專利名稱：用作用于cdk2和血管生成的抑制劑及用于治療乳腺、結(jié)腸、肺和前列腺癌的二取代吡唑并 ...的制作方法
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本發(fā)明涉及抑制血管生成和/或激酶活性的二取代吡唑并苯并二氮雜類。這些化合物可以用于治療癌性腫瘤，特別是乳腺、結(jié)腸、肺和前列腺癌。
血管生成為新血管在組織或器官中的生成。在正常的生理?xiàng)l件下，人和動物僅在非常特定的、有限的情況下進(jìn)行血管生成。例如，通常在傷口愈合、胎兒和胚胎發(fā)育以及黃體、子宮內(nèi)膜和胎盤的形成中觀察到血管生成。
毛細(xì)血管包含內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞，它們由基膜包圍。血管生成始于由內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞分泌的酶對基膜的侵蝕。然后，內(nèi)襯在血管內(nèi)腔的內(nèi)皮細(xì)胞通過基膜伸出。血管源性的刺激物誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移通過侵蝕的基膜。遷移細(xì)胞在母體血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂和增殖的地方之外形成“芽”。內(nèi)皮芽相互合并，生成毛細(xì)血管袢，從而產(chǎn)生新血管。
不受控制的血管生成是癌癥的標(biāo)志。在1971年，Dr.Judah Folkman提出，腫瘤生長取決于血管生成。參見例如，F(xiàn)olkman，New England Journalof Medicine，2851182-86(1971)。根據(jù)Dr.Folkman，在不生長另外的血管以滋養(yǎng)腫瘤的情況下，腫瘤僅能生長到一定的尺寸。在其最簡單的表述中，該提議指出“一旦發(fā)生了腫瘤‘成活’，腫瘤細(xì)胞群的每次增加必須由在腫瘤上會聚的新毛細(xì)管的增加來進(jìn)行”。目前理解的腫瘤‘成活’是指腫瘤生長的血管前相，其中占幾個(gè)立方毫米體積并且不超過幾百萬個(gè)細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞群可以存活于現(xiàn)存的宿主微脈管上。腫瘤體積超過此相的擴(kuò)大需要誘導(dǎo)新的毛細(xì)血管。例如，小鼠中的早期血管前相中的肺部微轉(zhuǎn)移除了在組織切片上進(jìn)行高倍顯微術(shù)之外是不能檢測的。
早在1945年，Algire，等，J.Nat.Cancer Inst.，673-85(1945)，表明植入小鼠中的皮下透明腔中的腫瘤的生長速率在新血管形成前是慢而線性的，而在新血管形成后是快而接近指數(shù)的。1966年，Dr.Folkman報(bào)道在其中血管不增殖的離體灌住器官中的腫瘤生長被限制到1-2mm3，但當(dāng)它們移植入小鼠中并且成為新血管形成時(shí)，快速膨脹到此體積的＞1000倍。參見例如，F(xiàn)olkman，等，Anals of Surgery，164491-502(1966)。
在無血管角膜中的腫瘤生長緩慢地并且以線性速率生長，但在新血管生長后轉(zhuǎn)為指數(shù)生長。參見例如，Gimbrone，Jr.，等，J.Nat.Cancer Inst.，52421-27(1974))。懸浮于兔眼前房的水性液體中的腫瘤保持活的、無血管的，并且尺寸被限制到＜1mm3。一旦將它們植入虹膜血管床，它們開始新血管生長并且快速生長，在兩周內(nèi)達(dá)到其原始體積的16,000倍。參見例如，Gimbrone，Jr.等，J.Exp.Med.，136261-76。
當(dāng)將腫瘤植入小雞胚胎絨毛尿囊膜上時(shí)，在＞72小時(shí)的無血管相的過程中它們緩慢地生長，但是不超過0.93+0.29mm的平均直徑。在新血管生長開始后的24小時(shí)內(nèi)，發(fā)生快速腫瘤膨脹，并且到第7天，血管化的腫瘤達(dá)到8.0+2.5mm的平均直徑。參見例如，Knighton，British，J.Cancer，35347-56(1977))。
轉(zhuǎn)移灶在兔肝中的血管管型顯示轉(zhuǎn)移灶尺寸的不均勻性，但對于在存在血管化時(shí)的尺寸顯示相對均勻的截止點(diǎn)。腫瘤通常無血管最高到1mm的直徑，但超過該直徑被新血管化。參見例如，Lien，等，Surgery，68334-40(1970)。
在胰腺小孔的β細(xì)胞中發(fā)育癌的轉(zhuǎn)基因小鼠中，血管前增殖性小孔被限制到尺寸＜1mm。在6-7周齡，4-10％的小孔成為新血管生長，并且從這些小孔，達(dá)到超過血管前小孔體積1,000倍的大血管化腫瘤。參見例如，F(xiàn)olkman，等，Nature，33958-61(1989)。
已經(jīng)表明，可以通過抑制血管生成而不是抑制腫瘤細(xì)胞本身的增殖，來治療腫瘤。例如，Kim等，Nature，362841044(1993)表明抗VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)的特異性抗體降低了微血管密度并且導(dǎo)致依賴作為它們血管生成的單一介體(在裸小鼠中)的VEGF的三種人腫瘤生長的“顯著或驚人的”抑制。該抗體不抑制腫瘤細(xì)胞在體外的生長。此外，Hori，等，Cancer，Resp.516180-84(1991)表明抗-bFGF單克隆抗體導(dǎo)致依賴于作為其血管生成的唯一介體的bFGF分泌的小鼠腫瘤生長的70％抑制。該抗體不抑制腫瘤細(xì)胞在體外的生長。還表明bFGF的腹膜內(nèi)注射通過刺激毛細(xì)內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤中的生長而增強(qiáng)了原始腫瘤及其轉(zhuǎn)移灶的生長。缺乏bFGF受體和bFGF的腫瘤細(xì)胞本身不是對于體外的腫瘤細(xì)胞的分裂素。參見例如，Gross，等，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.，3179(1990)。特異的血管生成抑制劑(AGM-1470)抑制體內(nèi)的腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，但比抑制在體外的腫瘤細(xì)胞增殖的活性低得多。與它抑制腫瘤細(xì)胞增殖相比，它以4logs低濃度半最大地(half-maximally)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖。參見例如，Ingber，等，Nature，48555-57(1990)。
還有腫瘤生長與血管生成相關(guān)的間接臨床證據(jù)。例如，轉(zhuǎn)移到玻璃體的人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤發(fā)育成被限制到＜1mm3的無血管螺旋樣體，盡管事實(shí)在于它們是能存活的并且結(jié)合有3H-胸苷(在從摘除的眼中除去并且在體外分析時(shí))。卵巢癌轉(zhuǎn)移至腹膜作為微小的無血管白種子(1-3mm3)。這些植入物很少長得更大，直到它們中的一個(gè)或多個(gè)成為新血管生成的。在乳腺癌(參見例如，Weidner，等，New Eng.J.of Med.，3241-8(1991)；Weidner，等，J.Nat.Cancer Inst.，841875-87(1992))和在前列腺癌(Weidner，等，Am.J. Pathol.，143(2)401-09(1993))中的新血管生成強(qiáng)度與未來的轉(zhuǎn)移灶危險(xiǎn)高度相關(guān)。
在新血管生長前，來自人皮膚黑素瘤的轉(zhuǎn)移灶稀少。新血管生長開始導(dǎo)致病變厚度增大并且轉(zhuǎn)移危險(xiǎn)增加。參見例如，Srivastava，等，Am.J.Pathol.，133419-23(1988))。在膀胱癌中，血管源性蛋白，bFGF的尿水平是比細(xì)胞學(xué)更敏感的狀態(tài)和重大疾病指標(biāo)。參見例如，Nguyen，等，J.Nat.Cancer，Inst.，85241-42(1993)。
血管生成已經(jīng)與大量不同類型的癌癥相關(guān)，所述的癌癥包括實(shí)體瘤和血液運(yùn)載的腫瘤。與血管生成相關(guān)的實(shí)體瘤包括但不限于橫紋肌肉瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，尤因肉瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤和骨肉瘤。血管生成與乳腺癌、前列腺癌、肺癌和結(jié)腸癌相關(guān)。血管生成還與血液運(yùn)載的腫瘤相關(guān)，所述的血液運(yùn)載的腫瘤如白血病，淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤以及各種急性或慢性骨髓腫瘤疾病中的任何一種，其中發(fā)生白血細(xì)胞不受限制的增殖，通常伴隨有貧血、削弱的血液凝固以及淋巴結(jié)、肝和脾的增大。還認(rèn)為，血管生成在骨髓異常中起一定的作用，所述的異常引起白血病、淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤。
童年期最常見的血管源性疾病之一是血管瘤。血管瘤是由新形成血管構(gòu)成的腫瘤。在大多數(shù)情況下，腫瘤是良性的，并且在沒有干預(yù)的條件下退化。在更嚴(yán)酷的情況下，腫瘤發(fā)展到大海綿狀和浸入的形式，并且產(chǎn)生臨床并發(fā)癥。全身形式的血管瘤，多發(fā)性血管瘤，死亡率高?？怪委煹难芰龃嬖?，其不能由目前使用的療法進(jìn)行治療。
因此，清楚的是，血管生成在癌癥的轉(zhuǎn)移中起主要作用。如果能夠抑制或消除血管源性活性，那么盡管腫瘤存在也將不生長。在疾病狀態(tài)下，防止血管生成可以公開由新微血管系統(tǒng)的侵入而導(dǎo)致的損傷。針對血管源性過程的控制的療法可能導(dǎo)致這些疾病的去除或減輕。
正在研究作為治療藥劑的抑制血管生成的幾個(gè)類別的化合物。這些是例如沙利度胺和沙利度胺類似物(USP 6,235,756(The Children’s MedicalCenter Corporation)；6,420,414(The Children’s Medical Center Corporation)；6,476,052(Celgene Corporation))；喹啉酮類(USP 6,774,237(ChironCorporation))；絲氨酸蛋白酶和血管舒緩素(USP 6,544,947(EntreMedInc.))；VEGF類似物和拮抗劑(USP 6,783,953(Janssen Pharmaceutica N.V.)；6,777,534(Children’s Medical Center Corporation))；結(jié)合AngiostatinTM或EndostatinTM的肽或蛋白(USP 6,201,104(EntreMed Inc.))；組織蛋白酶V-樣多肽(USP 6,783,969(Nuvelo Inc.))；其它抗血管形成肽(USP 6,774,211(Abbott Laboratories)；4-苯胺基-喹唑啉類(WO 2002/092578，WO2002/092577，WO 2002/016352，WO 2001/032651，WO 2000/047212(Astrazeneca))；酞嗪類(WO 2004/033042(Novartis)，WO 2003/022282(Novartis)，WO 2002/012227(Astrazeneca)，WO 2001/010859(Bayer)，WO98/35958(Novartis))；異噻唑類(WO 99/62890(Pfizer))；以及二氫吲哚酮類(indolinones)(WO 2001/037820，WO 2000/008202，WO 98/50356，WO96/40116(Sugen Inc.))。
幾篇評論報(bào)道了血管生成抑制劑作為治療藥劑的應(yīng)用。這些文章包括Mazitschek等，Current Opinion in Chemical Biology，8(4)432-441(2004)；Underiner，等，Current Medicinal Chemistry，11(6)731-745(2004)；Manley，等，Biochimica et Biophysica Acta，1697(1-2)17-27(2004)；Alessi，等，Biochimica et Biophysica Acta，1654(1)39-49(2004)；Tortora，等，Current Pharmaceutical Design，10(1)11-26(2004)。
不受控制的細(xì)胞增殖是癌癥的另一個(gè)標(biāo)志。癌性腫瘤細(xì)胞典型地具有對直接或間接調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂周期的基因的某些形式的破壞。
細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)是對于細(xì)胞周期控制關(guān)鍵的酶。參見例如，Coleman等，Annual Reports in Medicinal Chemistry，32171-179(1997)。這些酶調(diào)節(jié)細(xì)胞周期不同期之間的過渡，例如G1期至S期的進(jìn)程(活性DNA合成的周期)，或G2期至M期的進(jìn)程，其中發(fā)生了主動的有絲分裂和細(xì)胞分裂。參見例如，Science，2741643-1677(6 December 1996)上關(guān)于該主題的文章。
CDKs由催化CDK亞基和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白亞基組成。細(xì)胞周期蛋白亞基是CDK活性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物，因?yàn)槊總€(gè)CDK與細(xì)胞周期蛋白的特定亞型相互作用如細(xì)胞周期蛋白A(CDK1，CDK2)。不同的激酶/細(xì)胞周期蛋白對通過細(xì)胞周期的特定時(shí)期調(diào)節(jié)進(jìn)程。參見例如，Coleman，見上文。
在癌性細(xì)胞不受控制的生長過程中已涉及到細(xì)胞周期控制體系的異常。參見例如，Kamb，Trends in Genetics，11136-140(1995)；以及Coleman，見上文。另外，在許多腫瘤中已觀察到編碼CDK’s或它們的調(diào)節(jié)物的基因的改變或基因的表達(dá)的改變。參見例如，Webster，Exp.Opin.Invest.Drugs，7865-887(1998)，以及其中引用的參考文獻(xiàn)。因此，有大量的參考文獻(xiàn)證實(shí)抑制CDKs的化合物用作抗增殖性治療藥劑。參見例如，美國專利5,621,082；EP 0 666 270 A2；WO 97/16447；以及上文中Coleman中引用的參考文獻(xiàn)，特別是第10篇參考文獻(xiàn)。因此，需要鑒別CDK激酶活性的化學(xué)抑制劑。
特別需要鑒定小分子化合物來治療一種或多種類型的腫瘤，所述小分子化合物易于合成，并且有效抑制一種或多種CDK或CDK/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合物。
已經(jīng)研究或正在研究作為治療藥劑的抑制細(xì)胞周期蛋白激酶的幾個(gè)種類的化合物。有例如Flavopiridol的類似物(USP 5,733,920(Mitotix)；WO 98/1344(Bristol-Myers Squibb)；WO 97/42949(Bristol-MeyersSquibb))；嘌呤衍生物(WO 98/05335(CV Therapeutics)；WO 97/20842(CNRS))；吖啶酮類和苯并噻二嗪類(WO 98/49146A2(US Dept.of Healthand Human Services))；以及antisense(USP 5,821,234(StanfordUniversity))。此外，在論述CNS-作用的化合物的文章中公開了一些N，N-取代的二氫吡唑并苯并二氮雜類。參見，M.A.Berghot，Arch.Pharm.325285-289(1992)。
仍然需要治療一種或多種類型腫瘤、特別是通過調(diào)節(jié)血管生成和/或CDKs來治療的易于合成的小分子化合物。
本發(fā)明涉及新型的7，8-二取代的吡唑并苯并二氮雜類和這些化合物的藥用鹽。本發(fā)明的化合物是血管生成和/或激酶如細(xì)胞周期依賴性激酶(CDKs)，特別是CDK2的抑制劑。這些化合物和它們的藥用鹽以及所述化合物的酯是可以用于治療或控制細(xì)胞增殖疾病，特別是癌癥的抗增殖藥劑。本發(fā)明還涉及含有這樣化合物的藥物組合物以及用于治療和/或預(yù)防癌癥的方法，特別是在治療或控制實(shí)體瘤方面。本發(fā)明的化合物可以特別用于治療或控制乳腺、結(jié)腸、肺和前列腺腫瘤。本發(fā)明還涉及可以用于制備7，8-二取代的吡唑并苯并二氮雜類化合物如下面所述的式IV的那些化合物的新型中間體。
具體而言，本發(fā)明提供式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；
R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其含有任何一種或多種上述的化合物或其藥用鹽，以及藥用載體。制備這種組合物方法也是本發(fā)明的一部分。
本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明化合物的方法。本發(fā)明的化合物是血管生成和/或激酶的抑制劑。因此，本發(fā)明涉及抑制血管生成的方法。本發(fā)明還涉及抑制激酶的方法。此外，本發(fā)明涉及治療癌癥，特別是乳腺、結(jié)腸、肺和前列腺癌的方法，該方法包括對患有癌癥的患者給藥治療有效量的式IV的化合物或其藥用鹽。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供7，8-二取代-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜類化合物及含有它們的藥物組合物。在第二方面，本發(fā)明提供用于合成本發(fā)明的化合物的方法以及在這種合成中使用的有價(jià)值中間體。
本發(fā)明的化合物是血管生成的抑制劑。因此，在第三方面，本發(fā)明提供抑制血管生成的方法，該方法包括給藥治療有效量的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的化合物還是激酶如CDK2的抑制劑。因此，在第四方面，本發(fā)明提供抑制激酶活性的方法，該方法包括給藥治療有效量的本發(fā)明化合物。在第五方面，本發(fā)明提供用于治療或控制癌癥的方法，該方法包括給藥治療有效量的本發(fā)明化合物。具體而言，本發(fā)明提供用于治療乳腺、前列腺、結(jié)腸和肺癌的方法。
如此處中所用的，下列術(shù)語具有下列定義。不管所述的術(shù)語單獨(dú)或組合出現(xiàn)，都采用此處使用的下列定義。必須注意，如在說明書和后附權(quán)利要求書中所用的，單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“所述的”包括復(fù)數(shù)形式，除非上下文另外清楚地指明。
“烷基”是指含有1至6個(gè)，優(yōu)選1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的、取代或未取代的飽和脂族烴基。典型的烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、2-丁基、戊基、己基等。
“烷氧基”是指直鏈或支鏈的烴氧基，其中″烷基″部分為如上定義的烷基，并且該基團(tuán)通過氧原子連接到分子上。典型的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。
“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。優(yōu)選的鹵素為氟和氯。
“雜原子”是指選自N，O和S中的原子。
“6元雜環(huán)”是指6元非芳族的、部分或全部飽和的烴基，其含有1至3個(gè)雜原子，雜原子中的至少一個(gè)為氮。6元雜環(huán)的實(shí)例包括哌啶、哌嗪、嗎啉、硫代嗎啉等。
“5元或6元雜環(huán)”是指含有1至3個(gè)雜原子的5或6元環(huán)。碳環(huán)的實(shí)例包括戊基和己基等。雜環(huán)的實(shí)例包括二噁烷、二氧戊環(huán)、吡咯烷、咪唑烷等“IC50”是指抑制50％特定測量活性所需要的特定的吡唑并苯并二氮雜的濃度。[IC50尤其可以如下面的實(shí)施例A中所述進(jìn)行測量]“IC90”指抑制90％特定測量活性所需要的特定吡唑并苯并二氮雜的濃度。
“藥用”，例如藥用載體，賦形劑等是指對給藥具體化合物的受試者而言是藥用的、并且基本上無毒的。
“藥用鹽”是指常規(guī)酸式加成鹽或堿式加成鹽，其保留了式IV的化合物的生物效力和性能，并從合適的無毒的有機(jī)或無機(jī)酸或有機(jī)或無機(jī)堿來形成。酸式加成鹽的實(shí)例包括那些衍生自無機(jī)酸如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸的酸式加成鹽，和那些衍生自有機(jī)酸例如對甲苯磺酸，水楊酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，檸檬酸，蘋果酸，乳酸，富馬酸等的酸式加成鹽。堿式加成鹽的實(shí)例包括那些衍生自銨、鉀、鈉和季銨氫氧化物的堿式加成鹽，例如四甲基銨氫氧化物。
“苯基”是指這樣的官能團(tuán)，其為除去了一個(gè)氫的苯環(huán)。本發(fā)明的苯基可以是未取代的或取代的，例如被烷基，烷氧基，鹵素，CN，N(R6)2，NO2等所取代的。
“取代的”，如取代的烷基，除非另外說明，是指取代可以發(fā)生在一個(gè)或多個(gè)位置，并且在每個(gè)取代位置的取代基獨(dú)立地選自具體的選項(xiàng)。
“治療有效量”表示至少一個(gè)式IV的化合物、或它的藥用鹽、酯或代謝物的量，其顯著抑制腫瘤細(xì)胞，包括人腫瘤細(xì)胞系的增殖，或顯著地抑制供應(yīng)腫瘤或其轉(zhuǎn)移灶的血管的血管生成。
本發(fā)明提供式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；
每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為 在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物包括那些其中R1為鹵素或氰基的化合物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為O(CH2)mNR7R8。在這樣的化合物中，R7和R8可以各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或者R7和R8可以與它們連接的氮原子一起形成6元雜環(huán)。例如，NR7R8可以形成嗎啉或哌嗪環(huán)。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R7和R8與它們連接的氮原子一起形成6元雜環(huán)，并且R1為鹵素或氰基。
這種化合物的實(shí)例包括5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
還優(yōu)選的是其中R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基并且R1為鹵素或氰基的化合物。這樣的一種化合物的實(shí)例是5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為N(R6)2，其中每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選其中R1為鹵素或氰基的化合物，例如，化合物5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-N，N-二甲氨基-3-甲基-吡唑并[3，4-b]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為鹵素，烷基或被鹵素取代的烷基。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R1為鹵素，烷基或烷氧基。這種化合物的實(shí)例包括5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為羥基，烷氧基或被鹵素取代的烷氧基。在此實(shí)施方案內(nèi)的優(yōu)選化合物是那些化合物，其中R1為烷基，氰基，NH2C(O)或O(CH2)nOCH3。這樣化合物的實(shí)例包括5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在此組內(nèi)的其它優(yōu)選化合物是那些化合物，其中R1為鹵素。這種化合物的實(shí)例包括7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在此組內(nèi)的進(jìn)一步優(yōu)選化合物是那些化合物，其中R1為烷氧基。這種化合物的實(shí)例包括5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-5-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為苯基。優(yōu)選的化合物包括那些化合物，其中R1為烷氧基，例如，化合物5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R2為(OCH2CH2)nOCH3。在此實(shí)施方案內(nèi)的優(yōu)選化合物是那些化合物，其中R1為鹵素，烷氧基或氰基。這種化合物的實(shí)例包括5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及
5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1和R2一起形成二氧戊環(huán)。這樣一種化合物的實(shí)例為5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)并[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1為鹵素。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R2為鹵素；羥基；N(R6)2；O(CH2)mNR7R8，例如，其中NR7R8形成嗎啉環(huán)；烷氧基，例如，甲氧基或乙氧基；或 其中n為1或2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1為(OCH2CH2)nOCH3。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R2為烷氧基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1為NH2C(O)。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R2為烷氧基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1為烷基。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R2為烷氧基，鹵素，烷基或被鹵素取代的烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1為烷氧基。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R2為烷氧基；鹵素，例如，氯；苯基；或(OCH2CH2)nOCH3，其中n為1或2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R1為氰基。在此實(shí)施方案內(nèi)，優(yōu)選的化合物是那些化合物，其中R2為羥基；烷氧基；O(CH2)mNR7R8，特別是其中NR7R8形成嗎啉環(huán)；(OCH2CH2)nOCH3；或 其中n為1或2，并且m為2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式IV的化合物，其中R3為氫，即式XXII的化合物。這種化合物的實(shí)例包括5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氰基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。在再一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供如上定義的式IV的化合物，其中R4為鄰-氯；以及R1，R2和R3具有上面給出的含義。
在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供如上定義的式IV的化合物，其中R3為甲基；R4為鄰-氯；以及R1和R2具有上面給出的含義。
在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供如上定義的式IV的化合物，其中R1為鹵素或-CN；R3為甲基；R4為鄰-氯；以及R2具有上面給出的含義。
本發(fā)明提供用于合成二取代的吡唑并苯并二氮雜的方法。在實(shí)施例中提供用于合成本發(fā)明化合物的適宜方法。通常，本發(fā)明的化合物可以根據(jù)下面提供的合成方案制備。
下面的合成方案提供用于制備本發(fā)明化合物，即式IV的化合物的兩種一般方法。方法A中，示于方案1和2中，將式I的苯并二氮雜轉(zhuǎn)化為式IV的化合物。
方案1在方案1的方法中，根據(jù)本領(lǐng)域中已知的程序(WO 2000/064900；Scheibye，S.，等，Bulletin des Societes Chimiques Belges，87229-38(1978)；Jesberger，M.，等，Synthesis，1929-1958(2003))，將內(nèi)酰胺I轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的硫代內(nèi)酰胺II。將硫代內(nèi)酰胺II與N，N-二甲基乙酰胺的二甲基縮醛反應(yīng)，優(yōu)選在升高的溫度如60至130℃反應(yīng)，生成中間體III，其通過與肼反應(yīng)，生成吡唑衍生物IV。
方案2
在作為方案1的變體的方案2的方法中，或者通過本領(lǐng)域中已知的方法(Walser，A.；等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，Vol.50431-543(1991)；Walser，A.；等，Chemistry ofHeterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol.50545-629(1991)；Walser，A.；等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol 50631-848(1991)；Walser，A.；等，Chemistry ofHeterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol 50849-946(1991)；Archer，G. A.；等，Chemical Reviews，68747-84(1968)；Sternbach，L. H.，等，Journal of Organic Chemistry，273788-96(1962)；U.S.Patent No.3,681,341)，或者通過與磷酰氯反應(yīng)，然后與甲醇鈉反應(yīng)，將內(nèi)酰胺I轉(zhuǎn)化為O-甲基醚V。醚V與N，N-二甲基乙酰胺的二甲基縮醛反應(yīng)，形成中間體VI，其通過與肼反應(yīng)，生成吡唑衍生物IV。
制備式I化合物的方法在苯并二氮雜文獻(xiàn)(Walser，A.；等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol.50431-543(1991)；Walser，A.；等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol.50545-629(1991)；Walser，A.；等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol 50631-848(1991)；Walser，A.；等，Chemistry of Heterocyclic Compounds，Chichester，United Kingdom，vol 50849-946(1991)；Archer，G.A.；等，Chemical Reviews，68747-84(1968)；Sternbach，L.H.，等，Journal of OrganicChemistry，273788-96(1962))中是周知的。
方案3對于其中取代模式預(yù)先沒有描述的式I化合物的實(shí)例，其制備按照方案3中列出的方法，其中根據(jù)在Toyoda，T.，等，Tetrahedron Letters，21173-6(1980)中所述的方法，在路易斯酸存在下，苯胺衍生物VII與醛VIII縮合，生成氨基醇IX。
式VIII的化合物是可商購的。式VIII的化合物是可商購的，或者可以由可商購的材料通過本領(lǐng)域中已知的程序制備。式VII的化合物，除VIIgg，VIIkk，VIIii和VIIjj之外，是可商購的。式VIIgg和VIIkk的化合物可以例如通過FR1573745的方法制備?；衔颲IIii和VIIjj可以通過下面的方法制備，其按照VIIii進(jìn)行描述。7.34g(0.0347mol)的1-甲氧基-4-硝基-2-異丙氧基苯和15g的阮內(nèi)鎳在80mL的四氫呋喃-乙醇(1∶1)中的混合物在50psi氫氣氣氛下強(qiáng)力搖動4小時(shí)。然后，將混合物過濾通過硅藻土，并且在減壓下濃縮，得到4.57g的3-甲氧基-4-異丙氧基苯胺，將其直接用于下一步驟。可以以類似的方法，由2-甲氧基-4-硝基-1-異丙氧基苯制備VIIjj，2-甲氧基-4-硝基-1-異丙氧基苯可以由可商購的材料，使用Castello等，Tetrahedron Letters，262489-92(1985)的程序來制備。
由本領(lǐng)域中已知的方法(參見例如，上述的Walser參考資料；Sugasawa，T.；等，Journal of Heterocyclic Chemistry，16(3)445-8(1979)；以及Leroux，F(xiàn).，等，Journal of Organic Chemistry，684693-4699(2003))，可以進(jìn)行IX至相應(yīng)的氨基酮X的氧化。通過下面的方法用甘氨酸等價(jià)物衍生XX與溴乙酰溴反應(yīng)，接著與氨反應(yīng)提供XII或與疊氮化鈉反應(yīng)，接著疊氮化物進(jìn)行胺還原，提供XII，然后進(jìn)行環(huán)化，成為內(nèi)酰胺I(參見例如，上面所述的Walser參考資料)。
方案4備選地，可以由方案4中列出的方法B，生成式IV的吡唑衍生物。中間體X與氨基-氯-吡唑衍生物XIII反應(yīng)，生成中間體XIV。由Taniguchi，T.，等，Tetrahedron Letters，394679-4682(1998)中所述的一般方法，進(jìn)行烯丙基從XIV中的去除，其中中間體XIV在氫化二異丁鋁和鎳催化劑存在下反應(yīng)，生成吡唑衍生物IV。
由方案5和方案6中列出的方法制備氨基-氯-吡唑衍生物XIII。
方案5 方案6方案5中，乙基-2-氰基-3-乙氧基-2-丁烯酸酯與2-丙烯基-肼反應(yīng)，生成吡唑中間體XV?？梢杂煽缮藤彽牟牧?，通過美國專利2,824,121中所述的方法制備乙基-2-氰基-3-乙氧基-2-丁烯酸酯。氨基酯XV通過重氮化并且在銅鹽存在下與氯化物反應(yīng)而轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的氯衍生物XVI。該酯在堿性條件下水解，提供吡唑酸中間體XVII。酸XVII與氯甲酸甲酯反應(yīng)，接著與疊氮化物反應(yīng)，生成中間體羰基疊氮化物吡唑XVIII，其通過加熱，接著后處理，提供氨基-氯-吡唑衍生物XIII。備選地，氨基-氯-吡唑衍生物XIII可以通過烯丙基化硝基吡唑XIX(生成XX)，接著將硝基還原為氨基來制備(方案6)。
在R1或R2為可以進(jìn)行進(jìn)一步轉(zhuǎn)化的官能團(tuán)時(shí)，可以得到R1和R2的另外取代。例如，在R1和R2為氟的情況下，通過在堿存在下與醇或胺反應(yīng)，可以進(jìn)行單取代。這些反應(yīng)示于方案7、8和9。
方案7該反應(yīng)可以用來將化合物如(2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm)轉(zhuǎn)化為化合物如(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xa)和(2-氨基-5-氟-4-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xi)。
方案8該反應(yīng)可以用來將化合物如5-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)轉(zhuǎn)化為化合物如5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia)和5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib)。
方案9
該反應(yīng)可以用來將化合物如5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IImm)轉(zhuǎn)化為化合物如5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIa)，5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIf)，5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-乙氧基-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIg)，和5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIh)。
在其中R2為甲氧基的實(shí)例中，可以將中間體脫甲基化為相應(yīng)的羥基衍生物，然后可以將其進(jìn)一步烷基化。這示于方案10中。
方案10該反應(yīng)可以用來例如將化合物如7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)轉(zhuǎn)化為化合物如7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ij)，7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Inn)，7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ioo)，和7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)。該反應(yīng)還可以用來將式5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib)的化合物轉(zhuǎn)化為化合物如5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ik)，5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iv)，5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iqq)，5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Irr)和8-(2-氯乙氧基)-5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iss)。
通過本領(lǐng)域中已知的方法，例如在美國專利6,440,959中所述的那些方法，可以將其中R1為CN或C(O)N(R6)2的式IV化合物轉(zhuǎn)化為其中R1為COOH或COO烷基的化合物。
對于其中R3為H(式XXII的化合物)的那些式IV的化合物，可以根據(jù)方案11中列出的一般方法來制備所述的化合物。
方案11在共同擁有的美國專利6,440,959中，對于其中R2為H的實(shí)例，預(yù)先描述了該方法。硫代內(nèi)酰胺II與二甲基甲酰胺二乙基乙縮醛反應(yīng)，制備中間體XXI，然后其用肼處理，得到吡唑并苯并二氮雜XXII。可以在下面的實(shí)施例90至92中發(fā)現(xiàn)此反應(yīng)的具體實(shí)例。
取代表
式XIV的化合物是可以用作制備式IV的化合物中的中間體的新型化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式XIV的化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式XIV的下列具體化合物5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；
5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3，7-二甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)并[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
本發(fā)明提供藥物組合物，其包含至少一種本發(fā)明的化合物，例如式IV的化合物或其藥用鹽，以及藥用載體。
例如，可以以片劑、包衣片、錠劑、硬或軟明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑形式口服給藥本發(fā)明的藥物組合物。還可以例如以栓劑形式經(jīng)直腸或例如以注射液形式非腸道給藥所述的組合物。
本發(fā)明的藥物組合物包含一種或多種式IV的化合物和/或其藥用鹽?？梢园凑毡绢I(lǐng)域中公知的方式、例如通過常規(guī)混合、包囊、溶解、制粒、乳化、包埋、制錠或凍干工藝，制備這樣的組合物。可以使用治療上惰性的無機(jī)或有機(jī)載體配制這些藥物組合物。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸(steric acid)或其鹽可以用作片劑、包衣片、錠劑和硬明膠膠囊的這類載體。合適的軟明膠膠囊載體包括植物油、蠟和脂肪。根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，在軟明膠膠囊的情況中一般不需要載體。制備溶液和糖漿劑的適宜載體為水、多元醇類、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。注射用的適宜載體為水、醇類、多元醇類、甘油、植物油、磷脂類和表面活性劑。用于栓劑的適宜載體為天然或硬化油、蠟、脂肪和半液體多元醇類。
藥物組合物還可以含有防腐劑、加溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑、包衣劑或抗氧化劑。它們還可以含有其它治療上有價(jià)值的物質(zhì)，包括其它非通式IV的那些活性組分。
如上所述，式IV的化合物及它們的藥用鹽，以及含有這些化合物的組合物可以用于治療或控制細(xì)胞增殖疾病，特別是腫瘤疾病。這些化合物和含有所述化合物的制劑可以特別用于治療或控制實(shí)體瘤，諸如乳腺、前列腺、肺和結(jié)腸腫瘤。
式IV化合物的治療有效量或劑量可以在寬限內(nèi)改變，并且將被調(diào)整在每種特定的情況下的個(gè)體需要。一般來說，在對體重約為70kg的成年人進(jìn)行口服給藥或非腸道給藥的情況下，約10mg至約10,000mg、優(yōu)選約200mg至約1,000mg的每日劑量應(yīng)是合適的，不過，必要時(shí)，可以超過上限?？梢詫⒚咳談┝孔鳛閱蝿┝炕蚍謩┝拷o藥，或?qū)Ψ悄c道給藥而言，可以將其作為連續(xù)輸注給藥。
下列實(shí)施例用來幫助理解本發(fā)明并且決不是用來限制其范圍的。
實(shí)施例
總則在下面的實(shí)施例中，溫度以℃表示。對于質(zhì)譜數(shù)據(jù)，給出的值是MH+/Z離子形式，其是在Micromass Platform II質(zhì)譜儀測量的、正模式電霧化中得到的。
在描述一個(gè)實(shí)施例是以類似于另一個(gè)實(shí)施例的方式進(jìn)行的情況下，全部條件與在原始實(shí)施例中的規(guī)定的那些條件相同，不同之處在于，在一些情況下，采用不同量的材料。在提供不同量的原料的情況下，以與在原始實(shí)施例中相對于該原料的相同比例的量使用在此實(shí)施例中采用的其它成分。
制備氨基二苯甲酮中間體X(方案3) 實(shí)施例1制備(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xa) 于-20至-30℃，將2.0g(0.0142摩爾)的4-氟-3-甲氧基-苯胺在20mL的二氯甲烷中的溶液滴加至在20mL二氯甲烷中的2.24g(0.0142摩爾)的二氯苯基硼烷中，接著加入在10mL二氯甲烷中的3.59g(0.0355摩爾)的三乙胺。將混合物攪拌30分鐘；然后，加入在30mL的二氯甲烷中的2.0g(0.0142摩爾)的2-氯苯甲醛。移除冷卻浴，并且將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。在快速攪拌的條件下，將100mL的冷水加入至反應(yīng)混合物中，接著加入150mL的鹽水。分離二氯甲烷層，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將剩余物(4.5g，為褐色油)與10mL二乙醚和30mL的2M氫氧化鈉一起于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，并且將乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到3.6g的相應(yīng)氨基醇IXa(R1＝F，R2＝OCH3，R4＝Cl)，將其直接用于下一步驟。
將在上面反應(yīng)中得到的氨基醇(3.6g)溶解于60的二氯甲烷，并且與6.09g(0.071摩爾)的二氧化錳一起攪拌。在4小時(shí)后，將混合物過濾，并且在減壓下濃縮，得到4.2g粗的酮(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xa)，為褐色油。將粗酮由用乙酸乙酯-己烷洗脫的硅膠色譜純化，得到2.03g的(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xa)。MH+/Z＝280。
實(shí)施例2制備(2-氨基-5-溴-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xd) (2-氨基-5-溴-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xd)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.086摩爾的4-溴-3-甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝340。
實(shí)施例3制備(2-氨基-4，5-二甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xw) (2-氨基-4，5-二甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xw)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.123摩爾的3，4-二甲基苯胺反應(yīng)而制備的。
實(shí)施例4制備(2-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xx) (2-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xx)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0196摩爾的3，4-二甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝292。
實(shí)施例5制備(2-氨基-4-氯-5-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xy) (2-氨基-4-氯-5-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xy)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.019摩爾的3-氯-4-甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝296。
實(shí)施例6制備(2-氨基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xz) (2-氨基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xz)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0226摩爾的3-甲氧基-4-甲基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝276。
實(shí)施例7制備(2-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-(2-甲氧基苯基)-甲酮(Xaa) (2-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-(2-甲氧基苯基)-甲酮(Xaa)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-甲氧基苯甲醛與0.0196摩爾的3，4-二甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝288。
實(shí)施例8制備(6-氨基-1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xbb) (6-氨基-1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xbb)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.020摩爾的3，4-亞甲二氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝276。
實(shí)施例9制備(2-氨基-5-氯-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xcc) (2-氨基-5-氯-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xcc)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.019摩爾的3-甲氧基-4-氯苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝296。
實(shí)施例10制備(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xdd) (2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xdd)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0223摩爾的3-氟-4-甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝280。
實(shí)施例11制備(2-氨基-5-甲氧基-4-三氟甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xee) (2-氨基-5-甲氧基-4-三氟甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xee)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0263摩爾的4-甲氧基-3-三氟甲基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝330。
實(shí)施例12制備(2-氨基-5-甲氧基-4-苯基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xff) (2-氨基-5-甲氧基-4-苯基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xff)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0226摩爾的4-甲氧基-3-苯基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝338。
實(shí)施例13制備(2-氨基-5-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xgg) (2-氨基-5-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xgg)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0296摩爾的4-甲氧基-3-(2-甲氧基乙氧基)苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝336。
實(shí)施例14制備(2-氨基-4-氯-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xhh) (2-氨基-4-氯-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xhh)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0318摩爾的3-氯-4-甲基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝280。
實(shí)施例15制備(2-氨基-5-甲氧基-4-(1-甲基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xii) (2-氨基-5-甲氧基-4-(1-甲基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xii)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0252摩爾的3-異丙氧基-4-甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝320。
實(shí)施例16制備(2-氨基-4-甲氧基-5-(1-甲基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xjj) (2-氨基-4-甲氧基-5-(1-甲基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xjj)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0267摩爾的4-異丙氧基-3-甲氧基苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝320。
實(shí)施例17制備(2-氨基-4-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xkk) (2-氨基-4-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xkk)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.0242摩爾的3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝336。
實(shí)施例18制備(2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm) (2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm)是以類似于實(shí)施例1的方式，通過使2-氯苯甲醛與0.30摩爾的3，4-二氟苯胺反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝268。
實(shí)施例19由(2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm)制備(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xa) 將2.01g(0.0075摩爾)的(2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm)，24mL的甲醇和2.08mL的25％甲醇鈉溶液的溶液在惰性氣氛下加熱回流80分鐘。然后將混合物冷卻，放入乙酸乙酯中，并且用鹽水洗滌兩次。將乙酸乙酯萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮，得到2.04g的氨基二苯甲酮(benzopheneone)(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xa)，為結(jié)晶黃色固體。MH+/Z＝280。
實(shí)施例20制備(2-氨基-5-氟-4-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xi) 將1.4g(0.035摩爾)的60％氫化鈉，25mL的二噁烷，2.68g(0.01摩爾)的(2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm)和2.23g(0.016摩爾)的4-嗎啉丙醇的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將混合物通過加入50mL的水而猝滅。將混合物用乙酸乙酯萃取，并且將萃取物用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將剩余物與己烷一起研磨，然后從己烷-乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到2.55g的(2-氨基-5-氟-4-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xi)。MH+/Z＝393。
由氨基二苯甲酮X制備內(nèi)酰胺I(方案3) 實(shí)施例21制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id) 在30分鐘內(nèi)，將3.5mL(0.04摩爾)的溴乙酰溴在3.5mL的二氯甲烷中的溶液加入至11.8g(0.035摩爾)的(2-氨基-5-溴-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xd)、2.94mL的吡啶和350mL的二氯甲烷的冷(0℃)溶液中。將混合物于室溫?cái)嚢枇硗?小時(shí)，然后在水和二氯甲烷之間分配。將二氯甲烷層用飽和硫酸銅溶液洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到16.5g的N-溴乙酰苯胺XId。
將上面得到的粗的N-溴乙酰苯胺(XId)(16.5g，0.0357摩爾)溶解于250mL的四氫呋喃和80mL的甲醇中。將混合物冷卻至-78℃，并且加入35mL的蒸餾氨。將混合物攪拌1.5小時(shí)；然后，移除冷卻浴，并且將混合物于室溫?cái)嚢枇硗獾?小時(shí)，在此期間，使過量的氨汽化。將混合物減壓下濃縮，并且將剩余物在乙酸乙酯和水之間分配。將乙酸乙酯層依次用水，然后用鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮，提供13.6g粗的N-氨基-酰苯胺XIId。
將在上面反應(yīng)中得到的粗XIId懸浮于375mL的乙醇中，回流24小時(shí)，然后冷卻。通過過濾收集產(chǎn)物，得到9.2g的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)。MH+/Z＝379。
實(shí)施例22制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia)是以實(shí)施例21的方式，通過使0.125摩爾的(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)(2-氯苯基)-甲酮(Xa)與溴乙酰溴反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝319。
實(shí)施例23制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ii) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ii)是以實(shí)施例21的方式，通過使0.0062摩爾的(2-氨基-5-氟-4-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xi)與溴乙酰溴反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝432。
實(shí)施例24制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iz) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iz)是以實(shí)施例21的方式，通過使0.13摩爾的(2-氨基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xz)與溴乙酰溴反應(yīng)而制備的。
實(shí)施例25制備5-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm) 5-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)是以實(shí)施例21的方式，通過使0.019摩爾的(2-氨基-4，5-二氟苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xmm)與溴乙酰溴反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝307。
內(nèi)酰胺的轉(zhuǎn)化(方案8)
實(shí)施例265-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)轉(zhuǎn)化為5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia) 采用微波加熱，在密封的反應(yīng)容器中，將0.10g(0.00033摩爾)的5-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)，2mL的甲醇和0.03g的氫化鈉的混合物于100℃加熱40分鐘。然后將混合物冷卻，用乙酸乙酯稀釋，并且依次用水，然后用鹽水洗滌。將混合物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到0.103g的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia)，為白色晶體。MH+/Z＝319。
實(shí)施例275-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)轉(zhuǎn)化為5-(2-氯苯基)-8-N，N-二甲氨基-1，3-二氫-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Il) 采用微波加熱，將0.9201g(0.003摩爾)的5-(2-氯苯基)-7，8-二氟-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)和二甲胺在四氫呋喃中的3mL 2.0M溶液的混合物于150℃加熱30分鐘。將混合物冷卻，然后減壓下濃縮。將剩余物與乙酸乙酯-己烷一起研磨，得到0.63g的5-(2-氯苯基)-8-N，N-二甲氨基-1，3-二氫-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Il)，為黃色固體。MH+/Z＝332。
內(nèi)酰胺的轉(zhuǎn)化(方案10) 實(shí)施例287-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)轉(zhuǎn)化為7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ij) 將1.00g(0.0263摩爾)的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)在85mL的1，2-二氯乙烷中的溶液與1.053g(0.0079摩爾)的三氯化鋁一起攪拌過夜。加入另外的1.00g的三氯化鋁，并且將混合物攪拌過夜，此時(shí)間之后，將混合物傾倒入冰水中。將混合物用二氯甲烷-甲醇萃取，并且將有機(jī)層用水洗滌兩次，然后用無水硫酸鈉干燥。將溶液在減壓下濃縮，提供0.700g的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)(MH+/Z＝465)，其具有用于下一步驟的足夠純度。
在氬氣氛下，來自上面步驟的1.8281g(0.005摩爾)的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)、0.636g的碳酸鈉，0.9818g(0.006摩爾)的4-(3-氯丙基)-嗎啉和50mL的二甲基甲酰胺的混合物于50℃攪拌73小時(shí)。然后將混合物冷卻，并且在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉之間分配。然后將水層用乙酸乙酯反萃取。將乙酸乙酯層依次用飽和碳酸氫鈉，水，鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到粗的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ij)。通過用乙酸乙酯-甲醇(90∶10)洗脫的硅膠色譜，得到純的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ij)(1.721g)。MH+/Z＝492。
實(shí)施例295-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib)轉(zhuǎn)化為5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ik) 將1.2g(0.0037摩爾)的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib，實(shí)施例30中制備)在100mL的1，2-二氯乙烷中的溶液與2.5g(0.0187摩爾)的三氯化鋁一起于42℃攪拌8小時(shí)，之后加入另外的2.5g的三氯化鋁。將加熱和攪拌繼續(xù)另外的48小時(shí)，此時(shí)間之后，加入另外的2.5g的三氯化鋁。6小時(shí)后，將混合物冷卻，然后傾倒在冰水上。將該水用二氯甲烷-甲醇-四氫呋喃(80∶10∶10)萃取，并且將萃取物用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到1.6g粗的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iqq)。由用乙酸乙酯-甲醇(90∶10)洗脫的硅膠色譜純化，得到1.17g的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iqq)(MH+/Z＝312)，其具有用于下一步驟足夠的純度。
在氬氣氛下，將0.322g(0.00103摩爾)的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iqq)、6mL的二甲基甲酰胺，0.132g(0.00124摩爾)的碳酸鈉和0.2028g(0.00124摩爾)的4-(3-氯丙基)-嗎啉的混合物于50℃攪拌24小時(shí)。然后將混合物冷卻，并且在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯反萃取，然后將乙酸乙酯萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將剩余物由乙腈-甲醇(90∶10)洗脫的硅膠色譜純化，提供0.199g的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ik)。MH+/Z＝439。
實(shí)施例307-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)轉(zhuǎn)化為5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib)是由7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)，通過在鈀催化劑(四(三苯膦)鈀)存在下，根據(jù)與由Tschaen等，Synthetic Communications，24887-90(1994)所述的那些條件類似的條件，與氰化鋅反應(yīng)而制備的。在氬氣氛下，將0.9491g(0.0025摩爾)的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)，0.176g(0.0015摩爾)的氰化鋅、4mL的二甲基甲酰胺和0.289g(0.00025摩爾)的四(三苯膦)鈀的混合物于110℃加熱24小時(shí)。然后將混合物冷卻，放入乙酸乙酯中，并且用0.2M碳酸鈉溶液洗滌。將水相用乙酸乙酯反萃取，并且將乙酸乙酯層用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。使剩余物經(jīng)過用乙酸乙酯-己烷(4∶1)洗脫的硅膠色譜，得到0.620g的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib)。MH+/Z＝326。
實(shí)施例317-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Inn)轉(zhuǎn)化為5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Im) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Im)是以類似于實(shí)施例30的方式，在四(三苯膦)鈀存在下，通過使0.001摩爾的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Inn)與氰化鋅反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝370。
實(shí)施例327-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ioo)轉(zhuǎn)化為5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(In) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(In)是以類似于實(shí)施例30的方式，在四(三苯膦)鈀存在下，通過使0.0017摩爾的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ioo)與氰化鋅反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝414。
實(shí)施例33由7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Inn) 向0.300g(0.00082摩爾)實(shí)施例28中制備的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)、60mL的四氫呋喃、0.070mL的2-甲氧基乙醇和0.2586g的三苯膦的攪拌混合物中，加入0.194mL(0.00099摩爾)的偶氮二羧酸二異丙酯。將混合物攪拌過夜；然后，加入另外的0.2586g的三苯膦，0.070mL的2-甲氧基乙醇和0.194mL的偶氮二羧酸二異丙酯。將混合物攪拌另外1小時(shí)，然后減壓下濃縮。使剩余物經(jīng)過二氯甲烷-甲醇(98∶2)洗脫的硅膠色譜，得到0.212g的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Inn)。MH+/Z＝423。
實(shí)施例34由7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ioo) 7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ioo)是以類似于實(shí)施例33的方式，通過使0.00238摩爾的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ipp)與2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝467。
實(shí)施例35由5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iqq)制備8-(2-氯乙氧基)-5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iss) 8-(2-氯乙氧基)-5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iss)是以類似于實(shí)施例33的方式，通過使0.0031摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-羥基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iqq)與2-氯乙醇反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝374。
實(shí)施例36制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iv) 在氬氣氛下，將1.2g(0.0032摩爾)的8-(2-氯乙氧基)-5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iss，實(shí)施例35中制備)，2.85g(0.032摩爾)的2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)乙醇，20mL的四氫呋喃和4.8g(0.032摩爾)的碘化鈉的混合物于83℃的油浴中加熱20小時(shí)。將混合物冷卻，然后在乙酸乙酯和0.6M碳酸氫鈉溶液之間分配。將乙酸乙酯層用鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。使剩余物經(jīng)過用乙腈-甲醇(80∶20)洗脫的硅膠色譜，得到0.233g的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iv)。MH+/Z＝427。
實(shí)施例37制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(It) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(It)是以類似于實(shí)施例36的方式，通過使0.00414摩爾的8-(2-氯乙氧基)-5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iss)與N-甲基哌嗪反應(yīng)而制備的。
由內(nèi)酰胺(I)生成硫代內(nèi)酰胺(II)(方案1) 實(shí)施例38制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IId) 將2.0g(0.0053摩爾)的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Id)，200mL的1，2-二甲氧基乙烷和2.13g(0.0053摩爾)的Lawesson試劑(2，4-雙(4-甲氧基苯基)-2，4-二硫-1，3，2，4-二噻二磷庚烷(dithiadiphosphetane))的混合物于85℃加熱1小時(shí)，然后冷卻，并且傾倒在冰冷卻的碳酸氫鈉溶液上。將混合物用乙酸乙酯-甲醇(9∶1)萃取兩次，并且將有機(jī)層依次用水和鹽水洗滌。將合并的萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。剩余物與乙酸乙酯一起研磨，提供1.7g的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IId)。MH+/Z＝395。
實(shí)施例39制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIa) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIa)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.0284摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝335。
實(shí)施例40制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIb) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIb)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.0019摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ib)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝342。
實(shí)施例41制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIi) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIi)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.0053摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(內(nèi)酰胺Ii)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝448。
實(shí)施例42制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIj) 7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIj)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.0011摩爾的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ij)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝508。
實(shí)施例43制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIk) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(Ik)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.00057摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ik)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝455。
實(shí)施例44制備5-(2-氯苯基)-8-N，N-二甲氨基-1，3-二氫-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIl) 5-(2-氯苯基)-8-N，N-二甲氨基-1，3-二氫-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIl)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.006摩爾的5-(2-氯苯基)-8-N，N-二甲氨基-1，3-二氫-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Il)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝348。
實(shí)施例45制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIm) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIm)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.00081摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Im)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝386。
實(shí)施例46制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIn) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIn)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.00089摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(內(nèi)酰胺In)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝430。
實(shí)施例47制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIt) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIt)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.00069摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(It)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。
實(shí)施例48制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIv) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIv)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.00052摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iv)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝443。
實(shí)施例49制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIw) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIw)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.0006摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iw)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝315。
實(shí)施例50制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIz) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIz)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.0064摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iz)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝331。
實(shí)施例51制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IImm) 5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IImm)是以類似于實(shí)施例38的方式，通過使0.003摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Imm)與Lawesson試劑反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝332。
硫代內(nèi)酰胺的轉(zhuǎn)化(方案9) 實(shí)施例52制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIf) 將1.0g(0.0031摩爾)的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IImm)，0.372g的氫化鈉和20mL的2-甲氧基乙醇的混合物在微波容器中于120℃加熱30分鐘，冷卻，然后用乙酸乙酯稀釋。將混合物依次用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將剩余物與乙酸乙酯一起研磨，得到0.74g的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIf)，為白色固體，然后將其根據(jù)實(shí)施例58用來制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVf)，而沒有進(jìn)一步純化。MH+/Z＝379。
實(shí)施例53制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-乙氧基-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIg) 將0.5g(0.00155摩爾)的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IImm)、10mL的乙醇和0.62g的60％氫化鈉的混合物加熱回流24小時(shí)。將混合物冷卻，用乙酸乙酯稀釋，并且依次用水，然后用鹽水洗滌。將乙酸乙酯萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到0.52g的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-乙氧基-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIg)，為黃色固體。MH+/Z＝349。
實(shí)施例54制備5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIh) 將1.0g(0.0031摩爾)的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IImm)，10mL的異丙醇和0.62g的60％氫化鈉的混合物加熱回流5小時(shí)。將混合物冷卻，用乙酸乙酯稀釋，并且依次用水，然后用鹽水洗滌。將乙酸乙酯萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到1.2g的剩余物，其與己烷和乙酸乙酯一起研磨，得到0.76g的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIh)，為白色固體。MH+/Z＝363。
由硫代內(nèi)酰胺II制備吡唑并苯并二氮雜IV(方案2) 實(shí)施例55制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVd) 將1.8g(0.00455摩爾)的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IId)、2.26mL的1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺和20mL的二甲基甲酰胺的混合物于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，然后于110℃攪拌5小時(shí)。將混合物冷卻，并且減壓下濃縮。粗中間體IIId與0.713mL的無水肼，9mL的甲醇和24mL的二氯甲烷的溶液一起攪拌26小時(shí)，然后在乙酸乙酯和水之間分配。將乙酸乙酯層用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。經(jīng)過用乙酸乙酯洗脫的硅膠色譜，得到0.690g的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVd)。從二氯甲烷中重結(jié)晶，提供晶體7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVd)，mp 210-211℃。MH+/Z＝417。
實(shí)施例56制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVa) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVa)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0224摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIa)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝357。
實(shí)施例57制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVb) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVb)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0016摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIb)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝364。
實(shí)施例58制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVf) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVf)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0026摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIf)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝401。
實(shí)施例59制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVg) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVg)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0016摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-乙氧基-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIg)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝371。
實(shí)施例60制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVh) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVh)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.00198摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIh)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝385。
實(shí)施例61制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVi) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVi)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0045摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(硫代內(nèi)酰胺IIi)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝470。
實(shí)施例62制備7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVj) 7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVj)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0011摩爾的7-溴-5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIj)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝530。
實(shí)施例63制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVk) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVk)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.00054摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(硫代內(nèi)酰胺IIk)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝477。
實(shí)施例64制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-N，N-二甲氨基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVl) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-N，N-二甲氨基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVl)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.00187摩爾的5-(2-氯苯基)-8-N，N-二甲氨基-1，3-二氫-7-氟-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIl)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝370。
實(shí)施例65制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVm) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVm)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.00048摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基乙氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIm)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝408。
實(shí)施例66制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVn) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVn)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.00067摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIn)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝452。
實(shí)施例67制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVt) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVt)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.00062摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基))-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIt)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝476。
實(shí)施例68制備5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVv) 5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVv)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0005摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIv)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝465。
實(shí)施例69制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVw) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVw)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0005摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIw)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝337。
實(shí)施例70制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVz) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVz)是以類似于實(shí)施例55的方式，通過使0.0005摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIz)與1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。MH+/Z＝353。
由內(nèi)酰胺I制備吡唑并苯并二氮雜IV(方案2) 實(shí)施例71制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVa) 向0℃的3.0g(0.0094摩爾)的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Ia)，11.8mL的乙基二異丙胺、4.62g的1，2，4-三唑和45mL的四氫呋喃的混合物中，加入1.575mL的磷酰氯。20分鐘之后，移除冷卻浴，并且將混合物于室溫?cái)嚢枇硗?0分鐘。然后，將17mL4.37M甲醇鈉的甲醇溶液加入至反應(yīng)混合物中。攪拌2小時(shí)后，加入另外的5mL甲醇鈉溶液，并且攪拌混合物過夜。然后將混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將乙酸乙酯層依次用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮，得到3.2g的5-(2-氯苯基)-7-氟-2，8-二甲氧基-3H-1，4-苯并二氮雜(中間體Va)，其具有用于下一步驟中的足夠純度。
將3.0g上面制備的中間體Va、30mL的二甲基甲酰胺和13.2mL的1，1-二甲氧基-N，N-二甲基-乙胺的混合物于110℃加熱24小時(shí)，然后冷卻。將混合物在減壓下濃縮，得到粗的中間體VIa，將其直接用于下一步驟。將剩余物溶解于48mL的二氯甲烷和15mL的甲醇中，并且與1.41mL的無水肼反應(yīng)30小時(shí)。將混合物在水和乙酸乙酯之間分配。將水相用乙酸乙酯反萃取，并且將乙酸乙酯層用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。使剩余物經(jīng)過用乙酸乙酯-己烷(8∶1)洗脫的硅膠色譜，得到2.05g的5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVa)。將該材料從己烷-二氯甲烷中結(jié)晶，得到IVa，為黃色固體，mp 217-218℃。MH+/Z＝357。
由氨基二苯甲酮X與吡唑XIII制備吡唑并苯并二氮雜IV(方案4)。

實(shí)施例72制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVw) 將3.0g(0.0116摩爾)的(2-氨基-4，5-二甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xw)、2.0g(0.0116摩爾)的4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)，2.21g(0.0116摩爾)的對甲苯磺酸一水合物和40mL的異丙醇的混合物在密封管中于170℃加熱90分鐘。將混合物減壓下濃縮，并且將剩余物用乙酸乙酯稀釋，然后用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌兩次。將水相洗滌物用乙酸乙酯反萃取，并且將合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。剩余物與己烷一起研磨，得到中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVw)，為黃色固體。濾液由用乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶1)洗脫的硅膠色譜純化，提供另外的XIVw，并且與上面得到的材料合并，總產(chǎn)量為2.7g的XIVw，為黃色固體，將其直接用于下一步驟。
向-40℃的2.7g(0.00716摩爾)的5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVw)、0.155g(0.00029摩爾)的1，3-雙(二苯基膦基)丙烷氯化鎳(II)和140mL的無水四氫呋喃的溶液中加入43mL 1M的氫化二異丁基鋁的甲苯溶液。將混合物于0℃攪拌6小時(shí)，然后通過小心地加入冰水而猝滅。將混合物用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的乙酸乙酯萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。剩余物由用乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶1)洗脫的硅膠色譜純化，得到1.5g的5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVw)，為橙色固體。MH+/Z＝337。
實(shí)施例73制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVa) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVa)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0014摩爾的(2-氨基-5-氟-4-甲氧基苯基)(2-氯苯基)-甲酮(Xa)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVa)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝357。
實(shí)施例74制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVx) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVx)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.00093摩爾的(2-氨基-4，5-二甲氧基苯基)(2-氯苯基)-甲酮(Xx)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVx)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝369。
實(shí)施例75制備8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVy) 8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVy)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0012摩爾的(2-氨基-4-氯-5-甲氧基苯基)(2-氯苯基)-甲酮(Xy)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVy)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝373。
實(shí)施例76制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3，7-二甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVz) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3，7-二甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVz)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0012摩爾的(2-氨基-4-甲氧基-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xz)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3，7-二甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVz)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝353。
此外，還從脫烷基化反應(yīng)中分離出0.4％的1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-5-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVe)。MH+/Z＝319。
實(shí)施例77制備1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVaa) 1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVaa)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-(2-甲氧基苯基)-甲酮(Xaa)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVaa)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝365。
實(shí)施例78制備5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)并[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVbb) 5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)并[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVbb)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(6-氨基-1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xbb)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)(dioxolo)-1-(2-丙烯基)-[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVbb)進(jìn)行脫烷基化制備的。MH+/Z＝353。
實(shí)施例79制備7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVcc) 7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVcc)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-5-氯-4-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xcc)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVcc)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝373。
實(shí)施例80制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVdd) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVdd)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xdd)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVdd)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝357。
實(shí)施例81制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVee) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVee)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-5-甲氧基-4-三氟甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xee)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVee)進(jìn)行脫烷基化制備的。MH+/Z＝407。
實(shí)施例82制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVff) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVff)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-5-甲氧基-4-苯基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xff)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVff)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝415。
實(shí)施例83制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVgg) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVgg)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-5-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xgg)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVgg)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝413。
實(shí)施例84制備8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVhh) 8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVhh)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-4-氯-5-甲基苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xhh)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVhh)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝357。
實(shí)施例85制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVii) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVii)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-5-甲氧基-4-(1-甲基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xii)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVii)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝397。
實(shí)施例86制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVjj) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVjj)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0023摩爾的(2-氨基-4-甲氧基-5-(1-甲基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xjj)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVjj)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝397。
實(shí)施例87制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVkk) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(IVkk)是以類似于實(shí)施例72的方式，通過使0.0014摩爾的(2-氨基-4-甲氧基-5-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-(2-氯苯基)-甲酮(Xkk)與4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)反應(yīng)，隨后用氫化二異丁基鋁對中間體5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XIVkk)進(jìn)行脫烷基化而制備的。MH+/Z＝413。
實(shí)施例88制備4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)，方法1(方案5) 步驟1制備5-氨基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(XV)向10.3g(0.056摩爾)的2-氰基-3-乙氧基-2-丁烯酸乙酯在250mL甲醇中的溶液中，加入8.9g(0.0616摩爾)的烯丙基肼二鹽酸鹽和39mL的三乙胺。將反應(yīng)混合物于80℃回流3小時(shí)，然后減壓下濃縮。將剩余物由用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫的硅膠色譜純化，得到6.7g的5-氨基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(XV)，為黃色油。
步驟2制備5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(XVI)向6.7g(0.032摩爾)的5-氨基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(XV)在30mL濃鹽酸中的溶液中，加入8.6g(0.064摩爾)的氯化銅(II)。將混合物冷卻至0℃，并且在20分鐘內(nèi)，分批地加入2.65g(0.038摩爾)的亞硝酸鈉。將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后于40℃攪拌2小時(shí)。將混合物用50mL水稀釋，并且用氯仿萃取兩次。將氯仿萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將剩余物由用乙酸乙酯-己烷(1∶4)洗脫的硅膠色譜純化，得到5.0g的5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(XVI)，為淡黃色油。
步驟3制備5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸(XVII)向5.0g(0.0249摩爾)的5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(XVI)在40mL的四氫呋喃-水-甲醇(3∶1∶1)中的溶液中，加入5mL 10M氫氧化鈉溶液。將混合物于65℃加熱4小時(shí)，然后在減壓下濃縮至更小的體積。通過加入鹽酸，將pH調(diào)節(jié)至1-2。將產(chǎn)物通過過濾收集，用水洗滌，并且干燥，得到4.7g的5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸(XVII)，為茶色固體。
步驟4制備5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羰基疊氮化物(XVIII)向-10℃的6.0g(0.030摩爾)的5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羧酸(XVII)、4.2mL(0.030摩爾)的三乙胺和100mL的丙酮的溶液中，加入2.9mL(0.030摩爾)的氯甲酸乙酯。30分鐘后，加入在50mL水中的5.8g(0.090摩爾)的疊氮化鈉。將混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后減壓下濃縮至約原始體積的一半。將混合物用氯仿萃取兩次，并且將萃取物用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮，得到4.7g5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羰基疊氮化物(XVIII)，為白色固體。
步驟5制備4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)將12.3g(0.0545摩爾)的5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑-4-羰基疊氮化物(XVIII)在120mL甲苯中的溶液于100℃加熱1小時(shí)。加入20mL的鹽酸，并且將混合物于110℃加熱2小時(shí)，然后冷卻。將混合物減壓下濃縮，然后與50mL的二氯甲烷和10mL的三乙胺一起于室溫?cái)嚢琛⒒旌衔镞^濾，并且將濾液在減壓下濃縮。將剩余物由用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫的硅膠色譜純化，得到6.0g的4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)，為橙色油。MS MH+/Z 172該材料具有用于隨后反應(yīng)的足夠的純度。
實(shí)施例89制備4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)，方法2(方案6) 步驟1制備5-氯-3-甲基-4-硝基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XX)在氬氣下，向5.0g(0.031摩爾)的5-氯-3-甲基-4-硝基-1H-吡唑在100mL的無水四氫呋喃中的溶液中，加入0.37g(0.0464摩爾)的氫化鋰。將混合物于室溫?cái)嚢?5分鐘。然后，加入5.6g(0.0464摩爾)的烯丙基溴，并且將混合物于80℃加熱10小時(shí)。將混合物冷卻，傾倒在冰上，并且用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將剩余物由用乙酸乙酯-己烷(1∶2)洗脫的硅膠色譜純化，得到作為高極性成分的1.36g3-氯-5-甲基-4-硝基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑，為無色油，和作為低極性成分的0.5g5-氯-3-甲基-4-硝基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XX)，為無色油。
步驟2還原XX，生成4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)將0.5g(0.00248摩爾)的5-氯-3-甲基-4-硝基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XX)、1.6g(0.0198摩爾)的氯化銨、1.6g的鋅粉、20mL的甲醇和20mL的水的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將混合物過濾，并且將濾液用乙酸乙酯萃取。將乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。剩余物由用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫的硅膠色譜純化，得到0.10g的4-氨基-5-氯-3-甲基-1-(2-丙烯基)-1H-吡唑(XIII)，其與在上面實(shí)施例88(方法1)中制備的材料相同。
實(shí)施例90制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIa) 向0.64g(0.0019摩爾)的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7-氟-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIa)在5mL的二氯甲烷中的溶液中，加入5mL(0.029摩爾)的1，1-二乙氧基-N，N-二甲基-甲胺。將混合物于室溫?cái)嚢柽^夜，然后減壓下濃縮。將含有中間體XXIa的剩余物與18mL的二氯甲烷、5.5mL的甲醇和0.3mL的肼的混合物一起攪拌6小時(shí)，然后在二氯甲烷和水之間分配。將二氯甲烷層用水洗滌兩次，用無水硫酸鈉干燥，過濾，并且減壓下濃縮。將產(chǎn)物由用乙酸乙酯-己烷(4∶1)洗脫的硅膠色譜純化，提供0.500g的5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIa)。從二氯甲烷-乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到XXIIa，為淡紅色固體，mp 242-243℃。
實(shí)施例91制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIz) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIz)是以類似于實(shí)施例90的方式，通過使0.003摩爾的5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-8-甲氧基-7-甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIz)與1，1-二乙氧基-N，N-二甲基-甲胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。從乙酸乙酯-甲醇中重結(jié)晶，提供5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜，為淡紅色固體，mp 275-276℃。
實(shí)施例92制備5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氰基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIb) 5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氰基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIb)是以類似于上面的實(shí)施例的方式，通過使0.00096摩爾的5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，3-二氫-8-甲氧基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-硫酮(IIb)與1，1-二乙氧基-N，N-二甲基-甲胺反應(yīng)，然后與肼反應(yīng)而制備的。從乙酸乙酯中重結(jié)晶，提供5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氰基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜(XXIIb)，為淡紅色固體，mp 288-290℃。
實(shí)施例93片劑制劑項(xiàng) 組分Mg/片1化合物1*5251002505007502無水乳糖 103 8335 19 38 573交聯(lián)羧甲基 66 8 16 32 48纖維素鈉4聚乙烯吡咯 55 6 12 24 36烷酮K305硬脂酸鎂 11 1 3 6 9總重 120 120 150300600900*化合物1表示本發(fā)明的一種化合物。
制備步驟在適宜的混合器中將第1、2和3項(xiàng)混合15分鐘。
用20％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液(第4項(xiàng))對來自步驟1的粉末混合物制粒。
在50℃下干燥來自步驟2的顆粒。
使來自步驟3的顆粒通過適宜的研磨設(shè)備。
將第5項(xiàng)加入到研磨的制粒步驟4中并混合3分鐘。
在適宜的壓片機(jī)上壓制來自步驟5的顆粒。
實(shí)施例94膠囊劑項(xiàng)組分 mg/膠囊1 化合物1*5251002505002 無水乳糖159 123 148-- --3 玉米淀粉25 3540 35 704 滑石10 1510 12 245 硬脂酸鎂12 2 3 6總填充重量 200 200 300300600*化合物1表示本發(fā)明的化合物。
制備步驟在適宜的混合器中將第1、2和3項(xiàng)混合15分鐘。
加入第4和5項(xiàng)并混合3分鐘。
填充入適宜的膠囊。
實(shí)施例95注射液/乳劑制劑項(xiàng)組分 mg/mL1 化合物1*1mg2 FEG 400 10-50mg3 卵磷脂20-50mg4 大豆油1-5mg5 甘油 8-12mg6 水適量1mL*化合物1表示本發(fā)明的化合物。
制備步驟溶解第1項(xiàng)于第2項(xiàng)中。
將第3、4和5項(xiàng)加入到第6項(xiàng)中并混合至分散，然后勻化。
將來自步驟1的溶液加入到來自步驟2的混合物中，并勻化至分散液變?yōu)榘胪该鳌?br> 無菌過濾通過0.2μm濾膜并裝入小瓶。
實(shí)施例96注射液/乳劑制劑項(xiàng)組分 mg/mL1 化合物1*1mg2 四氫呋喃聚乙二醇醚 10-50mg3 卵磷脂 20-50mg4 大豆油 1-5mg5 甘油 8-12mg6 水 適量至1mL*化合物1表示本發(fā)明的化合物。
制備步驟溶解第1項(xiàng)于第2項(xiàng)中。
將第3、4和5項(xiàng)加入到第6項(xiàng)中并混合至分散，然后勻化。
將來自步驟1的溶液加入到來自步驟2的混合物中，并勻化至分散液變?yōu)榘胪该鳌?br> 無菌過濾通過0.2μm濾膜并裝入小瓶。
如下證明本發(fā)明化合物的抗血管源性活性和抗增殖活性。這些效果表明感興趣的化合物在抑制血管生成并且在治療癌癥，特別是實(shí)體瘤如乳腺和結(jié)腸癌方面是有用的。
實(shí)施例97CDK2 Flash Plate測定為確定CDK2活性的抑制，將純化的重組成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤(Rb)蛋涂布在96孔FlashPlate培養(yǎng)板(New England Nuclear，Boston，MA)上。Rb是由CDK2介導(dǎo)的磷酸化的天然底物(Herwig和Strauss Eur.J.Biochem.，246卷(1997)581-601頁，和該文引用的參考文獻(xiàn))。從昆蟲細(xì)胞提取物中部分純化重組活性人細(xì)胞周期蛋白E/CDK2復(fù)合物。將活性細(xì)胞周期蛋白E/CDK2與33P-ATP和測試化合物的稀釋物一起加入到Rb涂布的FlashPlate中。室溫?fù)u動孵育該板25分鐘，然后洗滌，并在Topcount閃爍計(jì)數(shù)器(Packard Instrument Co.，Downers Grove，IL)中計(jì)數(shù)。測試化合物的稀釋物在每個(gè)測定中一式兩份進(jìn)行檢測。依照下式，確定Rb磷酸化的抑制百分比，其為CDK2活性抑制的衡量標(biāo)準(zhǔn)
其中，“實(shí)驗(yàn)化合物”指的是重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均數(shù)/分鐘，“非特異性數(shù)”指的是當(dāng)不加入細(xì)胞周期蛋白E/CDK2時(shí)的平均數(shù)/分鐘，“總數(shù)”指的是當(dāng)不加入化合物時(shí)的平均數(shù)/分鐘。
本發(fā)明化合物的CDK2IC50值低于10μM，優(yōu)選低于1μM。代表性化合物的KDR IC50值列于下面的表I中。
表ICDK2的抑制
實(shí)施例98KDR & FGFr為了測定對KDR和FGFR的抑制作用，使用HTRF(Homogeneous TimeResolved Fluorescence)測定法進(jìn)行激酶試驗(yàn)。該測定法描述在A.J.Kolb等，Drug Discovery Today，1998，3(7)，p333中。
在激酶反應(yīng)前，在活化緩沖液(50mM HEPES，pH 7.4、1mM DTT、10％甘油、150mM NaCl、0.1mM EDTA、26mM MgCl2和4mM ATP)存在下活化重組EEE-標(biāo)記的KDR。將該酶在4℃溫育1小時(shí)。
在96-孔聚丙烯平板(Falcon)中進(jìn)行激酶活性試驗(yàn)，其中各孔中總體積為90μL。各孔中含有1μM KDR底物(生物素-EEEEYFELVAKKKK)、1nM活化的KDR和100μM至128pM(1∶5連續(xù)稀釋)范圍內(nèi)的8個(gè)試驗(yàn)濃度之一的測試化合物。在100mM HEPES，pH 7.4、1mM DTT、0.1mMNa2VO4、25mM MgCl2、50mM NaCl(來自KDR儲備溶液)、1％DMSO(來自化合物)、0.3mM ATP(在Km濃度下)和0.02％BSA存在下，進(jìn)行激酶活性試驗(yàn)。將該反應(yīng)體系在37℃下溫育30分鐘。為了終止KDR反應(yīng)，將72μL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)入含有18μL展開緩沖液(20mM EDTA、50mMHEPES，pH 7.4、0.02％BSA、10nM Eu-標(biāo)記的抗-pY抗體(終濃度2nM)和100nM鏈霉抗生物素(終濃度20nM))的STOP平板中?；旌虾?，將35μL的溶液轉(zhuǎn)入384-孔黑平板(Costar)的兩個(gè)孔中，并用Wallac Victor 5讀出器在615/665nm處讀數(shù)。
如上述對KDR活性試驗(yàn)所述進(jìn)行FGFR活性試驗(yàn)，但有如下區(qū)別。在室溫，于下列活化緩沖液中將GST-標(biāo)記的FGFR酶活化1小時(shí)100mMHEPES，pH 7.4、50mM NaCl、20mM MgCl2和4mM ATP。在100mMHEPES、1mM DTT、0.4mM MgCl2、0.4mM MnCl2、50mM NaCl、1％DMSO、10μM ATP(對FGFR而言Km＝8.5μM)、0.1mM Na2VO4和0.02％BSA存在下，使用1μM底物(生物素-EEEEYFELV)、1.5nM活化的FGFR和測試化合物進(jìn)行激酶活性試驗(yàn)，總體積為90μL。按照與KDR試驗(yàn)相同的方式進(jìn)行試驗(yàn)的其余部分。
根據(jù)一式兩份的數(shù)據(jù)組確定化合物的IC50值，并通過使用Excel和與等式Y(jié)＝[(a-b)/{1+(X/c)d]+b的擬合數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，其中a和b分別為在沒有測試抑制劑化合物存在和有極大量測試抑制劑化合物存在下的酶活性，c為IC50且d為化合物響應(yīng)的希爾常數(shù)。IC50值是在所述測試條件下將酶的活性降低50％的測試化合物濃度。
本發(fā)明化合物的KDR IC50值低于10μM，優(yōu)選低于1μM，最優(yōu)選低于0.5μM，或FGFR IC50值低于10μM，優(yōu)選低于1μM。最優(yōu)選地，本發(fā)明化合物的KDR IC50值低于1μM和FGFR IC50值低于1μM。代表化合物的KDR IC50值列于下面的表II中，并且代表化合物的FGFR IC50值列于下面的表III中。
表IIKDR的抑制
表IIIFGFR的抑制
實(shí)施例99MDA-MB-435，SW480和HCT-116從American Type Cell Culture Collection(ATOC；Rockvilie，MD)購買雌激素受體陰性上皮乳腺癌系(MDA-MB-435)，并且在ATCC推薦的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。為了分析測試化合物對這些細(xì)胞生長的影響，將該細(xì)胞在96孔組織培養(yǎng)板上以每孔2000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行鋪板，然后在37℃、5％CO2下溫育過夜。第二天，將測試化合物溶解于100％二甲亞砜(DMSO)中，制成10mM儲備液。將每種化合物用足夠量的無菌培養(yǎng)基稀釋至1mM，得到最終濃度120μM。然后將該化合物用1.2％DMSO在培養(yǎng)基中連續(xù)稀釋。將四分之一最終體積的稀釋化合物轉(zhuǎn)移至96孔板上。重復(fù)檢測該測試化合物。將DMSO加入到一排“對照細(xì)胞”中，使每孔中DMSO的終濃度達(dá)到0.3％。將沒有加入細(xì)胞的孔作為“空白”。將沒有加入抑制劑的孔作為“無抑制劑對照”。將該板再重新置于培養(yǎng)箱中，加入測試化合物后5天，如下進(jìn)行分析。
將3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑溴鎓(噻唑蘭；MTT)加入到每孔上，得到最終濃度1mg/mL。然后將該板在37℃溫育3小時(shí)。在將含MTT培養(yǎng)基吸出前，將該板在1000rpm下離心5分鐘。然后取出含MTT培養(yǎng)基，將100μL 100％乙醇加入到每孔中，以溶解最終的甲代謝物。為了保證完全溶解，將該板在室溫?fù)u動15分鐘。570nm下在微量滴定板讀數(shù)器(Molecular Dynamics)上讀出吸光度讀數(shù)，650nm下讀數(shù)作為對照。通過所有孔的值減去空白孔(沒有細(xì)胞)的吸光度，然后用1.00減去每個(gè)測試化合物重復(fù)測定的平均值與對照平均值的比值，計(jì)算抑制百分比。對濃度的對數(shù)值/抑制百分比曲線進(jìn)行線性回歸，確定抑制濃度(IC50)。
本發(fā)明化合物的MDA-MB-435 IC50值低于20μM，優(yōu)選低于2μM。對于5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iw)，在MDA-MB-435細(xì)胞基試驗(yàn)中抑制的IC50值為0.950μM。
還從ATCC獲得結(jié)腸腺癌系SW480和結(jié)腸癌系HCT-116，并且按照上述與MDA-MB-435細(xì)胞基檢測相同的方案進(jìn)行檢測，只是進(jìn)行以下修改。細(xì)胞系SW480以每孔1000細(xì)胞進(jìn)行鋪板，在加入測試化合物后第6天進(jìn)行檢測。細(xì)胞系HCT-116以每孔1000細(xì)胞進(jìn)行鋪板，在加入測試化合物后第4天進(jìn)行分析。
本發(fā)明化合物的SW480 IC50值低于20μM，優(yōu)選低于2μM。對于5-(2-氯苯基)-1，3-二氫-7，8-二甲基-2H-1，4-苯并二氮雜-2-酮(Iw)，在SW480(結(jié)腸)基試驗(yàn)中抑制的IC50值為0.950μM。
本發(fā)明化合物的HCT-116 IC50值低于20μM，優(yōu)選低于2μM。對于代表性化合物，在HCT-116(結(jié)腸)基試驗(yàn)中抑制的IC50值列于下面的表IV中。
表IV抗增殖活性HCT 116(結(jié)腸)試驗(yàn)
實(shí)施例100VEGF和FGF-刺激的HUVBC增殖試驗(yàn)通過BrdU試驗(yàn)、使用BrdU試劑盒(Roche Biochemicals 1-647-229)評價(jià)本發(fā)明測試化合物在細(xì)胞基試驗(yàn)中的抗增殖活性。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC，Clonetics CC-2519)在EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并以10000個(gè)細(xì)胞/孔在96-孔平底平板(Costar 3595)中體積為200μL的EGM-2(Clonetics CC-3162)培養(yǎng)基中接種過夜。在37℃和5％CO2下培養(yǎng)24小時(shí)后，通過抽吸緩慢除去溫育培養(yǎng)基，并用含有50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)的300μL預(yù)溫?zé)岬腅BM-2(Clonetics CC-3156)洗滌各孔中的內(nèi)含物。隨后再次抽吸剩余的培養(yǎng)基，并用160μL/孔缺血清的培養(yǎng)基(補(bǔ)充了1％加熱失活的FBS(CloneticsCC-4102)、50μg/mL慶大霉素和50ng/mL兩性霉素-B(Clonetics CC-4083)、10個(gè)單位/mL Wyeth-Ayerst肝素(NDC0641-0391-25)和2mM L-谷氨酰胺(GIBCO 25030-081)的EBM-2)替代。在對細(xì)胞進(jìn)行缺血清24小時(shí)后，將20μL在含有2.5％DMSO的缺血清培養(yǎng)基中10X測試濃度的測試化合物加入到適宜的孔中。對照孔含有20μL含有2.5％DMSO的缺血清培養(yǎng)基。將平板放回培養(yǎng)箱內(nèi)2小時(shí)。在將細(xì)胞與測試化合物一起預(yù)溫育2小時(shí)后，加入在缺血清培養(yǎng)基中10X稀釋的測試濃度的20μL生長因子、50ng/mL的FGF或200ng/mL的VEGF(R & D systems 293-VE)。本試驗(yàn)中FGF的終濃度為5ng/mL，且本試驗(yàn)中VEGF的終濃度為20ng/mL。不含生長因子的對照孔中含有20μL/孔的缺血清培養(yǎng)基和與含有生長因子的孔中相同量的BSA。將平板再放回培養(yǎng)箱內(nèi)22小時(shí)。
BrdU ELISA在接觸測試化合物24小時(shí)后，通過加入已經(jīng)在缺血清培養(yǎng)基中稀釋(1∶100)的20μL/孔的BrdU標(biāo)記試劑而用BrdU(Roche Biochemicals1-647-229)標(biāo)記細(xì)胞。然后將平板放回到培養(yǎng)箱內(nèi)4小時(shí)。通過在紙巾上吸干培養(yǎng)基除去標(biāo)記培養(yǎng)基。通過將200μL固定/變性溶液加入到各孔中并在室溫下溫育45分鐘而固定細(xì)胞并使DNA變性。在紙巾上吸干固定/變性溶液并向各孔中加入100μL抗-BrdU-POD，并在室溫下將各孔溫育2小時(shí)。除去抗體溶液并用300μLPBS將孔各自洗滌3-4次。向各孔中加入100μL TMB底物溶液，并將各孔在室溫下溫育5-8分鐘。然后通過加入100μL/孔的1M磷酸終止反應(yīng)。在450nm處與650nm對照波長處讀取平板。通過下列步驟計(jì)算各測試化合物的抑制百分比從所有孔中扣除空白(不含細(xì)胞)孔的吸光度，然后用1減去一式兩份的每次測試的平均吸光度與對照平均值的比值。隨后將終產(chǎn)物乘以100(抑制％＝(1-一式兩份測試的平均吸光度/對照平均值)100)。IC50值為抑制50％BrdU標(biāo)記的測試化合物濃度且為抑制細(xì)胞增殖的測定值。根據(jù)對濃度的對數(shù)與抑制百分比的曲線進(jìn)行線性回歸來確定IC50。
本發(fā)明化合物的VEGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)IC50值低于10μM，優(yōu)選低于1μM，或FGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)IC50值低于10μM，優(yōu)選低于1μM。更優(yōu)選地，本發(fā)明化合物的VEGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)IC50值低于1μM，并且FGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)IC50值低于1μM。代表性化合物在VEGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)中的IC50值提供于表V中，并且代表性化合物在FGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)中的IC50值提供于下面的表VI中。
表V抗增殖活性VEGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)
表VI抗增殖活性FGF-刺激的HUVEC試驗(yàn)
實(shí)施例101H460a從(ATOC；Rockvilie，MD)購買H460a細(xì)胞系，并且在ATCC推薦的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。為了分析測試化合物對這些細(xì)胞生長的影響，將該細(xì)胞在96孔組織培養(yǎng)板上以每孔150個(gè)細(xì)胞進(jìn)行鋪板，然后在37℃、5％CO2下溫育過夜。第二天，將測試化合物溶解于100％二甲亞砜(DMSO)中，制成10mM儲備液。將每種化合物用足夠量的無菌培養(yǎng)基稀釋至1mM，得到最終濃度120μM。然后將該化合物用1.2％DMSO在培養(yǎng)基中連續(xù)稀釋。將四分之一最終體積的稀釋化合物轉(zhuǎn)移至96孔板上。重復(fù)檢測該測試化合物。將DMSO加入到一排“對照細(xì)胞”中，使每孔中DMSO的終濃度達(dá)到0.3％。將沒有加入細(xì)胞的孔作為“空白”。將沒有加入抑制劑的孔作為“無抑制劑對照”。將該板再重新置于培養(yǎng)箱中，加入測試化合物后第5天，如下進(jìn)行分析。
將3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物(噻唑蘭；MTT)加入到每孔上，得到最終濃度1mg/mL。然后將該板在37℃溫育3小時(shí)。在將含MTT培養(yǎng)基吸出前，將該板在1000rpm下離心5分鐘。然后取出含MTT培養(yǎng)基，將100μL 100％乙醇加入到每孔中，以溶解最終的甲代謝物。為了保證完全溶解，將該板在室溫?fù)u動15分鐘。在微量滴定板讀數(shù)器(Molecular Dynamics)上讀出570nm波長處的吸光度，在650nm波長處讀數(shù)作為對照。通過從所有孔的值減去空白孔(沒有細(xì)胞)的吸光度，然后用1.00減去每個(gè)測試化合物重復(fù)測定的平均值與對照平均值的比值，得到抑制百分比。通過對濃度的對數(shù)值/抑制百分比的曲線進(jìn)行線性回歸，確定抑制濃度(IC50)。
本發(fā)明化合物的H460a IC50值低于20μM，優(yōu)選低于2μM。對于代表性化合物，在H460a基試驗(yàn)中抑制的IC50值列于表VII中。在H460a試驗(yàn)中，對于代表性化合物的IC90值列于下面的表VII中。
表VII抗增殖活性H460a試驗(yàn)
如上所述，本發(fā)明化合物具有抗血管源性活性，因而可以用于抑制個(gè)體中的血管生成。血管生成與癌癥相關(guān)。具體而言，腫瘤在沒有新血管生長以供給和滋養(yǎng)它們的情況下僅可以生長到一定的尺寸。因此，通過抑制這種新血管的生長，本發(fā)明的化合物可以用于治療癌癥。因此，本發(fā)明提供一種抑制患者中血管生成的方法，該方法包括給藥治療有效量，即血管生成-抑制量的式IV的化合物。
除了它們的抗血管源性活性外，本發(fā)明的化合物還是各種激酶如CDK2、KDR和FGFr的抑制劑。這些激酶的抑制影響腫瘤細(xì)胞的增殖。因此，本發(fā)明還提供通過直接抑制激酶而抑制腫瘤生長的方法。
本發(fā)明提供用于治療癌癥的方法，該方法包括給患有癌癥的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥用鹽。具體而言，本發(fā)明提供用于治療乳腺癌的方法，該方法包括給患有乳腺癌的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥用鹽。本發(fā)明還提供用于治療前列腺癌的方法，該方法包括給患有前列腺癌的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥用鹽。本發(fā)明進(jìn)一步提供用于治療結(jié)腸癌的方法，該方法包括給患有結(jié)腸癌的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥用鹽。本發(fā)明提供用于治療肺癌的方法，該方法包括給患有肺癌的患者給藥治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥用鹽。
盡管參照具體和優(yōu)選實(shí)施方案解釋了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解可以通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)和實(shí)施本發(fā)明進(jìn)行改變和修改。因此，本發(fā)明并不限于上述描述，而由后附權(quán)利要求及其等同技術(shù)方案定義。
權(quán)利要求
1.下式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1為鹵素。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為氰基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為O(CH2)mNR7R8。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中R7和R8與它們連接的N原子一起形成6元雜環(huán)。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為鹵素。
8.權(quán)利要求7的化合物，選自5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜，和7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
9.權(quán)利要求6的化合物，其中R1為氰基。
10.權(quán)利要求9的化合物，選自5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(3-(4-嗎啉基)丙氧基))-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜，和5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
11.權(quán)利要求5的化合物，其中R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中R1為鹵素。
13.權(quán)利要求11的化合物，其中R1為氰基。
14.權(quán)利要求13的化合物，其為5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-((2-甲氧基乙基)甲氨基)-乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
15.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為N(R6)2。
16.權(quán)利要求15的化合物，其中R1為鹵素。
17.權(quán)利要求16的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-N，N-二甲氨基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
18.權(quán)利要求15的化合物，其中R1為氰基。
19.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為鹵素，烷基或被鹵素取代的烷基。
20.權(quán)利要求19的化合物，其中R1為烷基。
21.權(quán)利要求20的化合物，選自8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜，和5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
22.權(quán)利要求19的化合物，其中R1為鹵素。
23.權(quán)利要求19的化合物，其中R1為烷氧基。
24.權(quán)利要求23的化合物，選自5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
25.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為羥基，烷氧基或被鹵素取代的烷氧基。
26.權(quán)利要求25的化合物，其中R1為鹵素。
27.權(quán)利要求26的化合物，選自7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；7-溴-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
28.權(quán)利要求27的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
29.權(quán)利要求25的化合物，其中R1為烷氧基。
30.權(quán)利要求29的化合物，選自5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-5-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
31.權(quán)利要求25的化合物，其中R1為烷基。
32.權(quán)利要求31的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
33.權(quán)利要求25的化合物，其中R1為O(CH2)nOCH3。
34.權(quán)利要求33的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
35.權(quán)利要求25的化合物，其中R1為氰基。
36.權(quán)利要求35的化合物，其為5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
37.權(quán)利要求25的化合物，其中R1為NH2C(O)。
38.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為苯基。
39.權(quán)利要求38的化合物，其中R1為烷氧基。
40.權(quán)利要求39的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
41.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為(OCH2CH2)nOCH3。
42.權(quán)利要求41的化合物，其中R1為鹵素。
43.權(quán)利要求42的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
44.權(quán)利要求41的化合物，其中R1為烷氧基。
45.權(quán)利要求44的化合物，其為5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
46.權(quán)利要求41的化合物，其中R1為氰基。
47.權(quán)利要求46的化合物，選自5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜，和5-(2-氯苯基)-7-氰基-1，2-二氫-8-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-3-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
48.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2一起形成二氧戊環(huán)。
49.權(quán)利要求48的化合物，其為5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)并[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
50.權(quán)利要求1的化合物，其中R3為氫。
51.權(quán)利要求50的化合物，選自5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氰基-8-甲氧基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
52.權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含治療有效量的式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽，和藥用載體。
53.一種抑制具有腫瘤的患者中血管生成的方法，該方法包括給藥治療有效量的式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；m為2，3或4；或其藥用鹽。
54.一種治療患者中乳腺癌的方法，該方法包括給藥治療有效量的式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
55.一種治療患者中前列腺癌的方法，該方法包括給藥治療有效量的式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
56.一種治療患者中結(jié)腸癌的方法，該方法包括給藥治療有效量的式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
57.一種治療患者中肺癌的方法，該方法包括給藥治療有效量的式IV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；或其藥用鹽。
58.一種制備下式IV的化合物的方法 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；所述方法包括(a)將式I的苯并二氮雜內(nèi)酰胺 轉(zhuǎn)變?yōu)槭絀I的硫代內(nèi)酰胺 (b)使式II的硫代內(nèi)酰胺與N，N-二甲基乙酰胺的二甲基縮醛反應(yīng)，生成式III的化合物 以及(c)使式III的化合物與肼反應(yīng)，生成式IV的化合物。
59.一種制備式IV的化合物的方法 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；所述方法包括(a)將式I的苯并二氮雜內(nèi)酰胺 轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的式V的O-甲基醚 (b)使式V的醚與N，N-二甲基乙酰胺的二甲基縮醛反應(yīng)，生成式VI的化合物 以及(c)使式VI的化合物與肼反應(yīng)，生成式IV的化合物。
60.一種制備式IV的化合物的方法 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R3為氫或烷基；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4；所述方法包括(a)使式X的化合物 與式XIII的氨基-氯-吡唑衍生物反應(yīng) 生成式XIV的化合物 以及(b)使式XIV的化合物在氫化二異丁基鋁和鎳催化劑存在下反應(yīng)，生成式IV的化合物。
61.式XIV的化合物 其中R1為烷基，烷氧基，鹵素，COOH，COO烷基，CN，C(O)N(R6)2或(OCH2CH2)nOCH3；R2為烷基，鹵素，被鹵素取代的烷基，OH，烷氧基，被鹵素取代的烷氧基，苯基，N(R6)2，(OCH2CH2)nOCH3，O(CH2)mNR7R8或 為任選被烷基或C(O)OR6取代的6元雜環(huán)；或者R1和R2一起形成5元雜環(huán)；R4為氫，鹵素，CN，NO2，烷基或烷氧基；每個(gè)R6獨(dú)立地為氫或烷基；R7和R8各自獨(dú)立地為氫，烷基或烷氧基烷基；或R7和R8與它們連接的氮原子一起形成任選被烷基取代的6元雜環(huán)；每個(gè)n獨(dú)立地為1，2或3；以及m為2，3或4。
62.權(quán)利要求61的化合物，選自5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7，8-三甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-氟-8-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7，8-二甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3，7-二甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；1，2-二氫-7，8-二甲氧基-5-(2-甲氧基苯基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-8，10-二氫-7-甲基-1，3-二氧戊環(huán)并[4，5-h]吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及7-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
63.權(quán)利要求61的化合物，選自5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-氟-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-8-三氟甲基-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-3-甲基-8-苯基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-甲氧基乙氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；8-氯-5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-3，7-二甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-7-甲氧基-8-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-(1-甲基乙氧基)-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜；以及5-(2-氯苯基)-1，2-二氫-8-甲氧基-7-甲氧基乙氧基-3-甲基-1-(2-丙烯基)-吡唑并[3，4-b][1，4]苯并二氮雜。
64.根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物，其中R4為鄰-氯；以及R1，R2和R3具有權(quán)利要求1中給出的含義。
65.根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物，其中R3為甲基；R4為鄰-氯；以及R1和R2具有權(quán)利要求1中給出的含義。
66.根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物，其中R1為鹵素或-CN；R3為甲基；R4為鄰-氯；以及R2具有權(quán)利要求1中給出的含義。
67.用于治療癌癥，特別是乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌和肺癌的根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物。
68.根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物用于制備藥劑的應(yīng)用，所述的藥劑用于治療癌癥，特別是乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌和肺癌。
69.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物和藥用輔料。
70.根據(jù)權(quán)利要求69的藥物組合物，其用于治療癌癥，特別是乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌和肺癌。
71.由根據(jù)權(quán)利要求58至60中任何一項(xiàng)的方法制備的根據(jù)權(quán)利要求1的式IV的化合物。
72.基本上如上所述的新型化合物、組合物、方法和應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)的化合物，其中R
文檔編號A61K31/5517GK101039946SQ200580035121
公開日2007年9月19日 申請日期2005年10月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月13日
發(fā)明者劉進(jìn)軍, 陸建春, 賈科莫·皮佐拉托, 任毅, 克希蒂吉·查比爾波?！に_卡, 彼得·米夏埃爾·沃庫利希, 張筑明 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司