專利名稱：被取代的羥基苯乙酮衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有抗增殖和抗微生物性質(zhì)的被取代的羥基苯乙酮衍生物、含有它們的藥物以及制備它們的方法。本發(fā)明的羥基苯乙酮衍生物還可用作制備生物學活性化合物的有機中間體產(chǎn)物。
US 5,449,794描述了苯并吡喃衍生物的抗菌、抗病毒或免疫刺激作用。WO98/29404和WO01/60359也描述了苯并吡喃衍生物的用途。
本發(fā)明提供了被取代的羥基苯乙酮衍生物、制備它們的方法以及它們在制備抗增殖和抗微生物的藥物組合物中的用途。本發(fā)明的羥基苯乙酮衍生物還可用作制備生物學活性化合物的有機中間體產(chǎn)物。
避免了從組成不定和有地域性差異的蜂膠中分離/提取的缺點，還優(yōu)化了本發(fā)明的化合物的活性。
本文所稱的化合物作為原料或中間體產(chǎn)物在文獻中是已知的。
Gazz.Chim.Ital.1989，119，385-388中描述了在作為堿的氫化鈉存在下、在二甲基亞砜中由鄰羥基苯乙酮制備1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮。Tetrahedron 2002，58(45)，9289-9296中描述了將1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮進行電化學脫保護產(chǎn)生鄰羥基苯乙酮，Tetrahedron Letters1999，40(46)，8121-8124中描述了鈦催化的脫保護。
J.Org.Chem.1998，63(24)，9103-9104中描述了將1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮進行三氟甲磺酸鐿催化的脫保護產(chǎn)生各苯酚衍生物。
Tetrahedron 2003，59(27)，5091-5104中描述了從1-[(4-羥基)苯基]乙酮和2-甲基-3-丁烯-2-醇開始進行1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮的酸催化合成。
JP 54019948中描述了數(shù)種查耳酮衍生物的合成。在其它中，1-[2，4-雙(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮也用作原料。
根據(jù)本發(fā)明，通式III的被取代的羥基苯乙酮衍生物 其中R1′、R2′、R3′和R4′相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或3-甲基丁-2-烯氧基，條件是R1′、R2′、R3′和R4′中至少一個為氫且R1′、R2′、R3′和R4′中至少一個為3-甲基丁-2-烯氧基，可通過以下方法來制備使通式I的羥基苯乙酮衍生物 其中R1、R2、R3和R4相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R1、R2、R3和R4中至少一個為氫且R1、R2、R3和R4中至少一個為羥基，在堿的存在下、于10至50℃的反應溫度、在有機溶劑中與式II的3-甲基丁-2-烯基鹵化物發(fā)生轉(zhuǎn)化 其中X為氯、溴或碘[按照一般方法1(GP1)進行O-烯丙基化，還可參見以下流程圖(1)]。
優(yōu)選按照GP1制備其中R1′和/或R3′為3-甲基丁-2-烯氧基的通式III化合物，即它們由其中R1和/或R3為羥基的通式I化合物來制備。
O-烯丙基化優(yōu)選在溶劑二甲基甲酰胺(DMF)中、于20至40℃的反應溫度、在堿碳酸鉀的存在下進行(參見GP1)。
然后，可以按照一般方法2或3(GP2或GP3)使以這種方法制備的O-烯丙基化的通式III化合物在N，N-二乙苯胺中且于160至220℃的反應溫度(優(yōu)選在回流下)發(fā)生反應，產(chǎn)生相應的C-異戊烯化或C-烷基化的通式IV化合物 其中R1″、R2″、R3″和R4″相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R1″、R2″、R3″和R4″中至少一個為異戊烯基或1，1-二甲基烯丙基且R1″、R2″、R3″和R4″中至少一個為羥基[參見以下流程圖(2)]。
優(yōu)選按照GP2或GP3制備其中R1″和/或R3″為羥基的通式IV化合物。
其中R1″為羥基的通式IV化合物還可以在DMF中于40至50℃的反應溫度(優(yōu)選45℃)與至少2摩爾當量的三氯氧化磷(POCl3)發(fā)生反應，產(chǎn)生各通式V的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物，其中R2″、R3″和R4″相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R2″、R3″和R4″中至少一個基團為異戊烯基或1，1-二甲基烯丙基[參見以下流程圖(3)]。
流程

圖1酚羥基與3-甲基丁-2-烯基溴化物的O-烯丙基化 離析物I反應產(chǎn)物IIIIa(鄰羥基苯乙酮) IIIa(L1)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基R1＝OH R2′，R3′，R4′＝HR2，R3，R4＝H IIIb(LP1)R1′，R2′，R4′＝HIb(對羥基苯乙酮) R3′＝3-甲基丁-2-烯氧基R3＝OH IIIc(2，4O)R1′，R3′＝3-甲基丁-2-烯氧基R4，R3，R1＝H R2′，R4′＝HIc(2，4-二羥基苯乙酮) IIId(L3)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基R1，R3＝OH R4′＝3-甲基丁-2-烯基R2，R4＝HR2′，R3′＝HId(L2) IIIe(LMK6)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基R1＝OH R2′＝1，1-二甲基烯丙基R2，R3＝H R3′，R4′＝HR4＝3-甲基丁-2-烯基IIIf(LP3)R1′，R2′＝HIe(LMK3) R3′＝3-甲基丁-2-烯氧基R1＝OHR4′＝3-甲基丁-2-烯基R2＝1，1-二甲基烯丙基R3，R4＝HIf(LP2)R1，R2＝HR3＝OHR4＝3-甲基丁-2-烯基流程圖23-甲基丁-2-烯氧基苯基醚的Claisen重排 3-甲基丁-2-烯氧基苯基醚III 反應產(chǎn)物IVIIIa (L1)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基 IVa(L2)R1″＝OHR2′，R3′，R4′＝HR2″，R3″＝HIIIb(LP1)R1′，R2′，R4′＝HR4″＝3-甲基丁-2-烯基R3′＝3-甲基丁-2-烯氧基 IVb(LP2)R1″，R2″＝HIIIc(2，4O)R1′，R3′＝3-甲基丁-2-烯氧基 R3″＝OHR2′，R4′＝H R4″＝3-甲基丁-2-烯基IIId(L3)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基IVcR1″，R3″＝OHR4′＝3-甲基丁-2-烯基 R2″，R4″＝3-甲基丁-2-烯基R2′，R3′＝HIVdR1″＝OHIIIe(LMK6)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基 R3″＝HR2′＝1，1-二甲基烯丙基 R2″，R4″＝3-甲基丁-2-烯基R3′，R4′＝HIVeR1″＝OHIIIf(LP3)R4′＝3-甲基丁-2-烯基 R2″＝1，1-二甲基烯丙基R3′＝3-甲基丁-2-烯氧基 R3″＝HR1′，R2′＝H R4″＝3-甲基丁-2-烯基IIIa(L1)R1′＝3-甲基丁-2-烯氧基IVfR1″＝HR2′，R3′，R4′＝H R2″＝3-甲基丁-2-烯基R3″＝OHR4″＝3-甲基丁-2-烯基IVg(LMK3)R1″＝OHR2″＝1，1-二甲基烯丙基R3″，R4″＝H
流程圖3按照Vilsmeier-Haack進行的酚的雜環(huán)化 酚IV 4-氧代-4H-色烯-3-甲醛VIVa(L2)R2″，R3″＝H Va (LMK21)R2″，R3″＝HR4″＝3-甲基丁-2-烯基，R1″＝OH R4″＝3-甲基丁-2-烯基IVcR3″＝OH VcR2″，R4″＝3-甲基丁-2-烯基R2″，R4″＝3-甲基丁-2-烯基 R3″＝OHIVdR2″，R4″＝3-甲基丁-2-烯基VdR2″，R4″＝3-甲基丁-2-烯基R3″＝H，R1″＝OH R3″＝HIVe (LMK7)R2″＝1，1-二甲基烯丙基 VeR2″＝1，1-二甲基烯丙基R3″＝H，R1″＝OH R3″＝HR4″＝3-甲基丁-2-烯基 R4″＝3-甲基丁-2-烯基IVg(LMK3)R2″＝1，1-二甲基烯丙基 VgR2″＝1，1-二甲基烯丙基R3″，R4″＝H R3″，R4″＝HR1″＝OH
流程圖4制備所要求化合物的選擇的合成步驟及其相互依賴性 按照上述方法制備的式III和IV的羥基苯乙酮衍生物以及式V的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物顯示出抗增殖和/或抗微生物的性質(zhì)，因此根據(jù)本發(fā)明可用于制備抗增殖或抗微生物的藥物組合物。
除1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮、1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮和1-[2，4-雙(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮外，式III和IV的羥基苯乙酮衍生物以及式V的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物還沒有被描述，因此，它們代表了本發(fā)明的另一方面。
本發(fā)明的優(yōu)選的化合物為以下的式III化合物1-[5-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮，1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮，和1-[5-(3-甲基丁-2-烯基)-4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮；以下的式IV化合物1-[2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[4-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥基苯基]乙酮，1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[2-羥基-3，5-雙(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[4-羥基-3，5-雙(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，和1-[2，4-二羥基-3，5-雙(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮；以及以下的式V化合物6-(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛，6，8-雙(3-甲基丁-2-烯基)-7-羥基-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛，6，8-雙(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛，8-(1，1-二甲基烯丙基)-6-(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛，和8-(1，1-二甲基烯丙基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛。
合成羥基苯乙酮衍生物的一般方法(GP)GP1酚羥基與3-甲基丁-2-烯基溴化物的O-烯丙基化將6mmole碳酸鉀加入到攪拌的2mmole各通式I的羥基苯乙酮在10ml二甲基甲酰胺中的溶液中。在氬氣下于室溫將溶液攪拌30分鐘。然后在連續(xù)攪拌下將3mmole 3-甲基丁-2-烯基溴化物注入到溶液中。在惰性氣體下于40℃連續(xù)攪拌約8小時后，將混合物倒入20ml冰/水混合物中。將水混懸液用氯仿萃取3次，每次30ml。然后將有機相用硫酸氫鈉溶液、然后用水洗滌。將氯仿相通過硫酸鈉干燥。過濾后，將溶液在減壓下濃縮，將殘余物經(jīng)色譜法進行后處理。
GP23-甲基丁-2-烯氧基苯基醚的CLAISEN重排將1mmole各通式III的烯丙基苯基醚溶解于10mlN，N-二乙苯胺中。于180℃將溶液加熱5小時。反應溶液冷卻后，將其溶解于50ml氯仿中。將氯仿溶液用15％鹽酸洗滌3次，然后用水洗滌，得到中性pH值。然后，在減壓下通過蒸餾除去氯仿，將殘余物溶解于20ml甲醇中。將一刮匙尖的Amberlite IR-120加入到此溶液中，將混合物攪拌20分鐘。過濾后，將溶液在減壓下濃縮，將殘余物經(jīng)色譜法進行后處理。
GP33-甲基丁-2-烯氧基苯基醚的CLAISEN-COPE重排將1mmole各通式III的3-甲基丁-2-烯氧基苯基醚溶解于10mlN，N-二乙苯胺中。然后將溶液加熱回流8小時(216℃)。反應時間完成后，將混合物溶解于50ml氯仿中。將N，N-二乙苯胺用15％鹽酸萃取，用水洗滌剩余的有機相直至得到中性pH。分離氯仿相，在減壓下通過蒸餾除去氯仿。將殘余物溶解于20ml甲醇中，加入一刮匙尖的Amberlite IR-120后攪拌20分鐘。將溶液過濾，在減壓下濃縮。將殘余物經(jīng)色譜法進行后處理。
制備實施例1.1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(L1)的合成 實驗式C13H16O2摩爾質(zhì)量204
按照GP1使1-(2-羥苯基)乙酮與3-甲基丁-2-烯基溴化物發(fā)生反應。對于色譜法后處理，使用甲苯/乙酸乙酯＝9/1的混合物作為洗脫劑。產(chǎn)率85％，無色液態(tài)；測定的Rf值(TLC，甲苯∶乙酸乙酯＝9∶1)0.41所合成化合物L1通過核磁共振光譜法(NMR)和紅外光譜法(IR)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(DMSO-d6)7.6(d，2H，H-1′/H-5′)，7.1(d，2H，H-2′/H-6′)，5.44(m，1H，H-4)，4.6(d，2H，H-3)，2.6(s，3H，CH3CO)，1.8(s，3H，CH3異戊烯基)，1.7(s，3H，CH3異戊烯基)。
13C-NMR(CDCl3)200.1(CO)，158.3(C-4′)，138.3(C-5)，133.5(C-6′)，130.4(C-2′)，128.5(C-3′)，120.4(C-1′)，119.1(C-4)，112.7(C-5′)，65.3(C-3)，32.0(C-1)，25.7(CH3)，18.2(CH3)。
IR(記錄為膠片)3072，3028(＝CH)，2976，(CH3)，2879(CH2)，1674(C＝O)，1236(C-O)cm-1。
2.1-[2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮(L2)的合成 實驗式C13H16O2摩爾質(zhì)量204按照GP3使在制備實施例1中得到的1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(L1)發(fā)生反應。對于后處理，使用甲苯/乙酸乙酯(9.5/0.5)的混合物作為洗脫劑。產(chǎn)率70％，無色液態(tài)；測定的Rf(TLC，甲苯∶乙酸乙酯＝9∶1)0.79
所合成化合物L2通過核磁共振光譜法(NMR)、紅外光譜法(IR)和質(zhì)譜法(MS)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(DMSO-d6)12.1(s，1H，OH)，7.5(d，1H，H-6′)，7.2(d，2H，H-2′/H-5′)，5.3(m，1H，H-4)，3.3(d，2H，H-3)，2.5(s，3H，H-1)，1.8(s，3H，CH3異戊烯基)，1.7(s，3H，CH3異戊烯基)。
13C-NMR(CDCl3)204.4(CO)，160.5(C-4′，136.8(C-6′)，133.1(C-5)，132.1(C-1′)，129.6(C-2′)，122.7(C-4)，119.3(C-3′，118.2(C-5′)，33.3(C-3)，26.6(CH3CO)，25.7(CH3異戊烯基)，17.8(CH3異戊烯基)。
IR(記錄為膠片)3437(OH)，3029(HC＝芳香烴)，2971，2916(CH3)，2857，(CH2)，1642(C＝O)，1589(C＝C)cm-1。
MS(70eV)204 M+.；189(M+.-15(CH3))；161(M+.-43(CH3CO)；69(C5H9，異戊烯基)；43(CH3CO)。
3.1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥苯基]乙酮(LMK3)的合成 實驗式C13H16O2摩爾質(zhì)量204按照GP2使在制備實施例1中得到的1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(L1)發(fā)生反應。對于后處理，使用甲苯/乙酸乙酯(9.5/0.5)的混合物作為洗脫劑。產(chǎn)率28％，無色液態(tài)；測定的Rf(TLC，甲苯∶乙酸乙酯＝9.5∶0.5)0.71所合成化合物LMK3通過核磁共振光譜法(NMR)、紅外光譜法(IR)和質(zhì)譜法(MS)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(CDCl3)13.1(s，1H，OH)；7.64(dd，1H，H-6’)；7.49(dd，1H，H-4’)；6.83(m，1H，H-5’)；6.25(dd，1H，H-4)；5.29(dd，1H，乙烯基CH2)；4.97(dd，1H，乙烯基CH2)；2.63(s，3H，CH3CO)；1.5(s，6H，CH3-烯丙基)。13C-NMR(75MHz，CDCl3)205.1(CO)；161.7(C-2’)；147.2(C-4，乙烯基-CH)；134.1(C-3′)；132.1(C-3′)；129.1(C-6′)，124.3(C-1′)；119.6(C-5′)；110.5(C-5，乙烯基-CH2)；40.6(C-3)；27.0(C-2)；26.8((CH3)2C-5)。
IR(記錄為膠片)3435(OH)，3030(＝CH芳香烴)，2970，2915(CH3)，2855，(CH2)，1644(C＝O)，1587(C＝C)cm-1。
MS(70eV)204 M+.；189(M+.-15(CH3))；161(M+.-43(CH3CO)；43(CH3CO)。4.1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(LMK6)的合成 實驗式C18H24O2摩爾質(zhì)量272按照GP1使在制備實施例3中得到的1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥苯基]乙酮(LMK3)與3-甲基丁-2-烯基溴化物發(fā)生反應。對于色譜法后處理，使用甲苯/乙酸乙酯＝9.5∶0.5的混合物作為洗脫劑。產(chǎn)率67％，無色液態(tài)；測定的Rf值(TLC，甲苯∶乙酸乙酯＝9∶1)0.37所合成化合物LMK6通過核磁共振光譜法(NMR)、紅外光譜法(IR)和質(zhì)譜法(MS)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(CDCl3)7.43(dd，1H，H-6’)；7.33(dd，1H，H-4’)；7.07(m，1H，H-5’)；6.21(dd，1H，H-4)；5.48(m，1H，H-7)；5.03(dd，1H，H-5，乙烯基CH2)；4.98(dd，1H，H-5，乙烯基-CH2)；4.27(d，2H，H-6，O-CH2)；2.61(s，3H，CH3CO)；1.79(s，3H，CH3-異戊烯基)；1.63(s，3H，CH3-異戊烯基)；1.51(s，6H，(CH3)2C-3)。
13C-NMR(75MHz，CDCl3)203.0(CO)；157.0(C-2′)；148.3(C-4，乙烯基-CH)；136.8(C-8)；131.3(C-3′)；128.2(C-8)，127.6(C-4′)；123.2(C-6′)；120.3(C-1′)；120.1(C-5′)；120.0(C-7)；110.3(C-5)；40.7(C-3)；29.9(C-2)；28.2((CH3)2C-3)；25.7(CH3-異戊烯基)；18.3(CH3-異戊烯基)。
IR(記錄為膠片)3032(＝CH芳香烴)，2975，2917(CH3)，2850，(CH2)，1675(C＝O)，1585(C＝C)cm-1。
MS(70eV)272M+.；257(M+.-15(CH3))；229(M+.-43(CH3CO)；43(CH3CO)。5.1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮(LMK7)的合成
實驗式C18H24O2摩爾質(zhì)量272按照GP3使在制備實施例4中得到的1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(LMK6)發(fā)生反應。對于色譜法后處理，使用包含甲苯/乙酸乙酯＝9.5∶0.5的混合物作為洗脫劑。產(chǎn)率23％，無色液態(tài)。
所合成化合物LMK7通過核磁共振光譜法(NMR)、紅外光譜法(IR)和質(zhì)譜法(MS)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(CDCl3)12.92(s，1H，OH)；7.40(dd，1H，H-6’)；7.31(d，1H，H-4’)；6.25(dd，1H，H-4)；5.30(m，1H，H-7)；5.02(dd，1H，H-5，乙烯基-CH2)；4.97(dd，1H，H-5，乙烯基-CH2)；3.28(d，2H，H-6)；2.61(s，3H，CH3CO)；1.77(s，3H，CH3-異戊烯基)；1.73(s，3H，CH3-異戊烯基)；1.50(s，6H，(CH3)2C-3)。13C-NMR(75MHz，CDCl3)204.5(CO)；160.2(C-2′)；147.6(C-4，乙烯基-CH)；136.8(C-8)；134.7(C-3′)；131.1(C-4′)；129.9(C-5′)；123.2(C-6′)；117.8(C-1′)；110.1(C-5)；40.6(C-3)；38.1(C-6)；34.1(CH3CO)；33.9((CH3)2C-3)；26.2(CH3-異戊烯基)；18.1(CH3-異戊烯基。
IR(記錄為膠片)3035(＝CH芳香烴)，2973，2920(CH3)，2847，(CH2)，1643(C＝O)，1580(C＝C)cm-1。
MS(70eV)272 M+.；257(M+.-15(CH3))；229(M+.-43(CH3CO)；43(CH3CO)。6.1-[5-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(L3)的合成 實驗式C18H24O2摩爾質(zhì)量272按照GP1使在制備實施例2中得到的1-[2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮(L2)與3-甲基丁-2-烯基溴化物發(fā)生反應。對于色譜法后處理，使用包含甲苯/乙酸乙酯＝9/1的混合物作為洗脫劑。產(chǎn)率80％。
所合成化合物L3通過核磁共振光譜法(NMR)和紅外光譜學(IR)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(DMSO-d6)7.5(d，1H，H-2′)，7.2(d，1H，H-6′，6.8(d，1H，H-5′)，5.5(m，1H，H-4)，5.2(m，1H，H-7)，4.6(d，2H，H-6)，3.2(d，2H，H-3)，2.5(s，3H，H-1)，1.8(s，6H，CH3異戊烯基)，1.7(s，6H，CH3異戊烯基)。
IR(記錄為膠片)3070，3026(＝CH)，2970(CH3)，2879(CH2)，1678(C＝O)，1236(C-O)cm-1。
7.1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(LP1)的合成 實驗式C13H16O2摩爾質(zhì)量204按照GP1使1-(4-羥苯基)乙酮與3-甲基丁-2-烯基溴化物發(fā)生反應。對于后處理，將沉淀的固態(tài)1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(LP1)用水洗滌，于室溫干燥。產(chǎn)率80％，無色化合物；mp 47℃。
所合成化合物LP1通過元素分析進行的定量鑒定按照實驗式組成計算的質(zhì)量關系76.47％C；7.84％H實測的質(zhì)量關系確認了實驗式76.43％C；7.81％H所合成化合物LP1通過核磁共振光譜法(NMR)、紅外光譜法(IR)和質(zhì)譜法(MS)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(DMSO-d6)7.9(d，2H，H-2′/H-4′，6.9(d，2H，H-1′/H-5′，5.5(m，1H，H-4)，4.6(d，2H，H-3)，2.6(s，3H，CH3CO)，1.8(s，3H，CH3異戊烯基)，1.7(s，3H，CH3異戊烯基)。
13C-NMR(CDCl3)196.7(CO)，162.7(C-6′)，138.8(C-5)，130.5(C-2′；C-4′)，130.1(C-3′)，118.8(C-4)，114.2(C-5′；C-1′)，64.9(C-3)，26.2(C-1)，25.7(CH3)，18.1(CH3)。
IR(記錄為膠片)3072，3029(＝CH)，2970，2935(CH3)，2875(CH2)，1668(C＝O)，1242(C-O)cm-1。
MS(70eV)204M+，136(M+-68)，69(異戊烯基)。
8.1-[2，4-雙(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮(2，4O)的合成 實驗式C18H22O3摩爾質(zhì)量288按照GP1使1-(2，4-二羥基苯基)乙酮與3-甲基丁-2-烯基溴化物發(fā)生反應。對于色譜法后處理，使用包含甲苯/乙酸乙酯＝9/1的混合物作為洗脫劑。
所合成化合物2，4O通過核磁共振光譜法(NMR)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(DMSO-d6)7.6(d，1H，H-6′，6.5(d，1H，H-5′)，6.4(d，1H，H-3′)，5.6(m，1H，H-7)，5.5(m，1H，H-4)，4.7(d，2H，H-6)，4.6(d，2H，H-3)，2.5(s，3H，H-1)，1.8(s，6H，CH3異戊烯基)，1.7(s，6H，CH3異戊烯基)。
9.6-(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛(LMK21)的合成 實驗式C15H14O3摩爾質(zhì)量242將4mmole在制備實施例2中得到的1-[2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮(L2)溶解于2ml無水二甲基甲酰胺中。在冷卻下逐滴加入1.29g三氯氧化磷。在攪拌下于45℃將反應混合物加熱1小時。然后將反應混合物倒在冰水上，然后于室溫攪拌4小時。將水相用氯仿萃取3次，通過硫酸鈉干燥，在真空下濃縮，通過柱色譜法(正己烷/乙酸乙酯＝1/0.1)純化。產(chǎn)率11％。
所合成化合物LMK21通過核磁共振光譜法(NMR)、紅外光譜法(IR)和質(zhì)譜法(MS)的結(jié)構(gòu)鑒定 結(jié)構(gòu)的NMR編號1H-NMR(CDCl3)10.35(s，1H，CHO)；8.52(s，1H，H-2)；8.07(d，1H，H-5)；7.56(m，1H，H-7)7.44(d，1H，H-8)；5.32(m，1H，＝CH乙烯基)；3.46(d，2H，CH2)；1.77(s，3H，CH3-異戊烯基)；1.73(s，3H，CH3-異戊烯基)。13C-NMR(75MHz CDCl3)188.6(CHO)；175.3(C-4)；164.1(C-2)，156.1(C-9)，135.7(C-7)，127.2(C(CH3)2)，125.8(C-6)；125.1(C-10)；123.6(C-5)；119.2(C-8)；117.9(＝CH-異戊烯基)；36.5(CH2-異戊烯基)；25.1(CH3-異戊烯基)；18.9(CH3-異戊烯基)。
IR(記錄為膠片)3040，3020(＝C-H)，2975(CH3)，2870(CH2)，1695(CHO)e 1645(CO)cm-1。
MS(70eV)242 M+.，241(M+.-1(H)，69(異戊烯基)，29(CHO)。
本發(fā)明的化合物的抗腫瘤作用(所合成化合物的抗腫瘤活性的試驗結(jié)果(見圖1-6))用以下人癌細胞系進行試驗肺NCI-460、乳腺正常(normal)MCF-7、乳腺NCI-ADR(表達MDR表型)、皮膚癌(黑素瘤)UACC-62、白血病K-562、結(jié)腸HT-29、腎癌786-0、卵巢癌OVCAR-3和前列腺癌PC-3(國立癌癥研究所贈送，F(xiàn)rederik，MA，USA)。
用含5％胎牛血清的5ml RPMI 1640(Gibco BRL，Life Technologies)在25ml細胞培養(yǎng)瓶(Nunc)中培養(yǎng)細胞。
使粘附的細胞胰蛋白酶化(0.5ml胰蛋白酶，Nuticell NutrientesCellulares)。然后通過加入5ml含5％血清的RPMI 1640使胰蛋白酶滅活。通過小心吸取液體制備單細胞混懸液，計數(shù)細胞，制備具有適宜細胞密度(根據(jù)細胞系而變化)的稀釋液，以100μl孔接種在96孔微量滴定板中。于37℃將微量滴定板預先孵育24小時以使培養(yǎng)穩(wěn)定。在37℃和5％CO2下將細胞與100μl受試物質(zhì)的稀釋液(0.25、2.5、25和250μg/ml，三倍稀釋)孵育48小時。Doxirubicin(Sigma化學公司)和他莫昔芬(Sigma化學公司)用作陽性對照。
按照Skehan等人(Journal of National Cancer Insitute，第82卷，第1107-1118頁1990)的說明進行抗增殖活性的磺酰羅丹明(SRB)試驗。用50％三氯乙酸(TCA，Sigma化學公司)(50μl/孔，終濃度為10％)通過蛋白質(zhì)沉淀于4℃將細胞固定1小時。棄去上清液，將板用自來水洗滌5次。將細胞用含0.4％SRB的1％乙酸溶液(50μl/孔)染色30分鐘，然后用1％乙酸洗滌4次以除去沒有結(jié)合的染料。將板干燥，用150μl/孔10mM Trizma緩沖劑(Sigma化學公司)使結(jié)合的染料溶解。于540nm處用自動板讀數(shù)器(Molecular Devices Max Microplate Reader)測定光密度。所有測定均進行3次。用Excel程序(Microsoft Office軟件包)計算光密度。
0.5至250μg/ml濃度范圍的本發(fā)明的化合物顯示出抑制細胞和殺細胞的活性。(1-[2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)])乙酮顯示出選擇性性質(zhì)而不損傷成纖維細胞，稀釋1∶2000時仍然具有活性。
本發(fā)明的所選化合物對細胞生長的濃度依賴性抑制示于圖1至6。
圖1化合物L1對所有受試細胞系均顯示出抑制細胞的活性(抑制細胞生長)，對NCI-460、UACC-62和NC1-ADR顯示出殺細胞的活性。
圖20.5至250μg/ml濃度范圍的化合物L2對所有細胞系均顯示出非常強的活性。
此外，還將該物質(zhì)對以下細胞系進行了試驗MIAPaCa2胰、C205結(jié)腸和T47D乳腺，對于比較，將其對非病原性細胞系WI38(成纖維細胞)進行了試驗。
化合物L2對所有3種腫瘤細胞系均具有選擇性活性(即對成纖維細胞沒有活性)，稀釋1∶2000時仍然具有活性。
表1.ED50(殺死50％人癌細胞的有效劑量值，μg/ml)
圖3圖3說明了化合物L3對受試細胞系具有抑制細胞和殺細胞的活性以及選擇性。
圖4化合物LP1對所有受試細胞系均顯示出中等的抑制細胞活性(從25μg/ml開始)和殺細胞活性(從250μg/ml開始)。
圖5化合物2，4O對所有受試細胞系均顯示出中等的抑制細胞活性(從25μg/ml開始)和殺細胞活性(從250μg/ml開始)。
圖6化合物LMK7對所有受試細胞系均顯示出抑制細胞活性(從25μg/ml開始)，但是其對受試肺癌細胞系沒有顯示出任何殺細胞活性。
抗微生物試驗(最低抑制濃度，MIC)通過將微生物用0.85％NaCl稀釋來制備試驗用的接種物，按照McFarland將稀釋水平設定在0.5，于580nm處在分光光度計中檢測。為了應用于試驗，將細胞混懸液稀釋至104UFC/ml。按照J.N.P.Eloff(PlantaMedica，第64卷，第711-713頁1998)的說明在96孔微量滴定板中進行MIC試驗。制備濃度為1.00-0.0015mg/ml的系列稀釋液。0.062-0.005mg/ml濃度的氯霉素或0.0125-0.001mg/ml濃度的制霉菌素(Merck)用作對照物質(zhì)。將接種物(100μl)置于所有孔中，于36℃將板孵育48小時。通過每孔加入20μl0.5％TTC(氯化四唑，Merck)的水溶液來檢測抗微生物活性。最低抑制濃度(MIC)定義為化合物抑制可見生長(通過TTC染色指示)的最低濃度。
抗微生物試驗的結(jié)果顯示在表2中。
表2.MIC值(mg/ml)
**抗白色念珠菌的對照物質(zhì)為制霉菌素表3.MIC值(mg/ml)
**抗白色念珠菌的對照物質(zhì)為制霉菌素表4.MIC值(mg/ml)
**抗白色念珠菌的對照物質(zhì)為制霉菌素以上試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有優(yōu)良的抗微生物(抗細菌和真菌)、抗病毒或抗增殖活性，因此可用于治療和預防人的惡性腫瘤，例如實體瘤如結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、甲狀腺癌、舌癌、膀胱癌、絨毛膜癌、肝癌、子宮癌、前列腺癌、咽癌、肺癌、乳腺癌、惡性黑素瘤、卡波西肉瘤、腦瘤、成神經(jīng)細胞瘤、卵巢癌、睪丸癌、骨肉瘤、胰癌、腎癌、腎上腺樣瘤和血管內(nèi)皮瘤，以及造血系統(tǒng)惡性腫瘤如白血病或淋巴瘤。
此外，本發(fā)明的化合物還可用作抗細菌和真菌病的藥物，例如由白色念珠菌引起的那些，如鵝口瘡、咽炎、指(趾)間真菌病，以及用作治療局部和全身性真菌病的藥物。
此外，本發(fā)明的化合物還可用作免疫刺激或免疫調(diào)節(jié)活性劑。
本發(fā)明還提供了包含任選與本領域中常用的佐劑和賦形劑混合的一種或至少一種本發(fā)明化合物的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可按照本領域普通技術人員眾所周知的常規(guī)方法和技術來配制/制備。
由此優(yōu)選口服、胃腸道外(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、鞘內(nèi))和局部(例如外用、直腸、陰道、口腔應用，在眼中或通過吸入)應用的劑型。
因此，本發(fā)明的藥物組合物可具體作為片劑(特別是還有腸溶包衣的片劑或活性劑釋放被調(diào)節(jié)的片劑)、膠囊劑(硬和軟明膠膠囊劑)、丸劑、顆粒劑、栓劑、珠劑(ovules)、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、硬膏劑、TTS或者還可作為乳劑、混懸劑、溶液劑或作為可重新配制的粉末(還用于胃腸道外應用)而提供。
權利要求
1.制備通式IV的羥基苯乙酮衍生物的方法 其中R1″、R2″、R3″和R4″相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R1″、R2″、R3″和R4″中至少一個為異戊烯基或1，1-二甲基烯丙基且R1″、R2″、R3″和R4″中至少一個為羥基，該方法的特征在于使通式I的羥基苯乙酮衍生物 其中R1、R2、R3和R4相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R1、R2、R3和R4中至少一個為氫且R1、R2、R3和R4中至少一個為羥基，在堿的存在下、于10至50℃的反應溫度、在有機溶劑中與式II的3-甲基丁-2-烯基鹵化物發(fā)生反應 其中X為氯、溴或碘，以得到通式III的羥基苯乙酮衍生物 其中R1′、2′、R3′和R4′相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或3-甲基丁-2-烯氧基，條件是R1′、R2′、R3′和R4′中至少一個為氫且R1′、R2′、R3′和R4′中至少一個為3-甲基丁-2-烯氧基，使式III化合物在N，N-二乙基苯胺中于160至220℃的反應溫度發(fā)生反應，以得到通式IV的羥基苯乙酮衍生物。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中通式III中的R1′為3-甲基丁-2-烯氧基，通式I中的R1為羥基。
3.根據(jù)權利要求1或2的方法，其中堿為碳酸鉀。
4.根據(jù)權利要求1或2的方法，該方法于20至40℃的反應溫度進行。
5.根據(jù)權利要求1或2的方法，其中有機溶劑為二甲基甲酰胺。
6.根據(jù)權利要求1的方法，其中通式IV中的R1″和/或R3″為羥基。
7.根據(jù)權利要求1或6的方法，其中通式III的羥基苯乙酮衍生物產(chǎn)生通式IV的羥基苯乙酮衍生物的反應在回流下進行。
8.制備通式V的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物的方法 其中R2″、R3″和R4″相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R2″、R3″和R4″中至少一個為異戊烯基或1，1-二甲基烯丙基，該方法的特征在于使其中R1″為羥基的根據(jù)權利要求1的通式IV的羥基苯乙酮衍生物于40至50℃的反應溫度下與至少2摩爾當量的二甲基甲酰胺和三氯氧化磷發(fā)生反應，以得到通式V的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物。
9.通式III的羥基苯乙酮衍生物 其中R1′、R2′、R3′和R4′相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或3-甲基丁-2-烯氧基，條件是R1′、R2′、R3′和R4′中至少一個為氫且R1′、R2′、R3′和R4′中至少一個為3-甲基丁-2-烯氧基，其中不包括1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮、1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮和1-[2，4-雙(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮。
10.根據(jù)權利要求9的羥基苯乙酮衍生物，包括1-[5-(3-甲基丁-2-烯基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮，1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮，和1-[5-(3-甲基丁-2-烯基)-4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮。
11.通式IV的羥基苯乙酮衍生物 其中R1″、R2″、R3″和R4″相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R1″、R2″、R3″和R4″中至少一個為異戊烯基或1，1-二甲基烯丙基且R1″、R2″、R3″和R4″中至少一個為羥基。
12.根據(jù)權利要求11的羥基苯乙酮衍生物，包括1-[2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[4-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥基苯基]乙酮，1-[3-(1，1-二甲基烯丙基)-2-羥基-5-(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[2-羥基-3，5-雙(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，1-[4-羥基-3，5-雙(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮，和1-[2，4-二羥基-3，5-雙(3-甲基丁-2-烯基)苯基]乙酮。
13.通式V的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物， 其中R2″、R3″和R4″相互獨立地為氫、異戊烯基、1，1-二甲基烯丙基或羥基，條件是R2″、R3″和R4″中至少一個為異戊烯基或1，1-二甲基烯丙基。
14.根據(jù)權利要求13的4-氧代-4H-色烯-3-甲醛衍生物，包括6-(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛、6，8-雙(3-甲基丁-2-烯基)-7-羥基-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛、6，8-雙(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛、8-(1，1-二甲基烯丙基)-6-(3-甲基丁-2-烯基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛和8-(1，1-二甲基烯丙基)-4-氧代-4H-色烯-3-甲醛。
15.藥物組合物，包含至少一種選自如下的化合物權利要求9至14中任一項的化合物、1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮、1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮和1-[2，4-雙(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮。
16.至少一種選自如下的化合物在制備抗增殖、抗微生物(細菌和真菌)、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)或免疫刺激藥物組合物中的用途權利要求9至14中任一項的化合物、1-[2-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮、1-[4-(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮和1-[2，4-雙(3-甲基丁-2-烯氧基)苯基]乙酮。
17.根據(jù)權利要求16的用途，用于預防或治療選自肺癌、乳腺癌(正常和表達MDR表型)、黑素瘤、白血病、結(jié)腸癌、腎癌、卵巢癌、胰癌和前列腺癌的腫瘤性疾病。
18.根據(jù)權利要求16的用途，用于預防或治療由念珠菌屬(Candida)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、微球菌屬(Micrococcus)、紅球菌屬(Rhodococcus)、埃希氏菌屬(Escherichia)、沙門氏菌屬(Salmonella)、念珠菌屬(Candida)、腸球菌屬(Enterococcus)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、奈瑟氏球菌屬(Neisseria)、沙門氏菌屬(Salmonella)、假單胞桿菌屬(Pseudomonas)、密螺旋體屬(Treponema)、分枝桿菌屬(Mycobacterium)或毛滴蟲屬(Trichomonas)的微生物引起的感染。
19.根據(jù)權利要求18的用途，用于預防或治療由選自枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、藤黃微球菌、馬紅球菌、屎腸球菌(Enterococcus faecium)、豬霍亂沙門氏菌、大腸埃希氏菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌、屎鏈球菌、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、雞瘟沙門菌(Salmonella pullorum)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)、凝結(jié)芽胞桿菌(Bacillus coagulans)、麻瘋分枝桿菌(Mycobacterium leprae)、陰道毛滴蟲(Trichomonas vaginalis)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)、巨大芽胞桿菌(Bacillus megaterium)、玫瑰色微球菌(Micrococcus roseus)、變易微球菌(Micrococcus varians)、傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)、白色念珠菌或結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)的微生物引起的感染。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有抗增殖和抗微生物性質(zhì)的被取代的羥基苯乙酮衍生物、含有它們的藥物組合物以及制備它們的方法。此外，本發(fā)明的羥基苯乙酮衍生物還可用作制備生物學活性化合物的有機中間體。
文檔編號A61P31/04GK1980880SQ200580023051
公開日2007年6月13日 申請日期2005年7月6日 優(yōu)先權日2004年7月6日
發(fā)明者J·A·金科塞斯蘇亞雷斯, K·佩塞克, E·埃斯特拉達羅格爾 申請人:里姆瑟藥物股份公司