專利名稱：用于預防或治療嬰兒呼吸道感染和急性中耳炎的方法
背景技術：
該申請享有2004年7月1日申請的美國臨時申請60/584,830的優(yōu)先權，在此以其整體引入作為參考。
(1)發(fā)明領域本發(fā)明總地涉及預防或治療嬰兒呼吸道感染和急性中耳炎的方法。
(2)相關技術的描述呼吸道感染是非常常見的，尤其在嬰兒中。在生命的頭一年中，嬰兒易于復發(fā)性呼吸道感染，通常僅僅在這一年中就經歷三至六次感染。每年僅在美國就有約6％小于一歲的嬰兒因為下呼吸道感染而住院。
呼吸道感染及其癥狀根據病毒的類型和感染的位置可以從輕度至嚴重。上呼吸道感染通常將它們自身表現為感冒，引起鼻子內壁、喉嚨和竇的炎癥和腫脹。流行性感冒，通常稱為流感，是上呼吸道高度接觸感染的病毒感染。流感的癥狀包括發(fā)燒，寒顫，頭疼，肌肉疼，頭昏，咳嗽，喉嚨痛，流鼻水，惡心和腹瀉。另一種上呼吸道感染，哮吼，導致非常深的咳嗽和不同程度的呼吸困難，主要是吸入時。
通常認為下呼吸道感染比上呼吸道更嚴重。呼吸道合胞病毒(RSV)是嬰兒和小于四歲兒童中下呼吸道感染最常見的誘因。VanWoensel，J.，等，Viral Lower Respiratory Tract Infection in Infants andYoung Children(嬰兒和幼兒中的病毒性下呼吸道感染)，BMJ 32736-40(2003)。這是一種這樣的常見病毒使得實際上所有三歲之前的兒童受到RSV的感染。在大多數嬰兒和兒童中，RSV是與感冒難以區(qū)分的輕度呼吸道感染。通常導致鼻塞，流鼻涕和咳嗽。
對抗RSV的保護涉及T-和B-細胞應答，抗體應答(IgM，lgG和IgA)，以及通過細菌和病毒感染激活的其他免疫系統(tǒng)應答。已經提出了嬰兒期的RSV感染與之后兒童期的復發(fā)性哮喘、氣喘和特應性變態(tài)反應的產生之間的關聯。因此，限制RSV感染可以防止充分延伸至兒童期的嚴重呼吸道并發(fā)癥。
支氣管炎是影響支氣管的下呼吸道感染，由于病毒性炎癥引起狹窄和腫脹。細支氣管炎和支氣管炎相似，但是主要發(fā)生在嬰兒中。這是支氣管分支網絡較小內徑管的炎癥。該感染導致呼吸困難，頻繁而劇烈的咳嗽以及哮喘，并需要住院。
對于嬰兒可能最嚴重的下呼吸道感染是肺炎。肺炎是由氣泡中的感染引起的，導致它們變得充滿液體，通常為含膿的性質，影響了二氧化碳的正常交換。肺炎的嚴重程度取決于所涉及的肺組織量。
大部分上呼吸道感染和下呼吸道感染是由病毒引起的，目前對此沒有特異性的預防或治療可獲得。一些呼吸道感染，包括流感，可以使用接種疫苗來預防。然而，即使產生了特定呼吸道感染的疫苗，它們是昂貴的且不是普遍可用的。相似地，治療這些感染的藥物具有有限的可用性且是昂貴的。因此，提供治療或預防嬰兒呼吸道感染的非藥物方法是有用的。
頻繁的呼吸道感染通常與急性中耳炎(AOM)相關，急性中耳炎也稱為中耳感染。AOM的特征在于急性、過程短的炎癥和中耳中的流體。AOM伴隨鼻炎，咳嗽，發(fā)熱，喉嚨痛，耳朵疼，聽力減退，煩躁，過敏，沒有胃口，嘔吐或腹瀉。還認為通過穿孔鼓膜的含膿耳液溢構成AOM。
百分之五十的兒童在一歲之前具有至少一次AMO的發(fā)作。百分之八十的兒童在三歲之前具有至少一次發(fā)作。在一歲至三歲之間，35％的兒童具有AOM的復發(fā)性發(fā)作。
AOM可以由病毒或細菌引起。引起AOM的最常見細菌菌株是肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)(35％的情況)，流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)(30％的情況)和粘膜炎莫拉氏菌(Moraxella catarrhalis)(10％的情況)。因為細菌菌株經常引起感染，通常通過給藥抗生素來治療AOM。實際上，對于AOM開出的抗生素處方要比嬰兒期的任何其他疾病多。該廣泛抗生素治療的缺陷是抗生素抗性的產生。例如，20％至40％的肺炎鏈球菌對青霉素和頭孢霉素是抗性的。相似地，30％至40％的流感嗜血桿菌和90％的粘膜炎莫拉氏菌已經產生了抗生素抗性。
由于致病細菌中抗生素抗性的普遍性，美國兒科學會(AmericanAcademy of Pediatrics)和美國家庭醫(yī)生學會(American Academy ofFamily Physician)已經產生了準則，建議對于AOM限制抗生素的處方。American Academy of Pediatrics and the American Academy ofFamily Physician，Subcommittee on the Management of Acute OtitisMedia，Clinical Practice Guideline(美國兒科學會和美國家庭醫(yī)生學會，急性中耳炎管理委員會，臨床實踐準則)(2004年3月)，在http://www.aafp.org/PreBuilt/final_aom.pdf可獲得。因此，因為抗生素療法變得更受限制，重要的是提供可替換的療法來降低嬰兒和幼兒中這種痛苦而嚴重病癥的發(fā)病率。
多個研究數據間的分析(meta-analysis)中，結果表明母乳喂養(yǎng)對嬰兒呼吸道感染和AOM的頻率具有正面影響。特別地，一個研究表明與至少四個月的專門母乳喂養(yǎng)相比較，許多目前可獲得的嬰兒配方奶粉的喂養(yǎng)與嬰兒呼吸道感染住院風險的3.6倍提高相關。Bachrach，V.等，Arch.Pediatr.Adolesc.Med.57237-43(2003)。此外，母乳喂養(yǎng)的嬰兒已經顯示出比專門配方奶粉喂養(yǎng)的嬰兒具有顯著低的AOM發(fā)作(約50％)。Duffy等，Pediatr.100(4)E7(1997)。這些差異可以歸因于人乳促進了有益細菌如乳桿菌(Lactobacilli)和雙歧桿菌(Bifidobacteria)生長的事實。Duffy等，Dig.Dis.Sci 44(8)1499-1505(1999)。
已經表明母乳喂養(yǎng)嬰兒的微生物區(qū)系主要含有雙歧桿菌。相反，配方奶粉喂養(yǎng)嬰兒的微生物區(qū)系更多樣化，含有雙歧桿菌和擬桿菌(Bacteroides)以及更多的致病菌種，葡萄球菌(Staphylococcus)，大腸桿菌(Escherichia coli)和梭菌(Clostridia)。母乳喂養(yǎng)和配方奶粉喂養(yǎng)嬰兒糞便中的雙歧桿菌的菌種也是不同的。已經提出各種因素作為母乳喂養(yǎng)和配方奶粉喂養(yǎng)嬰兒不同糞便菌群的成因，包括人乳中蛋白質的較低含量和不同組成，人乳中較低的磷含量，人乳中的多種寡糖，和人乳中多種免疫功能的激素和細胞介質。Agostoni等，ProbioticBacteria in Dietetic Products for InfantsA Commentary by theESPGHAN Committee on Nutrition(嬰兒膳食產品中的益生菌ESPGHAN委員會對營養(yǎng)的注釋)，J.Pediatr.Gastro.Nutr.38365-374(2004年4月)。與不同細菌群的成因無關，清楚的是母乳在治療或預防呼吸道感染和AOM中具有可測量的益處。
美國兒科學會和世界衛(wèi)生組織都建議母親母乳喂養(yǎng)一至兩年。然而，在發(fā)達國家，這些建議對于工作中的母親而言有時候是難以遵循的。例如，在美國，53％的哺乳期母親在她們的嬰兒一周大時引入配方奶粉。在四個月大之前，81％的嬰兒接受常規(guī)基礎的配方奶粉。低于5％的美國嬰兒在12個月大時是母乳喂養(yǎng)的。Wolf. J.，Am.J.Pub.Health 932000-2010(2003)。
促進配方奶粉喂養(yǎng)嬰兒中有益微生物腸道建群的一種方法是通過給予益生菌。益生菌是對宿主健康發(fā)揮有益作用的活微生物。乳桿菌和雙歧桿菌是其中常見的益生菌菌種。如這些的益生菌已經顯示出在治療各種胃腸道疾病中是有效的。
例如，Reid的U.S.專利6,613,549涉及在治療嬰兒腸感染中使用益生菌微生物如乳桿菌和雙歧桿菌。然而，該專利沒有教導任何腸道以外感染的治療。盡管益生菌在降低住院嬰兒中的腹瀉疾病發(fā)病率和輪狀病毒泄出中是有效的，但乳酸雙歧桿菌(B.lactis)和嗜熱雙歧桿菌(S.thermophilus)的益生菌結合就降低全部發(fā)病率的頻率而言沒有顯示出顯著的作用，為此尋找健康護理的看管。Saavedra等，Am.J.Clin.Nutr.79261-67(2004)。
Clancy等的U.S.專利申請20040057965和20030180260描述了給藥抗原和益生菌來治療粘膜感染如呼吸道感染。相似地，Drake等的U.S.專利申請No.2004026529l涉及通過給藥細菌、細菌營養(yǎng)物和抗微生物劑來抑制或降低慢性或上呼吸道感染和耳朵感染的方法。然而，這些參考文獻只涉及成人給藥并沒有公開將益生菌給藥于嬰兒來治療呼吸道感染或AOM。
已知嬰兒中的腸道微生物區(qū)系遠遠少于成人所產生的。盡管成人的微生物區(qū)系包括高于1013個微生物和接近500個種，但一些是有害的而一些是有益的，嬰兒的微生物區(qū)系只是那些微生物的一部分，包括絕對數量和菌種多樣性。因為嬰兒腸道和成人腸道之間的細菌群和菌種非常不同，不能假設為成人設計的益生菌給藥對于嬰兒必定是有益的。
因此，提供治療和或預防嬰兒呼吸道感染和AOM的益生菌治療是有益的。
發(fā)明概述簡而言之，本發(fā)明涉及預防或治療嬰兒呼吸道感染的新方法，包括將治療有效量的至少一種雙歧桿菌菌種結合至少一種促進選定的雙歧桿菌菌株在小腸中生長和粘附的益生菌菌種給藥于嬰兒。一實施方案中，雙歧桿菌菌種可以選自證明了免疫調節(jié)特性的雙歧桿菌。這些菌種包括，例如，雙歧雙歧桿菌(B.bifidum)，青春雙歧桿菌(B.adolescentis)，動物雙歧桿菌(B.animalis)，乳酸雙歧桿菌，嬰兒雙歧桿菌(B.infantis)，長雙歧桿菌(B.longum)和嗜熱雙歧桿菌(B.thermophilum)。本發(fā)明中特別有用的菌種是乳酸雙歧桿菌Bb-12。
一實施方案中，促進雙歧桿菌粘附的益生菌是乳桿菌中的成員，例如，鼠李糖乳桿菌GG(L.rhamnosus GG)(LGG)，德氏乳桿菌保加利亞亞種(L.delbrueckii subsp.bulgaricus)，或兩者的組合。
本發(fā)明還涉及預防或治療嬰兒急性中耳炎的新方法，包括將治療有效量的至少一種雙歧桿菌菌種和至少一種促進選定的雙歧桿菌菌種在腸粘膜中生長和粘附的益生菌給藥于嬰兒。
本發(fā)明還涉及預防或治療嬰兒呼吸道感染和復發(fā)性AOM感染的新方法。該方法包括包括將治療有效量的至少一種雙歧桿菌菌種和至少一種促進選定的雙歧桿菌菌種在腸粘膜中生長和粘附的益生菌給藥于嬰兒。
在幾個優(yōu)勢中，發(fā)現通過本發(fā)明獲得的是提供了預防或治療嬰兒呼吸道感染而不需要給藥不可用的或成本高的藥物或接種疫苗的方法。本發(fā)明還提供了預防或治療AOM而不需要給藥在致病細菌種中引起抗性的抗生素的方法。
附圖簡述

圖1是顯示了益生菌補充對頭一年生命過程中產生AOM發(fā)作效果的圖。
圖2是顯示了益生菌補充對頭一年生命過程中產生呼吸道感染效果的圖。
優(yōu)選實施方案的詳述現在來更詳細地參照本發(fā)明的實施方案，以下列出的一個或多個實施例。以解釋本發(fā)明而非限制本發(fā)明的方式來提供每個實施例，。實際上，本領域技術人員清楚在本發(fā)明種可以形成各種改進和改變而沒有脫離本發(fā)明的范圍或精神。例如，作為一個實施方案的一部分說明或描述的特征，可以用于另一個實施方案中來產生更進一步的實施方案。
因此，確定本發(fā)明涵蓋了這樣的改進和改變，如所附權利要求及其等價物的范圍內出現的。本發(fā)明的其他目的、特征和方面描述于以下的詳述中或從以下的詳述是顯而易見的。本領域技術人員可以理解本討論只是示范性實施方案的描述，不認為是限制本發(fā)明的較寬方面。
定義如在此所用的，術語“治療”意思是減緩、改善或醫(yī)治疾病、失調或疾病癥狀或病癥。
術語“預防”意思是過一些作用停止或阻礙疾病、失調或疾病癥狀或病癥通。
術語“治療有效量”指的是引起疾病、失調或疾病癥狀或病癥改善或緩解的量。
術語“嬰兒”意思是小于約2歲的人。
術語“呼吸道感染”或“呼吸道疾病”意思是影響負責將空氣中的氧攜帶至血流和排出二氧化碳的器官組的疾病或感染。
術語“益生菌”意思是對宿主健康發(fā)揮有益作用的微生物。可以是通過改善腸微生物平衡有益地影響宿主的活微生物喂養(yǎng)補充劑，含有活或死細菌的微生物制劑，或兩者的組合。通常優(yōu)選活的生物體，因為它們產生完整系統(tǒng)的抗原，繁殖來增加腸環(huán)境中這種生物體的數量來促進粘膜的相互作用，并可以粘附于腸組織來更好地刺激粘膜免疫應答。
術語“益生元”意思是刺激益生菌生長和/或活性的不可消化的食品成分。
術語“復發(fā)性”意思是在一年過程中3次或多次感染的發(fā)生。
如在此所用的，術語“嬰兒配方奶粉”意思是通過作為人乳替代物的滿足嬰兒營養(yǎng)需求的組合物。在美國，嬰兒配方奶粉的內含物通過列于21 C.F.R.100，106或107部分的聯邦法規(guī)來規(guī)定。這些法規(guī)限定了大量營養(yǎng)素，維生素，礦物質和其他配料含量來努力地模擬人母乳的營養(yǎng)和其他特性。
發(fā)明根據本發(fā)明，產生了預防或治療嬰兒呼吸道感染的新方法。該方法包括將治療有效量的至少一種雙歧桿菌如Bb-12和至少一種促進選定的雙歧桿菌菌株粘附于腸粘膜的益生菌如LGG給藥于嬰兒。
雙歧桿菌是在消化系統(tǒng)下半部分中起作用的革蘭氏陽性厭氧微生物。它們是不能動的，不形成孢子和過氧化氫酶陰性。它們具有各種形狀，包括短的彎桿狀，球棒形桿狀和分叉的Y型桿狀。由于它們在碳水化合物發(fā)酵過程產生乳酸，將它們歸類于乳酸細菌。
本發(fā)明的一實施方案中，雙歧桿菌菌中可以選自證明了免疫調節(jié)特性的雙歧桿菌。這些菌種可以包括，例如，雙歧雙歧桿菌，青春雙歧桿菌，動物雙歧桿菌，乳酸雙歧桿菌，嬰兒雙歧桿菌，長雙歧桿菌和嗜熱雙歧桿菌。本發(fā)明中特別有用的雙歧桿菌菌種是乳酸雙歧桿菌Bb-12，從位于Milwaukee，WI的Chr.Hansen Biosystems獲得。
本發(fā)明的一實施方案中，促進雙歧桿菌粘附于腸粘膜的益生菌可以是乳桿菌屬的成員。乳桿菌是革蘭氏陽性兼性厭氧微生物。它們不形成孢子且是無鞭毛的稈狀或球桿菌。本領域已知的任何乳桿菌菌種可用于該實施方案中。例如，促進粘附的益生菌可以是LGG，德氏乳桿菌保加利亞亞種，或兩者的組合。
LGG是從健康人的腸菌群中分離出來的乳桿菌菌株。其公開于Gorbach等的U.S.專利5,032,399中，在此以其整體引入作為參考。LGG對大多數抗生素是抗性的，在酸和膽汁的存在下是穩(wěn)定的，且熱切地粘附于人腸道的粘膜細胞。它在大多數個體中存活1至3天，在30％患者中存活高達7天。除了它的集群能力外，LGG還有益地影響粘膜免疫應答。LGG以保藏號ATCC 53103保藏于具有保藏資格的美國典型微生物培養(yǎng)中心。
德氏乳桿菌是革蘭氏陽性，兼性厭氧，不能移動和不形成孢子，桿狀微生物。和其他乳酸細菌一樣，德氏乳桿菌是耐酸的，不能合成卟啉，并具有乳酸作為主要代謝終產物的嚴格發(fā)酵機理。德氏乳桿菌菌種含有三個亞種，德氏乳桿菌德氏亞種(L.delbrueckii subsp.delbrueckii)，德氏乳桿菌乳亞種L.delbrueckii subsp.lactis)和德氏乳桿菌保加利亞亞種。
通常，選定雙歧桿菌對腸粘膜的粘附率約為18％。之前的研究已經表明特定的細菌菌種可以促進雙歧桿菌對腸粘膜的粘附。Juntunen，M.等，Clin.Diag.Lab.Immunol.8293-96(2001)。特別在兩種乳桿菌菌種，LGG(ATCC 53103)和德氏乳桿菌保加利亞亞種(從芬蘭的Valio Ltd.獲得)，的存在下，雙歧桿菌粘附各自從18％提高至44％和45％。同前。不希望受到這個或任何其他理論的束縛，認為這些乳桿菌菌株共同聚集并因此提高了雙歧桿菌對腸粘膜的粘附及其在腸內的滯留時間。
根據本發(fā)明的方法，當結合至少一種促進粘附的益生菌來提供雙歧桿菌菌株時，提供了組合物的嬰兒中呼吸道和AOM感染的數量降低。
本發(fā)明中，雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌的給藥形式不是關鍵的，只要將治療有效量給藥于嬰兒。更方便地，可以將雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌補充至此后喂養(yǎng)給嬰兒的嬰兒配方奶粉中。
一實施方案中，用于本發(fā)明中的嬰兒配方奶是營養(yǎng)上完整的并含有合適類型和含量的脂質，碳水化合物，蛋白質，維生素和礦物質。脂質或脂肪的含量通常為約3至約7g/100kal。蛋白質的含量通常為約1至約5g/100kcal。碳水化合物的含量通常為約8至約12g/100kcal。蛋白質源可以是本領域中所用的任何一種，例如，脫脂奶，乳清蛋白，酪蛋白，大豆蛋白，水解蛋白，部分水解蛋白，氨基酸等。一實施方案中，蛋白質是60∶40比例的乳清蛋白和酪蛋白的組合。碳水化合物源可以是本領域中所用的任何一種，例如，乳糖，葡萄糖，玉米糖漿干粉，麥芽糖糊精，蔗糖，淀粉，大米糖漿干粉等。脂質源可以是本領域中所用的任何一種，例如，植物油，如棕櫚油，大豆油，棕櫚油精，椰子油，中鏈甘油三酯油，高油酸向日葵油，高油酸紅花油等。
方便地，使用可購得的嬰兒配方奶粉。例如，Enfalac，Enfamil，Enfamil早產兒配方奶粉，含鐵的Enfamil，Lactofree，Nutramigen，Pregestimil和ProSobee(從Mead Johnson &Company，Evansville，IN，U.S.A獲得)可以補充合適量的雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌，并用于本發(fā)明方法的實踐中。
本發(fā)明的嬰兒配方奶粉可以含有設計來促進雙歧桿菌在腸粘膜內生長的配料。例如，雙歧桿菌需要亞鐵離子，核黃素和生物素用于生長。這些可以結合嬰兒配方奶粉中的其他配料來提供。
作為嬰兒配方奶粉給藥的可替換方案，可以作為嬰兒配方奶粉的補充劑而非全部來給藥雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌。
本發(fā)明可以用于治療或預防專門母乳喂養(yǎng)嬰兒或喂養(yǎng)母乳和嬰兒配方奶粉組合膳食嬰兒的呼吸道感染或AOM。
本發(fā)明特定的實施方案中，可以將至少一種益生元結合雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌補充至嬰兒膳食中。該實施方案中，益生元可以是本領域已知的任何益生元。特別的實施方案中，益生元選自半乳糖-寡糖、菊粉、果糖-寡糖、乳果糖、新糖(neosugar)及其組合。
本發(fā)明的一實施方案中，從出生直至嬰兒約一歲大將雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌補充至嬰兒的膳食中。本發(fā)明的另一個實施方案中，從出生直至嬰兒約三歲大將雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌補充至嬰兒膳食中。
一實施方案中，雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌的治療有效量為約105至1011菌落形成單位(cfu)。另一實施方案中，雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌的治療有效量為約106至108cfu。一實施方案中，每日給藥治療有效量。其他實施方案中，可以每隔一天，每周或每月給藥治療有效量。益生菌劑量的頻率和大小取決于，例如，選定的微生物，傳送載體和給藥藥劑的嬰兒。
提供提高的劑量是本領域技術人員知識水平內的，如通過本領域技術人員來確定對于個體嬰兒是安全而有效的。此外，可以基于它們與益生元組合和其他提高雙歧桿菌菌株集群的添加劑的結合來改變最小量。
本發(fā)明的一實施方案中，Bb-12與LGG的比例為約10∶1至1∶10。本發(fā)明的另一實施方案中，Bb-12與LGG的比例為5∶1至1∶5。本發(fā)明的再一實施方案中，Bb-12與LGG的比例為約3∶1至1∶3。本發(fā)明特定的實施方案中，Bb-12對LGG的比例為約1∶1。
可以作為膠囊形式中的粉末，作為乳濁液或糊劑的一種成分，或在本領域技術人員確定的對于活微生物是有效載體的任何其他合適的載體中來提供本發(fā)明的益生菌微生物?？梢栽趩为毜男〈衼硖峁┖幸嫔⑸锏姆勰┙M合物，例如，用于和嬰兒配方奶粉或初期食物混合。例如，膠囊可以打開使得內含物可以與嬰兒配方奶粉、粗濾去渣食品、奶、果汁或其他用于給嬰兒提供營養(yǎng)組合物的食品混合。乳濁液或糊劑也可以混合至各種食品中。
一實施方案中，雙歧桿菌菌株和促進粘附益生菌的補充預防或治療上呼吸道感染、流感、哮吼、呼吸道合胞病毒、支氣管炎、細支氣管炎和/或肺炎的發(fā)作。另一實施方案中，雙歧桿菌菌株和促進粘附益生菌的補充預防或治療AOM的發(fā)作。
通過本發(fā)明特定的益生菌組合獲得了頭一年生命過程中早期和復發(fā)性感染的發(fā)病率以及抗生素使用的顯著降低。對于呼吸道感染和AOM(嬰兒中最普遍的感染)，該效果是最突出的。這顯示于圖1和2中。這些圖說明了益生菌補充降低了在頭一年生命過程中產生呼吸道感染或AOM發(fā)作的兒童比例。此外，益生菌似乎給予了對抗早期感染的保護，在兒童產生頻繁感染，包括AOM，在早期經歷他們第一次感染的事實中，它的重要性達到了頂點。
以下的實施例描述了本發(fā)明的各種實施方案。從在此所公開的本發(fā)明的說明或實踐考慮，在此權利要求范圍內的其他實施方案對本領域技術人員是顯而易見的。確定的是認為說明書和實施例只是示范，本發(fā)明的范圍和精神通過實施例后的權利要求來確定。實施例中，所有百分比基于重量基礎來給出，除非另外指出。
實施例1該實施例描述了顯示雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌對呼吸道感染和AOM頻率的效果需要的材料和方法。
在2000年9月至2002年5月在芬蘭土爾庫良好的嬰兒診所招募參與發(fā)明者進行的雙盲安慰劑對照臨床研究的嬰兒。對于研究所包括的唯一標準是在兩個月大之前需要嬰兒配方奶粉。排除患有慢性疾病的嬰兒。
總地，將81名嬰兒用單獨編碼隨機分組，每日接受1×1010菌落形成單位的乳酸雙歧桿菌Bb-12和LGG或微晶體纖維素安慰劑直至12個月大。以視覺上相同的膠囊來提供每日的益生菌或安慰劑，將其內含物補充至嬰兒配方奶粉中(Enfamil，Mead JohnsonNutritionals，Evansville，IN)。該配方奶粉在該階段過程中用作單獨的嬰兒配方奶粉。阻止母親使用含有益生菌的商業(yè)產品。
在3，7和12月大時，按照預定觀察來進行嬰兒的臨床觀察。登記的81名嬰兒中72名完成了繼續(xù)研究(follow-up)。沒有完成繼續(xù)研究的9名嬰兒退出時的平均年齡為2.9個月(1.5至7.0)，因此只有完成研究的嬰兒包括于分析中。
為了確定益生菌在存儲過程中保持存活，通過微生物學家以盲方式來進行膠囊隨機樣品的微生物分析。發(fā)現對于LGG和Bb-12為每個膠囊1×109至1×1010的存活計數。
通過家庭或家庭醫(yī)生將研究階段過程中的所有感染記錄在特定的日記中。J將呼吸道感染，醫(yī)生診斷的AOM，胃腸道感染，和用抗生素劑治療的數目分開詳細記錄。研究的主要測量結果是早期呼吸道感染，醫(yī)生診斷的AOM和胃腸道感染的發(fā)病率。認為頭一年生命過程中的復發(fā)性感染(定義為3次或更多次發(fā)作)的發(fā)病率是次要的結果測量。認為抗生素的早期或復發(fā)性需要各自反映出可疑的早期或復發(fā)性細菌感染，并因此記錄。認為12月大之前的鼓膜切開術表示了頻繁的耳朵感染。鼓膜切開術是需要一般麻醉的外科方法，但必需避免作為AOM結果發(fā)生的耳朵結構損害。
詳細記錄研究群體在頭一年生命過程中的所有健康問題來分辨感染疾病的癥狀和非感染病原學。使用24小時食道pH探針研究來證實或排除作為咳嗽、嘔吐、或增加焦慮的可能的非感染性成因的胃-食道回流疾病。通過雙盲安慰劑對照的牛奶激發(fā)來證實牛奶過敏癥的診斷，這是胃腸道或皮膚癥狀的非感染性成因。使用Hanifin介紹的標準來診斷過敏性濕疹。Hanifin，J.M.，Atopic Dermatitis in Infants andChildren(嬰兒和兒童中的特應性皮炎)，Pediatr.Clin.Nutr.Am.38763-89(1991)。在7和12月大時通過皮膚穿刺測試來測定特異性敏化。所測試的抗原包括香蕉，馬鈴薯，胡蘿卜，蘋果。小麥，大米，奶，蛋，鱈魚，大豆和麥醇溶蛋白。認為任一時間點的一個或多個陽性反應的情況中，嬰兒得到了敏化。
為了確定干涉的順從性，在益生菌補充之前的登記時和在3個月大時再次收集糞便樣品，并存儲于-86℃。登記時從46名嬰兒獲得樣品，3個月大時從45名嬰兒獲得樣品。將糞便樣品解凍并在磷酸鹽緩沖鹽水(pH 7.2，10mM磷酸鹽)中連續(xù)稀釋。為了檢測LGG，將稀釋物涂布于Rogosa瓊脂上(Oxoid，Basingstoke，UK)并在37℃厭氧培養(yǎng)四天。純化典型的LGG菌落并從菌落中提取DNA。通過聚合酶鏈式反應來證實鏈同一性。
將數據表達為范圍的平均值或IQR的中值來獲得數據分布的估算。使用Mann-Whitney U測試和X2來進行組在基線之間的比較。對于頭12個月生命過程中的早期感染和復發(fā)性感染和抗生素治療的復發(fā)性需要，使用邏輯回歸分析來比較處理組。使用或不用對其他相關因素的調整來進行復發(fā)性感染和抗生素治療的分析。為了控制相關風險因素或混合因素，以向前的方式來進行逐步回歸分析。將處理組強制形成模型，引入模型的其他因素是性別，出生方式，專門母乳喂養(yǎng)的持續(xù)時間，母乳喂養(yǎng)的總持續(xù)時間，年長的同胞，母親吸煙，寵物所有權和過敏癥的家庭史。記錄或除去變量的標準是F-至-記錄(F-to-enter)的可能性≤0.10，F-至除去(F-to-remove)的可能性≥0.15。就相對風險，也稱為風險率(RR)，和95％的置信區(qū)間(CI)，給出了結果。對于沒有呼吸道感染的時間和沒有AOM的時間，應用Kaplan-Meier曲線，并使用對數級測試來比較處理組。使用SPSS(版本11.5)來分析數據。
實施例2該實施例說明了Bb-12和LGG對呼吸道感染和AOM頻率的效果。接受益生菌和安慰劑嬰兒中的基線特征相似，顯示于表1中。
表1.基線特征和病史
干預開始的平均年齡在接受益生菌的嬰兒中為38天(范圍為6-65天)，在接受安慰劑的嬰兒中為35天(范圍為2-59天)。登記的81名嬰兒中的72名(89％)完成了繼續(xù)研究。沒有完成繼續(xù)研究的9名嬰兒退出時的平均年齡為2.9個月(1.5-7.0的范圍)，因此只有完成研究的嬰兒包括于分析中。
研究益生菌降低了頭7個月生命過程中早期呼吸道感染和AOM的風險以及對抗生素治療的需要。這些結果詳細地列于表2中。
表2.頭7個月生命過程中的感染發(fā)病率
*對于母親過敏癥而校準的
對于母親過敏癥和出生方式而校準的在頭7個月的生命過程中，25/32(78％)接受益生菌的嬰兒和36/40(90％)接受安慰劑的嬰兒遇到至少一次急性感染的發(fā)作。特別地，7/32(22％)接受益生菌的嬰兒和20/40(50％)接受安慰劑的嬰兒經歷了AOM。給10/32(31％)接受益生菌的嬰兒和接受安慰劑的24/40(60％)嬰兒開了抗生素處方。在頭7個月的生命過程中，22/32(69％)接受益生菌的嬰兒和31/40(78％)接受安慰劑的嬰兒遇到至少一次呼吸道感染的發(fā)作。因此，益生菌補充降低了早期AOM、呼吸道感染和抗生素使用的風險。在頭7個月的生命過程中，胃腸道感染的發(fā)病率在兩組中都是低的。
除了在頭7個月生命過程中的效果，益生菌降低了頭12個月生命過程中復發(fā)性感染的發(fā)病率。這些結果顯示于表3中。
表3.頭12個月生命過程中復發(fā)性感染的發(fā)病率和藥物干預的使用
§對于年長的同胞和雙親過敏癥而校準的
對于年長的同胞而校準的**對于年長的同胞，母親吸煙，寵物所有權，專門母乳喂養(yǎng)的持續(xù)時間和母親過敏癥而校準的在頭12個月的生命過程中，總共參與研究的53/72(74％)嬰兒經歷了3次或更多次感染。更具體地，在該階段過程中31/72(43％)嬰兒遭受復發(fā)性感染和14/72(19％)復發(fā)性AOM。此外，26/72(36％)嬰兒經歷抗生素治療的復發(fā)性需要。益生素顯著降低了頭12個月生命過程中復發(fā)性感染的發(fā)病率。
例如，9/32(28％)接受益生菌的嬰兒和22/40(55％)接受安慰劑的嬰兒經歷了三次或多次呼吸道感染。接受益生菌的嬰兒中，只有4/32(13％)經歷了三次或多次AOM發(fā)作。相反，接受安慰劑的那些嬰兒中，10/40(25％)經歷了三次或多次AOM發(fā)作。此外，益生菌給藥趨于降低了用來預防復發(fā)性AOM或治療分泌性中耳炎而進行的鼓膜切開術的需要。在頭一年生命過程中，接受益生菌的嬰兒中沒有一個需要鼓膜切開術，而4/40(10％)接受安慰劑的嬰兒進行了該程序。
幾個因素與復發(fā)性感染和抗生素治療的復發(fā)性需要相關。在頭12個月的生命過程中，具有年長的同胞提高了復發(fā)性呼吸道感染的風險，抗生素的復發(fā)性需要，并趨于提高復發(fā)性AOM的風險。過敏癥的家庭史提高了復發(fā)性感染的風險，母親吸煙與復發(fā)性抗生素使用相關。專門母乳喂養(yǎng)的持續(xù)時間與復發(fā)性抗生素使用逆相關。寵物所有權給予了對抗復發(fā)性感染和抗生素復發(fā)性需要的保護。因此，將頭12個月生命過程中益生菌補充對復發(fā)性感染風險的作用對于這些因素而校準。
在1/32(3％)接受益生菌的嬰兒和3/40(8％)接受安慰劑的嬰兒中診斷出胃-食道回流疾病。與3/40(8％)接受安慰劑的嬰兒相比較，32名接受益生菌的嬰兒中沒有一個具有牛奶過敏癥?？偟兀?/32(13％)接受益生菌的嬰兒和8/40(20％)接受安慰劑的嬰兒在頭一年生命過程中遭受過敏性濕疹。在2/32(6％)接受益生菌的嬰兒和3/40(8％)接受安慰劑的嬰兒中檢測到特應性敏化。研究中補充益生菌的嬰兒在研究過程中沒有一個經歷多于2次的胃腸道感染。
還評價了3個月大時的LGG糞便收集和頭7個月生命過程中感染風險之間的關系。這些結果呈現于表4中。
表4.3個月大時LGG的糞便回收和頭7個月生命過程中感染風險的關系
在益生菌補充之前，收集12/46嬰兒糞便中的LGG，益生菌組中8/28(29％)，安慰劑組中4/18(22％)。干預前糞便中LGG的存在與一般的感染，呼吸道感染，AOM或胃腸道感染的發(fā)病率無關，對任何年齡的抗生素使用也不存在影響。在3個月大時，即，最小1個月的益生菌補充后，在21/28(75％)接受益生菌的嬰兒和2/17(12％)接受安慰劑的嬰兒中收集到LGG，p＜0.0001。此外，這個時間糞便中LGG的存在與7個月之前遇到至少一次AMO發(fā)作的降低風險相關；各自4/23(17％)和10/22(45％)嬰兒對LGG陽性和陰性。3個月大時糞便中LGG的存在也是對抗復發(fā)性感染保護的表示各自2/23(9％)和10/22(45％)嬰兒對LGG陽性和陰性，和對抗抗生素復發(fā)性需要保護的表示7個月之前，各自0/23(0％)和5/22(23％)嬰兒對LGG陽性和陰性。
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本領域技術人員可以實踐本發(fā)明的這些和其他改進和改變，而沒有脫離本發(fā)明的精神和范圍，其在所附權利要求中更特別地列出。此外，應當理解各種實施方案的特征可以全部或部分相互交換。此外，本領域技術人員將認識到前面的描述只是列舉，不是將本發(fā)明更深地限制于所附權利要求中所述的。因此，所附權利要求的精神和范圍不應當受限于其中所含優(yōu)選形式的描述。
權利要求
1.預防或治療嬰兒呼吸道感染的方法，該方法包括將治療有效量的Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
2.根據權利要求1的方法，其中所述呼吸道感染選自上呼吸道感染、流感、哮吼、呼吸道合胞病毒、支氣管炎、細支氣管炎和肺炎。
3.根據權利要求1的方法，其中從出生時直至約一歲大將Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
4.根據權利要求1的方法，其中從出生時直至約三歲大將Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
5.根據權利要求1的方法，其中Bb-12和LGG的治療有效量為約105至1011cfu。
6.根據權利要求1的方法，其中Bb-12和LGG的治療有效量為約106至108cfu。
7.根據權利要求1的方法，其中每日給藥治療有效量。
8.根據權利要求1的方法，其中Bb-12與LGG的比例為約10∶1至1∶10。
9.根據權利要求1的方法，其中Bb-12與LGG的比例為約5∶1至1∶5。
10.根據權利要求1的方法，其中Bb-12與LGG的比例為約1∶1。
11.根據權利要求1的方法，其中將Bb-12和LGG摻入嬰兒配方奶粉中并由嬰兒來食用。
12.根據權利要求1的方法，進一步包括給藥至少一種益生元。
13.根據權利要求12的方法，其中益生元選自半乳糖-寡糖、菊粉、果糖-寡糖、乳果糖、新糖及其組合。
14.預防或治療嬰兒急性中耳炎的方法，該方法包括將治療有效量的Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
15.根據權利要求14的方法，其中從出生時直至約一歲大將Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
16.根據權利要求14的方法，其中從出生時直至約三歲大將Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
17.根據權利要求14的方法，其中Bb-12和LGG的治療有效量為約105至1011cfu。
18.根據權利要求14的方法，其中Bb-12和LGG的治療有效量為約106至108cfu。
19.根據權利要求14的方法，其中每日給藥治療有效量。
20.根據權利要求14的方法，其中Bb-12與LGG的比例為約10∶1至1∶10。
21.根據權利要求14的方法，其中Bb-12與LGG的比例為約5∶1至1∶5。
22.根據權利要求14的方法，其中Bb-12與LGG的比例為約1∶1。
23.根據權利要求14的方法，其中將Bb-12和LGG摻入嬰兒配方奶粉中并由嬰兒來食用。
24.預防或治療嬰兒復發(fā)性呼吸道感染的方法，該方法包括將治療有效量的Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
25.預防或治療嬰兒復發(fā)性急性中耳炎感染的方法，該方法包括將治療有效量的Bb-12和LGG給藥于嬰兒。
全文摘要
本發(fā)明涉及預防或治療嬰兒呼吸道感染和急性中耳炎的新方法。該方法包括將治療有效量的雙歧桿菌菌株和促進粘附的益生菌如LGG給藥于嬰兒。
文檔編號A61K35/74GK101014351SQ200580022409
公開日2007年8月8日 申請日期2005年7月1日 優(yōu)先權日2004年7月1日
發(fā)明者E·伊索勞里, S·薩爾米寧 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司