專利名稱：用作蛋白激酶抑制劑的6－(2－烷基－苯基)－吡啶并[2,3－d]嘧啶類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型的6-(2-烷基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶類，涉及它們的制備方法，含有它們的藥劑及它們的制備，以及這些化合物作為藥學(xué)活性試劑的用途。
某些取代的雙環(huán)氮雜環(huán)類對于它們的蛋白激酶以及它們的酪氨酸激酶抑制活性在本領(lǐng)域是已知的。WO 02/090360公開了吡啶并[2，3-d]嘧啶類，其可以用作激酶酶抑制劑并且用于治療過增生性疾病。
WO 03/000011公開了吡啶并[2，3-d]嘧啶的含磷衍生物，其用作蛋白激酶抑制劑并且通常用于治療骨病、癌癥和信號疾病。
WO 96/15128公開了6-芳基-吡啶并[2，3-d]嘧啶類，其用作蛋白酪氨酸激酶的抑制劑并且用于治療動脈粥樣硬化、再狹窄、銀屑病、細(xì)菌感染和癌癥。
盡管在上述文獻(xiàn)中記載了進(jìn)展，但是，對于僅指定少數(shù)的、具有改善的治療指數(shù)如改善的活性、耐受性、選擇性或穩(wěn)定性的新化合物保留有需要。
本發(fā)明的衍生物是下面通式I的新型化合物
式I，其中R1為-CH3或者-CF3；R2為-C(O)-NH-烷基或者-C(O)-N(烷基)2，所有的烷基任選被以下基團(tuán)取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-雜環(huán)基；或者-NH-S(O)2-烷基；R3為雜環(huán)基；-NH-C(O)-烷基；-NH-S(O)2-烷基；以及R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分；及其藥用鹽。
根據(jù)本發(fā)明的化合物顯示出作為蛋白激酶抑制劑的活性，特別是src家族酪氨酸激酶抑制劑活性，因而可用于治療由所述酪氨酸激酶介導(dǎo)的疾病。酪氨酸激酶家族通過磷酸化肽和蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基在細(xì)胞信號和細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)中起重要作用。已知酪氨酸激酶的不當(dāng)活化和多種病態(tài)有關(guān)，這些病態(tài)包括炎性的、免疫的、CNS紊亂，或者腫瘤病癥，或者骨病。例如，參見Susva，M.等，Trends Pharmacol.Sci.，21(2000)489-495；Biscardi，J.S.等，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119。
本發(fā)明的化合物可以用作預(yù)防和治療如下疾病的活性劑，例如，移植排斥，炎性腸綜合征，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，銀屑病，再狹窄，過敏性哮喘，早老性癡呆，帕金森病，中風(fēng)，骨質(zhì)疏松癥，良性增生，以及癌癥如結(jié)腸直腸、乳腺、肺、前列腺、胰腺、胃、膀胱、卵巢、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、宮頸、腎臟或腎癌，白血病或淋巴瘤，或者可用于制備相應(yīng)的藥物。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)與本領(lǐng)域中已知的化合物相比，本發(fā)明的化合物顯示出改善的代謝穩(wěn)定和/或選擇性，以及至少相同的抗src-酪氨酸激酶的活性。
本發(fā)明的目的在于式I的化合物及其藥用鹽以及它們的對映異構(gòu)體形式、上述化合物的制備、含有它們的藥劑及它們的制備以及上述化合物在控制或預(yù)防疾病，特別是如上所述的疾病和病癥中的應(yīng)用，或在制備相應(yīng)藥劑中的應(yīng)用。
如本文所使用的，術(shù)語″烷基″是指含有1至5個(gè)，優(yōu)選1至3個(gè)碳原子的飽和的、直鏈或支鏈烴基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-丁基、叔丁基、正戊基、正己基以及它們的異構(gòu)體，優(yōu)選甲基或者乙基?！叭芜x取代的”烷基是如上所定義的烷基，其是未被取代，或被取代一次的，或如果可能，被取代兩次的。優(yōu)選地，這樣的烷基被取代一次。
如本文所用的術(shù)語“雜環(huán)基”是指具有5至10個(gè)環(huán)原子的單-或雙環(huán)芳香或非芳香環(huán)，其含有最多3個(gè)，優(yōu)選1或2個(gè)獨(dú)立地選自N、O或S中的雜原子，并且余下的環(huán)原子是碳原子。所述的雜環(huán)基任選被烷基取代一次或數(shù)次。優(yōu)選地，所述的雜環(huán)基為具有5或6個(gè)環(huán)原子的單環(huán)飽和環(huán)，其含有1或者2個(gè)獨(dú)立地選自N或者O中的雜原子。所述的雜環(huán)基可以任選地被氧代基團(tuán)或者如上定義的烷基取代一次或兩次。這種雜環(huán)基的實(shí)例是吡咯烷基；甲基吡咯烷基；咪唑基；吡唑基；2-甲基-吡唑基；二甲基-吡唑基；哌啶基；甲基-哌啶基；嗎啉基，優(yōu)選吡咯烷基和嗎啉基。
優(yōu)選地，式I中的取代基R3位于-NH-的對位或間位。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R2為-C(O)-NH-烷基；所述的烷基任選被以下基團(tuán)取代一次-NH(烷基)；-吡咯烷基；或者-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-烷基，-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基；-C(O)-NH-亞乙基-吡咯烷基或者-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；R2為-C(O)-NH-烷基；所述的烷基任選被以下基團(tuán)取代一次-NH(烷基)；
-吡咯烷基；或者-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-烷基，-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基；-C(O)-NH-亞乙基-吡咯烷基或者-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；以及R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-CH3。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-CH3；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫。
這樣的化合物是例如2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲基氨基-乙基)-酰胺；2-(3-甲磺酰基氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲基氨基-乙基)-酰胺；以及2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲基氨基-乙基)-酰胺。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；以及R2為-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；R2為-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫。
這樣的化合物是例如2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；以及2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中
R1為-CH3；以及R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CH3；R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫。
這樣的化合物是例如2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；以及2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3；R2為-C(O)-NH-烷基；所述的烷基任選被以下基團(tuán)取代一次-NH(烷基)；-吡咯烷基；或者-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者
-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3；R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-烷基，-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基；-C(O)-NH-亞乙基-吡咯烷基或者-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3；以及R2為-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3；R2為-C(O)-NH-亞甲基-吡咯烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
這樣的化合物是例如2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；以及2-(4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3；以及R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基。
本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案為式I的化合物，其中R1為-CF3；R2為-C(O)-NH-亞乙基-NH-S(O)2-烷基；R3為嗎啉代；-NH-S(O)2-烷基；或者-NH-C(O)-烷基；和R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分。
這樣的化合物是例如2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；
2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；以及2-(4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為一種制備根據(jù)本發(fā)明的化合物的方法，其中a)將式(III)化合物中的羧基 式(III)，其中R1具有如上對于式(I)給出的含義，轉(zhuǎn)化為式(IV)的酰胺衍生物 式(IV)，其中R1和R2具有如上對于式(I)給出的含義；b)將(IV)化合物中的硫烷基轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的亞砜基，所述的亞砜基
c)被相應(yīng)的式(VI)的苯胺取代 式(VI)其中R3和R4具有如上對于式(I)給出的含義，得到通式(I)的化合物；d)如果需要，將從(c)得到的所述通式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為藥用鹽。
通式(I)的衍生物或其藥用鹽可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的適用于化學(xué)相關(guān)化合物制備的任何方法制備。這種方法，當(dāng)用于制備式(I)的衍生物或其藥用鹽時(shí)，作為本發(fā)明進(jìn)一步的特征所提供，并且由以下方案1的代表性實(shí)例舉例說明，其中，除非另外申明，R1、R2、R3和R4具有此前定義的含義。必要的原料可以通過有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得。這些原料的制備方法描述于后附的實(shí)施例中。備選地，可以采用與屬于有機(jī)化學(xué)家普通技術(shù)范疇內(nèi)的方法類似的方法獲得必要的原料。
方案1步驟1可以將式(II)的取代的芳基丙酮酸與4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛縮合，得到式(III)的化合物。所述的縮合反應(yīng)可以在堿性條件下進(jìn)行，例如，用在水或者甲醇(MeOH)中的氫氧化鈉(NaOH)，或者用在二甲基甲酰胺(DMF)、1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)或者四氫呋喃(THF)中的1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)或者叔丁醇鉀(KOtBu)。備選地，在乙酸鈉存在下，在乙酸中進(jìn)行該縮合反應(yīng)。反應(yīng)溫度在室溫(RT)至150℃的范圍內(nèi)。
步驟2由本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)程序，可以將適宜的式(III)的羧酸轉(zhuǎn)化為式(IV)的酰胺衍生物。例如，首先由與碳二亞胺或者羰基二咪唑或者草酰氯的反應(yīng)將該酸活化，隨后在沒有分離的情況下與適宜的取代胺反應(yīng)。該反應(yīng)最好在惰性溶劑如THF，CH2Cl2或者NMP，在0℃至150℃的溫度進(jìn)行。
步驟3可以將式(IV)的吡啶并嘧啶類的2位上的甲硫基或者備選地，任何其它烷硫基或者芳硫基通過氧化為相應(yīng)的式(V)的亞砜或者相應(yīng)的砜而轉(zhuǎn)化為適宜的離去基團(tuán)。適宜的試劑是例如溫度為-40℃至+65℃的、在惰性溶劑如二氯甲烷(CH2Cl2)、氯仿(CHCl3)或者甲基叔丁基醚(MTBE)中的3-氯過苯甲酸(mCPBA)或者2-苯磺?；?3-苯基-氧雜氮丙啶。
步驟4可以將來自步驟3的亞砜或者砜以純的形式或者作為粗產(chǎn)物與式(VI)的苯胺類反應(yīng)，得到式(I)的2-苯胺基取代的吡啶并嘧啶?？梢栽谧鳛槿軇┑倪^量苯胺中，或者在惰性溶劑如CH2Cl2、甲苯、乙腈、DMF、二甲亞砜(DMSO)或者NMP中，并且在0℃至150℃范圍內(nèi)的溫度進(jìn)行該反應(yīng)?？梢约尤胨崛缛宜?TFA)或者鹽酸(HCl)，以催化該反應(yīng)。如已經(jīng)將mCPBA用于前一氧化步驟，則在粗反應(yīng)混合物中存在的間-氯苯甲酸可以用作催化劑。
在此反應(yīng)過程中，取代基R2上的某些官能團(tuán)可能需要使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的適宜保護(hù)基團(tuán)。所述的保護(hù)基團(tuán)在所述的反應(yīng)順序結(jié)束時(shí)可以裂開。例如，對于仲或伯胺官能團(tuán)的保護(hù)，這樣的保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例為叔丁氧碳基或芐氧碳基。
通式(I)的化合物可以含有一個(gè)或幾個(gè)手性中心，隨后可以以外消旋或光學(xué)活性形式存在?？梢园凑展姆椒▽⑼庀锓蛛x成對映體。例如，通過與光學(xué)活性酸反應(yīng)，可以由外消旋混合物形成可以通過結(jié)晶分離的非對映體鹽，所述的光學(xué)活性酸如D-或L-酒石酸、扁桃酸、蘋果酸、乳酸或樟腦磺酸。備選地，還可以通過使用在商購的手性HPLC-相上進(jìn)行的色譜法實(shí)現(xiàn)對映體的分離。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以其藥用鹽形式存在。術(shù)語″藥用鹽″指的是保持式(I)化合物的生物有效性和特性且由適宜的非毒性有機(jī)酸或無機(jī)酸或有機(jī)堿或無機(jī)堿形成的常用酸加成鹽或堿加成鹽。酸加成鹽包括例如來源于無機(jī)酸和來源于有機(jī)酸的那些鹽，所述的無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸；所述的有機(jī)酸如對-甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸等。堿加成鹽包括那些來源于銨、鉀、鈉的鹽和季銨氫氧化物，如氫氧化四甲銨的那些鹽。將藥物化合物化學(xué)修飾成鹽是藥物化學(xué)工作者眾所周知的技術(shù)，目的是為使化合物獲得改善的物理和化學(xué)穩(wěn)定性、吸濕性、流動性和溶解性。其例如描述于Stahl，P.H.和Wermuth，G，(編輯)，Handbook ofPharmaceutical Salts，Verlag Helvetica Chimica Acta(VHCA)，Zürich(2002)或者Bastin，R.J.等，Organic Proc.Res.Dev.4(2000)427-435。
可以將根據(jù)本發(fā)明的化合物及其藥用鹽作為藥劑使用，例如以藥物制劑形式?？梢酝ㄟ^口服、例如以片劑、包衣片、錠劑、硬明膠膠囊和軟明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑形式給予所述藥物制劑。然而，還可以通過直腸、例如以栓劑形式或通過非腸道、例如以注射液形式進(jìn)行給藥。
可以通過用藥物上惰性的、無機(jī)或有機(jī)載體加工根據(jù)本發(fā)明的化合物而得到上述藥物制劑。例如，可以將乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等用作片劑、包衣片、錠劑和硬明膠膠囊的載體。用于軟明膠膠囊的適宜載體為例如植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇類等。然而，根據(jù)活性物質(zhì)的特性，在軟明膠膠囊的情況下，通常不需要載體。用于生產(chǎn)溶液和糖漿劑的適宜載體例如有水、多元醇類、甘油、植物油等。用于栓劑的適宜載體例如有天然或硬化油、蠟、脂肪、半液體或液體多元醇類等。
此外，藥物制劑可以含有防腐劑、加溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、增甜劑、著色劑、調(diào)味劑、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑、掩蔽劑或抗氧化劑。它們還可以含有其它治療上有價(jià)值的物質(zhì)。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為一種藥劑，其含有與藥用輔劑一起的根據(jù)式(I)的一種或多種化合物作為活性成分。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為所述的藥劑，其用于治療由src-家族酪氨酸激酶的不適宜激活介導(dǎo)的疾病。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為所述的藥劑，其用于治療炎性疾病、免疫疾病、CNS疾病或骨病。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為所述的藥劑，其用于治療癌癥。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為根據(jù)式(I)的一種或多種化合物在制備用于治療由src家族酪氨酸激酶的不適宜激活介導(dǎo)的疾病的藥劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為根據(jù)式(I)的一種或多種化合物作為src家族酪氨酸激酶抑制劑的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為根據(jù)式(I)的一種或多種化合物作為細(xì)胞信號調(diào)節(jié)或抗增殖劑的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為根據(jù)式(I)的一種或多種化合物在治療炎性疾病、免疫疾病、CNS疾病或骨病中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為根據(jù)式(I)的一種或多種化合物在治療癌癥中的應(yīng)用。
例如，通過使用下列步驟得到藥物制劑1.將4.0g玻璃珠稱入定制的管GL 25，4cm(該珠填充半支管)。
2.加入50mg化合物、用刮刀(spatulum)分散并渦旋。
3.加入2ml明膠溶液(重量珠∶明膠溶液＝2∶1)并渦旋。
4.加蓋并用鋁箔包封以避光。
5.為研磨物制備平衡重。
6.在Retsch研磨機(jī)中以20/s研磨4小時(shí)(對某些物質(zhì)以30/s研磨達(dá)24小時(shí))。
7.通過以400g離心2分鐘，在與接收小瓶連接的過濾儲蓄器上用兩層濾膜(100μm)從珠上提取混懸劑。
8.將提取物移入量筒。
9.用小體積反復(fù)洗滌(本文為1ml步驟)至達(dá)到終體積或提取物澄清。
10.用明膠填充至終體積并勻化。
上述描述的制備產(chǎn)生具有1至10μm顆粒大小的式I化合物的微混懸劑。該混懸劑適合于口服應(yīng)用且用于下述體內(nèi)藥動學(xué)測試。
藥理學(xué)活性通過使用下列試驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明化合物作為src-家族酪氨酸激酶抑制劑的活性。
SRC抑制劑-試驗(yàn)參數(shù)反應(yīng)混合物ATP 5μM肽(Ro+Ja133-Ro)10μMJa133-Ro 196 nMRo 9.8μMPT66 230ng/ml分析緩沖液4mM MgCl22mM TCEP50mM HEPES0.1％吐溫20pH7.3酶2.5U/ml抑制劑最大25μM最小0.42nM材料Eu-標(biāo)記的磷酸酪氨酸抗體-用于Lck Cisbio Mab PT66-K，-用于Src EG&G Wallac PT66 Eu-W1024(均可商購)。
肽Ro NH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，和Ja133-RoJa133-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，其中Ja133為LightCycler-Red 640-N-羥基琥珀酰亞胺酯；由此通過最優(yōu)化固相肽合成方案(Merrifleld，F(xiàn)ed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412)，用Zinsser SMP350肽合成儀合成兩種肽類。簡單的說，通過反復(fù)偶聯(lián)20倍過量的氨基酸將所述肽固定在160mg(22.8μmol級)Rink-Linker改性的聚苯乙烯固相上，其中所述的氨基酸隨側(cè)鏈功能的不同而各自被臨時(shí)的哌啶不穩(wěn)定的Fmoc-和永久的酸不穩(wěn)定的叔-Bu-、BOC-和O-叔-Bu-基團(tuán)保護(hù)。底物序列AEEEIYGEFEAKKKK在N-末端還固定有間隔基氨基酸，即氨基辛酸和甘氨酸。在裂解N-末端臨時(shí)保護(hù)基后，用1.5倍量的LightCycler-Red 640-N-羥基琥珀酰亞胺酯(購自Roche Diagnostics GmbH)和三乙胺標(biāo)記仍然連接和被保護(hù)的肽。3小時(shí)后，用二甲基甲酰胺和異丙醇洗滌樹脂，直到藍(lán)色樹脂的洗脫液變無色為止。從固相中取出被完全保護(hù)和標(biāo)記的肽，并通過用80％三氟乙酸、10％乙二硫醇、5％硫代茴香醚和5％水的混合物處理使其從永久保護(hù)基上釋放。最終通過制備型反相HPLC純化分離底物。該純化步驟得到12.2mgRP-HPLC單峰的純藍(lán)色物質(zhì)(凍干物)。通過MALDI質(zhì)譜證實(shí)同一性[2720.0]。
酶Upstate Lck(p56lck，活性)、Upstate Src(p60c-src，部分純化)購自UBI，Upstate Biotech，Inc.。
時(shí)間分辨熒光試驗(yàn)讀出器Perkin Elmer，Wallac Viktor 1420-040多標(biāo)記計(jì)數(shù)器；液相操作系統(tǒng)Beckman Coulter，Biomek 2000。
ATP、TweenTM20、4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)購自RocheMolecular Biochemicals；MgCl2和MnCl2購自Merck Eurolab；三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽(TCEP)購自Pierce，384 Well低體積熒光板購自Falcon。
分析描述首先將所述酶在15℃下的含有相應(yīng)量本發(fā)明抑制劑的水溶液中預(yù)保溫15分鐘。然后通過加入含有ATP、肽和PT66的反應(yīng)混合物且隨后進(jìn)行振搖，啟動磷酸化反應(yīng)。立即使用時(shí)間分辨熒光光譜在合適的孔平板讀出器上監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行情況。
可以通過使用非線性曲線擬合(XLfit軟件(ID Business Solution Ltd.，Guilford，Surrey，UK))由反應(yīng)速率得到IC50值。
腫瘤抑制作用的體內(nèi)試驗(yàn)為了產(chǎn)生原發(fā)瘤，用1ml注射器和26G針頭將HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞(2.5×106，體積為100μl)皮下注射到雌性SCID小鼠(SCID米色(SevereCombined Immunodeficient/米色小鼠，購自Charles River，Sulzfeld，德國)的左肋中。HT-29細(xì)胞最初獲自NCI，并保藏在運(yùn)行的細(xì)胞庫中。在實(shí)驗(yàn)前將細(xì)胞解凍并體外培養(yǎng)擴(kuò)大。在第9天將小鼠分到治療組。分組(每組12只小鼠)時(shí)，將小鼠隨機(jī)分組，使每組的平均原發(fā)瘤體積約為120mm3。將測試化合物以在7.5％明膠、0.22％NaCl中的懸浮液形式每天口服給藥一次，基于實(shí)際體重，給藥體積為10ml/kg。治療開始于第10天并一直進(jìn)行到第30天，即研究的最后一天。在腫瘤細(xì)胞植入后第7天開始，每周測量兩次皮下原發(fā)瘤，用電子測徑器測量兩個(gè)方向(長度和寬度)。原發(fā)瘤體積用公式V[mm3]＝(長度[mm]×寬度[mm]×寬度[mm])/2計(jì)算。另外，所有動物的體重每周至少記錄兩次。最后，在研究結(jié)束時(shí)，取出腫瘤并稱重。
提供下面的實(shí)施例、參考文獻(xiàn)以幫助理解本發(fā)明，其真正的范圍列出在后附權(quán)利要求中。應(yīng)當(dāng)理解的是，在沒有離開本發(fā)明的精神的情況下，可以在所列出的程序中進(jìn)行修飾。
實(shí)施例原料a)3-(2-甲基苯基)-2-氧代丙酸將在150ml 5M HCl水溶液中的11g 2-乙酰氨基-3-(2-甲基-苯基)-丙烯酸回流2.5小時(shí)。在加入400ml的冰水后，將得到的懸浮液用二氯甲烷萃取數(shù)次。將有機(jī)相用濃碳酸鈉溶液洗滌三次，將水相用HCl酸化至pH1，并且再用二氯甲烷萃取。蒸發(fā)溶劑，并且剩余物通過在室溫放置過夜而結(jié)晶。將其溶解于二氯甲烷中，過濾，并且再于60℃蒸發(fā)。將溫的剩余物用乙腈處理，并且冷卻，得到白色沉淀物。從二氯甲烷/己烷/乙腈(6∶2∶2)中重結(jié)晶，得到4.2g的標(biāo)題化合物。
b)2-甲硫基-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸將1.05g 來自實(shí)施例a)的產(chǎn)物溶解于11ml無水二甲基甲酰胺(DMF)中，并且冷卻至0℃。滴加2.00g 1，8-氮雜-7-雙環(huán)[5.4.0]十一碳烯(DBU)，并且在5分鐘后，加入1.00g 4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛。將混合物加熱至85℃ 6小時(shí)。加入另一份0.2g的酮酸a)，并且繼續(xù)攪拌12小時(shí)。將混合物冷卻，真空下去除DMF，并且將剩余物溶解于150ml水中。在用HCl酸化至pH2后，粗產(chǎn)物沉淀，并且通過過濾分離。將濾液用二氯甲烷萃取，蒸發(fā)溶劑，并且將剩余物與粗產(chǎn)物合并。從二氯甲烷/乙醚中重結(jié)晶，得到1.5g的標(biāo)題產(chǎn)物。
c)2-甲硫基-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺于室溫，將0.50g來自實(shí)施例b)的中間體溶解于2ml無水二甲基甲酰胺(DMF)中，并且用0.221g羰基二咪唑處理。在1小時(shí)后，將0.159gN-(2-氨基-乙基)-甲磺酰胺加入至混合物中，并且繼續(xù)攪拌2小時(shí)。加入200ml鹽水，通過過濾分離出第一批粗產(chǎn)物。將濾液用二氯甲烷萃取，蒸發(fā)有機(jī)相，并且將剩余物與粗產(chǎn)物合并，使用乙酸乙酯/己烷的硅膠色譜得到120mg的標(biāo)題化合物。
d)(R)-2-{[(2-甲硫基-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羰基)-氨基]-甲基}-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯類似于實(shí)施例c)，使用0.258g的(R)-2-氨基甲基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(購自AstaTech)
收率208mge)2-甲基-4-(2-三氟甲基-亞芐基)-4H-噁唑-5-酮于80℃，將20g鄰-三氟甲基苯甲醛、60g N-乙?；拾彼岷?2g乙酸鈉在68.2g乙酸酐中攪拌22小時(shí)。將混合物傾倒入100ml冰水中，將沉淀物濾出，并且用水洗滌。得到35g的濕粗產(chǎn)物，在在沒有進(jìn)一步純化下用于下一步驟。
f)2-乙酰氨基-3-(2-三氟甲基-苯基)-丙烯酸將實(shí)施例e)的產(chǎn)物在2M氫氧化鈉水溶液中，于60℃攪拌1小時(shí)。在冷卻至室溫后，加入2.5g的活性炭，并且將混合物攪拌20分鐘，然后過濾。通過加入濃HCl，將濾液酸化至pH1-2。將得到沉淀物通過過濾分離，用水洗滌，并且真空下干燥，得到24.8g的標(biāo)題產(chǎn)物。
g)2-氧代-3-(2-三氟甲基苯基)-丙酸將24g來自實(shí)施例f)的產(chǎn)物懸浮于175ml 5M HCl，并且于100℃攪拌5小時(shí)。在冷卻至室溫后，通過過濾分離出沉淀的產(chǎn)物(2.05g)。從濾液中，分離出油狀相，其通過放置而固化，得到另外15.8g的標(biāo)題產(chǎn)物。
h)2-甲硫基-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸將0-5℃、在20ml無水二甲基甲酰胺(DMF)中的3.2g來自實(shí)施例g)的產(chǎn)物用4.28g 1，8-二氮雜-7-雙環(huán)[5.4.0]十一碳烯(DBU)處理5分鐘。加入2.05g 4-氨基-2-甲硫基嘧啶-5-甲醛，并且將混合物加熱至70-80℃ 6小時(shí)。于室溫繼續(xù)攪拌另外16小時(shí)，然后真空蒸發(fā)DMF。將剩余物放入70ml濃碳酸鈉溶液和40ml乙酸乙酯中。去除有機(jī)相，并且將碳酸鹽相用乙酸乙酯洗滌。通過加入濃HCl，將pH調(diào)節(jié)至1-2，并且將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。蒸發(fā)溶劑，得到1.1g的固體殘余物，其通過在少量乙酸乙酯中沸騰并且過濾而進(jìn)一步純化。
得到1.02g的標(biāo)題產(chǎn)物。
i)2-甲硫基-6-(2-三氟甲基苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺將在8ml無水二甲基甲酰胺(DMF)中的0.5g來自實(shí)施例h)的中間體用0.275g羰基二咪唑于室溫處理1小時(shí)。向混合物中加入在2ml DMF中的0.283g N-(2-氨基-乙基)-甲磺酰胺，并且繼續(xù)攪拌1小時(shí)。在真空中除去溶劑，并且剩余物由硅膠色譜和乙酸乙酯/己烷洗脫劑純化。
得到0.495g的標(biāo)題產(chǎn)物。
最終產(chǎn)物實(shí)施例1(R)-2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺于0-5℃，將在0.5ml二氯甲烷中的70mg來自實(shí)施例d)中的中間體用在二氯甲烷中的1.1當(dāng)量間-氯過苯甲酸(mCPBA)的干燥(硫酸鈉)溶液滴加處理。氧化由HPLC監(jiān)測，并且在30分鐘后，加入另一份0.1當(dāng)量的mCPBA。氧化完成后，通過加入幾滴二甲基硫烷而猝滅過量的過酸，并且于室溫?cái)嚢?0分鐘。將在0.5ml二氯甲烷中的25mg(1.1當(dāng)量)的3-乙酰氨基-苯胺加入到混合物中，并且于室溫繼續(xù)攪拌16小時(shí)。
使用來自二氯甲烷至二氯甲烷/甲醇830∶1)的梯度，由硅膠色譜得到Boc-保護(hù)的標(biāo)題化合物。通過于室溫在1ml二氯甲烷和1ml 1M HCl在乙醚中的混合物中攪拌3小時(shí)，實(shí)現(xiàn)保護(hù)基團(tuán)的裂開。將混合物用15ml二氯甲烷稀釋，用濃碳酸氫鈉溶液洗滌，并且蒸發(fā)。通過從乙酸乙酯/乙醚中結(jié)晶而進(jìn)一步純化粗標(biāo)題產(chǎn)物。
收率26mg1H-NMR(400MHz，CDCl3)9,22(br s，1H)；9,03(s，1H)；8,57(brs，1H)；8,17(br s，1H)；8,00(br s，1H)；7,86(s，1H)；7,73(d，1H)；7,29-7,10(m，4H)；7,05(br s，1H)；6,85(d，1H)；3,60-3,45(m，1H)；3,30-3,13(m，1H)；3,10-2,95(m，1H)；2,94-2,82(m，1H)；2,82-2,72(m，1H)；2,06(s，3H)；2,00(s，3H)；1,87-1,52(m，3H)；1,35-1,20(m，1H)。
實(shí)施例22-(4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺將45mg mCPBA在3ml二氯甲烷中的干燥(硫酸鈉)溶液于室溫滴加到在2ml二氯甲烷中的80mg中間體i)中。在30分鐘后，加入65.6mg的4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基胺(如WO04/41823中所述制備)，并且繼續(xù)攪拌16小時(shí)。將混合物用10％乙酸水溶液洗滌，并且將有機(jī)相干燥，蒸發(fā)，并且在硅膠/乙酸乙酯上進(jìn)行色譜分離。將得到的粗產(chǎn)物從乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶，得到75mg的標(biāo)題產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)10,52(s，1H)；9,49(s，1H)；8,89(brt，1H)；8,35(s，1H)；8,28(br s，2H)；7,81(d，1H)；7,70(t，1H)；7,62(t，1H)；7,43(d，1H)；7,17(d，1H)；7,08(br t，1H)；4,77(br s，2H)；3,87(brs，2H)；3,35-3,15(m，2H)；3,05-2,95(m，2H)；2,90(s，3H)；以關(guān)于實(shí)施例1或者實(shí)施例2的類似的程序，使用或者制備適宜的原料，制備下面的實(shí)施例。

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權(quán)利要求
1.一種下式I的化合物 其中R1為-CH3或者-CF3；R2為-C(O)-NH-烷基或者-C(O)-N(烷基)2，所有的烷基任選被以下基團(tuán)取代-OH；-NH(烷基)；-N(烷基)2；-雜環(huán)基；或者-NH-S(O)2-烷基；R3為雜環(huán)基；-NH-C(O)-烷基；-NH-S(O)2-烷基；以及R4為氫；或者備選地R3和R4相鄰并且與它們連接的苯環(huán)一起形成4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基部分；及其所有藥用鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為-CH3。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲基氨基-乙基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲基氨基-乙基)-酰胺；2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲基氨基-乙基)-酰胺；2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；以及2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-鄰甲苯基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1為-CF3。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(吡咯烷-2-基甲基)-酰胺；2-(4-嗎啉-4-基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；2-(3-乙酰氨基-苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺；2-(3-甲磺?；被?苯基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺?；被?乙基)-酰胺；以及2-(4，4-二氧代-3，4-二氫-2H-4λ*6*-苯并[1，4]氧硫雜環(huán)己二烯-6-基氨基)-6-(2-三氟甲基-苯基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-羧酸(2-甲磺酰基氨基-乙基)-酰胺。
6.一種制備根據(jù)式I的化合物的方法，其中a)將式III)化合物中的羧基 其中R1具有如上對于權(quán)利要求1中的式(I)所給出的含義，轉(zhuǎn)化為式(IV)的酰胺衍生物 其中R1和R2具有如上對于權(quán)利要求1中的式(I)所給出的含義；b)將式(IV)化合物中的硫烷基轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的亞砜基，所述的亞砜基c)被相應(yīng)的式(VI)的苯胺所取代 其中R3和R4具有如上對于權(quán)利要求1中的式(I)所給出的含義，得到通式(I)的化合物；d)如果需要，將從(c)得到的通式(I)的化合物轉(zhuǎn)化為藥用鹽。
7.一種藥劑，其含有與藥用輔劑一起的根據(jù)權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的一種或多種化合物作為活性成分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的藥劑，其用于治療癌癥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的一種或多種化合物在制備用于治療癌癥的藥劑中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)的一種或多種式I的化合物用于治療癌癥的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于通式(I)的化合物、它們的藥用鹽、對映異構(gòu)體形式、非對映異構(gòu)體和外消旋物，上述化合物的制備、含有它們的藥劑及它們的制備，以及上述化合物在控制或預(yù)防疾病如癌癥中的應(yīng)用。
文檔編號A61P11/06GK101014600SQ200580029903
公開日2007年8月8日 申請日期2005年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月21日
發(fā)明者K·霍諾爾德, W·舍費(fèi)爾, S·沙伊布勒赫 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司