專利名稱：三唑并酞嗪化合物的制作方法
三唑并酞嗪化合物發(fā)明申請領(lǐng)域本發(fā)明涉及可用于制藥工業(yè)中生產(chǎn)藥用組合物的新型三唑并酞嗪衍生物。已知技術(shù)背景可從先有技術(shù)了解三唑并酞嗪化合物。如，EP85840、 WO98/04559 、WO98/50385 、WO99/06407 (US6313125)、 WO02/083140、 US6525055、 EP0728759 (US 6001830); J. Med. Chem" (1988)， 31, 1115-1123; J. Med. Chem" (2004)， 47, 1807-1822和J. Med. Chem., (2004)， 47, 2176-2179中描述了各種取代型式的三唑并酞嗪化 合物。但是，其中從未公開過本發(fā)明的苯胺基-取代的三唑并酞嗪衍生物。也從未描述過三唑并酞。秦衍生物作為PDE2-抑制劑。 發(fā)明詳述目前已發(fā)現(xiàn)在下面詳細(xì)描述的新型的三唑并酞嗪衍生物具有令 人驚訝的和特別有益的特性。因此，在第一方面，本發(fā)明涉及式I的化合物 其中Rl為-U-A，其中11為直接鍵或亞曱基(-012-)，A為苯基、吡啶基、噻吩基或Rll-和/或Rlll-取代的苯基，其中Rll為l-4C-烷基、卣素、三氟曱基、羥基、l-4C-烷氧基、完 全或大部分被氟取代的l-4C-烷氧基、苯氧基、l-4C-烷氧基羰基、 嗎啉代或二-1 -4C-烷基氨基，Rlll為l-4C-烷氧基、囟素、羥基或l-4C-烷基， R2為氨基、羧基、l-4C-烷氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(O)-N(R4)R5，其中R3為l-4C-烷基、2-4C-烯基、3-7C-環(huán)烷基、三氟曱基、苯基、 R31-和/或R311-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取 代的l-4C-烷基或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為l-4C-烷氧基、鹵素、硝基、l-4C-烷基、三氟曱基、羥 基、l-4C-烷氧基羰基、3-7C-環(huán)烷基曱氧基、嗎啉代或單-或二-l-4C-烷基氨基，R311為l-4C-烷氧基、卣素、l-4C-烷基、羥基或3-7C-環(huán)烷基曱氧基，或R31和R311 —起為1-2C-亞烷基二氧基(alkylenedioxy )， R32為羥基、苯基-l-4C-烷氧基、l-4C-烷氧基、苯基、R321-和/或R3211-取代的苯基、單-或二-l-4C-烷基氨基、嗎啉代或4N-(R322)-哌嗪-l-基，其中R321為l-4C-烷氧基、卣素、硝基、l-4C-烷基、三氟曱基、羥基、l-4C-烷氧基羰基、3-7C-環(huán)烷基曱氧基或單-或二-l-4C-烷基氨基、R3211為l-4C-烷氧基、卣素、l-4C-烷基、羥基或3-7C-環(huán)烷基曱氧基，或R321和R3211 —起為l-2C-亞烷基二氧基， R322為1-4C-烷基， R33為氫、1 -4C-烷基或14C-烷基羰基， R4為氫、l-4C-烷基，R41-取代的2-4C-烷基、苯基、R42-和/或R421-取代的苯基或 吡咬基，其中R41為羥基、l-4C-烷氧基、單-或二-l-4C-烷基氨基或嗎啉代， R42為l-4C-烷氧基、卣素、硝基、l-4C-烷基、三氟曱基、羥 基、l-4C-烷氧基羰基、3-7C-環(huán)烷基曱氧基或單-或二-l-4C-烷基氨基， R421為l-4C-烷氧基、卣素、l-4C-烷基、羥基或3-7C-環(huán)烷基甲氧基，或R42和R421 —起為l-2C-亞烷基二氧基， R5為氫或l-4C-烷基，或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het， 其中Het為嗎啉代或4N-(l-4C-烷基)-哌嗪-l-基， 及這些化合物的 鹽。1- 4C-烷基為具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。其實(shí)例為丁 基、異丁基、仲丁基、叔丁基、丙基、異丙基，和，特別為乙基和 曱基。2- 4C-烷基為具有2-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。其實(shí)例為丁 基、異丁基、仲丁基、叔丁基、丙基、異丙基和乙基。3- 7C-環(huán)烷基表示環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基， 其中優(yōu)選環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。2-4C-烯基為具有2-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基。其實(shí)例為乙 烯基(vinyl)、 2-丁烯基、3-丁烯基、1-丙烯基和2-丙烯基(烯丙基)。本發(fā)明的鹵素為碘，或特別為溴、氯或氟。l-4C-烷氧基表示除氧原子外包含具有1-4個(gè)碳原子的直鏈或支 鏈烷基的基團(tuán)。其實(shí)例為丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、 丙氧基、異丙氧基，優(yōu)選為乙氧基和曱氧基。l-4C-烷氧基羰基為連有上述l-4C-烷氧基的羰基。其實(shí)例為曱
氧基羰基(CH30-C(0)-)和乙氧基羰基(CH3CH20C(0)-)。3-7C-環(huán)烷基曱氧基表示環(huán)丙基曱氧基、環(huán)丁基曱氧基、環(huán)戊基 曱氧基、環(huán)己基曱氧基或環(huán)庚基曱氧基，其中優(yōu)選環(huán)丙基曱氧基和 環(huán)戊基曱氧基。l-2C-亞烷基二氧基表示，例如亞曱二氧基(-0-CH2-0-)或亞乙二 氧基(-0-CH2-CH2-0-)。完全或大部分被氟取代的l-4C-烷氧基為，例如，2,2,3,3，3-五氟 丙氧基、全氟乙氧基、1,2,2-三氟乙氧基和特別為1,1,2,2-四氟乙氧基、 2,2,2-三氟乙氧基、三氟曱氧基和二氟曱氧基，其中優(yōu)選為二氟曱氧 基。"大部分"在此文中表示l-4C-烷氧基中超過一半的氫原子被氟原 子置換。二—i —4C-烷基氨基表示被兩個(gè)不同或兩個(gè)相同的上述1 -4C-烷基 取代的氨基。其實(shí)例為二曱基氨基、二乙基氨基和二異丙基。二_( i —4C-烷氧基)-苯基表示在任何可能的位置被兩個(gè)可相同或不 同的上述l-4C-烷氧基取代的苯基。單-或二—14C-烷基氨基除氮原子外包含一個(gè)或兩個(gè)上述14C-烷基。優(yōu)選的為二-l-4C-烷基氨基，特別為二曱基氨基、二乙基氨基和 二異丙基氨基。苯基-l-4C-烷氧基表示被苯基取代的上述l-4C-烷氧基之一。其實(shí)例為節(jié)氧基和苯乙氧基。l-4C-烷基羰基為連有上述1-4C-烷基之一的羰基。實(shí)例為乙酰 基(CH3CO-)。除非另有說明，本文提到的雜環(huán)基團(tuán)表示其所有可能的異構(gòu)形式。除非另有說明，本文提到的雜環(huán)基團(tuán)特別表示其所有可能的位 置異構(gòu)體。例如，術(shù)語吡啶基(pyridyl)或p比咬基，單獨(dú)使用或作為其它 基團(tuán)的一部分，包括吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基；或1N-(R33)-
哌啶基包括1N-(R33)-哌啶-2-基、1N-(R33)-哌啶-3-基和1N-(R33)-派 啶-4-基。1N-(R33)-哌啶基表示在氮原子上被R33取代的哌啶基，如在其 氮原子上被R33取代的任何選自派，定_2_基、哌啶-3-基和哌啶-4-基的基團(tuán)。4N-(R322)-哌。秦-l-基表示在其4-位的氮原子上被R322取代的哌 。秦-l-基。4N-(l-4C-烷基)-哌。秦-l-基表示在其4-位的氮原子上被上述1-4C-烷基之一取代的哌嗪-l-基，如4N-甲基-哌嗪-l-基。 2-(R41)-乙基表示2-位被R41取代的乙基。義為"鍵"的結(jié)構(gòu)相連時(shí)，則所述兩個(gè)部分為通過單鍵直接相連。除非另有說明，本文提到的被取代的結(jié)構(gòu)可在任何可能的位置 被取代。式I化合物的取代基R2可連接在苯環(huán)與氨基的連接位置的鄰 位、間位或?qū)ξ?，其中?yōu)選連接在間位，或特別連接在對位。當(dāng)在任何結(jié)構(gòu)中任何變量出現(xiàn)不止一次時(shí)，各個(gè)定義為獨(dú)立的。根據(jù)取代，本發(fā)明化合物的合適的鹽都為酸加成鹽或都為與堿 形成的鹽(all salts with bases )。特別要提及的是由藥學(xué)上常用的藥 理學(xué)可接受無機(jī)和有機(jī)酸和堿制成的鹽。 一方面，所述合適的鹽為 與酸形成的水不溶性的和特別是水可溶性的酸加成鹽，所述酸為， 如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙酸、檸檬酸、D-葡萄糖酸、 苯曱酸、2-(4-羥基苯曱?；?苯曱酸、丁酸、磺基水楊酸、馬來酸、 月桂酸、蘋果酸、富馬酸、琥珀酸、乙二酸、酒石酸、雙羥萘酸、 硬脂酸、曱苯磺酸、曱磺酸3-羥基-2-萘?xí)跛幔鶕?jù)所述酸為一元酸 或多元酸，并根據(jù)所需的鹽，所述酸在鹽制備中的采用等摩爾量比 率或其它不同的比率(one differing therefrom )。另一方面，根據(jù)取代，與堿形成的鹽也為合適的。與堿形成的
鹽的實(shí)例為鋰、鈉、鉀、鈣、鋁、4美、鈦、銨、葡甲胺或胍鹽，同 樣，在鹽制備中所用的堿為等摩爾量比率或其它不同的比率。在本發(fā)明化合物工業(yè)生產(chǎn)過程中可得到的藥理學(xué)不能接受的鹽 可通過本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員已知的方法轉(zhuǎn)化為藥理學(xué)可接受鹽。根據(jù)專家的知識，本發(fā)明的化合物與其鹽可包含含有不同量溶 劑的分離的結(jié)晶形式。因此，本發(fā)明化合物的所有溶劑合物和特別 是所有的水合物以及本發(fā)明化合物的鹽的所有溶劑合物和特別是所 有的水合物都包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。值得一提的本發(fā)明化合物為這^f羊的式I化合物，其中Rl為-U-A，其中u為直接鍵或亞曱基(-civ),A為苯基、吡啶基、噻吩基、二-(l-4C-烷氧基)-苯基或Rll-取代的笨基，其中Rll為l-4C-烷基、鹵素、三氟曱基、羥基、l-4C-烷氧基、完 全或大部分被氟取代的l-4C-烷氧基、苯氧基、l-4C-烷氧基羰基、 嗎啉代或二-1 -4C-烷基氨基，R2為氨基、羧基、l-4C-烷氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(O)-N(R4)R5，其中R3為l-4C-烷基、2-4C-烯基、3-7C-環(huán)烷基、三氟甲基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的1-4C-烷基或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為l-4C-烷氧基、嗎啉代或二-l-4C-烷基氨基，R32為羥基、苯基-l-4C-烷氧基、l-4C-烷氧基、苯基、R321-取代的苯基、二-l-4C-烷基氨基、嗎啉代或4N-(R322)-哌嗪-l-基，其中R321為l-4C-烷氧基， R322為l-4C-烷基，R33為氫、l-4C-烷基或l-4C-烷基羰基，R4為氫、l-4C-烷基、R41-取代的2-4C-烷基、苯基、R42-取代 的苯基或吡咬基，其中R41為羥基、l-4C-烷氧基、二-l-4C-烷基氨基或嗎啉代， R42為l-4C-烷氧基或二-l-4C-烷基氨基， R5為氫或l-4C-烷基，或R4和R5與連接它們的碳原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het，其中 Het為嗎啉代或4N-(l-4C-烷基)-哌。秦-l-基，及這些化合物的鹽。更值得一提的本發(fā)明化合物為這樣的式I化合物，其中Rl為-U-A,其中U為直接鍵或亞曱基(-CIV)，A為苯基、吡咬基、p塞吩基、二曱氧基笨基或Rll-取代的苯基，其中Rll為曱基、叔丁基、氯、氟、溴、三氟曱基、羥基、甲氧基、 乙氧基、三氟甲氧基、苯氧基、甲氧基羰基、嗎啉代或二曱基氨基，R2為氨基、羧基、l-4C-烷氧基羰基、陽N(H)-C(0)R3或-C(O)-N(R4)R5，其中R3為l-4C-烷基、2-4C-烯基、3-7C-環(huán)烷基、三氟曱基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的1-4C-烷基或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為l-4C-烷氧基、嗎啉代或二-l-4C-烷基氨基，R32為羥基、苯基-l-4C-烷氧基、l-4C-烷氧基、苯基、R321-取代的苯基、二-l-4C-烷基氨基、嗎啉代或4N-(R322)-哌嗪-l-基，其中R321為l-4C-烷氧基， R322為l-4C-烷基，R33為氫、l-4C-烷基或l-4C-烷基羰基，R4為氫、l-4C-烷基、R41-取代的2-4C-烷基、苯基、R42-取代 的苯基或吡。定基，其中R41為羥基、l-4C-烷氧基、二-l-4C-烷基氨基或嗎啉代， R42為l-4C-烷氧基或二-l-4C-烷基氨基， R5為氫或1-4C-烷基，或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het,其中 Het為嗎啉代或4N-(l-4C-烷基)-哌溱-l-基，及這些化合物的 鹽o特別值得一提的本發(fā)明化合物為這樣的式I化合物，其中Rl為-U-A,其中U為直接鍵或亞曱基(-CH2-)，A為苯基或Rll-取代的苯基，其中Rll為曱基、氯、氟、溴、三氟曱基、羥基、曱氧基、苯氧基、 曱氧基羰基或二曱基氨基，R2為氨基、羧基、甲氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(0)-N(R4)R5，其中R3為曱基、乙烯基、環(huán)丙基、環(huán)己基、三氟甲基、笨基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的l-2C-烷基 或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為曱氧基、嗎啉代或二曱基氨基，R32為羥基、芐氧基、曱氧基、苯基、R321-取代的苯基、二曱 基氨基、嗎啉代或4N-曱基-哌嗪-l-基，其中 R321為甲氧基， R33為氫、甲基或乙?；?，R4為氫、甲基、2-(R41)-乙基、苯基、R42-取代的苯基或吡啶 基，其中R41為羥基、曱氧基、二曱基氨基或嗎啉代， R42為曱氧基或二甲基氨基， R5為氫或曱基，
或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het，其中 Het為嗎啉代或4N-甲基-哌。秦-l-基，及這些化合物的鹽。特別值得一提的本發(fā)明化合物為這樣的式I化合物，其中 Rl為-U-A， 其中U為直接鍵，A為苯基或Rll-取代的苯基，其中Rll為氟、溴、三氟曱基或曱氧基，其中，特別地，Rl為4-曱氧基-苯基、2-曱氧基-苯基、2-溴-苯基、2-氟-苯基或2-(三氟曱基)-苯基；R2連接在苯環(huán)與三唑并酞喚骨架上的氨基的連接位置的間位或?qū)ξ?，其為氨基、羧基、甲氧基羰基?N(H)-C(0)R3或-C(0)-N(R4)R5，其中R3為曱基、乙烯基、環(huán)丙基、環(huán)己基、三氟曱基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的l-2C-烷基 或lN-(R33)-哌啶基，其中R31為曱氧基、嗎啉代或二曱基氨基，R32為羥基、芐氧基、曱氧基、苯基、R321-取代的苯基、二曱 基氨基、嗎啉代或4N-曱基-哌嗪-l-基，其中 R321為曱氧基， R33為氬、甲基或乙?；?，R4為氫、甲基、2-(R41)-乙基、笨基、R42-取代的苯基或吡啶 基，其中R41為羥基、曱氧基、二曱基氨基或嗎啉代、R42為曱氧基或 二曱基氨基，R5為氫或曱基，或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het，其中 Het為嗎啉代或4N-曱基-哌嗪-1 -基， 及這些化合物的鹽。 著重指出這樣的式I化合物，其中Rl為-U-A，其中u為直接鍵，A為苯基或Rll-取代的苯基，其中Rll為氟、溴、氯、三氟曱基、曱基或曱氧基，R2連接在苯環(huán)與三唑并酞溱骨架上的氨基的連接位置的間位或 對位，其為氨基、羧基、曱氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(0)-N(R4)R5， 其中R3為曱基、乙烯基、環(huán)丙基、環(huán)己基、三氟曱基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的l-2C-烷基 或lN-(R33)-哌啶基，其中R31為曱氧基、嗎啉代或二曱基氨基，R32為羥基、芐氧基、曱氧基、苯基、R321-取代的苯基、二曱 基氨基、嗎啉代或4N-曱基-哌嗪-l-基，其中 R321為曱氧基， R33為氫、曱基或乙?；?，R4為氫、曱基、2-(R41)-乙基、苯基、R42-取代的苯基或吡啶 基，其中R41為羥基、曱氧基、二曱基氨基或嗎啉代，R42為曱氧基或二曱基氨基，R5為氫或曱基，或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het，其中 Het為嗎啉代、4N-曱基-哌嗪-l-基或4N-乙基-哌嗪-l-基，及這些化合物的 鹽。本發(fā)明特別令人感興趣的化合物是指那些本發(fā)明范圍內(nèi)的包括 于一種或可能的話多種下面的實(shí)施方案中的式I化合物本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案1)是指這樣的式I 化合物，其中U為直接鍵，且A為苯基或Rll-取代的苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案2)是指這樣 的式I化合物，其中 U為直接鍵，且A為吡啶基或p塞吩基，如吡啶-4-基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案3)是指這樣 的式I化合物，其中 U為亞曱基，且 A為苯基或Rll-取代的苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案3-1 )是指這樣 的式I化合物，其中 Rl為-U-A,其中 U為亞曱基(-CH2-)， A為苯基或Rll-取代的苯基；另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案3-1-1)是指這 樣的式I化合物，其中Rl為(4-曱氧基-苯基)-甲基； 及這些化合物的鹽。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案4)是指這樣 的式I化合物，其中 U為亞曱基，且A為吡啶基或噻吩基，如噻吩-2-基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案5)是指這樣 的式I化合物，其中R2為-N(H)-C(0)R3。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案6)是指這樣
的式I化合物，其中R2為-C(0)-N(R4)R5。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案7)是指這樣 的式I化合物，其中Rl為(4-曱氧基-苯基)-曱基或4-甲氧基-苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案8)是指這樣 的式I化合物，其中Rl為4-曱氧基-苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案9)是指這樣 的式I化合物，其中Rl為(4-曱氧基-苯基)-曱基、2-羥基-苯基、苯基、3-曱氧基羰基 -苯基或4-曱氧基-苯基、2-曱氧基-苯基、2-溴-苯基、2-氟-苯基或2-(三 氟曱基)-苯基或2-氯-苯基、4-溴-笨基、2-曱基-苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案10)是指這樣 的式I化合物，其中Rl為4-曱氧基-苯基、2-曱氧基-苯基、2-溴-苯基、2-氟-苯基或 2-(三氟曱基)-苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案11)是指這樣 的式I化合物，其中Rl為2-溴-苯基。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案12)是指這樣 的式I化合物，其中R2為-N(H)-C(0)R3，其中R3為1N-H-哌啶基，特別為1N-H-哌啶-2-基或1N-H-哌啶-3-基。 另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案13)是指這樣 的式I化合物，其中R2連接在苯環(huán)與三唑并酞嗪骨架上的氨基的連接位置的間位。 另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案14)是指這樣
的式I化合物，其中R2連接在苯環(huán)與三唑并酞嗪骨架上的氨基的連接位置的對位。另一本發(fā)明化合物的特別的實(shí)施方案(實(shí)施方案15)是指包含 一種或多種下面化合物的式I化合物 Rl為4-曱氧基-苯基；R2連接在苯環(huán)與三唑并酞,骨架上的氨基的連接位置的對位；且R2為-N(H)-C(0)R3， 其中R3為1N-H-哌啶基；及這些化合物的鹽。一組特別的本發(fā)明化合物為這樣的式I化合物，其中 Rl為4-甲氧基-苯基或2-溴-笨基，R2連接在苯環(huán)與三唑并酞嗪骨架上的氨基的連接位置的對位， 且其為-N(H)-C(0)R3，其中R3為1N-H-哌啶基，特別為1N-H-哌啶-2-基或1N-H-哌啶-3-基?？砂凑杖缦率纠姆椒ǎ鶕?jù)下面的特定反應(yīng)步驟，或特別地， 根據(jù)下面的實(shí)施例或其類似的方法，依照本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員已 知的制備程序或合成策略來制備本發(fā)明的化合物。如下面的反應(yīng)方案1所顯示，其中Rl和R2具有上述意義適于 在親核取代反應(yīng)條件下合成的式I化合物可由相應(yīng)的式II化合物， 其中X為合適的離去基團(tuán)，特別為氯，通過與相應(yīng)的式m的笨胺 衍生物反應(yīng)來制備。所述親核取代反應(yīng)可按照下面的實(shí)施例中所描述的或熟練技術(shù) 人員已知方法進(jìn)行；因此，根據(jù)反應(yīng)物的反應(yīng)性，可在沒有溶劑的 情況下通過熔融反應(yīng)物來進(jìn)行反應(yīng)，或通過在合適的溶劑如N,N-二 曱基甲酰胺中，在合適的堿如氫化鈉或碳酸鉀存在下，在可使反應(yīng) 進(jìn)行的溫度(這可取決于反應(yīng)物，室溫，升高的溫度或所用溶劑的 回流溫度，在除此之外合適的條件下(beyond it))下，任選在微波輻射下進(jìn)行反應(yīng)。式III化合物為已知的或可由已知方式得到。式II化 合物可如本文后面所描述的方法制備。 反應(yīng)方案1如下所述的，其中Rl和R3具有上述意義，特別是那些無法通 過上述反應(yīng)方案1中顯示的合成策略得到的式Ia'的異酰胺 (isoamides)，可由下面的反應(yīng)方案2中顯示的方法通過其中Rl具 有上述意義的式Ia化合物與其中Y為合適的離去基團(tuán)如氯的式R3-C(O)Y的化合物在熟練技術(shù)人員慣用的條件下進(jìn)行?；饔脕碇?備?；蛘?，式Ia'的化合物還可由相應(yīng)的式Ia化合物和相應(yīng)的其中Y 為羥基的式R3-C(0)Y的化合物通過與本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員已知 的酰胺鍵連接試劑(amide bond linking reagents )在熟練技術(shù)人員常 用的條件下反應(yīng)來制備。可提及的本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員已知的示 例性酰胺鍵連接試劑為，例如碳化二亞胺(如，二環(huán)己基碳化二亞胺， 或，優(yōu)選l-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽)、偶氮二 羧酸衍生物(如偶氮二羧酸二乙基酯)、脲鏡鹽(uranium salts )[如O-(苯 并三唑-l-基)-N,N，N'，N'-四曱基脲錄、四氯硼酸鹽或O-(苯并三唑-lyl)-N,N,N'，N'-四曱基-脲鏡-六氟磷酸鹽]和N,N'-羰基二咪唑。在本發(fā)明 的范圍內(nèi)l-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC或 EDCI)為特別值得一提的。反應(yīng)方案2N(H)C(0)R3式R3-C(0)Y的化合物為已知的或可由已知方式得到。 式Ia的化合物可直接由上面描述的反應(yīng)方案1中所示的方法通 過采用二氨基苯來制備；或可通過其中Rl具有上述意義且R2為硝 基的式I化合物在合適的還原劑如二氯化錫幫助下，進(jìn)行還原反應(yīng) 來獲得。其中Rl具有上述意義且R2為硝基的式I化合物可按照反 應(yīng)方案1制備。其中R1、 R4和R5具有上述意義的如下所述的，特別是那些無 法由上面的反應(yīng)方案1中顯示的合成策略得到的式Ib'的酰胺，可通 過其中Rl具有上述意義的式Ib的苯曱酸與相應(yīng)的式HN(R4)R5的 胺在熟練技術(shù)人員常用的條件下進(jìn)行酰胺化(amidification)反應(yīng)來制備。該酰胺化反應(yīng)可在合適的酰胺鍵連接試劑的存在下進(jìn)行，如上 面提到的那些酰胺鍵連接試劑，特別是l-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基) 碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC或EDCI)。反應(yīng)方案3式HN(R4)R5的化合物為已知的或可通過已知方式得到。C(0)N(R4)R5C(O)OH
縮合其中Rl具有上述意義且X為合適的離去基團(tuán)特別是氯的式II氯的式Rl-C(O)Z的化合物通過一步環(huán)化反應(yīng)制備；或通過兩步反 應(yīng)，可由式IV化合物的酰化反應(yīng)得到可分離的式III的中間體，式III 的中間體可再通過縮合反應(yīng)得到所需的式II化合物。所述反應(yīng)可如下面的實(shí)施例中所描述的方式進(jìn)行，或在熟練技 術(shù)人員已知的條件下或在類似于領(lǐng)域中已知的與其類似反應(yīng)的條件 下進(jìn)行。因此，前述一步環(huán)化反應(yīng)可在類似于J.Med. Chem. Vol. 31, 1988,p. 1115中所描述的條件下，在合適的溶劑如曱苯、吡啶或二噁其中Rl具有上述意義的式Ib的苯曱酸可通過相應(yīng)的其中R2為 l-4C-烷氧基羰基特別是曱氧基羰基的式I的酯化合物的皂化作用來 制備。其中Rl具有上述意義，且R2為l-4C-烷氧基羰基特別是曱氧 基羰基的式I化合物可根據(jù)反應(yīng)方案1制備。式II的起始化合物可通過反應(yīng)方案4中顯示的方法或在下面的 實(shí)施例中指出的方法制備；或它們?yōu)轭I(lǐng)域中已知的如R. W. Carling et al.， J. Med. Chem. Vol. 47， No, 7, 1807-1822 (2004)中所描述或它們可 根據(jù)已知程序類似于領(lǐng)域中所描述的化合物的制備方法來制備。反應(yīng)方案4<formula>formula see original document page 25</formula> 烷中，在合適的堿(如三乙基胺)存在下，在升高的溫度或所用溶劑的 回流溫度下進(jìn)4亍。式IV化合物可通過其中X和x'可相同且為合適的離去基團(tuán)特別是X和X'都為氯的式V化合物與肼的親核取代反應(yīng)來制備。式RI-C(O)Z和V的化合物為已知的或可通過已知方式得到。應(yīng)了解，熟練的技術(shù)人員可通過領(lǐng)域中已知的合成策略和本領(lǐng) 域中普通技術(shù)人員慣用的反應(yīng)如上面所描述的反應(yīng)將某些本發(fā)明的 式I化合物轉(zhuǎn)化為另外的式I化合物。本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員還知道，如果起始化合物或中間體上有 多個(gè)反應(yīng)中心，則必需用保護(hù)基團(tuán)暫時(shí)阻斷一個(gè)或更多反應(yīng)中心以 使反應(yīng)確保在所需的反應(yīng)中心進(jìn)行。在T. Greene and P. Wuts (John Wiley & Sons, Inc. 1999, 3rd Ed.)的"Protective Groups in Organic Synthesis"或在P. Kocienski (Thieme Medical Publishers, 2000)的 "Protecting Groups (Thieme Foundations Organic Chemistry Series N Group"中詳細(xì)描述了大量已被證明的離去基團(tuán)的用途?？赏ㄟ^已知方式如減壓蒸除溶劑再將殘留物從合適的溶劑重結(jié) 晶或用常用的純化方法之一如在合適載體材料上的柱色譜法來分離 和純化本發(fā)明的式I物質(zhì)。通過將游離化合物溶于包含所需酸或^5威或之后在其中加入所需 的酸或堿的合適的溶劑(如酮如丙酮、曱基乙基酮或曱基異丁基酮； 醚如乙醚、四氫呔喃或二嗯烷；氯化烴如亞曱基氯或氯仿；或低分 子量脂肪醇如乙醇或異丙醇)中可得到鹽。所述鹽可通過過濾、再 沉淀、用非溶劑沉淀加成鹽或通過蒸發(fā)溶劑得到。通過堿化作用或 通過酸化作用所得的鹽可被轉(zhuǎn)化為游離化合物，其可再被轉(zhuǎn)化為鹽。 用這種方式，可將藥理學(xué)無法接受的鹽轉(zhuǎn)化為藥理學(xué)可接受鹽。在本發(fā)明中提到的轉(zhuǎn)化可合適地通過與本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員 所熟悉的類似的方法來進(jìn)行。本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員憑借其專業(yè)知識和本發(fā)明說明書中描述
和顯示的合成路線，知道如何發(fā)現(xiàn)式I化合物的其它可能的合成路 線。所有這些其它可能的合成路線也是本發(fā)明的一部分。已經(jīng)詳細(xì)描述了本發(fā)明，本發(fā)明的范圍并不僅限于那些已描述 的特征或?qū)嵤┓桨浮１绢I(lǐng)域中熟練技術(shù)人員會明白，根據(jù)領(lǐng)域中已知的知識和/或特別是根據(jù)本發(fā)明/>開(如闡明(explicite)、暗示 (implicite )或內(nèi)在公開(inherent disclosure )),對已描述的本發(fā)明 的修改、模擬、改變、衍生、同化和改編都不偏離所附的權(quán)利要求 中所定義的本發(fā)明精神和范圍。下面的實(shí)施例是為了進(jìn)一 步舉例說明本發(fā)明而不是對它的限 制。同樣，其制備未明確描述的另外的式I化合物可用類似的方式或用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟悉的方式采用常用操作技術(shù)來制備。下 面實(shí)施例中提到的本發(fā)明的式I化合物，特別是提到的終化合物與其鹽為本發(fā)明優(yōu)選的主題。在所述實(shí)施例中，MS表示質(zhì)i普，calc.為計(jì)算值，fnd.為實(shí)測值，其它縮寫具有熟練技術(shù)人員常用的意義。 實(shí)施例 終化合物L(fēng) N-[3-(4-甲氧基苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,4-二胺將1.0 g 6-氯-3-(4-曱氧基-笨基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪(化合 物Al)和2.7 g對苯二胺在17(TC下攪拌5小時(shí)。用6 ml乙醇稀釋反 應(yīng)混合物，抽濾沉淀物。所得固體從N，N-二曱基曱酰胺重結(jié)晶，得 到1.04g標(biāo)題化合物(m.p.: 295°C)。EF: C22H'8N60 (382.43)實(shí)測4直[M+l] 383.3備擇反應(yīng)程序I:將100 mg 6-氯-3-(4-曱氧基-笨基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪(化合 物Al), 1-3 mmol合適的苯胺衍生物和30 mg碳酸鉀在2，5 ml N,N-二曱基甲酰胺中在14(TC下攪拌4小時(shí)，或在微波輻射下在20(TC攪
拌10分鐘。用二氯曱烷/水或氫氧化鈉溶液稀釋反應(yīng)混合物，抽濾沉淀物，用水洗滌，并從N,N-二曱基曱酰胺重結(jié)晶。 備擇反應(yīng)程序II:將2.5 mmol合適的苯胺衍生物和2.5 mmol氫化鈉(60 %)的2.5 ml N,N-二甲基曱酰胺溶液用100 mg 6-氯-3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑 并[3,4-a]酞口秦(化合物Al)在室溫下處理。10分鐘后向反應(yīng)混合物中 加入水，抽濾沉淀物，所得固體從N,N-二曱基曱酰胺重結(jié)晶。備擇后處理程序所得產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化。2. N-[3-(4-曱氧基苯基Hl，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l，3-二胺從6-氯-3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪(化合物Al) 和間苯二胺開始，可用類似于化合物1中所描述的操作來制備標(biāo)題化合物。m.p.: 295°CEF: C22H18N6 0 (382.43) 實(shí)測值[M+l] 383.3從N-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,4-二胺(化合物1 )和合適的羧酸衍生物開始，下面的化合物3-26可由類似于化合物22的方法制備。3. C-二曱基氨基-N-(4-[3-(4-曱氧基-苯基Hl,2，4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C26 H25 N7 02 MS:計(jì)算值C26 H25 N7 02 (467.53)實(shí)測值[M+l] 467.94. 2-曱氧基-^{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-&]酞嗪-6-基氨基]-苯基卜乙酰胺C25 H22N6 03 MS:計(jì)算值C25H22N603 (454.49)實(shí)測值[M+l]454.85. 3-曱氧基-^{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-&]酞嗪-6-
基氨基]-苯基卜丙酰胺C26 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C26 H24 N6 03 (468.52)實(shí)測值[M+l] 469.06. 3-曱氧基-N-{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C30 H24N6 03 MS:計(jì)算值C3QH24N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l] 516.97. 二甲基氨基-N-{4-[3-(4-甲氣基-苯基)-[1 ，2,4]三。坐并[3,4-a]酞嗪 -6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C31H27N7 02MS:計(jì)算值C3IH27 N7 02 (529.61)實(shí)測值[M+l]529.78. 二曱基氨基-N-(4-[3-(4-曱氧基-苯基Hl,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪 -6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C31H27N7 02 MS:計(jì)算值C31H27 N7 02 (529.61)實(shí)測值[M+l] 530.09. ^{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-&]酞嗪-6-基氨基]-苯基卜異煙酰胺C28H21N7 02 MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l]487.810. N-{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3，4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-煙酰胺C28H21N7 02MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l]487.911. 1H-咪唑-4-曱酸(4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯基}-酰胺C26H20N8O2 MS:計(jì)算值(3261120忖8 02 (476.50)實(shí)測值[M+l] 476.712. 哌啶-2-曱酸{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基卜酰胺C2S H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 493.813. 哌啶-3-曱酸{4-[3-(4-甲氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4力]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C28 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l]493.814. l-乙酰基-哌啶-曱酸(4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3，4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C30 H29 N7 03 MS:計(jì)算值C30 H29 N7 03 (535.61)實(shí)測值[M+l]535.915. ^{4-[3-(4-甲氧基-苯基)-[1，2,4]三唑并[3,4^]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-2-苯基-乙酰胺C30 H24 N6 02 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 02 (500.56)實(shí)測值[M+l] 500.916. 2-(4-曱氧基-苯基)-N-(4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[U,4]三唑并 [3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯基卜乙酰胺C31H26N6 03 MS:計(jì)算值C31H26 N6 03 (530.59)實(shí)測值[M+l] 531.017. 2，2,2-三氟-^{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3，4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C24 H17 F3 N6 02 MS:計(jì)算值C24 H17 F3 N6 02 (478.44)實(shí)測值 [M+l] 478.818. 環(huán)丙基曱酸{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C26 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C26 H22 N6 02 (450.50)實(shí)測值[M+l] 450.819. 環(huán)己基曱酸{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1，2，4]三唑并[3,4-3]酞嗪- 6-基氨基]-苯基卜酰胺C29 H28 N6 02 MS:計(jì)算值C29 H28 N6 02 (492,59)實(shí)測值[M+l]492.820. 2-千氧基-N-(4-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞喚-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C31H26N6 03 MS:計(jì)算值C31H26 N6 03 (530.59)實(shí)測值[M+l]530.921. 呋喃-3-曱酸{4-[3-(4-曱氧基-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4力]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C27 H20 N6 03 MS:計(jì)算值C27 H20 N6 03 (476.50)實(shí)測值[M+l〗476.822. 吡啶-2-曱酸{4-[3-(4-曱氧基-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺向吡咬曱酸(0.27 mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(0.27 mmol)的 DMF (5 mL)溶液中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽 酸鹽(0.27 mmol),接著加入N-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a] 酞。秦_6-基]-苯-1,4-二胺(化合物1 ) (0.26 mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫 下攪拌過夜，真空濃縮。向殘留物中加入水(IO mL),過濾所得沉淀 物，用乙酸乙酯和乙醚洗滌。與曱苯共沸干燥固體，得到103mg標(biāo) 題化合物，為淺棕色固體。m.p.: 301 。C-305。CC28H21N702MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l]487.923. 哌啶-4-曱酸{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C28 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 494.224. 哌啶-4-曱酸{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪- 6-基氨基]-苯基卜酰胺鹽酸鹽C28 H28 CI N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值 [M+l] 493.825. N-{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯基}-2-嗎啉-4-基-乙酰胺C2S H27 N7 03 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 03 (509.57)實(shí)測值[M+l] 509.926. >^-{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-笨基} _2-(4-曱基-哌。秦-1 -基)-乙酰胺C29 H30N8O2 MS:計(jì)算值C29H30N8O2 (522.61)實(shí)測值[M+l] 522.8從選自化合物67-70的合適的氨基化合物和合適的酸酸衍生物 開始，用類似于化合物22的方法來制備下面的化合物27-31。27. 哌啶-2-甲酸(4-[3-(2-三氟曱基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞 嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C28 H24 F3 N7 O MS:計(jì)算值C28 H24 F3 N7 0(531.54)實(shí)測值 [M+l] 532.128. 哌啶-3-曱酸{4-[3-(2-溴-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C27H24BrN7OMS:計(jì)算值C27 H24 Br N7 O (542.44)實(shí)測值 [M+l] 542.229. 哌啶-3-曱酸(4-[3-(2-三氟曱基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞 嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C28 H24 F3 N7 O MS:計(jì)算值C28 H24 F3 N7 O (531.54)實(shí)測值 [M+l] 532.630. 哌啶-2-曱酸(4-[3-(2-溴-笨基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基卜酰胺C27H24BrN7OMS:計(jì)算值C27 H24 Br N7 O (542.44)實(shí)測值31. 哌啶_2_曱酸{4-[3-0曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞"秦-6-基氨基]-苯基}-酰胺C28 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 494.1從6-氯-3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪(化合物Al) 和合適的苯胺衍生物開始，用類似于制備化合物1的方法之一來制 備下面的化合物32-34。32. >1-{4-[3-(4-曱氧基苯基)-[1，2,4]三唑并[3，4-&]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C24 H2Q N6 02 (424,47)實(shí)測值[M+l] 425.333. >1-{4-[3-(4-曱氧基苯基)-[1，2，4]三唑并[3,4^]酞嗪-6-基氨基]-苯基卜苯曱酰胺C29 H22 N6 02 (486,54) m.p.: 323 °C34. 呋喃-2-曱酸{4-[3-(4-曱氧基笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4^]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C27H20N6O3 (476,5) m.p.303 °C從N-[3-(4-曱氧基笨基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,3-二 胺(化合物2)和合適的羧酸衍生物開始，用類似于制備化合物22的 方法制備下面的化合物35-63。35. 環(huán)己基曱酸{3-0(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4^]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C29 H2S N6 02 MS:計(jì)算值C29 H28 N6 02 (492.59)實(shí)測值[M+l] 492.936. ^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C29 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C29 H22 N6 02 (486,54)實(shí)測值[M+l] 486,937. 2-芐氧基-^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4^]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C3lH26N6 03 MS:計(jì)算值C31H26 N6 03 (530.59)實(shí)測值[M+l〗 530.938. 環(huán)丙基曱酸{3-[3-(4-曱氧基-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C26 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C26 H22 N6 02 (450.50)實(shí)測值[M+l] 451.039. 2,2,2-三氟-N-{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1 ，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C24H17F3N6 02MS:計(jì)算值C24 HI7 F3 N6 02 (478.44)實(shí)測值 [M+l] 478.740. 呋喃-2-曱酸p-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C27 H2Q N6 03 MS:計(jì)算值C27 H2。 N6 03 (476.50)實(shí)測值[M+l]476.841. 呋喃-3-曱酸{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1，2,4]三唑并[3,4-^酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C27 H2。 N6 03 MS:計(jì)算值C27 H2Q N6 03 (476.50)實(shí)測值[M+l]476.942. 1 H-咪唑-4-曱酸{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[1,2,4]三哇并[3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯基}-酰胺C26H2。N8 02 MS:計(jì)算值C26H2。N8 02 (476.50)實(shí)測值[M+l]476.843. C-二曱基氨基-N-{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯基}-苯甲酰胺C31H27N702MS:計(jì)算值C31H27 N7 02 (529.61)實(shí)測值[M+l]529.944. ^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1，2,4]三唑并[3,4力]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-異煙酰胺C28H21N702MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l] 487.845. 2-曱氧基-^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-司酞溱-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C25 H22 N6 03 MS:計(jì)算值C25 H22 N6 03 (454.49)實(shí)測值[M+l]454.846. 4-甲氧基-^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C3Q H24 N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l]516.947. 3-曱氧基-^{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-司酞嗪-6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C30 H24N6 03 MS:計(jì)算值C30H24N6O3 (516.56)實(shí)測值[M+l]516.848. 2-(4-曱氧基-苯基)-!^-{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C31H26N6 03 MS'.計(jì)算值C31H26 N6 03 (530.59)實(shí)測值[M+l] 531.049. ^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-2-苯基-乙酰胺C30 H24 N6 02 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 02 (500.56)實(shí)測值[M+l]500.950. ^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-煙酰胺C28H21N7 02 MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l] 487.7 51， 二曱基氨基-N-(3-[3-(4-曱氧基-笨基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a]酞 嗪-6-基氨基]-苯基}-苯甲酰胺C31H27N702MS:計(jì)算值C31H27 N7 02 (529.61)實(shí)測值[M+l] 529.952. C-二曱基氨基-N-(3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C26 H25 N7 02 MS:計(jì)算值C26 H25 N7 02 (467.53)實(shí)測值[M+l] 467.953. 3-曱氧基-N-{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2,4]三哇并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-丙酰胺C26 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C26 H24 N6 03 (468.52)實(shí)測值[M+l〗 469.054. 1-乙?；?哌啶-4-曱酸{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-笨基}-酰胺C30 H29N7 03 MS:計(jì)算值C30H29N7O3 (535.61)實(shí)測值[M+l] 535.955. 吡啶-2-曱酸{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3，4-司酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C2SH21N7 02 MS:計(jì)算值C2S H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l]487.856. 二曱基氨基-N-(3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2，4]三唑并[3,4-a]酞 。秦-6-基氨基]-苯基}-苯曱酰胺C31H27N702MS:計(jì)算值C31H27 N7 02 (529.61)實(shí)測值[M+l]529.957. 哌啶-4-曱酸{3_[3-(4-甲氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4^]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C2S H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 493.8 58. 哌啶-3-曱酸{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1，2,4]三唑并[3,4力]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C2S H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 493.859. 哌啶-2-曱酸{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1，2,4]三唑并[3，4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C28 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l]493.860. 2-羥基-^{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-乙酰胺C24 H2。 N6 03 MS:計(jì)算值C24 H20 N6 03 (440.47)實(shí)測值[M+l]440.961. N-{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-丙烯酰胺C25 H2QN602 MS:計(jì)算值C25H2。N602 (436.48)實(shí)測值[M+l]436.862. 1-曱基-哌啶-4-曱酸{3-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C29 H29 N7 02 MS:計(jì)算值C29 H29 N7 02 (507.60)實(shí)測值[M+l]507.963. 二曱基氨基-N-(3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞 嗪-6-基氨基]-苯基}-丁酰胺C28 H29 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H29 N7 02 (495.59)實(shí)測值[M+l] 495.9從選自化合物71-74的合適的氨基化合物和合適的羧酸衍生物 開始，用類似于制備化合物22的方法來制備下面的化合物64-65。64. 環(huán)丙基曱酸{3-[3-(2-氟-笨基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基 氨基]-苯基}-酰胺 C25 H19 F N6 O MS:計(jì)算值C25 H19 F N6 O (438.47)實(shí)測值 [M+l] 439.165. 環(huán)丙基曱酸{3-[3-(2-甲氧基-笨基)-[1，2,4]三唑并[3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯基}-酰胺C26 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C26 H22 N6 02 (450.50)實(shí)測值[M+l] 451.1從6-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-[l，2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪(化合物Al) 和合適的苯胺衍生物開始，用類似于制備化合物1的方法之一來制 備下面的化合物66。66. N-(3-[3-(4-甲氧基苯基Hl,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-笨基}-乙酰胺C24 H20 N6 02 424，47 m.p.: 295 °C從選自A2-A9的合適的起始化合物開始，通過類似于制備化合 物74a中描述的還原反應(yīng)來制備下面的化合物67-74;或者，用類似 于制備化合物1的方法來制備化合物67-74a。67. N-[3-(2-甲氧基苯基Hl，2，4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,4-二胺C22H18N6OMS:計(jì)算值C22 H1S N6 O (382.43)實(shí)測值[M+l] 383.168. N-[3-(2-氟苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l，4-二胺69. N-[3-(2-溴苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基]-苯-l，4-二胺 C21H15BrN6MS:計(jì)算值C21H15 Br N6 (431.30)實(shí)測值[M+l]431.070. N-[3-(2-三氟曱基-苯基Hl,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基]-苯-1,4-二胺C22 H15 F3 N6 MS:計(jì)算值C22 H,5 F3 N6 (420.40)實(shí)測值[M+l] 421.071. N-[3-(2-曱氧基苯基Hl,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,3-二
胺C22H18N6OMS:計(jì)算值C22 H18 N6 0 (382.43)實(shí)測值[M+l] 383.172. N-[3-(2-氟苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基]-苯-l，3-二胺73. N-[3-(2-溴苯基)-[l，2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基]-苯-l，3-二胺 C21H15BrN6MS:計(jì)算值C21H15 Br N6 (431.30)實(shí)測值[M+l]433.174. N-[3-(2-三氟甲基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞。秦-6-基]-苯-l,3-二胺74a. N-[3-(2-曱基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a]酞。秦-6-基]-苯-l，3-二胺向(3-硝基-苯基)-(3-鄰-曱苯基-[l,2，4]三唑并[3，4-a]-酞嗪-6-基)-胺 (化合物A10) (263 mg， 0.66 mmol)在2: 1的冰醋酸和37%鹽酸(18ml) 混合物中的混懸液中加入氯化錫二水合物(450 mg, 1.99mmol)。將該 混合物在90。C下攪拌2天。冷卻后，過濾沉淀物，濾液濃縮。用柱 色譜法(CH2CVMeOH, 95: 5)純化殘留物，得到205 mg類白色固體， 將其用1 : 1的異丙醇和石油醚混合物研磨，得到77 mg類白色針 狀標(biāo)題化合物。從6-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪(化合物Al) 和合適的苯胺衍生物開始，用類似于制備化合物1的方法來制備下 面的化合物75-76。75. 4-[3-(4-甲氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基絲]-苯曱酸曱酯C24 H19 N5 03 425,45實(shí)測值[M+l〗426.476. 3-[3-(4-曱氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱酸曱酯C24H19N5 03 425,45實(shí)測值[M+l] 426.377. 4-[3-(4-曱氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯甲
酸將40 mg 4-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨 基]-苯曱酸曱酯(化合物75)， 25 mg氫氧化鉀和150 pl水在2 ml曱 醇在IO(TC攪拌1小時(shí)。抽濾反應(yīng)混合物，用10ml水稀釋，并用2M 鹽酸酸化至pH2-3。抽濾沉淀物，用水洗滌，干燥，得到23 mg標(biāo) 題化合物。EF: C23H17N503 (411.42)實(shí)測值[M+l] 412,3 備擇反應(yīng)程序在密封管中，向曱醇鈉的曱醇溶液(通過在氬氣下向無水曱醇(20 ml)中加入鈉(590 mg， 25.4 mmol)制備)中加入4-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯甲酸曱 S旨(化合物 75) (4.0g， 9.40 mmol)和二異丙基胺(32 ml)。將該混合物在IO(TC下攪拌3天，然后 蒸發(fā)。殘留物用乙酸乙酯和少量曱醇洗滌，得到3.78g標(biāo)題化合物，為淺黃色粉末。m.p.: 309。C (分解)78. 3-[3-(4-曱氧基苯基Hl,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基tt]-苯曱酸從3-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱 酸曱酯(化合物76)開始，可用類似于制備化合物77的方法來制備標(biāo) 題化合物。EF: C23H17N5 03 (411.42)實(shí)測值[M+l] 411.8從4-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯甲酸(化合物77)和合適的胺衍生物開始，用類似于制備化合物103的方法來制備下面的化合物79-89。。79. 4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-^(2-嗎p林-4-基-乙基)-苯甲酰胺C29 H29 N7 03 MS:計(jì)算值C29 H29 N7 03 (523.60)實(shí)測值[M+l] 524.0 80. N-(3-曱氧基-苯基)-4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l]516.881. N-(4-曱氧基-苯基)-4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 03 (516,56)實(shí)測值[M+l]516.982. 4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞。秦-6-基氨基]-^ 苯基-苯曱酰胺C29 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C29 H22 N6 02 (486.54)實(shí)測值[M+l] 486.983. N-(4-二曱基氨基-苯基)-4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C31H27N7 02 MS:計(jì)算值C31H27 N7 02 (529,61)實(shí)測值[M+l]529.884. N-(2-曱氧基-苯基)-4-[3-(4-甲氧基-笨基)-[l,2，4]三唑并[3,4-a] 酞。秦-6-基氨基]-苯曱酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l]516.985. 4-[3-(4-甲氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]-^ 曱基-苯曱酰胺C24 H2。N602 MS:計(jì)算值C24H20N6O2 (424.47)實(shí)測值[M+l] 424.986. N-(2-二甲基氨基-乙基)-4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-笨曱酰胺C27 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C27 H27 N7 02 (481.56)實(shí)測值[M+l] 481.7 87. N-(2-曱氧基-乙基)-4-[3-(4-甲氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C26 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C26 H24 N6 03 (468.52)實(shí)測值[M+l] 468.788.1- {4-[3-(4-甲氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗓-6-基氨基]-苯基} -1 -(4-甲基-哌溱-1 -基)-曱酮C2S H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 494.089. 4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-N,N-二曱基-苯曱酰胺C25 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C25 H22 N6 02 (438.49)實(shí)測值[M+l] 439.0從6-氯-3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪(化合物Al) 和合適的苯胺衍生物開始，用類似于制備化合物1的方法之一來制 備下面的化合物91-92。。91. 4-[3-(4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三哇并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯甲酰胺C23H18N6O2 410，44實(shí)測值[M+l]411.392. l -{4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1 ，2,4]三。坐并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}小嗎啉_4-基曱酮C27H24N603 480,53 m.p.: 295 °C從3-[3-(4-甲氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱 酸(化合物78)和合適的胺衍生物開始，用類似于制備化合物103的 方法來制備下面的化合物90和93-108。90. N-(2-二曱基氨基-乙基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并 [3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯甲酰胺鹽酸鹽C27 H28 CI N7 02 MS:計(jì)算值C27 H27 N7 02 (481.56)實(shí)測值 [M+l] 481.893. l-(3-[3-(4-曱氧基-苯基Hl，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基} -1 -(4-曱基-哌嗪-1 -基)-曱酮C28 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C28 H27 N7 02 (493.57)實(shí)測值[M+l] 493.994. 1-{3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3，4-3]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-1-嗎啉-4-基-曱酮C27 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C27 H24 N6 03 (480.53)實(shí)測值[M+l] 480.995. 3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基)-苯曱酰胺C29 H29 N7 03 MS:計(jì)算值C29 H29 N7 03 (523.60)實(shí)測值[M+l]523.896. N-(2-二甲基氨基-乙基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯曱酰胺C27 H27 N7 02 MS:計(jì)算值C27 H27 N7 02 (481.56)實(shí)測值[M+l]481.997. 3-[3-(4-曱氧基-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]^-吡啶-3-基-苯曱酰胺C28 H21N7 02 MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)測值[M+l] 487,898. N-(2-羥基-乙基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2，4]三唑并[3,4-a]酞 嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C25 H22 N6 03 MS:計(jì)算值C25 H22 N6 03 (454.49)實(shí)測值[M+l] 454.899. 3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-&]酞嗪-6-基氨基]-^ 吡啶-4-基-苯甲酰胺C2SH2!N7 02 MS:計(jì)算值C28 H21N7 02 (487.53)實(shí)觀他[M+l] 487.8
100. N-(4-曱氧基-苯基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C3Q H24 N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l] 516.9101. N-(3-曱氧基-苯基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l] 516.9102. N-(2-曱氧基-苯基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯甲酰胺C30 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C30 H24 N6 03 (516.56)實(shí)測值[M+l] 516.9103， N-(4-二甲基氨基-苯基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺向3-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱 酸(化合物78) (100 mg， 0.24 mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(35 mg， 0.26 mmol)的DMF (5 mL)溶液中加入l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基 碳化二亞胺鹽酸鹽(43mg, 0.26 mmol),接著加入N，N-二甲基-苯二胺 (35 mg， 0.26 mmol)。在室溫下攪^H亥反應(yīng)混合物2天，真空濃縮。 向殘留物中加入水(20 mL)，過濾所得沉淀物，用曱醇和二氯曱烷洗 滌。與曱苯共沸干燥固體，得到79mg標(biāo)題化合物，為灰色粉末。m.p.: 314。C-318。CC3lH27N7 02 MS:計(jì)算值C31H27 N7 02 (529.61)實(shí)測值[M+l] 530.0104. 3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基M]-N-苯基-苯曱酰胺C29 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C29 H22 N6 02 (486.54)實(shí)測值[M+l] 486.8 105. 3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1，2,4]三唑并[3，4-3]酞。秦-6-基氨基]-N,N-二曱基-苯曱酰胺C25 H22 N6 02 MS:計(jì)算值C25 H22 N6 02 (438.49)實(shí)測值[M+l] 438.8106. N-(2-曱氧基-乙基)-3-[3-(4-甲氧基-苯基Hl,2，4]三唑并[3,4-a] 酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C26 H24 N6 03 MS:計(jì)算值C26 H24 N6 03 (468.52)實(shí)測值[M+l] 468.8107. 3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基氨基]->^-(2-嗎啉-4-基-乙基)-苯曱酰胺鹽酸鹽C29 H30C1 N7 03 MS:計(jì)算值C29 H29 N7 03 (523.60)實(shí)測值 [M+l] 523.8108. N-(2-二曱基氨基-乙基)-3-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并 [3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯曱酰胺鹽酸鹽C27 H2S CI N7 02 MS:計(jì)算值C27 H27 N7 02 (481.56)實(shí)測值 [M+l] 481.8從6-氯-3-(4-甲氧基-苯基)-[l，2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪(化合物Al) 和合適的苯胺衍生物開始，用類似于制備化合物1的方法之一來制 備下面的化合物109-110。109. 3-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱酰胺C23H18N6 02 410,44 m.p.: 296°C110. 3-[3-(4-曱氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4〈]酞嗪-6-基氨基]-^ 甲基苯曱酰胺C24 H20 N6 02 424,47 m.p.: 316 °C111. N- {4-[3-(4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基} _4-嗎啉-4-基-苯曱酰胺將100 mg &[3-(4-曱氧基苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-3]酞嗪-6-基]- 苯-l,4-二胺(化合物1)， 10 mg 二甲基氨基吡啶和145 mg 4-嗎啉-4-基-苯曱酰氯在12 ml甲苯中在沸騰溫度下攪拌1-3小時(shí)。冷卻至室 溫后，抽濾沉淀物，所得固體從N,N-二曱基曱酰胺重結(jié)晶，得到15 mg 標(biāo)題化合物(m.p.: 313°C)。EF: C33H29N7 03(571.64)實(shí)測值[M+l] 572.4 從N-[3-(4-曱氧基苯基)-[l，2，4]三唑并[3,4-a]酞噪-6-基]-苯-l,4-二 胺(化合物l)和合適的羧酸衍生物開始，用類似于在化合物22中所 描述的制備化合物3-26的方法來制備下面的化合物112。112. 4-曱氧基->^-{4-[3-(4-曱氧基苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-&]酞嗪-6-基氨基]-苯基}-苯甲酰胺C30 H24N6 03 MS:計(jì)算值C3QH24N603 (516.56)實(shí)測值[M+l] 517.3用類似于化合物74a中描述的還原反應(yīng)來制備下面的化合物113和 114;或者，從B8(用于113)或B9(用于114)開始，用類似于制備化 合物1的方法來制備下面的化合物113和114。113. N-[3-(4-溴-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,3-二胺 C21HI5BrN6MS:計(jì)算值C21H15 Br N6 (431.30)實(shí)測值[M+l]431.1114. N-[3-(2-氯-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l，3-二胺 C21H15C1N6MS:計(jì)算值C21H15 CI N6 (386.85)實(shí)測值[M+H]387.0從N-[3-(4-溴-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基]-苯-l,3-二胺 (化合物113)和合適的羧酸衍生物開始，用類似于化合物22中描述 的制備化合物3-26的方法來制備下面的化合物115。115. 環(huán)丙基甲酸。-[3-(4-溴-苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基卜酰胺C25H19BrN6OMS:計(jì)算值C25 H19 Br N6 O (499.37)實(shí)測值 [M+H] 499.0從化合物74a(用于116)或化合物74 (用于117)和合適的羧酸衍 生物開始，用類似于化合物22中描述的制備化合物64/65的方法來 制備下面從化合物N6和N7。116. 環(huán)丙基曱酸[3-(3-0-曱苯基-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨 基)-苯基]-酰胺C26H22N6OMS:計(jì)算值C26 H22 N6 O (434.5)實(shí)測值(M+l ) 435.2117. 環(huán)丙基甲酸P-[3-(2-三氟曱基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞 嗪-6-基氨基]-苯基}-酰胺C26H19F3N6OMS:計(jì)算值C26 HI9 F3 N6 O (488.48)實(shí)測值 (M+l )489.1從4-[3-(4-曱氧基苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯曱 酸(化合物77)和合適的胺衍生物開始，用類似于化合物103中描述 的制備化合物79-89的方法來制備下面的化合物118。118. 1-(4-乙基-哌嗪-1-基)-1-{4-[3-(4-曱氧基-笨基)-[1,2,4]三唑并 [3,4-a]酞。秦-6-基氨基]-苯基}-曱酮C29H29N7 02MS: C29H29N7 02計(jì)算值507.60實(shí)測值(M+H) 508.1起始化合物Al. 6-氯-3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2，4]三唑并[3,4-a]酞嗪在6(TC下，將6.0 g (4-氯-酞嗪-l-基)-肼(化合物Bl)懸浮于160 ml 曱苯和18 ml三乙基胺中，然后用6.0 g 4_曱氧基-苯甲酰氯的48 ml 曱苯溶液處理。在110。C下攪拌該混合物6小時(shí)，冷至室溫，抽濾， 用曱苯?jīng)_洗。所得固體從N,N-二甲基曱酰胺重結(jié)晶，用水洗滌沉淀 物，干燥，得到5.2g標(biāo)題化合物(m.p.: 192-193。C)。EF: C,sHnClN4 0(310.75)實(shí)測值[M+l] 311.2備擇后處理程序
所述產(chǎn)物可用硅膠柱色譜法純4匕。從合適的起始化合物B2-B9和合適的苯胺衍生物開始，用類似 于制備化合物1的方法之一來制備化合物A2-A12。A2. (3-硝基-苯基)-{3-(2-曱氧基-苯基)-[1,2，4]三唑并[3,4-司-酞。秦-6-基}-胺A3. (3-硝基-苯基H3-(2-氟-笨基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]-酞嗪-6-基}-胺A4. (3-硝基-苯基)-{3-(2-溴-笨基)-[1,2,4]三唑并[3，4-3]-酞嗪-6-基}-胺A5. (3-硝基-苯基)-{3-(2-三氟曱基-苯基)-[1,2,4]三唑并[3,4-a]-酞 。秦-6-基}-胺A6. (4-硝基-苯基)_{3-(2-甲氧基-苯基H 1,2,4]三唑并[3，4-a]-酞嗪-6-基}-胺A7. (4-硝基-苯基)-{3-(2-氟-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4-3]-酞嗪-6-基}-胺A8. (4-硝基-苯基)-{3-(2-溴-笨基)-[1,2,4]三唑并[3,4^]-酞嗪-6-基}-胺A9. (4-硝基-苯基H3-(2-三氟曱基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]-酞 嗪-6-基}-胺A10. (3-硝基-苯基)-(3-0-曱苯基-[1,2，4]三唑并[3,4-3]-酞嗪-6-基)-胺All. (3-硝基-苯基)-(3-(4-溴-苯基)-[[1，2,4]三唑并[3,4^]-酞嗪-6-基]-胺A12. (3-硝基-苯基)-(3-(2-氯-苯基)-[[1,2，4]三唑并[3，4-3]-酞嗪-6-基]-胺Bl.(4-氯-酞嗪-l-基)-肼在9(TC下將10 g購買得到的二氯酞嗪分批加入到50 ml乙醇和 20 ml水合肼溶液中。10分鐘后，將反應(yīng)混合物冷至室溫，抽濾沉
淀物，用乙醇沖洗，得到8.4g標(biāo)題化合物。EF: C8H7C1N4 (194.62)實(shí)測值:[M+l] 195.0 從(4-氯-酞嗪-l-基)-肼(化合物Bl)和合適的苯曱酸衍生物開始， 用類似于制備化合物Al或B7的方法來制備下面的化合物B2-B9。 B2. 6-氯-3-(2-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞。秦 B3.6-氯-3-(2-氟-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞口秦 B4. 6-氯-3-(2-溴-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪 B5. 6-氯-3-(2-三氟曱基-苯基)-[l，2，4]三唑并[3，4-a]酞嗪 B6. 6-氯-3-(2-曱基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪 B7. 6-氯-3-苯基-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪 步驟1:將2.5 g (4-氯-酞嗓-l-基)-肼(化合物Bl)懸浮于250 ml甲苯中， 然后在回流溫度下用1.7 ml苯曱酰氯的50 ml曱苯溶液處理。2小 時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷至室溫，抽濾。減壓濃縮濾液，殘留物從N,N-二曱基曱酰胺重結(jié)晶，得到1.2 g N-(4-氯-2H-酞嗪-l-亞基)苯曱酰肼 (Benzoic Acid (4-chloro-2H-phthalazin-l-ylidene)-hydrazide )。EF: C15HU C1N4 0 (298.73)實(shí)測值[M+l] 299.1步驟2:將2.5 g N-(4-氯-2H-酞嗪-l-亞基)苯曱酰肼和1 g三乙基胺鹽酸 鹽懸浮于60 ml乙二醇中，在130。C下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物 冷至室溫，加入600 ml水。所得產(chǎn)物用二氯曱烷萃取，用硫酸鈉干 燥有機(jī)層，減壓濃縮。殘留物從N,N-二曱基曱酰胺重結(jié)晶，得到標(biāo) 題化合物。EF: C15 H9 CI N4 (280.72)實(shí)測值[M+l] 281.2備擇后處理程序所述產(chǎn)物可用硅膠柱色譜法純化。B8. 3-(4-溴-苯基)-6-氯-[l，2，4]三唑并[3,4-a]酞嗪C15H8BrClN4MS:計(jì)算值C15 H8 Br CI N4 (359.61)實(shí)測值[M+l〗358.8B9. 6-氯-3-(2-氯-苯基Hl,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪 C15 H8 CI2 N4 MS:計(jì)算值C15 H8 Cl2 N4 (315.16)實(shí)測值[M+H] 314,8商業(yè)適用性本發(fā)明的化合物具有有用的藥理學(xué)特性，這使得它們具有工業(yè) 生產(chǎn)價(jià)值。作為選擇性的環(huán)GMP-水解磷酸二脂酶抑制劑(cGMP-PDE 抑制劑)-優(yōu)選2-型，它們一方面適于治療病理性內(nèi)皮活性增強(qiáng) (pathologically enhanced endothelial activity)和內(nèi)皮屏障功能受損 (impaired endothelial barrier function)的疾病i口膿毒寸生Y木克、月永管 水腫或與不希望的血管新生(neoangiogenesis )相關(guān)的疾病。另一方 面，由于PDE2在神經(jīng)組織中有表達(dá)，它們還可用于神經(jīng)變性疾病。 另外，PDE2在人血小板中表達(dá)，PDE2抑制劑顯示可抑制血小板的 功能。因此，本發(fā)明的化合物可用作抗血栓形成/血小板凝集抑制劑。 此外，由于心肌中顯示有PDE2,因此本發(fā)明的化合物可有效對抗心 律失常。由于它們的cGMP-PDE (優(yōu)選PDE2)抑制特性，本發(fā)明化合物可 用于人用藥和獸藥中，其中它們可用于治療和預(yù)防下面的疾病(1)所 有病理性內(nèi)皮活性增強(qiáng)/內(nèi)皮屏障功能受損病癥如膿毒性休克中的多 器官衰竭特別是急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、肺炎、各種原因的急 性和慢性氣管疾病(鼻炎、支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫、COPD)、 血管性水肺、外周性水腫、腦水肺如創(chuàng)傷性的或中風(fēng)引起的(following 腦水腫；(2)所有與病理性血管新生增強(qiáng)有關(guān)的病癥如與血管新生有 關(guān)的所有腫瘤(良性或惡性)和與血管新生有關(guān)的所有炎性疾病如關(guān)節(jié) 炎型病癥(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊推炎、骨關(guān)節(jié)炎和其它關(guān) 節(jié)炎病癥)、所有形式的牛皮癬、視網(wǎng)膜性失明(retinal blindness )、 支氣管哮喘、炎性腸病、移植排斥、同種異體移植物排斥/動脈粥樣 硬化；(3)所有同時(shí)需要抑制血小板凝集作用與降低內(nèi)皮活性增強(qiáng)的
病癥如血栓栓塞病癥和包括心肌梗塞、腦梗塞、短暫性缺血發(fā)作(transitory ischaemic attacks )、心纟交痛、外周循環(huán)障礙在內(nèi)的局部缺 血(ischaemias )，血栓溶解治療后防止再狹窄、經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形 術(shù)(PTA),經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)和分流術(shù)(bypass); (4)所 有類型的認(rèn)知損傷特別是認(rèn)知障礙如輕度認(rèn)知障礙(MCI)、 Alzheimer 病、Lewy-Body癡呆、Parkinson病和月齒血管'f生癡呆(cerebrovascular dementia);和(5)心律失常。本發(fā)明還涉及治療患有上述其中已知疾病的哺乳動物包括人類 的方法。所述方法的特征在于給予患病哺乳動物治療有效的和藥理 學(xué)有效的可耐受量的一種或多種本發(fā)明化合物。本發(fā)明還涉及已知 PDE特別是PDE2的方法，所述方法包括將所述PDE與有效量的本 發(fā)明化合物接觸。本發(fā)明還涉及已知PDE特別是PDE2的方法，所述方法包括給予需要該抑制作用的哺乳動物藥理學(xué)活性的和治療有效的且可耐受 量的至少一種本發(fā)明化合物。發(fā)明化合物。本發(fā)明還涉及具有PDE特別是PDE2抑制活性的本發(fā)明化合物。本發(fā)明也涉及本發(fā)明化合物在生產(chǎn)用于治療和/或預(yù)防所提到的 疾病的藥用組合物值的用途。別是PDE2-相關(guān)性疾病的藥用組合物的用途。本發(fā)明還涉及用于治療和/或預(yù)防所提到的疾病的藥用組合物，所述組合物包含一種或多種本發(fā)明化合物。本發(fā)明還涉及具有PDE特別是PDE2抑制活性的藥用組合物。 另外，本發(fā)明涉及產(chǎn)品，其包含包裝材料和裝在所述包裝材料中的藥物，其中所述藥物在治療學(xué)上可有效用于拮抗2型環(huán)核苷酸
磷酸二脂酶(PDE2)的作用并改善PDE2-介導(dǎo)的病癥的癥狀，其中所 述包裝材料包含說明藥物可用于預(yù)防或治療PDE2-介導(dǎo)的病癥的標(biāo) 簽或包裝說明書，其中所述藥物包含一種或多種本發(fā)明的式I化合 物。所述包裝材料、標(biāo)簽和包裝說明書不同于或類似于通常認(rèn)為的 用于具有相關(guān)用途的藥物的標(biāo)準(zhǔn)包裝材料、標(biāo)簽和包裝說明書本發(fā)明藥用組合物可用本領(lǐng)域中任何通?？山邮艿慕o藥方式進(jìn) 行給藥。用作說明的合適的給藥方式的實(shí)例包括靜脈給藥、口服、 經(jīng)鼻給藥、胃腸外給藥、局部給藥、經(jīng)皮給藥和直腸給藥。優(yōu)選靜 脈給藥和口服給藥。所述藥用組合物通過本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員熟悉的已知方法制 備。作為藥用組合物，本發(fā)明的化合物(=活性化合物)可單獨(dú)應(yīng) 用或優(yōu)選與合適的藥用助劑和/或輔料聯(lián)用，如為片劑、包衣片、膠 嚢、薄膜衣片(caplets)、栓劑、貼劑(patches)(如TTS)、乳劑、 混懸劑、凝膠劑或溶液劑形式，所述活性化合物的含量最好為0.1-95%，并且，通過選擇合適的助劑和/或輔料，可得到確切適于活性 化合物和/或達(dá)到所需起始作用的藥物給藥形式(如緩釋形式或腸溶 形式)。由于其專業(yè)知識，本領(lǐng)域中熟練技術(shù)人員都熟悉適于所需藥物 制劑的助劑或輔料。除溶劑外，可用凝膠形成劑、軟膏基質(zhì)和其它 活性化合物輔料如抗氧化劑、分散劑、乳化劑、防腐劑、增溶劑、 著色劑、絡(luò)合劑或滲透促進(jìn)劑。對于呼吸道疾病的治療，本發(fā)明的化合物還優(yōu)選通過氣霧劑形 式吸入；固體、液體或混合組合物的氣溶膠顆粒的直徑優(yōu)選為0.5-10 pm， 最好為2-6 |_im。可通過壓力-驅(qū)動的噴射霧化器或超聲霧化器來產(chǎn)生氣溶膠，但 最好通過推進(jìn)劑-驅(qū)動的計(jì)量氣霧劑或從吸入劑膠嚢中的微粒化的活 性化合物無推進(jìn)劑給藥。根據(jù)所用的吸入系統(tǒng)，除活性化合物外，給藥形式另外包含所
需的輔料如推進(jìn)劑(如對計(jì)量氣霧劑來說為Frigen)、表面活性物質(zhì)、 乳化劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、調(diào)味劑、填充劑(如就干粉吸入裝置來說 為乳糖)，或者，如果合適的話，還含有另外的活性化合物。為了達(dá)到吸入目的，可用許多種可產(chǎn)生最佳粒徑的氣霧劑裝置， 然后采用正確合理的吸入技術(shù)給予患者。除了使用適配器 (adaptors)(間隔器(spacers),膨脹器(expanders))和梨形容器(如 Nebulator , Volumatic )和發(fā)射吹氣噴霧的自動裝置(automatic devices emitting a puffer spray) (Autohaler⑧)之夕卜，只于于i十量氣霧劑， 特別是對于干粉吸入裝置來說，可用很多種專業(yè)溶液(technical solutions )(如Diskhaler , Rotadisk , Turbohaler⑧或歐洲專利申i青EP 0 505 321種描述的吸入裝置)，使用它們可使活性化合物達(dá)到最佳給 藥效果。對于皮膚病疾病的治療，本發(fā)明化合物特別以適于局部應(yīng)用的 藥用組合物形式給藥。對于所述藥用組合物的生產(chǎn)，本發(fā)明化合物 (-活性化合物)優(yōu)選與合適的藥用助劑混合，然后進(jìn)一步加工得 到合適的藥物制劑。合適的藥物制劑為，如散劑、乳劑、混懸劑、 噴霧劑、油(oils)、軟膏、脂肪軟膏、乳膏、糊劑、凝膠劑或溶液劑。本發(fā)明的藥用組合物可通過已知方法制備。活性化合物的劑量 按照PDE抑制劑常用的數(shù)量級實(shí)^f亍。因此用于治療皮膚病的局部應(yīng) 用形式(如軟膏)包含的活性化合物的濃度為，如0.1-99%。吸入給 藥的劑量通常為0.1-3 mg每天。全身治療(口服或靜脈注射)的習(xí)慣 劑量為0.03-3 mg/kg每天。生物學(xué)研究測定PDE活性抑制作用的方法 縮寫PDE:磷酸二脂酶，PCR:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，RT-PCR:逆轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈反應(yīng)，dNTPs:脫氧核苷三磷酸，RNA:核糖核酸，cDNA:
互補(bǔ)脫氧核糖核酸，bp: 堿基對，(dT)15: 15聚胸苦酸 (pentadecathymidylic acid)， ORF:開》文閱讀沖匡架，GB no.: GenBank 數(shù)據(jù)庫檢索號，rBV:重組桿狀病毒，wt:野生型，aa :氨基酸， UCR :上游保守區(qū)(upstream conserved region), PAA :聚丙烯酰胺。氨基酸用1個(gè)特征字母表示A表示丙氨酸，C表示半胱氨酸， D表示天冬氨酸，E表示谷氨酸，F(xiàn)表示苯丙氨酸，G表示甘氨酸， H表示組氨酸，I表示異亮氨酸，K表示賴氨酸，L表示亮氨酸，M 表示甲硫氨酸，N表示天冬酰胺，P表示脯氨酸，Q表示谷氨酰胺， R表示精氨酸，S表示絲氨酸，T表示蘇氨酸，V表示纈氨酸，W 表示色氨酸，Y表示酪氨酸。克隆重組PDE的通用方法用得自Qiagen的Rneasy Mini試劑盒從細(xì)胞系中純化RNA。用 Expand逆轉(zhuǎn)錄酶(Roche)與50pM引物(dT)15和1 mM dNTPs (都來 自Roche)在20 |al反應(yīng)體系中將1呢RNA反轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA。用 5 (il cDNA作為隨后的PCR反應(yīng)的模板。人組織cDNA購自Clontech 或Invitrogen。在PCR反應(yīng)中使用1 |il。PCR在Stratagene Robocycler 40或在MWG Primus 96 plus thermocyder中進(jìn)行。通常，PCR與得自 Roche的Expand Lond Template PCR System在加有0.75 mM MgCl2、 0.3 每種引物、500dNTPs的緩沖液3中進(jìn)行。PCR產(chǎn)物用High Pure PCR Product Purification Kit(Roche)純化 或用得自Qiagen的QIAquick Gel Extraction試劑盒從瓊脂糖膠中純 化，并克隆入得自Invitrogen的pCR2.1-TOPO載體。ORF在桿狀病 毒表達(dá)載體(轉(zhuǎn)移質(zhì)粒)中被亞克隆。pCR-Bac和pVL載體得自 Invitrogen。 PBacPak載體(pBP8或pBP9)得自Clontech。限制性內(nèi)切 酶得自Roche和MBI Fermentas。小務(wù)飾酶和連接酶得自New England Biolabs。 DNA由GATC GmbH (Konstanz, Germany, www.gatc.de)公
司或在ALTANA Pharma實(shí)驗(yàn)室中用ABI PRISM 310和Big染料終 止4盾環(huán)觀'J序 v2 4b學(xué)法(Big dye terminator cycle sequencing v2 chemistry)(Applied Biosystem)測序。序列分析用Hitachi 2.5版DNASIS 軟件或用Vector NTI 7載體進(jìn)行。當(dāng)需要時(shí)，最終用得自Stratagene 的QuickChange Site-Directed Mutagenesis i式齊寸盒進(jìn)ff體夕卜i秀變。 克隆人PDE 2A3PDE2A3 (GB no. U67733)用腦cDNA的PCR進(jìn)行2步擴(kuò)增。用 引物CP1 PD2AS (5'-GAGGAGTGATGGGGCAGGC-3')和PR9PD2AA (5'-GCGAAGTGGGAGACAGAAAAG-3')分離N-端片段，用引物 PR7PD2AS (5'-GATCCTGAACATCCCTGACG-3')和CP3PD2AA (5'-GGGATCACTCAGCATCAAGGC-3')分離C-端片段。將PCR產(chǎn)物克 隆入載體pCR2.1-Topo。首先將N-端片段用EcoRI亞克隆入 pBluescript II KS (-)，然后將Bstl 1071/EcoRV片段與得自C-端克隆 的相應(yīng)的限制性片段交換，得到完整ORF。用Xbal和Kpnl將PDE2A3 的ORF亞克隆入pBP8。重組PDE2的表達(dá)通過在Sf9昆蟲細(xì)胞中的同源重組來制備rBV。將表達(dá)質(zhì)粒與 Bac-N-Blue (Invitrogen)或Baculo-Gold DNA (Pharmingen)用標(biāo)準(zhǔn)方案 (Pharmingen)進(jìn)行共轉(zhuǎn)染。用噬菌斑測定方法選擇無Wt病毒的重組 病毒上清液。然后，通過3次擴(kuò)增來制備高滴度病毒上清液。通過 在無血清的SF900培養(yǎng)基(Life Technologies)中用1-10 MOI (多重感 染)感染2xl06細(xì)胞/ml使PDE2在Sf21細(xì)胞中表達(dá)。將細(xì)胞在28 。C下培養(yǎng)，通常培養(yǎng)48小時(shí)，然后將其在1000 g和4。C下沉淀5-10 分鐘。在旋動培養(yǎng)燒瓶中，將細(xì)胞在75 rpm轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)。SF21昆 蟲細(xì)胞以濃度約107細(xì)胞/ml重懸浮于冰冷的(4。C)勻漿緩沖液(20 mM Tris，pH8.2,包含下面的添加物140mMNaCl、 3.8mMKCl、 1 mM EGTA、 1 mM MgCl2、 1 mM卩-3克基乙醇、2 mM苯曱脒、0.4 mM Pefablock、 10 pM亮肽素、10 |iM胃酶抑素A, 5 [iM胰蛋白酶抑制
劑)中，通過超聲處理使其斷裂(disrupted by ultrasonication )。然后 將所述勻漿在lOOOxg離心10分鐘，上清液在-80。C下儲存直到隨后 使用(見下面)。通過Bradford法(BioRad， Munich)用BSA作為標(biāo)準(zhǔn) 品測定蛋白含量。重組蛋白的完整度和大小通過蛋白質(zhì)印跡法 (westernblot)測定。用SPA技術(shù)測定重組人PDE2A3抑制作用用由 Amersham Pharmacia Biotech(參見procedural instructions "phosphodiesterase [3H]cAMP SPA enzyme assay, code TRKQ 7090")提 供的改良的SPA(閃爍親近分析法)測試中的測試樣品抑制重組人 PDE2A3活性，在96孔微滴定板(MTP's)上進(jìn)行。測試體積為100 pl， 包含20 mM Tris緩沖液(pH 7.4)、 0.1 mg BSA (牛血清白蛋白)/ml、 5 mM Mg2+、 0.5 j_iM cAMP (包含約50,000 cpm的[3H]CAMP)、 5|iiM cGMP (用來激活PDE2A3),將2 (al各物質(zhì)在DMSO和足量的重組 PDE (1000xg上清液，見上面)中稀釋，確保在該實(shí)驗(yàn)條件下15-20% 的cAMP被轉(zhuǎn)化。在37。C下預(yù)孵育5分鐘后，加入底物(cAMP)開始 反應(yīng)，將測定液(assays)再孵育15分鐘；然后，加入SPA珠(50pl) 終止反應(yīng)。參照制造商的說明書，將SPA珠預(yù)先懸浮于水中，然后 以l : 3 (v/v)稀釋；所述稀釋溶液還包含3 mMIBMX。在珠沉淀后 (〉30分鐘)，用市售檢測器械分析MTP's,通過非線性回歸根據(jù)濃度 效應(yīng)曲線確定化合物對PDE活性抑制作用的相應(yīng)的ICs。值。 評價(jià)HUVEC單層細(xì)胞的大分子通透性的抑制作用的方法 測定內(nèi)皮單層細(xì)胞大分子通透性方法按照改良的Langeler & van Hinsbergh (1988)中描述的方法進(jìn)行。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞從臍帶中按 照標(biāo)準(zhǔn)程序(Jaffe et al. 1973)分離，然后在加有2% FCS、 0.5ng/ml VEGF、 10ng/ml bFGF、 5ng/ml EGF、 20ng/ml Long R3 IGF-1 、 0.2(ig/ml 氬化可的松、1 pg/ml抗壞血酸、22.5嗎/ml肝素、50ng/ml慶大霉素、 50ng/ml兩性霉素B(EGM2購自 Promocdl GmbH, Heidelberg, Germany)的內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(EBM)中培養(yǎng)。在融合時(shí)，將細(xì)胞
用胰蛋白酶處理，以73000細(xì)胞/孔將細(xì)胞重置于用10嗎cm2-1纖連 蛋白(Fibronectin) (Sigma, Taufkirchen， Germany)子貞涂漬的3(im聚碳酸 酯濾器轉(zhuǎn)孑L(Transwells)插片(Costar GmbH, Bodenheim, Germany) 上。在實(shí)驗(yàn)前，將HUVEC在EGM2 (lOOpl在上層孔中，600^1在 下層孔中)中培養(yǎng)4天，每隔一天更換培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，用含 有1%人血清白蛋白的M199替換培養(yǎng)基。用環(huán)核苷酸調(diào)節(jié)劑(選擇 性PDE3抑制劑莫他匹酮、選擇性PDE4抑制劑RP734(H、 cGMP生 成劑ANP或SNP和PDE2抑制劑)預(yù)孵育內(nèi)皮細(xì)胞15分鐘。然后用 凝血酶(1 U ml.1) (Sigma, Tau汰ichen, Germany)刺激HUVEC,向上 層孑L中力口入辣根過氧化物酶(horsh radish peroxidase)(5(ig/ml) (Sigma， Taufkirchen, Germany)作為大分子標(biāo)記蛋白。孵育1小時(shí)后，移去轉(zhuǎn) 孔，用得自Sigma(Taufkirchen, Germany)的3,3，,5,5，-四曱基聯(lián)苯胺液 體底物系統(tǒng)在下層孔中^H則辣根過氧化物酶透過內(nèi)皮單層細(xì)胞的活 性。結(jié)果在前述測定中確定的代表性的抑制值[用-log ICs。(mol/l)表示]如 下表A中所示，其中化合物的編號與實(shí)施例的編號相對應(yīng)。 表APDE2活性的抑制作用化合物-log IC50(mol/l)1-66,75-110,112,116-118所列化合物的抑制值在7.5-9.2范 圍內(nèi)同時(shí)(In parallel),本發(fā)明的化合物可抑制凝血酶誘導(dǎo)的HUVEC 單層細(xì)胞對作為大分子標(biāo)記物的辣根過氧化物酶(HRP)的通透性。因 此，這暗示PDE2抑制劑可提高在很多病癥中都受損的內(nèi)皮細(xì)胞屏 障作用，所述病癥如急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)或嚴(yán)重的肺炎。 用檢測PDE2抑制劑的這些細(xì)胞作用的系統(tǒng)觀察到PDE2的酶學(xué)特
性，其對cAMP顯示出更高的Km，其活性被cGMP激活。凝血酶 誘導(dǎo)的HRP通透性增加可被PDE3 (lO^M莫他匹酮)H和PDE4(1 pM RP73401)的完全抑制作用完全阻止。但是，在另外的ANP (100nM) 或SNP(lmM)存在下，可增加cGMP， PDE3和4的通透性抑制作用 可被部分逆轉(zhuǎn)。如果存在1 pMRP73401、 10pM莫他匹酮、100nM ANP或lmM SNP時(shí)，PDE2抑制劑阻滯凝血酶刺激的HRP通透性， 這表明ANP或SNP通過產(chǎn)生cGMP可激活PDE2。在有和沒有PDE2 抑制劑存在下和在1 pM RP73401、 lO(iM莫他匹酮和100nM ANP 存在下用抑制百分率來評價(jià)在不同濃度下HRP通透性的濃度依賴型 抑制作用。在沒有PDE3和4抑制作用時(shí)，ANP或SNP(和)PDE2抑 制劑對凝血酶誘導(dǎo)的大分子通透性過高顯示出極低的作用。 SNP-或ANP-誘導(dǎo)的HUVEC單層細(xì)胞通透性的抑制作用 HUVEC細(xì)胞在3pm聚碳酸酯濾器(Transwells)上用1 pM RP73401 (用來阻滯PDE4)和lO(iM莫他匹酮(用來阻滯PDE3)、 lmM SNP或100nM ANP和1 (iM測試樣品預(yù)孵育15分鐘，然后用1 U/ml 凝血酶刺激。60分鐘后評價(jià)傳代入下層孔的HRP。 RP73401和莫他 匹酮完全阻滯凝血酶誘導(dǎo)的通透性過高，其可被SNP和ANP部分 逆轉(zhuǎn)。本發(fā)明的化合物可以濃度依賴型模式抑制SNP-或ANP-誘導(dǎo) 的通透性增加。在前述測定中確定的代表性的抑制值[以-log IC50 (mol/l)表示]如 下表B所示，其中化合物的編號與實(shí)施例的編號相對應(yīng)。 表BSNP-或ANP-誘導(dǎo)的通透性的抑制作用化合物-log IC50(mol/l)3,4,5,7,8,11,12,17,18,21,25,30,38,54,85所列化合物的抑制值在7.2-8.7范圍內(nèi)
權(quán)利要求
1.式I的化合物其中R1為-U-A，其中U為直接鍵或亞甲基(-CH2-)，A為苯基、吡啶基、噻吩基或R11-和/或R111-取代的苯基，其中R11為1-4C-烷基、鹵素、三氟甲基、羥基、1-4C-烷氧基、完全或大部分被氟取代的1-4C-烷氧基、苯氧基、1-4C-烷氧基羰基、嗎啉代或二-1-4C-烷基氨基，R111為1-4C-烷氧基、鹵素、羥基或1-4C-烷基，R2為氨基、羧基、1-4C-烷氧基羰基、-N(H)-C(O)R3或-C(O)-N(R4)R5，其中R3為1-4C-烷基、2-4C-烯基、3-7C-環(huán)烷基、三氟甲基、苯基、R31-和/或R311-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的1-4C-烷基或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為1-4C-烷氧基、鹵素、硝基、1-4C-烷基、三氟甲基、羥基、1-4C-烷氧基羰基、3-7C-環(huán)烷基甲氧基、嗎啉代或單-或二-1-4C-烷基氨基，R311為1-4C-烷氧基、鹵素、1-4C-烷基、羥基或3-7C-環(huán)烷基甲氧基，或R31和R311一起為1-2C-亞烷基二氧基，R32為羥基、苯基-1-4C-烷氧基、1-4C-烷氧基、苯基、R321-和/或R32 1 1-取代的苯基、單-或二-1-4C-烷基氨基、嗎啉代或4N-(R322)-哌嗪-1-基，其中R321為1-4C-烷氧基、鹵素、硝基、1-4C-烷基、三氟甲基、羥基、1-4C-烷氧基羰基、3-7C-環(huán)烷基甲氧基或單-或二-1-4C-烷基氨基，R3211為1-4C-烷氧基、鹵素、1-4C-烷基、羥基或3-7C-環(huán)烷基甲氧基，或R321和R3211一起為1-2C-亞烷基二氧基，R322為1-4C-烷基，R33為氫、1-4C-烷基或1-4C-烷基羰基，R4為氫、1-4C-烷基、R41-取代的2-4C-烷基、苯基、R42-和/或R421-取代的苯基或吡啶基，其中R41為羥基、1-4C-烷氧基、單-或二-1-4C-烷基氨基或嗎啉代，R42為1-4C-烷氧基、鹵素、硝基、1-4C-烷基、三氟甲基、羥基、1-4C-烷氧基羰基、3-7C-環(huán)烷基甲氧基或單-或二-1-4C-烷基氨基，R421為1-4C-烷氧基、鹵素、1-4C-烷基、羥基或3-7C-環(huán)烷基甲氧基，或R42和R421一起為1-2C-亞烷基二氧基，R5為氫或1-4C-烷基或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het，其中Het為嗎啉代或4N-(1-4C-烷基)-哌嗪-1-基，及這些化合物的鹽。
2.權(quán)利要求1的式I化合物，其中Rl為-U-A,其中U為直接鍵或亞曱基(-CH。，A為苯基、吡啶基、噻吩基、二-(l-4C-烷氧基)-苯基或Rll-取 代的苯基，其中Rll為l-4C-烷基、鹵素、三氟曱基、羥基、l-4C-烷氧基、完 全或大部分被氟取代的l-4C-烷氧基、苯氧基、l-4C-烷氧基羰基、 嗎啉代或二-1 -4C-烷基氨基，R2為氨基、羧基、l-4C-烷氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(O)-N(R4)R5，其中R3為l-4C-烷基、2-4C-烯基、3-7C-環(huán)烷基、三氟甲基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的1-4C-烷基或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為l-4C-烷氧基、嗎啉代或二-l-4C-烷基氨基，R32為羥基、苯基-l-4C-烷氧基、l-4C-烷氧基、笨基、R321-取代的苯基、二-l-4C-烷基氨基、嗎啉代或4N-(R322)-哌嗪-l-基，其中R321為l-4C-烷氧基， R322為l-4C-烷基，R33為氫、l-4C-烷基或l-4C-烷基羰基，R4為氫、l-4C-烷基、R41-取代的2-4C-烷基、苯基、R42-取代 的苯基或吡。定基，其中R41為羥基、l-4C-烷氧基、二-l-4C-烷基氨基或嗎啉代， R42為l-4C-烷氧基或二-l-4C-烷基氨基， R5為氫或l-4C-烷基或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het,其中Het為嗎啉代或4N-(l-4C-烷基)-哌嗪-l-基，及這些化合物的鹽。
3.權(quán)利要求1的式I化合物，其中Rl為-U-A,其中U為直接鍵或亞曱基(-CH2-)，A為苯基、吡啶基、噻吩基、二曱氧基苯基或Rll-取代的苯基,其中Rll為甲基、叔丁基、氯、氟、溴、三氟曱基、羥基、曱氧基、 乙氧基、三氟曱氧基、苯氧基、曱氧基羰基、嗎啉代或二曱基氨基，R2為氨基、羧基、l-4C-烷氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(O)-N(R4)R5，其中R3為l-4C-烷基、2-4C-烯基、3-7C-環(huán)烷基、三氟曱基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的1-4C-烷基或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為l-4C-烷氧基、嗎啉代或二-l-4C-烷基氨基，R32為羥基、苯基-l-4C-烷氧基、l-4C-烷氧基、苯基、R321-取代的苯基、二-l-4C-烷基氨基、嗎啉代或4N-(R322)-哌嗪-l-基，其中R321為l-4C-烷氧基， R322為l-4C-烷基，R33為氫、l-4C-烷基或l-4C-烷基羰基，R4為氫、l-4C-烷基、R41-取代的2-4C-烷基、苯基、R42-取代 的苯基或吡啶基，其中R41為羥基、l-4C-烷氧基、二-l-4C-烷基氨基或嗎啉代， R42為l-4C-烷氧基或二-l-4C-烷基氨基， R5為氫或l-4C-烷基或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het,其中Het為嗎啉代或4N-(l-4C-烷基)-哌嗪-l-基，及這些化合物的鹽。
4.權(quán)利要求1的式I化合物，其中Rl為-U-A，其中U為直接鍵或亞曱基(-CH。，A為苯基或Rll-取代的苯基，其中Rll為曱基、氯、氟、溴、三氟曱基、羥基、曱氧基、苯氧基、曱氧基羰基或二曱基氨基，R2為氨基、羧基、曱氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(0)-N(R4)R5，其中R3為曱基、乙烯基、環(huán)丙基、環(huán)己基、三氟曱基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的l-2C-烷基 或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為曱氧基、嗎啉代或二曱基氨基，R32為羥基、節(jié)氧基、曱氧基、苯基、R321-取代的苯基、二曱 基氨基、嗎啉代或4N-曱基-哌嗪-l-基，其中 R321為甲氧基， R33為氫、曱基或乙?；琑4為氫、曱基、2-(R41)-乙基、苯基、R42-取代的苯基或吡啶 基，其中R41為羥基、曱氧基、二曱基氨基或嗎啉代，R42為甲氧基或二曱基氨基，R5為氫或曱基或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het,其中Het為嗎啉代或4N-曱基-哌n秦-l-基，及這些化合物的鹽。
5.權(quán)利要求1的式I化合物，其中Rl為-U-A，其中U為直接鍵，A為苯基或Rll-取代的苯基，其中 Rll為氟、溴、三氟曱基或曱氧基，R2連接在苯環(huán)與三唑并酞嗪骨架上的氨基的連接位置的間位或 對位，其為氨基、羧基、曱氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(0)-N(R4)R5， 其中R3為曱基、乙烯基、環(huán)丙基、環(huán)己基、三氟甲基、苯基、R31- 取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的l-2C-烷基 或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為曱氧基、嗎啉代或二甲基氨基，R32為羥基、芐氧基、曱氧基、苯基、R321-取代的苯基、二曱 基氨基、嗎啉代或4N-曱基-哌。秦-l-基，其中 R321為曱氧基， R33為氫、曱基或乙?；?，R4為氬、曱基、2-(R41)-乙基、苯基、R42-取代的苯基或吡啶 基，其中R41為羥基、曱氧基、二曱基氨基或嗎啉代， R42為曱氧基或二曱基氨基， R5為氫或曱基或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het,其中Het為嗎啉代或4N-曱基-哌嗪-l-基，及這些化合物的鹽。
6.權(quán)利要求1的式I化合物，其中Rl為-U-A，其中U為直接鍵，A為苯基或Rll-取代的苯基，其中Rll為氟、溴、氯、三氟曱基、曱基或曱氧基，R2連接在苯環(huán)與三唑并酞嗪骨架上的氨基的連接位置的間位或 對位，其為氨基、羧基、曱氧基羰基、-N(H)-C(0)R3或-C(0)-N(R4)R5， ^巾R3為曱基、乙烯基、環(huán)丙基、環(huán)己基、三氟曱基、苯基、R31-取代的苯基、呋喃基、咪唑-4-基、吡啶基、R32-取代的l-2C-烷基 或1N-(R33)-哌啶基，其中R31為甲氧基、嗎啉代或二曱基氨基，R32為羥基、千氧基、曱氧基、苯基、R321-取代的苯基、二甲 基氨基、嗎啉代或4N-曱基-哌。秦-l-基，其中R321為曱氧基， R33為氫、曱基或乙?；?，R4為氫、曱基、2-(R41)-乙基、苯基、R42-取代的苯基或吡啶 基，其中R41為羥基、曱氧基、二曱基氨基或嗎啉代，R42為曱氧基或二甲基氨基，R5為氫或曱基或R4和R5與連接它們的氮原子一起形成雜環(huán)基團(tuán)Het,其中 Het為嗎啉代、4N-曱基-哌嗪-l-基或4N-乙基-哌嗪-l-基及這些化合物的鹽。
7. 權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的式I化合物，其中Rl為4-曱氧基-苯基、2-曱氧基-苯基、2-溴-苯基、2-氟-苯基、 2-(三氟曱基)-苯基、2-氯-苯基、4-溴-苯基或2-曱基-苯基 及這些化合物的鹽。
8. 選自下列化合物的式I化合物N-(4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3，4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}環(huán)丙基曱酰胺，N-p-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l,2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯基}環(huán)丙基曱酰胺，或H4-[3-(4-曱氧基-苯基)-[l，2,4]三唑并[3,4-a]酞嗪-6-基氨基]-苯 基} _ 1 —(4-曱基-哌嗪-1 -基)-曱酮。
9. 權(quán)利要求1的式I化合物，用于治療疾病。
10. —種藥用組合物，所述組合物包含一種或多種權(quán)利要求1 的式I化合物與常用的藥用輔料和/或助劑。
11. 權(quán)利要求1的式I化合物在制備治療與PDE2活性相關(guān)的疾 病的藥用組合物中的用途，所述疾病如病理性內(nèi)皮活性增強(qiáng)和內(nèi)皮 屏障功能受損病癥如膿毒性休克和^^管水腫。
12. 權(quán)利要求1的式I化合物在制備治療下述病癥的藥用組合物中的用途(1)與病理性血管新生增強(qiáng)相關(guān)的病癥如所有腫瘤(良性 或惡性)或(2)與血管新生相關(guān)的所有炎性疾病如關(guān)節(jié)炎型病癥。
13. —種治療需要其的患者的病理性內(nèi)皮活性增強(qiáng)和內(nèi)皮屏障 功能受損病癥如膿毒性休克和脈管水腫的方法，所述方法包括給予 所述患者治療有效量的權(quán)利要求1的式I化合物。
14. 一種治療需要其的患者的(l)與病理性血管新生增強(qiáng)相關(guān)的 病癥如所有胂瘤(良性或惡性)或(2)與血管新生相關(guān)的所有炎性疾 病如關(guān)節(jié)炎型病癥的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量 的權(quán)利要求1的式I化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開的式(I)化合物是新型有效的PDE2抑制劑，其中R1和R2定義于說明書中。
文檔編號A61K31/5025GK101133057SQ200580038057
公開日2008年2月27日 申請日期2005年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月2日
發(fā)明者B·施米德特, D·弗洛克茲, H·-P·克利, H·特諾, R·庫爾澤, S·韋恩布倫納 申請人:奧坦納醫(yī)藥公司