專(zhuān)利名稱：使用抗－igf－1r抗體聯(lián)合治療非血液的惡性腫瘤的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及治療非血液的惡性腫瘤的方法，包含施用抗-胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)抗體，聯(lián)合施用其它治療劑例如化療劑和激素療法。
胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)信號(hào)傳遞系統(tǒng)在許多組織的生長(zhǎng)和發(fā)育中起重要作用，并調(diào)節(jié)總體的生長(zhǎng)。胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)是7.5-kD多肽，它在血漿中高濃度地循環(huán)，且在大多數(shù)組織中可檢測(cè)到。IGF-1會(huì)刺激細(xì)胞分化和細(xì)胞增殖，且是大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞類(lèi)型持續(xù)增殖所必需的。這些細(xì)胞類(lèi)型包括，除了別的以外，人二倍體成纖維細(xì)胞，上皮細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，骨髓細(xì)胞，軟骨細(xì)胞，成骨細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞。
導(dǎo)致IGF-1-刺激的細(xì)胞增殖或分化的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的第一步是，IGF-1或IGF-2(或超生理濃度的胰島素)向IGF-1受體的結(jié)合。IGF-1受體(IGF-1R)由兩類(lèi)亞基組成α亞基(一種130-135kD蛋白，它是完全細(xì)胞外的，且在配體結(jié)合中起作用)和β亞基(一種95-kD跨膜蛋白，具有跨膜和胞質(zhì)域)。IGF結(jié)合蛋白(IGFBP)具有生長(zhǎng)抑制作用，這是通過(guò)，至少部分地，競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合IGF，并阻止它們與IGF-1F的結(jié)合。IGF-1，IGF-2，IGF1R，和IGFBP之間的相互作用，會(huì)影響許多生理和病理過(guò)程，例如發(fā)育、生長(zhǎng)和代謝調(diào)節(jié)。
最初作為單鏈?zhǔn)荏w原(proreceptor)多肽合成IGF-1R，其通過(guò)下述方式加工糖基化，蛋白水解性裂解，和共價(jià)結(jié)合，以裝配成包含2個(gè)α亞基和2個(gè)β亞基的成熟的460-kD異四聚體。β亞基具有配體-激活的酪氨酸激酶活性。該活性參與介導(dǎo)配體作用的信號(hào)傳遞途徑，其包含β-亞基的自磷酸化作用和IGF-1R底物的磷酸化作用。
IGF-1和/或IGF-1R在維持體外和體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞中的作用，有大量的證據(jù)。在肺(Kaiser et al.，J.Cancer Res.Clin.Oncol.119665-668，1993；Moodyetal.，Life Sciences 521161-1173，1993；Macauley et al.，Cancer Res.，502511-2517，1990)、乳房(Pollack et al.，Cancer Lett.38223-230，1987；Foekens etal.，Cancer Res.497002-7009，1989；Cullen et al.，Cancer Res.497002-7009，1990；Arteaga et al.，J.Clin.Invest.841418-1423，1989)、前列腺和結(jié)腸(Remaole-Bennet et al.，J.Clin.Endocrinol.Metab.75609-616，1992；Guo et al.，Gastroenterol.1021101-1108，1992)的腫瘤中，IGF-1R水平升高。另外，IGF-1似乎是人神經(jīng)膠質(zhì)瘤的自分泌刺激劑(Sandberg-Nordqvist et al.，Cancer Res.532475-2478，1993)，同時(shí)IGF-1會(huì)刺激過(guò)表達(dá)IGF-1R的纖維肉瘤的生長(zhǎng)(Butler et al.，Cancer Res.583021-27，1998)。另外，與具有″低正?！宸秶鷥?nèi)的IGF-1水平的個(gè)體相比，具有″高正?！逅降腎GF-1的個(gè)體具有增加的普通癌癥的危險(xiǎn)(Rosen et al.，Trends Endocrinol.Metab.10136-41，1999)。關(guān)于IGF-1/IGF-1受體相互作用在多種人腫瘤的生長(zhǎng)中所起的作用的評(píng)論，見(jiàn)Macaulay，Br.J.Cancer，65311-320，1992。
目前，在使用許多種類(lèi)的抗腫瘤劑。多西他賽是源自紫杉樹(shù)的樹(shù)皮和針葉的稱作″紫杉烷″的一組藥物中的一種，它是表現(xiàn)出比多柔比星明顯更高的應(yīng)答率的第一種抗癌劑，所述多柔比星是一種非常有活性的試劑和在轉(zhuǎn)移性乳腺癌的第一線治療中廣泛使用的化學(xué)療法。
與絲裂霉素C和長(zhǎng)春堿的組合(在下列患者群體中常用的一種方案)相比，多西他賽也是作為單一試劑在晚期乳腺癌患者中表現(xiàn)出提高的存活率的第一種化療藥物。與絲裂霉素C和長(zhǎng)春堿的組合相比，多西他賽的平均進(jìn)展時(shí)間和治療失敗時(shí)間明顯更長(zhǎng)，且1年存活率明顯更高。在其它人惡性腫瘤例如卵巢、肺、頭和頸、胃和胰腺的癌癥中，還已經(jīng)記錄了多西他賽的有前途的結(jié)果。
紫杉醇(也是一種紫杉烷)會(huì)結(jié)合微管，并阻止它們的分子分解，從而抑制有絲分裂(細(xì)胞分裂)。由于仍然存在紡錘體，細(xì)胞不能分裂成子細(xì)胞。紫杉醇對(duì)于卵巢癌和晚期乳腺癌是最有效的。
激素療法可以非常有效地降低患有激素受體陽(yáng)性的乳腺癌的婦女復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)。他莫昔芬是已經(jīng)應(yīng)用最久(接近30年)的激素療法。它會(huì)阻斷雌激素對(duì)乳腺癌細(xì)胞的作用，阻止細(xì)胞的生長(zhǎng)。他莫昔芬可以使絕經(jīng)后的婦女的復(fù)發(fā)降低40-50％，使絕經(jīng)前的婦女降低30-50％。它也會(huì)降低新乳腺癌在未患病的乳房中形成的危險(xiǎn)，且可以使晚期病癥的進(jìn)展減速。
近年來(lái)，已經(jīng)將芳香酶抑制劑用作激素療法。這類(lèi)療法僅僅推薦給患有激素受體陽(yáng)性的乳腺癌的絕經(jīng)后的婦女。它通過(guò)阻斷雌激素在肌肉和脂肪組織中的生產(chǎn)來(lái)起作用，這是絕經(jīng)后的婦女中的雌激素的主要來(lái)源，絕經(jīng)后卵巢停止生產(chǎn)明顯水平的雌激素。
前列腺癌是最常見(jiàn)的癌癥，且是美國(guó)男性癌癥死亡的第二種原因。約10％初期前列腺癌病例表現(xiàn)出轉(zhuǎn)移性疾病。但是，在剩下的病例中，盡管通過(guò)手術(shù)、輻射或醫(yī)學(xué)療法進(jìn)行治療，轉(zhuǎn)移仍會(huì)發(fā)展，且這些轉(zhuǎn)移最終會(huì)變成激素難以治療的。以前已經(jīng)證實(shí)，化療在激素難以治療的(獨(dú)立于雄激素的)漸進(jìn)性前列腺癌(HRPC)中的應(yīng)用具有較差的功效和較高的毒性。含有多西他賽的新療法已經(jīng)表現(xiàn)出超過(guò)以前的治標(biāo)療法的存活益處。盡管有該積極的趨勢(shì)，用多西他賽和潑尼松治療的HRPC患者的生存中值是僅僅18.9個(gè)月；顯然，需要更有效的療法來(lái)治療HRPC患者。
雖然一些現(xiàn)在可得到的抗癌治療已經(jīng)是成功的，很少觀察到對(duì)這些治療的完全反應(yīng)，且這些治療難治的患者人數(shù)仍然很大。因而，必須開(kāi)發(fā)新治療方案，尤其是能增加或增強(qiáng)其它抗腫瘤劑的抗腫瘤活性的那些。
考慮到IGF-1和IGF-1R在癌癥和其它增殖性障礙等疾病(IGF-1和/或IGF-1R過(guò)表達(dá))中的作用，生成了IGF-1R的抗體，其會(huì)阻斷IGF-1或IGF-2向IGF-1R的結(jié)合。這樣的抗體記載在，例如，2002年7月11日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O02/053596；2005年2月24日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O05/016967和WO05/016970；2003年12月24日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利中請(qǐng)?zhí)朩O03/106621；2004年9月30日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O04/083248；2003年12月4日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O03/100008；2004年10月14日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)WO04/087756；和2005年1月26日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O05/005635。因?yàn)樗鼈兊淖钄嗄[瘤細(xì)胞存活途徑的能力，需要使用這樣的抗-IGF-1R抗體來(lái)治療患者的癌癥，尤其是非血液的惡性腫瘤，以得到與單獨(dú)的標(biāo)準(zhǔn)癌癥治療方案相比改善的臨床益處。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及治療需要這樣的治療的患者的晚期非血液的惡性腫瘤的方法，包含向患者施用治療有效量的抗-IGF-1R抗體的步驟。
更具體地，本發(fā)明涉及一種方法，其包含向患者施用能特異性地結(jié)合IGF-1R的抗體以及治療有效量的至少一種選自下述的試劑的步驟烷化劑，葉酸拮抗劑，嘧啶拮抗劑，細(xì)胞毒性抗生素，鉑化合物，紫杉烷，長(zhǎng)春花生物堿，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，EGFR抑制劑，和激素治療劑。優(yōu)選地，抗體是能特異性地結(jié)合人IGF-1R的抗體。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗-IGF-1R抗體具有下述性質(zhì)(a)對(duì)人IGF-1R的Kd為8×10-9或更小的結(jié)合親合力，和(b)以小于100nM的IC50，抑制人IGF-1R和IGF-1之間的結(jié)合。
在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗-IGF-1R抗體包含(a)重鏈，其包含選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR-1，CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列，和(b)輕鏈，其包含選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR-1，CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列，或(c)具有來(lái)自選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR序列的變化的序列，所述的序列選自保守變化，其中保守變化選自非極性殘基被其它非極性殘基替代，極性的帶電荷的殘基被其它極性的不帶電荷的殘基替代，極性的帶電荷的殘基被其它極性的帶電荷的殘基替代，和結(jié)構(gòu)上類(lèi)似的殘基的取代；和非保守的取代，其中非保守的取代選自極性的帶電荷的殘基對(duì)極性的不帶電荷的殘基的取代，和非極性殘基對(duì)極性殘基的取代，添加和缺失。
本發(fā)明也涉及用于治療非血液的惡性腫瘤的藥物組合物，其包含(a)治療有效量的能特異性地結(jié)合IGF-1R的抗體，(b)治療有效量的至少一種選自下述的試劑烷化劑，葉酸拮抗劑，嘧啶拮抗劑，細(xì)胞毒性抗生素，鉑化合物，紫杉烷，長(zhǎng)春花生物堿，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，EGFR抑制劑，和激素治療劑；和(c)藥學(xué)上可接受的載體。
附圖詳述

圖1A-1C顯示了來(lái)自6種人抗-IGF-1R抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列彼此的比對(duì)以及與種系序列的比對(duì)。圖1A顯示了抗體2.12.1(SEQ ID NO1)，2.13.2(SEQ ID NO5)，2.14.3(SEQ ID NO9)和4.9.2(SEQ ID NO13)的輕鏈可變區(qū)(VL)的核苷酸序列彼此的比對(duì)以及與種系Vκ A30序列(SEQ ID NO39)的比對(duì)。圖1B顯示了抗體4.17.3的VL的核苷酸序列(SEQ ID NO17)與種系Vκ O12序列(SEQ ID NO41)的比對(duì)。圖1C顯示了抗體6.1.1的VL的核苷酸序列(SEQ ID NO21)與種系VκA27序列(SEQ ID NO37)的比對(duì)。比對(duì)也顯示了每種抗體的VL的CDR區(qū)域。SEQ ID NO53-55分別顯示了圖1A-1C的共有序列。
圖2A-2D顯示了來(lái)自6種人抗-IGF-1R抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列彼此的比對(duì)以及與種系序列的比對(duì)。圖2A顯示了抗體2.12.1的VH的核苷酸序列(SEQ ID NO3)與種系VH DP-35序列(SEQ ID NO29)的比對(duì)。圖2B顯示了抗體2.14.3的VH的核苷酸序列(SEQ ID NO11)與種系VIV-4/4.35序列(SEQ ID NO43)的比對(duì)。圖2C-1和2C-2顯示了抗體2.13.2(SEQ ID NO7)，4.9.2(SEQ ID NO15)和6.1.1(SEQ ID NO23)的VH的核苷酸序列彼此的比對(duì)以及與種系VH DP-47序列(SEQ ID NO31)的比對(duì)。圖2D顯示了抗體4.17.3的VH的核苷酸序列(SEQ ID NO19)與種系VH DP-71序列(SEQ ID NO35)的比對(duì)。比對(duì)也顯示了抗體的CDR區(qū)域。SEQ ID NO56-59分別顯示了圖2A-2D的共有序列。
圖3A顯示了與種系序列相比，2.13.2和2.12.1的重鏈和輕鏈的不同區(qū)域中的突變的數(shù)目。圖3A-D顯示了來(lái)自抗體2.13.2和2.12.1的重鏈和輕鏈的氨基酸序列與它們來(lái)源的種系序列的比對(duì)。圖3B顯示了抗體2.13.2的重鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO45)與種系序列DP-47(3-23)/D6-19/JH6(SEQ ID NO46)的比對(duì)。圖3C顯示了抗體2.13.2的輕鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO47)與種系序列A30/Jk2(SEQID NO48)的比對(duì)。圖3D顯示了抗體2.12.1的重鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO49)與種系序列DP-35(3-11)/D3-3/JH6(SEQ ID NO50)的比對(duì)。圖3E顯示了抗體2.12.1的輕鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO51)與種系序列A30/Jk1(SEQ ID NO52)的比對(duì)。對(duì)于圖3B-E，信號(hào)序列是斜體的，CDR標(biāo)有下劃線，恒定域是粗體的，構(gòu)架(FR)突變用氨基酸殘基上面的加號(hào)(“+”)突出顯示，CDR突變用氨基酸殘基上面的星號(hào)突出顯示。
圖4證實(shí)，抗-IGF-1R抗體2.13.2和4.9.2會(huì)減少3T3-IGF-1R腫瘤中的IGF-1R磷酸酪氨酸信號(hào)。
圖5證實(shí)，抗-IGF-1R抗體2.13.2會(huì)抑制3T3-IGF-1R腫瘤體內(nèi)生長(zhǎng)。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及非血液的惡性腫瘤的治療，包括乳房、肺、腦、皮膚、卵巢、前列腺、頭和頸、結(jié)直腸、胃、膀胱、腎、食管和胰腺的癌癥，以及兒童的實(shí)體瘤。早期和晚期(轉(zhuǎn)移的)癌癥的治療，在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于治療乳腺癌，前列腺癌，和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。
目前，許多種類(lèi)的化療藥物被用于非血液的惡性腫瘤的治療中，它們也適用于本發(fā)明的聯(lián)合療法中。例如，烷化劑是一類(lèi)烷化DNA、從而限制鏈的解螺旋和復(fù)制的藥物。烷化劑包括環(huán)磷酰胺(CYTOXAN)，異環(huán)磷酰胺(IFEX)，鹽酸氮芥(MUSTARGEN)，塞替派(THIOPLEX)，鏈脲霉素(streptozotocin)(ZANOSAR)，卡莫司汀(BICNU，GLIADELWAFER)，洛莫司汀(CEENU)，和達(dá)卡巴嗪(DTIC-DOME)。在本發(fā)明的方法中使用的一種優(yōu)選的烷化劑是環(huán)磷酰胺。
葉酸拮抗劑會(huì)結(jié)合二氫葉酸還原酶(DHFR)，并干擾嘧啶(胸苷)合成。甲氨蝶呤(MATREX，F(xiàn)OLEX，TREXALL)，三甲曲沙(NEUTREXIN)和培美曲塞(ARIMTA)是適用于本發(fā)明的方法中的葉酸拮抗劑。除了DHFR以外，培美曲塞也會(huì)抑制胸苷酸合酶和甘氨酰胺核糖核苷酸甲?；D(zhuǎn)移酶，它們是參與胸苷合成的另外兩種葉酸-依賴性的酶。
嘧啶拮抗劑會(huì)抑制參與嘧啶合成的酶。作為嘧啶類(lèi)似物，它們也會(huì)通過(guò)與正常的核苷酸競(jìng)爭(zhēng)向DNA分子中的整合，干擾DNA生產(chǎn)。適用于本發(fā)明的方法中的嘧啶拮抗劑包括5-氟尿嘧啶(5-FU)；卡培他濱(XELODA)，即5′-脫氧-5-氟尿苷(5′-FDUR)的前藥，它在體內(nèi)會(huì)被酶促地轉(zhuǎn)化成5-FU；雷替曲塞(TOMUDEX)；替加氟-尿嘧啶(UFTORAL)；和吉西他濱(GEMZAR)。
蒽環(huán)類(lèi)抗生素通過(guò)嵌入DNA鏈之間，抑制DNA的解螺旋，發(fā)揮細(xì)胞毒性效應(yīng)。蒽環(huán)類(lèi)抗生素和蒽環(huán)類(lèi)抗生素衍生物包括鹽酸多柔比星(ADRIAMYCIN，RUBEX，DOXIL)，鹽酸表柔比星(ELLENCE，PHARMORUBICIN)，柔紅霉素(CERUBIDINE，DAUNOXOME)，奈莫柔比星，鹽酸伊達(dá)比星(IDAMYCIN PFS，ZAVEDOS)和米托蒽醌(DHAD，NOVANTRONE)。在本發(fā)明中使用的優(yōu)選的蒽環(huán)類(lèi)抗生素包括多柔比星和表柔比星。
其它細(xì)胞毒性抗生素可以用作癌癥化療劑，且適用于本發(fā)明中。它們包括更生霉素(放線菌素D，COSMEGEN)，普卡霉素(MITHRACIN)，絲裂霉素(MUTAMYCIN)，和博來(lái)霉素(BLENOXANE)。更生霉素是特別優(yōu)選的。
鉑化合物通過(guò)嵌入DNA鏈之間和內(nèi)部，抑制DNA的解螺旋，發(fā)揮它們的抗腫瘤作用。在本發(fā)明的方法中有用的鉑化合物包括順鉑(PLATINOL)和卡鉑(PARAPLATIN)。
紫杉烷會(huì)促進(jìn)微管的組裝，同時(shí)抑制它們分解成微管蛋白，從而阻止細(xì)胞在有絲分裂過(guò)程中破壞有絲分裂紡錘體的能力。作為單一試劑療法和在與其它化療劑的聯(lián)合中，它們已經(jīng)表現(xiàn)出對(duì)許多實(shí)體瘤的顯著活性。本發(fā)明的聯(lián)合療法的一個(gè)實(shí)施方案包括，與IGF-1R抗體聯(lián)合使用一種或多種紫杉烷。與IGF-1R抗體聯(lián)合使用的合適的紫杉烷包括多西他賽(TAXOTERE)和紫杉醇(TAXOL)。
長(zhǎng)春花生物堿象紫杉烷一樣，是″紡錘體抑制劑″，作用于形成有絲分裂紡錘體的微管。它們通過(guò)干擾微管組裝，阻止紡錘體形成，抑制有絲分裂。長(zhǎng)春花生物堿包括長(zhǎng)春地辛(ELDISINE)，硫酸長(zhǎng)春堿(VELBAN)，硫酸長(zhǎng)春新堿(ONCOVIN)和酒石酸長(zhǎng)春瑞濱(NAVELBINE)。在本發(fā)明的方法中使用的一種優(yōu)選的長(zhǎng)春花生物堿是長(zhǎng)春瑞濱。
喜樹(shù)堿類(lèi)似物通過(guò)抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I(對(duì)DNA復(fù)制和包裝至關(guān)重要的一種酶)起作用。腫瘤細(xì)胞中的拓?fù)洚悩?gòu)酶I的水平比正常組織高。在本發(fā)明的方法中有用的喜樹(shù)堿類(lèi)似物包括依立替康(CAMPTOSAR)和托泊替康(HYCAMTIN)。依立替康是特別優(yōu)選的。
拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑會(huì)干擾正常的DNA斷裂重封過(guò)程(如同拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑一樣)，且它們也會(huì)干擾新復(fù)制的染色體的分離，導(dǎo)致致畸變的突變和潛在的細(xì)胞死亡。上面討論的蒽環(huán)類(lèi)抗生素會(huì)表現(xiàn)出拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制活性。鬼臼毒素的衍生物(盾葉鬼臼的一種提取物，它是抗有絲分裂的葡糖苷)也是拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑。適用于本發(fā)明的鬼臼毒素衍生物包括依托泊苷(VEPESID)，磷酸依托泊苷(ETOPOPHOS)，和替尼泊苷(VUMON)。依托泊苷是特別優(yōu)選的。
抑制表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶(TK)的化合物，代表著相對(duì)新種類(lèi)的在本發(fā)明的方法中有用的抗腫瘤藥。許多人癌癥會(huì)在細(xì)胞表面表達(dá)EGFR家族的成員。當(dāng)配體結(jié)合EGFR時(shí)，它會(huì)啟動(dòng)細(xì)胞反應(yīng)的級(jí)聯(lián)，導(dǎo)致增強(qiáng)的細(xì)胞分裂，并影響癌癥發(fā)育和進(jìn)展的其它方面，包括血管發(fā)生，轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散，和細(xì)胞凋亡的抑制。EGFR-TK抑制劑可以選擇性地靶向EGFR家族的成員之一(EGFR(也稱作HER1或ErbB-1)，HER2/neu(也稱作ErbB-2)，HER3(也稱作ErbB-3)，或HER4(也稱作ErbB-4))，或可以靶向它們中的2種或多種。適用于本發(fā)明中的EGFR-TK抑制劑包括gefitinib(IRESSA)，erlotinib(TARCEVA)，曲妥單抗(HERCEPTIN)，panitumumab(ABX-EGF；Abgenix/Amgen)，lapatinib(GlaxoSmithKline)，CI-1033(Pfizer)，GW2016(GlaxoSmithKline)，EKB-569(Wyeth)，PKI-166(Novartis)，CP-724，714(Pfizer)，和BIBX-1382(Boeringer-Ingelheim)。在2002年11月14日公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)US 2002-0169165A1中，描述了其它的EGFR-TK抑制劑。
本發(fā)明的聯(lián)合療法的另一個(gè)實(shí)施方案包括，與IGF-1R抗體聯(lián)合使用激素治療，尤其是治療乳腺癌的抗-雌激素。這樣的激素治療與雌激素競(jìng)爭(zhēng)乳房組織中的結(jié)合位點(diǎn)。它們包括檸檬酸他莫昔芬(NOLVADEX)和氟維司群(FASLODEX)。類(lèi)似地，抗-雄激素會(huì)阻斷睪酮受體，因此可以用于治療雄激素-依賴性的前列腺癌。
其它激素治療包括芳香酶抑制劑。這類(lèi)激素試劑會(huì)滅活芳香酶，后者是將雄激素轉(zhuǎn)化成雌激素的酶。適于和IGF-1R抗體聯(lián)合使用的芳香酶抑制劑的實(shí)例包括阿那曲唑(ARIMIDEX)，來(lái)曲唑(FEMARA)，依西美坦(AROMASIN)，和鹽酸法倔唑。依西美坦是特別優(yōu)選的用于本發(fā)明的方法中的芳香酶抑制劑。
抗體與其它治療劑的共同施用(聯(lián)合治療)包括，施用包含抗-IGF-1R抗體和一種或多種其它治療劑的藥物組合物，和施用2種或多種分開(kāi)的藥物組合物，一種包含抗-IGF-1R抗體，且其它種包含其它的治療劑。而且，盡管共同施用或聯(lián)合(結(jié)合)治療通常指彼此同時(shí)施用抗體和其它治療劑，它也包括同時(shí)、先后或分開(kāi)地施用治療物的各個(gè)組分。
本發(fā)明也包括施用除了第一種和第二種組分以外的其它治療劑，無(wú)論是與那些組分中的一種或多種同時(shí)地還是先后地。這樣的治療劑包括鎮(zhèn)痛藥，癌癥疫苗，抗血管劑，抗增殖劑，和止吐藥。優(yōu)選的止吐藥包括aprepitant，鹽酸昂丹司瓊，鹽酸格拉司瓊，和甲氧氯普胺。
每次施用的持續(xù)時(shí)間可以變化，從快速施用至連續(xù)灌注。結(jié)果，為了本發(fā)明的目的，聯(lián)合不只是限于通過(guò)組分的物理結(jié)合得到的那些，也指允許分開(kāi)施用的那些，這可以是同時(shí)的或間隔一段時(shí)間。根據(jù)本發(fā)明的組合物優(yōu)選地是可以腸胃外施用的組合物。但是，在局部的區(qū)域療法的情況下，可以經(jīng)口地或腹膜內(nèi)地施用這些組合物。
如本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)明白的，要與IGF-1R抗體聯(lián)合使用的治療劑的選擇，和它們使用的時(shí)機(jī)，部分地取決于治療的癌癥的類(lèi)型和階段。例如，在早期乳腺癌(這時(shí)癌癥還沒(méi)有擴(kuò)散到乳房以外)中，手術(shù)和輻射之后通常是輔助化療或輔助激素治療，其中的任一種都可以在本發(fā)明的方法中與IGF-1R抗體相組合。早期乳腺癌的典型的輔助化療包括環(huán)磷酰胺，甲氨蝶呤和5-FU(″CMF″)；5-FU，多柔比星，和環(huán)磷酰胺(″FAC″)；多西他賽，多柔比星，和環(huán)磷酰胺(″TAC″)；多柔比星和環(huán)磷酰胺(″AC″)；多柔比星和環(huán)磷酰胺，之后為紫杉醇(″AC和T″)；和5-FU，表柔比星，和環(huán)磷酰胺(″FEC″)。在該階段，他莫昔芬是優(yōu)選的激素治療。
在局部的晚期乳腺癌中，其中癌癥僅僅擴(kuò)散到附近的組織或淋巴結(jié)中，患者經(jīng)常接受化療，其后是手術(shù)和輻射，然后是輔助激素治療?；蛘撸中g(shù)/輻射之后是輔助化療，然后是輔助激素治療。IGF-1R抗體可以與化療劑或激素治療劑聯(lián)合施用，無(wú)論它們?cè)谑中g(shù)/輻射之前或之后使用。局部的晚期乳腺癌的典型的化療方案包括FAC，AC，F(xiàn)EC，和多柔比星+多西他賽(″AT″)。
轉(zhuǎn)移性乳腺癌已經(jīng)從它開(kāi)始的乳房擴(kuò)散到身體的其它部位。化療之前可以任選地進(jìn)行激素治療。第一線激素治療目前包括他莫昔芬和阿那曲唑。第一線化療方案目前包括FAC，TAC，多西他賽+表柔比星，多西他賽，紫杉醇，卡培他濱，長(zhǎng)春瑞濱，和曲妥單抗。第二線化療治療包括單獨(dú)的多西他賽，或與卡培他濱聯(lián)合的多西他賽。本發(fā)明的方法適用作第一線療法和第二線療法。
在美國(guó)，已經(jīng)接受紫杉醇和卡鉑的聯(lián)合，作為不能手術(shù)治療的階段IIIB(即癌癥已經(jīng)擴(kuò)散到肺附近的結(jié)構(gòu)，縱隔中的淋巴結(jié)，或胸的另一側(cè)或頸下的淋巴結(jié))和階段IV(即癌癥已經(jīng)擴(kuò)散到身體的其它部位或另一片肺)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的第一線治療的護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)。但是，在用大部分階段IV群體進(jìn)行的功效研究中，總應(yīng)答率僅僅是體力狀態(tài)0-1的患者的約28％。在歐洲，NSCLC的第一線治療是吉西他濱和順鉑。NSCLC的其它治療方案包括單獨(dú)的紫杉醇，或與順鉑或吉西他濱相組合的紫杉醇；單獨(dú)的多西他賽，或與順鉑或吉西他濱相組合的多西他賽；單獨(dú)的長(zhǎng)春瑞濱，或與吉西他濱相組合的長(zhǎng)春瑞濱；單獨(dú)的依立替康，或與吉西他濱相組合的依立替康；培美曲塞；和gefitinib。
已知通過(guò)IGF-1R的信號(hào)傳遞是細(xì)胞系的腫瘤發(fā)生所必需的，且已經(jīng)證實(shí)會(huì)降低化療的細(xì)胞毒性，阻止IGF-1R活性會(huì)提高現(xiàn)有的療法的有效性，并阻止腫瘤在動(dòng)物模型中的進(jìn)展。因此，預(yù)期IGF-1R的抑制劑(例如本發(fā)明的抗體)在聯(lián)合使用時(shí)，會(huì)降低腫瘤細(xì)胞存活率，并提高化療的功效。
當(dāng)與細(xì)胞一起溫育時(shí)，作為IGF-1-誘發(fā)的受體自磷酸化作用的高度特異性的且有效的抑制劑的完全的人單克隆抗體，會(huì)誘導(dǎo)受體內(nèi)在化對(duì)IGF-1R的下調(diào)節(jié)。在實(shí)體瘤離體模型中下調(diào)節(jié)IGF-1R的劑量(31.25-125μg)，相當(dāng)于在第1天8-40μg/ml和第9天2-20μg/ml的抗體濃度。向攜帶轉(zhuǎn)染子IGF-1R過(guò)表達(dá)NIH-3T3細(xì)胞系的腫瘤的無(wú)胸腺小鼠腹膜內(nèi)地施用抗-IGF-1R抗體，會(huì)導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)的劑量依賴性的抑制。導(dǎo)致50％生長(zhǎng)抑制的抗-IGF-1R抗體的血清濃度是，第1天20μg/ml，第9天13μg/ml。類(lèi)似的抗腫瘤研究擴(kuò)大到人腫瘤異種移植物模型。作為單一試劑，抗-IGF-1R抗體會(huì)抑制幾種異種移植物模型的生長(zhǎng)，包括乳房、肺和結(jié)直腸癌。
在H460和EBC-1人NSCLC腫瘤異種移植物模型中，測(cè)試了抗-IGF-1R抗體與紫杉醇或卡鉑的聯(lián)合。與每種單獨(dú)的試劑相比，抗-IGF-1R抗體與那些試劑的聯(lián)合，會(huì)增加它們的腫瘤生長(zhǎng)抑制。
除非本文中另有定義，在本發(fā)明中使用的科學(xué)、技術(shù)和醫(yī)學(xué)術(shù)語(yǔ)，具有本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義。一般地，在本文所述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)和蛋白和核酸化學(xué)方面使用的命名和它們的技術(shù)，是本領(lǐng)域眾所周知的和常用的。
除非另有說(shuō)明，下面的術(shù)語(yǔ)應(yīng)當(dāng)理解成具有下面的含義″抗體″指完整的免疫球蛋白，或它的能與完整的抗體競(jìng)爭(zhēng)特異性結(jié)合的抗原結(jié)合部分。通過(guò)重組DNA技術(shù)，或通過(guò)完整抗體的酶的或化學(xué)的剪切，可以生產(chǎn)抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分包括，除了別的以外，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2，F(xiàn)v，dAb，和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)片段，單鏈抗體(scFv)，嵌合抗體，雙體(diabody)和多肽，后者含有免疫球蛋白的至少一部分，其足以提供特異性抗原向該多肽的結(jié)合。
免疫球蛋白鏈會(huì)表現(xiàn)出相同的由3個(gè)超可變區(qū)(也稱作互補(bǔ)決定區(qū)或CDR)連接的相對(duì)保守的構(gòu)架區(qū)(FR)的一般結(jié)構(gòu)。每對(duì)的2條鏈的CDR在構(gòu)架區(qū)對(duì)齊，能結(jié)合特定的表位。從N-末端至C-末端，輕鏈和重鏈都包含域FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3，CDR3和FR4。氨基酸向每個(gè)域的分配，是根據(jù)Kabat，Sequences of Proteins ofImmunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1987和1991))，或Chothia & Lesk，J.Mol.Biol.196901-917(1987)；Chothiaetal.，Nature 342878-883(1989)的定義。
″分離的抗體″是這樣的抗體，它(1)不伴有天然伴隨的組分(包括其它天然伴隨的抗體，其在它的天然狀態(tài)時(shí)伴隨它)，(2)不含來(lái)自相同物種的其它蛋白，(3)由來(lái)自不同物種的細(xì)胞表達(dá)，或(4)不會(huì)天然發(fā)生。分離的抗體的實(shí)例包括，已經(jīng)使用IGF-1R親合純化的抗-IGF-1R的抗體，已經(jīng)由雜交瘤或其它細(xì)胞系體外合成的抗-IGF-1R抗體，和源自轉(zhuǎn)基因小鼠的人抗-IGF-1R抗體。
術(shù)語(yǔ)″嵌合抗體″指這樣的抗體，它含有來(lái)自一種抗體的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域，和來(lái)自一種或多種其它抗體的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，一個(gè)或多個(gè)CDR源自人抗-IGF-1R抗體。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所有CDR源自人抗-IGF-1R抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，混合來(lái)自超過(guò)一種人抗-IGF-1R抗體的CDR，并在嵌合抗體中配對(duì)。而且，構(gòu)架區(qū)可以源自相同的抗-IGF-1R抗體之一，源自一種或多種不同的抗體，例如人抗體，或源自人源化的抗體。
術(shù)語(yǔ)“表位”包括能特異性地結(jié)合免疫球蛋白或T-細(xì)胞受體的任意蛋白決定基。表位決定基通常由分子的化學(xué)活性的表面簇組成，例如氨基酸或糖側(cè)鏈，且通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征，以及特定的電荷特征。當(dāng)離解常數(shù)≤1μM，優(yōu)選地≤100nM和最優(yōu)選地≤10nM時(shí)，認(rèn)為抗體會(huì)特異性地結(jié)合抗原。
如應(yīng)用于多肽的，術(shù)語(yǔ)″實(shí)質(zhì)的一致性″指，2個(gè)肽序列當(dāng)最佳地比對(duì)時(shí)，例如通過(guò)程序GAP或BESTFIT，使用默認(rèn)的缺口權(quán)重，具有至少75％或80％序列一致性，優(yōu)選地至少90％或95％序列一致性，甚至更優(yōu)選地至少98％或99％序列一致性。優(yōu)選地，不一致的殘基位置的不同之處在于保守的氨基酸取代?！灞Ｊ氐陌被崛〈迨沁@樣的，其中氨基酸殘基被具有類(lèi)似化學(xué)性質(zhì)(例如，電荷或疏水性)的帶側(cè)鏈(R基團(tuán))的另一個(gè)氨基酸殘基取代。通常，保守的氨基酸取代基本上不會(huì)改變蛋白的功能性質(zhì)。在2個(gè)或多個(gè)氨基酸序列彼此的差別在于保守取代的情況下，可以上調(diào)序列一致性百分比或相似性程度，以改正取代的保守性質(zhì)。進(jìn)行這樣的調(diào)整的方法，是本領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知的。見(jiàn)，例如，Pearson，Methods Mol.Biol。24307-31(1994)。具有類(lèi)似化學(xué)性質(zhì)的帶側(cè)鏈的氨基酸基團(tuán)的實(shí)例包括，1)脂肪族側(cè)鏈甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸和異亮氨酸；2)脂肪族-羥基側(cè)鏈絲氨酸和蘇氨酸；3)含有酰胺的側(cè)鏈天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸，酪氨酸，和色氨酸；5)堿性側(cè)鏈賴氨酸，精氨酸，和組氨酸；和6)含硫的側(cè)鏈?zhǔn)前腚装彼岷图琢虬彼?。保守的氨基酸取代基包括纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，賴氨酸-精氨酸，丙氨酸-纈氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，和天冬酰胺-谷氨酰胺。
優(yōu)選的氨基酸取代是這樣的，它會(huì)(1)減少對(duì)蛋白酶解的敏感性，(2)減少對(duì)氧化的敏感性，(3)改變形成蛋白復(fù)合物的結(jié)合親合力，(4)改變結(jié)合親合力，和(4)賦予或修飾這樣的類(lèi)似物的其它物理化學(xué)或功能性質(zhì)。類(lèi)似物可以包括天然發(fā)生的肽序列以外的序列的各種突變。例如，可以在天然發(fā)生的序列(優(yōu)選地，在形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域以外的多肽部分)中，產(chǎn)生單個(gè)或多個(gè)氨基酸取代(優(yōu)選地保守的氨基酸取代)。保守的氨基酸取代應(yīng)當(dāng)基本上不改變親本序列的結(jié)構(gòu)特征(例如，替代氨基酸不會(huì)傾向于破壞在親本序列中發(fā)生的螺旋，或破壞表征親本序列的其它類(lèi)型的二級(jí)結(jié)構(gòu))。
短語(yǔ)″聯(lián)合″包括同時(shí)、先后或分開(kāi)施用治療物的單個(gè)組分。例如，可以每三天施用一次抗體，每天施用一次其它治療劑。可以在用其它治療劑治療障礙之前或之后，施用抗體。類(lèi)似地，可以在其它治療(例如放療，化療，光動(dòng)力學(xué)治療，手術(shù)或其它免疫療法)之前或之后，施用抗-IGF-1R抗體。
術(shù)語(yǔ)“并存地”和“同時(shí)地”可互換地使用，指(1)在時(shí)間上同時(shí)地，或(2)在共同治療方案過(guò)程中的不同時(shí)間，施用本發(fā)明的聯(lián)合療法的化合物。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“先后地”指施用第一種組分后，施用第二種組分?？?IGF-1R抗體可以是第一種組分或第二種組分。施用一種組分后，可以在第一種組分之后基本上立即施用第二種組分，或者可以在第一種組分之后的有效時(shí)間段后施用第二種組分；有效時(shí)間段是為實(shí)現(xiàn)施用第一種組分的最大益處而給出的時(shí)間量。
術(shù)語(yǔ)″患者″包括哺乳動(dòng)物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人。
除非另有說(shuō)明，如本文所使用的術(shù)語(yǔ)″治療″指，預(yù)防這樣的術(shù)語(yǔ)所指的障礙或狀況，或這樣的障礙或狀況的一種或多種癥狀，或逆轉(zhuǎn)、減輕、抑制其發(fā)展。除非另有說(shuō)明，如本文所使用的名詞″治療″指上面定義的動(dòng)詞“治療”的治療行為。
人抗體會(huì)避免與具有小鼠或大鼠可變區(qū)和/或恒定區(qū)的抗體有關(guān)的某些問(wèn)題。更優(yōu)選的是完全人抗-人IGF-1R抗體。預(yù)期完全人抗-IGF-1R抗體會(huì)使小鼠或小鼠-衍生的單克隆抗體(Mab)固有的免疫原性反應(yīng)和過(guò)敏反應(yīng)最小化，從而增加施用的抗體的功效和安全性。可以預(yù)期，完全人抗體的應(yīng)用，會(huì)提供治療可能需要重復(fù)抗體施用的慢性和復(fù)發(fā)性人疾病(例如，炎癥和癌癥)的實(shí)質(zhì)優(yōu)點(diǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了不會(huì)結(jié)合補(bǔ)體的抗-IGF-1R抗體。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，抗-IGF-1R抗體會(huì)高親合力地結(jié)合IGF-1R。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗-IGF-1R抗體以1×10-8M或更小的Kd結(jié)合IGF-1R。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體以1×10-9M或更小的Kd結(jié)合IGF-1R。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體以5×10-10M或更小的Kd結(jié)合IGF-1R。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體以1×10-10M或更小的Kd結(jié)合IGF-1R。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體以與選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的抗體基本上相同的Kd結(jié)合IGF-1R。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體以與包含一個(gè)或多個(gè)CDR的抗體基本上相同的Kd結(jié)合IGF-1R，所述CDR來(lái)自選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的抗體。
本發(fā)明也采用會(huì)與人抗-IGF-1R抗體結(jié)合相同的抗原或表位的抗-IGF-1R抗體。本發(fā)明也可以采用會(huì)與人抗-IGF-1R抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)的抗-IGF-1R抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，人抗-IGF-1R抗體是2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，人抗-IGF-1R包含一個(gè)或多個(gè)CDR，該CDR來(lái)自選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的抗體。
使用包含由人κ基因編碼的可變序列的抗-IGF-1R抗體，也可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，可變序列由Vκ A27，A30或O12基因家族編碼。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，可變序列由人VκA30基因家族編碼。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，輕鏈包含不超過(guò)10個(gè)來(lái)自種系VκA27，A30或O12的氨基酸取代，優(yōu)選地不超過(guò)6個(gè)氨基酸取代，更優(yōu)選地不超過(guò)3個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該氨基酸取代是保守的取代。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與種系氨基酸序列相比，抗-IGF-1R抗體的VL含有與抗體2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的任一個(gè)或多個(gè)VL相同的氨基酸取代。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，輕鏈包含與2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的VL的氨基酸序列相同的氨基酸序列。在另一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，輕鏈包含與2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的輕鏈的CDR區(qū)域相同的氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，輕鏈包含來(lái)自2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的輕鏈的至少一個(gè)CDR區(qū)域的氨基酸序列。
使用包含人重鏈或源自人重鏈的序列的抗-IGF-1R抗體或其一部分，也可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。在一個(gè)實(shí)施方案中，重鏈氨基酸序列源自人VHDP-35，DP-47，DP-70，DP-71或VIV-4/4.35基因家族。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈氨基酸序列源自人VHDP-47基因家族。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈包含來(lái)自種系VHDP-35，DP-47，DP-70，DP-71或VIV-4/4.35的不超過(guò)8個(gè)氨基酸變化，更優(yōu)選地不超過(guò)6個(gè)氨基酸變化，更優(yōu)選地不超過(guò)3個(gè)氨基酸變化。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，相對(duì)于種系氨基酸序列，抗-IGF-1R抗體的VH含有與抗體2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的任一個(gè)或多個(gè)VH相同的氨基酸取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在與在抗體2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.17.3.，4.9.2或6.1.1的任一個(gè)或多個(gè)VH處發(fā)現(xiàn)的那些相同的位置，產(chǎn)生氨基酸取代，但不使用相同的氨基酸產(chǎn)生保守的氨基酸取代。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈包含與2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的VH的氨基酸序列相同的氨基酸序列。在另一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈包含與2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的重鏈的CDR區(qū)域相同的氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈包含來(lái)自2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1的重鏈的至少一個(gè)CDR區(qū)域的氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈包含來(lái)自不同重鏈的CDR的氨基酸序列。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，從2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3或6.1.1，得到來(lái)自不同重鏈的CDR。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明采用會(huì)抑制IGF-1向IGF-1R的結(jié)合或IGF-2向IGF-1R的結(jié)合的抗-IGF-1R抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，IGF-1R是人的。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗-IGF-1R抗體是人抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其一部分會(huì)以不超過(guò)100nM的IC50抑制IGF-1R和IGF-1之間的結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，IC50不超過(guò)10nM。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，IC50不超過(guò)5nM。通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法，可以測(cè)量IC50。典型地，可以通過(guò)ELISA或RIA測(cè)量IC50。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)RIA測(cè)量IC50。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明采用在有IGF-i存在下會(huì)阻止IGF-1R的激活的抗-IGF-1R抗體。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，抗體會(huì)造成來(lái)自用該抗體處理的細(xì)胞的IGF-1R的下調(diào)節(jié)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，或6.1.1，或包含重鏈，輕鏈或其抗原結(jié)合區(qū)。
通過(guò)用IGF-1R抗原免疫包含一些或所有人免疫球蛋白基因座的非人動(dòng)物，可以生產(chǎn)人抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，非人動(dòng)物是XENOMOUSETM，它是工程化的小鼠株，其包含人免疫球蛋白基因組的大片段，且是小鼠抗體生產(chǎn)缺陷的。見(jiàn)，例如，Green et al.NatureGenetics 713-21(1994)和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,916,771，5,939,598，5,985,615，5,998,209，6,075,181，6,091,001，6,114,598，和6,130,364。也見(jiàn)1991年7月25日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O91/10741；1994年2月3日公開(kāi)的WO94/02602；1996年10月31日公開(kāi)的WO96/34096和WO96/33735；1998年4月23日公開(kāi)的WO98/16654；1998年6月11日公開(kāi)的WO98/24893；1998年11月12日公開(kāi)的WO98/50433；1999年9月10日公開(kāi)的WO99/45031；1999年10月21日公開(kāi)的WO99/53049；2000年2月24日公開(kāi)的WO00/09560；和2000年6月29日公開(kāi)的WO00/037504。XENOMOUSETM會(huì)生成完全人抗體的成人樣人抗體庫(kù)，并產(chǎn)生抗原特異性的人單克隆抗體。通過(guò)導(dǎo)入人重鏈基因座和κ輕鏈基因座的兆堿基大小的、種系構(gòu)型YAC片段，第二代XENOMOUSETM含有人抗體庫(kù)的大約80％。見(jiàn)，Mendez et al.NatureGenetics 15146-156(1997)，Green和Jakobovits J.Exp.Med.188483-495(1998)。
可以將IGF-1R抗原與佐劑一起施用，刺激免疫反應(yīng)。這樣的佐劑包括完全或不完全弗氏佐劑，RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激復(fù)合物)。這樣的佐劑可以通過(guò)將它隔離在局部倉(cāng)儲(chǔ)室中，保護(hù)多肽免于迅速分散，或者它們可以含有會(huì)刺激宿主分泌對(duì)于巨噬細(xì)胞是趨化性的因子和免疫系統(tǒng)的其它組分的物質(zhì)。
編碼輕鏈的可變區(qū)的核酸分子可以源自A30，A27或O12 Vκ基因。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，輕鏈源自A30 Vκ基因。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，編碼輕鏈的核酸分子含有來(lái)自種系A(chǔ)30 Vκ基因的不超過(guò)10個(gè)氨基酸變化，優(yōu)選地不超過(guò)6個(gè)氨基酸變化，和更優(yōu)選地不超過(guò)3個(gè)氨基酸變化。
在一個(gè)實(shí)施方案中，與突變前的抗-IGF-1R抗體相比，抗體含有突變的抗-IGF-1R抗體的VH或VL區(qū)域中的不超過(guò)10個(gè)氨基酸變化。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，在突變的抗-IGF-1R抗體的VH或VL區(qū)域中，存在不超過(guò)5個(gè)氨基酸變化，更優(yōu)選地不超過(guò)3個(gè)氨基酸變化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在恒定域中，存在不超過(guò)15個(gè)氨基酸變化，更優(yōu)選地，不超過(guò)10個(gè)氨基酸變化，甚至更優(yōu)選地，不超過(guò)5個(gè)氨基酸變化。
SEQ ID NO2，6，10，14，18和22提供了6個(gè)抗-IGF-1R κ輕鏈的可變區(qū)的氨基酸序列。SEQ ID NO4，8，12，16，20和24提供了6個(gè)抗-IGF-1R重鏈的可變區(qū)的氨基酸序列。SEQ ID NO26描述了氨基酸序列，且SEQ ID NO25描述了編碼抗-IGF-1R抗體2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3和6.1.1的輕鏈的恒定區(qū)的核酸序列。SEQ ID NO28描述了氨基酸序列，且SEQ ID NO27描述了編碼抗-IGF-1R抗體2.12.1，2.13.2，2.14.3，3.1.1，4.9.2，4.17.3和6.1.1的重鏈的恒定區(qū)的核酸序列。SEQ ID NO30，32，34，36和44分別提供了種系重鏈DP-35，DP-47，DP-70，DP-71和VIV-4的氨基酸序列。SEQ ID NO33提供了種系重鏈DP-70的核苷酸序列。SEQ ID NO38，40和42提供了所述6個(gè)抗-IGF-1R κ輕鏈所源自的3個(gè)種系κ輕鏈的氨基酸序列。
可以將抗-IGF-1R抗體整合進(jìn)適于施用給對(duì)象的藥物組合物中。典型地，藥物組合物包含抗體和藥學(xué)上可接受的載體。如本文所使用的，″藥學(xué)上可接受的載體″包括生理上相容的任意的和所有的溶劑，分散介質(zhì)，包衣劑，抗菌劑和抗真菌劑，等滲劑和吸收延遲劑，等。藥學(xué)上可接受的載體的實(shí)例包括水，鹽水，磷酸鹽緩沖鹽水，葡萄糖，甘油，乙醇等，及其組合。在許多情況下，優(yōu)選地在組合物中包含等滲劑例如蔗糖，多元醇例如甘露醇，山梨糖醇，或氯化鈉。也可以包含少量的輔助物質(zhì)例如潤(rùn)濕劑或乳化劑，防腐劑或緩沖劑，其能增加抗體或抗體部分的貯存期限或有效性。
藥物組合物可以是多種形式。它們包括，例如，液體，半固體和固體劑型，例如液體溶液(例如，可注射的和可輸注的溶液)，分散系或懸浮液，片劑，丸劑，粉末，脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選的形式依賴于目的施用方式和治療用途。典型的優(yōu)選的組合物是可注射的或可輸注的溶液形式，例如與用于用其它抗體對(duì)人被動(dòng)免疫的那些類(lèi)似的組合物。優(yōu)選的施用方式是腸胃外的(例如，靜脈內(nèi)的，皮下的，腹膜內(nèi)的，肌肉內(nèi)的或輸注)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)靜脈內(nèi)輸注或注射，施用抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)肌肉內(nèi)或皮下注射，施用抗體。如技術(shù)人員會(huì)明白的，施用途徑和/或方式隨希望的結(jié)果而變化。
治療組合物典型地必須是無(wú)菌的，且在生產(chǎn)和保藏條件下是穩(wěn)定的?？梢詫⒔M合物配制成溶液、微乳劑、分散系、脂質(zhì)體或適合高藥物濃度的其它有序結(jié)構(gòu)。通過(guò)將需要量的抗-IGF-1R抗體與上述的一種成分或多種成分的組合一起整合進(jìn)適當(dāng)溶劑中，根據(jù)需要，隨后進(jìn)行過(guò)濾除菌，可以制備無(wú)菌注射溶液。通常，通過(guò)將活性化合物整合進(jìn)含有基本分散介質(zhì)和來(lái)自上述物質(zhì)的需要的其它成分的無(wú)菌介質(zhì)中，制備分散系。在用于制備無(wú)菌注射溶液的無(wú)菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍-干燥，其會(huì)從以前無(wú)菌過(guò)濾的溶液，產(chǎn)生活性成分和任何其它希望的成分的粉末。可以維持溶液的合適的流動(dòng)性，例如，通過(guò)使用包衣劑例如卵磷脂，在分散系的情況下，通過(guò)維持需要的顆粒大小，和通過(guò)使用表面活性劑。通過(guò)在組合物中包含會(huì)延遲吸收的試劑，例如，單硬脂酸鹽和明膠，可以實(shí)現(xiàn)可注射的組合物的延遲吸收。
在某些實(shí)施方案中，可以用會(huì)保護(hù)化合物免于快速釋放的載體，制備活性化合物，例如控釋制劑，包括埋植劑(implant)，透皮貼劑，和微囊化的輸送系統(tǒng)?？梢允褂每缮锝到獾摹⑸锵嗳莸木酆衔?，例如乙酸乙烯乙酯，聚酐，聚乙醇酸，膠原，聚原酸酯，和聚乳酸。制備這樣的制劑的許多方法，獲得了專(zhuān)利或者是本領(lǐng)域的技術(shù)人員通常已知的。見(jiàn)，例如，Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems，J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
藥物組合物可以包含″治療有效量″或″預(yù)防有效量″的本發(fā)明的抗體或抗體部分?！逯委熡行Я俊逯福谛枰膭┝亢蜁r(shí)間段，會(huì)有效地達(dá)到希望的治療結(jié)果的量。治療有效量的抗體或抗體部分可以隨多種因素而變化，例如個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重，和抗體或抗體部分在個(gè)體中引起希望的反應(yīng)的能力。治療有效量也是這樣的，其中治療上有益的作用超過(guò)抗體或抗體部分的任何有毒的或有害的作用?！孱A(yù)防有效量″指，在需要的劑量和時(shí)間段，會(huì)有效地達(dá)到希望的預(yù)防結(jié)果的量。典型地，由于在疾病之前或疾病的早期，使用預(yù)防劑量，預(yù)防有效量小于治療有效量。
可以調(diào)整給藥方案，以提供最佳的希望的反應(yīng)。例如，可以施用單次推注，可以隨時(shí)間施用幾次分開(kāi)的劑量，或可以根據(jù)治療情形的緊急的指示，按比例地減少或增加劑量。可以將包含抗體或包含抗體和一種或多種其它治療劑的聯(lián)合治療的藥物組合物，配制成單次或多次劑量。特別有利地，將腸胃外的組合物配制成劑量單位形式，以方便施用和劑量的均勻性。如本文所使用的劑量單位形式指，適用作要治療的哺乳動(dòng)物對(duì)象的單元?jiǎng)┝康奈锢砩戏蛛x的單位；每個(gè)單位含有經(jīng)計(jì)算能產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性化合物和所需的藥物載體。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，取決于且直接依賴于(a)活性化合物的獨(dú)特特征和要達(dá)到的治療或預(yù)防作用，和(b)配制這樣的用于治療個(gè)體的敏感性的活性化合物領(lǐng)域固有的限制。特別有用的制劑是5mg/ml抗-IGF-1R抗體，其在20mM檸檬酸鈉，pH5.5，140mM NaCl，和0.2mg/ml聚山梨酯80的緩沖液中。
可以施用抗體(有或沒(méi)有其它試劑)一次或超過(guò)一次至少一段時(shí)間，直到狀況得到治療、減輕或治愈。通常，只要腫瘤存在，就施用抗體，條件是該抗體會(huì)造成腫瘤或癌癥停止生長(zhǎng)或減小重量或體積。抗體通常作為如上所述的藥物組合物的一部分來(lái)施用。抗體的劑量通常是在下述范圍內(nèi)0.025-100mg/kg，更優(yōu)選地0.05-50mg/kg，更優(yōu)選地0.05-20mg/kg，和甚至更優(yōu)選地0.1-10mg/kg。應(yīng)當(dāng)指出，劑量值可以隨要減輕的狀況的類(lèi)型和嚴(yán)重性而變化。還應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)于任何特定的對(duì)象，應(yīng)當(dāng)根據(jù)個(gè)體的需要和施用組合物或監(jiān)督組合物的施用的人的專(zhuān)業(yè)判斷，隨時(shí)間調(diào)整特定的劑量方案，本文所述的劑量范圍僅僅是示例性的，無(wú)意限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。
可以每天三次至每6個(gè)月一次地施用抗體?？梢园从?jì)劃施用，例如每天三次，每天兩次，每天一次，每?jī)商煲淮危咳煲淮?，每周一次，每?jī)芍芤淮?，每月一次，?個(gè)月一次，每3個(gè)月一次和每6個(gè)月一次。通過(guò)經(jīng)口的、粘膜的、口頰的、鼻內(nèi)的、可吸入的、靜脈內(nèi)的、皮下的、肌肉內(nèi)的、腸胃外的、腫瘤內(nèi)的或局部的途徑，可以施用抗體。
可以在遠(yuǎn)離腫瘤部位的位置，施用抗體。也可以通過(guò)微泵連續(xù)施用抗體。
在某些實(shí)施方案中，可以氣霧劑或可吸入形式中施用抗體。在液體中不溶的或不懸浮的細(xì)微粉碎的固體微粒形式的干氣霧劑，也可以用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。使用例如噴霧器，例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,624,251；3,703,173；3,561,444；和4,635,627所述的那些，可以以噴霧劑形式施用本發(fā)明的藥物制劑。
通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法，可以測(cè)量抗體的血清濃度。可以預(yù)防性地施用抗體，以預(yù)防癌癥或腫瘤的發(fā)生。在具有″高正?！逅降腎GF-1的患者中，這是特別有用的，因?yàn)橐呀?jīng)證實(shí)這些患者具有更高的形成普通癌癥的危險(xiǎn)。見(jiàn)上面的Rosen et al.。
可以標(biāo)記在本發(fā)明的方法中采用的抗體。這可以通過(guò)整合檢測(cè)標(biāo)記來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如，放射標(biāo)記的氨基酸的整合或向生物素基的多肽的結(jié)合，后者可以被標(biāo)記的抗生物素蛋白(例如，鏈霉抗生物素，其含有可以通過(guò)光學(xué)或比色方法檢測(cè)出的熒光標(biāo)記或酶活性)檢測(cè)出。在某些情況下，標(biāo)記或標(biāo)示物也可以是治療劑。標(biāo)記多肽和糖蛋白的各種方法，是本領(lǐng)域已知的，且可以使用。多肽的標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于下面的放射性同位素或放射性核素(例如，3H，14C，15N，35S，90Y，99Tc，111In，125I，131I)，熒光標(biāo)記(例如，F(xiàn)ITC，羅丹明，鑭系磷光體(lanthanide phosphors))，酶標(biāo)記(例如，辣根過(guò)氧化物酶，β-半乳糖苷酶，螢光素酶，堿性磷酸酶)，化學(xué)發(fā)光劑，生物素基，由第二個(gè)報(bào)告物識(shí)別的預(yù)定的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對(duì)序列，第二個(gè)抗體的結(jié)合位點(diǎn)，金屬結(jié)合域，表位標(biāo)簽)。在有些實(shí)施方案中，通過(guò)不同長(zhǎng)度的間隔臂結(jié)合標(biāo)記，以減少潛在的空間位阻。
在本發(fā)明中采用的抗體優(yōu)選地源自表達(dá)人免疫球蛋白基因的細(xì)胞。本領(lǐng)域已知轉(zhuǎn)基因小鼠在生產(chǎn)這樣的“人”抗體中的應(yīng)用。一種這樣的方法記載在1996年12月3日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)系列號(hào)08/759,620中。也見(jiàn)Mendez et al.Nature Genetics 15146-156(1997)；Green和Jakobovits J.Exp.Med.188483-495(1998)；歐洲專(zhuān)利號(hào)EP0463151(1996年6月12日公告授權(quán))；和1994年2月3日公開(kāi)的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O94/02602；1996年10月31日公開(kāi)的WO96/34096；和1998年6月11日公開(kāi)的WO98/24893。
如上所述，本發(fā)明包括抗體片段的應(yīng)用。通過(guò)剪切完整的蛋白，例如通過(guò)蛋白酶或化學(xué)剪切，可以制備抗體片段，例如Fv，F(xiàn)(ab′)2和Fab?；蛘?，設(shè)計(jì)截短的基因。例如，編碼F(ab′)2片段的一部分的嵌合基因，包括編碼H鏈的CH1域和鉸鏈區(qū)的DNA序列，其后是翻譯終止子，以產(chǎn)生截短的分子。
在一種方案中，可以使用編碼重鏈和輕鏈J區(qū)域的共有序列設(shè)計(jì)用作引物的寡核苷酸，將有用的限制位點(diǎn)導(dǎo)入J區(qū)域，隨后將V區(qū)域片段連接至人C區(qū)域片段。通過(guò)定點(diǎn)誘變，可以修飾C區(qū)域cDNA，以在人序列的類(lèi)似位置處設(shè)置限制位點(diǎn)。
用于得到在本發(fā)明中采用的抗體的表達(dá)載體包括質(zhì)粒，逆轉(zhuǎn)錄病毒，粘粒，YAC，EBV衍生的附加體，等。方便的載體通常是這樣的，它編碼功能上完全的人CH或CL免疫球蛋白序列，其具有工程化的適當(dāng)限制位點(diǎn)，以便可以容易地插入和表達(dá)任何VH或VL序列。在這樣的載體中，拼接通常發(fā)生在插入的J區(qū)域的拼接供體位點(diǎn)和在人C區(qū)域前面的拼接受體位點(diǎn)之間，也在人CH外顯子內(nèi)存在的拼接區(qū)域。多腺苷酸化和轉(zhuǎn)錄終止發(fā)生在編碼區(qū)域下游的天然染色體位置?？梢詫⒌玫降那逗峡贵w連接到任意的強(qiáng)啟動(dòng)子，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒的LTR，例如SV-40早期啟動(dòng)子(Okayama et al.Mol.Cell.Bio.3280(1983))，勞斯肉瘤病毒LTR(Gorman et al.Proc.Natl.Acad.Sci.796777(1982))，和莫洛尼鼠白血病病毒LTR(Grosschedl et al.Cell 41885(1985))；天然1g啟動(dòng)子，等。
產(chǎn)生的用于本發(fā)明的抗體不需要最初具有特定的希望的同種型。然而，這樣產(chǎn)生的抗體可以具有任意的同種型，且此后可以使用常規(guī)技術(shù)，進(jìn)行同種型轉(zhuǎn)換。它們包括直接重組技術(shù)(見(jiàn)例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,816,397)，和細(xì)胞-細(xì)胞融合技術(shù)(見(jiàn)例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,916,771)。
如上所述，通過(guò)向不同治療用途的IgGl，IgG2，IgG3，IgG4，IgD，IgA，IgE，或IgM的同種型轉(zhuǎn)換，可以改變本發(fā)明的抗體的效應(yīng)功能。而且，通過(guò)使用例如雙特異性、免疫毒素或放射標(biāo)記，可以避免細(xì)胞殺死所需的對(duì)補(bǔ)體的依賴。
可以產(chǎn)生雙特異性的抗體，其包含(i)2個(gè)抗體一個(gè)具有對(duì)IGF-1R的特異性，另一個(gè)具有對(duì)第二個(gè)分子的特異性，(ii)單個(gè)抗體，其具有對(duì)IGF-1R的特異性的一條鏈和對(duì)第二個(gè)分子的特異性的第二條鏈，或(iii)具有對(duì)IGF-1R和其它分子的特異性的單鏈抗體。使用眾所周知的技術(shù)，可以產(chǎn)生這樣的雙特異性的抗體，例如，F(xiàn)angeret al.Immunol.Me thods 472-81(1994)；上面的Wright和Harris；和Traunecker et al.Int.J.Cancer(Suppl.)751-52(1992)。
也可以制備用于本發(fā)明的抗體，也包括“kappabodies”(Ill etal.Protein Eng.10949-57(1997))，“minibodies”(Martinetal.EMBO J.135303-9(1994))，“雙體”(Holliger et al.Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)906444-6448(1993))，和“janusins”(Traunecker et al.EMBO J.103655-3659(1991)和Traunecker etal.Int.J.Cancer Suppl.751-52(1992))。
可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)修飾采用的抗體，以起免疫毒素的作用。見(jiàn)例如，Vitetta Immunol.Today 14252(1993)。也見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,194,594。使用眾所周知的技術(shù)，也可以制備放射標(biāo)記的抗體。見(jiàn)例如，Junghans et al.in Cancer Chemotherapy and Biotherapy655-686(第2版，Chafner和Longo，eds.，Lippincott Raven(1996))。也見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,681,581，4,735,210，5,101,827，5,102,990(Re.35,500)，5,648,471，和5,697,902。
用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的特定抗體包括在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O02/053596中描述的那些，其還描述了抗體2.12.1，2.13.2.，2.14.3，3.1.1，4.9.2，和4.17.3。如在該公開(kāi)的申請(qǐng)中所公開(kāi)的，于2000年12月12日，將生產(chǎn)這些抗體的雜交瘤保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，10801 University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，具有下面的保藏號(hào)
這些抗體是具有人κ輕鏈的完全人IgG2或IgG4重鏈。更具體地，本發(fā)明涉及具有這些抗體的氨基酸序列的抗體的應(yīng)用。
當(dāng)通過(guò)固相或溶液相測(cè)量時(shí)，在本發(fā)明中采用的抗體優(yōu)選地具有非常高的親合力，典型地具有約10-9至約10-11M的Kd。
可以在雜交瘤細(xì)胞系以外的細(xì)胞系中，表達(dá)在本發(fā)明中使用的抗體。編碼特定抗體的cDNA或基因組克隆的序列，可以用于轉(zhuǎn)化合適的哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞。通過(guò)將多核苷酸導(dǎo)入宿主細(xì)胞的任意的已知的方法，包括例如，將多核苷酸包裝進(jìn)病毒(或病毒載體)，并用該病毒(或載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細(xì)胞，或通過(guò)本領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)染方法，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,399,216，4,912,040，4,740,461，和4,959,455所示例的，可以進(jìn)行轉(zhuǎn)化。將異源多核苷酸導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法，是本領(lǐng)域眾所周知的，包括但不限于，葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，磷酸鈣沉淀，1，5-二甲基-1，5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，原生質(zhì)體融合，電穿孔，粒子轟擊，多核苷酸在脂質(zhì)體中的包囊化，肽綴合物，樹(shù)枝狀聚合物(dendrimer)，和將DNA直接顯微注射進(jìn)核中。
可用作表達(dá)宿主的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系是本領(lǐng)域眾所周知的，包括許多可從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)得到的不死細(xì)胞系，包括但不限于中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，NSO0，HeLa細(xì)胞，幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞，猴腎細(xì)胞(COS)，和人肝細(xì)胞癌細(xì)胞(例如，Hep G2)。也可以采用非哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括細(xì)菌、酵母、昆蟲(chóng)和植物細(xì)胞。用于消除糖基化的抗體CH2域的定位誘變是優(yōu)選的，以預(yù)防由非人糖基化導(dǎo)致的免疫原性、藥物動(dòng)力學(xué)和/或效應(yīng)功能的變化。在歐洲專(zhuān)利號(hào)0216846，0256055，和0323997，和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?9303964.4中，全部或部分地討論了谷氨酰胺合酶表達(dá)系統(tǒng)。
通過(guò)生成用感興趣的免疫球蛋白重鏈和輕鏈序列轉(zhuǎn)基因的哺乳動(dòng)物或植物，以及生成可從其回收的抗體，也可以轉(zhuǎn)基因地生產(chǎn)在本發(fā)明中使用的抗體。可以在山羊、?；蚱渌溉閯?dòng)物的乳汁中，生產(chǎn)和回收轉(zhuǎn)基因抗體。見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,827,690，5,756,687，5,750,172，和5,741,957。
參考下面的實(shí)施例，可以進(jìn)一步明白本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。這些實(shí)施例意在解釋本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案，無(wú)意限制權(quán)利要求的有效范圍。
實(shí)施例I抗-IGF-1R抗體與多西他賽聯(lián)合治療晚期非血液的惡性腫瘤僅僅每個(gè)循環(huán)的第一天，患有晚期非血液的惡性腫瘤(由至少一種可精確地測(cè)量的病灶定義的可測(cè)量的疾病，通過(guò)常規(guī)的計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(CT)掃描，其大小≥2cm×1cm，或通過(guò)螺旋CT掃描，其大小≥1cm×1cm)的患者，通過(guò)靜脈內(nèi)的(IV)輸注，經(jīng)1小時(shí)，接受標(biāo)準(zhǔn)劑量的多西他賽(TAXOTERE)(至多75mg/m2，使用實(shí)際體重計(jì)算身體表面積(BSA))。完成多西他賽輸注后，以0.1mg/kg至10mg/kg的劑量，在5mg/ml液體制劑中，靜脈內(nèi)施用本文所述的抗-IGF-1R抗體。21天后，重復(fù)治療方案，升高抗-IGF-1R抗體劑量，此后每21天重復(fù)，直到疾病發(fā)展或不可接受的毒性形成最少2個(gè)循環(huán)且最多17個(gè)循環(huán)。多西他賽的術(shù)前用藥方案包括經(jīng)口的地塞米松8mg，每天兩次，持續(xù)3天，從多西他賽施用前一天開(kāi)始。適當(dāng)時(shí)，提供預(yù)防性的止吐藥。
劑量升高使用加速滴定設(shè)計(jì)，其采用劑量倍增方案，每劑量水平(組)3-6位受試者。在每個(gè)新組中，受試者之間不存在要求的等待階段。在當(dāng)前劑量水平的第一位受試者已經(jīng)被觀察21天、且隨后的受試者已經(jīng)被觀察14天之前，不啟用隨后的組。
測(cè)量下面的參數(shù)抗-IGF-1R抗體的安全性、耐受性、藥物動(dòng)力學(xué)(PK)參數(shù)；人抗-人抗體反應(yīng)(HAHA)；應(yīng)答率和發(fā)展時(shí)間；和循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)的數(shù)目和循環(huán)的可溶的IGF-1R的數(shù)目。
實(shí)施例II抗-IGF-1R抗體與紫杉醇和卡鉑聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌在研究的第1部分，沒(méi)有接受在先化療的患有階段IIIB或階段IV或(手術(shù)/輻射后)復(fù)發(fā)的、可測(cè)量的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的患者，以200mg/m2的標(biāo)準(zhǔn)劑量，通過(guò)IV輸注，經(jīng)3小時(shí)，接受紫杉醇(TAXOL)。在接受紫杉醇之前，所有患者接受預(yù)防性的抗過(guò)敏藥/止吐藥。通過(guò)IV輸注，經(jīng)15-30分鐘，施用卡鉑(PARAPLATIN)；基于Calvert公式，曲線下的目標(biāo)區(qū)域(AUC)為6mg/ml×min，計(jì)算劑量。完成卡鉑輸注后，以0.05mg/kg至10mg/kg的劑量，在5mg/ml制劑中，靜脈內(nèi)施用本文所述的抗-IGF-1R抗體。21天后，重復(fù)治療方案，升高抗-IGF-1R抗體劑量，此后每21天重復(fù)，直到疾病發(fā)展或不可接受的毒性形成最少1個(gè)循環(huán)且最多6個(gè)循環(huán)。
使用加速滴定設(shè)計(jì)升高劑量，其采用劑量倍增方案，每組3-6位受試者。在每個(gè)新組中，受試者之間不存在要求的等待階段。在當(dāng)前劑量水平的第一位受試者已經(jīng)被觀察21天、且隨后的受試者已經(jīng)被觀察14天之前，不啟用隨后的組。
一旦至少6位患者已經(jīng)被觀察21天(即完成一個(gè)循環(huán))后，開(kāi)始研究的隨機(jī)的第二部分。
研究的第2部分是與紫杉醇和卡鉑相聯(lián)合的抗-IGF-1R抗體(組A)和單獨(dú)的紫杉醇和卡鉑(組B)的兩組隨機(jī)的、非比較的研究。在第2部分的第1天，象在第一部分中一樣，兩組患者經(jīng)相同的時(shí)間段，接受相同劑量的紫杉醇和卡鉑。施用卡鉑后，組A中的患者還接受與在第一部分中相同的抗-IGF-1R抗體劑量。參考在第一部分中證實(shí)的安全性和耐受性，確定劑量。21天后，重復(fù)治療，此后每21天重復(fù)，直到疾病發(fā)展或不可接受的毒性形成最少2個(gè)循環(huán)且最多6個(gè)循環(huán)。
測(cè)量下面的參數(shù)抗-IGF-1R抗體的PK參數(shù)，HAHA，應(yīng)答率和發(fā)展時(shí)間，CTC，循環(huán)的IGF-1，IGFBP，和可溶的循環(huán)IGF-1R。
實(shí)施例III抗-IGF-1R與多西他賽和表柔比星聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌(其具有至少一種可以在二維精確測(cè)量的病灶，通過(guò)常規(guī)的CT掃描，其大小≥2cm×1cm，或通過(guò)螺旋CT掃描，其大小≥1cm×1cm)的患者，接受表柔比星75mg/m2，作為單次15分鐘輸注。暫停1小時(shí)后，施用多西他賽(TAXOTERE)75mg/m2，作為單次IV輸注，隨后以0.05mg/此至10mg/kg的劑量，IV輸注如本文所述的抗-IGF-1R抗體。適當(dāng)時(shí)，施用預(yù)防性的止吐藥。21天后，重復(fù)治療，升高抗-IGF-1R抗體劑量，此后每21天重復(fù)，直到疾病發(fā)展或不可接受的毒性形成最少2個(gè)循環(huán)且最多6個(gè)循環(huán)。
使用加速滴定設(shè)計(jì)升高劑量，其采用劑量倍增方案，每組3-6位受試者。在每個(gè)新組中，受試者之間不存在要求的等待階段。在當(dāng)前劑量水平的第一位受試者已經(jīng)被觀察21天、且隨后的受試者已經(jīng)被觀察14天之前，不啟用隨后的組。
測(cè)量下面的參數(shù)PK參數(shù)；HAHA，應(yīng)答率和發(fā)展時(shí)間。使用卡普蘭-邁耶結(jié)果限制方法，計(jì)算發(fā)展時(shí)間和總存活。
實(shí)施例IV抗-IGF-1R與多西他賽和潑尼松聯(lián)合治療激素-難治的前列腺癌受試者是患有轉(zhuǎn)移性前列腺癌的患者，其在至少一種激素治療(睪丸切除術(shù)，雌激素，LHRH療法，等)后，具有小于50ng/dL的睪酮水平，大于20ng/mL的前列腺-特異性的抗原(PSA)，和比間隔至少1周的3個(gè)連續(xù)時(shí)期測(cè)量的激素治療最低值超過(guò)＞50％的PSA增加。多西他賽的術(shù)前用藥方案包括經(jīng)口的地塞米松8mg，每天兩次，持續(xù)3天，從多西他賽施用前一天開(kāi)始。
僅僅在每個(gè)循環(huán)的第一天，通過(guò)IV輸注，經(jīng)1小時(shí)，施用75mg/m2劑量的多西他賽(TAXOTERE)(使用實(shí)際體重計(jì)算BSA)。完成多西他賽輸注后，在5mg/ml液體制劑中，靜脈內(nèi)施用本文所述的抗-IGF-1R抗體。每天施用潑尼松，即每天施用2次經(jīng)口的5mg劑量，從第1天開(kāi)始。適當(dāng)時(shí)，可以施用預(yù)防性的止吐藥。每21天(±3天)重復(fù)治療方案，直到疾病發(fā)展或不可接受的毒性形成最多10個(gè)循環(huán)。
測(cè)量下面的參數(shù)PSA反應(yīng)，抗-IGF-1R抗體的總體PK參數(shù)，HAHA，CTC的總數(shù)和表達(dá)IGF-1R的CTC總數(shù)。
盡管為了理解清楚的目的，已經(jīng)通過(guò)說(shuō)明和實(shí)施例比較詳細(xì)地描述了前面的發(fā)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能容易地明白，參考本發(fā)明的教導(dǎo)，可以對(duì)其進(jìn)行某些變化和改進(jìn)，而不脫離所附權(quán)利要求書(shū)的精神和范圍。
序列表<110>Cohen，BruceGualberto，AntonioMelvin，CarrieRoberts，Luisa M.
<120>使用抗-IGF-IR抗體聯(lián)合治療非血液的惡性腫瘤<130>PC32226A<150>60/588，721<151>2004-07-16<160>60<170>PatentIn version3.3<210>1<211>291<212>DNA<213>智人<400>1tgcatctgta ggagacagag tcaccttcac ttgccgggca agtcaggaca ttagacgtga 60tttaggctgg tatcagcaga aaccagggaa agctcctaag cgcctgatct atgctgcatc120ccgtttacaa agtggggtcc catcaaggtt cagcggcagt ggatctggga cagaattcac180tctcacaatc agcagcctgc agcctgaaga ttttgcaact tattactgtc tacagcataa240taattatcct cggacgttcg gccaagggac cgaggtggaa atcatacgaa c 291<210>2<211>136<212>PRT<213>智人<400>2Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp1 5 10 15
Ile Arg Arg Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro20 25 30Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser35 40 45Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser50 55 60Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn65 70 75 80Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val Glu Ile Ile Arg85 90 95Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln100 105 110Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr115 120 125Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp130 135<210>3<211>352<212>DNA<213>智人<400>3gggaggcttg gtcaagcctg gaggtccctg agactctcct gtgcagcctc tggattcact 60ttcagtgact actatatgag ctggatccgc caggctccag ggaaggggct ggaatgggtt120
tcatacatta gtagtagtgg tagtaccaga gactacgcag actctgtgaa gggccgattc180accatctcca gggacaacgc caagaactca ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc240gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgtgaga gatggagtgg aaactacttt ttactactac300tactacggta tggacgtctg gggccaaggg accacggtca ccgtctcctc ag352<210>4<211>174<212>PRT<213>智人<400>4Gly Arg Leu Gly Gln Ala Trp Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala1 5 10 15Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala20 25 30Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser35 40 45Thr Arg Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg50 55 60Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala65 70 75 80Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Gly Val Glu Thr Thr85 90 95Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu115 120 125Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys130 135 140Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser145 150 155 160Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Cys Ala165 170<210>5<211>322<212>DNA<213>智人<400>5gacatccaga tgacccagtt tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatcccgtt tgcacagagg ggtcccatca180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct240gaagattttg caacttatta ctgtttacaa cataatagtt acccgtgcag ttttggccag300gggaccaagc tggagatcaa ac 322<210>6<211>107<212>PRT<213>智人<400>6Asp lle Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Glyl 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Arg Leu His Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Cys85 90 95Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys100 105<210>7<211>375<212>DNA<213>智人<400>7aggtgcagct gttggagtct gggggaggct tggtacagcc tggggggtcc ctgagactct 60cctgtacagc ctctggattc acctttagca gctatgccat gaactgggtc cgccaggctc120cagggaaggg gctggagtgg gtctcagcta ttagtggtag tggtggtacc acattctacg180cagactccgt gaagggccgg ttcaccatct ccagagacaa ttccaggacc acgctgtatc240tgcaaatgaa cagcctgaga gccgaggaca cggccgtata ttactgtgcg aaagatcttg300gctggtccga ctcttactac tactactacg gtatggacgt ctggggccaa gggaccacgg360
tcaccgtctc ctcag 375<210>8<211>124<212>PRT<213>智人<400>8Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser1 5 10 15Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala20 25 30Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser35 40 45Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys50 55 60Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Thr Leu Tyr Leu65 70 75 80Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Lys Asp Leu Gly Trp Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120<210>9<211>302
<212>DNA<213>智人<400>9tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga gtcaccttca cttgccgggc aagtcaggac 60attagacgtg atttaggctg gtatcagcag aaaccaggga aagctcctaa gcgcctgatc120tatgctgcat cccgtttaca aagtggggtc ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg180acagaattca ctctcacaat cagcagcctg cagcctgaag attttgcaac ttattactgt240ctacagcata ataattatcc tcggacgttc ggccaaggga ccgaggtgga aatcatacga300ac 302<210>10<211>100<212>PRT<213>智人<400>10Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg1 5 10 15Ala Ser Gln Asp Ile Arg Arg Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro20 25 30Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser35 40 45Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr50 55 60Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys65 70 75 80
Leu Gln His Asn Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val85 90 95Glu Ile Ile Arg100<210>11<211>338<212>DNA<213>智人<400>11gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg 60ctccatcagt aattactact ggagctggat ccggcagccc gccgggaagg gactggagtg120gattgggcgt atctatacca gtgggagccc caactacaac ccctccctca agagtcgagt180caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg aagctgaact ctgtgaccgc240cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggt aacgattttt ggagtggtta ttatctttga300ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag338<210>12<211>112<212>PRT<213>智人<400>12Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr1 5 10 15Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln20 25 30Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly35 40 45
Ser Pro Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val50 55 60Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala65 70 75 80Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Thr Ile Phe Gly Val Val85 90 95Ile Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser100 105 110<210>13<211>322<212>DNA<213>智人<400>13gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga agtgatttag gctggtttca gcagaaacca120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccaaat tacaccgtgg ggtcccatca180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagccg cctgcagcct240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctctcac tttcggcgga300gggaccaagg tggagatcaa ac 322<210>14<211>107<212>PRT<213>智人<400>14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Asp20 25 30Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Lys Leu His Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu85 90 95Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105<210>15<211>376<212>DNA<213>智人<400>15gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct120ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtat cacatactac180gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatctg300
ggctacggtg acttttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg360gtcaccgtct cctcag376<210>16<211>125<212>PRT<213>智人<400>16Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Lys Asp Leu Gly Tyr Gly Asp Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met100 105 110Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser115 120 125
<210>17<211>279<212>DNA<213>智人<400>17caggagacag agtcaccatc acttgccggg caagtcagag cattagtacc tttttaaatt 60ggtatcagca gaaaccaggg aaagccccta aactcctgat ccatgttgca tccagtttac120aaggtggggt cccatcaagg ttcagtggca gtggatctgg gacagatttc actctcacca180tcagcagtct gcaacctgaa gattttgcaa cttactactg tcaacagagt tacaatgccc240cactcacttt cggcggaggg accaaggtgg agatcaaac 279<210>18<211>92<212>PRT<213>智人<400>18Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr1 5 10 15Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu20 25 30Ile His Val Ala Ser Ser Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser35 40 45Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln50 55 60Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Ala Pro65 70 75 80
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys85 90<210>19<211>341<212>DNA<213>智人<400>19cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc tgcactgtct ctggtggctc 60catcagtagt tactactgga gttggatccg gcagccccca gggaagggac tggagtggat120tgggtatatc tattacagtg ggagcaccaa ctacaacccc tccctcaaga gtcgagtcac180catatcagta gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag ctgagttctg tgaccgctgc240ggacacggcc gtgtattact gtgccaggac gtatagcagt tcgttctact actacggtat300ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca g341<210>20<211>113<212>PRT<213>智人<400>20Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val1 5 10 15Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro20 25 30Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser35 40 45Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp50 55 60
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala65 70 75 80Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Tyr Ser Ser Ser Phe Tyr85 90 95Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser100 105 110Ser<210>21<211>274<212>PRT<213>智人<400>21Ala Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr1 5 10 15Gly Thr Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly20 25 30Thr Gly Thr Thr Cys Gly Cys Gly Gly Cys Ala Gly Gly Thr Ala Cys35 40 45Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys Ala Gly Cys50 55 60Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys65 70 75 80
Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Cys85 90 95Thr Ala Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala100 105 110Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr Cys Cys Cys115 120 125Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Thr Gly Gly Cys130 135 140Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly145 150 155 160Ala Cys Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys Cys Ala Thr165 170 175Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys Cys Thr180 185 190Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Gly Cys Ala Gly Thr Gly Thr195 200 205Thr Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala210 215 220Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Thr Cys Ala Cys Cys Thr Cys Gly Asn225 230 235 240Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala245 250 255
Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Ala Ala Thr Cys Ala Ala260 265 270Ala Cys<210>22<211>91<212>PRT<213>智人<400>22Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Gly Arg Tyr1 5 10 15Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile20 25 30Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly35 40 45Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro50 55 60Glu Asp Phe Ala Val Phe Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Arg65 70 75 80Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys85 90<210>23<211>367<212>DNA<213>智人
<400>23gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct120ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attactggga gtggtggtag tacatactac180gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcca300gggactacgg tgattatgag ttggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc360tcctcag 367<210>24<211>122<212>PRT<213>智人<400>24Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Gly Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Lys Asp Pro Gly Thr Thr Val Ile Met Ser Trp Phe Asp Pro Trp100 105 110Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120<210>25<211>320<212>DNA<213>智人<400>25gaactgtggc tgcaccatct gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg 60gaactgcctc tgttgtgtgc ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt120ggaaggtgga taacgccctc caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca180gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga240aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga300gcttcaacag gggagagtgt320<210>26<211>106<212>PRT<213>智人<400>26Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln1 5 10 15Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser35 40 45Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr50 55 60Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys65 70 75 80His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro85 90 95Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys100 105<210>27<211>978<212>DNA<213>智人<400>27gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 60agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg120tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca180ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc240tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc300aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc360ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc420gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc480
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt540gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc600aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg660cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac720caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg780gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac840ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac900gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc960tccctgtctc cgggtaaa 978<210>28<211>326<212>PRT<213>智人<400>28Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg1 5 10 15Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr20 25 30Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser35 40 45Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser50 55 60Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys85 90 95Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro100 105 110Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp115 120 125Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp130 135 140Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly145 150 155 160Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn165 170 175Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp180 185 190Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro195 200 205Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu210 215 220Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn225 230 235 240Gln Val Scr Lcu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr260 265 270Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys275 280 285Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn ValPhe Ser Cys290 295 300Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu305 310 315 320Ser Leu Ser Pro Gly Lys325<210>29<211>296<212>DNA<213>智人<400>29caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct120ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac180gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga296<210>30<211>98<212>PRT<213>智人
<400>30Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr20 25 30Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg<210>31<211>296<212>PRT<213>智人<400>31Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Thr Gly Gly1 5 10 15Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Cys Thr Thr20 25 30
Gly Gly Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Gly35 40 45Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr50 55 60Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr65 70 75 80Cys Ala Cys Cys Thr Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr85 90 95Gly Cys Cys Ala Thr Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys100 105 110Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala115 120 125Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys130 135 140Thr Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr Thr Ala Gly Thr Gly Gly Thr Ala145 150 155 160Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala Gly Cys Ala Cys Ala Thr Ala165 170 175Cys Thr Ala Cys Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Thr Gly180 185 190Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala195 200 205
Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Thr Thr Cys210 215 220Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Cys Gly Cys Thr Gly Thr Ala Thr225 230 235 240Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys245 250 255Thr Gly Ala Gly Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys260 265 270Gly Gly Cys Cys Gly Thr Ala Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr275 280 285Gly Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala290 295<210>32<211>98<212>PRT<213>智人<400>32Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Lys<210>33<211>296<212>DNA<213>智人<400>33caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc 60acctgcgctg tctctggtgg ctccatcagc agtagtaact ggtggagttg ggtccgccag120cccccaggga aggggctgga gtggattggg gaaatctatc atagtgggag caccaactac180aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tcagtagaca agtccaagaa ccagttctcc240ctgaagctga gctctgtgac cgccgcggac acggccgtgt attactgtgc gagaga296<210>34<211>98<212>PRT<213>智人<400>34Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glyl 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser20 25 30Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp35 40 45Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu50 55 60Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser65 70 75 80Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg<210>35<211>293<212>DNA<213>智人<400>35caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac180ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg240aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aga 293<210>36<211>97<212>PRT
<213>智人<400>36Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg<210>37<211>290<212>PRT<213>智人<400>37Gly Ala Ala Ala Thr Thr Gly Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Gly Cys1 5 10 15Ala Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr
20 25 30Gly Thr Cys Thr Thr Thr Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly35 40 45Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr50 55 60Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Ala65 70 75 80Gly Ala Gly Thr Gly Thr Thr Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys85 90 95Thr Ala Cys Thr Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Cys100 105 110Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala115 120 125Gly Gly Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr Cys130 135 140Ala Thr Cys Thr Ala Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Cys Cys Ala145 150 155 160Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr165 170 175Cys Cys Cys Ala Gly Ala Cys Ala Gly Gly Thr Thr Cys Ala Gly Thr180 185 190Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala
195 200 205Cys Ala Gly Ala Cys Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys210 215 220Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly225 230 235 240Cys Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Gly Cys Ala Gly245 250 255Thr Gly Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala260 265 270Gly Thr Ala Thr Gly Gly Thr Ala Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys Thr275 280 285Cys Cys290<210>38<211>96<212>PRT<213>智人<400>38Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro85 90 95<210>39<211>288<212>DNA<213>智人<220>
<221>misc_feature<222>(288)..(288)<223>n是a，c，g，或t<400>39gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca120gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct240gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt accctccn 288<210>40<211>96<212>PRT<213>智人<400>40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly lle Arg Asn Asp20 25 30Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Pro85 90 95<210>41<211>288<212>DNA<213>智人<400>41gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca120gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca180aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct240gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctcch 288<210>42<211>96<212>PRT
<213>智人<400>42Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr20 25 30Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro85 90 95<210>43<211>293<212>DNA<213>智人<400>43caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc120gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcac caactacaac180ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg240aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aga 293
<210>44<211>97<212>PRT<213>智人<400>44Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Arg Ile Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg<210>45<211>470<212>PRT<213>智人<400>45Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln20 25 30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe35 40 45Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Phe Tyr Ala65 70 75 80Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr85 90 95Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Leu Gly Trp Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Tyr115 120 125Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 135 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145 150 155 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr165 170 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser195 200 205Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr210 215 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225 230 235 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro245 250 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp260 265 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp275 280 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly290 295 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305 3l0 315 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp325 330 335Leu Asn Gly Lys G1u Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro340 345 350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn370 375 380Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile385 390 395 400Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr405 410 415Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys420 425 430Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys435 440 445Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu450 455 460Ser Leu Ser Pro Gly Lys465 470<210>46<211>470<212>PRT<213>智人<400>46Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly1 5 10 15Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe35 40 45Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala65 70 75 80Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn85 90 95Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr115 120 125Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 135 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145 150 155 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr165 170 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser180 185 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr210 215 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225 230 235 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro245 250 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp260 265 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp275 280 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly290 295 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305 310 315 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp325 330 335Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro340 345 350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu355 360 365Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile385 390 395 400Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr405 410 415Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys420 425 430Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys435 440 445Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu450 455 460Ser Leu Ser Pro Gly Lys465 470<210>47<211>236<212>PRT<213>智人<400>47Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp1 5 10 15Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser20 25 30Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45
Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys50 55 60Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Arg Leu His Arg Gly Val65 70 75 80Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr85 90 95Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln100 105 110His Asn Ser Tyr Pro Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile115 120 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp130 135 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145 150 155 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu165 170 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp180 185 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr195 200 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230 235<210>48<211>236<212>PRT<213>智人<400>48Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp1 5 10 15Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser20 25 30Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys50 55 60Ala Pro Lys Arg Leu lle Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val65 70 75 80Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr85 90 95Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln100 105 110His Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu lle115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp130 135 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145 150 155 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu165 170 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp180 185 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr195 200 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser210 215 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230 235<210>49<211>470<212>PRT<213>智人<400>49Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile lle Lys Gly1 5 10 15Val Gln Cys Gln Ala Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys20 25 30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Glu Trp Val Ser ryr Ile Ser Ser Ser Gly Ser rhr Arg Asp ryr Ala65 70 75 80Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn85 90 95Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Val Arg Asp Gly Val Glu Thr Thr Phe Tyr Tyr Tyr Tyr115 120 125Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 135 140Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg145 150 155 160Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr165 170 175Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser180 185 190Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser195 200 205Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
210 215 220Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys225 230 235 240Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro245 250 255Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp260 265 270Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp275 280 285Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly290 295 300Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn305 310 315 320Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp325 330 335Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro340 345 350Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu355 360 365Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn370 375 380Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr405 410 415Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys420 425 430Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys435 440 445Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu450 455 460Ser Leu Ser Pro Gly Lys465 470<210>50<211>473<212>PRT<213>智人<400>50Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu ValAla Ile Ile Lys Gly1 5 10 15Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys20 25 30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe35 40 45Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala65 70 75 80Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn85 90 95Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Leu Arg Phe Leu Glu Trp Leu Leu Tyr Tyr115 120 125Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr130 135 140Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro145 150 155 160Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val165 170 175Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala180 185 190Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly195 200 205Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly2l0 215 220Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys225 230 235 240
Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys245 250 255Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys260 265 270Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val275 280 285Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr290 295 300Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu305 310 315 320Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His325 330 335Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys340 345 350Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln355 360 365Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met370 375 380Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro385 390 395 400Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu420 425 430Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val435 440 445Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln450 455 460Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys465 470<210>51<211>236<212>PRT<213>智人<400>51Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp1 5 10 15Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser20 25 30Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45Gln Asp Ile Arg Arg Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys50 55 60Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr85 90 95Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln100 105 110His Asn Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val Glu Ile115 120 125Ile Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp130 135 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145 150 155 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu165 170 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp180 185 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr195 200 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser210 215 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230 235<210>52<211>236<212>PRT
<213>智人<400>52Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp1 5 10 15Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp lle Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser20 25 30Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys50 55 60Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val65 70 75 80Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr85 90 95Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln100 105 110His Asn Ser Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile115 120 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp130 135 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu165 170 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp180 185 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr195 200 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser210 215 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys225 230 235<210>53<211>326<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<220>
<221>misc_feature<222>(289)..(289)<223>n是a，c，g，或t<400>53gacatccaga tgacccagty tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60wtcacttgcc gggcaagtca ggrcattaga mrtgatttag gctggtwtca gcagaaacca120gggaaagcyc ctaagcgcct gatctatgct gcatccmrwt trcammgwgg ggtcccatca180aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcmg cctgcagcct240gaagattttg caacttatta ctgtytacar cataatartt aycckybsns kttyggcsrr300
gggaccrags tggaratcaw acgaac 326<210>54<211>322<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<400>54gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgyaggaga cagagtcacc 60atcacttgcc gggcaagtca gagcattagy asctwtttaa attggtatca gcagaaacca120gggaaagccc ctaarctcct gatcyatgyt gcatccagtt trcaargtgg ggtcccatca180aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct240gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacartr ccccayychc tttcggcgga300gggaccaagg tggagatcaa ac 322<210>55<211>325<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<220>
<22l>misc_feature<222>(291)..(291)<223>n是a，c，g，或t<400>55gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60ctctcctgya gggccagtca gagtgttmgc rgcagstact tagcctggta ccagcagaaa120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca180gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag240cctgaagatt ttgcagtgtw ttactgtcag cagtatggta gytcacctcs nacgttcggc300caagggacca aggtggaaat caaac 325<210>56<211>376<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<400>56caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60tcctgtgcag cctctggatt cacyttcagt gactactaya tgagctggat ccgccaggct120ccagggaagg ggctggartg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac cakakactac180gcagactctg tgaagggccc attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgy gagagatgga300gtggaaacta ctttttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg360gtcaccgtct cctcag376<210>57<211>358<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<220>
<22l>misc_feature<222>(337)..(337)<223>n是a，c，g，或t<400>57caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt arttactact ggagctggat ccggcagccc120gccgggaagg gactggagtg gattgggcgt atctatacca gtgggagcmc caactacaac180ccctccctca agagtcgagt caccatgtca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg240aagctgarct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggt aacgattttt300ggagtggtta ttatctttga ctactggggc cagrganccc tggtcaccgt ctcctcag 358<2l0>58<211>418<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<400>58caggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60tcctgtrcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgarctgggt ccgccaggct120ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagst attastggka gtggtggtab yacatwctac180gcagactccg tgaagggccc gttcaccatc tccagagaca attccargam cacgctgtat240ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatctk300ggctrsksyg actyttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggacyacg360gtgattatga gttggttcga cccctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 418<2l0>59<211>364
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<400>59caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagytggat ccggcagccc120ccagggaagg gactggagtg gattgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac180ccctccctca agagtcgact caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg240aagctgagyt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgccag gacgtatagc300agttcgttct actactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc360tcag 364<210>60<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列的描述共有序列<400>60Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser1 5 10 1權(quán)利要求
1.治療需要這樣的治療的患者的非血液的惡性腫瘤的方法，包含向患者施用治療有效量的能特異性地結(jié)合IGF-1R的抗體以及治療有效量的至少一種選自下述的試劑烷化劑，葉酸拮抗劑，嘧啶拮抗劑，細(xì)胞毒性抗生素，鉑化合物，紫杉烷，長(zhǎng)春花生物堿，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，EGFR抑制劑，和激素治療劑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述的試劑是紫杉烷。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述的紫杉烷是多西他賽。
4.權(quán)利要求2的方法，其中所述的紫杉烷是紫杉醇。
5.權(quán)利要求3和4中的任一項(xiàng)的方法，其中抗體和紫杉烷與選自下述的其它治療劑聯(lián)合施用卡鉑，順鉑，吉西他濱，卡培他濱，表柔比星和潑尼松。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述的其它治療劑是卡鉑。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述的其它治療劑是表柔比星。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述的其它治療劑是潑尼松。
9.權(quán)利要求1-8中的任一項(xiàng)的方法，其中所述的非血液的惡性腫瘤是乳腺癌。
10.權(quán)利要求1-8中的任一項(xiàng)的方法，其中所述的非血液的惡性腫瘤是肺癌。
11.權(quán)利要求1-8中的任一項(xiàng)的方法，其中所述的非血液的惡性腫瘤是前列腺癌。
12.藥物組合物，其用于根據(jù)權(quán)利要求1-11中的任一項(xiàng)的方法治療非血液的惡性腫瘤，包含治療有效量的能特異性地結(jié)合IGF-1R的抗體，治療有效量的至少一種選自下述的試劑烷化劑，葉酸拮抗劑，嘧啶拮抗劑，細(xì)胞毒性抗生素，鉑化合物，紫杉烷，長(zhǎng)春花生物堿，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，EGFR抑制劑，和激素治療劑；和藥學(xué)上可接受的載體。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中所述抗體具有下述的性質(zhì)對(duì)人IGF-1R的Kd為8×10-9或更小的結(jié)合親合力，和以小于100nM的IC50，抑制人IGF-1R和IGF-1之間的結(jié)合。
14.權(quán)利要求12或13中的任一項(xiàng)的組合物，其中所述的抗體包含下述的至少一種(a)重鏈，其包含選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR-1，CDR-2和CDR-3的氨基酸序列，(b)輕鏈，其包含選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR-1，CDR-2和CDR-3的氨基酸序列，和(c)具有來(lái)自選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR序列的變化的序列，所述的序列選自保守變化，其中保守變化選自非極性殘基被其它非極性殘基替代，極性的帶電荷的殘基被其它極性的不帶電荷的殘基替代，極性的帶電荷的殘基被其它極性的帶電荷的殘基替代，和結(jié)構(gòu)上類(lèi)似的殘基的取代；和非保守的取代，其中非保守的取代選自極性的帶電荷的殘基對(duì)極性的不帶電荷的殘基的取代，和非極性殘基對(duì)極性殘基的取代，添加和缺失。
15.權(quán)利要求12-14中的任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體包含重鏈，其包含選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR-1，CDR-2和CDR-3的氨基酸序列；和輕鏈，其包含選自2.12.1，2.13.2，2.14.3，4.9.2，4.17.3，和6.1.1的抗體的CDR-1，CDR-2和CDR-3的氨基酸序列。
16.權(quán)利要求12-15中的任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體選自包含源自人基因DP-47的重鏈氨基酸序列和源自人基因A30的輕鏈氨基酸序列的抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療非血液的惡性腫瘤的治療方法，包含向患者施用抗－IGF－1R抗體，尤其是人抗－IGF－1R抗體，聯(lián)合施用至少一種其它治療劑。本發(fā)明還涉及包含這些抗體的藥物組合物，和使用這樣的組合物進(jìn)行治療的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK101014365SQ200580024027
公開(kāi)日2007年8月8日 申請(qǐng)日期2005年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月16日
發(fā)明者A·瓜爾貝托, B·D·科恩, C·L·梅爾文, M·L·羅伯茨 申請(qǐng)人:輝瑞產(chǎn)品公司