專利名稱：大環(huán)β－分泌酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及取代的大環(huán)BACE-1抑制劑、包含所述化合物的藥用組合物，及其在治療阿爾茨海默氏病中的用途。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默氏病(AD)為最終致命的漸進(jìn)性神經(jīng)退化性疾病。疾病進(jìn)展與涉及記憶、推理、定位及判斷的認(rèn)知功能的逐漸喪失相關(guān)。包括精神錯亂、抑郁及攻擊行為的行為變化也表明疾病進(jìn)展。相信認(rèn)知及行為功能障礙由腦內(nèi)的海馬及大腦皮層中神經(jīng)元功能改變及神經(jīng)元損傷引起。目前可用的AD治療為治標(biāo)的，且盡管所述治療可改善認(rèn)知及行為障礙，但其不能阻止疾病進(jìn)展。因此，對可停止疾病進(jìn)展的AD治療的醫(yī)藥需求仍未得到滿足。
AD的病理特征為包含異常磷酸化τ蛋白質(zhì)的細(xì)胞外β-淀粉狀蛋白(Aβ)斑塊及細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的沉積?；加蠥D的個體在已知對記憶及認(rèn)知十分重要的腦部呈現(xiàn)出典型的Aβ沉積。相信Aβ為神經(jīng)元細(xì)胞損傷及功能障礙的基本病因，其與認(rèn)知及行為衰退相關(guān)。淀粉狀蛋白斑塊主要由包含40-42個氨基酸殘基的Aβ肽組成，所述Aβ肽由淀粉狀前體蛋白質(zhì)(APP)的處理得到。通過多樣不同的蛋白酶活性來處理APP。通過β-分泌酶在對應(yīng)于Aβ的N端位置及通過γ-分泌酶活性在C端裂解APP產(chǎn)生Aβ肽。也通過α-分泌酶活性裂解APP，導(dǎo)致稱為可溶性APP的分泌性非淀粉狀片段。
稱為BACE-1的天冬氨酰蛋白酶已確定為導(dǎo)致APP在對應(yīng)于Aβ肽N端位置上裂解的β-分泌酶活性。
積累的生物化學(xué)及遺傳證據(jù)證明了Aβ在AD病因?qū)W中的主要作用。例如，在活體外，且當(dāng)注射入嚙齒動物腦內(nèi)時，Aβ顯示對神經(jīng)元細(xì)胞有毒。此外已知初期發(fā)作AD的遺傳形式，其中存在明確的APP或早老蛋白突變。這些突變增強(qiáng)Aβ的產(chǎn)生并認(rèn)為是引起AD的成因。
由于Aβ肽因β-分泌酶活性而形成，因而抑制BACE-1應(yīng)抑制Aβ肽的形成。因此抑制BACE-1為治療AD及其它由Aβ斑塊沉積引起的認(rèn)知及神經(jīng)退化性疾病的治療方法。
WO 04/04396、WO 02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WO02/02518及WO 02/02520中公開取代的胺BACE-1抑制劑。WO89/03842中公開包含(1-氨基-2-羥基-2-雜環(huán))乙基部分的腎素抑制劑。WO 02/088101中公開功能上描述為包含4個疏水部分的BACE抑制劑和優(yōu)選包含雜環(huán)或雜芳基部分的系列化合物。
WO 02/100856及WO 02/100399中公開用于治療阿爾茨海默氏病的大環(huán)化合物及制備大環(huán)化合物的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及具有結(jié)構(gòu)式I的化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1為
或 R2為-N(R5)C(O)R4-或亞雜環(huán)基環(huán)；R3為亞芳基、亞雜芳基、亞雜環(huán)基或亞環(huán)烷基；R4為亞芳基、亞雜芳基、亞雜環(huán)基或亞環(huán)烷基；R5為氫、烷基、芳基、雜芳基或環(huán)烷基；R6及R7獨立選自氫、-OH、烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、芳烷氧基、雜芳烷氧基和烷氧基，前提是當(dāng)R6及R7為-OH、芳烷氧基、雜芳烷氧基和烷氧基時，R6和R7不與相鄰于環(huán)氮的環(huán)碳連接；R8為氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、-C(O)R9、-C(O)OR12、-S(O)R9、-S(O2)R9或-CN；前提是當(dāng)Y為＝O時，R8不能為-C(O)R9、-C(O)OR12、-S(O)R9、-S(O2)R9或-CN；R9為氫、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、烯基、炔基或-N(R10)(R11)；R10和R11獨立選自氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基烷基、烯基和炔基；或R10和R11與它們所連接的氮-起形成3-7元雜環(huán)基環(huán)；R12為烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、烯基或炔基；X為O、S、C(R5)或NH；Y為＝O或(H，H)；m為1、2或3；n為0、1、2或3；且
o為0、1、2或3；其中各烷基任選被1至3個選自鹵代、芳基、環(huán)烷基、氰基、羥基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(環(huán)烷基)、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基的部分取代；且其中各亞芳基、亞雜芳基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、亞雜環(huán)基、亞環(huán)烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜芳烷基、芳烷氧基或雜芳烷氧基任選被1至4個選自-CF3、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、烷基芳基、雜芳烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、烷基雜芳基、羥基、羥烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、?；⒎减；Ⅺu代、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、烷基磺酰基、芳基磺?；?、雜芳基磺酰基、烷硫基、芳硫基、雜芳基硫基、芳烷硫基、雜芳烷硫基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-及-SO2NY1Y2的部分取代，其中Y1和Y2可相同或不同，且獨立選自氫、烷基、芳基、環(huán)烷基和芳烷基，前提是亞環(huán)烷基和亞雜環(huán)基可由＝O取代。
式I表示的化合物為用于預(yù)防和治療阿爾茨海默氏病的β-分泌酶抑制劑。
在另一方面，本發(fā)明涉及一種藥用組合物，其包含至少一種式I的化合物及藥學(xué)上可接受的載體。
在另一方面，本發(fā)明包括抑制BACE-1的方法，該方法包括給予需要此種治療的患者至少一種式I的化合物。本發(fā)明也要求抑制β-淀粉狀蛋白斑塊于神經(jīng)組織(例如腦)中，于神經(jīng)組織上或于神經(jīng)組織周圍形成或形成并沉積的方法，該方法包括給予需要此種治療的患者至少一種式I的化合物。
更具體地說，本發(fā)明包括治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予需要此種治療的患者至少一種式I的化合物。本發(fā)明還包括治療阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括給予需要此種治療的患者至少一種式I的化合物。
在另一方面，本發(fā)明包括治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予需要此種治療的患者至少一種式I的化合物與至少一種選自不同于式I化合物的β-分泌酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、γ-分泌酶抑制劑、非類固醇抗炎藥、N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑、膽堿脂酶抑制劑和抗淀粉狀蛋白抗體的化合物的組合。
在最后一方面，本發(fā)明涉及一種藥劑盒，它包含分開的容器，各容器包含用于組合使用的單獨包裝的藥用組合物，其中一容器包含于藥學(xué)上可接受的載體中的至少一種式I的化合物，而第二個容器包含于藥學(xué)上可接受的載體中的至少一種不同于式I化合物的β-分泌酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、γ-分泌酶抑制劑、非類固醇抗炎藥、N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑、膽堿脂酶抑制劑和/或抗淀粉狀蛋白抗體，組合的量為治療認(rèn)知疾病或神經(jīng)退化性疾病諸如阿爾茨海默氏病的有效量。
發(fā)明詳述參考上述式I，本發(fā)明的優(yōu)選化合物為具有以下立體化學(xué)的那些化合物 在式I的優(yōu)選化合物中，R1為
R2優(yōu)選為-N(R5)C(O)R4-，其中R4優(yōu)選為亞芳基，且R5優(yōu)選為烷基。更優(yōu)選R4為亞苯基且R5為丙基。在一優(yōu)選實施方案中，R4為 或者，R2為亞雜環(huán)基，R2更優(yōu)選為具有以下結(jié)構(gòu)的由＝O取代的亞雜環(huán)基 R3優(yōu)選為亞芳基，R3更優(yōu)選為亞苯基或鹵代取代的亞苯基。R3甚至更優(yōu)選為 優(yōu)選地，m為2且n為1。
R7優(yōu)選為氫。
R8優(yōu)選為芳烷基或-S(O2)R9，或R8更優(yōu)選為 或 優(yōu)選地，X為O且Y為O。
在式I化合物的優(yōu)選實施方案中，R1為 R2為-N(R5)C(O)R4-或亞雜環(huán)基；R3為亞芳基；R4為亞芳基或亞雜環(huán)基；R5為烷基；R7為氫；R8為芳烷基或-S(O2)R9；m為2；n為1；X為O；且Y為O。
在上述優(yōu)選實施方案中，R3優(yōu)選為亞苯基或鹵代取代的亞苯基。特別是，R3為 或 在上述優(yōu)選實施方案中，R4優(yōu)選為亞芳基，特別是，R4為 或者R2為亞雜環(huán)基，R2更優(yōu)選為具有以下結(jié)構(gòu)的由＝O取代的亞雜環(huán)基
在上述優(yōu)選實施方案中，R8為 或 除非另有說明，否則下列定義應(yīng)用于本說明書及權(quán)利要求書全文中。應(yīng)用這些定義可無需考慮術(shù)語是單獨使用或與其它術(shù)語組合使用。因此，″烷基″的定義可應(yīng)用于″烷基″以及應(yīng)用于″烷氧基″、″環(huán)烷基″等的″烷基″部分。
除非另有說明，否則上述及整個說明書所用的下列術(shù)語應(yīng)理解為具有下列含義″患者″包括人及動物。
″哺乳動物″意謂人及其它哺乳動物。
″烷基″意指脂族烴基，其為直鏈或支鏈且碳鏈中包含約1至約20個碳原子。烷基碳鏈中優(yōu)選包含約1至約12個碳原子。烷基碳鏈中更優(yōu)選包含約1至約6個碳原子。支鏈意指一或多個諸如甲基、乙基或丙基的低級烷基與線性烷基鏈連接?！宓图壨榛逡庵柑兼溨芯哂屑s1至約6個碳原子的烷基，其可為直鏈或支鏈。
″亞烷基″意指自上述定義的烷基除去一氫原子所得的雙官能基。亞烷基的非限制性實例包括亞甲基和亞乙基。
″烯基″意指包含至少一個碳-碳雙鍵的脂族烴基，其可為直鏈或支鏈，且碳鏈中包含約2至約15個碳原子。優(yōu)選的烯基的碳鏈中含有約2至約12個碳原子；且碳鏈中更優(yōu)選含有約2至約6個碳原子。支鏈意指一或多個諸如甲基、乙基或丙基的低級烷基與線性烯基鏈連接?！宓图壪┗逡庵柑兼溨泻屑s2至約6個碳原子，且可為直鏈或支鏈。術(shù)語 ″取代的烯基″意指該烯基可被一或多個相同或不同的取代基取代，各取代基獨立選自鹵代、烷基、芳基、環(huán)烷基、氰基、烷氧基和-S(烷基)。適合的烯基的非限制性實例包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、辛烯基和癸烯基。
″炔基″意指包含至少一個碳-碳三鍵的脂族烴基，其可為直鏈或支鏈，且碳鏈中包含約2至約15個碳原子。優(yōu)選的炔基的碳鏈中含有約2至約12個碳原子；且碳鏈中更優(yōu)選含有約2至約4個碳原子。支鏈意指一或多個諸如甲基、乙基或丙基的低級烷基與線性炔基鏈連接?！宓图壢不逡庵柑兼溨泻屑s2至約6個碳原子，且可為直鏈或支鏈。適合的炔基的非限制性實例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。術(shù)語″取代的炔基″意指該炔基可被一或多個相同或不同的取代基取代，各取代基獨立選自烷基、芳基和環(huán)烷基。
″芳基″意指包含約6至約14個碳原子，優(yōu)選約6至約10個碳原子的芳族單環(huán)或多環(huán)系統(tǒng)。芳基可任選被一或多個如上所定義的相同或不同″環(huán)系取代基″取代。適合的芳基的非限制性實例包括苯基和萘基。
″亞芳基″意指自如上定義的芳基除去一氫原子所得的雙官能基。亞芳基的非限制性實例包括亞苯基和亞萘基。
″雜芳基″意指包含約5至約14個環(huán)原子，優(yōu)選約5至約10個環(huán)原子的芳族單環(huán)或多環(huán)系統(tǒng)，其中一或多個環(huán)原子為單獨或組合的除碳元素以外的元素，如氮、氧或硫。優(yōu)選的雜芳基包含約5至約6個環(huán)原子?！咫s芳基″可任選被一或多個如本文所述的相同或不同″環(huán)系取代基″取代。雜芳基詞根名前的前綴氮雜、氧雜或硫雜意指分別存在至少一個氮、氧或硫原子作為環(huán)原子。雜芳基的氮原子可任選氧化為相應(yīng)N-氧化物。適合的雜芳基的非限制性實例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代吡啶酮)、異唑基、異噻唑基、唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、噠嗪基、喹喔啉基、酞嗪基、羥吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮雜吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、異喹啉基、苯并氮雜吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。術(shù)語″雜芳基″也指部分飽和雜芳基部分，諸如四氫異喹啉基、四氫喹啉基等。
″亞雜芳基″意指自上述定義的雜芳基除去一氫原子所得的雙官能基。亞雜芳基的非限制性實例包括亞吡啶基、亞吡嗪基、亞呋喃基、亞噻吩基和亞嘧啶基。
″芳烷基″或″芳基烷基″意指芳基-烷基-，其中芳基和烷基如前所述。優(yōu)選的芳烷基包含低級烷基。適合的芳烷基的非限制性實例包括芐基、2-苯乙基和萘基甲基。通過烷基鍵結(jié)至母體部分。
″烷芳基″意指烷基-芳基-，其中烷基和芳基如前所述。優(yōu)選的烷芳基包含低級烷基。適合的烷芳基的非限制性實例為甲苯基。通過芳基鍵結(jié)至母體部分。
″環(huán)烷基″意指包含約3至約10個碳原子，優(yōu)選約5至約10個碳原子的非芳族單環(huán)或多環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選的環(huán)烷基環(huán)包含約5至約7個環(huán)原子。環(huán)烷基可任選被一或多個如上定義的相同或不同″環(huán)系取代基″取代。適合的單環(huán)環(huán)烷基的非限制性實例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等。適合的多環(huán)環(huán)烷基的非限制性實例包括1-十氫萘基、降冰片基、金剛烷基等，及諸如茚滿基、四氫萘基等的部分飽和物質(zhì)。
″亞環(huán)烷基″意指自上述定義的環(huán)烷基除去一氫原子所得的雙官能基。亞環(huán)烷基的非限制性實例包括亞環(huán)丁基和亞環(huán)丙基。
″鹵代″意指氟代、氯代、溴代或碘代。優(yōu)選為氟代、氯代和溴代。
″環(huán)系取代基″意指連接至芳族或非芳族環(huán)系統(tǒng)的取代基，例如其取代環(huán)系統(tǒng)上的一個可利用的氫。環(huán)系取代基可相同或不同，各環(huán)系取代基獨立選自-CF3、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、烷芳基、雜芳烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、烷基雜芳基、羥基、羥烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳?；?、鹵代、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、烷基磺?；⒎蓟酋；?、雜芳基磺酰基、烷硫基、芳硫基、雜芳基硫基、芳烷硫基、雜芳烷硫基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、＝O、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-和-SO2NY1Y2，其中Y1和Y2可相同或不同，且獨立選自氫、烷基、芳基、環(huán)烷基和芳烷基。″環(huán)系取代基″也可意指同時取代環(huán)系統(tǒng)上兩相鄰碳原子上的兩個可利用的氫(各碳上的一個氫)的單獨部分。這樣的部分的實例為形成諸如下列部分的亞甲二氧基、亞乙二氧基、-C(CH3)2-等 和 ″雜環(huán)基″意指包含約3至約10個環(huán)原子，優(yōu)選約4至約7個環(huán)原子的非芳族飽和單環(huán)或多環(huán)系統(tǒng)，其中環(huán)系統(tǒng)中一或多個原子為單獨或組合的除碳元素以外的元素，例如氮、氧或硫。環(huán)系統(tǒng)中不存在相鄰的氧和/或硫原子。優(yōu)選的雜環(huán)基包含約5至約6個環(huán)原子。雜環(huán)基詞根名前的前綴氮雜、氧雜或硫雜意指分別存在至少一個氮、氧或硫原子作為環(huán)原子。雜環(huán)基中任一-NH可經(jīng)保護(hù)作為如-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)基團(tuán)等存在；也認(rèn)為這樣的保護(hù)為本發(fā)明的部分。雜環(huán)基可任選被一或多個如本文所述的相同或不同″環(huán)系取代基″取代。雜環(huán)基的氮或硫原子可任選氧化成相應(yīng)N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。適合的單環(huán)雜環(huán)基的非限制性實例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、噻唑烷基、1，4-二氧雜環(huán)己烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、內(nèi)酰胺、內(nèi)酯等。
″亞雜環(huán)基″意指自上述定義的雜環(huán)基除去一氫原子所得的雙官能基。亞雜環(huán)基的非限制性實例包括亞哌啶基、亞吡咯烷基、亞哌嗪基、亞嗎啉基、亞硫嗎啉基、亞噻唑烷基、1，4-亞二氧雜環(huán)己烷基、亞四氫呋喃基和亞四氫噻吩基。
應(yīng)注意在本發(fā)明的含雜原子環(huán)系統(tǒng)中，碳原子上無羥基與N、O或S相鄰，碳原子上也無N或S基團(tuán)與另一雜原子相鄰。因此，舉例而言，在如下所示的環(huán)中沒有-OH直接與標(biāo)號為2和5的碳連接 也應(yīng)注意諸如如下所示部分的互變異構(gòu)形式在本發(fā)明的某些實施方案中是等價的 和 ″炔基烷基″意指炔基-烷基-，其中炔基和烷基如前所述。優(yōu)選的炔基烷基包含低級炔基和低級烷基。通過烷基鍵結(jié)至母體部分。適合的炔基烷基的非限制性實例包括炔丙基甲基。
″雜芳烷基″意指雜芳基-烷基-，其中雜芳基和烷基如前所述。優(yōu)選的雜芳烷基包含低級烷基。適合的雜芳烷基的非限制性實例包括吡啶基甲基和喹啉-3-基甲基。通過烷基鍵結(jié)至母體部分。
″雜芳烷硫基″意指雜芳烷基-S-，其中雜芳烷基如前所述。優(yōu)選的雜芳烷硫基包含低級烷基。通過硫鍵結(jié)至母體部分。
″雜芳基烯基″意指雜芳基-烯基，其中雜芳基和烯基如前所述。優(yōu)選的雜芳基烯基包含低級烯基。通過烯基鍵結(jié)至母體部分。
″雜芳基炔基″意指雜芳基-炔基，其中雜芳基和炔基如前所述。優(yōu)選的雜芳基炔基包含低級炔基。通過炔基鍵結(jié)至母體部分。
″羥烷基″意指HO-烷基-基團(tuán)，其中烷基如前所述。優(yōu)選的羥烷基包含低級烷基。適合的羥烷基的非限制性實例包括羥甲基和2-羥乙基。
″?；逡庵窰-C(O)-、烷基-C(O)-或環(huán)烷基-C(O)-，其中各基團(tuán)如前所述。通過羰基鍵結(jié)至母體部分。優(yōu)選的?；图壨榛?。適合的?；姆窍拗菩詫嵗柞；?、乙酰基和丙?；?。
″芳?；逡庵阜蓟?C(O)-基團(tuán)，其中芳基如前所述。通過羰基鍵結(jié)至母體部分。適合的基團(tuán)的非限制性實例包括苯甲?；?-萘?；?。
″烷氧基″意指烷基-O-基團(tuán)，其中烷基如前所述。適合的烷氧基的非限制性實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基和正丁氧基。通過醚氧鍵結(jié)至母體部分。
″烷氧基烷基″意指烷氧基-烷基-，其中烷氧基和烷基如前所述。適合的烷氧基烷基的非限制性實例包括乙氧基乙基、甲氧基甲基和乙氧基甲基。通過烷基鍵結(jié)至母體部分。
″芳氧基″意指芳基-O-基團(tuán)，其中芳基如前所述。適合的芳氧基的非限制性實例包括苯氧基和萘氧基。通過醚氧鍵結(jié)至母體部分。
″芳烷氧基″意指芳烷基-O-，其中芳烷基如前所述。適合的芳烷氧基的非限制性實例包括芐氧基和1-或2-萘甲氧基。通過醚氧鍵結(jié)至母體部分。
″烷基雜芳基″意指烷基-雜芳基-，其中烷基和雜芳基如前所述。通過雜芳基鍵結(jié)至母體部分。
″烷硫基″意指烷基-S-，其中烷基如前所述。適合的烷硫基的非限制性實例包括甲硫基和乙硫基。通過硫鍵結(jié)至母體部分。
″芳硫基″意指芳基-S-基團(tuán)，其中芳基如前所述。適合的芳硫基的非限制性實例包括苯硫基和萘硫基。通過硫鍵結(jié)至母體部分。
″芳烷硫基″意指芳烷基-S-基團(tuán)，其中芳烷基如前所述。適合的芳烷硫基的非限制性實例為芐硫基。通過硫鍵結(jié)至母體部分。
″烷氧羰基″意指烷基-O-C(O)-基團(tuán)，其中烷基如前所述。適合的烷氧羰基的非限制性實例包括甲氧羰基和乙氧羰基。通過羰基鍵結(jié)至母體部分。
″芳氧羰基″意指芳基-O-C(O)-基團(tuán)，其中芳基如前所述。適合的芳氧羰基的非限制性實例包括苯氧羰基和萘氧羰基。通過羰基鍵結(jié)至母體部分。
″芳烷氧羰基″意指芳烷基-O-C(O)-基團(tuán)，其中芳烷基如前所述。適合的芳烷氧羰基的非限制性實例包括芐氧羰基。通過羰基鍵結(jié)至母體部分。
″烷基磺?；逡庵竿榛?S(O2)-基團(tuán)，其中烷基如前所述。優(yōu)選基團(tuán)為其中烷基為低級烷基。通過磺酰基鍵結(jié)至母體部分。
″芳基磺?；逡庵阜蓟?S(O2)-基團(tuán)，其中芳基如前所述。通過磺?；I結(jié)至母體部分。
″環(huán)烷基烷基″意指環(huán)烷基-烷基-，其中環(huán)烷基和烷基如前所述。優(yōu)選基團(tuán)為其中烷基為低級烷基。通過烷基鍵結(jié)至母體部分。
″雜芳烷氧基″意指雜芳烷基-O-基團(tuán)，其中雜芳烷基如前所述。通過醚氧鍵結(jié)至母體部分。
″雜芳基磺酰基″意指雜芳基-S(O2)-基團(tuán)，其中雜芳基如前所述。通過磺?；I結(jié)至母體部分。
″雜芳基硫基″意指雜芳基-S-基團(tuán)，其中雜芳基如前所述。通過硫鍵結(jié)至母體部分。
″雜環(huán)基烷基″意指雜環(huán)基-烷基-，其中雜環(huán)基和烷基如前所述。通過烷基鍵結(jié)至母體部分。
術(shù)語″取代的″意指指定原子上的一或多個氫由指定一組基團(tuán)中選出的基團(tuán)取代，前提是在現(xiàn)有狀況下未超出指定原子的正常原子價且該取代將導(dǎo)致穩(wěn)定化合物。僅當(dāng)取代基和/或變量的組合導(dǎo)致穩(wěn)定化合物時，這樣的組合才是允許的?！宸€(wěn)定化合物″或″穩(wěn)定結(jié)構(gòu)″意指可足夠穩(wěn)固地自反應(yīng)混合物分離至有用純度并調(diào)配入有效治療劑中的化合物。
術(shù)語″任選取代的″意指由指定基團(tuán)、殘基或部分任選取代。
關(guān)于化合物中部分(如取代基、基團(tuán)或環(huán))的數(shù)量，除非另有定義，否則″一或多個″及″至少一個″意指多至化學(xué)上可允許的部分的數(shù)量，且本領(lǐng)域技術(shù)人員可判定這樣的部分的最大數(shù)量。關(guān)于包含使用″至少一種式I的化合物″的組合物及方法，可同時給予一至三種式I的化合物，優(yōu)選為一種。
波浪線 作為鍵一般指可能異構(gòu)體的混合物或可能異構(gòu)體中的任一種，例如可能的異構(gòu)體包含(R)-及(S)-立體化學(xué)。舉例而言， 意指包含 和 環(huán)系統(tǒng)內(nèi)所畫的直線，例如 表明指示的直線(鍵)可與可取代的環(huán)碳原子中的任一個連接。
如本領(lǐng)域所熟知的，除非另有說明，否則自一具體原子畫出且其中在鍵末端未描繪出部分的鍵表明甲基經(jīng)該鍵鍵結(jié)至該原子。例如 表示 對一化合物而言，術(shù)語″分離″或″以分離的形式″意指自合成方法或天然來源或其組合分離后的該化合物物理狀態(tài)。對一化合物而言，術(shù)語″純化″或″以純化的形式″意指自純化方法或本文所述的方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法得到后可通過本文所述或本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的標(biāo)準(zhǔn)分析進(jìn)行特征鑒定的足夠純度的該化合物的物理狀態(tài)。
應(yīng)注意假定任一在本文的正文、流程、實施例及表格中具有未滿足價位的雜原子具有滿足其價位的氫原子。
當(dāng)稱化合物中的官能基為″保護(hù)的″時，此意指當(dāng)該化合物進(jìn)行反應(yīng)時，該基團(tuán)以修飾的形式防止在受保護(hù)處的不需要的副反應(yīng)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解適合的保護(hù)基團(tuán)，且可參考標(biāo)準(zhǔn)教程，例如T.W.Greene等人的Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，New York。
當(dāng)在任一組成或式I中出現(xiàn)一次以上的任何變量(例如芳基、雜環(huán)、R2等)時，每次出現(xiàn)的定義均與其它每次出現(xiàn)的定義無關(guān)。
本文所用的術(shù)語″組合物″用以包括一包含指定量的指定成份的產(chǎn)物，及由指定量的指定成份的組合直接或間接產(chǎn)生的任一產(chǎn)物。
本文也涵蓋本發(fā)明的化合物的前藥及溶劑合物。本文所用的術(shù)語″前藥″表示一化合物，其為在給予受治療者后，通過新陳代謝或化學(xué)過程經(jīng)化學(xué)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生式I的化合物或其鹽和/或其溶劑合物的藥物前體。T.Higuchi與V.Stella的Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)14 of the A.C.S.Symposium Series及Bioreversible Carriers in DrugDesign，(1987)Edward B.Roche編，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press中已討論了所述前藥，且此兩者通過引用結(jié)合到本文中。
″溶劑合物″意指本發(fā)明的化合物與一或多個溶劑分子物理性締合。該物理性締合涉及各種程度的離子鍵及共價鍵，包括氫鍵。在某些實例中，例如當(dāng)一或多個溶劑分子摻入結(jié)晶固體的晶格中時，溶劑合物可分離。″溶劑合物″包含溶液相及可分離溶劑合物。適合的溶劑合物的非限制性實施例包括乙醇化物、甲醇化物等?！逅衔铩鍨槿軇┓肿訛镠2O的溶劑合物。
式I的化合物可形成也處于本發(fā)明的范圍內(nèi)的鹽類。除非另有說明，否則本文中式I的化合物應(yīng)理解為包括其鹽。本文所用的術(shù)語″鹽″表示與無機(jī)和/或有機(jī)酸形成的酸性鹽，及與無機(jī)和/或有機(jī)堿形成的堿性鹽。此外，當(dāng)式I的化合物包含諸如(但不限于)吡啶或咪唑的堿性部分及諸如(但不限于)羧酸的酸性部分時，可形成兩性離子(″內(nèi)鹽″)且該兩性離子包含于本文所用的術(shù)語″鹽″中。盡管其它鹽也適用，但藥學(xué)上可接受(意即無毒、生理學(xué)上可接受)的鹽為優(yōu)選。例如，可通過將式I的化合物與一定量(諸如等當(dāng)量)的酸或堿于諸如其中鹽可沉淀的介質(zhì)或水性介質(zhì)中反應(yīng)，隨后冷凍干燥形成式I化合物的鹽。
例示性酸加成鹽類包括醋酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽等。此外，例如在P.Stahl等人Camille G.(編輯)的Handbook ofPharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)ZurichWiley-VCH；S.Berge等人的Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人的The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York及The Orange Book(Food & DrugAdministration，Washington，D.C.在其網(wǎng)站上)中已討論一般認(rèn)為可適合于自堿性藥用化合物形成藥學(xué)上可用的鹽的酸。這些公開通過引用結(jié)合到本文中。
例示性堿性鹽類包括銨鹽、諸如鈉、鋰及鉀鹽的堿金屬鹽、諸如鈣及鎂鹽的堿土金屬鹽、諸如二環(huán)己基胺類、叔丁基胺類的有機(jī)堿(例如有機(jī)胺類)的鹽及以諸如精氨酸、賴氨酸等的氨基酸形成的鹽。堿性含氮基團(tuán)可用諸如低級烷基鹵化物(如甲基、乙基和丁基的氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷酯(如硫酸二甲酯、二乙酯及二丁酯)、長鏈鹵化物(如癸基、月桂基和硬脂?；穆然?、溴化物及碘化物)、芳烷基鹵化物(如芐基和苯乙基的溴化物)及其它的試劑進(jìn)行季胺化。
所有此類酸性鹽及堿性鹽為本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)上可接受的鹽，且認(rèn)為所有酸性及堿性鹽相當(dāng)于本發(fā)明相應(yīng)化合物的游離形式。
式I的化合物及鹽，及其溶劑合物及前藥可以互變異構(gòu)形式(例如作為酰胺或亞氨基醚)存在。所有此類互變異構(gòu)形式作為本發(fā)明的部分涵蓋于本文中。
本發(fā)明化合物(包括所述化合物的鹽、溶劑合物及前藥以及所述前藥的鹽及溶劑合物)的所有立體異構(gòu)體(例如幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體等)，諸如那些因不同取代基上的不對稱碳而存在的立體異構(gòu)體，包括對映體形式(其甚至在無不對稱碳時也存在)、幾何異構(gòu)形式、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體及非對映形式，如位置異構(gòu)體(例如4-吡啶基和3-吡啶基)，皆涵蓋于本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，本發(fā)明化合物的各立體異構(gòu)體可大體上不含其它異構(gòu)體，或例如可作為外消旋體的混合物或與所有其它立體異構(gòu)體或其它經(jīng)選擇的立體異構(gòu)體的混合物存在。如IUPAC1974標(biāo)準(zhǔn)所定義，本發(fā)明的手性中心可具有S或R構(gòu)型。使用術(shù)語″鹽″、″溶劑合物″、″前藥″等意欲同等地應(yīng)用于本發(fā)明化合物的對映體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、位置異構(gòu)體、外消旋體或前藥的鹽、溶劑合物及前藥。
用式I表示的化合物為用于預(yù)防和治療阿爾茨海默氏病的β-分泌酶抑制劑。
本發(fā)明的一方面為通過給予哺乳動物治療有效量的至少一種式I化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物來治療患有由BACE-1(天冬氨酰蛋白酶)介導(dǎo)或加重的疾病或病癥的哺乳動物(如人)的方法。
″有效量″或″治療有效量″用以描述有效抑制BACE-1并因此對適合的患者產(chǎn)生所要的治療效果的本發(fā)明化合物或組合物的量。
優(yōu)選劑量為每天每kg體重約0.001至1000mg的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。尤其優(yōu)選的劑量為每天每口感體重約0.01至30mg的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明的另一方面為治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病諸如阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括給予需要這樣的治療的哺乳動物治療有效量的至少一種式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明的另一方面為治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病諸如阿爾茨海默氏病的方法，該方法包括給予哺乳動物治療有效量的至少一種式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明也涉及藥用組合物，其包含至少一種式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明也涉及用于治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的藥用組合物，其包含治療有效量的至少一種式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
對于組合方面，也構(gòu)思使用不同于式I化合物的任一β-分泌酶抑制劑?？赏ㄟ^下述程序測定β-分泌酶抑制活性。適用的β-分泌酶抑制劑公開于(但不限于)WO 02/02505、WO 02/02506、WO 02/02512、WO02/02518、WO 02/02520及WO 02/088101中。
本發(fā)明的又一方面為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物與如下所述其它化合物的組合。
因此，本發(fā)明包括治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物(如女人或男人)a.一定量的第一化合物，該第一化合物為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；及b.一定量的第二化合物，該第二化合物為膽堿脂酶抑制劑。
組合使用的膽堿脂酶抑制劑包括乙?；?和/或丁酰基膽堿脂酶抑制劑。膽堿脂酶抑制劑的實例包括他克林、多奈哌齊、利伐斯的明、加蘭他敏(galantamine)、吡啶斯的明(pyridostigmine)及新斯的明(neostigmine)。
因此，本發(fā)明包括治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物(如女人或男人)a.一定量的第一化合物，該第一化合物為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；及b.一定量的第二化合物，該第二化合物為抗淀粉狀蛋白抗體。例如，在Hock等人的Nature Medicine，8(2002)，第1270-1275頁中已描述抗淀粉狀蛋白抗體。
因此，本發(fā)明包括治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物(如女人或男人)a.一定量的第一化合物，該第一化合物為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；及b.一定量的第二化合物，該第二化合物為抗炎化合物?？寡谆衔锏膶嵗?但不限于)非類固醇抗炎藥，諸如雙氯芬酸(Voltaren、Cataflam)、二氟尼柳(diflunisal)(Dolobid)、依托度酸(Lodine)、氟比洛芬(flurbiprofen)(Ansaid)、布洛芬(Motrin、Advil)、吲哚美辛(Indocin)、酮洛芬(Orudis、Oruvail)、酮咯酸(Toradol)、萘丁美酮(nabumetone)(Relafen)、萘普生(Naprosyn、Alleve)、丙嗪(Daypro)、吡羅昔康(piroxicam)(Feldene)、舒林酸(Clinoril)、托美丁(tolmetin)(Tolectin)、塞來考昔(Celebrex)及羅非考昔(Vioxx)。
因此，本發(fā)明包括治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物(如女人或男人)a.一定量的第一化合物，該第一化合物為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；及b.一定量的第二化合物，該第二化合物為γ-分泌酶抑制劑?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的程序測定用于本發(fā)明組合的γ-分泌酶抑制劑。典型的γ-分泌酶抑制劑包括(但不限于)WO 03/013527、US 6,683,091、WO03/066592、2003年9月16日申請的USSN 10/663,042、WO 00/247671、WO 00/050391、WO 00/007995及WO 03/018543中所述的γ-分泌酶抑制劑。
因此，本發(fā)明包括治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物(如女人或男人)a.一定量的第一化合物，該第一化合物為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；及
b.一定量的第二化合物，該第二化合物為HMG-CoA還原酶抑制劑化合物。與式I的化合物組合使用的HMG-CoA還原酶抑制劑包括″他汀類″，例如阿托伐他汀、洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)及羅蘇伐他汀。
因此，本發(fā)明包括治療諸如阿爾茨海默氏病的神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物(如女人或男人)a.一定量的第一化合物，該第一化合物為式I的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物；及b.一定量的第二化合物，該第二化合物為N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑。例如，適合的N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑為美盧君。
藥物制劑優(yōu)選為單位劑型。在該劑型中，制劑細(xì)分成包含適當(dāng)量活性組分的適當(dāng)分級的單位劑量，例如為達(dá)到所要的目的的有效量。
根據(jù)具體應(yīng)用，制劑單位劑量中活性化合物的量可自約1mg至約1000mg之間變化或調(diào)整，優(yōu)選為約1mg至約50mg，更優(yōu)選為約1mg至約25mg。
使用的實際劑量可視患者要求及所治療病癥的嚴(yán)重程度而變化。通過本領(lǐng)域的技術(shù)可確定針對具體情況的適當(dāng)給藥方案。為方便起見，需要時，可在給藥期間將總?cè)談┝糠珠_并分次給予。
鑒于諸如患者年齡、病癥及體重以及所治療癥狀的嚴(yán)重程度的因素，根據(jù)主治臨床醫(yī)師的判斷可調(diào)整本發(fā)明化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽的給藥量及給藥頻率。典型的口服給藥的推薦日劑量方案可為每日約1mg至約300mg，優(yōu)選為每日1mg至50mg，分二至四次給藥。
鑒于諸如患者年齡、病癥及體重以及治療癥狀的嚴(yán)重程度的因素，根據(jù)主治臨床醫(yī)師的判斷可調(diào)整組合(不同于式I化合物的β-分泌酶抑制劑、NSAIDS、他汀類(statin)藥物、膽堿脂酶抑制劑等)的化合物及或其藥學(xué)上可接受的鹽類的給藥量及給藥頻率。
為自本發(fā)明所述的化合物制備藥用組合物，惰性的、藥學(xué)上可接受的載體可為固體或液體。固體形式制劑包括散劑、片劑、可分散顆粒、膠囊、扁囊劑及栓劑。散劑和片劑可包含約5至約95％的活性成份。適合的固體載體為本領(lǐng)域已知，例如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖或乳糖。片劑、散劑、扁囊劑及膠囊可用作適合于口服給藥的固體劑型。可于A.Gennaro編的Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania中發(fā)現(xiàn)藥學(xué)上可接受的載體的實例及制備各種組合物的方法。
為制備栓劑，首先將諸如硬脂肪酸甘油酯類或可可油的混合物的低熔點蠟熔融，通過攪拌將活性成份均勻分散于其中。然后將熔融均勻混合物注入適當(dāng)大小的模具中，冷卻并因此固化。
液體形式制劑包括溶液、懸浮液及乳液。液體形式制劑的實例可為用于非經(jīng)腸注射的水或水-丙二醇溶液。液體形式制劑也可包括用于鼻內(nèi)給藥的溶液。
適用于吸入的氣溶膠制劑可包括溶液或粉末形式的固體，其可與諸如惰性壓縮氣體的藥學(xué)上可接受的載體組合。
也包括用于口服或非經(jīng)腸給藥的可在使用前立刻轉(zhuǎn)變成液體形式制劑的固體形式制劑。此類液體形式包括溶液、懸浮液及乳液。
本發(fā)明的化合物也可經(jīng)皮傳遞。經(jīng)皮組合物可為乳膏、洗液、氣溶膠和/或乳液形式，且為達(dá)此目的其可如本領(lǐng)域所熟知的包含于基質(zhì)型或貯庫型經(jīng)皮貼片中。
優(yōu)選經(jīng)口給予該化合物。
藥物制劑優(yōu)選為單位劑型。在該劑型中，制劑細(xì)分成包含適當(dāng)量活性組分的單位劑量，例如為達(dá)成所要的目的的有效量。
當(dāng)式I的化合物與不同于式I化合物的β-分泌酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、γ-分泌酶抑制劑、非類固醇抗炎藥、N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑、膽堿脂酶抑制劑或抗淀粉狀蛋白抗體組合以治療認(rèn)知病癥或神經(jīng)退化性病癥時，可同時或順序共同給予所述活性組分，或可給予包含式I的化合物及其它在藥學(xué)上可接受的載體中的其它藥物之一的單一藥用組合物。可以諸如膠囊、片劑、散劑、扁囊劑、懸浮液、溶液、栓劑、經(jīng)鼻噴霧等的任一常規(guī)的經(jīng)口或非經(jīng)腸形式單獨或一起給予所述組合的組分?？捎晒_材料確定不同于式I化合物的β-分泌酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、γ-分泌酶抑制劑、非類固醇抗炎藥、N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑、膽堿脂酶抑制劑或抗淀粉狀蛋白抗體的劑量，且該劑量為每kg體重0.001至100mg之間。
當(dāng)給予式I的化合物與不同于式I化合物的β-分泌酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、γ-分泌酶抑制劑、非類固醇抗炎藥、N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑、膽堿脂酶抑制劑或抗淀粉狀蛋白抗體的各個分開的藥用組合物時，可將其于藥劑盒的形式提供，該藥劑盒包含于一單獨的包裝中，一個容器包含在藥學(xué)上可接受的載體中的式I化合物，而另外的分開的容器含有于藥學(xué)上可接受的載體中的其它藥物，其中式I化合物及其它藥物以使該組合在治療學(xué)上有效的量存在。例如，當(dāng)必須以不同時間間隔給予組分時或當(dāng)組分為不同劑型時，藥劑盒有利于聯(lián)合給予。
本發(fā)明也包括多藥物組合物、藥劑盒及治療方法，例如式I的化合物可與HMG-CoA還原酶抑制劑和非類固醇抗炎藥聯(lián)合給藥。
在下列制備及實施例中，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，如下列反應(yīng)流程所示使用溶液相或固體相合成法可制備式I的化合物，但本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到其它程序也適用。
在下列流程及實施例中，使用下列縮寫甲基Me；乙基Et；丙基Pr；丁基Bu；芐基Bn乙酸乙酯EtOAc芐氧羰基CbzN，N-二甲基甲酰胺DMF1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC或EDCI
室溫RT小時h分鐘min保留時間tR三氟乙酸TFA四氫呋喃THF1-羥基苯并三唑HOBt甲醇MeOH乙醇EtOH乙酸AcOH二甲亞砜DMSO二異丙基氨化鋰LDA叔-二甲基甲硅烷基氯TBSCI叔-二甲基硅烷基TBS三苯基膦PPh3偶氮二甲酸二異丙酯DIAD溴化銅(I)-二甲基硫CuBr-Me2S叔丁氧羰基Boc四(三苯基膦)鈀Pd(PPh3)4三苯基膦PPh3四丁基氟化銨TBAF三乙胺Et3N、NEt3或TEA硼氫化鋰LiBH4芐基溴BnBr二碳酸二叔丁酯(Boc)2O4-二甲氨基吡啶DMAP丁基鋰BuLi芐基氯BnCl
乙二酰氯(COCl)2制備型薄層層析PTLC薄層層析TLC核磁共振NMR液相層析質(zhì)譜法LCMS二異丙胺DIPA二甲基乙酰胺DMA新戊酰氯PivCl。
一般流程
制備實施例1 步驟1 將丙胺(150ml，1.82mol)添加至在冰水浴中的4-氯-1-丁醇(49.5g，0.456mmol)中。使混合物緩慢升溫至RT并攪拌64h。然后將混合物回流5h并在減壓下蒸發(fā)。使殘余物在乙醚(3×250ml)與40％NaOH水溶液(400ml)之間分配。合并的有機(jī)層用MgSO4干燥、經(jīng)濃縮并蒸餾得到產(chǎn)物(14.87g，25％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝3.56(m，4H)，2.59(m，4H)，1.4-1.8(m，6H)，0.93(m，3H)。
步驟2 將步驟1的產(chǎn)物(8.655g，66.07mmol)、TBSCI(20.12g，133.5mmol)、咪唑(13.50g，198.3mmol)及催化量的DMAP的無水CH2Cl2(180ml)溶液于RT下攪拌16h。用0.5N NaOH(100ml)洗滌混合物，干燥(Na2SO4)，濃縮并溶解于DMF(20ml)中。將HOBt(10.73g，79.45mmol)、EDCl(15.38g，80.25mmol)、三乙胺(Et3N、NEt3或TEA)(29.0ml，208mmol)及間苯二甲酸單甲酯(10.23g，56.78mmol)添加至所得溶液中。將混合物于RT下攪拌3天并蒸發(fā)至干燥。使殘余物在CH2Cl2(200ml)與0.5N NaOH(200ml)之間分配。有機(jī)層用NH4Cl水溶液(100ml)洗滌，用MgSO4干燥并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-3％)純化得到產(chǎn)物(8.829g，38％)。MS m/e 408(M+H)+。
步驟3 將步驟2的產(chǎn)物(8.829g，21.69mmol)與LiOH-H2O(1.021g，24.33mmol)于MeOH(75ml)及水(25ml)中的混合物于RT下攪拌16h?；旌衔锝?jīng)蒸發(fā)至干燥，使殘留物溶解于DMF(80ml)中。將三乙胺(3.0ml，21mmol)、EDCl(4.233g，22.08mmol)、HOBt(2.974g，22.01mmol)及L-酪氨酸甲酯(4.235g，21.69mmol)添加至所得溶液中。將混合物于RT下攪拌16h并濃縮。使殘留物在CH2Cl2(250ml)與NH4Cl水溶液(50ml)之間分配。有機(jī)層用5％碳酸氫鈉(100ml)洗滌，用MgSO4干燥并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-3.5％)純化得到產(chǎn)物(7.84g，63％)。MSm/e571(M+H)+。
步驟4 將1M TBAF的THF(9.2ml)溶液添加至步驟3產(chǎn)物(3.50g，6.14mmol)的THF(100ml)溶液中，將混合物于RT下攪拌4.5h?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-4％)純化得到產(chǎn)物(2.40g，86％)。MSm/e 457(M+H)+。
步驟5
將步驟4的產(chǎn)物(1.22g，2.68mmol)、三丁基膦(995μl，4.01mmol)及1，1′-(偶氮二羰基)二哌啶(1.01g，4.01mmol)于苯(150ml)及THF(19ml)中的混合物于RT下攪拌22h?；旌衔锝?jīng)濃縮，使殘留物溶解于EtOAc(200ml)中并用1N HCl(100ml)洗滌。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉及鹽水萃取，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-2％)純化得到產(chǎn)物(0.583g，50％)。MSm/e 439(M+H)+。
步驟6 將2M硼氫化鋰的THF(3.3ml)溶液添加至在冰水浴中的步驟5產(chǎn)物(580mg，1.32mmol)的無水EtOH(20ml)溶液中。將混合物在冰水浴中攪拌10min，然后于RT下攪拌4h。用水(1ml)及5％檸檬酸(5ml)猝滅反應(yīng)?；旌衔锝?jīng)濃縮并用EtOAc(3×50ml)萃取。合并的有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉(20ml)及鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-5％)純化得到產(chǎn)物(502mg，93％)。MSm/e 411(M+H)+。
步驟7 將(Boc)2O(22.9g，105mmol)緩慢添加至在冰水浴中的哌嗪酮(10.0g，100mmol)、三乙胺(20.2g，200mmol)及DMAP(50mg)的CH2Cl2(250ml)溶液中。將混合物在冰水浴中攪拌1h并于RT下攪拌4.5h?；旌衔镉肅H2Cl2(250ml)稀釋，用水(250ml)、5％檸檬酸(200ml)、1N HCl(200ml)、飽和碳酸氫鈉(20ml)及鹽水洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(18.0g，90％)。MSm/e 201(M+H)+。
步驟8 在冰水浴中將氫化鈉(2.40g，60.0mmol)及芐基氯(6.60g，52.5mmol)添加至步驟7產(chǎn)物(10.0g，50.0mmol)的無水DMF(250ml)溶液中。將混合物于RT下攪拌4.5h。用水(10ml)猝滅反應(yīng)，用CH2Cl2(500ml)稀釋，并用水(2×250ml)洗滌。有機(jī)層用飽和NH4Cl(200ml)萃取，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-5％)純化得到產(chǎn)物(10.7g，74％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.2-7.3(m，5H)，4.57(s，2H)，4.10(s，2H)，3.53(m，2H)，3.19(m，2H)，1.41(s，9H)。
步驟9 將步驟6的產(chǎn)物(123mg，0.300mmol)及Dess-Martin periodinane(256mg，0.602mmol)于CH2Cl2(15ml)中的混合物于RT下攪拌30min?；旌衔镉肅H2Cl2(50ml)稀釋，用1N Na2S2O3(20ml)及飽和NaHCO3洗滌，用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮得到粗品醛。
將2M LDA(0.45ml)添加至在干冰丙酮浴中的步驟8產(chǎn)物(261mg，0.900mmol)的無水THF(5ml)溶液中，將混合物攪拌1h。添加上述醛的THF(5ml)溶液，將混合物在干冰丙酮浴中攪拌2h。用飽和NH4Cl(4ml)猝滅反應(yīng)，用CH2Cl2(50ml)稀釋，并用水(30ml)洗滌。有機(jī)層用飽和NH4Cl及鹽水萃取，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(100mg，48％)。MSm/e 699(M+H)+。
步驟10 將步驟9產(chǎn)物(100mg，0.143mmol)的15％TFA/ CH2Cl2(10ml)溶液于RT下攪拌75min。混合物經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到流分A(15mg，18％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝6.4-7.8(m，13H)，5.83(m，1H)，3.9-5.0(m，6H)，2.7-3.8(m，11H)，1.5-2.0(m，5H)，1.2-1.5(m，3H)，0.4-1.0(m，3H)。MSm/e 599(M+H)+。
流分B(18mg，21％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.0-7.6(m，10H)，6.6-7.0(m，3H)，5.7-6.3(m，1H)，3.8-4.8(m，6H)，2.6-3.7(m，12H)，1.2-2.0(m，7H)，0.98(m，1H)，0.62(m，2H)。MSm/e 599(M+H)+。
制備實施例2 步驟1
將正溴丙烷(24.6g，0.200mol)添加至在冰水浴中的烯丙胺(45.7g，0.800mol)中，將混合物于RT下攪拌3天?；旌衔锝?jīng)蒸餾得到固體，將5g該固體溶解于DMF(50ml)中。將間苯二甲酸單甲酯(1.86g，10.0mmol)、HOBt(2.70g，20.0mmol)及EDCl(3.83g，20.0mmol)添加至該溶液中。將混合物于RT下攪拌16h并用EtOAc(300ml)及1NNaOH(100ml)稀釋。有機(jī)層用1N HCl(100ml)、水(100ml)、飽和碳酸氫鈉(100ml)及鹽水(100ml)洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(2.20g，84％)。MSm/e 262(M+H)+。
步驟2 將步驟1的產(chǎn)物(2.20g，8.42mmol)于MeOH(25ml)及1N HCl(18ml)中的混合物于RT下攪拌18h?；旌衔锝?jīng)濃縮，殘留物在1N HCl(20ml)與乙醚(2×100ml)之間分配。合并的有機(jī)層用Na2SO4干燥并經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(2.10g，100％)。MS m/e 248(M+H)+。
步驟3 將咪唑(9.26g，136mmol)及TBSCl(7.56g，50.16mmol)添加至N-Boc-D-絲氨酸甲酯(10.0g，45.6mmol)的DMF(150ml)冰冷溶液中。將混合物于RT下攪拌20h并經(jīng)濃縮。殘余物用EtOAc(300ml)溶解并用飽和NH4Cl及碳酸氫鈉萃取。有機(jī)層用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(16.5g，100％)。MSm/e 356(M+Na)+。
步驟4
將2M硼氫化鋰THF(37.1ml)溶液緩慢添加至步驟3產(chǎn)物(16.5g，45.6mmol)的THF(150ml)溶液中。將混合物于RT下攪拌2.5h。用飽和NH4Cl猝滅反應(yīng)并用EtOAc(2×250ml)萃取。合并的有機(jī)層用飽和NH4Cl(100ml)、飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌，經(jīng)干燥并濃縮得到產(chǎn)物(14.5g，100％)。MS m/e 306(M+H)+。
步驟5 將DIAD(10.76g，53.21mmol)添加至三苯基膦(13.95g，53.19mmol)的THF(400ml)及CH3CN(50ml)冰冷溶液中。將混合物攪拌15min，且經(jīng)15min添加步驟4的產(chǎn)物(8.20g，26.2mmol)的THF(100ml)溶液。添加完成后，移除冰水浴，將混合物于RT下攪拌2天?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過柱層析(梯度EtOAc/己烷0-5％)純化得到產(chǎn)物(3.75g，50％)。MSm/e 288(M+H)+。
步驟6 將烯丙醇(8.90g，0.154mol)緩慢添加至60％NaH(6.40g，0.160mol)的無水DMA(400ml)懸浮液中。將混合物于RT下攪拌1h。添加3，5-二氟溴苯(30.0g，0.155mol)，將混合物于RT下攪拌24h。用水(1.51)猝滅反應(yīng)并用乙醚(4×300ml)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(500ml)洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(己烷)純化得到產(chǎn)物(14.3g，40％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝6.81(m，2H)，6.53(m，1H)，5.96(m，1H)，5.34(m，2H)，4.46(m，2H)。
步驟7
將鎂屑(292mg，12.0mmol)添加至火焰干燥燒瓶中，隨后添加三分之一的步驟6的產(chǎn)物(2.31g，10.0mmol)的THF(16ml)溶液。用二溴乙烷(50μl)啟動反應(yīng)，然后緩慢添加剩余的步驟6的產(chǎn)物溶液。將混合物于RT下攪拌30min，并于-40℃下將其添加至CuBr-Me2S(310mg，1.51mmol)的THF(30ml)懸浮液中。將混合物于4℃下攪拌30min，添加步驟5的產(chǎn)物(1.20g，4.17mmol)的無水乙醚(15ml)溶液。將所得混合物于4℃下攪拌1h，然后于RT下攪拌3天。用飽和NH4Cl(100ml)猝滅反應(yīng)并用EtOAc(2×150ml)萃取。合并的有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度EtOAc/己烷0-5％)純化得到產(chǎn)物(1.00g，55％)。MS m/e440(M+H)+。
步驟8 將步驟7的產(chǎn)物(500mg，1.14mmol)的CH2Cl2(12ml)及4N HCl/二氧雜環(huán)己烷(6ml)溶液于RT下攪拌20h。混合物經(jīng)濃縮，使殘余物在CH2Cl2(50ml)與5N NH4OH(20ml)之間分配。有機(jī)層用K2CO3干燥并經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(345mg，100％)。MS m/e 226(M+H)+。
步驟9
將步驟8的產(chǎn)物(445mg，1.98mmol)、步驟2的產(chǎn)物(539mg，2.18mmol)、HOBt(442mg，3.27mmol)及EDCl(627mg，3.27mmol)于DMF(20ml)中的混合物于RT下攪拌3天?；旌衔锝?jīng)濃縮，且殘留物在CH2Cl2(200ml)與1N NaOH之間分配。有機(jī)層用5％檸檬酸及鹽水洗滌，用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮。殘余物于MeOH(20ml)及1N NaOH(10ml)中的溶液于RT下攪拌4h?；旌衔锝?jīng)濃縮，使殘留物在EtOAc(150ml)與飽和NaHCO3之間分配。有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-2.5％)純化得到產(chǎn)物(405mg，45％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.63(m，2H)，7.37(m，1H)，7.28(m，1H)，7.07(m，1H)，6.56(m，2H)，6.43(m，1H)，5.95(m，1H)，5.5-5.9(m，1H)，5.33(m，1H)，5.0-5.25(m，3H)，4.42(m，2H)，4.23(m，1H)，4.07(m，1H)，3.5-3.8(m，3H)，3.36(m，2H)，3.06(m，1H)，2.86(m，2H)，1.3-1.7(m，2H)，0.6-1.0(m，3H)。
步驟10 將步驟9的產(chǎn)物(400mg，0.880mmol)及第二代Grubb催化劑(37mg，0.044mmol)于CH2Cl2(200ml)中的混合物于50℃下加熱2.5h，然后于RT下加熱16h?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過柱層析(梯度MeOH/CH2Cl20-2.5％)純化得到產(chǎn)物(340mg，91％)。MS m/e 427(M+H)+。
步驟11 將步驟10的產(chǎn)物(340mg，0.797mmol)、甲酸銨(50mg，0.79mmol)及10％Pd/C(50mg)的混合物在H2(1atm)下攪拌18h?；旌衔锝?jīng)過濾、濃縮，且未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。將該物質(zhì)(129mg，0.301mmol)與Dess-Martin periodinane(510mg，1.20mmol)于CH2Cl2(25ml)中的混合物于RT下攪拌2h。用1N Na2S2O3猝滅反應(yīng)，且在飽和NaHCO3與CH2Cl2(100ml)之間分配。有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮得到粗品醛。
將2M LDA(0.45ml)添加至在干冰丙酮浴中的制備實施例1中步驟8的產(chǎn)物(261mg，0.900mmol)的無水THF(5ml)溶液中，將混合物攪拌1h。添加上述醛的THF(5ml)溶液，混合物在干冰丙酮浴中攪拌1h。用飽和NH4Cl(5ml)猝滅反應(yīng)并用CH2Cl2(50ml)稀釋。有機(jī)層用水及鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(120mg，56％)。MS m/e 717(M+H)+。
步驟12
將步驟11的產(chǎn)物(120mg，0.167mmol)及TFA(2ml)于CH2Cl2(8ml)中的混合物于RT下攪拌1.5h。混合物經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到餾份A(22mg，21％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.05-7.8(m，9H)，6.7-7.0(m，1H)，6.50(m，2H)，6.36(m，1H)，4.4-5.0(m，3H)，3.9-4.3(m，2H)，3.4-3.9(m，3H)，2.7-3.4(m，9H)，1.2-2.1(m，8H)，0.94(m，2H)，0.59(m，1H)。MS m/e 617(M+H)+。
餾份B(17mg，16％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.45-7.65(m，2H)，7.1-7.3(m，8H)，6.95(m，1H)，6.56(m，1H)，6.37(m，1H)，4.68(m，2H)，3.9-4.4(m，3H)，2.7-3.9(m，13H)，1.2-2.2(m，7H)，1.04(m，2H)，0.58(m，1H)。MS m/e 617(M+H)+。
餾份C(12mg，12％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.2-7.8(m，8H)，6.75-7.0(m，1H)，6.5-6.7(m，2H)，6.2-6.4(m，2H)，4.4-4.8(m，3H)，3.6-4.2(m，3H)，2.7-3.4(m，10H)，1.2-2.2(m，8H)，0.95(m，2H)，0.61(m，1H)。MS m/e 617(M+H)+。
制備實施例3 步驟1
將衣康酸(13.0g，100.0mmol)及烯丙胺(5.71g，100mmol)于無水甲苯(100ml)中的混合物在密閉管中于125℃下加熱16h。混合物冷卻至RT后，添加1N NaOH水溶液(400ml)，且水層用乙醚(2×200ml)萃取。水層用濃HCl酸化至pH1，并用乙醚(10×300ml)萃取。合并的有機(jī)部分經(jīng)濃縮，且殘余物用CH2Cl2(200ml)溶解并用鹽水洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并冷凍干燥得到淡黃色固體(9.60g，57％)。MS m/e 170(M+H)+。
步驟2 將新戊酰氯(6.45g，53.5mmol)添加至于-45℃下步驟1的產(chǎn)物(8.60g，50.9mmol)及三乙胺(15.4g、153mmol)的無水THF(200ml)溶液中。將混合物于-45℃下攪拌1h，然后將其添加至氯化鋰(4.75g，112mmol)及(S)-4-芐基-2-唑烷酮(9.02g，50.9mmol)的THF(100ml)懸浮液中。將所得混合物于RT下攪拌16h并過濾。濾液經(jīng)濃縮，使其溶解于EtOAc(700ml)中，并用1N HCl(200ml)、飽和碳酸氫鈉(200ml)及鹽水洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度0-75％EtOAc/己烷)純化得到產(chǎn)物(7.20g，43％)。MS m/e 329(M+H)+。
步驟3 將30％過氧化氫(4ml)及氫氧化鋰(0.672g，16.0mmol)添加至在冰水浴中的步驟2的產(chǎn)物(2.63g，8.01mmol)的THF(30ml)及水(8ml)溶液中。將混合物于0℃下攪拌7h。添加10％亞硫酸氫鈉水溶液(40ml)，將混合物于RT下攪拌16h?；旌衔锝?jīng)濃縮，使殘余物在1NNaOH(8ml)與CH2Cl2(2×100ml)之間分配。將水層于0℃酸化至pH2，并用乙醚(5×100ml)萃取。合并的有機(jī)部分經(jīng)MgSO4干燥并濃縮得到產(chǎn)物(1.00g，74％)。MS m/e 170(M+H)+。
步驟4 將制備實施例2、步驟8的產(chǎn)物(3.10g，13.0mmol)及碳酸鉀(5.39g，39.0mmol)的EtOH(30ml)及水(90ml)溶液于70℃下加熱。添加芐基溴(3.42ml，28.6mmol)，混合物于70℃下攪拌2.5h。除去EtOH，且殘余物用乙醚(2×200ml)萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用K2CO3干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度0-10％EtOAc/己烷)純化得到產(chǎn)物(4.40g，83％)。MS m/e 406(M+H)+。
步驟5 將DMSO(938mg，12.0mmol)添加至在干冰丙酮浴中的乙二酰氯(762mg，6.00mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中。5min后，添加步驟4的產(chǎn)物(2.03g，5.01mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液，將混合物攪拌1h。添加三乙胺(2.42g，23.9mmol)，2min后移除冷卻浴。將混合物攪拌30min并用水(50ml)稀釋。添加CH2Cl2(100ml)，水層用CH2Cl2(2×100ml)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮得到未進(jìn)一步純化的醇。
將1.6M丁基鋰的己烷(4.13ml，6.61mmol)溶液添加至在干冰丙酮浴中的二異丙胺(667mg，6.59mmol)的THF(5ml)溶液中。5min后將混合物置于冰水浴中并攪拌20min。將溶液再一次在干冰丙酮浴中冷卻，并添加制備實施例1中步驟8的產(chǎn)物(1.74g，5.99mmol)的THF(20ml)溶液。將混合物攪拌1h。添加上述醛的THF(30ml)溶液，允許混合物緩慢升溫至RT并攪拌16h。用飽和NH4Cl(20ml)猝滅反應(yīng)并用乙醚(3×100ml)萃取。合并的有機(jī)層用5％檸檬酸、飽和NaHCO3及鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，經(jīng)濃縮并通過柱層析(梯度EtOAc/己烷0-40％)純化得到產(chǎn)物(1.20g，35％)。MS m/e 694(M+H)+。
步驟6 將步驟5的產(chǎn)物(1.00g，1.44mmol)的MeOH(15ml)溶液用N2脫氣。添加無水碳酸鉀(594mg，4.30mmol)及Pd(PPh3)4(324mg，0.280mmol)，將混合物于RT下攪拌5h?；旌衔锝?jīng)過濾并濃縮。殘留物溶解于CH2Cl2(150ml)中并用5％檸檬酸、飽和NaHCO3及鹽水洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥并經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(980 mg，100％)。MS m/e 654(M+H)+。
步驟7
將步驟6的產(chǎn)物(980mg，1.44mmol)、20％Pd(OH)2/C(980mg)及AcOH(1ml)于EtOH(50ml)中的混合物在H2(1atm)下攪拌12h。混合物經(jīng)過濾并濃縮得到產(chǎn)物(682mg，100％)。MS m/e 474(M+H)+。
步驟8 將步驟7的產(chǎn)物(66mg，0.14mmol)、步驟3的產(chǎn)物(28mg，0.17mmol)、HOBt(38mg，0.28mmol)、EDCI(53mg，0.28mmol)及三乙胺(40μl，0.28mmol)于CH2Cl2(5ml)中的混合物于RT下攪拌22h。添加1N NaOH(10ml)，將混合物攪拌30min。混合物用CH2Cl2(50ml)稀釋，用5％檸檬酸、水及鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(66mg，76％)。MS m/e 625(M+H)+。
步驟9 將步驟8的產(chǎn)物(66mg，0.11mmol)、碳酸鉀(146mg，1.06mmol)及烯丙基溴(14mg，0.12mmol)于丙酮(4ml)中的混合物于RT下攪拌18h。使混合物在5％檸檬酸與CH2Cl2(50ml)之間分配。有機(jī)層用飽和NaHCO3及鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(40 mg，57％)。MS m/e 665(M+H)+。
步驟10 將第二代Grubb催化劑(5mg，0.006mmol)添加至步驟9的產(chǎn)物(40mg，0.060mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液中?；旌衔镉肗2脫氣5min，然后加熱至50℃，歷時2小時?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(30mg，79％)。MS m/e 637(M+H)+。
步驟11 將步驟10的產(chǎn)物(30mg，0.047mmol)及10％Pd/C(30mg)于EtOH(5ml)中的混合物在H2(1atm)下攪拌75min?；旌衔锝?jīng)過濾并濃縮得到產(chǎn)物(30 mg，100％)。MS m/e 639(M+H)+。
步驟12
將步驟11的產(chǎn)物(30mg，0.047mmol)及TFA(1ml)的CH2Cl2(4ml)溶液于RT下攪拌1.5h?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過PTLC(5％2MNH3/MeOH-95％CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(20mg，79％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.25-7.35(m，5H)，6.53(m，1H)，6.42(m，2H)，4.67(d，1H，J＝14.4Hz)，4.44(d，1H，J＝14.4Hz)，4.36(m，1H)，3.8-4.2(m，4H)，3.60(m，1H)，2.8-3.4(m，9H)，2.69(m，1H)，2.54(m，2H)，1.84(m，2H)，1.66(m，1H)，1.47(m，2H)。LCMS tR＝2.88 min m/e 539(M+H)+。
制備實施例4 步驟1 于室溫下將2.0mL 2M硼烷-二甲硫的THF溶液添加至制備實施例3中步驟7的產(chǎn)物(236mg，0.5mmol，前面步驟的粗產(chǎn)物)的無水THF(20mL)溶液中。將該混合物于60-70℃加熱過夜。添加MeOH(30mL)后，混合物于70℃另外加熱2h。使混合物冷卻至RT并于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至干燥。添加另外的MeOH(30mL)并濃縮至干燥。產(chǎn)物未經(jīng)純化，直接用于下一步驟。MSm/e 460(M+H)+。
步驟2 將制備實施例3中步驟3的產(chǎn)物(102mg，0.60mmol)、HOBt(162mg，1.2mmol)及EDCI(230mg，1.2mmol)的CH2Cl2(6ml)溶液于RT下攪拌1.5h。然后添加步驟1產(chǎn)物(粗產(chǎn)物，約0.5mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液，隨后添加三乙胺(240mg，2.4mmol)。將混合物于RT下攪拌22h。添加1N NaOH(20ml)，將混合物攪拌45min?；旌衔镉肅H2Cl2(150ml)稀釋，用H2O、5％檸檬酸及鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過ISCO(用CH2Cl2洗脫10min，0-2.5％MeOH/CH2Cl2洗脫35min)純化得到產(chǎn)物(90mg，三步29％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.22-7.32(m，5H)，6.58(d，1H，J＝8.8Hz)，6.39(m，2H)，6.25(m，1H)，3.79-3.93(m，5H)，3.27-3.58(m，7H)，3.06(d，1H，J＝10Hz)，2.96(m，1H)，2.77(d，1H，J＝10.8Hz)，2.50-2.56(m，2H)，2.05-2.32(m，4H)，1.38(s，9H)。MS m/e 611(M+H)+。
步驟3
將步驟3的產(chǎn)物(40mg，0.066mmol)、碳酸鉀(91mg，0.66mmol)及烯丙基溴(18mg，0.15mmol)于丙酮(5ml)中的混合物于60-70℃下攪拌18小時。使混合物冷卻至RT，經(jīng)過濾并濃縮。使殘余物溶解于CH2Cl2(50ml)中。有機(jī)層用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(27mg，63％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.22-7.30(m，5H)，6.41(m，3H)，5.96(m，1H)，5.84(d，1H，J＝8.9Hz)，5.62(m，1H)，5.37(dd，1H，J＝1.6 Hz)，5.33(dd，1H，J＝1.6Hz)，5.23(dd，1H，J＝1.2 Hz，J＝10Hz)，5.09-5.14(m，2H)，4.43(dt，2H，J＝6.4Hz，J＝1.5Hz)，3.69-3.95(m，5H)，3.26-3.58(m，7H)，3.08(d，1H，J＝10Hz)，2.92(m，1H)，2.77(d，1H，Hz)，2.63(m，1H)，2.42(m，2H)，2.22(d，1H，J＝9Hz)，2.06(m，1H)，1.37(s，9H)。MS m/e 651(M+H)+。
步驟4 將第二代Grubb催化劑(7.8mg，0.0092mmol)添加至步驟3產(chǎn)物(60mg，0.092mmol)的CH2Cl2(40ml)溶液中?；旌衔镉肗2脫氣5min，然后加熱至40-50℃ 1h?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(52mg，91％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.22-7.32(m，5H)，6.51(d，1H，J＝8.8Hz)，6.40(d，1H，J＝10Hz)，6.32(s，1H)，6.26(d，1H，J＝8.8Hz)，5.65(m，2H)，4.60(s，2H)，4.56(d，1H，J＝3.2 Hz)，4.00(s，1H)，3.85(d，2H，J＝10 Hz)，3.17-3.51(m，6H)，2.62-2.97(m，6H)，2.47(t，1H，J＝12 Hz)，2.05-2.15(m，2H)，1.78-1.88(m，2H)，1.41(s，9H)。MS m/e 623(M+H)+。
步驟5 將步驟4的產(chǎn)物(52mg，0.084mmol)及20％ Pd(OH)2/C(52mg)于EtOH(5ml)及乙酸(0.4mL)中的混合物于H2(1atm)下攪拌90min。混合物經(jīng)過濾并濃縮。使殘余物溶解于CH2Cl2(50ml)中并用飽和NaHCO3及鹽水洗滌，然后用K2CO3干燥并經(jīng)濃縮得到產(chǎn)物(33mg，74％)。MS m/e 535(M+H)+。
步驟6 將三乙胺(20mg)添加至步驟5的產(chǎn)物(33mg，0.062mmol)的無水CH2Cl2(6ml)冰冷溶液中，隨后添加間甲苯磺酰氯(13mg，0.068mmol)的CH2Cl2溶液。將該混合物于0℃下攪拌1h。然后用CH2Cl2(50ml)稀釋，用5％檸檬酸、飽和NaHCO3及鹽水洗滌并用MgSO4干燥。溶液經(jīng)濃縮并通過PTLC(5％MeOH/CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(27mg，63％)。MSm/e 689(M+H)+。
步驟7 將步驟6的產(chǎn)物(27mg，0.039mmol)及TFA(1ml)的CH2Cl2(4ml)溶液于RT下攪拌1h?；旌衔锝?jīng)濃縮并通過PTLC(5％ 2M NH3/MeOH-95％CH2Cl2)純化得到產(chǎn)物(23mg，94％)。1H-NMR(CDCl3)δ＝7.49(m，2H)，7.38(m，2H)，6.53(d，1H，J＝8Hz)，6.45(s，1H)，6.39(m，1H)，4.01-4.17(m，3H)，3.82-3.85(m，2H)，3.64(m，1H)，3.23-3.43(m，3H)，2.85-3.10(m，7H)，2.66-2.70(m，2H)，2.50-2.57(m，2H)，2.40(s，3H)，1.88(s，寬，1H)，1.65(m，1H)，1.39-1.47(m，2H)。LCMS tR＝2.99min m/e589(M+H)+。
BACE-1克隆、蛋白質(zhì)表達(dá)及純化BACE1(sBACE1，對應(yīng)于氨基酸1-454)的預(yù)定可溶形式可通過PCR使用advantage-GC cDNA PCR藥劑盒(Clontech，Palo Alto，CA)自全長BACE1 cDNA(pCDNA4/mycHisA構(gòu)造中的全長人類BACE1cDNA；多倫多大學(xué)(University of Toronto))生產(chǎn)。pCDNA4-sBACE1myc/His的HindIII/PmeI片段使用Klenow來鈍端并亞克隆入pFASTBACI(A)(Invitrogen)的Stu I位點。通過DH10Bac細(xì)胞(GIBCO/BRL)轉(zhuǎn)移產(chǎn)生sBACE1 mycHis重組bacmid。隨后使用CellFectin(Invitrogen，San Diego，CA)將sBACE1 mycHis bacmid構(gòu)造轉(zhuǎn)染至sf9細(xì)胞中，從而產(chǎn)生重組桿狀病毒。使Sf9細(xì)胞于用3％熱滅活FBS及0.5 X青霉素/鏈霉素溶液(Invitrogen)補(bǔ)充的SF 900-II培養(yǎng)基(Invitrogen)中生長。5毫升高滴度斑塊純化的sBACEmyc/His病毒用于感染1L對數(shù)生長的sf9細(xì)胞72小時。通過以3000xg離心15分鐘沉淀完整細(xì)胞。收集包含分泌性sBACE1的上澄液并用100 mM HEPES(pH8.0)50％v/v稀釋。將稀釋的培養(yǎng)基裝載于Q-瓊脂糖凝膠柱上。Q-瓊脂糖凝膠柱用緩沖液A(20mM HEPES，pH8.0，50mM NaCl)洗滌。
用緩沖液B(20mM HEPES，pH8.0，500mM NaCl)自Q-瓊脂糖凝膠柱洗脫蛋白質(zhì)。合并自Q-瓊脂糖凝膠柱的蛋白質(zhì)峰并將其裝載于Ni-NTA瓊脂糖柱上。然后用緩沖液C(20mM HEPES，pH8.0，500mM NaCl)洗滌Ni-NTA柱。然后用緩沖液D(緩沖液C+250mM咪唑)洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。使用Centricon 30濃縮器(Millipore)濃縮通過Bradford分析法(Biorad，CA)測定峰蛋白質(zhì)流份。通過SDS-PAGE及Commassie Blue染色(Commassie Blue staining)評估的sBACE1純度為約90％。N-端測序表明大于90％的純化sBACE1包含前結(jié)構(gòu)域；因此該蛋白質(zhì)稱為sproBACE1。
肽水解分析于30℃下將抑制劑、25nM EuK-生物素標(biāo)記的APPsw底物(EuK-KTEEISEVNLDAEFRHDKC-生物素；CIS-Bio International，法國)、5nM未標(biāo)記APPsw肽(KTEEISEVNLDAEFRHDK；American PeptideCompany，Sunnyvale，CA)、7nM sproBACE1、20mM PIPES pH5.0，0.1％Brij-35(蛋白質(zhì)級，Calbiochem，San Diego，CA)及10％甘油預(yù)培養(yǎng)30分鐘。通過于5μl等分試樣中添加底物引發(fā)反應(yīng)，從而導(dǎo)致總體積為25μl。于30℃下反應(yīng)3hr后，通過添加包含50mM Tris-HCl pH8.0、0.5M KF、0.001％Brij-35、20μg/ml SA-XL665(偶合至鏈霉抗生物素的別藻藍(lán)蛋白(allophycocyanin)蛋白質(zhì)；CIS-Bio Interntional，法國)(0.5μg/well)的等體積2x中止緩沖液猝滅反應(yīng)。溫育前，短暫振蕩平板并以1200xg旋轉(zhuǎn)10秒以將所有液體沉淀至平板底部。在PackardDiscoveryHTRF平板讀數(shù)器上使用337nm雷射光激發(fā)樣品進(jìn)行HTRF測量，隨后延遲50μs并同時測量620nm及665nm發(fā)射400μs。
在存在不同濃度的抑制劑(I)及固定濃度的酵素及基質(zhì)下，通過量測665nm處相對熒光除以620nm處相對熒光的百分?jǐn)?shù)變化(665/620比率)測定抑制劑I的IC50。使用GraphPad Prism 3.0軟件，選擇允許可變斜率的四參數(shù)logistic方程進(jìn)行此數(shù)據(jù)的非線性回歸分析。Y＝底+(頂-底)/(1+10^((LogEC50-X)*斜率))；X為I濃度的對數(shù)，Y為比率變化百分?jǐn)?shù)，且Y自底開始以S形延伸至頂。
本發(fā)明的化合物具有約100至約10,000nM范圍的IC50，優(yōu)選為約100至約1000nM，更優(yōu)選為約100至約500nM。優(yōu)選立體化學(xué)的化合物具有約2至約500nM范圍的IC50值，優(yōu)選約2至約100nM。下式的化合物
具有4nM的IC50。
下表說明下列化合物的IC50分類。
具有2至1000nM IC50的化合物為A類化合物。
具有1000至10000nM IC50的化合物為B類化合物。
具有超過10000nM IC50的化合物為C類化合物。
盡管本發(fā)明已結(jié)合上述具體實施方案加以描述，但其許多替代、修改及變化對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是顯而易見的。所有這樣的替代、修改及變化均落入本發(fā)明的精神及范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1為 R2為-N(R5)C(O)R4-或亞雜環(huán)基環(huán)；R3為亞芳基、亞雜芳基、亞雜環(huán)基或亞環(huán)烷基；R4為亞芳基、亞雜芳基、亞雜環(huán)基或亞環(huán)烷基；R5為氫、烷基、芳基、雜芳基或環(huán)烷基；R6及R7獨立選自氫、-OH、烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、芳烷氧基、雜芳烷氧基和烷氧基，前提是當(dāng)R6及R7為-OH、芳烷氧基、雜芳烷氧基和烷氧基時，R6和R7不與相鄰于環(huán)氮的環(huán)碳連接；R8為氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、-C(O)R9、-C(O)OR12、-S(O)R9、-S(O2)R9或-CN；前提是當(dāng)Y為＝O時，R8不能為-C(O)R9、-C(O)OR12、-S(O)R9、-S(O2)R9或-CN；R9為氫、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、烯基、炔基或-N(R10)(R11)；R10和R11獨立選自氫、烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基烷基、烯基和炔基；或R10和R11與它們所連接的氮一起形成3-7元雜環(huán)基環(huán)；R12為烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、烯基或炔基；X為O、S、C(R5)或NH；Y為＝O或(H，H)；m為1、2或3；n為0、1、2或3；且o為0、1、2或3；其中各烷基任選被1至3個選自鹵代、芳基、環(huán)烷基、氰基、羥基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(環(huán)烷基)、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基的部分取代；且其中各亞芳基、亞雜芳基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、亞雜環(huán)基、亞環(huán)烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、芳烷基、雜芳烷基、芳烷氧基或雜芳烷氧基任選被1至4個選自-CF3、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、烷基芳基、雜芳烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、烷基雜芳基、羥基、羥烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、?；⒎减；Ⅺu代、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、烷基磺?；?、芳基磺?；?、雜芳基磺?；⑼榱蚧?、芳硫基、雜芳基硫基、芳烷硫基、雜芳烷硫基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、-C(＝N-CN)-NH2、-C(＝NH)-NH2、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-、Y1Y2NSO2-及-SO2NY1Y2的部分取代，其中Y1和Y2可相同或不同，且獨立選自氫、烷基、芳基、環(huán)烷基和芳烷基，前提是亞環(huán)烷基和亞雜環(huán)基可由＝O取代。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為-N(R5)C(O)R4-。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R3為亞芳基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R3為亞苯基或鹵代-取代的亞苯基。
6.權(quán)利要求4的化合物，其中R3為
7.權(quán)利要求4的化合物，其中R3為
8.權(quán)利要求1的化合物，其中R4為亞芳基。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中R4為亞苯基。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R4為
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為亞雜環(huán)基。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中R2為由＝O取代的亞雜環(huán)基。
13.權(quán)利要求12的化合物，其中R2為
14.權(quán)利要求3的化合物，其中R5為烷基。
15.權(quán)利要求14的化合物，其中R5為丙基。
16.權(quán)利要求1的化合物，其中m為2且n為1。
17.權(quán)利要求1的化合物，其中R7為氫。
18.權(quán)利要求1的化合物，其中X為O。
19.權(quán)利要求1的化合物，其中Y為O。
20.權(quán)利要求1的化合物，其中R8為芳烷基或-S(O2)R9。
21.權(quán)利要求1的化合物，其中R8為
22.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為 R2為-N(R5)C(O)R4-或亞雜環(huán)基；R3為亞芳基；R4為亞芳基或亞雜環(huán)基；R5為烷基；R7為氫；R8為芳烷基或-S(O2)R9；m為2n為1；X為O；且Y為O。
23.權(quán)利要求22的化合物，其中R3為亞苯基或鹵代取代的亞苯基。
24.權(quán)利要求23的化合物，其中R3為
25.權(quán)利要求24的化合物，其中R3為
26.權(quán)利要求22的化合物，其中R4為亞芳基。
27.權(quán)利要求22的化合物，其中R4為
28.權(quán)利要求22的化合物，其中R2為亞雜環(huán)基或由＝O取代的亞雜環(huán)基。
29.權(quán)利要求28的化合物，其中R2為
30.權(quán)利要求13的化合物，其中R5為丙基。
31.權(quán)利要求22的化合物，其中R8為
32.權(quán)利要求1的化合物，它具有下面的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)
33.權(quán)利要求1的化合物，它選自下列化合物 及
34.權(quán)利要求1的化合物，它為純化的形式。
35.權(quán)利要求1的化合物，它為分離的形式。
36.一種藥學(xué)上可接受的組合物，它包含有效量的權(quán)利要求1的化合物及藥學(xué)上有效的載體。
37.一種抑制β-淀粉狀蛋白斑塊在神經(jīng)組織中，神經(jīng)組織上或神經(jīng)組織周圍形成或形成并沉積的方法，該方法包括給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物。
38.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物。
39.權(quán)利要求38的方法，其中治療的疾病為阿爾茨海默氏病。
40.一種藥用組合物，它包含在藥學(xué)上有效的載體中的有效量的權(quán)利要求1的化合物及有效量的膽堿脂酶抑制劑。
41.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括聯(lián)合給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物和有效量的膽堿脂酶抑制劑。
42.權(quán)利要求41的方法，其中所述膽堿脂酶抑制劑為乙?；憠A脂酶或丁酰基膽堿脂酶。
43.權(quán)利要求41的方法，其中所述膽堿脂酶抑制劑選自他克林、多奈哌齊、利伐斯的明、加蘭他敏、吡啶斯的明及新斯的明。
44.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括聯(lián)合給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物和有效量的抗炎化合物。
45.權(quán)利要求44的方法，其中所述抗炎化合物為非類固醇抗炎藥。
46.權(quán)利要求45的方法，其中所述非類固醇抗炎藥為雙氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮洛酸、萘丁美酮、萘普生、丙嗪、吡羅昔康、舒林酸、托美丁、塞來考昔或羅非考昔。
47.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括聯(lián)合給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物和有效量的γ-分泌酶抑制劑。
48.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括聯(lián)合給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物和有效量的HMG-CoA還原酶抑制劑。
49.權(quán)利要求48的方法，其中所述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物為阿托伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀或羅蘇伐他汀。
50.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括聯(lián)合給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物和有效量的N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑。
51.權(quán)利要求50的方法，其中所述N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑為美金剛。
52.一種治療認(rèn)知或神經(jīng)退化性疾病的方法，該方法包括聯(lián)合給予需要這種治療的患者有效量的權(quán)利要求1的化合物和有效量的抗淀粉狀蛋白抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開式(I)的新化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中R
文檔編號A61P25/28GK101027297SQ200580032394
公開日2007年8月29日 申請日期2005年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月28日
發(fā)明者A·W·史丹佛, 黃穎, 李國青, C·O·史崔藍(lán), J·H·佛特 申請人:先靈公司