方法制備在非質(zhì)子溶劑例如二氯甲烷中，任選地在存在叔胺例如三乙胺下，將式(II)的羧酸用活化劑例如BOP(苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸鹽)、TBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽)、BOP-Cl(二(2-氧代-3-唑烷基)膦酰氯(phosphinic chloride))、草酰氯或1，1’-羰基二咪唑處理，然后使形成的反應(yīng)產(chǎn)物，即有活性的式(II)化合物的衍生物與胺HNR4R5反應(yīng)。
另外，式(I)的酰胺可通過在非質(zhì)子溶劑例如四氫呋喃中，使羧酸(II)衍生的混合酸酐與胺HNR4R5反應(yīng)制備，其中R1、R2和R3具有式(I)中定義的含義。方便地，所述反應(yīng)在低溫下進(jìn)行，例如25℃至-90℃，方便地在約-78℃。
混合的酸酐可方便地通過在非質(zhì)子溶劑例如乙酸乙酯中，在存在叔有機(jī)堿例如三烷基胺如三乙胺下，并在低溫例如25℃至-90℃，方便地在約-78℃下，使式(II)的羧酸與適宜的酰基氯例如新戊酰氯反應(yīng)制備。
式(I)化合物也可通過下述方法制備在適宜的溶劑例如二氯甲烷中，使其中R1、R2和R3具有在式(I)中定義的含義，R6為2-羥基苯基的式(III)化合物與1，1’-羰基二咪唑或1，1′-硫代羰基二咪唑反應(yīng)，然后如此形成的產(chǎn)物與胺HNR4R5反應(yīng)。
式(II)化合物可以由其中R6為2-羥基苯基的式(III)化合物與1，1’-羰基二咪唑或1，1′-硫代羰基二咪唑在適宜的溶劑比如二氯甲烷中反應(yīng)，然后如此形成的產(chǎn)物與含水丙酮反應(yīng)而制備。
其中R6為2-羥基苯基的式(III)化合物可通過使用氫氣和鈀催化劑，由其中R6為2-芐氧基苯基的相應(yīng)的式(III)化合物氫解制備。
另外，其中R6為2-羥基苯基的式(III)化合物可通過在存在活性炭上的鈀催化劑和乙酸下，由其中R1、R2和R3具有式(I)中定義的含義、R6為2-芐氧基苯基、R7為芐氧羰基和R8為C1-6烷基的式(IV)化合物與氫反應(yīng)制備。
該反應(yīng)可方便地在溶劑比如乙醇、三氟乙醇或其混合物中進(jìn)行。
式(IV)化合物可通過下述方法制備在存在三乙胺下，且在溶劑例如三氟乙醇中，使氨基酯鹽酸化物(V)與醛R3CHO(VI)反應(yīng)， 其中R1具有式(I)中定義的含義，R8為C1-6烷基；然后，在溶劑例如三氟乙醇中，得到的產(chǎn)物與式(VII)化合物和異氰化物CNR6(VIII)反應(yīng)，
其中R1具有式(I)中定義的含義，R7為叔-丁氧羰基或芐氧羰基，在CNR6中，R6為2-芐氧苯基。
其中R6為2-芐氧苯基的式(III)化合物可按下述方法制備在二烷中，式(IV)化合物，其中R1、R2和R3具有式(I)中定義的含義，R6為2-芐氧基苯基和R7為叔丁氧羰基，與鹽酸反應(yīng)，然后在溶劑例如二氯甲烷中，與三乙胺反應(yīng)。
其中R7為叔-丁氧羰基的式(IV)化合物可通過上述路徑使用其中R7為叔-丁氧羰基的式(VII)化合物來制備。
R2取代基為1-甲基丙基，并且其中R2為1-甲基丙基的具有(S)或(R)構(gòu)型的式(I)化合物可以通過以其中R2基具有需要的(S)或(R)構(gòu)型的氨基酯鹽酸化物(V)開始制備。
氨基酯鹽酸化物(V)，其中R1具有式(I)中定義的含義，R8為C1-6烷基，可通過Schmidt，U；Kroner，M；Griesser，H.Synthesis(1989)，(11)，832-5中的方法，由相應(yīng)的市售氨基酸D-別異亮氨酸或D-異亮氨酸制備。
其中R3具有式(I)中定義的醛R3CHO(VI)為市售獲得，或可通過文獻(xiàn)方法制備(Comins，Daniel L.；Weglarz，Michael A.；J.Org.Chem.；53；19；1988；4437-4442)。
其中R1具有式(I)中定義的含義，R7為叔丁氧羰基的氨基酸衍生物(VII)為市售獲得；其中R1具有式(I)中定義的含義，R7為芐氧羰基的氨基酸衍生物(VII)可在溶劑例如二烷的水溶液中通過用N-(芐氧羰基氧基)琥珀酰亞胺和三乙胺處理相應(yīng)的市售氨基酸(R)-R1CH(NH2)CO2H(IX)制備，其中R1具有式(I)中定義的含義。
異氰化物CNR6(VIII)可根據(jù)文獻(xiàn)方法制備(Obrecht，Roland；Herrmann，Rudolf；Ugi，Ivar，Synthesis，1985，4，400-402)。
式(I)化合物的酸加成鹽可通過常規(guī)方法制備，例如通過化合物在適宜溶劑例如二氯甲烷或丙酮中與適宜無機(jī)或有機(jī)酸的適宜溶液反應(yīng)制備。
下述實(shí)施例用于闡述本發(fā)明的實(shí)施方案，而不對(duì)其構(gòu)成限制。
試驗(yàn)命名法所有的中間體和實(shí)施例使用ISISDraw中的ACD Name Pro6.02來命名。
縮寫CV柱體積。一種柱體積定義為填充柱中吸著劑占有的體積。這可由使用的特定吸著劑的質(zhì)量和密度來近似計(jì)算(1CV＝質(zhì)量除以密度)。
一般性純化和分析方法分析HPLC是在Supelcosil LCABZ+PLUS柱(3.3cm×4.6mm ID)上進(jìn)行的，用0.1％HCO2H和0.01M醋酸銨的水溶液(溶劑A)，和0.05％HCO2H和5％水的乙腈溶液(溶劑B)洗脫，使用洗脫梯度1，0-0.7分鐘0％B，0.7-4.2分鐘0％-100％B，4.2-5.3分鐘100％B，5.3-5.5分鐘0％B或者洗脫梯度2，0-0.7分鐘0％B，0.7-4.2分鐘0％-100％B，4.2-4.6分鐘100％B，4.6-4.8分鐘0％B，流速為3ml/分鐘。保留時(shí)間(Rt)為按分鐘計(jì)。用Waters ZQ 2000質(zhì)譜儀記錄質(zhì)譜(MS)，采用電噴霧正[ES+ve得到MH+和M(NH4)+分子離子]或電噴霧負(fù)[ES-ve，得到(M-H)-分子離子]模式。用四甲基硅烷作為外標(biāo)，使用Bruker DPX 400MHz波譜儀記錄1H NMR波譜。
使用二氧化硅柱(cartridges)進(jìn)行純化指使用Presearch提供的有Redisep柱的CombiflashCompanionTM進(jìn)行的色譜。疏水玻璃料(frit)是指由Whatman出售的過濾管。SPE(固相萃取)是指使用International SorbentTechnology Ltd出售的柱。TLC(薄層色譜)指使用Merck出售的涂敷有硅膠60 F254的TLC板。
中間體1
甲基N-[(2R)-2-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-({[(苯甲基)氧基]羰基}氨基)乙?；鵠-N-[1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-氧代-2-({2-[(苯甲基)氧基]苯基}氨基)乙基]-D-別異亮氨酸酯用三乙胺(2.24mL，16.1mmol)處理2，6-二甲基吡啶-3-甲醛(AuroraFeinchemie GmbH)(2.00g，16.1mmol)和(D)-別異亮氨酸甲酯鹽酸化物(2.93g，16.1mmol)在甲醇(50mL)和2，2，2-三氟乙醇(50mL)中的溶液，室溫和通入氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?0小時(shí)。
加入(2R)-2，3-二氫-1H-茚-2-基({[(苯甲基)氧基]羰基}氨基)乙酸(5.24g，16.1mmol)和2-芐氧基苯基異腈(3.37g，16.1mmol)，室溫在通入氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?天。減壓下濃縮混合物，然后將其分配于乙酸乙酯(150mL)和水(150mL)加飽和的碳酸氫鈉水溶液(6mL)中。用乙酸乙酯(50mL)反萃取水相，用半飽和的碳酸氫鈉水溶液、氯化銨和氯化鈉水溶液(各100mL)連續(xù)洗滌合并的有機(jī)萃取液，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物(12.01g)。這可在Redisep二氧化硅柱(330g)上純化，用20-50％乙酸乙酯的環(huán)己烷溶液洗脫，得到7.46g成對(duì)非對(duì)映體的標(biāo)題化合物。
HPLC Rt＝3.88和3.96分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝797中間體2 2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-(2-羥基苯基)乙酰胺將粗甲基N-[(2R)-2-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-({[(苯甲基)氧基]羰基}氨基)乙酰基]-N-[1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-氧代-2-({2-[(苯甲基)氧基]苯基}氨基)乙基]-D-別異亮氨酸酯(中間體1)(7.46g)溶于乙醇(150mL)和乙酸(10mL)中，在1個(gè)H2大氣壓下，通過10％鈀碳(Degussa型)(1.8g，用水1∶1 w∶w潤濕)氫化混合物18小時(shí)。減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物，將殘余物分配于乙酸乙酯和加入飽和的碳酸氫鈉直到水相為堿性(pH8)的水中。用乙酸乙酯萃取水相，合并的有機(jī)萃取物先用3∶1的飽和的碳酸氫鈉水溶液水(100mL)洗滌，然后用飽和的鹽水洗滌，之后用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸發(fā)。在Redisep二氧化硅柱(120g)上純化粗產(chǎn)物，用0-10％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到成對(duì)非對(duì)映體的標(biāo)題化合物(2.94g)。
HPLC Rt＝2.75和2.81分鐘(梯度2)；m/z[M+H]+＝541中間體3 2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-{2-[(苯甲基)氧基]-苯基}乙酰胺將4，6-二甲基-3-吡啶甲醛1(2.52g)和甲基D-別異亮氨酸酯鹽酸化物(3.4g)溶于2，2，2-三氟乙醇(50ml)中。向其中加入三乙胺(2.61ml)，靜置反應(yīng)混合物18小時(shí)。將(2R)-2，3-二氫-1H-茚-2-基({[(1，1-二甲基乙基)氧基]-羰基}氨基)乙酸(5.44g)和2-[(苯甲基)氧基]苯基異氰化物(4.18g)與甲醇(10ml)加入到反應(yīng)混合物中，室溫?cái)嚢枞芤?天。真空除去溶劑，用二氯甲烷和水分離殘余物。有機(jī)相通過疏水玻璃料，并真空蒸發(fā)。將殘余物溶于4N氯化氫的二烷溶液中(50ml)，靜置反應(yīng)混合物4小時(shí)。真空除去溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷(200ml)中。向其中加入三乙胺(20ml)，靜置反應(yīng)混合物20小時(shí)。用二氯甲烷和水分離反應(yīng)混合物。有機(jī)相通過疏水玻璃料，并真空蒸發(fā)。殘余物應(yīng)用到4×90g Biotage柱，用環(huán)己烷/乙酸乙酯(1∶1，1∶2 v/v)和乙酸乙酯洗脫。合并需要的級(jí)分，真空蒸發(fā)，得到2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-{2-[(苯甲基)氧基]苯基}乙酰胺(5.55g，47％)，呈褐色泡沫狀。
HPLC Rt＝3.43，3.45分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝631參考文獻(xiàn)1.Comins，Daniel L.；Weglarz，Michael A.；J.Org.Chem.；53；19；1988；4437-4442.
中間體4 2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-(2-羥基苯基)乙酰胺將2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-{2-[(苯甲基)氧基]苯基}乙酰胺(中間體3)(3.30g)溶于乙醇(75ml)中，通過活性炭上的鈀(潤濕10％Pd，0.50g)氫化20小時(shí)。過濾除去催化劑，用二氯甲烷洗滌。真空蒸發(fā)合并的濾出液和洗出液。殘余物應(yīng)用90g Biotage柱，用乙酸乙酯洗脫。合并需要的級(jí)分，真空蒸發(fā)，得到2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-(2-羥基苯基)乙酰胺(2.43g，87％)，呈淺黃色固體。
HPLC Rt＝2.86分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝541.
中間體5{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}(2，6-二甲基-3-吡啶基)乙酸鹽酸化物 將2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-(2-羥基苯基)乙酰胺(24.25g，45mmol)(中間體2)和1，1′-羰基二咪唑(11.7g，72mmol)溶于無水二氯甲烷(200ml)中，氮?dú)庀蚂o置20小時(shí)。真空除去溶劑，將殘余物溶于丙酮(200ml)和2N鹽酸(20ml)中。攪拌20小時(shí)后，真空除去溶劑，將殘余物溶于甲醇(50ml)中。該溶液應(yīng)用到氨丙基柱(2×70g)，先用甲醇洗脫(250ml)，然后用10％乙酸的甲醇溶液(250ml)洗脫。合并需要的級(jí)分，真空蒸發(fā)。用2N鹽酸處理殘余物，真空蒸發(fā)得到的溶液，得到標(biāo)題化合物{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}(2，6-二甲基-3-吡啶基)乙酸鹽酸化物，呈褐色固體(12.21g，56％)。
HPLC Rt＝2.48分鐘(梯度2)；m/z [M+H]+450。
中間體6 (2R)-2，3-二氫-1H-茚-2-基({[(苯甲基)氧基]羰基}氨基)乙酸將(2R)-氨基(2，3-二氫-1H-茚-2-基)乙酸(1.91g，10mmol)懸浮于二烷(10ml)和水(10ml)中。向其中加入三乙胺(1.7ml)和N-(芐氧基羰基氧基)-琥珀酰亞胺(2.54g)，室溫快速攪拌反應(yīng)混合物2天。將反應(yīng)混合物傾入水(50ml)中，用氯仿(100ml)萃取。用1N鹽酸(50ml)和水(50ml)洗滌有機(jī)相。經(jīng)過硫酸鎂干燥，真空除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(3.06g，94％)1H NMR (CDCl3)δ7.40-7.29(m，5H)，7.21-7.11(m，4H)，5.28(d，1H，J＝8.6hZ)，5.11(s，2H)，4.57(m，1H)，3.14-2.79(m，5H)；LCMS m/z 326(MH+)，Rt3.35分鐘(梯度2)實(shí)施例1 (2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺在N2下，室溫?cái)嚢?-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-(2-羥基苯基)乙酰胺(中間體2)(0.400g，0.74mmol)和1，1′-羰基二咪唑(0.192g，1.18mmol)的無水二氯甲烷(10mL)溶液7小時(shí)。用2M甲胺的四氫呋喃溶液(1.849mL，3.70mmol)處理混合物，室溫靜置過夜。N2下吹出溶劑，在Redisep二氧化硅柱(35g)上純化殘余物，用0-10％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，接著用KromasilKR100-10-C18反相柱純化，用包含0.1％甲酸的乙腈水溶液(20-45％MeCN)洗脫。從1，4-二烷中冷凍干燥后，得到呈白色冷凍干燥物(30％)的標(biāo)題化合物。
HPLC Rt＝2.44分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝4631H NMR(CDCl3)δ 7.63(d，1H)，7.25-7.15(m，4H)，7.05(d，1H)，6.79(d，1H)，5.96(q，1H)，5.35(s，1H)，4.07(dd，1H)，3.88(d，1H)，3.19-2.88(m，4H)，2.85(d，3H)，2.81-2.73(m，1H)，2.56(s，3H)，2.55(s，3H)，1.82-1.67(m，2H)，1.20-1.08(m，1H)，0.99(d，3H)，0.90(t，3H)。
類似地，由中間體2和二甲胺(2.0M的四氫呋喃溶液)制備實(shí)施例2 (2R)-2-{3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺從1，4-二烷中冷凍干燥后，呈白色冷凍干燥物(33％)HPLC Rt＝2.69分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝4771H NMR(CDCl3)δ 7.49(d，1H)，7.27-7.15(m，4H)，7.08(d，1H)，6.66(s，1H)，6.30(d，1H)，4.10(dd，1H)，4.05(d，1H)，3.22-3.08(m，3H)，2.99-2.84(m，4H)，2.80-2.70(m，4H)，2.63(s，3H)，2.58(s，3H)，1.65-1.53(m，1H)，0.97-0.78(m，2H)，0.71(t，3H)，0.46(d，3H)。
類似地，由中間體2和嗎啉(3.7mmol)制備
實(shí)施例3(方法A) (3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮從1，4-二烷中冷凍干燥后，呈白色冷凍干燥物(88mg，23％)HPLC Rt＝2.70分鐘(梯度2)；m/z[M+H]+＝5191H NMR(CDCL3)δ 7.49(d，1H)，7.27-7.15(m，4H)，7.10(d，1H)，6.68(s，1H)，6.40(d，1H)，4.10(dd，1H)，4.01(d，1H)，3.74-3.52(m，5H)，3.28-3.07(m，5H)，2.97-2.84(m，2H)，2.79-2.71(m，1H)，2.62(s，3H)，2.59(s，3H)，1.65-1.53(m，1H)，0.98-0.80(m，2H)，0.70(t，3H)，0.45(d，3H)。
實(shí)施例3(方法B) (3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮用1，1-羰基二咪唑(2.6g，16mmol)處理{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}(2，6-二甲基-3-吡啶基)乙酸鹽酸化物(5.0g，10.3mmol)(中間體5)的無水二氯甲烷(50ml)混懸液，氮?dú)庀聰嚢璺磻?yīng)混合物18小時(shí)。加入嗎啉(4.8ml，55mmol)，氮?dú)庀蚂o置得到的溶液18小時(shí)。真空除去溶劑，用乙酸乙酯和水分離殘余物。用鹽水洗滌有機(jī)相，經(jīng)無水硫酸鎂干燥。真空除去溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷中。將其應(yīng)用堿性氧化鋁柱(240g)，使用0-7.5％甲醇的二乙醚溶液(9CV)、7.5-10％甲醇的二乙醚溶液(1CV)和10％甲醇的二乙醚溶液(1CV)梯度洗脫。合并需要的級(jí)分，真空蒸發(fā)，得到(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮，呈白色固體(2.4g，45％)。
HPLC Rt＝2.72分鐘(梯度2)；m/z[M+H]+＝519實(shí)施例4 (2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺將2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-(2-羥基苯基)乙酰胺(中間體4)(0.700g)和1，1’-羰基二咪唑(0.324g)溶于無水二氯甲烷(20ml)中，靜置20小時(shí)。給一半的該溶液(10ml)中加入2.0M二甲胺的四氫呋喃溶液(5ml)，靜置該反應(yīng)混合物3天。用二氯甲烷和飽和的碳酸氫鈉水溶液分離反應(yīng)混合物。有機(jī)相通過疏水玻璃料，真空蒸發(fā)。殘余物應(yīng)用至二氧化硅柱(10g)，先用乙酸乙酯洗脫，再用5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫。真空蒸發(fā)需要的級(jí)分，用MassDirected AutoPrep進(jìn)一步純化殘余物。得到(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺(0.10g，32％)，呈白色泡沫狀。
HPLC Rt＝2.82分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝4771H NMR(CDCl3)δ 8.32(s，1H)，7.26-7.15(m，4H)，7.08(s，1H)，6.71(s，1H)，6.16(d，1H)，4.17(d，1H)，4.10(dd，1H)，3.22-3.06(m，3H)，2.98(s，3H)，2.91(m，1H)，2.74(dd，1H)，2.67(s，3H)，2.57(s，3H)，2.39(s，3H)，1.56(m，1H)，0.93(m，1H)，0.85(m，1H)，0.68(t，3H)，0.45(d，3H)。
類似地，由中間體4和甲胺制備實(shí)施例5
(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺HPLC Rt＝2.60分鐘(梯度1)；m/z[M+H]+＝4631H NMR(CDCl3)δ 8.48(s，1H)，7.25-7.14(m，4H)，7.04(s，1H)，6.72(d，1H)，6.07(q，1H)，5.45(s，1H)，4.07(dd，1H)，3.90(d，1H)，3.17-3.04(m，3H)，2.92(m，1H)，2.86(d，3H)，2.76(dd，1H)，2.53(s，3H)，2.33(s，3H)，1.70(m，2H)，1.12(m，1H)，0.94(d，3H)，0.87(t，3H)。
類似地，由中間體4和嗎啉制備實(shí)施例6 (3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮HPLC Rt＝2.94分鐘(梯度2)；m/z[M+H]+＝5191H NMR(CDCl3)δ 8.34(s，1H)，7.25-7.15(m，4H)，7.09(s，1H)，6.71(s，1H)，6.21(d，1H)，4.14-4.07(m，2H)，3.73-3.47(m，5H)，3.23-3.05(m，5H)，2.95-2.83(m，2H)，2.74(dd，1H)，2.58(s，3H)，2.38(s，3H)，1.56(m，1H)，0.94(m，1H)，0.86(m，1H)，0.68(t，3H)，0.44(d，3H)。
生物活性在下文描述的所有試驗(yàn)中測(cè)試本發(fā)明的實(shí)施例1-6。每個(gè)化合物的結(jié)果顯示在下文表1中。表1也包括用于比較的化合物X。
試驗(yàn)1使用FLIPR測(cè)定對(duì)人催產(chǎn)素-1受體的拮抗劑親和力細(xì)胞培養(yǎng)將粘著性(Adherent)中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，其穩(wěn)定地表達(dá)重組體人催產(chǎn)素-1(hOT)受體，保存在DMEMF12培養(yǎng)基(Sigma，cat no D6421)中培養(yǎng)，再加入10％熱滅活的胎小牛血清(Gibco/Invitrogen，cat.no.01000-147)、2mML-谷氨酰胺(Gibco/Invitrogen，cat.no.25030-024)和0.2mg/ml G418(Gibco/Invitrogen，cat no.10131-027)。在37℃下，在95％∶5％空氣∶CO2中單層培養(yǎng)細(xì)胞，使用TrypLETMExpress(Gibco/Invitrogen，cat no.12604-013)每3-4天傳代。
使用FLIPRTM測(cè)定[Ca2+]i在如上述培養(yǎng)基中以每孔10,000細(xì)胞的密度將CHO-hOT細(xì)胞接種于黑壁凈底(black walled clear-base)384-孔板(Nunc)，保存過夜(95％∶5％空氣∶CO2，在37℃)。除去培養(yǎng)基后，在37℃，在包含丙磺舒(probenacid)(0.7mg/ml)、細(xì)胞質(zhì)鈣指示劑、Fluo-4(4uM；Teflabs，USA)和淬滅劑亮黑(Brilliant Black)(250uM；Molecular Devices，UK)的Tyrode′s培養(yǎng)基(NaCl，145mM；KCl，2.5mM；HEPES，10mM；葡萄糖，10mM；MgCl2，1.2mM；CaCl2，1.5mM)中培養(yǎng)細(xì)胞1小時(shí)。在37℃下，用單獨(dú)的緩沖液或包含OT拮抗劑的緩沖液再培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘，然后在加入次最大量濃度催產(chǎn)素(EC80)之前或之后放置入FLIPRTM(Molecular Devices，UK)中來檢測(cè)細(xì)胞的熒光(λex＝488nm，λEM＝540nm)。
數(shù)據(jù)分析使用Activity Base Version 5.0.10分析采用FLIPR的功能性反應(yīng)。
試驗(yàn)2催產(chǎn)素結(jié)合試驗(yàn)制備由表達(dá)人重組體催產(chǎn)素受體的CHO細(xì)胞制備膜。在-70℃以等分試樣冷凍該膜制品直到使用時(shí)。
結(jié)合試驗(yàn)方案在沒有(全部結(jié)合)或有(非特異性結(jié)合)1uM未標(biāo)記的催產(chǎn)素和增加濃度的實(shí)施例1至6中的化合物或比較化合物下，在200ul包含～2.4nM的[3H]-催產(chǎn)素的試驗(yàn)緩沖液(50mM Tris，10mM MgCl2和0.1％牛血清白蛋白，pH7.5)中培養(yǎng)膜(～50ug)。室溫進(jìn)行培養(yǎng)60分鐘。用3ml冰冷的緩沖液終止反應(yīng)，通過Whatman GF/C濾紙過濾，濾紙?jiān)?.3％聚氮丙啶中預(yù)浸。用3ml緩沖液洗滌濾器(filter)4次，使用Brandel細(xì)胞收集器收集。濾器在3ml ReadySafe閃爍液(Beckman)中計(jì)數(shù)過濾物。
特異性結(jié)合占總結(jié)合的約90％。
數(shù)據(jù)分析使用非線性回歸分析(GraphPad)從競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)確定IC50值，使用Cheng和Prusoff，1974方法轉(zhuǎn)化為Ki。數(shù)據(jù)表示平均值。
Assay 3微粒體中體外固有清除率的測(cè)定用于培養(yǎng)的NADP再生緩沖液為在試驗(yàn)當(dāng)天新制備的。在每1mL 2％的碳酸氫鈉中，其包含7.8mg葡糖-6-磷酸鹽(一鈉鹽)、1.7mg NADP和6單位的葡糖-6-磷酸脫氫酶。在pH7.4的磷酸緩沖液中制備微粒體(人，女性；短尾猴，雌性；狗，雌性；大鼠，雌性)，其包含0.625mg蛋白/mL。
除非另有說明，用Tecan Genesis 150/8 RSP進(jìn)行所有的后續(xù)步驟。1.25mM的所述化合物儲(chǔ)備溶液為在乙腈/水(1∶1)中制備的。將25μl的1.25mM儲(chǔ)備溶液加入到600μl的乙腈/水(1∶1)中，得到50μM溶液。對(duì)于每個(gè)種類而言，將50μM溶液(10μL)加入到微量培養(yǎng)板(Porvair，96深孔，正方形)上的微粒體(790μL)中。
將400μL包含所述化合物的微粒體溶液轉(zhuǎn)移到微量培養(yǎng)板(Porvair，96深孔，圓形)上，在37℃預(yù)加溫5分鐘，然后開始培養(yǎng)。通過給預(yù)加溫的微粒體中加入100μL的NADP再生體系開始所有的培養(yǎng)。在37℃，在Techne加熱器(heating block)中培養(yǎng)混合物。0、3、6、12和30分鐘培養(yǎng)后，采集20μL等分試樣，加入到100μL包含內(nèi)標(biāo)的乙腈中。
為了確定代謝速率，以0.5uM的化合物濃度和0.5mg/mL的蛋白質(zhì)濃度進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)液中溶劑的濃度為0.5％。
通過LC/MS/MS確定試驗(yàn)化合物的濃度；結(jié)果以分析物內(nèi)標(biāo)峰面積比表示。
通過使用Excel對(duì)濃度-時(shí)間曲線擬合單指數(shù)式衰減來計(jì)算清除率，使用下式計(jì)算固有清除率 結(jié)果在上述試驗(yàn)中測(cè)試本發(fā)明的實(shí)施例1至6以及比較化合物X＝(2R)-2-[(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-異丁基-2，5-二氧代哌嗪-1-基]-N，N-二甲基-2-(6-甲基吡啶-3-基)乙酰胺(在WO03/053443中的實(shí)施例209)。
當(dāng)在試驗(yàn)1和2中試驗(yàn)時(shí)，比較化合物X顯示出與本發(fā)明化合物1至6類似的效能，事實(shí)上，這些化合物的每個(gè)都顯示出8.1至9.2的fpKi’s(試驗(yàn)1)，和8.8至10.5的pKi’s(試驗(yàn)2)。
然而，當(dāng)與比較化合物X比較時(shí)，在微粒體中體外固有清除率(試驗(yàn)3)方面，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出令人驚奇的改善。
表1
表1的注釋+對(duì)應(yīng)于1-8ml/min/mg++對(duì)應(yīng)于9-15ml/min/mg+++對(duì)應(yīng)于16-20ml/min/mg++++對(duì)應(yīng)于21-30ml/min/mg+++++對(duì)應(yīng)于＞31ml/min/mg
權(quán)利要求
1.至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自式(I)化合物和其可藥用衍生物 其中R1為2-茚滿基，R2為1-甲基丙基，R3選自2，6-二甲基-3-吡啶基或4，6-二甲基-3-吡啶基，R4代表甲基和R5代表氫或甲基，或者R4和R5與它們連接的氮原子代表嗎啉代。
2.至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自式(I)化合物的鹽和溶劑化物 其中R1為2-茚滿基，R2為1-甲基丙基，R3選自2，6-二甲基-3-吡啶基或4，6-二甲基-3-吡啶基，R4代表甲基和R5代表氫或甲基，或者R4和R5與它們連接的氮原子一起代表嗎啉代。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，其中R2為(1S)-1-甲基丙基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；及其可藥用衍生物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、3和4中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；及其可藥用衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、3和4中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N-甲基乙酰胺；(2R)-2-{(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-二氧代-1-哌嗪基}-2-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-N，N-二甲基乙酰胺；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；及其可藥用衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、3和4中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(4，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；及其可藥用衍生物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、3和4中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體，選自(3R，6R)-3-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-1-[(1R)-1-(2，6-二甲基-3-吡啶基)-2-(4-嗎啉基)-2-氧代乙基]-6-[(1S)-1-甲基丙基]-2，5-哌嗪二酮；及其可藥用衍生物。
9.包含根據(jù)權(quán)利要求1和3-8中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體和一種或多種可藥用載體的藥物組合物。
10.用于治療的根據(jù)權(quán)利要求1和3-8中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體。
11.根據(jù)權(quán)利要求1和3-8中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體在制備拮抗催產(chǎn)素對(duì)催產(chǎn)素受體效應(yīng)的藥物中的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求1和3-8中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體在制備治療一種或多種選自下述疾病或病癥的藥物中的用途預(yù)產(chǎn)期前分娩、痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位和良性前列腺增生癥。
13.治療或預(yù)防通過催產(chǎn)素作用介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，其包含給藥需要的哺乳動(dòng)物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1和3-8中任一項(xiàng)的至少一個(gè)化學(xué)實(shí)體。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述疾病或病癥選自預(yù)產(chǎn)期前分娩、痛經(jīng)、子宮內(nèi)膜異位和良性前列腺增生癥。
15.制備在權(quán)利要求1中要求保護(hù)的式(I)化合物的方法，包含(a)在用于從羧酸或其活性衍生物和胺制備酰胺的標(biāo)準(zhǔn)條件下，使式(II)化合物或其活性衍生物 與胺HNR4R5反應(yīng)，其中R4和R5具有在權(quán)利要求1中定義的含義，在式(II)化合物中R1、R2和R3具有權(quán)利要求1中定義的含義，R3處的手性為R或S或其混合物；或(b)在適宜的溶劑中，式(III)化合物 與1，1′-羰基二咪唑或1，1′-硫代羰基二咪唑反應(yīng)，其中，R1、R2和R3具有權(quán)利要求1中定義的含義，R6為2-羥基苯基，隨后，如此形成的產(chǎn)物與胺HNR4R5反應(yīng)，其中R4和R5具有在權(quán)利要求1中定義的含義。
全文摘要
公開了式(I)的化合物和其可藥用衍生物，其中R
文檔編號(hào)A61P15/06GK1972924SQ200580021014
公開日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2005年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月23日
發(fā)明者艾倫·D·博思威克, 迪爾德麗·M·B·?；? 約翰·利德爾, 安德魯·M·梅森 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司