專利名稱：治療高脂血癥的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥的方法和組合物。更具體而言，本發(fā)明涉及治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物高脂血癥以及與高脂血癥有關(guān)的不適或并發(fā)癥的方法和組合物。

背景技術(shù)：
盡管過去20年發(fā)病率下降了33％，心血管病仍然是當(dāng)前美國(guó)人的主要死因。若干致病因素與心血管病相關(guān)，包括傳染病，自身免疫反應(yīng)，血膽固醇過多癥和高脂血癥。有近90％的心血管病被診斷成動(dòng)脈硬化癥，該癥是由高血漿濃度的低密度脂蛋白(LDLs)所引起的。
哺乳動(dòng)物中至少有5種不同的脂蛋白，它們?cè)诖笮。M成，密度和功能上相互區(qū)分。在小腸細(xì)胞中，飲食脂質(zhì)被包入稱作“乳糜微?！钡拇笾鞍讖?fù)合物，該復(fù)合物具有高甘油三酯和低膽固醇含量。在肝臟中，甘油三酯和膽固醇酯作為被稱作極低密度脂蛋白(VLDLs)的富含甘油三酯的脂蛋白被包裝并釋放至血漿中，VLDLs主要運(yùn)輸肝臟中制造或由脂肪組織釋放的甘油三酯。通過酶作用，VLDLs或被肝臟還原和吸收，或被轉(zhuǎn)化成中密度脂蛋白(IDLs)。IDLs又或被肝臟吸收或被進(jìn)一步修飾而形成低密度脂蛋白(LDLs)。而LDLs或被肝臟吸收和降解，或被肝外組織吸收。高密度脂蛋白(HDLs)在稱作膽固醇反向運(yùn)輸?shù)倪^程中幫助從外圍組織去除膽固醇。有些形式的脂蛋白，諸如LDLs，被視為“壞”膽固醇，增加心臟病或其他由動(dòng)脈硬化引起的疾病的風(fēng)險(xiǎn)。其他形式的脂蛋白，諸如HDLs，被視為“好”膽固醇，對(duì)身體健康是必要的。
LDL代謝受肝臟低密度蛋白受體(LDLR)的調(diào)節(jié)。LDLR表達(dá)增加導(dǎo)致血漿LDL的清除通過受體介導(dǎo)的胞吞作用而改善，降低血漿LDL水平，以及減少動(dòng)脈斑形成的發(fā)生率。LDLR表達(dá)一般在轉(zhuǎn)錄水平通過負(fù)反饋機(jī)制由胞內(nèi)膽固醇池調(diào)節(jié)。該調(diào)節(jié)經(jīng)LDLR啟動(dòng)子的甾醇調(diào)節(jié)元件(SRE-1)與SRE結(jié)合蛋白(SREBPs)相互作用而得以控制。在失活態(tài)時(shí)，SREBP與SREBP-切割活化蛋白(SCAP)連在一起。SCAP含有膽固醇-傳感結(jié)構(gòu)域，對(duì)甾醇耗損反應(yīng)，從而活化SCAP-SREBP運(yùn)輸活性。在膽固醇耗損條件下，SCAP運(yùn)輸SREBP至高爾基體，在這里SREBP的N-端轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域通過特異性切割從前體蛋白釋放出來。SREBP的活性形式轉(zhuǎn)座至細(xì)胞核，結(jié)合至其同源SRE-1位點(diǎn)，并且活化LDLR基因的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)有足夠的膽固醇時(shí)，SCAP-SREBP復(fù)合物通過甾醇的主動(dòng)阻遏在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中維持失活形式，而LDLR基因轉(zhuǎn)錄維持在最低的組成型水平。
LDL調(diào)節(jié)機(jī)制的缺乏或不足可導(dǎo)致高脂血癥，其特征在于血清脂質(zhì)在血流中的異常增加。高脂血癥是發(fā)展動(dòng)脈硬化癥和其他心血管和外周血管病的公知誘因。原發(fā)性高脂血癥一般由遺傳缺陷引起，而繼發(fā)性高脂血癥一般由轉(zhuǎn)化因素，諸如疾病，藥物和/或飲食因素引起。高脂血癥還可產(chǎn)生自原發(fā)性和繼發(fā)性誘因的組合。
原發(fā)性高脂血癥包括家族性高乳糜微粒血癥(hyperchylomicronemia)，家族性高膽固醇血癥，家族性組合的高脂血癥，家族性異常β脂蛋白血癥，家族性高甘油三酯血癥，以及家族性缺陷型載脂蛋白B-100。家族性高乳糜微粒血癥為遺傳性紊亂，導(dǎo)致分解脂肪分子的酶--LP脂肪酶的不足。LP脂肪酶缺乏可引起大量脂肪或脂蛋白在血液中的累積。家族性高膽固醇血癥是由LDL受體基因中一個(gè)或多個(gè)突變引起的，所述突變導(dǎo)致LDL受體失靈，或者甚至完全缺少LDL受體。這些遺傳缺陷與LDL清除的減少或無效相關(guān)，導(dǎo)致LDL和總膽固醇水平在血漿中的升高。家族性組合的高脂血癥又稱多脂蛋白型高脂血癥，可導(dǎo)致膽固醇和甘油三酯水平的周期性升高以及HDL水平的降低。家族性缺陷的載脂蛋白B-100為常染色體顯性遺傳異常，由谷氨酰胺替代精氨酸的單核苷酸突變引起。該突變導(dǎo)致LDL顆粒對(duì)LDL受體的親和性降低，從而增加LDL和總膽固醇的血漿水平。家族性異常β脂蛋白血癥又稱III型高脂蛋白血癥，導(dǎo)致中度到重度升高血清甘油三酯和膽固醇水平以及異常的載脂蛋白E功能。在家族型高甘油三酯血癥中，血漿VLDL的濃度提升。這可引起輕度到中度高的甘油三酯水平(以及平常不高的膽固醇水平)，并且通常與低血漿HDL水平相關(guān)。
繼發(fā)性高脂血癥可被諸如下列疾病觸發(fā)不受控的糖尿病(胰島素依賴性糖尿病以及非胰島素依賴性糖尿病)(Bianchi，R.，et al.，Diab.Nutr.Metabl.743-51(1994)；Welborn，T.A.，Aust.NZ J.Med.2461-64(1994))，甲狀腺功能減退，尿毒癥，腎病綜合癥，肢端肥大癥，阻塞性肝病，以及異常蛋白血癥(dysproteinemia)(多發(fā)性骨髓瘤，紅斑狼瘡)(Harrison′s Principles of Internal Medicine，Ed.Braunwald，E.，et al.，11thEdition，McGraw-Hill 1016-1024(1988))。許多藥物也會(huì)產(chǎn)生繼發(fā)性高脂血癥，包括口服避孕藥，糖皮質(zhì)激素和抗高血壓藥。飲食因素，諸如高卡路里攝取，最近增重，高飽和脂肪和膽固醇食物消耗，以及醇類攝取，另有助于發(fā)展繼發(fā)性高脂血癥。
不管何種原因，脂蛋白水平升高與許多病態(tài)有關(guān)，這些病態(tài)包括動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，高血壓，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥和黃瘤。
脂蛋白水平，包括膽固醇水平的下降減少與高脂血癥相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)和/或嚴(yán)重性。多年以來，已嘗試許多不同策略來治療高脂血癥，主要集中在抗異常脂血癥藥--2004年的全球市場(chǎng)估計(jì)為260億美元(Commercial Insights AntiyslipidemicsCommercial Absorption ofLipitor’s Dominance，Datamonitor，May，2005)。治療高脂血癥和高膽固醇最常用的處方藥采用3-羥基-3-甲基-戊二酰-CoA還原酶(HMG-CoA還原酶)抑制劑，又稱“他汀(statins)”。他汀通過減慢膽固醇的產(chǎn)生和增加肝臟從血流中清除LDL的能力而降低膽固醇。最新的他汀為阿托伐他汀(atorvastatin)(Lipitor)，其是唯一批準(zhǔn)用于減少甘油三酯以及減少總膽固醇和LDL膽固醇的他汀。其他主要減少LDL膽固醇的可用他汀有西伐他汀(cerivastatin)(Baychol)，氟伐他汀(fluvastatin)(Lescol)，洛伐他汀(lovastatin)(Mevacor)，普伐他汀(pravastatin)(Pravachol)和辛伐他汀(simvastatin)(Zocor)。然而，有關(guān)利用他汀帶來肝臟衰竭和潛在的致命rhambdomyolysis方面的擔(dān)憂已導(dǎo)致開發(fā)輔助療法，與其他藥物組合低劑量他汀。盡管該策略一直相當(dāng)有效，但本領(lǐng)域以改進(jìn)的藥物來治療高脂血癥仍存在重要需求。
另一試圖降低膽固醇的治療方法采用膽汁酸螯合劑(例如，消膽胺，降甾醇酸)，和/或煙酸(尼克酸)，其通過降低高甘油三酯而發(fā)揮作用。然而，膽汁酸螯合劑可引起胃腸問題，諸如便秘，腹部疼痛，飽脹，嘔吐，腹瀉，失重和腸胃氣脹，還可減少其他藥物的吸收。煙酸可引起肝臟問題，頭昏眼花和視力模糊，使得這些藥物不為很多患者接受。
除采用常規(guī)藥物療法之外，傳統(tǒng)藥物(諸如中藥和日本藥物)也已用于心血管病治療多年。包括采用姜黃色素，又稱姜黃根，其被認(rèn)為通過阻斷凝血噁烷A2的形成而減少體內(nèi)膽固醇。凝血噁烷A2還起到增加血小板凝集天然抑制劑--環(huán)前列腺素的作用，因此用于抑制血塊形成(Srivastava et al.，Arzneimittelforschung，1986，36(4)715-17)。姜黃色素一直用于降低血清總膽固醇和LDL膽固醇水平，并用于增加有益HDL膽固醇水平。其他已提出用于降低膽固醇的草藥和植物治療包括gugulipid(制自印度Commiphora Mukul樹的樹脂)，大蒜，維生素E，大豆，可溶性纖維，肉堿，鉻輔酶Q10，纖維，葡萄籽提取物，泛酸，紅酵母米(red yeast rice)，蜂王漿，魚油和綠茶。不過，問題在于，大多數(shù)這些天然來源的植物產(chǎn)品和礦物產(chǎn)品存在一致性計(jì)量問題，并且許多對(duì)至少有些患者有不可接受的副作用。
平均而言，在前7個(gè)工業(yè)化國(guó)家中有42％的人口患有高脂血癥(Commercial Insights AntidyslipidemicsCommercial Absorption ofLipitor’s Dominance，Datamonitor，May，2005)。鑒于這些統(tǒng)計(jì)結(jié)果和治療高脂血癥的現(xiàn)狀，本領(lǐng)域?qū)﹁b定新化合物，制劑和方法以安全有效地降低患有高脂血癥和其他與脂質(zhì)水平升高相關(guān)的疾病和不適的患者血漿脂質(zhì)水平，存在迫不得已的未滿足的需求。
發(fā)明示例性實(shí)施方案概述 所以，本發(fā)明目的是提供用于治療和處理哺乳動(dòng)物對(duì)象，包括人的高脂血癥的新型和改進(jìn)的組合物和方法。
本發(fā)明另一目的是提供用于治療和處理哺乳動(dòng)物對(duì)象，包括人的膽固醇代謝紊亂的新型和改進(jìn)的組合物和方法。
本發(fā)明進(jìn)一步目的是提供用于治療和預(yù)防由高脂血癥或高膽固醇觸發(fā)或加重的疾病的組合物和方法，所述疾病包括，但不限于，心血管病，諸如動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥，高血壓和黃瘤。
通過采用下式I的黃連素，相關(guān)化合物和衍生物提供用于治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥或高膽固醇的新型和令人驚奇的有效方法和組合物，從而實(shí)現(xiàn)這些目的并滿足其他目的和優(yōu)點(diǎn)。

式I 其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以生成本發(fā)明公開內(nèi)容的活性(例如，抗異常脂血癥，LDL-調(diào)節(jié)或LDLR-調(diào)節(jié)的)化合物的任何組合，是氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；纪榛?，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被?，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，或雜環(huán)基。當(dāng)存在一個(gè)以上R基團(tuán)時(shí)，R基團(tuán)可選自上述任一基團(tuán)，相同或相異。在某些示例性實(shí)施方案中，可選擇下列舉例說明的對(duì)上述式I的結(jié)構(gòu)修飾，以提供用于治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥的有益候選化合物，例如，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基(例如，取代選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基)；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基(例如，取代選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基)。其他本發(fā)明組合物和方法中所用的候選化合物根據(jù)下文提供的內(nèi)容而容易生產(chǎn)和選擇。
本發(fā)明制劑和方法中有用的黃連素及相關(guān)化合物和衍生物包括，但不限于，黃連素和相關(guān)或衍生化合物的鹽，例如，黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。本發(fā)明中其他有用形式的黃連素及相關(guān)化合物和衍生物包括所述化合物的其他可藥用活性鹽，以及所述化合物的活性異構(gòu)體，對(duì)映體，多晶型，溶劑化物，水合物，和/或前藥。
在示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法采用式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，來治療和/或預(yù)防高脂血癥或另一與高脂血癥相關(guān)的疾病或不適，諸如心血管病的癥狀。
根據(jù)本發(fā)明方法，適合用式I的黃連素及黃連素相關(guān)和衍生化合物治療的哺乳動(dòng)物對(duì)象包括，但不限于，高脂血癥對(duì)象和高膽固醇對(duì)象，包括以高LDL、高膽固醇和/或高甘油三酯水平呈現(xiàn)的對(duì)象，或處于發(fā)展高LDL、高膽固醇和/或高甘油三酯水平的高風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。
這些和其他對(duì)象被有效治療的方法是給所述對(duì)象預(yù)防性和/或治療性施用高脂血癥有效量(或者替代地，抗異常脂血癥，LDL-調(diào)節(jié)，或LDLR-調(diào)節(jié)有效量)的式I的黃連素或黃連素相關(guān)化合物或衍生物，足以預(yù)防或減少高脂血癥或一種或多種與高脂血癥相關(guān)的疾病或不適(或者替代地，引發(fā)對(duì)象抗異常脂血癥，LDL-調(diào)節(jié)，或LDLR-調(diào)節(jié)反應(yīng))。本發(fā)明治療上有用的方法和制劑為如上所述的各種形式的式I的黃連素及黃連素相關(guān)和衍生化合物，包括所述化合物的任何活性可藥用鹽，以及活性異構(gòu)體，對(duì)映體，多晶型，溶劑化物，水合物，前藥，和/或其組合。因此，黃連素用作下文實(shí)施例中舉例說明本發(fā)明的實(shí)施方案。
在本發(fā)明其他實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物對(duì)象被有效治療的方法是給所述對(duì)象預(yù)防性和/或治療性施用膽固醇-控制有效量的式I的黃連素化合物或相關(guān)或衍生化合物，足以預(yù)防或減少對(duì)象高膽固醇，或一種或多種相關(guān)癥狀或不適。本發(fā)明這些治療上有用的方法和制劑同樣可采用各種形式的式I的黃連素化合物或相關(guān)或衍生化合物，包括可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，多晶型，溶劑化物，水合物，前藥，和/或其組合。
在本發(fā)明其他方面，提供組合的制劑和方法，其采用有效量的黃連素化合物(或另一式I的黃連素相關(guān)或衍生化合物)與一種或多種第二或輔助活性劑組合，所述活性劑與黃連素或黃連素相關(guān)或衍生化合物組合配制或協(xié)同給藥，以生成對(duì)象抗高脂血癥或降膽固醇有效反應(yīng)(或者替代地，抗異常脂血癥，LDL-調(diào)節(jié)，或LDLR-調(diào)節(jié)反應(yīng))。本文中示例的組合制劑和協(xié)同治療方法采用式I的黃連素或黃連素相關(guān)或衍生化合物與一種或多種額外的降脂劑或其他所示的第二或輔助治療劑組合。這些實(shí)施方案中與例如黃連素組合使用的第二或輔助治療劑，單獨(dú)或與例如黃連素組合，可具有直接或間接降脂活性，包括降膽固醇活性，或與例如黃連素組合可顯示其他有用的輔助治療活性。這些組合制劑和協(xié)同治療方法中有用的輔助治療劑包括，例如，抗高脂血癥；抗異常血脂劑(antidyslipidemic agents)；血漿HDL-升高劑；抗高血膽固醇劑，包括但不限于，膽固醇攝取抑制劑；膽固醇生物合成抑制劑，例如，HMG-CoA還原酶抑制劑(又稱他汀，諸如，洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，羅蘇伐他汀(rosuvastatin)，匹伐他汀(pitavastatin)，和阿托伐他汀)；HMG-CoA合酶抑制劑；鯊烯環(huán)氧酶抑制劑或鯊烯合成酶抑制劑(又稱鯊烯合酶抑制劑)；?；?輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑，包括但不限于，甲亞油酰胺(melinamide)；普羅布考(probucol)；煙酸及其鹽；煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑，包括但不限于，β-谷甾醇或依澤替米貝(ezetimibe)；膽汁酸螯合劑陰離子交換樹脂，包括但不限于消膽胺，考來替泊(colestipol)，colesevelam或交聯(lián)葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；LDL受體誘導(dǎo)劑；貝特(fibrates)，包括但不限于，降甾醇酸，苯扎貝特(bezafibrate)，非諾貝特(fenofibrate)和吉非貝齊(gemfibrozil)；維生素B6(又稱吡哆醇)及其可藥用鹽，諸如HCl鹽；維生素B12(又稱氰鈷胺素)；維生素B3(又稱煙酸和煙酰胺，同上)；抗氧化維生素，包括但不限于，維生素C和E和β胡蘿卜素；β阻斷劑(blockers)；血管收縮素II受體(AT1)拮抗劑；血管收縮素-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，腎素抑制劑；血小板凝集抑制劑，包括但不限于，纖維蛋白原受體拮抗劑，即，糖蛋白IIb/IIIa纖維蛋白原受體拮抗劑；激素，包括但不限于，雌激素；胰島素；離子交換樹脂；歐米伽-3油；苯氟雷司(benfluorex)；二十六烷五烯酸乙酯(ethylicosapentate)；和安氯地平(amlodipine)。輔助性療法還可包括增加鍛煉，手術(shù)，和飲食變化(例如，向低膽固醇飲食改變)。有些草藥治療也可有效用于組合制劑和協(xié)同療法中，以治療高脂血癥，例如，姜黃色素，gugulipid，大蒜，維生素E，大豆，可溶性纖維，魚油，綠茶，肉堿，鉻，輔酶Q10，抗氧化維生素，葡萄籽提取物，泛酸(pantothine)，紅酵母米(red yeast rice)，和蜂王漿。
本發(fā)明的上述目的和其他目的，特征，方面和優(yōu)點(diǎn)從下列詳細(xì)說明中變成一目了然。
附圖簡(jiǎn)述

圖1為L(zhǎng)DL受體基因的啟動(dòng)子區(qū)。三個(gè)直接重復(fù)序列和兩個(gè)TATA-樣序列與啟動(dòng)子區(qū)一起被鑒定。甾醇的順式元件位于重復(fù)序列2上，而細(xì)胞因子OM的調(diào)節(jié)元件(SIRE)與TATA-樣序列重疊。
圖2為胞內(nèi)調(diào)節(jié)LDL受體基因表達(dá)，包括通過黃連素調(diào)節(jié)的示意圖。
圖3A和B為人肝臟BEL-7402細(xì)胞中LDLR mRNA水平在用黃連素(A)或黃連素硫酸鹽(B)處理后24小時(shí)的定量RT-PCR。
圖4利用流式細(xì)胞儀對(duì)在BEL-7402細(xì)胞表面上表達(dá)的LDLR的蛋白濃度在用15μg/ml黃連素處理后24小時(shí)的測(cè)量。
圖5 A-C為倉(cāng)鼠中血清膽固醇(A)和LDL(B)在用黃連素B處理后的降低以及LDL的降低作為時(shí)間函數(shù)(C)的圖表。
圖6描述在用黃連素最后處理后4小時(shí)處死的倉(cāng)鼠中通過定量實(shí)時(shí)RT-PCR(A)和Western印跡(B)測(cè)量的總LDLR mRNA和蛋白提取物的濃度。
圖7的Western印跡顯示利用針對(duì)SREBP2的單克隆抗體，Hep G2細(xì)胞中前體(P)和成熟(M)形式的SREBP2的濃度。
圖8(A)為Northern印跡，顯示在或用洛伐他汀(Lov)單獨(dú)或與黃連素(BBR)組合處理24小時(shí)的HepG2細(xì)胞中LDLR表達(dá)和(B)為同樣細(xì)胞的實(shí)時(shí)RT-PCR圖表。
圖9的圖表顯示在GW707和抑瘤素(oncostatin) M存在下LDLR啟動(dòng)子活性的增加。
圖10(A)為Northern印跡，顯示在不同濃度的放線菌素D存在下用黃連素處理的HepG2細(xì)胞中LDLR mRNA的濃度，和(B)標(biāo)準(zhǔn)化LDLR mRNA信號(hào)以剩余LDLR mRNA百分比繪圖。
圖11為L(zhǎng)DLR mRNA 3’UTR和嵌合Luc-LDLR 3’UTR構(gòu)建體的示意圖。
圖12為Northern印跡分析(A)對(duì)照細(xì)胞和(B)用黃連素或二甲亞砜作為對(duì)照處理的細(xì)胞中的Luc-LDLR融合mRNA。
圖13為ARE和UCAU基序(B)缺失的構(gòu)建體的示意圖，以及圖表闡述通過實(shí)時(shí)RT-PCR分析確定的wt pLuc/UTR-2和缺失構(gòu)建體對(duì)黃連素處理的反應(yīng)。
圖14為收集自未處理或處理以5μg/ml劑量的黃連素所示不同時(shí)間的(A)Bel-7402細(xì)胞或(B)Hep G2細(xì)胞的細(xì)胞蛋白的Western印跡，以及(C)為以所示濃度處理1小時(shí)的HepG2細(xì)胞的Western印跡。
發(fā)明示例性實(shí)施方案詳述 本發(fā)明提供用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物對(duì)象，包括個(gè)體和體外，離體和體內(nèi)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，組織和器官高脂血癥和高膽固醇的新型方法和組合物。在多種不同的實(shí)施方案中，所述方法和組合物有效用于預(yù)防或治療由高脂血癥和高膽固醇引起的疾病，包括心血管病。如本發(fā)明所用，術(shù)語(yǔ)“心血管病”意在包括各種癥狀，不適和/或疾病，包括動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，心肌梗塞，高血壓，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥和黃瘤，以及所有常規(guī)靶向的起因于上述疾病和不適或與上述疾病和不適相關(guān)的癥狀。
在此提供的降脂制劑和方法，包括降膽固醇制劑和方法，采用如上所述的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，包括其所有活性可藥用化合物以及各種不同的可預(yù)見并容易提供的這些化合物的復(fù)合體，衍生物，鹽，溶劑化物，異構(gòu)體，對(duì)映體，多晶型，和前藥及其組合，作為新型降脂劑。本發(fā)明所用的示例性化合物作為說明性實(shí)施方案，包括黃連素硫酸鹽，黃連素氯化物，黃連素鹽酸鹽，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。
在所述制劑和方法中，在此公開的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物有效用于治療哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥和高膽固醇水平，所述對(duì)象患有高脂血癥和/或高膽固醇和與高脂血癥和高膽固醇相關(guān)的不適，包括心血管病，諸如，但不限于，動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，高血壓，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥和黃瘤。
廣泛的哺乳動(dòng)物對(duì)象，包括人對(duì)象，適于利用本發(fā)明的制劑和方法進(jìn)行治療。這些對(duì)象包括，但不限于，呈現(xiàn)有高脂血癥或高膽固醇水平或由高脂血癥加重或觸發(fā)的疾病的人和其他哺乳動(dòng)物對(duì)象，所述疾病諸如心血管病，包括動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，間歇性跛行，高血壓，異常脂血癥，餐后脂血癥和黃瘤。
在本發(fā)明方法和組合物中，一種或多種在此公開的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物作為有效用于治療高脂血癥和/或相關(guān)紊亂的抗脂血癥劑或降膽固醇劑，被有效配成制劑或給藥。在示例性實(shí)施方案中，為舉例說明之目的，黃連素氯化物單獨(dú)或與一種或多種輔助性治療劑組合，在藥物制劑和治療方法中經(jīng)證明是抗高脂血癥有效劑。本發(fā)明公開內(nèi)容進(jìn)一步以天然或合成化合物的形式提供額外的可藥用黃連素化合物和黃連素相關(guān)和衍生化合物，包括在此公開的化合物的復(fù)合體，衍生物，鹽，溶劑化物，異構(gòu)體，對(duì)映體，多晶型，和前藥及其組合，它們?cè)诒景l(fā)明方法和組合物中有效作為降脂治療劑。
高脂血癥是血清脂質(zhì)在血流中異常增加。一般被分類成原發(fā)性高脂血癥，由遺傳缺陷引起；或繼發(fā)性高脂血癥，由各種不同的病態(tài)，藥物和/或飲食因素引起。高脂血癥也可產(chǎn)生自高脂血癥原發(fā)性和繼發(fā)性誘因的組合。本發(fā)明組合物和方法在治療所有類型的高脂血癥，不管其原因如何，皆是有效的。
高脂血癥和高膽固醇水平的一個(gè)原因在于一種或多種LDL調(diào)節(jié)機(jī)制或途徑失靈。血漿中的LDL濃度部分受到LDL受體的調(diào)節(jié)，該受體從血流中捕獲LDL顆粒，并吸引它們進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，如果太多就從血流中清除它們，而如果需要更多LDL則釋放它們。LDL受體基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)通過甾醇調(diào)節(jié)元件-結(jié)合蛋白途徑(SREBP)而得以控制。膽汁酸螯合劑，膽固醇生物合成抑制劑，和膽固醇吸收抑制劑都影響SREBP途徑，并隨后上調(diào)LDL受體表達(dá)。他汀完全抑制3-羥基-3-甲基-戊二酰-CoA還原酶(HMG-CoA還原酶)和阻斷肝臟中的膽固醇生物合成。激素，細(xì)胞因子，生長(zhǎng)因子和第二信使也調(diào)節(jié)LDL受體基因的轉(zhuǎn)錄，正如下表1所概述。LDL受體基因的轉(zhuǎn)錄后控制還是藥物介入的靶。本發(fā)明中已確定，黃連素能夠通過肝細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄后和甾醇獨(dú)立機(jī)制而上調(diào)LDL受體表達(dá)(圖2)。
表1.通過不同試劑上調(diào)LDL受體基因表達(dá) *c/EBPCCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白；Egr1早生長(zhǎng)反應(yīng)基因1；ERK胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶；IL白介素；LDL低密度脂蛋白；OM抑瘤素M；PKC蛋白激酶C；PMA佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯；SIRE甾醇-獨(dú)立的調(diào)節(jié)元件；SRE甾醇調(diào)節(jié)元件；SREBP甾醇調(diào)節(jié)元件-結(jié)合蛋白；TNF腫瘤壞死因子；UTR未翻譯區(qū)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，表1鑒定的上述試劑分別具有調(diào)節(jié)LDL受體表達(dá)活性，它們與在此描述的黃連素化合物及黃連素相關(guān)和衍生化合物組合在如下文詳述的各種不同組合制劑和協(xié)同給藥方法中是有益的。
人LDL受體結(jié)構(gòu)基因位于染色體19的短臂。該基因跨越近45千堿基(kb)，并由18個(gè)外顯子和17個(gè)內(nèi)含子組成，每個(gè)外顯子編碼不同蛋白結(jié)構(gòu)域。(Lindgren et al.，PNAS 828567-8571(1985))。啟動(dòng)子位于5’側(cè)翼區(qū)，其中大多數(shù)順式作用的DNA元件發(fā)現(xiàn)介于堿基對(duì)(bp)-58和-234中間，起始甲硫氨酸密碼子A定為+1。啟動(dòng)子區(qū)跨越177bp，包括三個(gè)不完全直接重復(fù)序列(每個(gè)重復(fù)序列為16bp)，兩個(gè)TATA-樣序列，和數(shù)個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，它們?nèi)繉?duì)基因表達(dá)和調(diào)節(jié)是必需的(圖1)(Südhoff et al.，Science 228815-822(1987))。重復(fù)序列2含有10bpDNA甾醇調(diào)節(jié)元件(SRE)(圖1，Smith et al.，J.Biol.Chem2652306-2310(1990))，其控制LDL調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。人LDL受體mRNA的序列長(zhǎng)度為5.3kb，含有異乎尋常的2.5kb長(zhǎng)3’未翻譯區(qū)(UTR)(Yamamoto，Cell 3927-38(1984))。在3’UTR的5’近區(qū)有三個(gè)富含AU的元件(AREs)，并在其3’遠(yuǎn)區(qū)有三個(gè)拷貝的Alu-樣重復(fù)序列。這些結(jié)構(gòu)在LDL受體mRNA的穩(wěn)定性上起關(guān)鍵作用，該mRNA在Hep G2細(xì)胞中具有約45分鐘組成型短的半衰期，并用作轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)LDL受體基因表達(dá)的順式作用元件(Yamamoto et al.，Cell 3927-38(1984)和Wilsonet al.，J.Lipid Res.391025-1032(1998))。
甾醇調(diào)節(jié)元件-結(jié)合蛋白(SREBP)為轉(zhuǎn)錄因子，屬于堿性-螺旋-環(huán)-螺旋-亮氨酸拉鏈(bHLH-Zip)家族(Yokoyama et al.，Cell75187-197(1993))。它們結(jié)合至甾醇調(diào)節(jié)元件(SRE)，該元件不僅存在于LDL受體基因的啟動(dòng)子中，而且存在于為參與膽固醇或脂肪酸生物合成的酶編碼的其他基因，諸如HMG-CoA還原酶基因和乙酰基輔酶A合成酶基因的啟動(dòng)子中(Rawson et al.，Mol.Cell.Biol.4631-640(2003))。LDL受體基因的大激活子為SREBP-2(Horton，et al.，J.Clin.Invest.1091125-1131(2002)。
當(dāng)膽固醇或其衍生物在細(xì)胞中富余時(shí)，SREBP途徑受到抑制，而LDL受體基因或脂質(zhì)合成所需的其他基因的轉(zhuǎn)錄被關(guān)閉。富余膽固醇直接結(jié)合至SREB切割-活化蛋白(SCAP)的甾醇敏感區(qū)(SSD)，引起構(gòu)型變化，使得SCAP結(jié)合至一對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白命名的胰島素-誘導(dǎo)基因(Insig)1和2，然后形成SREBP/SCAP/Insig三元復(fù)合體(圖2)(Yanget al.，Cell 110489-500(2002))。該復(fù)合體在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中誘捕SREBP/SCAP，以致SREBPs不能夠到達(dá)切割用高爾基體，由此LDLR的表達(dá)水平降低。結(jié)果，膽固醇的吸收和合成被抑制，以及細(xì)胞達(dá)到膽固醇穩(wěn)態(tài)(Yang et al.，Cell 1104489-500(2002))。
當(dāng)甾醇缺乏時(shí)，SCAP不與Insig蛋白相互作用。相反，SREBP/SCAP復(fù)合體自由離開內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，并進(jìn)入高爾基體(Espenshade et al.，PNAS9911694-11699(2002)。在抵達(dá)高爾基體后，SREBP前體的轉(zhuǎn)錄活性區(qū)通過位于高爾基膜中的兩種蛋白酶兩次連續(xù)蛋白水解切割而釋放，同時(shí)SCAP返回內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(圖2)(Brown et al.，PNAS 9611041-11048(1999)和Nohturfft et al.，PNAS 9611235-11240(1999)。SREBP前體的切割導(dǎo)致含有bHLH-拉鏈結(jié)構(gòu)域的片段的釋放；所述片段稱作核SREBP(nSREBP)，或成熟形式的SREBP。nSREBP進(jìn)入核，并激活LDLR的轉(zhuǎn)錄(Brown et al.，PNAS 9611041-11048(1999)。結(jié)果，細(xì)胞吸收更多的含膽固醇脂蛋白，并增加膽固醇生產(chǎn)達(dá)到膽固醇穩(wěn)態(tài)的新水平。nSREBP是不穩(wěn)定的，并被蛋白體多遍在化和快速降解，預(yù)計(jì)半衰期為3小時(shí)(Hirano，et al.，J.Biol.Chem.27636431-36437(2001))。
LDL受體表達(dá)可被因子調(diào)節(jié)，所述因子諸如激素，包括動(dòng)脈保護(hù)作用的雌激素和三碘甲腺氨酸；胰島素和數(shù)個(gè)細(xì)胞因子，包括腫瘤壞死因子(TNF)α，白介素(IL)1，IL-6和抑瘤素M(OM)，所有因子激活LDL受體基因在肝細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄(Stopeck et al.，J.Biol.Chem.26817489-17494(1993))(表1)。只有當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)在無甾醇培養(yǎng)基中時(shí)，TNF-α和IL-1才能夠調(diào)節(jié)LDL受體基因轉(zhuǎn)錄，而它們的誘導(dǎo)作用在加入甾醇或LDL后被阻遏(Stopecket al.，J.Biol.Chem.26817489-17494(1993))。OM或IL-6以甾醇-獨(dú)立方式上調(diào)LDL受體基因表達(dá)，類似于胰島素和某些生長(zhǎng)因子(Gierens et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.201777-1783(2000))。通過補(bǔ)充轉(zhuǎn)錄因子早生長(zhǎng)反應(yīng)基因1(Egr1)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(c/EBPβ)，結(jié)合至稱作甾醇-獨(dú)立的調(diào)節(jié)元件(SIRE)的DNA基序，OM已顯示增加LDL受體基因轉(zhuǎn)錄，SIRE與LDL受體基因啟動(dòng)子區(qū)中的TATA-樣序列重疊(圖1)，而IL-6需要SRE和重復(fù)序列3Sp1結(jié)合位點(diǎn)，用于介導(dǎo)其轉(zhuǎn)錄活化作用因子(Gierens et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.201777-1783(2000))。
生長(zhǎng)因子包括血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)，EGF和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)，也上調(diào)LDL受體基因表達(dá)(Basheeruddin et al.，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.151248-1254(1995))。生長(zhǎng)因子對(duì)LDL受體基因啟動(dòng)子的刺激作用需要SRE和Sp1結(jié)合位點(diǎn)作為順式作用元件，并與ERK介導(dǎo)的磷酸化作用和SREBP的活化相關(guān)，因?yàn)樯L(zhǎng)因子有效激活該信號(hào)途徑，就象胰島素一樣(Kotzka et al.，J.Lipid.Res.4199-108(2000))。第二信使類似物佛波醇酯也調(diào)節(jié)LDL受體基因表達(dá)。
上述胞外刺激物似乎需要活化ERK信號(hào)級(jí)聯(lián)。阻斷ERK途徑終止其調(diào)節(jié)LDL受體基因表達(dá)的能力(Kumar et al.，J.Biol.Chem.2755214-4221(1998)。ERK屬于有絲分裂素激活的蛋白激酶(MAPK)亞家族，通過連續(xù)磷酸化作用激活對(duì)胞外刺激物結(jié)合至細(xì)胞表面上的受體而言是次要的。這些受體或具有固有酪氨酸激酶活性(象生長(zhǎng)因子受體和胰島素受體一樣)，或偶聯(lián)至另一蛋白-酪氨酸激酶(象細(xì)胞因子的受體一樣)(Robinson，Curr Opin.Cell.Biol.9180-186(1997)。活化后，ERK使眾多細(xì)胞質(zhì)或核蛋白因子磷酸化和活化，并介導(dǎo)多生物反應(yīng)，包括那些控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的反應(yīng)。但是，ERK途徑如何連接至LDL受體基因的啟動(dòng)子并通過不同機(jī)制增加其轉(zhuǎn)錄先前尚未加以闡明。在本發(fā)明中，正如下文實(shí)施例XI所述，經(jīng)確定，黃連素快速激活ERK，和ERK活化動(dòng)力學(xué)先于由黃連素上調(diào)LDLR表達(dá)。ERK活化在黃連素穩(wěn)定LDLR mRNA中也經(jīng)確定是重要的。
如下文實(shí)施例所述，黃連素及其類似物行駛轉(zhuǎn)錄后控制LDL受體，如圖2舉例說明。黃連素為廣泛分布于9種植物家族中的四元生物堿，具有式II化合物的結(jié)構(gòu)。

式II 黃連素可在下列植物中找到Hydrastis canadensis(白毛茛)，Coptischinensis(黃連或goldenthread)，Berberis aquifolium(俄勒岡葡萄)，Berberis vulgaris(小檗)，Berberis aristata(姜黃樹)，Chinese Isatis，Mahonia swaseyi，Yerba mansa(Anemopsis californica)和Phellodendronamurense。來自這些和其他含黃連素草本植物源的產(chǎn)物包括其任何制品或提取物，預(yù)期作為本發(fā)明包含黃連素(或黃連素類似物，相關(guān)化合物和/或衍生物)的有用組合物。本發(fā)明有用的黃連素化合物及黃連素相關(guān)和衍生化合物典型地具有式I所示的結(jié)構(gòu)，盡管功能上等同的類似物，復(fù)合體，共軛物，和這類化合物的衍生物在本發(fā)明至少某些方面范圍內(nèi)也可被本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識(shí)。

式I 本發(fā)明有用的式I的黃連素化合物及黃連素相關(guān)和衍生化合物還典型地具有結(jié)構(gòu)，其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13選自(各自獨(dú)立地，和以任何組合生成所述的活性化合物)鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；轷Ｑ趸?，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被?，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，或雜環(huán)基。
在更詳細(xì)的實(shí)施方案中，將選擇對(duì)上述式I的說明性結(jié)構(gòu)修飾，以提供有用的候選化合物，用于治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物高脂血癥，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基(例如，取代選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基)；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基(例如，取代選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基)。本發(fā)明提供用于本發(fā)明組合物和方法中的額外候選化合物，其中式I所示的R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，和/或R12基團(tuán)分別被任選(獨(dú)立地，共同地，和以任何組合生成所述的活性化合物)取代，如下段落中所述和限定。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指溴、氯、氟或碘。在一個(gè)實(shí)施方案中，鹵素是氟。在另一實(shí)施方案中，R9，R10，R11，R12和/或R13可獨(dú)立地是氯或溴。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“羥基”是指-OH或--O-。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“烯烴”是指含有碳-碳雙鍵的不飽和烴。這種烯烴基團(tuán)的例子包括乙烯，丙烯等。在一個(gè)實(shí)施方案中，R2和/或R3可獨(dú)立地是亞甲基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指直鏈或支鏈脂肪族基團(tuán)，含有1-20個(gè)碳原子，優(yōu)選1-7個(gè)碳原子和最優(yōu)選1-6個(gè)碳原子。該定義也適用于烷氧基，烷?；头纪榛械耐榛糠?。在一個(gè)實(shí)施方案中，R1，R2，R3，R4，R8和/或R13可獨(dú)立地是甲基或乙基。在另一實(shí)施方案中，R8和/或R13可獨(dú)立地是n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1二methyleledhyl，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2-二甲基丙基，3-甲基丁基，m-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1-2-二甲基丁基，1，3-二甲基或1-甲基-2乙基丙基。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”包括取代和未取代的共價(jià)連接至氧原子的烷基，烯基，和炔基。在一個(gè)實(shí)施方案中，烷氧基含有1-6個(gè)碳原子。烷氧基的實(shí)施方案包括，但不限于甲氧基，乙氧基，異丙基氧基，丙氧基，丁氧基，和戊氧基。在進(jìn)一步實(shí)施方案中，R9，R10，R11，和/或R12可獨(dú)立地是甲氧基或乙氧基。在另一實(shí)施方案中，R1是甲氧基。取代烷氧基的實(shí)施方案包括鹵化烷氧基。在進(jìn)一步實(shí)施方案中，烷氧基可取代以基團(tuán)，諸如烯基，炔基，鹵素，羥基，烷基羰基氧基，芳基羰基氧基，烷氧基羰基氧基，芳基氧基羰基氧基，羧酸酯，烷基羰基，芳基羰基，烷氧基羰基，氨基羰基，烷基氨基羰基，二烷基氨基羰基，烷基硫代羰基，烷氧基，磷酸酯，phosphonato，phosphinato，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，和烷基芳基氨基)，?；被?包括烷基羰基氨基，芳基羰基氨基，甲氨酰和脲基)，脒基，亞氨基，巰基，硫烷基，硫芳基，硫代羧酸酯，硫酸酯，烷基亞磺酰，sulfonato，氨磺酰，亞磺酰氨基，硝基，三氟甲基，氰基，疊氮，雜環(huán)基，烷基芳基，或芳基或雜芳基部分。示例性鹵素取代的烷氧基包括，但不限于氟甲氧基，二氟甲氧基，三氟甲氧基，氯甲氧基，二氯甲氧基，和三氯甲氧基。在一個(gè)實(shí)施方案中，R1，R4，R9，R10，R11和/或R12可獨(dú)立地是羥基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“硝基”單獨(dú)或組合是指-NO2基團(tuán)。
如在此所用的“氨基”是指-NRR′，其中R和R′可獨(dú)立地是氫，烷基，芳基，烷氧基，或雜芳基。如在此所用的術(shù)語(yǔ)“氨基烷基”與“氨基”相比代表更詳細(xì)的選擇，并且是指-NRR′，其中R和R′可獨(dú)立地是氫或(C1-C4)烷基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“三氟甲基”是指-CF3。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“三氟甲氧基”是指-OCF3。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指飽和環(huán)烴環(huán)體系，含有3-7個(gè)可任選被取代的碳原子。示例性實(shí)施方案包括，但不限于，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。在某些實(shí)施方案中，環(huán)烷基是環(huán)丙基。在另一實(shí)施方案中，(環(huán)烷基)烷基的環(huán)部分含有3-7個(gè)碳原子，而其烷基部分含有1-4個(gè)碳原子。在某些實(shí)施方案中，(環(huán)烷基)烷基是環(huán)丙基甲基。烷基任選取代以1-3個(gè)選自鹵素，羥基和氨基的取代基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“烷?；焙汀巴轷Ｑ趸备髯允侵?，-C(O)-烷基和-O-C(O)-烷基，分別任選含有2-5個(gè)碳原子。烷?；屯轷Ｑ趸木唧w實(shí)施方案分別是乙?；鸵阴Ｑ趸?。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“芳基”是指環(huán)部分具有6-12個(gè)碳原子的單環(huán)或二環(huán)芳香族烴基，例如，苯基，萘基，聯(lián)苯基，和二苯基，各自可取代以，例如，1-4個(gè)取代基，諸如烷基；如上所定義的取代烷基，鹵素，三氟甲基，三氟甲氧基，羥基，烷氧基，環(huán)烷基氧基，烷?；?，烷酰氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，硝基，氰基，羧基，羧基烷基，氨甲酰，甲氨酰和芳基氧基。本發(fā)明芳基的具體實(shí)施方案包括苯基，取代苯基，萘基，聯(lián)苯基，和二苯基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“芳酰基”單獨(dú)或組合是指衍生自芳香族羧酸，諸如任選取代的苯甲酸或萘甲酸(naphthoic acids)的芳基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“腈”或“氰基”是指-CN。
術(shù)語(yǔ)“二烷基氨基”是指具有兩個(gè)相同或不同連接烷基的氨基。
術(shù)語(yǔ)“烯基”是指具有1-3個(gè)雙鍵、2-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基。優(yōu)選的實(shí)施方案包括乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，1-甲基亞乙基，1-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，2-甲基-2-丙烯基，1-戊烯基，2-戊烯基，4-戊烯基，3-甲基-2-丁烯基，1-己烯基，2-己烯基，1-庚烯基，2-庚烯基，1-辛烯基，2-辛烯基，1，3-辛二烯基，2-壬烯基，1，3-壬二烯基，2-癸烯基等。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“炔基”是指具有1-3個(gè)三鍵、2-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈炔基。示例性炔基包括，但不限于，乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，3-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基，4-戊炔基，1-辛炔基，6-甲基-1-庚炔基，和2-癸炔基。
術(shù)語(yǔ)“羥基烷基”單獨(dú)或組合是指如前定義的烷基，其中一個(gè)或數(shù)個(gè)氫原子，優(yōu)選一個(gè)氫原子已被羥基所替換。例子包括羥甲基，羥乙基和2-羥乙基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“氨基烷基”是指-NRR′基，其中R和R′可獨(dú)立地是氫或(C1-C6)烷基。
術(shù)語(yǔ)“烷基氨基烷基”是指經(jīng)由烷基連接的烷基氨基(即，具有通式結(jié)構(gòu)--烷基-NH-烷基或--烷基-N(烷基)(烷基))的基團(tuán)。這種基團(tuán)包括，但不限于單和二-(C1-C8烷基)氨基C1-C8烷基，其中各個(gè)烷基可以相同或不同。
術(shù)語(yǔ)“二烷基氨基烷基”是指連接至烷基的烷基氨基。例子包括，但不限于N，N-二甲基氨基甲基，N，N-二甲基氨基乙基N，N-二甲基氨基丙基等。術(shù)語(yǔ)二烷基氨基烷基還包括其中橋連烷基部分被任選取代的基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”是指以一個(gè)或多個(gè)鹵代基團(tuán)取代的烷基，例如，氯甲基，2-溴乙基，3-碘丙基，三氟甲基，全氟丙基，8-氯壬基等。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“羧基烷基”是指取代基--R′-COOH，其中R′是亞烷基；和碳烷氧基烷基是指--R′-COOR，其中R′和R分別是亞烷基和烷基。在某些實(shí)施方案中，烷基是指1-6個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基，諸如甲基，乙基，n-丙基，異丙基，n-丁基，t-丁基，n-戊基，2-甲基戊基，n-己基等。亞烷基與烷基相同，除基團(tuán)是二價(jià)之外。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基烷基”是指取代以烷氧基的亞烷基。例如，甲氧基乙基[CH3OCH2CH2--]和乙氧基甲基(CH3CH2OCH2--)皆為C3烷氧基烷基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“羧基”代表式-COOH的基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“烷?；被笔侵负谢鶊F(tuán)--C(O)--接著--N(H)--的烷基，烯基或炔基，例如乙?；被?，丙酰基氨基和丁?；被?。
術(shù)語(yǔ)“羰基氨基”是指基團(tuán)--NR--CO--CH2--R′，其中R和R′可以獨(dú)立地選自氫或(C1-C4)烷基。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“甲氨?！笔侵?-O--C(O)NH2。
如在此所用的術(shù)語(yǔ)“氨甲?！笔侵敢还倌軋F(tuán)，其中氮原子直接鍵合至羰基，即，如在--NRC(＝O)R′或--C(＝O)NRR′中，其中R和R′為氫，烷基，取代的烷基，烯基，取代的烯基，烷氧基，環(huán)烷基，芳基，雜環(huán)，或雜芳基。
術(shù)語(yǔ)“烷基磺酰氨基”是指基團(tuán)--NHS(O)2Ra，其中Ra為如上定義的烷基。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”是指任選取代的不飽和，部分飽和，或完全飽和的芳香族或非芳香族環(huán)基，在至少一個(gè)含碳原子環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子的4-7元單環(huán)，或7-11元二環(huán)體系。雜環(huán)體系上的取代基可選自上文對(duì)芳基所述的那些。含雜原子的雜環(huán)基中的各環(huán)可具有選自氮原子，氧原子和硫原子的1，2或3個(gè)雜原子。給定雜環(huán)中的多個(gè)雜原子可以相同或不同。
在此表示的所有數(shù)值范圍包括在所示范圍內(nèi)。因此，R范圍0-4被理解包括1，2，3和4的數(shù)值。
黃連素氯化物為本發(fā)明方法和組合物中所用的一種示例形式的黃連素，具有下列式III結(jié)構(gòu)
式III 盡管黃連素及相關(guān)和衍生化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何方法生成，用于本發(fā)明的示例性化合物，例如也可根據(jù)下文所述的途徑1，2，3，和4生成。這些反應(yīng)和合成路線僅以說明性目的提供，并且應(yīng)理解，縮短、替代和修改的方案，例如涵蓋這些方案的實(shí)質(zhì)要素，或等同物，也預(yù)期落入本發(fā)明范疇內(nèi)。
途徑1
化合物1R1＝H，R2＝F 化合物2R1＝H，R2＝OH 化合物3R1＝OH，R2＝OCH3 途徑2
化合物1R1＝CH3，R2＝H，R3＝CH3 化合物2R1＝OH，R2＝OCH3，R3＝H 化合物3R1＝H，R2＝OCH3， R3＝H 途徑3
R＝CH3，NO2，Cl等 R1＝C1-C5烷基 途徑4
含有式I化合物的降脂組合物，包括本發(fā)明藥物制劑，含有降脂有效量的式I的黃連素化合物，或黃連素相關(guān)或衍生化合物，其有效用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥和高膽固醇。通常，降脂有效量包括降膽固醇有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，包含活性化合物的量在治療性介入的規(guī)定時(shí)期以單或多單位劑型是治療有效的，從而可測(cè)量性緩解對(duì)象高脂血癥或高膽固醇的一種或多種癥狀，和/或緩解對(duì)象心血管病或不適的一種或多種癥狀。在示例性實(shí)施方案中，這些組合物在體內(nèi)治療方法內(nèi)能有效緩解高脂血癥。
本發(fā)明降脂組合物典型地包含降脂有效量或單位劑量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，所述化合物可與一種或多種可藥用載體，賦形劑，媒介，乳化劑，穩(wěn)定劑，防腐劑，緩沖劑，和/或其他可增強(qiáng)穩(wěn)定性，遞送，吸收，半衰期，功效，藥代動(dòng)力學(xué)，和/或藥效學(xué)的添加劑一起配成制劑，減少副作用，或提供其他藥用優(yōu)點(diǎn)。降脂有效量包括降膽固醇有效量的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物(例如，包含有效濃度/量的黃連素，或黃連素選擇的可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，多晶型和/或前藥的單位劑量)取決于臨床和患者具體因素而由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易確定。給哺乳動(dòng)物對(duì)象，包括人施用的活性化合物的合適的有效單位劑量范圍為10-1500mg，20-1000mg，25-750mg，50-500mg，或150-500mg。在某些實(shí)施方案中，抗高脂血癥或低脂血癥有效劑量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物可在狹窄范圍內(nèi)選擇，例如，10-25mg，30-50mg，75-100mg，100-250mg，或250-500mg。這些和其他有效單位劑量可以每天，每周或每月單劑或多劑形式給藥，例如，服藥方案包括每天，每周，或每月給藥1-5劑，或2-3劑。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，10-25mg，30-50mg，75-100mg，100-250mg，或250-500mg的劑量每天給藥一次，兩次，三次，四次或五次。在更詳細(xì)的實(shí)施方案中，50-75mg，100-200mg，250-400mg，或400-600mg的劑量每天給藥一次或兩次。在替代的實(shí)施方案中，劑量可基于體重計(jì)算，并且給藥的量例如為約0.5mg/kg-約100mg/kg/天，1mg/kg-約75mg/kg/天，1mg/kg-約50mg/kg/天，2mg/kg-約50mg/kg/天，2mg/kg-約30mg/kg/天或3mg/kg-約30mg/kg/天。
本發(fā)明包含抗高脂血癥有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物的組合物的遞送量，定時(shí)和方式通常依個(gè)體調(diào)節(jié)，取決于諸如個(gè)體的體重，年齡，性別和狀況，高脂血癥和/或相關(guān)癥狀的嚴(yán)重性，給藥是否是預(yù)防性或治療性等因素，以及依公知的實(shí)現(xiàn)藥物遞送，吸收，藥代動(dòng)力學(xué)，包括半衰期，和功效的其他因素。
本發(fā)明降脂制劑的有效量或多劑量治療方案通常選擇接近對(duì)基本上預(yù)防或緩解對(duì)象高脂血癥和心血管病，和/或?qū)旧项A(yù)防或緩解一種或多種與對(duì)象高脂血癥相關(guān)的癥狀必需和足夠的最小服藥方案。劑量和給藥規(guī)程一般包括在數(shù)天或甚至一周或多周或多年的療程中重復(fù)服藥療法。有效治療法還可包括按每天單或多劑量給藥的預(yù)防劑量，持續(xù)多天，多周，多月或甚至多年的療程。
多種不同的分析和模型系統(tǒng)可容易地采用，以確定本發(fā)明抗高脂血癥治療的治療效力。例如，常規(guī)進(jìn)行血液測(cè)試，以測(cè)量總膽固醇以及甘油三脂，LDL和HDL水平。總膽固醇水平大于200mg/dL的個(gè)體被視為心血管病高風(fēng)險(xiǎn)的邊界線。那些總膽固醇水平大于239mg/dL的個(gè)體被視為處于高風(fēng)險(xiǎn)。LDL水平小于100mg/dL被認(rèn)為最佳。LDL水平130-159mg/dL為高風(fēng)險(xiǎn)邊界線。LDL水平160-189mg/dL處于心血管病高風(fēng)險(xiǎn)，以及那些LDL大于190mg/dL的個(gè)體被視為處于心血管病極高風(fēng)險(xiǎn)。甘油三酯水平小于150mg/dL為正常。水平150-199mg/dL為高邊界線，以及水平200以上被視為個(gè)體處于心血管病高風(fēng)險(xiǎn)。通過標(biāo)準(zhǔn)血液脂質(zhì)分布圖測(cè)試，可確定脂質(zhì)水平。有效量的本發(fā)明組合物可降低高脂水平至少10％，20％，30％，50％或更高，直至75-90％，或95％或更高。有效量也使個(gè)體的脂質(zhì)分布圖移向各個(gè)脂質(zhì)的最佳類別，即，LDL水平從190mg/dl降低至130-159mg/dL內(nèi)或甚至進(jìn)一步降低至100mg/dL以下。有效量可進(jìn)一步降低LDL或甘油三酯水平約10-約70mg/dL，約20-約50mg/dL，約20-約30mg/dL，或約10-約20mg/dL。
個(gè)體還可利用hs-CRP(高靈敏性C-反應(yīng)蛋白)血液測(cè)試加以評(píng)價(jià)。那些hs-CRP結(jié)果小于1.0mg/L的個(gè)體處于心血管病低風(fēng)險(xiǎn)。hs-CRP結(jié)果為約1.0-3.0mg/L的個(gè)體處于心血管病平均風(fēng)險(xiǎn)。那些hs-CRP結(jié)果大于3.0mg/L的個(gè)體處于心血管病高風(fēng)險(xiǎn)。有效量的本發(fā)明組合物會(huì)降低hs-CRP結(jié)果低于3.0mg/L。有效量的本發(fā)明組合物可使hs-CRP結(jié)果降低約0.5-約3.0mg/L，和進(jìn)一步約0.5-約2.0mg/L。
本發(fā)明組合物和方法的有效性也可由心血管病癥狀的降低所證實(shí)，所述心血管病包括呼吸短缺，胸疼，腿痛，疲倦，混亂視力變化，尿血，鼻血，不規(guī)則心跳，失衡或失調(diào)，虛弱，或眩暈。
對(duì)在此描述的各個(gè)所示不適而言，在由對(duì)象高脂血癥，高膽固醇和/或靶向心血管病或不適引起或與之相關(guān)的一種或多種癥狀中，與安慰劑治療或其他合適的對(duì)照對(duì)象相比，測(cè)試對(duì)象會(huì)顯示10％，20％，30％，50％或更大的減少，直至75-90％，或95％或更大的減少。
在本發(fā)明的其他方面，提供了組合的降脂制劑和協(xié)同給藥方法，采用有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)化合物或衍生化合物和一種或多種第二或輔助藥劑，該藥劑與黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物組合配成制劑或協(xié)同給藥，生成組合的多活性劑抗高脂血癥組合物或協(xié)同治療方法。本文中的示例性組合制劑和協(xié)同治療方法采用黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與一種或多種第二抗高脂血癥劑組合，或與一種或多種輔助治療劑組合，所述輔助治療劑在選定的組合制劑或協(xié)同治療法中對(duì)治療或預(yù)防靶向(或相關(guān))疾病，不適和/或癥狀是有益的。對(duì)大多數(shù)本發(fā)明組合制劑和協(xié)同治療方法而言，式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與一種或多種第二或輔助治療劑組合配成制劑或協(xié)同給藥，以生成組合的制劑或協(xié)同治療方法，從而組合有效地或協(xié)同有益地治療對(duì)象高脂血癥和/或一種或多種心血管病癥狀。本文中示例的組合制劑和協(xié)同治療方法采用式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與一種或多種第二或輔助治療劑組合，所述治療劑選自，例如，抗高脂血癥；抗異常血脂劑(antidyslipidemic agents)；血漿HDL-升高劑；抗高膽固醇血癥劑，包括但不限于，膽固醇攝取抑制劑；膽固醇生物合成抑制劑，例如，HMG-CoA還原酶抑制劑(又稱他汀，諸如，洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，羅蘇伐他汀，匹伐他汀，和阿托伐他汀)；HMG-CoA合酶抑制劑；鯊烯環(huán)氧酶抑制劑或鯊烯合成酶抑制劑(又稱鯊烯合酶抑制劑)；酰基-輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑，包括但不限于，甲亞油酰胺；普羅布考；煙酸及其鹽；煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑，包括但不限于，β-谷甾醇或依澤替米貝；膽汁酸螯合劑陰離子交換樹脂，包括但不限于消膽胺，考來替泊，colesevelam或交聯(lián)葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；LDL受體誘導(dǎo)劑；貝特，包括但不限于，降甾醇酸，苯扎貝特，非諾貝特和吉非貝齊；維生素B6(又稱吡哆醇)及其可藥用鹽，諸如HCl鹽；維生素B12(又稱氰鈷胺素)；維生素B3(又稱煙酸和煙酰胺，同上)；抗氧化維生素，包括但不限于，維生素C和E和β胡蘿卜素；β阻斷劑(blockers)；血管收縮素II受體(AT1)拮抗劑；血管收縮素-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，腎素抑制劑；血小板凝集抑制劑，包括但不限于，纖維蛋白原受體拮抗劑，即，糖蛋白IIb/IIIa纖維蛋白原受體拮抗劑；激素，包括但不限于，雌激素；胰島素；離子交換樹脂；歐米伽-3油；苯氟雷司；二十六烷五烯酸乙酯；和安氯地平。輔助性療法還可包括鍛煉增加或變化，手術(shù)，和飲食變化(例如，向低膽固醇和/或增加纖維飲食改變)。如上所述，草藥制劑(例如，固體制劑，液體提取物等)也可有效用于組合制劑和協(xié)同療法中，以降低脂水平。本文中有效組合的草本植物劑包括例如，姜黃色素，抗氧化維生素，gugulipid(來自Commiphora Mukul樹樹脂)，大蒜，維生素E，大豆，可溶性纖維，魚油，綠茶，肉堿，鉻，輔酶Q10，葡萄籽提取物，泛酸，紅酵母米(redyeast rice)，和蜂王漿。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含黃連素和一種或多種具有抗炎或降脂活性的輔助劑的組合降脂制劑。在這類組合制劑中，黃連素和具有降脂活性的輔助劑將以降脂有效量單獨(dú)或組合存在于組合制劑中。在示例性實(shí)施方案中，黃連素和非黃連素降脂劑分別以降脂量(即，以在對(duì)象中獨(dú)自引發(fā)可檢測(cè)的抗高脂血癥反應(yīng)的單一劑量)存在?；蛘?，組合制劑可以亞治療單一劑量包含黃連素和非黃連素劑中的一種或兩種，其中組合制劑包含兩種藥劑，特征在于兩種藥劑的組合劑量，所述劑量共同有效引發(fā)降脂反應(yīng)。因此，黃連素和非黃連素劑中的一種或兩種可以亞治療劑量存在于制劑中，或以協(xié)同給藥規(guī)程給藥，但共同在制劑或方法中時(shí)，它們?cè)趯?duì)象中引發(fā)可檢測(cè)的降脂反應(yīng)。
為了實(shí)施本發(fā)明協(xié)同給藥方法，式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物可以協(xié)同治療規(guī)程與一種或多種在此預(yù)期的第二或輔助治療劑同時(shí)或相繼給藥。因此，在某些實(shí)施方案中，黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與非黃連素降脂劑，或其他任何在此預(yù)期的第二或輔助治療劑，利用單獨(dú)的制劑或如上所述的組合制劑(即，既包含黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物也包含非黃連素治療劑)協(xié)同給藥。該協(xié)同給藥可同時(shí)或以任一次序相繼進(jìn)行，并存在時(shí)間段只有一種或兩種(或全部)活性治療劑單獨(dú)和/或共同發(fā)揮其生物學(xué)活性。所有這些協(xié)同治療方法的區(qū)別在于，黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物施加至少某些降脂活性，與由第二或輔助治療劑提供的補(bǔ)充的降脂或截然不同的臨床反應(yīng)結(jié)合生成有利的臨床反應(yīng)。通常，黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與第二或輔助治療劑的協(xié)同給藥將給對(duì)象帶來改進(jìn)的治療或預(yù)防效果，超出由單獨(dú)給藥黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或第二或輔助治療劑所引發(fā)的治療效果。這種條件預(yù)期直接效果以及間接效果。
在示例性實(shí)施方案中，式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物將與一種或多種第二降脂劑，或其他所示治療劑，(同時(shí)或相繼以組合或單獨(dú)制劑)協(xié)同給藥，所述治療劑，選自例如，膽固醇攝取抑制劑；膽固醇生物合成抑制劑，例如，HMG-CoA還原酶抑制劑(又稱他汀，諸如，洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，羅蘇伐他汀，匹伐他汀，和阿托伐他汀)；HMG-CoA合酶抑制劑；鯊烯環(huán)氧酶抑制劑或鯊烯合成酶抑制劑(又稱鯊烯合酶抑制劑)；酰基-輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑，包括但不限于，甲亞油酰胺；普羅布考；煙酸及其鹽；煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑，包括但不限于，β-谷甾醇或依澤替米貝；膽汁酸螯合劑陰離子交換樹脂，包括但不限于消膽胺，考來替泊，colesevelam或交聯(lián)葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；LDL受體誘導(dǎo)劑；貝特，包括但不限于，降甾醇酸，苯扎貝特，非諾貝特和吉非貝齊；維生素B6(又稱吡哆醇)及其可藥用鹽，諸如HCl鹽；維生素B12(又稱氰鈷胺素)；維生素B3(又稱煙酸和煙酰胺，同上)；抗氧化維生素，包括但不限于，維生素C和E和β胡蘿卜素；β阻斷劑(blockers)；血管收縮素II受體(AT1)拮抗劑；血管收縮素-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，腎素抑制劑；血小板凝集抑制劑，包括但不限于，纖維蛋白原受體拮抗劑，即，糖蛋白IIb/IIIa纖維蛋白原受體拮抗劑；激素，包括但不限于，雌激素；胰島素；離子交換樹脂；歐米伽-3油；苯氟雷司；二十六烷五烯酸乙酯；和安氯地平。輔助性療法還可包括增加鍛煉，手術(shù)，和飲食變化(例如，向低膽固醇飲食改變)。有些草藥治療也可有效用于組合制劑和協(xié)同療法中，以治療高脂血癥，例如，姜黃色素，gugulipid，大蒜，維生素E，大豆，可溶性纖維，魚油，綠茶，肉堿，鉻，輔酶Q10，抗氧化維生素，葡萄籽提取物，泛酸，紅酵母米(red yeast rice)，和蜂王漿。
如上所述，在本發(fā)明預(yù)期的所有實(shí)施方案中，抗高脂血癥和相關(guān)方法和制劑可采用任一形式的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，包括本發(fā)明化合物的可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，多晶型，溶劑化物，水合物，和/或前藥中任一或組合。在示例性本發(fā)明實(shí)施方案中，黃連素以說明性目的用于治療性制劑和方法中。
本發(fā)明藥物組合物可通過任一實(shí)現(xiàn)其所需治療或預(yù)防目的的方式給藥。本發(fā)明組合物的合適的給藥途徑包括，但不限于，口服，頰，鼻，氣溶膠，局部，透皮，粘膜，注射，慢釋，控釋，離子電滲療法，超聲波導(dǎo)入術(shù)(sonophoresis)，并包括其他所有常規(guī)途徑，裝置和方法?？勺⑸浞椒òǎ幌抻?，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)，脊柱內(nèi)，鞘內(nèi)，腦腔內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，皮下和鼻內(nèi)途徑。
本發(fā)明組合物進(jìn)一步包括適于在用特定給藥形式的可藥用載體。本發(fā)明組合物的劑型包括藥物復(fù)合領(lǐng)域認(rèn)可的適于制備上述劑量單位的賦形劑。所述賦形劑包括，不必限于，粘合劑，填料，潤(rùn)滑劑，乳化劑，懸浮劑，甜味劑，調(diào)味劑，防腐劑，緩沖劑，潤(rùn)濕劑，崩解劑，泡騰劑，和其他常規(guī)賦形劑和添加劑。
如果需要，本發(fā)明組合物通過使用緩釋載體，諸如親水緩釋聚合物以控釋形式給藥。本文中示例性控釋劑包括，但不限于，羥丙基甲基纖維素，粘度范圍為約100cps-約100,000cps或其他可生物相容的基質(zhì)，諸如膽固醇。
本發(fā)明組合物通常以口服劑型，任選與載體或其他添加劑組合配制和給藥。藥物制劑技術(shù)常見的合適載體包括，但不限于，微晶纖維素，乳糖，蔗糖，果糖，葡萄糖，右旋糖，或其他糖類，二元磷酸鈣，硫酸鈣，纖維素，甲基纖維素，纖維素衍生物，高嶺土，甘露糖，乳糖醇，麥芽糖醇，木糖醇，山梨糖醇，或其他糖醇，干淀粉，糊精，麥芽糊精，或其他多糖，肌醇，或其混合物。用于本發(fā)明的示例性單位口服劑型包括片劑，其可通過任何常規(guī)制備藥物口服單位劑型的方法制備。口服單位劑型，諸如片劑，可含有一種或多種其他制劑成分，包括但不限于，釋放改性劑，助滑劑(glidants)，壓縮助劑，崩解劑，滑潤(rùn)劑，粘合劑，調(diào)味劑，香味增強(qiáng)劑，甜味劑和/或防腐劑。合適的滑潤(rùn)劑包括硬脂酸，硬脂酸鎂，滑石，硬脂酸鈣，氫化植物油，苯甲酸鈉，亮氨酸carbowax，十二烷基硫酸鎂，膠質(zhì)二氧化硅和單硬脂酸甘油酯。合適的助滑劑包括膠質(zhì)二氧化硅，火成二氧化硅，硅石，滑石，火成硅石，石膏和單硬脂酸甘油酯。可用于包衣的物質(zhì)包括羥丙基纖維素，二氧化鈦，滑石，甜味劑和著色劑。
本發(fā)明的其他組合物可以本領(lǐng)域公知的任一吸入或經(jīng)鼻遞送形式制備和給藥。能夠在患者竇腔或肺泡沉積氣溶膠式純化的黃連素制劑的裝置包括計(jì)量吸入器，霧化器(nebulizer)，干粉發(fā)生器，噴霧器(sprayer)等。為系統(tǒng)性效果適于肺部投藥的方法和組合物在本領(lǐng)域是眾所周知的。其他可能的遞送方法包括通過吸入而肺深部遞送。以例如鼻噴劑或鼻滴劑形式給藥的合適制劑，其中載體為液體，可包括黃連素組合物和其他任何活性或非活性成分的水溶液或油溶液。
本發(fā)明進(jìn)一步組合物和方法為治療高脂血癥提供局部給藥黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。局部組合物可包含式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物以及一種或多種混合在皮膚病學(xué)或粘膜可接受載體的其他活性或非活性組分，其形式包括氣溶膠噴劑，粉劑，皮膚貼劑，粘劑(sticks)，顆粒，霜?jiǎng)鄤?，凝膠，洗劑，糖漿，藥膏，浸漬海綿，棉涂藥器，或作為溶液，或水液體，非水液體，水包油乳液或油包水液體乳液中的懸浮液。這些局部組合物可包含式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，所述化合物溶解或分散于有待混合至該局部組合物或遞送裝置中的部分水或其他溶劑或液體。容易理解的是，經(jīng)皮給藥途徑通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的透皮增強(qiáng)劑而增強(qiáng)。適于此種劑型的制劑摻入常用賦形劑，尤其是用于維持藥物在延長(zhǎng)時(shí)段，例如24小時(shí)內(nèi)吸收的手段，例如，結(jié)構(gòu)或基質(zhì)。經(jīng)皮遞送還可通過超聲波導(dǎo)入術(shù)等技術(shù)而增強(qiáng)。
為靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，皮下或腹膜內(nèi)給藥等腸胃外給藥而設(shè)計(jì)的其他本發(fā)明黃連素組合物，包括水性和非水性滅菌可注射溶液，如其他許多本發(fā)明預(yù)期的組合物一樣，可任選含有抗氧化劑，緩沖劑，抑菌劑和/或致使制劑與哺乳動(dòng)物對(duì)象血液等滲的溶質(zhì)；和包括懸浮劑和/或增稠劑的水性和非水性滅菌懸浮液。制劑可以單位劑量或多劑量容器的方式曾現(xiàn)。本發(fā)明其他組合物和制劑可包含腸胃外給藥后延期釋放的聚合物。腸胃外制劑可以是適于這種給藥的溶液，分散液或乳液。所述藥劑還可配制至用于腸胃外給藥之后延期釋放的聚合物。可藥用制劑和成分通常是無菌或容易滅菌的，生物學(xué)惰性的，和容易給藥的。這種聚合材料對(duì)制藥復(fù)合領(lǐng)域技術(shù)人員而言是眾所周知的。胃腸外制劑通常含有緩沖劑和防腐劑，和藥物和生理可接受的可注射流體，諸如水，生理鹽水，平衡的鹽溶液，水性右旋糖，甘油等。臨時(shí)注射溶液，乳液和懸浮液可制備自前述的無菌粉末，顆粒和片劑。優(yōu)選的單位劑量制劑是那些含有如在此所述的日劑量或單位，日亞劑量，或其合適部分的活性成分。
在更詳細(xì)實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物可包含膠囊化的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，以下列形式遞送例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊，微顆粒，或微球體，例如，分別羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；膠質(zhì)藥物遞送系統(tǒng)(例如，脂質(zhì)體，白蛋白微球體，微乳液，納米顆粒和納米膠囊)或在大乳液內(nèi)。
如上所述，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明方法和組合物可采用可藥用鹽，例如上述黃連素化合物和/或黃連素相關(guān)或衍生化合物的酸加成鹽或堿式鹽?？伤幱眉映甥}的例子包括無機(jī)和有機(jī)酸加成鹽。合適的酸加成鹽形成自形成非毒性鹽的酸，例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，硝酸鹽，磷酸鹽和磷酸氫鹽。其他可藥用鹽包括，但不限于金屬鹽，諸如鈉鹽，鉀鹽，銫鹽等；堿土金屬鹽，諸如鈣鹽，鎂鹽等；有機(jī)胺鹽，諸如三乙胺鹽，吡啶鹽，甲基吡啶鹽，乙醇胺鹽，三乙醇胺鹽，二環(huán)己基胺鹽，N，N’-二芐基乙烯二胺鹽等；有機(jī)酸鹽，諸如乙酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，扁桃酸鹽，乙酸鹽，二氯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，草酸鹽，和甲酸鹽；磺酸鹽，諸如甲磺酸鹽，苯磺酸鹽，和對(duì)甲苯磺酸鹽；和氨基酸鹽，諸如精氨酸鹽，天冬酰胺酸鹽，谷氨酸鹽，酒石酸鹽，和葡糖酸鹽。合適的堿式鹽形成自形成非毒性鹽的堿，例如鋁，鈣，鋰，鎂，鉀，鈉，鋅和二乙醇胺鹽。
為了說明本發(fā)明方法和組合物中黃連素化合物及黃連素相關(guān)和衍生化合物的有用鹽形式的范圍，生成了鹽形式黃連素的示例性集合，并測(cè)試其溶解度(表2)。由此提供的新型黃連素鹽體現(xiàn)本發(fā)明的其他方面，并例證在此有用的黃連素和相關(guān)化合物的廣泛集合。
表2.示例性黃連素鹽 在其他詳細(xì)實(shí)施方案中，本發(fā)明方法和組合物采用式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物的前藥。前藥視為任一共價(jià)結(jié)合的載體，該載體體內(nèi)釋放活性母體藥物。本發(fā)明內(nèi)有用的前藥例子包括帶有羥基烷基或氨基烷基作為取代基的酯或酰胺，并且這些前藥可通過將上述化合物與酐，諸如琥珀酸酐反應(yīng)而制備。
在此公開的發(fā)明還可理解涵蓋利用所述化合物的體內(nèi)代謝產(chǎn)物(或給藥對(duì)象前體化合物之后體內(nèi)生成，或直接以代謝產(chǎn)物本身的形式給藥)而包括式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物的方法和組合物。這種產(chǎn)物例如，主要通過酶法，可產(chǎn)生自給藥化合物的氧化，還原，水解，酰胺化，酯化等。因此，本發(fā)明方法和組合物包括采用由含有下列步驟的方法產(chǎn)生的化合物將式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與哺乳動(dòng)物對(duì)象接觸一段足以生成其代謝產(chǎn)物的時(shí)間。這種產(chǎn)物的鑒定方法通常是制備本發(fā)明的放射性標(biāo)記化合物，以可檢測(cè)劑量將其胃腸外給藥至動(dòng)物，諸如大鼠，小鼠，豚鼠，猴子，或至人，代謝足夠時(shí)間，并從尿液，血液或其他生物樣品中分離其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
在此公開的本發(fā)明還應(yīng)理解涵蓋診斷組合物，用于診斷哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥和/或心血管病或不適的風(fēng)險(xiǎn)值，存在，嚴(yán)重性，或治療標(biāo)記，或用于處理哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥和/或心血管病或不適，包括將標(biāo)記(例如，同位素標(biāo)記，熒光標(biāo)記或其他標(biāo)記以允許利用常規(guī)方法檢測(cè)標(biāo)記化合物)的式I的黃連素素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物接觸處于風(fēng)險(xiǎn)或呈現(xiàn)以一種或多種高脂血癥和/或心血管病癥狀的哺乳動(dòng)物對(duì)象(例如，細(xì)胞，組織，器官，或個(gè)體)，并且其后利用大批任一公知的分析和標(biāo)記/檢測(cè)方法檢測(cè)標(biāo)記化合物的存在，位置，代謝，和/或結(jié)合狀態(tài)(例如，檢測(cè)與參與LDL受體生理學(xué)/代謝的未標(biāo)記結(jié)合伴侶的結(jié)合)。在示例性實(shí)施方案中，式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是同位素標(biāo)記的，以具有不同原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子替換一種或多種原子。可并入本發(fā)明公開的化合物的同位素例子，包括同位素氫，碳，氮，氧，磷，氟和氯，諸如2H，3H，13C，14C，15N，18O，17O，31P，32P，35S，18F，和36Cl。然后，根據(jù)常規(guī)技術(shù)，同位素標(biāo)記的化合物給藥至個(gè)體或其他對(duì)象，隨后如上所述檢測(cè)，生成有用的診斷和/或治療處理數(shù)據(jù)。
實(shí)施例 下述試驗(yàn)證明黃連素化合物及黃連素相關(guān)和衍生化合物作為降膽固醇藥的新型和有效用途，所述藥通過不同于目前低血脂藥，例如他汀所用的機(jī)理，可有效降低血清膽固醇、甘油三酯和LDL。在示例性試驗(yàn)中，來自人肝細(xì)胞瘤衍生的細(xì)胞系的細(xì)胞HepG2以700種分離自中草藥的化合物處理24小時(shí)。然后從細(xì)胞分離RNA，并利用半定量RT-PCR分析確定LDLR mRNA。在測(cè)試的化合物中，黃連素顯示對(duì)LDLR表達(dá)增加最大。處理培養(yǎng)在含有0.5％脂蛋白-貧化的胎牛血清或補(bǔ)充以甾醇和黃連素的血清的培養(yǎng)基中的HepG2細(xì)胞導(dǎo)致LDLRmRNA的表達(dá)呈現(xiàn)時(shí)間依賴性增加。這些和其他發(fā)現(xiàn)在下列實(shí)施例中進(jìn)一步展開和闡述。
實(shí)施例I 黃連素對(duì)高脂血癥中國(guó)倉(cāng)鼠膽固醇，甘油三酯和LDL蛋白水平的影響 處理前兩周，購(gòu)自國(guó)家疫苗和血清研究所(北京，中國(guó))的雌性中國(guó)倉(cāng)鼠被轉(zhuǎn)換成高脂肪和膽固醇飲食(10％豬油，10％蛋黃粉和1％膽固醇)。兩周后，14只倉(cāng)鼠組通過腹膜注射施用10mg/kg/天的黃連素，通過腹膜注射施用20mg/kg/天的黃連素，口服50mg/kg/天，100mg/kg/天的黃連素，或鹽水，歷時(shí)10天。療程之前，之中和之后，禁食4小時(shí)后測(cè)量血清膽固醇，甘油三酯和LDL水平。療程之后4小時(shí)，處死動(dòng)物，并取出其肝臟用于分析。
從表3可見，在所有被處理動(dòng)物中，黃連素降低了膽固醇，甘油三酯和LDL蛋白的水平。10天處理之后，劑量50/mg/kg/天的黃連素減少LDL 26％和劑量100mg/kg/天減少LDL 42％。兩種劑量至第5天觀察到血清LDL的減少，并至第7天變成顯著性(圖5)。
表3黃連素在高脂血癥中國(guó)倉(cāng)鼠中的降脂效果 *P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001(與對(duì)照組比較) 在處理結(jié)束時(shí)，各組三只動(dòng)物被殺死，并通過定量實(shí)時(shí)RT-PCR和Western印跡分析檢查肝臟LDLR mRNA和蛋白表達(dá)。對(duì)實(shí)時(shí)RT-PCR而言，利用ABI Prism 7900-HT序列檢測(cè)系統(tǒng)和通用MasterMix(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA)，通過Superscript II，以隨機(jī)引物對(duì)1μg總RNA在42℃下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄30分鐘。LDLR和GAPD mRNA表達(dá)水平的確定采用人LDLR和GAPD預(yù)開發(fā)的TaqMan分析試劑(Applied Biosystems)。如圖6可見，LDLR mRNA和蛋白水平在所有黃連素處理的倉(cāng)鼠中均以劑量依賴方式得到提升。在以100mg/kg/天的黃連素處理的倉(cāng)鼠肝臟中，mRNA增加3.5倍，而蛋白增加2.6倍。
實(shí)施例II 黃連素在患有高脂血癥的人中的效果 患有高脂血癥的人患者(52名男性和39名女性)被隨機(jī)分成兩組，并以0.5g黃連素鹽酸鹽每天兩次處理(n＝63)，或以安慰劑處理(n＝28)3個(gè)月。3個(gè)月之后，利用標(biāo)準(zhǔn)血脂測(cè)試，測(cè)量禁食血清濃度的膽固醇，甘油三酯，HDL和LDL。肝功和腎功也進(jìn)行測(cè)量。那些以黃連素處理的患者相比那些以安慰劑處理的患者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性降低的膽固醇，甘油三酯和LDL蛋白水平，其中黃連素鹽酸鹽降低膽固醇血清水平18％(P＜0.001)，甘油三酯28％(P＜0.001)和LDL 20％(P＜0.001)。由于有些參與者同時(shí)服用其他藥物可能影響結(jié)果，所述結(jié)果利用僅來自那些黃連素治療之前或之中既未服藥也未特殊飲食的參與者的數(shù)據(jù)進(jìn)行重新分析。從表4可見，那些僅服用黃連素鹽酸鹽的患者的結(jié)果甚至更顯著，其中降低血清水平的膽固醇29％(P＜0.0001)，甘油三酯35％(P＜0.0001)和LDL 25％(P＜0.0001)。所有對(duì)象對(duì)黃連素的耐受性良好，除1名患者之外，未觀察到副作用，該名患者在治療中患有輕度便秘，但在降低劑量至0.25g，每天兩次之后便秘得以緩解。BBR不改變腎功能(通過測(cè)量被治療對(duì)象和安慰劑對(duì)象中的肌酸，血尿素氮，和總膽紅素而確定)，但基本上改進(jìn)了肝功——分別減少丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，和γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶近48％，36％，和41％。安慰劑組對(duì)這些參數(shù)未顯示明顯變化。
表4黃連素在高脂血癥患者中的降脂效果 a膽固醇，甘油三酯，HDL-c，和LDL-c基線的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，治療前在黃連素組和安慰劑組之間沒有顯著差異(p＞0.05)。與治療前組基線相比，***P＜0.0001(匹配的t測(cè)試) 實(shí)施例III 黃連素對(duì)LDLR表達(dá)的影響 Bel-7402細(xì)胞以0，0.5，1，2.5，5，μg/ml的黃連素或2.5，7.5和15μg/ml的黃連素硫酸鹽處理。然后細(xì)胞離心和洗滌，并抽提LDLRmRNA。利用掃描定量RT-PCR測(cè)量LDLR mRNA水平(圖3A和B)。從圖3A和B可見，黃連素和黃連素硫酸鹽處理以劑量依賴方式增加了LDLR mRNA表達(dá)，其中5μg/ml黃連素增加LDLR mRNA表達(dá)2.3倍。黃連素還在BEL-7402細(xì)胞表面增加LDLR蛋白表達(dá)。
以5μg/ml黃連素處理的Bel-7402細(xì)胞用含有EDTA的細(xì)胞去除緩沖液分開，洗滌并以1×106細(xì)胞/ml的密度重懸浮于FACS溶液(含有0.5％BSA和0.02％疊氮鈉的PBS)。然后，細(xì)胞與LDLR的單克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology，Inc.，Santa Cruz，CA)在終稀釋度1∶50下溫育，室溫放置1小時(shí)。接著，細(xì)胞與同位素匹配的非特異性小鼠IgG反應(yīng)作為非特異性著色的對(duì)照。細(xì)胞洗滌并以FITC共軛的小鼠IgG山羊抗體(Santa Cruz Biotechnology，Inc.，Santa Cruz，CA，1∶100稀釋)染色，以及通過FACS(FACSort，Becton Dickinson，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)分析熒光強(qiáng)度。如圖4可見，黃連素增加細(xì)胞表面LDLR蛋白表達(dá)4倍。
上述研究表明，黃連素的降血脂效果通過LDLR表達(dá)增加而介導(dǎo)。
實(shí)施例IV 黃連素和辛伐他汀組合用于降低大鼠血清脂水平 大鼠喂飼高脂肪高膽固醇(HFHC)飲食10天，然后分組，每組7只。大鼠口服給藥黃連素或辛伐他汀，或黃連素和辛伐他汀的組合25天。25天后，測(cè)量血清膽固醇，甘油三酯和LDL-c水平。從表5可見，黃連素治療顯著降低了大鼠膽固醇，甘油三酯和LDL-c水平，并在降低甘油三酯和LDL-c水平方面比辛伐他汀更有效。辛伐他汀和黃連素的組合比單獨(dú)任一種進(jìn)一步降低膽固醇，甘油三酯和LDL-c水平。
表5以黃連素和辛伐他汀在大鼠中的組合治療 25天后，檢查血總膽固醇，甘油三酯和LDL-c水平。表中結(jié)果為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。
實(shí)施例V 黃連素用于增加LDLR mRNA穩(wěn)定性 HepG2細(xì)胞或以黃連素鹽酸鹽或以GW707作為陽(yáng)性對(duì)照培養(yǎng)8小時(shí)。然后收集來自未處理細(xì)胞或以黃連素或GW707處理的細(xì)胞的總細(xì)胞溶解物，并通過Western印跡分析。從圖7可見，GW70基本上增加了成熟形式的SREB-2的量，而黃連素沒有效果。這些數(shù)據(jù)顯示，通過截然不同于他汀所用的機(jī)理，黃連素有效增加LDLR表達(dá)，由此進(jìn)一步表明，該新型藥物及其相關(guān)和衍生化合物會(huì)提供有用的抗高血脂制劑和方法，并使其他公知抗血脂藥的副作用最小化。
實(shí)施例VI 在他汀存在下黃連素的功能 將HepG2細(xì)胞培養(yǎng)在LPDS培養(yǎng)基中，然后未處理，以濃度為0.5和1μM的洛伐他汀與或不與黃連素一起處理24小時(shí)，或單獨(dú)以黃連素處理。從圖8可見，黃連素和洛伐他汀對(duì)LDLR mRNA表達(dá)具有加成刺激作用，該數(shù)據(jù)表明上文所述的新型組合制劑和協(xié)同治療方法的普遍實(shí)用性。
實(shí)施例VII LDLR啟動(dòng)子活性分析 HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染以報(bào)告構(gòu)建體pLDLR234Luc，該構(gòu)建體含有SRE-1基序和甾醇-獨(dú)立的調(diào)節(jié)元件，該元件介導(dǎo)細(xì)胞因子抑瘤素M-誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄LDLR基因。轉(zhuǎn)染后，將細(xì)胞培養(yǎng)在0.5％脂蛋白貧化的胎牛血清(LPDS)或LPDS和膽固醇培養(yǎng)基中，接著以黃連素，GW707或抑瘤素M處理8小時(shí)。如圖9可見，LDLR啟動(dòng)子活性在兩種培養(yǎng)條件下被GW707和抑瘤素M強(qiáng)力提升。黃連素沒有作用，這進(jìn)一步表明該化合物與具有抗高血脂活性的其他公知藥物相比通過不同的LDLR調(diào)節(jié)機(jī)理而操作。
實(shí)施例VIII 黃連素對(duì)LDLR mRNA的穩(wěn)定作用 將HepG2細(xì)胞培養(yǎng)，然后單獨(dú)放置或以黃連素處理15小時(shí)。15小時(shí)后，放線菌素D(5μg/ml)在0，20，40，60，90，120，或150分鐘處添加至細(xì)胞。分離總mRNA，并通過Northern印跡分析LDLR mRNA的量。如圖10可見，黃連素延長(zhǎng)LDLR轉(zhuǎn)錄本的周轉(zhuǎn)率近3倍。與之相反，黃連素并未改變HMG-CoA還原酶的mRNA穩(wěn)定性。
實(shí)施例IX HepG2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染 LDLR 3’UTR的3個(gè)連續(xù)片段被插入細(xì)胞巨化病毒啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Luc質(zhì)粒(pLuc)，位于SV40多腺苷酸化信號(hào)前的Luc編碼序列的3’端。將Luc cDNA插入pcDNA3.1/Zeo(+)中的HindIII和Xba位點(diǎn)而構(gòu)建野生型Luc報(bào)告質(zhì)粒。利用XbaI-尾的引物和pLDLR3作為模板，通過PCR擴(kuò)增LDLR mRNA的2.5kb 3’UTR的不同區(qū)域而完成添加LDLR3/UTR。野生型pLuc和嵌合質(zhì)粒pLuc-UTR-2，UTR-3和UTR-4被轉(zhuǎn)染至HepG2細(xì)胞(圖11)。培養(yǎng)皿中接種的細(xì)胞瞬時(shí)以嵌合質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，細(xì)胞被胰蛋白酶化，并對(duì)于每個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，相等地再接種至兩個(gè)皿中。過夜溫育后，一個(gè)皿以二甲基亞砜作為溶劑對(duì)照進(jìn)行處理，而另一皿以黃連素處理8小時(shí)。為了檢測(cè)Luc-LDLR融合轉(zhuǎn)錄本的存在，利用5’引物L(fēng)uc-2up(5’-GCTGGAGAGCAACTGCARAAGGC-3’)(SEQ ID NO1)和3’引物L(fēng)uc-2lo(5’-GCAGACCAGTAGATCCAGAGG-3’)(SEQ ID NO2)，及pGL3-basic作為模板，進(jìn)行PCR反應(yīng)，以擴(kuò)增Luc編碼區(qū)的550 bp片段。PCR片段標(biāo)記以32P并用于Northern印跡分析，以測(cè)量Luc mRNA和Luc-LDLR 3’UTR嵌合融合體的表達(dá)。從圖12可見，同時(shí)包含UTR-2和UTR-3序列減少了Luc mRNA的表達(dá)水平近3-4倍，顯示在這些組中存在不穩(wěn)定決定簇，而Luc mRNA水平通過與UTR-4融合而僅適度減少。黃連素增加Luc-UTR-2mRNA的水平2.5倍，而不影響LucUTR-3和Luc-UTR-4或野生型的表達(dá)。這表明，黃連素影響雜合Luc-LDLR轉(zhuǎn)錄本的mRNA穩(wěn)定性，以及穩(wěn)定性通過存在于LDLR 3’UTR的5’近區(qū)(nt 2677-3582)的調(diào)節(jié)序列而介導(dǎo)。
實(shí)施例X 確定ARE和UCAU基序在黃連素介導(dǎo)的LDLR mRNA穩(wěn)定性中的作用 為了創(chuàng)建ARE缺失構(gòu)建體，利用pLuc/UTR-2作模板，通過定點(diǎn)突變，在nt 3,384處生成Apa位點(diǎn)，用于缺失ARE3，和在nt 3,334處生成Apa1位點(diǎn)用于缺失ARE2。突變質(zhì)粒以Apa1切割，以去除含ARE的區(qū)域，然后將剩余載體與UTR-2的5’近區(qū)重新連接。為了創(chuàng)建UCAU基序缺失，利用UTR-2作模板，生成兩個(gè)SacII位點(diǎn)，用于內(nèi)缺失nt3.062-3,324。所有構(gòu)建體被測(cè)序，正確的克隆被進(jìn)一步繁殖，以分離質(zhì)粒DNA。將這些構(gòu)建體和黃連素反應(yīng)性野生型構(gòu)建體轉(zhuǎn)染至HepG2細(xì)胞。黃連素對(duì)嵌合Luc轉(zhuǎn)錄本的影響利用定量實(shí)時(shí)RT-PCR分析通過測(cè)量Luc mRNA而確定。缺失ARE3區(qū)導(dǎo)致部分喪失黃連素刺激，而同時(shí)缺失ARE3和ARE2使得構(gòu)建體對(duì)黃連素不反應(yīng)。黃連素對(duì)Luc轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定作用還通過缺失UCAU基序而毀壞(圖13)。
實(shí)施例XI 黃連素對(duì)MEK1-ERK途徑的活化 HepG2或Bel-7402細(xì)胞以黃連素分別處理0.25，0.5，0.75，1，2，8，和24小時(shí)，并利用僅識(shí)別活化(磷酸化)的ERK的抗體，通過western印跡測(cè)試活化ERK的水平。在兩種肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系中，黃連素快速活化ERK，以及ERK活化的動(dòng)力學(xué)先于黃連素上調(diào)LDLR表達(dá)(圖14A和B)。黃連素活化也是劑量依賴的(圖14C)。這些數(shù)據(jù)顯示，ERK途徑的活化是黃連素介導(dǎo)的穩(wěn)定LDLR轉(zhuǎn)錄本的前提事件。
實(shí)施例XII 黃連素的藥代動(dòng)力學(xué) 健康的人志愿者口服給予300mg黃連素。給藥后0.5，1，2，3，4，5，7，12和24小時(shí)采集血樣，并通過HPLC評(píng)估黃連素濃度。由3P87藥代動(dòng)力學(xué)軟件程序(中國(guó)藥理學(xué)協(xié)會(huì)，中國(guó))分析血濃度曲線。利用一個(gè)隔室模型，中值藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)估值(范圍)如下峰時(shí)間T峰化2.37小時(shí)，峰濃度Cmax394.7ηg/ml，消失半衰期T1/22.91小時(shí)，曲線下面積AUC2799.0μg/L h，清除率CL130.5L/h。平均藥物保留時(shí)間為32.63小時(shí)。
在平行動(dòng)物模型研究中，四只犬科動(dòng)物(畢爾格獵犬)對(duì)象口服給予45mg/kg黃連素。給藥后2和3小時(shí)，通過HPLC確定藥物的血清濃度。沒有明顯的檢測(cè)譜峰，暗示濃度低于最低檢測(cè)限10ηg/ml。一條接受280mg/kg的黃連素的狗，其黃連素峰顯示給藥后2小時(shí)濃度為31.4ηg/ml，3小時(shí)濃度為22.6ηg。在黃連素已清除該系統(tǒng)后，同樣的狗給藥700 mg/kg的黃連素，并在給藥后2，3，5，7，9和24小時(shí)采集血樣，濃度分別為21.51，44.89，49.54，36.35，27.83，和16.01ηg/ml。
四只畢爾格獵犬靜脈內(nèi)注射以100mg/kg的黃連素。利用兩個(gè)隔室模型，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)估值如下消失半衰期T1/2B為12.59±8.83小時(shí)。曲線下面積AUC為1979.31±1140.31μg/h.L，血清除率CL為60.70±24.38L/h。
在附加的平行動(dòng)物模型研究中，3H-黃連素靜脈內(nèi)給藥至5只兔子(25MBq/kg)，通過靜脈內(nèi)滴注至四只兔子(46.25Mbq/kg)。在不同時(shí)刻點(diǎn)取出0.1ml血液，并測(cè)量輻射。兩組的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)估值如下T1/2α分別為1.41±0.16h，1.03±0.11h，和T1/2β分別為35.3±1.3h，35.8±2.0h，Vd分別為20±3L/kg和22.1±1.7L/kg。
50mg/kg的黃連素通過胃灌注給藥至六只兔子。給藥后在不同時(shí)刻點(diǎn)采集血清樣品，并使用RP-HPLC測(cè)量藥物濃度。利用3P87藥代動(dòng)力學(xué)軟件程序(中國(guó)藥理學(xué)協(xié)會(huì)，中國(guó))分析血液藥物濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)。通過自動(dòng)擬合，兔子黃連素藥代動(dòng)力學(xué)模型發(fā)現(xiàn)與一個(gè)隔室開放模型匹配。主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下峰時(shí)間T峰0.63±0.25h，峰濃度Cmax92.72±50.89ηg/ml，消失半衰期T1/2β3.11±0.58h，曲線下面積，AUC491.7±295.5μg h/L。結(jié)果顯示，黃連素可被快速吸收達(dá)到有效濃度。
兔子血液蛋白結(jié)合率通過體外分析測(cè)量為38±3％(XD±S，n＝6)。
在另一附加的動(dòng)物模型研究中，小鼠通過尾靜脈注射以3H-黃連素(135LBq/10g)。給藥后5分鐘-2小時(shí)測(cè)量組織輻射，黃連素濃度分布從高到低依次為肺＞肝＞腎＞脾＞心＞腸＞胃＞腦。
在終系列動(dòng)物模型研究中，大鼠被口服給藥3H-黃連素。給藥后48小時(shí)，測(cè)試排泄物中是否存在黃連素?？诜┝恐薪?jīng)測(cè)量有2.7％在尿中，有86％在糞便物中。
大鼠靜脈內(nèi)接受黃連素(9.25MBq/kg)。測(cè)量累積6天的大鼠尿和糞便排泄物中是否存在黃連素。靜脈內(nèi)劑量中有73％的黃連素以代謝和未代謝形式發(fā)現(xiàn)在累積的尿中，有10.9％發(fā)現(xiàn)在糞便物中。
三只大鼠靜脈內(nèi)給予黃連素(9.25MBq/kg)。24小時(shí)后，收集膽囊分泌物，并評(píng)價(jià)是否存在黃連素。在膽囊分泌物中有10.1±0.9％(x±SD，n＝3)的黃連素。
實(shí)施例XIII 黃連素毒性分析 大鼠和小鼠給藥黃連素通過各種不同的技術(shù)，包括口服，皮下注射，腹膜注射和靜脈內(nèi)注射。
在大鼠中，口服劑量為L(zhǎng)D50＞15000mg/kg獲得毒性。通過皮下注射的毒性為L(zhǎng)D50 7970-10690mg/kg。通過腹膜注射的毒性為L(zhǎng)D50＝138.1-146.2mg/kg和通過靜脈內(nèi)注射給藥黃連素時(shí)LD50 46.2-63.3mg/kg。
在小鼠中，口服劑量為L(zhǎng)D50＞29586-4500mg/kg獲得毒性。通過皮下注射的毒性為L(zhǎng)D50 13.9-20mg/kg。通過腹膜注射的毒性為L(zhǎng)D5030-32.2mg/kg，而采用靜脈內(nèi)注射的毒性為L(zhǎng)D50 7.6-10.2mg/kg。
對(duì)長(zhǎng)期毒性確定而言，大鼠口服給藥300mg/kg的黃連素182天。在血液測(cè)試，血液生化，尿分析或組織病理學(xué)方面未發(fā)現(xiàn)異常。
為了評(píng)價(jià)畸型潛力，懷孕小鼠口服給藥日劑量30-480mg/kg的黃連素，開始于懷孕第7天，并連續(xù)7天。大鼠給藥黃連素，開始于懷孕第9天，連續(xù)7天。出生缺陷并不明顯。
實(shí)施例XIV 采用黃連素和洛伐他汀的示例性組合療法 根據(jù)上述教導(dǎo)，采用式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與示例性第二抗血脂癥劑組合的組合藥物療法通過在大鼠模型對(duì)象中使用黃連素和示例性他汀，洛伐他汀而證實(shí)。該研究的步驟符合上述實(shí)施例，結(jié)果提供于下表6中。
表6.黃連素和洛伐他汀在協(xié)同治療方案中的組合抗高血脂癥功效 膽固醇和LDL濃度mmol/L 第0天代表未治療的大鼠 第15天代表治療15天的大鼠 上述數(shù)據(jù)表明根據(jù)上述教導(dǎo)的協(xié)同治療方案中所用的示例性黃連素化合物與第二抗血脂劑的組合效力。
盡管為清楚理解之目的，上述發(fā)明通過說明性而非限制性實(shí)施例方式已詳細(xì)加以描述，但是對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯而易見的是，可在權(quán)利要求的范圍內(nèi)實(shí)施某些變化和修飾。在上下文中，為簡(jiǎn)化說明，各種出版物和其他參考文獻(xiàn)已引用在上述公開內(nèi)容中。這些參考文獻(xiàn)分別在此以其全文為所有目的引作參考。然而，值得注意的是，在此討論的各種出版物僅并入其在本申請(qǐng)申請(qǐng)日之前的公開內(nèi)容，鑒于先發(fā)明制，本發(fā)明人保留居先這種公開內(nèi)容的權(quán)利。
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(下列出版物中含有的全部公開內(nèi)容和描述在此為所有目的共同引作參考)
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權(quán)利要求
1.一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥的方法，包括給所述對(duì)象施用抗高脂血癥有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被装滨?，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
3.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括給藥第二抗高血脂劑或其他輔助治療劑，所述抗高血脂劑或輔助治療劑在與式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物的組合制劑或協(xié)同治療方案中能有效治療或預(yù)防所述對(duì)象高脂血癥或另一心血管病或其相關(guān)癥狀或不適。
4.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂或輔助治療劑在給對(duì)象施用所述黃連素的同時(shí)，之前或之后以協(xié)同給藥方案給藥至所述對(duì)象。
5.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗血脂劑或輔助治療劑選自膽固醇攝取抑制劑；膽固醇生物合成抑制劑，包括HMG-CoA還原酶抑制劑或他??；HMG-CoA合酶抑制劑；鯊烯環(huán)氧酶抑制劑或鯊烯合成酶抑制劑；?；?輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑，包括甲亞油酰胺；普羅布考；煙酸及其鹽；煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑，包括β-谷甾醇和依澤替米貝；膽汁酸螯合劑陰離子交換樹脂，包括消膽胺，考來替泊，colesevelam和交聯(lián)葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；LDL受體誘導(dǎo)劑；貝特，包括降甾醇酸，苯扎貝特，非諾貝特和吉非貝齊；維生素B6及其可藥用鹽；維生素B12，包括氰鈷胺素和羥鈷胺素；維生素B3；抗氧化維生素，包括維生素C和E和β胡蘿卜素；β阻斷劑；血管收縮素II受體(AT1)拮抗劑；血管收縮素-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，腎素抑制劑；血小板凝集抑制劑，包括纖維蛋白原受體拮抗劑；激素，包括雌激素；胰島素；離子交換樹脂；歐米伽-3油；苯氟雷司；二十六烷五烯酸乙酯；和安氯地平。
6.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為他汀或HMG-CoA還原酶抑制劑。
7.權(quán)利要求6的方法，其中他汀或HMG-CoA還原酶抑制劑為洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，羅蘇伐他汀，匹伐他汀，或阿托伐他汀。
8.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為膽固醇攝取抑制劑或膽固醇合成抑制劑。
9.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為?；?輔酶A膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑。
10.權(quán)利要求9的方法，其中?；?輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑為甲亞油酰胺或普羅布考。
11.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為膽固醇吸收抑制劑。
12.權(quán)利要求11的方法，其中膽固醇吸收抑制劑為β-谷甾醇或依澤替米貝。
13.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為陰離子交換樹脂。
14.權(quán)利要求13的方法，其中陰離子交換樹脂為消膽胺，考來替泊，colesevelam或二烷基氨基烷基衍生物。
15.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為貝特。
16.權(quán)利要求15的方法，其中貝特為降甾醇酸，苯扎貝特，非諾貝特或吉非貝齊。
17.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括勸告或約定對(duì)象進(jìn)行另一治療處理，選自鍛煉，飲食調(diào)理，或手術(shù)。
18.權(quán)利要求3的方法，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為草本植物來源的產(chǎn)物或提取物。
19.權(quán)利要求18的方法，其中草本植物來源的產(chǎn)物或提取物獲自或選自姜黃色素，gugulipid，大蒜，維生素E，大豆，可溶性纖維，魚油，綠茶，肉堿，鉻輔酶Q10，維生素C，β胡蘿卜素，葡萄籽提取物，泛酸，紅酵母米，和蜂王漿。
20.一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物對(duì)象一種或多種由高脂血癥引起的心血管病或不適的癥狀的方法，包括給所述對(duì)象施用抗高血脂有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；轷Ｑ趸?，芳基，芳?；纪榛?，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷酰基氨基，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基。
21.權(quán)利要求20的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
22.權(quán)利要求20的方法，其中所述一種或多種心血管病或不適的癥狀包括動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，高血壓，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥或黃瘤。
23.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗高脂血癥有效量包括每天約10-約1500mg的所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。
24.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗高脂血癥有效量包括每天約20-約1000mg的所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。
25.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗高脂血癥有效量包括每天約25-約750mg的所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。
26.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗高脂血癥有效量包括每天約50-約500mg的黃連素。
27.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗高脂血癥有效量的所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物每天給藥一次，二次，三次或四次。
28.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象總膽固醇至約200mg/dL。
29.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象總膽固醇至約175mg/dL。
30.權(quán)利要求1的方法，其中給藥黃連素是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象LDL水平至約130mg/dL。
31.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象LDL水平約20mg/dL-約50mg/dL。
32.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象甘油三酯至約150mg/dL。
33.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象甘油三酯約20mg/dL-約50mg/dL。
34.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象hs-CRP至約2.0mg/L。
35.權(quán)利要求1的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象hs-CRP約0.5mg/L-約2.0mg/L。
36.一種控制哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥以減少或預(yù)防心血管病的方法，包括給所述對(duì)象施用抗高脂血癥有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳酰基，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被装滨?，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基。
37.權(quán)利要求36的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
38.權(quán)利要求36的方法，其中所述方法有效減少或預(yù)防所述對(duì)象一種或多種選自下列的癥狀，疾病，或不適動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，高血壓，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥，和黃瘤。
39.權(quán)利要求36的方法，其中所述高脂血癥與所述對(duì)象的原發(fā)性或繼發(fā)性高脂血癥相關(guān)。
40.權(quán)利要求36的方法，其中高脂血癥與所述對(duì)象的家族性高乳糜微粒血癥，家族性高膽固醇血癥，家族性組合的高脂血癥，家族性異常β脂蛋白血癥，家族性高甘油三酯血癥，家族性缺陷型載脂蛋白B-100，糖尿病，甲狀腺功能減退，尿毒癥，腎病綜合癥，肢端肥大癥，阻塞性肝病，或異常蛋白血癥相關(guān)。
41.權(quán)利要求36的方法，其中所述高脂血癥與所述對(duì)象先前或當(dāng)前使用口服避孕藥，糖皮質(zhì)激素，或抗高血壓藥相關(guān)。
42.權(quán)利要求36的方法，其中所述高脂血癥與所述對(duì)象的不良飲食習(xí)慣相關(guān)。
43.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象總膽固醇至約200mg/dL。
44.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象總膽固醇至約175mg/dL。
45.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象LDL水平至約130mg/dL。
46.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象LDL水平約20mg/dL-約50mg/dL。
47.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象甘油三酯至約150mg/dL。
48.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象甘油三酯約20mg/dL-約50mg/dL。
49.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象hs-CRP至約2.0mg/L。
50.權(quán)利要求36的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物是抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象hs-CRP約0.5mg/L-約2.0mg/L。
51.一種治療一種或多種心血管病癥狀的方法，包括給哺乳動(dòng)物對(duì)象施用有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；纪榛?，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被装滨?，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基。
52.權(quán)利要求51的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
53.權(quán)利要求51的方法，其中所述一種或多種癥狀包括呼吸短缺，胸疼，腿痛，疲倦，混亂，視力變化，尿血，鼻血，不規(guī)則心跳，失衡或失調(diào)，虛弱，或眩暈。
54.預(yù)防或緩解哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥的組合物，包括抗高脂血癥有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷酰基氨基，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基。
55.權(quán)利要求54的組合物，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
56.權(quán)利要求55的組合物，其中式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物為黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，或黃連素甜菜堿。
57.治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥的組合物，包括抗高脂血癥有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；轷Ｑ趸?，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被?，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基；
以及心血管病治療中有用的第二抗高血脂劑或其他輔助治療劑。
58.權(quán)利要求57的組合物，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
59.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑選自膽固醇攝取抑制劑；膽固醇生物合成抑制劑，包括HMG-CoA還原酶抑制劑或他?。籋MG-CoA合酶抑制劑；鯊烯環(huán)氧酶抑制劑和鯊烯合成酶抑制劑；?；?輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑，包括甲亞油酰胺；普羅布考；煙酸及其鹽；煙酰胺；膽固醇吸收抑制劑，包括β-谷甾醇和依澤替米貝；膽汁酸螯合劑陰離子交換樹脂，包括消膽胺，考來替泊，colesevelam和交聯(lián)葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；LDL受體誘導(dǎo)劑；貝特，包括降甾醇酸，苯扎貝特，非諾貝特和吉非貝齊；維生素B6及其可藥用鹽；維生素B12，包括氰鈷胺素和羥鈷胺素；維生素B3；抗氧化維生素，包括維生素C，維生素E和β胡蘿卜素；β阻斷劑；血管收縮素II受體(AT1)拮抗劑；血管收縮素-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，腎素抑制劑；血小板凝集抑制劑，包括纖維蛋白原受體拮抗劑；激素，包括雌激素；胰島素；離子交換樹脂；歐米伽-3油；苯氟雷司；二十六烷五烯酸乙酯；和安氯地平。
60.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為他汀或HMG-CoA還原酶抑制劑。
61.權(quán)利要求60的組合物，其中他汀或HMG-CoA還原酶抑制劑為洛伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，氟伐他汀，羅蘇伐他汀，匹伐他汀，或阿托伐他汀。
62.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為膽固醇攝取抑制劑或膽固醇生物合成抑制劑。
63.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為?；?輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑。
64.權(quán)利要求63的組合物，其中?；?輔酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑為甲亞油酰胺或普羅布考。
65.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為膽固醇吸收抑制劑。
66.權(quán)利要求65的組合物，其中膽固醇吸收抑制劑為β-谷甾醇或依澤替米貝。
67.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為陰離子交換樹脂。
68.權(quán)利要求67的組合物，其中陰離子交換樹脂為消膽胺，考來替泊，colesevelam或二烷基氨基烷基衍生物。
69.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為貝特。
70.權(quán)利要求69的組合物，其中貝特為降甾醇酸，苯扎貝特，非諾貝特或吉非貝齊。
71.權(quán)利要求57的組合物，其中第二抗高血脂劑或輔助治療劑為草本植物來源的產(chǎn)物或提取物。
72.權(quán)利要求71的組合物，其中草本植物來源的產(chǎn)物或提取物獲自或選自姜黃色素，gugulipid，大蒜，維生素E，大豆，可溶性纖維，魚油，綠茶，肉堿，鉻輔酶Q10，維生素C，β胡蘿卜素，葡萄籽提取物，泛酸，紅酵母米，和蜂王漿。
73.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥黃連素為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象總膽固醇至約200mg/dL。
74.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥黃連素為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象總膽固醇至約175mg/dL。
75.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥黃連素為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象LDL水平至約130mg/dL。
76.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象LDL水平約20mg/dL-約50mg/dL。
77.權(quán)利要求53的組合物，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象甘油三酯至約150mg/dL。
78.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象甘油三酯約20mg/dL-約50mg/dL。
79.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象hs-CRP至約2.0mg/L。
80.權(quán)利要求57的組合物，其中給藥黃連素為抗高脂血癥有效地降低所述對(duì)象hs-CRP約0.5mg/L-約2.0mg/L。
81.一種調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物對(duì)象LDLR表達(dá)的方法，包括給所述對(duì)象施用有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；轷Ｑ趸?，芳基，芳?；纪榛?，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被装滨?，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基；
以及心血管病治療中有用的第二抗高血脂劑或其他輔助治療劑。
82.權(quán)利要求81的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
83.權(quán)利要求81的方法，其中所述哺乳動(dòng)物對(duì)象選自哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物，哺乳動(dòng)物組織或組織外植體，哺乳動(dòng)物器官或器官外植體，或哺乳動(dòng)物個(gè)體。
84.增加哺乳動(dòng)物對(duì)象LDLR表達(dá)的組合物，包括LDLR增加有效量的黃連素或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥。
85.增加哺乳動(dòng)物細(xì)胞，組織，器官，或個(gè)體LDLR表達(dá)的組合物，包括LDLR有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被?，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基，及其黃連素類似物或可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥。
86.權(quán)利要求85的組合物，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
87.權(quán)利要求85的組合物，其中式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物選自黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。
88.一種增加哺乳動(dòng)物細(xì)胞，組織，器官或個(gè)體LDLR穩(wěn)定性的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物對(duì)象施用有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
實(shí)施例I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被?，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基，及其黃連素類似物或可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥。
89.權(quán)利要求88的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
90.權(quán)利要求88的方法，其中式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物選自黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。
91.增加哺乳動(dòng)物細(xì)胞，組織，器官，或個(gè)體LDLR穩(wěn)定性的組合物，包括LDLR穩(wěn)定量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；轷Ｑ趸?，芳基，芳?；纪榛?，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被?，甲氨酰，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基，及其黃連素類似物或可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥。
92.權(quán)利要求91的組合物，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
93.權(quán)利要求91的組合物，其中式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物選自黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。
94.一種調(diào)節(jié)選自哺乳動(dòng)物細(xì)胞，組織，器官，或個(gè)體的哺乳動(dòng)物對(duì)象ERK活化的方法，包括給所述對(duì)象施用ERK活化調(diào)節(jié)有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷?；?，烷酰氧基，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被装滨?，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基，及其黃連素類似物或可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥。
95.權(quán)利要求94的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
96.權(quán)利要求94的方法，其中式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物選自黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。
97.一種降低選自哺乳動(dòng)物細(xì)胞，組織，器官，或個(gè)體的哺乳動(dòng)物對(duì)象膽固醇的方法，包括給所述對(duì)象施用降膽固醇有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物，或其可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥
式I，
其中R1，R2，R3，R4，R8，R9，R10，R11，R12和/或R13各自獨(dú)立地，共同地，或以任何組合方式選自氫，鹵素，羥基，烷基，烷氧基，硝基，氨基，三氟甲基，環(huán)烷基，(環(huán)烷基)烷基，烷酰基，烷酰氧基，芳基，芳?；?，芳烷基，腈，二烷基氨基，烯基，炔基，羥基烷基，氨基烷基，烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基，鹵代烷基，羧基烷基，烷氧基烷基，羧基，烷?；被装滨?，氨甲酰，羰基氨基，烷基磺酰氨基，和雜環(huán)基，及其黃連素類似物或可藥用鹽，異構(gòu)體，對(duì)映體，溶劑化物，水合物，多晶型或前藥。
98.權(quán)利要求97的方法，其中R1選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R2選自H，甲基，乙基，亞甲基；R3選自H，甲基，乙基，亞甲基；R4選自甲基，乙基，羥基，或甲氧基；R8選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代；R9選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R10選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R11選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；R12選自甲基，乙基，羥基，Cl，Br；和R13選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，包括選自甲基，乙基，n-丙基，1-甲基乙基，n-丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，1，1-二甲基乙基，n-戊基，2-甲基丁基，1，1-二甲基丙基，2，2二甲基丙基，3-甲基丁基，n-己基，1-甲基戊基，1，1-二甲基丁基，2，2-二甲基丁基，3-甲基戊基，1，2-二甲基丁基，1，3-二甲基和1-甲基-2乙基丙基的取代。
99.權(quán)利要求97的方法，其中式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物選自黃連素硫酸鹽，黃連素鹽酸鹽，黃連素氯化物，巴馬亭氯化物，含氧黃連素，二氫黃連素，8-氰基二氫黃連素，四氫黃連素N-氧化物，四氫黃連素，N-甲基四氫黃連素鎓碘化物，6-原黃連素，9-乙氧基羰基黃連素，9-N，N-二甲基甲氨酰黃連素和12-溴代黃連素，黃連素疊氮化物，和黃連素甜菜堿。
100.權(quán)利要求97的方法，進(jìn)一步包括給所述對(duì)象施用第二降膽固醇劑。
101.權(quán)利要求100的方法，其中第二降膽固醇劑與所述黃連素一起以組合制劑形式給藥至所述對(duì)象。
102.權(quán)利要求100的方法，其中第二降膽固醇劑在給藥所述黃連素至對(duì)象的同時(shí)，之前，或之后以協(xié)同給藥方案給藥至所述對(duì)象。
103.權(quán)利要求100的方法，其中第二降膽固醇劑選自血漿HDL-升高劑，膽固醇生物合成抑制劑，HMG-CoA還原酶抑制劑，HMG-CoA合酶抑制劑，鯊烯環(huán)氧酶抑制劑，鯊烯合成酶抑制劑，?；o酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶抑制劑，煙酰胺，膽固醇吸收抑制劑，膽汁酸螯合劑，陰離子交換樹脂，激素，胰島素，貝特，維生素B6，維生素B12，維生素B3，抗氧化維生素，β阻斷劑，血管收縮素II受體(AT1)拮抗劑，血管收縮素-轉(zhuǎn)化酶抑制劑，腎素抑制劑，血小板凝集抑制劑，離子交換樹脂，歐米伽-3油，苯氟雷司，或膽固醇攝取抑制劑。
104.權(quán)利要求100的方法，其中所述降膽固醇有效量包括每天約20mg-約1500mg所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。
105.權(quán)利要求100的方法，其中所述降膽固醇有效量包括每天約25mg-約750mg所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。
106.權(quán)利要求100的方法，其中所述膽固醇有效量包括每天約50mg-約500mg所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物。
107.權(quán)利要求100的方法，其中所述降膽固醇有效量的所述式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物為每天給藥一次，二次，三次，或四次。
108.權(quán)利要求100的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物有效降低所述對(duì)象總膽固醇至約200mg/dL。
109.權(quán)利要求100的方法，其中給藥所述有效量的式I的黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物有效降低所述對(duì)象總膽固醇至約175mg/dL。
全文摘要
本發(fā)明為預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥，高膽固醇，和/或心血管病提供涉及黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物的方法和組合物。本發(fā)明方法和組合物有效用于預(yù)防和治療動(dòng)脈硬化癥，冠狀動(dòng)脈疾病，心絞痛，頸動(dòng)脈疾病，中風(fēng)，腦動(dòng)脈硬化，高血壓，心肌梗塞，腦梗塞，充氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄，間歇性跛行，異常脂血癥，餐后脂血癥或黃瘤。提供的其他組合物和方法采用黃連素化合物或黃連素相關(guān)或衍生化合物與第二抗高血脂劑，或不同治療劑組合，以針對(duì)高脂血癥和/或心血管病生成更有效的治療工具，和/或雙重活性治療方法和制劑，用于預(yù)防或減少高脂血癥和一種或多種與哺乳動(dòng)物對(duì)象高脂血癥病相關(guān)的因果性或相關(guān)性癥狀或不適。
文檔編號(hào)A61P3/06GK101102768SQ200580039050
公開日2008年1月9日 申請(qǐng)日期2005年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月17日
發(fā)明者蔣建東, 孔維佳, 趙立勛, 宋丹青, 敬 魏 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所