專利名稱：原生動物感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在寄生性的原生動物感染病的預(yù)防或治療中有用的藥物組合物。
背景技術(shù)：
已知，至今為止，尤其是在以熱帶和亞熱帶地域為中心的地區(qū)有許多寄生性的原生動物感染病，例如，有瘧疾、利什曼病、非洲錐蟲病(非洲睡眠病)、美洲錐蟲病(恰加斯(氏)病(Chagas))、淋巴絲蟲病、巴貝西蟲病等。這其中，可分為只感染人的感染病、也感染家畜和小動物的人畜共通感染病，不論哪一種感染病都會帶來重大的經(jīng)濟和社會的損害?，F(xiàn)在，在這些疾病中，存在著充分治療效果的藥物還沒有出現(xiàn)、對治療藥具有抗性的原生動物的出現(xiàn)和擴散、以及治療藥的副作用等問題，因此迫切希望獲得有效的藥物。
例如，由于現(xiàn)在可以使用的利什曼病治療劑-葡萄糖酸銻(Pentostam)在分子內(nèi)具有銻原子，因此不可避免治療的副作用-銻中毒。非洲錐蟲病(非洲睡眠病)的初期治療中可以使用的美拉胂醇(Melarsoprol)在分子內(nèi)含有砷原子，因此存在著引起作為副作用的砷中毒這樣的問題。而且，這些疾病中，有些是會影響到正常的社會生活的重癥疾病，甚至是需要護理的臥床不起的疾病、以及會發(fā)展成致死性癥狀的疾病，因此必須要開發(fā)即時的化學療法制劑。
已知本發(fā)明的藥物組合物中含有的通式(1)表示的化合物是對癌細胞具有高選擇性的抗腫瘤劑(例如，參照歐洲專利第527494號公報，特開平5-117148號公報，和美國專利第5861424號公報。)，但是并不知道其作為寄生蟲性的原生動物感染病的預(yù)防藥或治療藥的用途。另一方面，本發(fā)明人弄清出了下述通式(3)表示的若丹菁(Rhodacyanine)化合物對瘧疾和利什曼病顯示出治療效果(例如，參照專利文獻特開2000-191531號公報，特開2003-034640號公報，特開2003-034641號公報和特開2003-034642號公報。)，但是幾乎沒有了解寄生蟲感染癥與藥物的效果之間的因果關(guān)系，在這種現(xiàn)狀下，要發(fā)現(xiàn)對原生動物感染病有效的化合物的結(jié)構(gòu)極為困難。也就是說、本發(fā)明的通式(1)表示的化合物是否顯示出對原生動物感染病的效果完全不清楚，絕不是可以預(yù)想得到的。
化1
(式中、R7和R9分別獨立地表示烷基，R8表示烷基、芳基、或雜環(huán)基，C和D分別獨立地表示用于形成5元或6元雜環(huán)的原子團，P表示生理學上可允許的陰離子，a表示使分子整體的電荷為零所必需的0～2的整數(shù)、b表示0或1。)專利文獻1歐洲專利第527494號公報專利文獻2特開平5-117148號公報專利文獻3美國專利第5861424號公報專利文獻4特開2000-191531號公報專利文獻5特開2003-034640號公報專利文獻6特開2003-034641號公報專利文獻7特開2003-034642號公報發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的問題在于提供對寄生性的原生動物感染病具有高選擇毒性并且具有高預(yù)防或治療效果的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物。
用于解決問題的方法本申請發(fā)明人為了解決上述問題，就各種各樣的化合物，鑒定了成為病因的原生動物的增殖效果，而且，反復進行了鑒定作為副作用的指標的哺乳類細胞的細胞毒性的研究，結(jié)果是，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的通式(1)表示的化合物對寄生性的原生動物感染病非常有效，從而完成本發(fā)明。
也就是說，本發(fā)明涉及[1]原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于含有下述通式(1)表示的化合物作為有效成分；化2
(式中、R表示烷基、芳基或雜環(huán)基，A和B，各自獨立地表示含有至少1個不同原子的5元環(huán)或6元環(huán)、或其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)，Y表示S，O，Se，或-NR1-(R1表示烷基、芳基或雜環(huán)基)，L1，L2，L3，L4和L5各自獨立地表示次甲基，Q表示生理學上可允許的陰離子，k表示使分子整體的電荷為零所必需的0～2的整數(shù)，p和q分別表示在0～3范圍內(nèi)且p和q之和為1以上6以下的整數(shù)。)；和[2]上述[1]中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于L1和/或L5為取代次甲基，構(gòu)成L1和A的原子和/或構(gòu)成L5和B的原子結(jié)合形成5或6元環(huán)，和[3]上述[1]或[2]中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于通式(1)表示的化合物是下述通式(2)表示的化合物；化3
(式中、R2和R3各自獨立地表示烷基，X1和X2各自獨立地表示S，O，Se，-CH＝CH-、-CR4R5-(R4和R5各自獨立地表示烷基。)、或-NR6-(R6表示烷基、芳基、或雜環(huán)基。)，Z1和Z2各自獨立地表示5元環(huán)或6元環(huán)、或為了形成在其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)所必需的原子團，m和n分別表示0或1。)。
此外，本發(fā)明還涉及上述[3]中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物y，其特征在于[4]L1和/或L5為取代次甲基，L1和R2和/或L5和R3結(jié)合從而形成5或6元環(huán)；和[5]上述[1]～[4]中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于Q是鹵素離子、磺酸離子、或羧酸離子；和[6]上述[1]～[5]任一項中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于原生動物寄生感染病是瘧疾、利什曼病、非洲錐蟲病、或美洲錐蟲病。
發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，可以提供一種原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其對寄生性的原生動物感染病具有高選擇毒性且具有高預(yù)防或治療效果。
具體實施例方式
作為本發(fā)明的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物(以下、單獨稱為本發(fā)明的藥物組成)，如果是含有下述通式(1)表示的化合物作為有效成分的藥物組合物，沒有特別的限定，可以含有1種，也可以含有2種以上通式(1)表示的化合物，通常，還可以同時含有藥物上可允許的載體或稀釋劑。
化4
通式(1)中，R表示烷基、芳基或雜環(huán)基。作為通式(1)的R表示的烷基，優(yōu)選碳數(shù)為1～15的烷基，更優(yōu)選碳數(shù)為1～7的烷基，可以是直鏈狀，分支狀，也可以是環(huán)狀。這種烷基可以被取代，作為優(yōu)選的取代基，可以例舉有碳數(shù)為1～15的烷基、碳數(shù)為2～15的烯基、碳數(shù)為2～15的炔基、碳數(shù)為1～15的烷氧基、碳數(shù)為6～15的芳氧基、鹵素原子(氯、溴、氟、碘等)、碳數(shù)為6～15的芳基、羥基、氨基、烷基或用芳基取代的氨基、酰氨基、磺酰氨基、氨基甲?；被酋；?、羧基、碳數(shù)為2～15的烷氧羰基、碳數(shù)為2～15的酰氧基、5元或6元的雜環(huán)(吡咯環(huán)、呋喃環(huán)、哌啶環(huán)、嗎啉環(huán)、吡啶環(huán)等)、氰基、硝基等，但是它們也可以再互相取代。作為R表示的具體的烷基，可以例舉有甲基、乙基、羥乙基、2-丙烯基、芐基、丙基、丁基等。
作為通式(1)的R表示的芳基、優(yōu)選是碳數(shù)為5～15的芳基，更優(yōu)選是碳數(shù)為6～10的芳基。這種芳基可以是被取代的，作為取代基，可以例舉有與上述烷基中相同的取代基。作為R表示的具體的芳基，可以例舉有苯基、甲苯基、p-氯苯基、1-萘基、2-萘基等。
作為通式(1)的R表示的雜環(huán)基，可以是飽和環(huán)，也可以是不飽和環(huán)，優(yōu)選5～8元環(huán)，更優(yōu)選5元環(huán)或6元環(huán)。作為不同原子，可以例舉有氮原子、氧原子、硫原子、硒原子、碲原子、磷原子，但是優(yōu)選氮原子、氧原子、硫原子、硒原子。這種雜環(huán)基可以是被取代的雜環(huán)基，作為取代基，與上述烷基中相同的取代基。作為R表示的具體的雜環(huán)基，可以例舉有吡咯基、呋喃基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、吡啶基、吡咯烷基等。
通式(1)中，A和B各自獨立地表示含有至少1個不同原子的5元環(huán)或6元環(huán)，或其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)。作為通式(1)的A和B表示的含有至少1個不同原子的5元環(huán)或6元環(huán)可以是飽和環(huán)，也可以是不飽和環(huán)，作為包含于這種5元環(huán)或6元環(huán)中的不同原子，可以例舉有氮原子、氧原子、硫原子、硒原子、碲原子、硅原子、磷原子等，優(yōu)選含有至少一個氮原子。此外，作為A和B表示的上述5元環(huán)或6元環(huán)中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)中的3～8元環(huán)可以是飽和環(huán)，也可以是不飽和環(huán)，例如，可以例舉有環(huán)丙烷環(huán)、環(huán)丙烯環(huán)、環(huán)丁烷環(huán)、環(huán)丁烯環(huán)、環(huán)戊烷環(huán)、環(huán)戊烯環(huán)、環(huán)己烷環(huán)、環(huán)己烯環(huán)、環(huán)庚烷環(huán)、環(huán)庚烯環(huán)、環(huán)辛烷環(huán)、環(huán)辛烯環(huán)、苯環(huán)、萘環(huán)、蒽環(huán)、菲環(huán)、噻吩環(huán)、吡啶環(huán)等，這其中尤為優(yōu)選5元環(huán)或6元環(huán)。此外，A和B可具有1個或2個以上的取代基，作為這種取代基，可以例舉有與通式(1)的R表示的烷基的取代基相同的取代基。
通式(1)中，Y表示S，O，Se或-NR1-，其中，優(yōu)選S或O。并且，R1表示烷基、芳基或雜環(huán)基，分別與通式(1)的R表示的烷基、芳基或雜環(huán)基意義相同。
通式(1)中，L1，L2，L3，L4和L5各自獨立地表示表示次甲基，可具有取代基。作為取代基，優(yōu)選可以例舉有碳數(shù)為1～15的烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)、碳數(shù)為6～15的芳基(例如，苯基、甲苯基、萘基等)、鹵素原子(氯、溴、氟和碘)、碳數(shù)為2～15的烯基(例如乙烯基、1-丙烯基等)、碳數(shù)為2～15的炔基(例如，乙炔基等)、碳數(shù)為1～15的烷氧基(例如，甲氧、乙氧基等)。而且，L1為取代次甲基時，可以通過構(gòu)成L1和A的原子結(jié)合形成5元環(huán)或6元環(huán)，同樣，L5為取代次甲基時，可以通過構(gòu)成L5和B的原子結(jié)合形成5元環(huán)或6元環(huán)，作為這種5元環(huán)或6元環(huán)，可以例舉有5元雜環(huán)(例如，吡咯啉環(huán)等)和6元雜環(huán)(例如，四氫化吡咯烷環(huán)、惡嗪環(huán)等)。
通式(1)中，Q表示生理學上可允許的陰離子。所謂這種生理學上可允許的陰離子，是指在給接受者施用通式(1)表示的化合物時無毒，并且使通式(1)表示的化合物溶解于水性系統(tǒng)的離子。作為Q表示的生理學上可允許的陰離子，可以例舉有，例如，氯離子、溴離子和碘離子等鹵素離子；甲磺酸離子、三氟甲磺酸離子、p-甲苯磺酸離子、萘磺酸離子、2-羥乙烷磺酸離子等脂肪族和芳香族磺酸離子等磺酸離子；環(huán)己烷氨基磺酸離子等氨基磺酸離子；甲基硫酸離子和乙基硫酸離子等硫酸離子；硫酸氫離子；硼酸離子；二乙基磷酸離子和甲基氫磷酸離子等烴基和二烴基磷酸離子；三甲基吡咯啉酸離子等吡咯啉酸離子；羧酸離子(可以合適使用取代了羧基和羥基的羧酸離子的)；碳酸離子；碳酸氫離子和氫氧化物離子；醋酸離子；丙酸離子；戊酸離子；檸檬酸離子；馬來酸離子；富馬酸離子；乳酸離子；琥珀酸離子；酒石酸離子；安息香酸離子，并且優(yōu)選鹵素離子、磺酸離子、或羧酸離子。
通式(1)中，k表示使分子整體的電荷為零所必需的0～2的整數(shù)、p和q分別表示在0～3范圍內(nèi)且p和q之和為1以上6以下的整數(shù)。
并且，上述通式(1)表示的化合物優(yōu)選下述通式(2)表示的化合物。
化5
通式(2)中、R2和R3各自獨立地表示烷基，與通式(1)的R表示的烷基意義相同。并且，可以通過構(gòu)成L1和R2的原子結(jié)合形成5元環(huán)或6元環(huán)，同樣，L5為取代次甲基時，可以通過構(gòu)成L5和R3的原子結(jié)合形成5元環(huán)或6元環(huán)。作為通過L1和R2，L5和R3的結(jié)合形成的環(huán)，優(yōu)選，可以例舉有5元雜環(huán)(例如，吡咯啉環(huán)等)和6元雜環(huán)(例如，四氫化吡咯烷環(huán)、惡嗪環(huán)等)。
通式(2)中、X1和X2各自獨立地表示S，O，Se，-CH＝CH-、-CR4R5、或-NR6，R4和R5各自獨立地表示烷基，R6表示烷基、芳基或雜環(huán)基。R4～R6表示的烷基，R6表示的芳基雜環(huán)基，與通式(1)的R表示的意義相同。
通式(2)中、Z1和Z2各自獨立地表示5元環(huán)或6元環(huán)、或為了形成其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)所必需的原子團。所謂由Z1和Z2表示的原子團形成的5元環(huán)或6元環(huán)是指在通式(2)表示的化合物的含有N，X1，Z2或N+，含有X2，Z2的各個環(huán)狀部上形成的環(huán)，作為Z1和Z2、具體可以例舉有，亞甲基、乙烯基、亞乙烯基等。
作為由Z1和Z2表示的原子團形成的5元環(huán)或6元環(huán)為雜環(huán)的具體實例，可以例舉有噻唑類環(huán)(例如，噻唑、4-甲基噻唑、4-苯基噻唑、4，5-二苯基噻唑、4，5-二甲基噻唑等)、苯并噻唑類環(huán)(例如，苯并噻唑、5-甲基苯并噻唑、5-苯基苯并噻唑、5-甲氧苯并噻唑、4-氟代苯并噻唑、5，6-二氧亞基苯并噻唑、5-硝基苯并噻唑、5-三氟甲基苯并噻唑、5-甲氧羰基苯并噻唑、6-羥基苯并噻唑、5-氰基苯并噻唑、5-碘苯并噻唑等)、萘并惡二噻戊噻唑類環(huán)(例如，α-萘并惡二噻戊噻唑、β-萘并惡二噻戊噻唑、γ-萘并惡二噻戊噻唑、5-甲氧-β-萘并惡二噻戊噻唑、8-甲氧-α-萘并惡二噻戊噻唑、6-甲氧-8-醋酸基-β-萘并惡二噻戊噻唑、8，9-二羥基-β-萘并惡二噻戊噻唑等)、惡唑類環(huán)(例如，4-甲基惡唑、4-苯基惡唑、4，5-二苯基惡唑、4-苯氧基惡唑等)、苯并惡唑類環(huán)(例如，苯并惡唑、5-氯苯并惡唑、5，6-二甲基苯并惡唑、6-羥基苯并惡唑、5-苯基苯并惡唑等)、萘并惡唑類環(huán)(例如，α-萘并惡唑、β-萘并惡唑、γ-萘并惡唑等)、硒唑類環(huán)(例如，4-甲基硒唑、4-苯基硒唑等)、苯硒唑類環(huán)(例如，苯硒唑、5-氯苯硒唑、5，6-二甲基苯硒唑、6-羥基苯硒唑、5-苯基苯硒唑等)、噻唑啉類環(huán)(例如，噻唑啉、4，4-二甲基噻唑啉等)、2-吡啶類環(huán)(例如，2-吡啶、5-甲基-2-吡啶、5-甲氧-2-吡啶、4-氯-2-吡啶、5-氨基甲酰-2-吡啶、5-甲氧羰基-2-吡啶、4-乙酰氨基-2-吡啶、6-甲硫基-2-吡啶、6-甲基-2-吡啶等)、4-吡啶類環(huán)(例如，4-吡啶、3-甲氧-4-吡啶、3，5-二甲基-4-吡啶、3-氯-4-吡啶、3-甲基-4-吡啶等)、2-喹啉類環(huán)(例如，2-喹啉、6-甲基-3-喹啉、6-氯-2-喹啉、6-乙氧-2-喹啉、6-羥基-2-喹啉、6-硝基-2-喹啉、6-乙酰氨基-2-喹啉、8-氟代-2-喹啉等)、4-喹啉類環(huán)(例如，4-喹啉、6-甲氧-4-喹啉、6-乙酰氨基-4-喹啉、8-氯-4-喹啉、8-三氟甲基-4-喹啉等)、1-異喹啉類環(huán)(例如，1-異喹啉、6-甲氧-1-異喹啉、6-乙酰氨基-1-異喹啉、6-氯-1-異喹啉等)、3，3-二烷基假吲哚(ジアルキルインドレニン)類環(huán)(例如，3，3-二甲基假吲哚、3，3，7-三甲基假吲哚、5-氯-3，3-二甲基假吲哚、5-乙氧羰基-3，3-二甲基假吲哚、5-硝基-3，3-二甲基假吲哚、3，3-二甲基4，5-苯撐假吲哚、3，3-二甲基-6，7-苯撐假吲哚、5-乙酰氨基-3，3，-二乙基假吲哚、5-二乙基氨基-3，3-二丙基假吲哚、5-苯甲酰氨基-3-乙基-3-甲基假吲哚等)、咪唑類環(huán)(例如，咪唑、1-甲基-4-苯基咪唑、1-芐基-4，5-二甲基咪唑等)、苯并咪唑類環(huán)(例如，苯并咪唑、1-甲基苯并咪唑、1-甲基-5-三氟甲基苯并咪唑、1-乙基-5-氯苯并咪唑、1-苯基-5-甲氧羰基苯并咪唑、1-乙基-5-二甲基氨基苯并咪唑等)、萘并咪唑類環(huán)(例如，1-甲基-α-萘并咪唑、1-甲基-5-甲氧-β-萘并咪唑等)等。
并且，Z1和Z2也可以是上述5元環(huán)或6元環(huán)中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)、優(yōu)選縮合了5或6元環(huán)的縮合環(huán)，作為這種1個或2個以上的3～8元環(huán)、可以是飽和環(huán)，也可以是不飽和環(huán)，可以例舉有，例如，環(huán)丙烷環(huán)、環(huán)丙烯環(huán)、環(huán)丁烷環(huán)、環(huán)丁烯環(huán)、環(huán)戊烷環(huán)、環(huán)戊烯環(huán)、環(huán)己烷環(huán)、環(huán)己烯環(huán)、環(huán)庚烷環(huán)、環(huán)庚烯環(huán)、環(huán)辛烷環(huán)、環(huán)辛烯環(huán)、苯環(huán)、萘環(huán)、蒽環(huán)、菲環(huán)、噻吩環(huán)、吡啶環(huán)等。而且，上述5元環(huán)、6元環(huán)和縮合環(huán)可以具有1個或2個以上的取代基，作為這種取代基，可以例舉有與通式(1)的R表示的烷基的取代基同樣的取代基。
通式(2)中，m和n分別表示0或1。
上述本發(fā)明的通式(1)和通式(2)表示的化合物，可以按照歐洲專利第527,494號、特開平5-117148號、美國專利公開號692,347號；Knott(E.B.Knott)等人的非專利文獻J.CHEm.SOC.，4762頁(1952年)、同949頁(1955年)、和川上等人所著的非專利文獻J.MED.C hEM.，3151頁(1997年)中公開的，從公知的起始原料，容易地制備，該公開內(nèi)容全部記載于本說明書中。
作為本發(fā)明的通式(1)和通式(2)表示的化合物的典型的例子，可以例舉有以下的化合物，但是這些化合物不限于此。
化6

化7

化8
本發(fā)明的藥物組合物可以有效用于瘧疾、利什曼病、非洲錐蟲病(非洲睡眠病)、美洲錐蟲病(恰加斯(氏)病(Chagas))、淋巴絲蟲病、巴貝西蟲病、其它病因為因寄生性的原生動物的感染的各種類型的疾病的預(yù)防或治療。本發(fā)明的藥物組合物，根據(jù)需要，可以含有以往一直使用的抗原生動物感染病劑。作為這種以往一直使用的抗原生動物感染病劑的最佳實例，可以例舉有氯喹、甲氟喹、蒿屬素、阿托伐醌、乙嘧啶(息瘧定)(以上為瘧疾的治療藥)；蘇拉明、噴他脒(pentamidine)(以上為非洲錐蟲病的治療藥)芐硝唑(Benznidazol)、伯氨喹(以上、為美洲錐蟲病的治療藥)、葡萄糖酸銻(Pentostam)、兩性霉素B、滅特復星(Miltefosine)(以上、為利什曼病的治療藥)等。
并且，作為可以與本發(fā)明的通式(1)和通式(2)表示的化合物一起使用的藥物載體或稀釋劑，可以使用以往可一般使用的藥物載體或稀釋劑，可以例舉有，例如，葡萄糖；蔗糖；乳糖；乙醇；甘油；甘露糖醇；山梨糖醇；季戊四醇；二乙二醇、丙二醇、二丙二醇、聚乙二醇400、多種聚乙二醇；三月桂酸甘油酯、和二硬脂酸甘油酯等脂肪酸的單、二和三甘油酯；果膠；淀粉；精氨酸；木糖；滑石；石松子；橄欖油、花生油、蓖麻油、玉米油、紅花油、小麥麥芽油、芝麻油、棉籽油、葵花油和魚肝油等油和油脂；明膠；卵磷脂；二氧化硅；纖維素；甲羥基丙基纖維素、甲基纖維素、羥基乙基纖維素等纖維素衍生物；硬脂酸鈣、月桂酸鈣、油酸鎂、棕櫚酸鈣、二十二酸鈣和硬脂酸鎂等具有12～22個碳原子脂肪酸鹽；環(huán)糊精類(例如，α-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、γ-環(huán)糊精、羥基乙基-β-環(huán)糊精、羥基丙基-β-環(huán)糊精、二羥基丙基-β-環(huán)糊精、羧甲基乙基-β-環(huán)糊精、環(huán)舞低聚糖<シクロアワオドリン，cycloawaodorin>、和二甲基-β-環(huán)糊精等)；乳化劑(例如，具有2～22，尤其是10～18個碳原子的飽和和不飽和脂肪酸和與甘醇、甘油、二乙二醇、季戊四醇、乙醇、丁醇、十八烷醇等具有1～20個碳原子的單價的脂肪醇或多價醇的酯；和二甲聚硅氧烷等硅酮等。
并且，本發(fā)明的通式(1)和通式(2)表示的化合物的藥學的有效量和給藥方法或給藥方法，依賴于感染病的成因的寄生原生動物的種類、原生動物的寄生部位、病狀的重量、治療方法、患者的年齡、體重、性別、全面的健康狀態(tài)、和患者的(遺傳的)人種的背景。然而，一般，本發(fā)明的給藥量為1～2000mg，更一般為50～500mg/日/體重70kg，作為合適的給藥方法、可以例舉有，例如，以溶于5％葡萄糖水溶液的形式或伴隨上述的載體或稀釋劑的形式，在靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下注射、口服、或涂布在皮膚上等方法。
以下，為了闡明本發(fā)明的通式(1)和通式(2)表示的化合物及其藥物組合物的有效性，公開了實施例，但本發(fā)明的技術(shù)的范圍不限于這些實施例。
實施例11-1.藥物感受性熱帶熱瘧疾原生動物的培養(yǎng)本實施例中，采用了惡性瘧原蟲(Plasmodium Falciparum)F CR-3株的原生動物。實驗中使用的培養(yǎng)基為在經(jīng)過濾滅菌的RPMI-1640培養(yǎng)基中，將pH調(diào)整成7.4，以終濃度為10％添加人血清制成的培養(yǎng)基。瘧疾原生動物的培養(yǎng)在O2濃度5％、CO2濃度5％、N2濃度90％、溫度36.5℃下進行。
1-2.藥物感受性熱帶熱瘧疾原生動物增殖抑制篩選試驗通過離心分離收集經(jīng)培養(yǎng)的瘧疾原生動物感染紅血球，用含有血清的培養(yǎng)基進行清洗后、加入非感染紅血球，初期感染率為0.3％。此時的血球比容值為3％。試驗中使用的本發(fā)明化合物、陽性對象藥(氯喹、奎寧)溶解于二甲亞砜(DMSO)，作為預(yù)定濃度的試驗液。在24孔培養(yǎng)板中以平均5～10μL加入試驗液。對照，以10μL/孔加入DMSO。將試驗液分成兩份。接著，加入預(yù)先調(diào)整成預(yù)定濃度的熱帶熱瘧疾原生動物培養(yǎng)液，平靜地進行移液，使之均一地懸浮于培養(yǎng)基中。培養(yǎng)板在CO2-O2-N2(5％，5％，90％)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時后，對各孔制成薄層涂抹標本，進行Diff-Quik染色后，在顯微鏡(油浸、1,000×)下測量，計算試驗液添加組和對照地瘧疾原生動物感染率。根據(jù)按上述求得的瘧疾原生動物感染率用下式計算出增殖抑制率，求出50％增殖抑制濃度(EC50)。
增殖抑制率(％)＝{1-(b-a)/(C-a)}×100a初期感染率b試驗液添加時的感染率c對照的感染率1-3.小鼠FM3A細胞增殖抑制試驗使用小鼠乳癌來源的FM3A細胞的野生株-F28-7株。培養(yǎng)基為在ES培養(yǎng)基中以2％的終濃度添加除去了補體的胎兒牛血清而成的培養(yǎng)基，在CO2濃度5％、37℃下進行培養(yǎng)。
這種條件下的FM3A細胞的倍增時間為約12小時。進行前述培養(yǎng)，用培養(yǎng)基將進入對數(shù)增殖期的細胞稀釋成5×104cells/ML。試樣使用瘧疾活性測定時調(diào)制的試樣。在24孔培養(yǎng)板中以平均5～10μL加入試樣溶液(如果加入培養(yǎng)基等，最終濃度成為1×10-4～1×10-5M。)?；衔锓殖蓛煞荩鳛閷φ?，同時制備加入了10μLDMSO的孔。接著，加入平均990～995μL預(yù)先制備的培養(yǎng)細胞懸浮液，平靜地進行移液培養(yǎng)基，使之均一地懸浮。48小時培養(yǎng)后，用細胞控制器(cell controller)(CC-108，Toa.Medical Electrics公司制)計算各孔的細胞數(shù)，用下式計算出增殖率，算出50％增殖抑制率(EC50)。
增殖率(％)＝{(C-A)/(B-A)}×100A初期細胞數(shù)B2天后的對照的細胞數(shù)C添加試樣2天后的細胞數(shù)根據(jù)添加了試樣的孔的細胞數(shù)和對照的細胞數(shù)計算出細胞增殖抑制活性。由此評價試樣的細胞毒性。
1-4.對藥物感受性瘧疾的藥效判定根據(jù)試樣對于藥物感受性熱帶熱瘧疾原生動物和小鼠FM3A細胞的EC50值評價試樣的抗瘧疾作用。用下式計算可以作為對藥物感受性瘧疾原生動物的選擇毒性的指標使用的化學療法系數(shù)，進行了藥效判定。
化學療法系數(shù)＝(試樣對于小鼠FM3A細胞的EC50值)÷(試樣對于藥物感受性熱帶熱瘧疾原生動物的EC50值)試樣對于本發(fā)明化合物和陽性對象藥的藥物感受性熱帶熱瘧疾原生動物和小鼠FM3A細胞的各EC50值、以及選擇毒性系數(shù)示于表1。
表1

本發(fā)明的化合物顯示出與已知藥物奎寧和氯喹同等或其以上的增殖抑制效果。而且，并沒有顯示出對正常細胞的強毒性。
實施例22-1.氯喹抗性熱帶熱瘧疾原生動物的培養(yǎng)本實施例中使用了惡性瘧原蟲(Plasmodium Falciparum)K1株的原生動物。實驗中使用的培養(yǎng)基是在經(jīng)過濾滅菌地RPMI-1640培養(yǎng)基中以5％的終濃度添加人血清而形成的培養(yǎng)基。瘧疾原生動物的培養(yǎng)在O2濃度3％、CO2濃度4％、N2濃度93％、溫度為37℃下進行。
2-2.氯喹抗性熱帶熱瘧疾原生動物增殖抑制篩選試驗試驗中使用的本發(fā)明化合物-陽性對象藥(氯喹)溶解于DMSO中，制成預(yù)定濃度的試驗液。通過離心分離收集培養(yǎng)的瘧疾原生動物感染紅血球，用非感染紅血球稀釋，初期感染率為0.15％。此時的血球比容值為2.5％。在96孔培養(yǎng)板的孔中添加200μL的瘧疾感染培養(yǎng)液，加入含有預(yù)定濃度的藥物的試驗液或不含藥物的DMSO進行調(diào)整。試驗液制成雙份。于37℃培養(yǎng)48小時后，在各孔中加入0.5μCi的放射性的鋰(3H)表征的次黃嘌呤。進而，在24小時同條件下培養(yǎng)后，玻璃纖維過濾器上收集，用蒸留水清洗。用β平板液體閃爍計數(shù)器(Wallac公司制)測量放射線強度，計算試驗液添加組和對照的瘧疾原生動物感染率。根據(jù)按上述求得的瘧疾原生動物感染率用下式計算出增殖抑制率，求出50％增殖抑制濃度(EC50)。
增殖抑制率(％)＝{1-(b-A)/(C-A)}×100a初期感染率b試驗液添加時的感染率c對照的感染率2-3.大鼠L6細胞增殖抑制試驗使用大鼠來源的L6細胞(大鼠骨骼成肌細胞)。培養(yǎng)基為在RPMI1640培養(yǎng)基中以1％的終濃度添加L-谷氨酰胺(200mM)，以10％的終濃度添加胎兒牛血清制成的培養(yǎng)基，在CO2濃度5％、37℃下培養(yǎng)。將試驗中使用的本發(fā)明化合物或?qū)ο笏幦芙庥贒MSO中，制成預(yù)定濃度的試驗液。進行前述培養(yǎng)，將含有進入對數(shù)增殖期的細胞的培養(yǎng)基分在96孔培養(yǎng)板的孔中，接著加入含有預(yù)定濃度的藥物的試驗液或不合藥物的DMSO。試驗液分成兩份。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)板72小時后，檢測增殖抑制活性。檢測按下述方式進行。
在各孔中加入10μL的Alamar Blue水溶液，再培養(yǎng)2小時。接著，在熒光微板讀數(shù)器(SpectramaxGemeni XS；美國molecular device公司制)中裝備培養(yǎng)板，用536nM的激發(fā)波長照射，測定588nM的熒光強度，計算試驗液添加組和對照的L6細胞的殘存率。根據(jù)按上述求出的細胞殘存率用下式計算對L6細胞的增殖抑制率，求出50％增殖抑制濃度(EC50)。
增殖抑制率(％)＝{(C-A)/(B-A)}×100A初期細胞數(shù)B3天后的對照的細胞數(shù)C添加試樣3天后的細胞數(shù)2-4.對氯喹抗性瘧疾的藥效判定根據(jù)試樣對于氯喹抗性熱帶熱瘧疾原生動物和大鼠L6細胞的EC50值評價試樣的抗瘧疾作用。用下式計算可以作為對氯喹抗性瘧疾原生動物的選擇毒性的指標使用的化學療法系數(shù)，進行了藥效判定。
化學療法系數(shù)＝(試樣對于大鼠L6細胞的EC50值)÷(試樣對于氯喹抗性熱帶熱瘧疾原生動物的EC50值)試樣對于本發(fā)明化合物和陽性對象藥的氯喹感受性熱帶熱瘧疾原生動物和大鼠L5細胞的各EC50值、以及選擇毒性系數(shù)示于表2。
表2


本發(fā)明的化合物顯示出與已知藥物氯喹同等或其以上的增殖抑制效果。而且，并沒有顯示出對正常細胞的強毒性。也就是說，可以評定為作為抗藥物抗性瘧疾藥是有效的。
實施例33-1.非洲錐蟲病原生動物的培養(yǎng)本實施例中使用了羅德西亞布氏錐蟲(Trypanosoma brucei rhodensiense)(STIB900株)的原生動物的血流棲息型錐鞭毛體。實驗中使用的培養(yǎng)基采用在經(jīng)過濾滅菌的MEM培養(yǎng)基中添加25mM的N-2-羥基乙基哌嗪-2-乙磺酸(HEPES)、1g/L的葡萄糖、1％的MEM非必需氨基酸、0.2mM的2-巰基乙醇、2mM的丙酮酸鈉炎、0.1mM的次黃嘌呤和15％熱處理馬血清制成的培養(yǎng)基。原生動物的培養(yǎng)在CO2濃度為5％的空氣中，在溫度為37度下進行。
3-2.非洲錐蟲病原生動物增殖抑制篩選試驗將試驗中使用的本發(fā)明化合物、陽性對象藥(美拉胂醇(Melarsoprol))溶解于二甲亞砜(DMSO)中，制成預(yù)定濃度的試驗液。在96孔培養(yǎng)板的孔中加入含有原生動物的個數(shù)為8×103個的培養(yǎng)基和含有預(yù)定濃度的藥物的試驗液或不含藥物的DMSO，分別加入培養(yǎng)基，使終濃度為100μL，進行調(diào)整。將試驗液分成兩份。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)板72小時后，檢測增殖抑制活性。檢測按下述方式進行。在各孔中加入10μL的Alamar Blue水溶液，再培養(yǎng)2小時。接著，將培養(yǎng)板培養(yǎng)板安裝于熒光微板讀數(shù)器(Spectramax Gemeni XS；美國molecular device公司制)中，用536nM的激發(fā)波長照射，測定588nM的熒光強度，計算試驗液添加組和對照的錐蟲屬原生動物感染率。根據(jù)按上述求出的原生動物感染率用下式計算增殖抑制率，求出50％增殖抑制濃度(EC50)。
增殖抑制率(％)＝{1-(b-A)/(C-A)}×100a初期感染率b試驗液添加時的感染率c對照的感染率3-3.非洲錐蟲病的藥效判定用下式計算可以作為對非洲錐蟲病原生動物的選擇毒性的指標使用的選擇毒性系數(shù)，進行了藥效判定。
選擇毒性系數(shù)＝(試樣對于大鼠L6細胞的EC50值)÷(試樣對于非洲錐蟲病原生動物的EC50值)試樣對于本發(fā)明化合物和陽性對象藥的非洲錐蟲病原生動物和大鼠L6細胞的各EC50值，以及選擇毒性系數(shù)示于表3。
表3


本發(fā)明的化合物顯示出與已知藥物美拉胂醇(Melarsoprol)同等的非洲錐蟲病增殖抑制效果。并且，對正常細胞顯示出比已知藥物更弱的毒性、或同等毒性。也就是說，可以評定為副作用少的抗非洲錐蟲病(非洲睡眠病)藥是有效的。并且，由于這些發(fā)明物的分子內(nèi)沒有砷原子，因此不會給患者造成砷中毒等嚴重的副作用。
實施例44-1.美國錐蟲屬原生動物的培養(yǎng)本實施例中使用了克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi)(Tulahuen C2C4株)的原生動物的感染于大鼠L6細胞的無鞭毛體和錐鞭毛體。實驗中使用的培養(yǎng)基為在含有L6細胞的RPMI1640培養(yǎng)基上以1％的終濃度添加L-谷氨酰胺(200mM)，以10％的終濃度添加胎兒牛血清，37℃下培養(yǎng)。
4-2.美國錐蟲屬原生動物增殖抑制篩選試驗將試驗中使用的本發(fā)明化合物、陽性對象藥(芐硝唑(Benznidazol))溶解于DMSO中，制成預(yù)定濃度的試驗液。在96孔培養(yǎng)板的孔中加入含有原生動物的個數(shù)為5×103個的培養(yǎng)基，進行48小時前培養(yǎng)。交換培養(yǎng)基后，加入含有預(yù)定濃度的藥物的試驗液或不含藥物的DMSO。將試驗液分成兩份。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)板96小時后，檢測增殖抑制活性。檢測按下述方式進行。
在各孔中加入50μL的CPRG/Nonidet，再放置2～6小時。接著，將培養(yǎng)板培養(yǎng)板安裝于熒光微板讀數(shù)器中，測定540nM的吸光度，計算試驗液添加組和對照的錐蟲屬原生動物感染率，根據(jù)按上述求出的原生動物感染率用下式計算增殖抑制率，求出50％增殖抑制濃度(EC50)。
增殖抑制率(％)＝{1-(b-A)/(C-A)}×100a初期感染率b試驗液添加時的感染率c對照的感染率4-3.美國錐蟲屬的藥效判定用下式計算可以作為對美國錐蟲屬原生動物的選擇毒性的指標使用的選擇毒性系數(shù)，進行了藥效判定。
選擇毒性系數(shù)＝(試樣對于大鼠L6細胞的EC50值)÷(試樣對于美國錐蟲屬原生動物的EC50值)試樣對于本發(fā)明化合物和陽性對象藥的美國錐蟲屬原生動物和大鼠L6細胞的各EC50值，以及選擇毒性系數(shù)示于表4。
表4


本發(fā)明的化合物顯示出與已知藥物芐硝唑(Benznidazol)同等的美國錐蟲屬原生動物增殖抑制效果。而且，對正常細胞毒性也不強。也就是說，可以評定為作為副作用少的抗美國錐蟲屬(恰加斯(氏)病(Chagas))藥是有效的。
實施例55-1.利什曼病原生動物的培養(yǎng)本實施例中使用杜氏利什曼蟲(Leishmania Donovani)(MHOM/ET/67/L82株)。原生動物用敘利亞金地鼠(Syrian Golden hamster)傳代，由其獲得無鞭毛體。實驗中，使用加入了10％經(jīng)加熱處理的胎兒牛血清的SM培養(yǎng)基，調(diào)整成pH5.4，在CO2濃度為5％的空氣下、于37℃進行培養(yǎng)。
5-2.利什曼病原生動物增殖抑制篩選試驗將試驗中使用的本發(fā)明化合物、陽性對象藥(滅特復星(Miltefosine))溶解于DMSO中，制成預(yù)定濃度的試驗液。在96孔培養(yǎng)板的孔中加入含有預(yù)定個數(shù)的原生動物的培養(yǎng)基，進行前處理后，用CASY細胞分析系統(tǒng)(ドイツ·SchaRfe公司制)測量無鞭毛的濃度。然后，含有預(yù)定濃度的藥物的試驗液或不含藥物的DMSO。將試驗液分成兩份。在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)板72小時后，檢測增殖抑制活性。檢測按下述方式進行。
在各孔中加入10μL的Alamar Blue水溶液，再培養(yǎng)2小時。接著，將培養(yǎng)板培養(yǎng)板安裝于熒光微板讀數(shù)器(Spectramax Gemeni XS；美國molecular device公司制)中，用536nM的激發(fā)波長照射，測定588nM的熒光強度，計算試驗液添加組和對照的利什曼病原生動物感染率。根據(jù)按上述求出的原生動物感染率用下式計算增殖抑制率，求出50％增殖抑制濃度(EC50)。
增殖抑制率(％)＝{1-(b-A)/(C-A)}×100a初期感染率b試驗液添加時的感染率c對照的感染率5-3.利什曼病的藥效判定用下式計算可以作為對利什曼病原生動物的選擇毒性的指標使用的選擇毒性系數(shù)，進行了藥效判定。
選擇毒性系數(shù)＝(試樣對于大鼠L6細胞的EC50值)÷(試樣對于利什曼病原生動物的EC50值)試樣對于本發(fā)明化合物和陽性對象藥的利什曼病原生動物和大鼠L6細胞的各EC50值，以及選擇毒性系數(shù)示于表5。
表5


本發(fā)明的化合物顯示出與已知藥物滅特復星(Miltefosine)同等的利什曼病原生動物增殖抑制效果。并且，對正常細胞毒性也弱。也就是說，可以評定為作為副作用少的抗利什曼病藥是有效的。
根據(jù)以上的實施例1～5的結(jié)果，清楚了即使本發(fā)明的化合物通過低用量給藥，也顯示出對寄生性的原生動物感染病的增殖抑制效果，即使通過比顯示出原生動物增殖抑制的用量更高用量的給藥也不會損傷哺乳類細胞。也就是說，由此清楚了本發(fā)明的化合物適于作為原生動物寄生感染病的預(yù)防藥或治療藥。
工業(yè)上利用的可能性如果根據(jù)本發(fā)明，可以提供對寄生性的原生動物感染病具有高選擇毒性，并且具有高預(yù)防或治療效果的原生動物感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物。
權(quán)利要求
1.一種原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于含有下述通式(1)表示的化合物作為有效成分化1
(式中、R表示烷基、芳基或雜環(huán)基，A和B，各自獨立地表示含有至少1個不同原子的5元環(huán)或6元環(huán)、或其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)，Y表示S，O，Se，或-NR1-(R1表示烷基、芳基或雜環(huán)基)，L1，L2，L3，L4和L5各自獨立地表示次甲基，Q表示生理學上可允許的陰離子，k表示使分子整體的電荷為零所必需的0～2的整數(shù)，p和q分別表示在0～3范圍內(nèi)且p和q之和為1以上6以下的整數(shù)。)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于L1和/或L5為取代次甲基，構(gòu)成L1和A的原子和/或構(gòu)成L5和B的原子結(jié)合形成5或6元環(huán)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于通式(1)表示的化合物是下述通式(2)表示的化合物化2
(式中、R2和R3各自獨立地表示烷基，X1和X2各自獨立地表示S，O，Se，-CH＝CH-、-CR4R5-(R4和R5各自獨立地表示烷基。)、或-NR6-(R6表示烷基、芳基、或雜環(huán)基。)，Z1和Z2各自獨立地表示5元環(huán)或6元環(huán)、或為了形成在其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)所必需的原子團，m和n分別表示0或1。)
4.根據(jù)權(quán)利要求3中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于L1和/或L5為取代次甲基，L1和R2和/或L5和R3結(jié)合從而形成5或6元環(huán)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項中記載的原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于Q是鹵素離子、磺酸離子、或羧酸離子。
6.根據(jù)權(quán)利要求求1～5任一項中記載的原蟲寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于原生動物寄生感染病是瘧疾、利什曼病、非洲錐蟲病、或美洲錐蟲病。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種對寄生性的原生動物感染病具有高選擇毒性，并且具有高預(yù)防或治療效果的原生動物感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物。原生動物寄生感染病的預(yù)防或治療用藥物組合物，其特征在于含有下述通式(1)表示的化合物作為有效成分。化1，(式中、R表示烷基、芳基或雜環(huán)基，A和B，各自獨立地表示含有至少1個不同原子的5元環(huán)或6元環(huán)、或其中縮合了1個或2個以上的3～8元環(huán)的縮合環(huán)，Y表示S，O，Se，或－NR
文檔編號A61P33/02GK101031295SQ20058003317
公開日2007年9月5日 申請日期2005年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月4日
發(fā)明者井原正隆, 高須清誠, 普多霍姆·卡尼塔, 北口博司, 川上雅之, 佐藤幸藏 申請人:獨立行政法人科學技術(shù)振興機構(gòu), 富士膠片株式會社