專利名稱：二胺類β的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的β2腎上腺素能受體激動劑。本發(fā)明還涉及包含這類化合物的藥物組合物、用這類化合物治療與β2腎上腺素能受體活性相關(guān)的疾病的方法以及適用于制備這類化合物的方法和中間體。
背景技術(shù)：
β2腎上腺素能受體激動劑被認為是治療肺的疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支氣管炎和肺氣腫)的有效藥物。β2腎上腺素能受體激動劑還可用于治療早產(chǎn)，而且潛在地適用于治療神經(jīng)障礙和心臟障礙。盡管使用某些β2腎上腺素能受體激動劑已取得了成功，但目前藥劑的作用持續(xù)時間、效能、選擇性和/或開始仍不夠理想。因此，需要另外的具有改進的性能(如改進的作用持續(xù)時間、效能、選擇性和/或開始)的β2腎上腺素能受體激動劑。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了新的具有β2腎上腺素能受體激動劑活性的化合物。除了其它的性質(zhì)以外，本發(fā)明的化合物是強效的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動劑。此外，已證明本發(fā)明的示范性化合物具有令人驚訝的和出乎意料長的作用持續(xù)時間，其允許每日一次，或者甚至更不頻繁的給藥。
因此，本發(fā)明提供了式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體
其中R1、R2、R3和R4中的每一個獨立選自氫、羥基、氨基、鹵素、-CH2OH和-NHCHO，或者R1和R2連在一起選自-NHC(＝O)CH＝CH-、-CH＝CHC(＝O)NH-、-NHC(＝O)S-和-SC(＝O)NH-；R5選自氫、-ORa和-NRaRb，其中Ra和Rb各自獨立地是氫或者C1-3烷基；n是0到7的整數(shù)；m是0到5的整數(shù)；并且R6、R7、R8、R9和R10中的每一個獨立地是氫或C1-6烷基；條件是當m是0時，R5是氫。
本發(fā)明還提供了含有本發(fā)明的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明進一步提供了含有本發(fā)明的化合物和一種或多種其它治療劑的組合以及含有本發(fā)明的化合物、一種或多種其它治療劑和藥學上可接受的的載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況(condition)(例如，肺的疾病如哮喘或慢性阻塞性肺病、早產(chǎn)、神經(jīng)障礙、心臟障礙或炎癥)的哺乳動物的方法，該方法包括向所述哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明的化合物。特別地，本發(fā)明提供了治療哺乳動物的哮喘或慢性阻塞性肺病的方法，該方法包括向所述哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明進一步提供了治療的方法，該方法包括給予治療有效量的本發(fā)明的化合物和一種或多種其它治療劑的組合。
本發(fā)明還提供了治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動物的方法，該方法包括向所述哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明的化合物還可以被用作研究工具，即，用于研究生物系統(tǒng)或樣品，或用于研究其它化學化合物的活性。因此，在本發(fā)明方法方面的另一方面，本發(fā)明提供了使用式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體，作為研究生物系統(tǒng)或樣品或用于發(fā)現(xiàn)新的β2腎上腺素能受體激動劑的研究工具的方法。
在分開的和不同的方面，本發(fā)明還提供了本文所述的合成方法和中間體，其適用于制備本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還提供了用于醫(yī)學治療中的如本文所述的本發(fā)明的化合物，以及本發(fā)明的化合物在制備用于治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況(例如，肺的疾病如哮喘或慢性阻塞性肺病、早產(chǎn)、神經(jīng)障礙、心臟障礙或炎癥)的哺乳動物的制劑或藥物中的用途。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了新的式(I)的二胺類β2腎上腺素能受體激動劑，或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。下面的取代基和值打算提供本發(fā)明不同方面的典型實例。這些典型的值打算進一步定義這樣的方面，而不打算排除其它的值或限制本發(fā)明的范圍。
在本發(fā)明的一個特定方面，R1是鹵素、-CH2OH或-NHCHO。
在其它的特定方面，R1是氯、-CH2OH或-NHCHO；或R1是-CH2OH或-NHCHO。
在一個特定方面，R2是氫。
在一個特定方面，R3是羥基或氨基；在另一個特定方面，R3是羥基。
在一個特定方面，R4是氫或鹵素；或R4是氫或氯。
在一個特定方面，R1是-NHCHO，R3是羥基，并且R2和R4分別是氫。
在另一個特定方面，R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-，R3是羥基，并且R4是氫。
在另一個特定方面，R1是-CH2OH，R3是羥基，并且R2和R4分別是氫。
在還一個特定方面，R1和R4是氯，R3是氨基，并且R2是氫。
在又一個特定方面，R1和R2連在一起是-NHC(＝O)S-或-SC(＝O)NH-，R3是羥基，并且R4是氫。
在一個特定方面，R5是氫或-ORa。在這方面內(nèi)典型的R5值包括，但不限于氫、羥基、甲氧基和乙氧基。
在另一個特定方面，R5是氫或-NRaRb。在這方面內(nèi)典型的R5值包括，但不限于氫、氨基、甲氨基、二甲氨基、乙氨基和二乙氨基。
在另一個特定方面，R5是氫。
在一個特定方面，R7是氫。
在另一個特定方面，R7是甲基。
在一個特定方面，R8是氫。
在另一個特定方面，R8是甲基。
在一個特定方面，R9是氫。
在另一個特定方面，R9是甲基。
在一個特定方面，R10是氫。
在另一個特定方面，R10是氫。
在一個特定方面，n是2、3、4、5或6。
在另一個特定方面，n是4。
在一個特定方面，m是0、1、2或3。
在另一個特定方面，m是1。
在一個方面，本發(fā)明提供了式(II)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體
其中R1是-CH2OH或-NHCHO，并且R2是氫；或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-；n是2到6的整數(shù)；m是0到3的整數(shù)。
可以特別提及以下的化合物8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮； 其中，化學命名法符合自動命名程序AutoNom，其由MDLInformation Systems，GmbH(Frankfurt，德國)提供。
如上所舉例說明的，本發(fā)明的化合物包含一個或多個手性中心。因此，除非另外指出，本發(fā)明包括外消旋混合物、純的立體異構(gòu)體(即，單個的對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體)，以及這類異構(gòu)體的立體異構(gòu)體-富集的混合物。當顯示特定的立體異構(gòu)體時，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會理解，除非另外指出，少量的其它立體異構(gòu)體可以存在于本發(fā)明的組合物中，條件是這類其它異構(gòu)體的存在不消除該組合物作為整體的效用。
特別的是，本發(fā)明的化合物含有手性中心，該手性中心在式(I)和(II)中與羥基連接的亞烷基碳上。當使用立體異構(gòu)體的混合物時，在帶有羥基的手性中心為(R)定向的立體異構(gòu)體的量大于對應(yīng)的(S)立體異構(gòu)體的量是有利的。當比較相同化合物的立體異構(gòu)體時，(R)立體異構(gòu)體相對于(S)立體異構(gòu)體來說是優(yōu)選的。
定義當描述本發(fā)明的化合物、組合物和方法時，除非另外指出，下面的術(shù)語具有下面的含義。
術(shù)語“烷基”意思是指一價飽和的烴基，其可以是直鏈或支鏈的或其組合。除非另有定義，這樣的烷基典型地包含1-10個碳原予。作為實例，典型的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
術(shù)語“鹵素”意思是指氟、氯、溴或碘。
在此所用的術(shù)語“治療”意思是指患者如哺乳動物(尤其是人)的疾病或醫(yī)學病況的治療，其包括(a)防止疾病或醫(yī)學病況的發(fā)生，即，患者的預(yù)防性治療；(b)改善疾病或醫(yī)學病況，即，消除患者的疾病或醫(yī)學病況或引起患者的疾病或醫(yī)學病況的消退；(c)抑制疾病或醫(yī)學病況，即，減緩或阻止患者的疾病或醫(yī)學病況的發(fā)展；或(d)減輕患者的疾病或醫(yī)學病況的癥狀。
術(shù)語“治療有效量”意思是指當向需要治療的患者給藥時，足以實現(xiàn)治療的量。
術(shù)語“與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況”包括目前所知的或在將來發(fā)現(xiàn)的與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的所有疾病狀態(tài)和/或病況。這樣的疾病狀態(tài)包括，但不限于，肺的疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支氣管炎和肺氣腫)，以及神經(jīng)障礙和心臟障礙。還已知β2腎上腺素能受體活性與早產(chǎn)(參見美國專利號5,872,126)和某些類型的炎癥(參見國際專利申請公開號WO99/30703和美國專利號5,290,815)有關(guān)。
術(shù)語“藥學上可接受的鹽”是指由對于向患者如哺乳動物給藥來說可接受的堿或酸制備的鹽。這樣的鹽可以來源于藥學上可接受的無機或有機堿以及來源于藥學上可接受的無機或有機酸。
衍生自藥學上可接受的酸的鹽包括，但不限于乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、延胡索酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、半乳糖二酸、硝酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸、昔萘酸(1-羥基-2-萘甲酸)鹽等。特別感興趣的是衍生自延胡索酸、氫溴酸、鹽酸、乙酸、硫酸、甲磺酸、昔萘酸和酒石酸鹽。
衍生自藥學上可接受的無機堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、三價鐵、二價鐵、鋰、鎂、三價錳、二價錳、鉀、鈉、鋅等鹽。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥學上可接受的有機堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，包括取代的胺、環(huán)胺、天然存在的胺等等，如精氨酸、甜菜堿、咖啡堿、膽堿、N，N′-二芐基亞乙基二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、哈胺(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉，哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等的鹽。
術(shù)語“溶劑合物”意思是指由一個或多個溶質(zhì)分子，即，本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽，和一個或多個溶劑的分子形成的絡(luò)合物或聚集體。這樣的溶劑合物通常是具有基本上固定的溶質(zhì)和溶劑摩爾比的結(jié)晶固體。作為實例，典型的溶劑包括水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸等等。當溶劑是水時，形成的溶劑合物是水合物。
將要理解，術(shù)語“或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體”打算包括鹽、溶劑合物和立體異構(gòu)體的所有排列，如式(I)的化合物的立體異構(gòu)體的藥學上可接受的鹽的溶劑合物。
術(shù)語“離去基團”意思是指在取代反應(yīng)如親核取代反應(yīng)中可以被另外的官能團或原子置換的官能團或原子。作為實例，典型的離去基團包括Cl、Br、I基團；磺酸酯基團如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對硝基苯磺酸酯等等；和酰氧基如乙酰氧基、三氟乙酸基等等。
術(shù)語“氨基保護基”意思是指適于防止在氨基氮上的不希望的反應(yīng)的保護基團。典型的氨基保護基團包括，但不限于甲?；?；酰基，例如烷酰基如乙?；?；烷氧羰基如叔丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基如芐氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基如芐基(Bn)、三苯甲基(Tr)、和1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基如三甲基硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基硅烷基(TBS)；等等。
術(shù)語“羥基保護基”意思是指適于防止在羥基上的不希望的反應(yīng)的保護基團。典型的羥基保護基團包括，但不限于烷基如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如烷酰基如乙?；环蓟谆缙S基(Bn)、對甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基、DPM)；甲硅烷基如三甲基硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基硅烷基(TBS)；等等。
一般合成程序使用下面的一般方法和程序，由容易得到的原料可以制備本發(fā)明的化合物。盡管在以下的方案中舉例說明了本發(fā)明的特定方面，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認識到，采用在此描述的方法或通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法、試劑和原料，可以制備本發(fā)明的所有方面。還將理解，當給出典型或優(yōu)選的工藝條件(即，反應(yīng)溫度、時間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時，除非另外說明，也可以使用其他工藝條件。最佳的反應(yīng)條件可以隨使用的特定反應(yīng)物或溶劑而變化，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化程序可以確定這樣的反應(yīng)條件。
此外，如對本領(lǐng)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，為了防止某些官能團經(jīng)受不希望的反應(yīng)，常規(guī)的保護基可能是必需的。用于特定官能團的適合保護基的選擇以及保護和脫保護的適宜條件，是本領(lǐng)域中所熟知的。例如，在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups inOrganic Snthesis，第三版，Wiley，紐約1999，以及其中引用的參考文獻中描述了許多保護基及其引入和脫去。
在一個合成的方法中，按照方案A中所說明的制備式(I)和(II)的化合物。(除非另外指出，下述的方案中所示的取代基和變量具有如上所提供的定義)。
方案A 其中P1表示羥基保護基，P2表示羥基保護基，并且L表示離去基團，例如溴。變量R11可以是氫，或R11可以是P3，其中P3表示氨基保護基。
如方案A中所示，使式1的化合物首先和二胺2反應(yīng)得到式3的中間體。通常，這個反應(yīng)在極性、非質(zhì)子傳遞溶劑中進行，任選在堿存在下和加熱。保護基P1通常是甲硅烷基保護基，通常使用氟化物試劑，例如三氫氟化三乙胺，或酸，將它從式3的中間體上脫去，提供式4的中間體。保護基P2通常是芐基保護基，通常使用路易斯酸或通過使用炭上鈀催化劑的氫化，將它從式4的中間體上脫去。當R11是氨基保護基P3時，可以選擇該保護基，使得可以在與用于羥基保護基P1的那些相同的脫保護條件下將它脫去。例如，當P1是芐基時，芐氧基羰基(Cbz)可被用作P3并且用路易斯酸，例如三氯化硼，或通過氫化處理中間體4，可提供所述產(chǎn)物。
通過本領(lǐng)域中已知的程序，以及例如在美國專利第6,653,323B2和6,670,376B1號(通過參考將它們并入本文)及其中的參考文獻中描述的程序，輕易地制備在本申請中描述的反應(yīng)中使用的式1化合物。
可以由可輕易獲得的原料制備式2的中間體。例如，在方案B中舉例說明了用于制備中間體2′(其中R11表示氨基保護基P3的中間體)的程序。
方案B
在方案B中，P4表示氨基保護基，例如，叔丁氧基羰基(Boc)基團。
通常在還原劑，例如氰基硼氫化鈉的存在下，將保護的二胺5與醛6偶合，提供式7的中間體。將保護基P3加到中間體7的內(nèi)部氮原子上形成中間體8。選擇保護基P3，使得可以在P3的存在下選擇性地脫去保護基P4。例如，當Cbz被用作P3時，通常在堿，例如氫氧化鈉存在下用芐基氯甲酸酯處理中間體7，形成中間體8，例如，在酸性條件下從中間體8上脫去保護基P4，形成中間體2′。
在方案C中舉例說明了制備中間體2″(其中R11表示氫的中間體)的程序。
方案C 根據(jù)方案C，將保護的氨基取代的羧酸9與胺10偶合，提供酰胺中間體11。該反應(yīng)通常在偶合劑，例如，1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺(EDC)的存在下進行，并且可以使用催化劑，例如，1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)。在適當?shù)臈l件下將中間體11脫保護，提供式12的中間體，例如，使用硼烷還原劑或氫化鋰鋁將式12的中間體還原，形成中間體2″。
在下面的實施例中描述了關(guān)于用于制備本發(fā)明的典型化合物或其中間體的具體反應(yīng)條件和其它程序的進一步細節(jié)。
因此，在方法方面，本發(fā)明提供了制備式(I)的化合物，或其鹽或立體異構(gòu)體或保護的衍生物的方法，該方法包括如下步驟使式(III)的化合物 其中P1是羥基-保護基，L是離去基團，R6為式(I)中所定義，R1a、R2a、R3a和R4a中的每一個被定義為與式(I)中的R1、R2、R3和R4相同，或R1a、R2a、R3a和R4a中的每一個獨立地是-OP2，其中P2是羥基-保護基，與式(IV)的化合物反應(yīng) 其中R5、R7、R8、R9、R10、n和m如式(I)中所定義并且R11是氫或P3，其中P3是氨基-保護基，提供式(V)的化合物
除去保護基P1提供式(VI)的化合物 (VI)；并且當R1a、R2a、R3a或R4a中的任一個是-OP2時或當R11是P3時，除去保護基P2和P3，如果存在，提供式(I)的化合物，或其鹽或立體異構(gòu)體。
藥物組合物本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。因此，該化合物，優(yōu)選以藥學上可接受的鹽的形式，可以配制成任何適合的給藥形式，如口服或胃腸外給藥，或吸入給藥。
作為說明，化合物可以與常規(guī)藥物載體和賦形劑混合，并以散劑、片劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑和糯米紙囊劑等形式使用。這樣的藥物組合物將包含約0.05-約90％重量的活性化合物，更通常的是約0.1-約30％。藥物組合物可以包含常規(guī)的載體和賦形劑，如玉米淀粉或明膠、乳糖、硫酸鎂、硬脂酸鎂、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸。常用于本發(fā)明制劑中的崩解劑包括交聯(lián)羧甲基纖維素、微晶纖維素、玉米淀粉、羥乙酸淀粉鈉和藻酸。
液體組合物一般由在適合液體載體中的化合物或其藥學上可接受的鹽的混懸劑或溶液組成，所述液體載體例如乙醇、甘油、山梨糖醇、非水溶劑如聚乙二醇、油類或水，任選含懸浮劑、增溶劑(如環(huán)糊精)、防腐劑、表面活性劑、濕潤劑、矯味劑或著色劑。選擇性地，液體制劑可以由可重構(gòu)的粉末制得。
例如，含活性化合物、懸浮劑、蔗糖和增甜劑的粉末可以用水重構(gòu)形成混懸液；糖漿劑可以由含活性成分、蔗糖和增甜劑的粉末制得。
片劑形式的組合物可以采用任何合適的常規(guī)用于制備固體組合物的藥物載體進行制備。所述載體的實例包括硬脂酸鎂、淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纖維素和粘合劑，例如聚乙烯吡咯烷酮。片劑還可以提供有彩色薄膜包衣，或作為載體的一部分的內(nèi)含顏色。此外，活性化合物可以配制成受控釋放的劑型如含親水或疏水基質(zhì)的片劑。
膠囊劑形式的組合物，可以采用常規(guī)的膠囊化程序制得，例如將活性化合物和賦形劑摻入硬明膠膠囊中。或者地，可以制備活性化合物和高分子量聚乙二醇的半固體基質(zhì)，并將其裝填入硬明膠膠囊中；或可以制備活性化合物的聚乙二醇的溶液或可食用油，例如液體石蠟或分級分離的椰子油的混懸液，并將其裝入軟明膠膠囊中。
可以包括的片劑粘合劑是阿拉伯膠、甲基纖維素、羧甲基纖維鈉、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、羥丙基甲基纖維素、蔗糖、淀粉和乙基纖維素?？梢允褂玫臐櫥瑒┌ㄓ仓徭V或其它硬脂酸金屬鹽、硬脂酸、硅油(silicone fluid)、滑石、蠟、油和膠態(tài)二氧化硅。
也可以使用嬌味劑如薄荷、冬青油，櫻桃嬌味劑等。另外，可能需要加入著色劑使劑型在外觀上更吸引人或有助于產(chǎn)品的鑒別。
當胃腸外給予時是有效的本發(fā)明的化合物及其藥學上可接受的鹽，可以配制成肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥。
用于肌內(nèi)或鞘內(nèi)給藥的典型的組合物將由活性成分在油，例如花生油或芝麻油中的混懸液或溶液組成。用于靜脈內(nèi)或鞘內(nèi)給藥的典型的組合物將由無菌等滲的水溶液組成，其含有例如活性成分和葡萄糖或氯化鈉或葡萄糖和氯化鈉的混合物。其它實例是乳酸林格注射液，加葡萄糖的乳酸格林注射液、含葡萄糖的Normosol-M、Isolyte E、?；窳肿⑸湟旱鹊?。任選地，共溶劑例如聚乙二醇；螯合劑例如乙二胺四乙酸；增溶劑例如環(huán)糊精；和抗氧化劑例如焦亞硫酸鈉，可以包括在制劑中。或者，溶液可以冷凍干燥，隨后在給藥前用適合的溶劑重構(gòu)。
局部給藥有效的本發(fā)明的化合物及其藥學上可接受的鹽可以配制為透皮組合物或透皮傳送系統(tǒng)(“貼劑”)。這樣的組合物包括，例如背襯、活性化合物儲庫、控制膜、襯墊和觸壓粘合劑。所述透皮貼劑可用于提供以受控的量連續(xù)或不連續(xù)的輸注本發(fā)明的化合物。用于藥用物質(zhì)傳送的透皮貼劑的構(gòu)建和用途是本領(lǐng)域中熟知的。例如，參見美國專利號5,023,252。這類貼劑可以構(gòu)建成用于連續(xù)的、脈沖式或視需要遞送藥用物質(zhì)。
給予本發(fā)明的化合物的一個優(yōu)選的方式是吸入。吸入是有效的直接傳送藥劑至呼吸道的方式。有三種一般類型的藥物吸入裝置霧化器吸入器、干粉吸入器(DPI)和定量吸入器(MDI)。常規(guī)霧化器裝置產(chǎn)生高速的氣流，其引起治療劑像霧一樣噴霧，其被帶進患者的呼吸道。治療劑配制成液體形式如可呼吸大小的微粉化顆粒的溶液或混懸液，其中微粉化通常定義為具有約90％或更多的直徑小于約10μm的顆粒。
常規(guī)霧化器裝置中使用的典型的制劑是活性劑藥用鹽的等滲水溶液，活性劑的濃度介于約0.05μg/mL至約1mg/mL之間。適合的霧化器裝置能從商業(yè)上購得，例如，PARI GmbH(Starnberg，德國)。其它霧化器裝置已經(jīng)公開于例如美國專利號6,123,068中。
DPI通常以自由流動的粉末的形式給予治療劑，在吸入的時候該粉末可以分散于患者的氣流中。使用外部的能量源來分散粉末的可替代性的DPI裝置也被開發(fā)。為了得到自由流動的粉末，治療劑可以用適合的賦形劑(例如，乳糖或淀粉)來配制。例如，干粉制劑可以通過將干的乳糖顆粒與本發(fā)明的化合物(即，活性劑)適合形式，通常是藥學上可接受的鹽的微粉化的顆粒混合，再干摻合來制得。選擇性地，藥劑可以不用賦形劑進行配制。制劑裝入干粉分配器中，或裝入用于干粉傳送裝置的吸入藥筒或膠囊中。
可商購的DPI傳送裝置的實例包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC)(參見，例如美國專利號5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(參見，例如美國專利號6,378,519)；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(參見，例如美國專利號4,524,769)；和Rotahaler(GlaxoSmithKline)(參見，例如美國專利號4,353,365)。適合的DPI裝置的進一步實例描述于美國專利號5,415,162、5,239,993和5,715,810，以及其中的參考文獻。
MDI通常用壓縮的推進劑氣體排放出計量量的治療劑。用于MDI給藥的制劑包括在液化的推進劑中的活性成分的溶液或混懸液。盡管含氯氟烴如CCl3F，已被常規(guī)用作推進劑，但由于對于這類物質(zhì)對臭氧層的不利影響的擔心，開發(fā)了采用氫氟烷烴(HFA)如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3，-七氟-正丙烷(HFA 227)的制劑。用于MDI給藥的HFA制劑的另外的組分包括共溶劑如乙醇或戊烷，和表面活性劑如脫水山梨醇三油酸酯、油酸、卵磷脂和甘油(參見，例如美國專利號5,225,183、EP0717987A2和WO92/22286)。
因此，用于MDI給藥的適合的制劑可以包括約0.001％-約2％重量的本發(fā)明化合物，約0％-約20％重量的乙醇和約0％-約5％重量的表面活性劑，剩余物是HFA推進劑。在一個制備制劑的方法中，將冷凍或加壓的氫氟烷烴加入含本晶型、乙醇(假如存在)和表面活性劑(假如存在)的管瓶中。為了制備混懸液，以微粉化顆粒形式提供所述化合物(通常為鹽形式)。將制劑裝入氣霧劑罐中，所述罐形成了MDI裝置的一部分。美國專利號6,006,745和6,143,227提供了專門為與HFA推進劑一起使用而開發(fā)的MDI裝置的實例。
在可替代的制劑中，通過在活性化合物的藥用鹽的微粉化顆粒上噴霧干燥表面活性劑的包衣，制得混懸劑制劑(參見，例如WO99/53901和WO00/61108)。關(guān)于制備可呼吸的顆粒的方法的另外的實施例與適于吸入給藥的制劑和裝置參見美國專利號6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398，WO99/55319和WO00/30614。
應(yīng)該理解的是，適于特定給藥方式的本發(fā)明化合物的任何形式(即，游離堿、藥用鹽或溶劑合物)，可以用于上面討論的藥物組合物中。
預(yù)期活性化合物在廣泛的劑量范圍內(nèi)是有效的，并以治療有效量給藥。然而，應(yīng)當理解，實際給藥的化合物的量是由醫(yī)生按照有關(guān)的情況(包括將要治療的病況、選擇的給藥途徑、給予的實際化合物及其相對活性、個體患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者癥狀的嚴重性等)來決定的。
化合物可以周期性的劑量給藥每周一次、每周多次、每日一次或每日多次劑量。治療方案可能要求在很長的時間階段給藥(例如幾周或數(shù)月)，或治療方案可能要求長期給藥。
吸入給藥的治療劑的合適劑量是約0.05μg/天-約1000μg/天的一般范圍，包括約0.1μg/天-約500μg/天。應(yīng)當理解的是，在確定吸入給藥的合適劑量時，要考慮有特定的傳送裝置特色的傳送到肺的活性劑的部分?？诜o藥的合適劑量是約0.05μg/天-約100mg/天的一般范圍，優(yōu)選是約0.5μg/天-約1000μg/天。
除了其它性質(zhì)以外，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出令人驚訝和出人意料的作用持續(xù)時間。如在以下生物測定法中描述的，本發(fā)明的化合物在支氣管保護的動物模型中證明作用持續(xù)時間大于24小時。本發(fā)明的化合物是強效的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動劑。特別地，與β1和β3腎上腺素能受體比較，本發(fā)明的化合物對β2腎上腺素能受體有選擇性。
因此本發(fā)明提供了一種治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動物的方法，該方法包括向所述哺乳動物給于治療有效量的本發(fā)明的化合物或含本發(fā)明化合物的藥物組合物。
本活性劑還可以用作另外含一種或多種其它治療劑的組合的一部分。例如，本活性劑可以與一種或多種治療劑聯(lián)合給藥，所述治療劑選自抗炎藥(例如，皮質(zhì)類固醇和非甾體抗炎藥(NSAIDs)、抗膽堿能藥(特別是毒蕈堿性受體拮抗劑)、其它β2腎上腺素能受體激動劑、抗感染藥(例如，抗生素或抗病毒藥)或抗組胺劑。因此，在進一步方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的化合物和一種或多種治療劑(例如，抗炎藥、抗膽堿能藥、另外的β2腎上腺素能受體激動劑、抗感染藥或抗組胺劑)的組合。
其它的治療劑可以藥學上可接受的鹽或溶劑合物的形式使用。合適時，其它治療劑可以光學純的立體異構(gòu)體形式使用。
適合的抗炎藥包括皮質(zhì)類固醇和NSAIDs。可以與本發(fā)明的化合物聯(lián)合使用的合適的皮質(zhì)類固醇為那些口服和吸入的皮質(zhì)類固醇及其具有抗炎活性的前藥。實例包括甲基潑尼松龍、潑尼松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯、倍氯米松酯(例如，17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如，糠酸酯)、曲安奈德、羅氟奈德、環(huán)索奈德、丙酸布替可特、RPR-106541和ST-126。優(yōu)選的皮質(zhì)類固醇包括丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯，更優(yōu)選6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯。
合適的NSAIDs包括色甘酸鈉、奈多羅米鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如茶堿、PDE4抑制劑或者混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白三烯拮抗劑(例如，孟魯司特)、白三烯合成抑制劑、iNOS抑制劑、蛋白酶抑制劑如類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動劑)、細胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑，如白介素抗體(αIL抗體)、特別地αIL-4療法、αIL-13療法或其組合)；或者細胞因子合成抑制劑。合適的其它的β2-腎上腺素受體激動劑包括沙美特羅(例如昔萘酸鹽形式)、沙丁胺醇(例如硫酸鹽或者游離堿形式)、福美特羅(例如富馬酸鹽形式)、非諾特羅或者特布他林及其鹽。
還感興趣的是本活性劑與磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑組合的用途。典型的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括，但是不限于，順式4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-甲酸、2-甲氧甲酰-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮、順式-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]、順式-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-甲酸等，或其藥學上可接受的鹽。其它典型的PDE4或混合的PDE4/PDE3抑制劑包括AWD-12-281(elbion)、NCS-613(INSERM)、D-4418(Chiroscience和Schering-Plough)、CI-1018或PD-168787(Pfizer)、WO99/16766中公開的苯并間二氧雜環(huán)戊二烯化合物(Kyowa Hakko)、K-34(Kyowa Hakko)、V-11294A(Napp)、羅氟司特(Byk-Gulden)、WO99/47505中公開的pthalazinone化合物(Byk-Gulden)、Pumafentrine(Byk-Gulden，目前為Altana)、阿羅茶堿(Almirall-Prodesfarma)、VM554/UM565(Vernalis)、T-440(Tanabe Seiyaku)和T2585(TanabeSeiyaku)。
合適的抗膽堿能藥是充當毒蕈堿受體拮抗劑的那些化合物，特別是為M1、M2或M3受體或其組合的拮抗劑的那些化合物。示范性化合物包括顛茄植物的生物堿類，例如阿托品、東莨菪堿、后馬托品、莨菪堿；這些化合物通常是作為叔胺的鹽而給藥的。這些藥物、特別是鹽形式可容易從大量商業(yè)來源獲得或者可以利用文獻資料制備或制得，也就是阿托品-CAS-51-55-8或者CAS-51-48-1(無水形式)，硫酸阿托品-CAS-5908-99-6；氧阿托品-CAS-4438-22-6或者其HCl鹽-CAS-4574-60-1和甲硝阿托品-CAS-52-88-0。
后馬托品-CAS-87-00-3，氫溴酸鹽-CAS-51-56-9，甲基溴化物鹽-CAS-80-49-9。
莨菪堿(d，l)-CAS-101-31-5，氫溴酸鹽-CAS-306-03-6和硫酸鹽-CAS-6835-16-1。
東莨菪堿-CAS-51-34-3，氫溴酸鹽-CAS-6533-68-2，甲基溴化物鹽-CAS-155-41-9。
優(yōu)選的抗膽堿能藥包括以愛全樂(Atrovent)的名稱銷售的異丙托銨(例如溴化物形式)，氧托銨(例如溴化物形式)和噻托銨(例如溴化物形式)(CAS-139404-48-1)。感興趣的還有甲胺太林(CAS-53-46-3)、溴化丙胺太林(CAS-50-34-9)、甲溴辛托品或Valpin50(CAS-80-50-2)、克利溴銨(Quarzan，CAS-3485-62-9)、copyrrolate(Robinul)、異丙碘銨(CAS-71-81-8)、溴美噴酯(美國專利2,918,408)、曲地氯胺(Pathilone，CAS-4310-35-4)和甲硫己環(huán)銨(Tral，CAS-115-63-9)。還參見鹽酸環(huán)噴托酯(CAS-5870-29-1)、托品酰胺(CAS-1508-75-4)、鹽酸苯海索(CAS-144-11-6)、哌侖西平(CAS-29868-97-1)、替侖西平(CAS-80880-90-9)、AF-DX116或者美索曲明和在WO01/04118中公開的化合物，其公開通過引用結(jié)合到本文中。
合適的抗組胺藥(也稱作H1-受體拮抗劑)包括大量已知抑制H1-受體并且對于人類使用是安全的拮抗劑的任何一種或者多種。它們都是組胺與H1-受體相互作用的可逆的、競爭性抑制劑。大多數(shù)為第一代拮抗劑的這些抑制劑的大部分，基于它們的核心結(jié)構(gòu)被表征為乙醇胺類、乙二胺類和烷基胺類。另外，其它的第一代抗組胺藥包括可以基于它們的結(jié)構(gòu)被表征為哌嗪和吩噻嗪類的那些。第二代拮抗劑，其為非-鎮(zhèn)靜的，具有類似的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，因為它們保留了核心亞乙基(烷基胺類)或者模擬具有哌嗪或者哌啶的叔胺基團。舉例說明的拮抗劑如下乙醇胺類馬來酸卡比沙明、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸苯海拉明和茶苯海明。
乙二胺類馬來酸吡拉明、曲吡那敏HCl和枸櫞酸曲吡那敏。
烷基胺類氯吡那敏及其鹽例如馬來酸鹽和阿伐斯汀。
哌嗪類羥嗪HCl、雙羥萘酸羥嗪、賽克利嗪HCl、乳酸賽克利嗪、美克洛嗪HCl和西替利嗪HCl。
哌啶類阿司咪唑、左卡巴司汀HCl、氯雷他定或其脫乙酯基類似物，和特非那定和鹽酸非索非那定或者另一種藥學上可接受的鹽。
鹽酸氮卓斯汀也是一種H1受體拮抗劑，它可以與本發(fā)明的化合物聯(lián)合使用。
優(yōu)選的抗組胺藥的實例包括美沙吡林和氯雷他定。
因此，本發(fā)明在進一步方面提供一種含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與皮質(zhì)類固醇的組合。特別地，本發(fā)明提供一種組合，其中皮質(zhì)類固醇是丙酸氟替卡松或其中皮質(zhì)類固醇是6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯或6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯。
因此，本發(fā)明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與PDE4抑制劑的組合。
因此，本發(fā)明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與抗膽堿能藥的組合。
因此，本發(fā)明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體和抗組胺劑的組合。
因此，本發(fā)明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體連同PDE4抑制劑和皮質(zhì)類固醇的組合。
因此，本發(fā)明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體連同抗膽堿能藥和皮質(zhì)類固醇的組合。
如以上組合中所用的，術(shù)語“式(I)的化合物”包括式(II)的化合物及其優(yōu)選的組，和任何單獨公開的一種或多種化合物。
因此，本發(fā)明還提供了藥物組合物，它包含式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與一種或多種如以上所述的其它治療劑。
這類組合的單個化合物可以以分開或者組合的藥物制劑順序或者同時給藥。已知治療劑的合適劑量容易被本領(lǐng)域技術(shù)人員意識到。因此，本發(fā)明的治療方法包括這類組合的單個化合物以分開或者組合的藥物制劑順序或者同時給藥。
因此，根據(jù)進一步方面，本發(fā)明提供治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動物的方法，該方法包括向該哺乳動物給予治療有效量的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與治療可接受量的一種或多種其它治療劑。
由于本發(fā)明的化合物是β2腎上腺素能受體激動劑，這類化合物還可以用作調(diào)查或研究含有β2腎上腺素能受體的生物系統(tǒng)或樣品的研究工具，或用來發(fā)現(xiàn)新的β2腎上腺素能受體激動劑。而且，因為與在其它β腎上腺素能亞型上的結(jié)合和功能活性比較，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出對β2腎上腺素能受體的選擇性，所以這類化合物還可用于研究生物系統(tǒng)或樣品中β2腎上腺素能受體的選擇性激動的作用。任何含β2腎上腺素能受體的合適的生物系統(tǒng)或樣品可用于這類研究中，該研究可以在體外或體內(nèi)進行。
適合于這類研究的典型的生物系統(tǒng)和樣品包括，但不限于細胞、細胞提取物、質(zhì)膜、組織樣品、哺乳動物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬等)等等。采用常規(guī)的操作和裝置，如放射配基結(jié)合試驗和功能測定，例如如下所述的配基-介導的細胞內(nèi)環(huán)腺苷酸(cAMP)變化的測定或相似性質(zhì)的測定，來測定激動β2腎上腺素能受體的效應(yīng)。本發(fā)明化合物的β2腎上腺素能受體激動量通常是在約1毫微摩爾至約1000毫微摩爾的范圍。當本發(fā)明的化合物用作發(fā)現(xiàn)新的β2腎上腺素能受體激動劑的研究工具時，作為分開的實施方式本發(fā)明還包括，對比數(shù)據(jù)(使用合適的測定)的產(chǎn)生和鑒定目標試驗化合物的試驗數(shù)據(jù)的分析。
下面的非限制性實施例說明了本發(fā)明的典型藥物組合物。用于本發(fā)明活性化合物的制劑的另外適合的載體也可以在RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，第二十版，Lippincott Williams &Wilkins，Philadelphia，PA，2000中找到。
制劑實施例A這個實施例說明了用于本發(fā)明化合物口服給藥的典型藥物組合物的制備。
成分每片的量，(mg)
活性成分1乳糖，噴霧干燥的148硬脂酸鎂2
將上述成分混合，并引入硬殼明膠膠囊內(nèi)。
制劑實施例B這個實施例說明了用于本發(fā)明化合物口服給藥的另一個典型藥物組合物的制備。
成分每片的量，(mg)
活性成分1玉米淀粉50乳糖145硬脂酸鎂5
將以上成分密切混合并壓成單刻痕的片劑。
制劑實施例C這個實施例說明了用于本發(fā)明化合物口服給藥的典型藥物組合物的制備。
制備具有以下組成的口服混懸劑。
成分活性化合物 3mg富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g尼泊金甲酯 0.1g砂糖 25.5g山梨糖醇(70％溶液) 12.85g硅酸鎂鋁K(Vanderbilt Co.)1.0g嬌味劑 0.035mL著色劑 0.5mg蒸餾水 適量至100mL
制劑實施例D這個實施例說明了含有本發(fā)明化合物的典型藥物組合物的制備。
制備具有以下組成的緩沖至pH 4的可注射制劑。
成分活性化合物 0.1mg乙酸鈉緩沖溶液(0.4M) 2.0mLHCl(1N)適量至pH4水(蒸餾的、無菌的) 適量至20mL
制劑實施例E這個實施例說明了用于注射本發(fā)明化合物的典型藥物組合物的制備。
通過向1mg的本發(fā)明化合物中力加入20mL的無菌水制備重構(gòu)的溶液。使用前，然后用200mL可與活性化合物配伍的靜脈內(nèi)注射的流體稀釋該溶液。該流體選自5％葡萄糖溶液、0.9％氯化鈉溶液，或5％葡萄糖和0.9％氯化鈉的混合物。其它的實例是乳酸格林注射液、含5％葡萄糖的乳酸格林注射液、含5％葡萄糖的Normosol-M、IsolyteE和酰化的格林注射液。
制劑實施例F這個實施例說明了用于本發(fā)明化合物的局部應(yīng)用的典型藥物組合物的制備。
成分 克活性化合物 0.2-10司盤60 2吐溫60 2礦物油 5凡士林 10尼泊金甲酯 0.15尼泊金丙酯 0.05BHA(丁基化羥基苯甲醚)0.01水 適量至100
合并以上除水以外的所有成分，并在攪拌下加熱至60℃。然后在劇烈攪拌下添加60℃的足量的水以使成分乳化，然后適量添加水至100g。
制劑實施例G這個實施例說明了含有本發(fā)明化合物的典型藥物組合物的制備。
通過將0.1mg活性化合物的藥用鹽溶解于用檸檬酸酸化的0.9％氯化鈉溶液中，制備用于霧化器中的含水氣霧劑制劑。攪拌混合物并超聲處理，直到活性鹽溶解。通過緩慢加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH至3-8的范圍。
制劑實施例H這個實施例說明了用于吸入藥筒的含本發(fā)明化合物的干粉制劑的制備。
用具有下列成分的藥物組合物填充明膠吸入藥筒。
成分
mg/藥筒活性化合物的藥用鹽0.2乳糖 25
在與乳糖摻合前，先將活性化合物的藥用鹽微粉化。使用粉劑吸入器給予藥筒的內(nèi)含物。
制劑實施例I這個實施例說明了用于干粉吸入裝置中的含本發(fā)明化合物的干粉制劑的制備。
制備微粉化的藥用鹽和乳糖的體積配方(bulk formulation)比為1∶200的藥物組合物。把組合物填充入干粉吸入裝置，所述裝置每劑量能傳送約10μg-約100μg的活性藥物成分。
制劑實施例J這個實施例說明了用于定量吸入器中的含本發(fā)明化合物的制劑的制備。
通過將5g平均尺寸小于10μm的微粉化顆粒形式的活性化合物分散于膠體溶液中，制成含5％的活性化合物的藥用鹽、0.5％卵磷脂和0.5％海藻糖的混懸液，所述膠體溶液由0.5g的海藻糖和0.5g的卵磷脂溶解于100mL的軟化水中形成。將混懸液噴霧干燥，并將所得的物質(zhì)微粉化到平均直徑小于1.5μm的顆粒。將該顆粒裝填入含加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的罐中。
制劑實施例K這個實施例說明了用于定量吸入器中的含本發(fā)明化合物的制劑的制備。
通過將10g平均尺寸小于10μm的微粉化顆粒形式的活性化合物分散于溶液中，制成含5％的活性化合物的藥用鹽和0.1％卵磷脂的混懸液，所述溶液由0.2g的卵磷脂溶解于200mL的軟化水中形成。將混懸液噴霧干燥，并將所得的物質(zhì)微粉化至平均直徑小于1.5μm的顆粒。將該顆粒裝填入含加壓的1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷的罐中。
制劑實施例L這個實施例說明了用于吸入藥筒中的含有本發(fā)明的化合物和皮質(zhì)類固醇的干粉制劑的制備。
用具有下列成分的藥物組合物填充明膠吸入藥筒成分
mg/藥筒活性化合物的藥用鹽 0.1皮質(zhì)類固醇 0.5乳糖 25
在與乳糖摻合前，將活性化合物的藥用鹽和皮質(zhì)類固醇微粉化。使用粉末吸入器施用藥筒的內(nèi)容物。
生物學測定法本發(fā)明的化合物及其藥學上可接受的鹽，表現(xiàn)出生物活性，并且適用于醫(yī)學治療?；衔锝Y(jié)合β2腎上腺素能受體的能力及其選擇性、激動劑效價和內(nèi)在活性，可以用以下的試驗A-B證明，或可以使用本領(lǐng)域已知的其它試驗證明。
縮寫％Eff ％功效ATCC 美國典型培養(yǎng)物保藏中心BSA 牛血清白蛋白cAMP 3′5′-環(huán)磷酸腺苷DMEM Dulbecco改進的Eagle培養(yǎng)基DMSO 甲亞砜EDTA 乙二胺四乙酸Emax 最大功效FBS 胎牛血清Gly 甘氨酸HEK-293 人胚腎-293PBS 磷酸鹽緩沖鹽水rpm 轉(zhuǎn)/分Tris 三(羥甲基)氨基甲烷來自表達人β1或β2腎上腺素能受體的細胞的膜制備物使穩(wěn)定地表達克隆的人β1或β2腎上腺素能受體的HEK-293衍生的細胞系在存在500μg/mL遺傳霉素并含10％透析的FBS的DMEM中分別生長到接近匯合。使用細胞刮板用乙二胺四乙酸1∶5,000(PBS中0.2g/L EDTA)提起細胞單層。通過以1,000rpm離心使細胞沉淀，并且將細胞沉淀在-80℃下冷凍保存或立刻制備膜。就制備而言，將細胞沉淀再懸浮在溶胞緩沖液(10mM的Tris/HCL pH7.4@4℃，每50mL緩沖液(Roche cat.#1 697498，Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)一片“含2mM EDTA的完全性蛋白酶抑制劑混合物片”)中，并在冰上使用吻合緊密的Dounce玻璃勻漿器勻化(沖擊20次)。以20,000xg離心勻漿，通過如上所述的再懸浮和離心，用溶胞緩沖液洗滌該沉淀一次。將最后的沉淀再懸浮在膜緩沖液(75mMTris/HCl pH7.4，12.5mM MgCl2，1mM EDTA@25℃)。用Bradford的方法(Bradford MM.，Analytical Biochemistry，1976，72，248-54)測定膜懸浮液的蛋白質(zhì)濃度。在-80℃下以等分試樣冷凍保存膜。
試驗A對人β1和β2腎上腺素能受體的放射配體結(jié)合試驗在96-孔微量滴定板中進行結(jié)合試驗，在測定緩沖液(75mMTris/HCl pH7.4@25℃，12.5mM MgCl2，1mM EDTA，0.2％BSA)中總測定體積為100μL，含有5μg膜蛋白(對于含有人β2腎上腺素能受體的膜)，或含有2.5μg膜蛋白(對于含有人β1腎上腺素能受體的膜)。采用[3H]二氫阿普洛爾(NET-720，100Ci/mmol，PerkinElmer LifeSciences Inc.，Boston，MA)以從0.01nM-200nM的10個不同的濃度，進行用于測定放射性配體的Kd值的飽和結(jié)合研究。用1nM的[3H]二氫阿普洛爾和從40pM-10μM的10個不同的化合物濃度，進行用于測定化合物pKi值的置換試驗。在溶解緩沖液(25mM Gly-HCl，pH3.0，含50％DMSO)中將化合物溶解至濃度為10mM，然后在50mMpH3.0的Gly-HCl中稀釋至1mM，并且從這里連續(xù)稀釋成測定緩沖液。在存在10μM未標記的阿普洛爾的條件下，測定非特異性結(jié)合。測定在室溫下溫育90分鐘，通過在預(yù)先浸漬在0.3％的聚乙烯亞胺中的GF/B玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)快速過濾終止結(jié)合反應(yīng)。用過濾緩沖液(75mM Tris/HCl，pH7.4@4℃，12.5mM MgCl2，1mM EDTA)洗滌濾板三次，以除去未結(jié)合的放射性。將板干燥、添加50μL的Microscint-20液體閃爍流體(PackardBioScience Co.，Meriden，CT)，并在Packard Topcount液體閃爍計數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中對板計數(shù)。用GraphPadPrism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，使用一位點競爭的3參數(shù)模型，通過非線性回歸分析來分析結(jié)合數(shù)據(jù)。當在存在10μM阿普洛爾的條件下測定時，將曲線最小值固定為非特異性結(jié)合的值。采用Cheng-Prusoff方程式(Cheng Y和Prusoff WH.，Biochemical Pharmacology，1973年，22，23，第3099-108頁)，從觀察到的IC50值和放射性配體的Kd值計算化合物的Ki值。將受體亞型選擇性計算為Ki(β1)/Ki(β2)的比。
將結(jié)合結(jié)果表達為Ki值的負十對數(shù)，pKi。在本試驗中具有較高pKi值的化合物對β2腎上腺素能受體具有較高的結(jié)合親和力。
試驗B采用分別異源地表達人β1腎上腺素受體、β2腎上腺素受體和β3腎上腺素受體的細胞系的全細胞cAMP快速板(Flashplate)試驗使穩(wěn)定地表達克隆的人β1腎上腺素能受體(克隆H34.1)的HEK-293細胞系在由補充了10％FBS和500μg/mL遺傳霉素的DMEM組成的培養(yǎng)基中長到約70％-90％匯合。使穩(wěn)定地表達克隆的人β2-腎上腺素受體(克隆H24.14)的HEK-293細胞系在相同的培養(yǎng)基中長到完全匯合。使穩(wěn)定地表達克隆的人β3-腎上腺素受體的CHO-K1細胞系在補充了10％FBS和每第五傳代加入的800μg/mL的遺傳霉素的Ham’s F-12培養(yǎng)基中長到約70％-90％匯合。在測定前一天，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)換到不含抗生素的相同生長培養(yǎng)基中。
根據(jù)制造商的用法說明，采用含有125I-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶活化測定系統(tǒng)(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)，以放射免疫測定法格式進行cAMP測定。
在測定的當天，用PBS漂洗細胞一次，用乙二胺四乙酸1∶5,000(PBS中0.2g/L EDTA)提起并計數(shù)。以1,000rpm離心使細胞沉淀，并將其再懸浮在預(yù)加熱至37℃的刺激緩沖液中。對于表達β1-腎上腺素受體的細胞來說，將10nM的ICI118,551添加到刺激緩沖液中，并在37℃下溫育細胞10分鐘。對于分別表達β1-腎上腺素受體、β2-腎上腺素受體和β3-腎上腺素受體的細胞，以30,000、40,000和70,000個細胞/孔的最終濃度使用細胞。將化合物在DMSO溶解至10mM的濃度，然后用50mM pH3.0的Gly-HCl稀釋至1mM，并且從這里連續(xù)稀釋成測定緩沖液(75mM Tris/HCl，pH7.4@25℃，12.5mM MgCl2，1mM EDTA，0.2％BSA)。在測定中以10μM到9.5pM范圍內(nèi)的11個不同的濃度測試化合物。在37℃下溫育反應(yīng)10分鐘，并且通過加入100μL冰冷的檢測緩沖液停止反應(yīng)。將板密封、在4℃下溫育過夜并在第二天上午在topcount閃爍計數(shù)器(PackardBioScience Co.，Meriden，CT)中計數(shù)。按照制造商的用戶手冊所描述的，基于觀察到的樣品的計數(shù)和cAMP標準品的計數(shù)，計算每毫升反應(yīng)產(chǎn)生的cAMP的量。用GraphPad Prism軟件包(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)，使用S形劑量-響應(yīng)(希爾斜率＝1)的3參數(shù)模型，通過非線性回歸分析來分析數(shù)據(jù)。將激動劑效價表達為pEC50值。將功能β2/β1選擇性定義為比值EC50(β1)/EC50(β2)，并且相應(yīng)地將功能β2/β3選擇性定義為比值EC50(β3)/EC50(β2)。
試驗C采用內(nèi)源性地表達人β2腎上腺素能受體的肺上皮細胞系的全細胞cAMP快速板試驗為了在表達內(nèi)源性水平的β2腎上腺素能受體的細胞系中測定激動劑效價和功效(內(nèi)在活性)，使用人肺上皮細胞系(BEAS-2B)(ATCCCRL-9609，美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA)(January B等人，British Journal of Pharmacology，1998，123，4，第701-711頁)。使細胞在完全的、無血清的培養(yǎng)基(含腎上腺素和維甲酸的LHC-9MEDIUM，cat#181-500，Biosource International，Camarillo，CA)中生長到75％-90％匯合。在測定前一天，將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換為LHC-8(不含腎上腺素或維甲酸，cat#141-500，Biosource International，Camarillo，CA)。
根據(jù)制造商的用法說明，采用含有125I-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶活化測定系統(tǒng)(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)，以放射免疫測定法格式進行cAMP測定。
在測定的當天，細胞用PBS漂洗，通過用含5mM EDTA的PBS刮而提起，并計數(shù)。通過以1,000rpm離心使細胞沉淀，并以600,000個細胞/mL的最終濃度將其再懸浮在預(yù)加熱至37℃的刺激緩沖液中。在測定中以30,000個細胞/孔的最終濃度使用細胞。將化合物在溶解緩沖液(25mM pH3.0的Gly-HCl，含50％DMSO)中溶解至10mM的濃度，然后用50mM pH3.0的Gly-HCl稀釋至1mM，并且從這里連續(xù)稀釋成測定緩沖液(75mM Tris/HCl，pH7.4@25℃，12.5mMMgCl2，1mM EDTA，0.2％BSA)。
在測定中，以在10μM到40pM范圍內(nèi)的10個不同的濃度測試化合物。在存在10μM異丙腎上腺素的條件下測定最大響應(yīng)。在37℃下溫育反應(yīng)10分鐘，并通過加入100μL冰冷的檢測緩沖液停止反應(yīng)。把板密封、在4℃下溫育過夜并在第二天上午在topcount閃爍計數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中計數(shù)。按照制造商的用戶手冊所描述的，基于觀察到的樣品的計數(shù)和cAMP標準品的計數(shù)，計算每mL反應(yīng)產(chǎn)生的cAMP的量。用GraphPad Prism軟件包(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)，使用具有可變斜率的S形劑量-響應(yīng)的4參數(shù)模型，通過非線性回歸分析來分析數(shù)據(jù)。由觀察到的Emax(擬合曲線的頂點)和對于10μM異丙腎上腺素獲得的最大響應(yīng)的比，計算化合物功效(％Eff)，并將其表達為相對于異丙腎上腺素的％Eff。
試驗D豚鼠模型中對抗乙酰膽堿誘導的支氣管痙攣的支氣管保護的測定通過籠子卡片個體鑒別每組6只體重在250和350克之間的雄性豚鼠的組(Duncan-Hartley(HsdPocDH)Harlan，Madison，WI)。在整個研究中，允許動物隨意地獲得食物和水。
在全身暴露給藥隔室(R & S Molds，San Carlos，CA)中，在10分鐘內(nèi)通過吸入給予試驗化合物。安排給藥隔室，使得氣霧劑從中央歧管被同時遞送到6個單獨的隔室。60分鐘順應(yīng)期和10分鐘暴露于霧化的注射用水(WFI)后，將豚鼠暴露于試驗化合物或載體(WFI)的氣霧劑。使用由22psi壓力下的氣體混合物(CO2＝5％、O2＝21％和N2＝74％)驅(qū)動的LC Star噴霧器裝置(型號22F51，PARI RespiratoryEquipment，Inc.Midlothian，VA)，由水溶液產(chǎn)生這些氣霧劑。在該操作壓力下通過霧化器的氣體流量是大約3L/分鐘。通過正壓將所產(chǎn)生的氣霧劑驅(qū)動到隔室中。在傳送氣霧化溶液的過程中使用未稀釋的空氣。在10分鐘霧化過程中，霧化了大約1.8mL的溶液。這是通過比較填充的噴霧器的霧化前和霧化后重量，用重量分析法進行測量的。
服藥后1.5、24、48和72小時，采用全身體積描記法評價通過吸入給予的化合物的支氣管保護作用。在開始肺評估前45分鐘，用肌內(nèi)注射氯胺酮(43.75mg/kg)、賽拉嗪(3.50mg/kg)、乙酰丙嗪(1.05mg/kg)來麻醉每只豚鼠。外科手術(shù)部位剃毛并用70％的酒精清潔后，做一個2-5cm的頸前側(cè)面的中線切口。然后，分離頸靜脈并用充滿生理鹽水的聚乙烯導管(PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)插管，以允許靜脈內(nèi)輸注0.1mg/mL的乙酰膽堿(Ach)，(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)的鹽水溶液。然后，自由地切開氣管，并用14G聚四氟乙烯管(#NE-014，Small Parts，Miami Lakes，F(xiàn)L)插管。如果需要，通過另外肌肉內(nèi)注射前面提及的麻醉劑混合物來保持麻醉。如果動物對捏擰其腳爪有反應(yīng)或其呼吸率大于100次/分鐘，監(jiān)測并調(diào)節(jié)麻醉的深度。
一旦完成插管，將動物放置到體積描記器(#PLY3114，BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)中，并插入食管壓力插管以測量肺驅(qū)動壓(壓力)。將聚四氟乙烯氣管導管連到體積描記器的開口，以允許豚鼠呼吸來自隔室外面的房間空氣。然后密封隔室。使用加熱燈維持體溫，并采用10mL校準注射器(#5520系列，Hans Rudolph，KansasCity，MO)，用4mL空氣使豚鼠的肺膨脹3次，以確保下氣道不會萎陷并且動物不會遭受通氣過度。
一旦測定順應(yīng)性的基線值在0.3-0.9ml/cm H2O的范圍內(nèi)，并且阻力的基線值每秒0.1-0.199cm H2O/mL的范圍內(nèi)，就開始肺的評估。Buxco肺測量計算機程序使得能夠采集并導出肺的值。開始該程序起始實驗方案和數(shù)據(jù)采集。通過Buxco壓力傳感器測量每次呼吸時在體積描記器內(nèi)發(fā)生的體積隨時間的變化。通過對隨時間變化的該信號積分，計算每次呼吸的流量的量度。將該信號和肺的驅(qū)動壓變化(使用Sensym壓力傳感器(#TRD4100)采集)，通過Buxco(MAX 2270)前置放大器與數(shù)據(jù)采集界面(#’s SFT3400和SFT3813)相連接。所有其它肺參數(shù)從這兩個輸入信號導出。
采集基線值5分鐘，5分鐘后用Ach攻擊豚鼠。在規(guī)定的實驗開始后的時間和以下述的劑量從注射泵(sp210iw，World PrecisionInstruments，Inc.，Sarasota，F(xiàn)L)中靜脈內(nèi)輸注Ach1分鐘在5分鐘時1.9μg/分鐘、在10分鐘時3.8μg/分鐘、在15分鐘時7.5μg/分鐘、在20分鐘時15.0μg/分鐘、在25分鐘時30μg/分鐘和在30分鐘時60μg/分鐘。如果在每個Ach劑量后的3分鐘阻力或順應(yīng)性沒有回到基線值，用來自10mL校準注射器的4mL空氣使豚鼠的肺膨脹3次。記錄的肺參數(shù)包括呼吸頻率(呼吸/分鐘)、順應(yīng)性(mL/cm H2O)和肺阻力(每秒的cm H2O/mL)(Giles等，1971)。一旦在這個實驗方案的第35分鐘完成了肺功能測量，將豚鼠從體積描記器中取出，通過CO2窒息使之安樂死。
用下列方程式，使用從一系列Ach攻擊期間的所述流量和壓力導出的肺阻力值，計算量PD2(將其定義為使基線肺阻力加倍所需要的Ach的量)。這是從臨床學科中用于計算PC20值的方程式導出的(Am.Thoracic Soc，2000)。
PD2=antilog[logC1+(logC2-logC1)(2R0-R1)R2-R1]]]>其中C1＝倒數(shù)第二個Ach濃度(C2前面的濃度)C2＝最后的Ach濃度(導致肺阻力(RL)兩倍增加的濃度)R0＝基線RL值R1＝C1后的RL值R2＝C2后的RL值使用單向(One-Way)方差分析，接著使用Bonferroni/Dunn檢驗的post-hoc分析，進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。p-值＜0.05被認為是顯著的。
使用用于Windows的GraphPad Prism，3.00版本(GraphPadSoftware，San Diego，California)，用四參數(shù)對數(shù)方程擬合劑量-響應(yīng)曲線。
Y＝Min+(Max-Min)/(1+10^((logED50-X)*希爾斜率))，其中X是劑量的對數(shù)，Y是響應(yīng)值(PD2)，Y在Min開始并且漸近地接近Max，具有S形。
提供以下實施例用于說明本發(fā)明，不應(yīng)以任何方式解釋為限制本發(fā)明的范圍。
實施例一般原則除非另外指出，試劑、原料和溶劑從商業(yè)供應(yīng)商購得，例如Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)、J.T.Baker(Phillipsburg，NJ)和Honeywell Burdick和Jackson(Muskegon，MI)，并且在沒有進一步純化下被使用；反應(yīng)在氮氣氛下進行；用薄層色譜法(二氧化硅TLC)、分析型高效液相色譜法(分析型HPLC)或質(zhì)譜分析監(jiān)測反應(yīng)混合物；反應(yīng)混合物通常用硅膠急驟柱色譜法或用制備型HPLC，采用以下所述的一般方案提純；將NMR試樣溶解于氘代溶劑(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，光譜用Varian Gemini2000儀器(300MHz)在標準參數(shù)下獲得；采用Perkin Elmer儀器(PE SCIEX API150EX)通過電噴射離子化方法(ESMS)進行質(zhì)譜分析鑒別。
實施例18-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的合成a.(6-苯乙氨基己基)-氨基甲酸叔丁基酯的制備將(6-氨基己基)氨基甲酸叔丁基酯鹽酸鹽(5g，20mmol)溶解在50％二氯甲烷/甲醇(50mL)中并在環(huán)境溫度下用苯乙醛(2.3mL，20mmol)處理1小時。添加氰基硼氫化鈉(1.2g，19mmol)并攪拌混合物過夜。添加水，接著添加飽和的碳酸氫鈉和附加的二氯甲烷。分配混合物，用硫酸鈉干燥有機物并在堿壓下除去揮發(fā)物，以得到標題中間體，在沒有進一步純化下使用該中間體。
b.(6-叔丁氧羰基氨基-己基)苯乙基氨基甲酸芐基酯的制備在環(huán)境溫度下用芐基氯甲酸酯(2.8mL，20mmol)和氫氧化鈉水溶液(1M，30mL)處理前一步驟的產(chǎn)物過夜。用乙酸異丙酯萃取混合物。用檸檬酸水溶液(0.5M)，接著用飽和的碳酸氫鈉洗滌有機物，用硫酸鈉干燥并在減壓下除去揮發(fā)物，以得到標題中間體(9g)，在沒有進一步純化下使用它。
c.(6-氨基己基)苯乙基氨基甲酸芐基酯的制備將前一步驟的產(chǎn)物(9g粗的)溶解在二氯甲烷(45mL)中并在環(huán)境溫度下用三氟乙酸(45mL)處理。在減壓下除去揮發(fā)物，將殘余物溶于水中并用氫氧化鈉堿化。用二氯甲烷萃取混合物并用硫酸鈉干燥有機物。在減壓下除去揮發(fā)物得到標題中間體，將其蒸發(fā)至干并在沒有進一步純化下使用它。
d.[(R)-2-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-2-(8-芐基氧基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-5-基)乙基]-(6-苯乙氨基-己基)氨基甲酸芐基酯的制備在110℃加熱前一步驟的產(chǎn)物(6.5g粗的，18mmol)、8-芐基氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(4.5g，9.2mmol)和二甲亞砜(13mL)1小時，然后冷卻到環(huán)境溫度過夜。將混合物在水和乙酸異丙酯之間分配。用飽和的碳酸氫鈉洗滌有機物，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。通過反相HPLC純化混合物得到標題中間體，為其三氟乙酸鹽。
e.[(R)-2-羥基-2-(8-芐基氧基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-5-基)乙基]-(6-苯乙氨基-己基)氨基甲酸芐基酯的制備將前一步驟的產(chǎn)物溶解在四氫呋喃中并在室溫下用三氫氟化三乙胺處理，直到通過HPLC判斷反應(yīng)完全。將混合物分配在1M氫氧化鈉和乙酸異丙酯之間。用硫酸鈉干燥有機物并蒸發(fā)至干，得到標題中間體。
f.8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的合成在室溫下將前一步驟的產(chǎn)物(250mg，0.39mmol)溶解在二氯甲烷中，并以等分試樣添加三氯化硼(在二氯甲烷中1M)。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)，添加附加的三氯化硼，直到判斷反應(yīng)完全。添加10％乙酸水溶液并在減壓下除去二氯甲烷。通過反相HPLC純化殘余物，得到標題化合物，為其雙-三氟乙酸鹽。
實施例28-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的可替代性合成a.(5-苯乙基氨甲酰基-戊基)氨基甲酸叔丁基酯的制備在氮氣下將苯乙胺(340μL，4.3mmol)、6-叔丁氧羰基氨基-己酸(1.0g，4.3mmol)和1-羥基苯并三唑(700mg，5.1mmol)溶解在N，N-二甲基甲酰胺中并冷卻到0℃。添加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽并攪拌混合物過夜，讓其溫至室溫。將混合物分配在水和乙酸異丙酯之間。用0.5M檸檬酸，然后用飽和的碳酸氫鈉洗滌有機物，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。在沒有進一步純化下使用殘余物。
b.6-氨基-N-(2-苯乙基)己酰胺的制備將前一步驟的產(chǎn)物溶解在二氯甲烷(10mL)中并在室溫下用三氟乙酸(10mL)處理1小時。在減壓下除去揮發(fā)物并將殘余物溶于二氯甲烷中，用1N氫氧化鈉洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干，得到標題中間體(830mg，3.5mmol)，在沒有進一步純化下使用它。
c.N1-苯乙基己烷-1，6-二胺的制備在氮氣和室溫下將前一步驟的產(chǎn)物(330mg，1.4mmol)溶解在四氫呋喃(4mL)中并添加硼烷-二甲硫復(fù)合物(500μL)?；亓骰旌衔镞^夜，然后在冰浴中冷卻。小心地添加甲醇并在減壓下除去揮發(fā)物。將殘余物再溶解在甲醇中并再次濃縮，得到標題中間體(360mg，1.6mmol)，在沒有進一步純化下使用它。
d.8-芐基氧基-5-[(R)-1-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的制備將前一步驟的產(chǎn)物(200mg，0.91mmol)、8-芐基氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(340mg，0.70mmol)、碳酸氫鈉(180mg，2.1mmol)和二甲亞砜(1.7mL)加熱到110℃達55分鐘，冷卻到室溫并在乙酸異丙酯和水之間分配。用硫酸鈉干燥有機物并蒸發(fā)至干。通過反相HPLC純化殘余物，得到標題中間體，為其雙-三氟乙酸鹽(75mg，88μmol)。
e.8-芐基氧基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的制備將前一步驟的產(chǎn)物(75mg，88μmol)溶解在四氫呋喃(1mL)中并在室溫下用三氫氟化三乙胺(60μL，370μmol)處理18小時。將混合物分配在1M氫氧化鈉和乙酸異丙酯之間。用硫酸鈉干燥有機物并蒸發(fā)至干，得到標題中間體。
f.8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的合成在室溫下將前一步驟的產(chǎn)物溶解在二氯甲烷中并以等分試樣添加三氯化硼(在二氯甲烷1M)。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)，添加附加的三氯化硼直到判斷反應(yīng)完全。添加10％乙酸水溶液并在減壓下除去二氯甲烷。通過反相HPLC純化殘余物，得到標題化合物，為其雙-三氟乙酸鹽。C25H33N3O3計算的m/z[M+H+]424.26；實測值424.4。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)10.4(s，2H)，8.6(brs，4H)，8.0(d，1H，J＝9.9Hz)，7.1-7.3(m，5H)，7.0(d，1H，J＝8.2Hz)，6.9(d，1H，J＝8.2hz)，6.4(d，1H，J＝9.9Hz)，6.1(brs，1H)，5.2(brd，1H，J＝8.5Hz)，2.7-3.1(m，10H)，1.4-1.6(m，4H)，1.1-1.3(m，4H)。
比較實施例8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙基氧基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的合成a.6-苯乙基氧基己腈的制備將6-溴代己腈(3.0mL，23mmol)和四丁級溴化銨(350mg，1.1mmol)溶解在四氫呋喃(5mL)和50％氫氧化鈉水溶液(15mL)中。添加苯乙醇(3.0mL，25mmol)，導致沉淀。將混合物加熱到65℃，此時固體溶解。在65℃攪拌混合物4小時，然后冷卻到室溫并放置11天。添加水、己烷和乙酸乙酯并分配混合物。用水、飽和的氯化鈉洗滌有機物，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干，得到標題中間體(5.3g，24mmol)，在沒有進一步純化下使用它。
b.6-苯乙基氧基己胺的制備將前一步驟的產(chǎn)物(5.3g，24mmol)溶解在四氫呋喃(50mL)中并用硼烷-二甲硫復(fù)合物(6mL)處理?；亓骰旌衔?.5小時，然后添加額外的硼烷-二甲硫復(fù)合物(2mL)，再回流混合物20小時，冷卻到室溫，并小心地添加甲醇。在減壓下除去揮發(fā)物并從甲醇中再蒸發(fā)混合物，得到標題中間體(5.7g，26mmol)，在沒有進一步純化下使用它。
c.8-芐基氧基-5-[(R)-1-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)-2-(6-苯乙基氧基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的制備將前一步驟的產(chǎn)物(3.4g，15mmol)、8-芐基氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔丁基二甲基硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(3.4g，7.0mmol)、碳酸氫鈉(2.3g，27mmol)和二甲亞砜(7mL)在100℃加熱135分鐘，然后冷卻到室溫并讓它靜置16小時。將混合物分配在水和乙酸異丙酯之間并用水然后用飽和的氯化鈉洗滌有機物，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干。通過反相HPLC純化產(chǎn)物，得到標題中間體，為其三氟乙酸鹽(1.5g，2.0mmol)。
d.8-芐基氧基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙基氧基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的制備將前一步驟的產(chǎn)物(1.5g，2.0mmol)溶解在四氫呋喃(15mL)中并用三氫氟化三乙胺(660μL，4.0mmol)在室溫下處理3天。將混合物分配在1M氫氧化鈉和乙酸乙酯之間。用飽和的氯化鈉洗滌有機物，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)至干，得到標題中間體(1.4g，2.7mmol)，在沒有進一步純化下使用它。
e.8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙基氧基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮的合成將前一步驟的產(chǎn)物(1.4g，2.7mmol)和炭上氫氧化鈀(20％Pd，含濕量～60％，300mg)懸浮在四氫呋喃(30mL)中并在室溫和氫氣氣氛下攪拌兩小時。過濾除去鈀并在減壓下蒸發(fā)混合物。通過反相HPLC純化殘余物，得到標題化合物，為其三氟乙酸鹽。C25H32N2O4計算的m/z[M+H+]425.25；實測值425.3。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)10.4(s，1H)，10.4(s，1H)，8.4(brs，2H)，8.0(d，1H，J＝10.2Hz)，7.0-7.2(m，6H)，6.9(d，1H，J＝8.0Hz)，6.5(d，1H，J＝9.9Hz)，6.1(d，1H，J＝3.7Hz)，5.2(m，H)，3.4(t，2H，J＝7.0Hz)，3.2(t，2H，J＝6.6Hz)，2.7-3.0(m，4H)，2.7(t，2H，J＝6.9Hz)，1.3-1.5(m，4H)，1.1-1.2(m，4H)。
實施例4生物學測定結(jié)果在上面描述的生物學測定中測試了本發(fā)明的典型化合物，實施例1和2的化合物，8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮和比較實施例的化合物，8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙基氧基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮?，F(xiàn)將測定的結(jié)果總結(jié)在下表中。
表1.體外測定結(jié)果
表2.體內(nèi)測定結(jié)果
*實施例1中制備的化合物在上述體外結(jié)合親和性測定和功能測定中測試的本發(fā)明的化合物對β2腎上腺素能受體具有活性，比較化合物也具有活性。令人意外的是，本發(fā)明的化合物證實了在給藥后72小時在豚鼠模型中的支氣管保護作用，而比較化合物在給藥后72小時在體內(nèi)無活性。另外，本發(fā)明的化合物在試驗B的功能測定中顯示出對β2腎上腺素能受體的優(yōu)異選擇性(與β1和β3受體亞型比較)。所述測定結(jié)果顯示，本發(fā)明提供了強效的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動劑，其具有異常長的作用持續(xù)時間。
盡管已參照本發(fā)明的具體實施方案描述了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當理解，在不背離本發(fā)明的真實精神和范圍下，可以進行各種變化并且可以同等方案取代。此外，可以進行很多修飾使特定的情形、材料、物質(zhì)的組成、方法、方法步驟，適應(yīng)本發(fā)明的目的、精神和范圍。所有這類修飾被計劃在此附加的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。另外，在上文引用的所有的出版物、專利和專利文獻在此以全文引入作為參考，好像個別地引入作為參考一樣。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R1、R2、R3、R4中的每一個獨立地選自氫、羥基、氨基、鹵素、-CH2OH和-NHCHO，或R1和R2連在一起選自-NHC(＝O)CH＝CH-、-CH＝CHC(＝O)NH-、-NHC(＝O)S-和-SC(＝O)NH-；R5選自氫、-ORa和-NRaRb，其中Ra和Rb各自獨立地是氫或C1-3烷基；n為0到7的整數(shù)；m為0到5的整數(shù)；并且R6、R7、R8、R9和R10中的每一個獨立地是氫或C1-6烷基；條件是當m是0時，R5是氫。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R9和R10各是氫。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中R5和R6各是氫。
4.權(quán)利要求1的化合物，它是式(II)的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R1是-CH2OH或-NHCHO，并且R2是氫；或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-；n是2到6的整數(shù)；m是0到3的整數(shù)。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中n是4。
6.權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的化合物，其中m是1。
7.權(quán)利要求4到6任一項的化合物，其中R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-。
8.權(quán)利要求4到7任一項的化合物，其中帶有羥基的亞烷基碳上的立體化學是(R)。
9.權(quán)利要求1的化合物，其化學名稱為8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(6-苯乙氨基-己氨基)乙基]-1H-喹啉-2-酮；或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
10.一種藥物組合物，它包含治療有效量的權(quán)利要求1到9任一項的化合物和藥學上可接受的載體。
11.權(quán)利要求10的藥物組合物，其中該組合物還包含治療有效量的一種或多種其它治療劑。
12.權(quán)利要求11的藥物組合物，其中所述其它治療劑是皮質(zhì)類固醇、抗膽堿能藥或PDE4抑制劑。
13.權(quán)利要求10到12任一項的藥物組合物，其中該組合物被配制用于通過吸入給藥。
14.一種組合，它包含權(quán)利要求1到9任一項的化合物和一種或多種其它治療劑。
15.一種組合，它包含權(quán)利要求1到9任一項的化合物和選自丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲基酯和6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯的化合物。
16.權(quán)利要求1到9任一項所述的化合物，其用于治療中。
17.權(quán)利要求1到9任一項的化合物，或者權(quán)利要求14或權(quán)利要求15的組合在制備藥物中的用途。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物用于治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動物。
19.權(quán)利要求18的用途，其中所述疾病或病況是肺的疾病或病況。
20.權(quán)利要求19的用途，其中所述肺的疾病或病況是哮喘或慢性阻塞性肺病。
21.權(quán)利要求18的用途，其中所述藥物適合于通過吸入給藥。
22.權(quán)利要求1到9任一項的化合物在制備與一種或多種治療劑聯(lián)合給藥用于治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動物的藥物中的用途。
23.制備根據(jù)權(quán)利要求1到9任一項的式(I)化合物的方法，該方法包括(a)使式(III)的化合物 其中P1是羥基保護基，L是離去基團，R1a、R2a、R3a和R4a中的每一個獨立地與權(quán)利要求1到9任一項中定義的R1、R2、R3和R4相同或為-OP2，其中P2是羥基保護基；與式(IV)的化合物反應(yīng) 其中R11是氫或P3，其中P3是氨基保護基，提供式(V)的化合物 (b)除去保護基P1，提供式(VI)的化合物 并且(c)當R1a、R2a、R3a或R4a中的任一個是-OP2時，或當R11是P3時，除去保護基P2和P3，如果存在的話，提供式(I)的化合物，或其鹽或立體異構(gòu)體。
24.通過權(quán)利要求23的方法制備的產(chǎn)物。
25.一種治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動物的方法，該方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的權(quán)利要求1到9任一項的化合物。
26.權(quán)利要求25的方法，它還包括給予治療有效量的一種或多種其它治療劑。
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述其它治療劑是皮質(zhì)類固醇、抗膽堿能藥或PDE4抑制劑。
28.權(quán)利要求25到27任一項的方法，其中該方法包括通過吸入給予化合物。
29.一種研究包含β2腎上腺素能受體的生物系統(tǒng)或樣品的方法，該方法包括(a)使所述生物系統(tǒng)或樣品與權(quán)利要求1到9任一項的化合物接觸；并且(b)測定由所述化合物引起的對所述生物系統(tǒng)或樣品的作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的β
文檔編號A61K31/16GK1984876SQ200580024061
公開日2007年6月20日 申請日期2005年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月3日
發(fā)明者M·S·林塞爾 申請人:施萬制藥