專利名稱：制備莰佛胺及其鹽的方法和中間體、含中間體的藥物組合物，及其作為抗癌藥的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及莰佛胺(canfosfamide)及其鹽，并且尤其涉及其制備方法和在其制備過程中的中間體，含一些中間體的藥物組合物，以及它們作為抗癌藥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
美國專利第5,556,942號和PCT國際公開號WO 95/09866披露了結(jié)構(gòu)式 的化合物和其酰胺、酯及其鹽，以及它們的合成方法，其中L為吸電子離去基團；Sx為-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-S(＝NH)-、-S(＝O)(＝NH)-、-S+(C1-C6烷基)-、-Se(＝O)-、-Se(＝O)2-、-Se(＝NH)-、或-Se(＝O)(＝NH)-，或為-O-C(＝O)-、或-HN-C(＝O)-；每一R1、R2和R3獨立地為H或非干擾取代基；
n為0、1或2；Y選自由以下構(gòu)成的組 其中m為1或2；以及AAc是通過肽鍵連接到該化合物的其余部分的氨基酸。
據(jù)稱這些化合物是選擇性治療含有相容GST同功酶的靶組織的有用藥物，同時提高骨髓中GM祖細胞的水平。所披露的關(guān)于L的具體實施方式
包括對不需要細胞產(chǎn)生毒性藥物的化合物，包括二氨基磷酸酯和二氨基磷酸酯芥。
其中一個化合物中是TLK286，在那些公開中被稱為TER 286，其化學(xué)名為γ-谷氨?；?α-氨基-β-((2-乙基-N，N，N，N-四(2′-氯)乙基氨基磷酸酯基)磺?；?丙?；?(R)-(-)-苯基甘氨酸。TLK286是以下化學(xué)式的化合物 TLK286本身被提議的國際非專利藥名(pINN)為莰佛胺，而作為鹽酸加合鹽，其美國采用名(USAN)TLK286為莰佛胺鹽酸鹽。
Lyttle等人在J.Med.Chem.，371501-1507(1994)上公開了莰佛胺和兩種類似物、它們的合成，以及它們與三種GST同功酶的相互作用。這些合成方法涉及未保護的三肽[在莰佛胺的情況下，L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸]與2-溴乙基二氨基磷酸酯[在莰佛胺情況下，N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-溴乙基酯]的反應(yīng)，接著用過氧化氫和過乙酸對生成的硫醚進行氧化。
莰佛胺是一種抗癌化合物，通過GST P1-1的作用和并通過GSTA1-1被激活，而釋放出細胞毒性的二氨基磷酸酯部分。莰佛胺經(jīng)過GST P1-1的激活之后，隨著MKK4、JNK、p38 MAP激酶，和caspase3的激活，通過應(yīng)激反應(yīng)信號傳導(dǎo)路徑來誘導(dǎo)細胞凋亡。在體外測試中，莰佛胺已經(jīng)被證實，在選擇性對阿霉素有耐藥性的M6709人體克隆癌細胞系中，以及在選擇性對環(huán)磷酰胺有耐藥性的MCF-7人體乳腺癌細胞系中(兩者都過表達GST P1-1)，比在它們的親代細胞系中為有效；并且在設(shè)計以具有高、中和低水平的GST P1-1的M7609的鼠異種移植物中，莰佛胺的效能與GST P1-1的水平為正相關(guān)(Morgan等人，Cancer Res.，582568-2575(1998))。
莰佛胺鹽酸鹽，作為單一藥劑和與其它抗癌藥劑組合使用，目前正在進行治療卵巢癌、乳腺癌、非小細胞肺癌以及直腸癌方面的多種臨床試驗評價。已經(jīng)在患非小細胞肺癌和卵巢癌的患者中顯示顯著的單藥劑抗腫瘤活性和的存活率的提高，以及在結(jié)腸癌和乳腺癌中的單藥抗腫瘤活性。來自體外細胞培養(yǎng)和腫瘤活組織檢查的證據(jù)表明，莰佛胺對鉑類、紅豆杉醇和阿霉素(Rosario等人，Mol.Pharmacol.，58167-174(2000))是非交叉耐藥性的，以及對吉西他濱(gemcitabine)也是非交叉耐藥性的。用莰佛胺鹽酸鹽治療的患者表現(xiàn)出非常低的臨床明顯血液毒性發(fā)生率。
Herr等人，Org.Proc.Res.Dev.，5442-444(2001)，披露了從未保護三肽L-γ-谷氨?；?L-半胱氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸和N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(芳磺酰氧基)乙酯的莰佛胺的逆合成方法；以及從POCl3分三步，經(jīng)過N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-羥乙基酯，合成N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(芳磺酰氧基)乙酯的方法。美國專利第6,506,739號和PCT國際公開號WO 01/83496公開了N，N，N′，N′-四(2-鹵代乙基)二氨基磷酸2-(取代)乙基酯，包括N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-羥基乙酯和N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(芳磺酰氧基)乙酯，例如，N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(4-溴苯磺酰氧基)乙酯。
開發(fā)一種經(jīng)濟有效的莰佛胺及其鹽的合成方法是合乎需要的。

發(fā)明內(nèi)容
在第一方面，本發(fā)明是以下化學(xué)式的化合物及其鹽 其中R1是氨基保護基團。
在第二方面，本發(fā)明是以下結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽
其中R1是氨基保護基團。
在第三方面，本發(fā)明是以下化學(xué)式的化合物及其鹽 其中R1是氨基保護基團。
在第四方面，本發(fā)明是以下化學(xué)式的化合物及其鹽 其中R1是氨基保護基團，而R2是硫保護基團。
在第五方面，本發(fā)明是制備莰佛胺或其鹽的方法，包括對本發(fā)明第一方面的化合物去保護，可選地隨后生成莰佛胺的鹽。
在第六方面，本發(fā)明是制備本發(fā)明第一方面化合物的方法，包括氧化本發(fā)明第二方面的化合物。
在第七方面，本發(fā)明是制備本發(fā)明第二方面的化合物的方法，包括在堿性條件下使本發(fā)明第三方面的化合物與N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯反應(yīng)。
在第八方面，本發(fā)明是制備本發(fā)明第三方面的化合物的方法，包括對本發(fā)明第四方面的化合物中的硫原子去保護。
在第九方面，本發(fā)明是包括本發(fā)明第一方面化合物的藥物組合物，用于治療癌癥和生產(chǎn)治療癌癥藥物的本發(fā)明第一方面的化合物，以及通過給予本發(fā)明第一方面的化合物治療癌癥的方法。
本發(fā)明的優(yōu)選具體實施方式
由提交的本申請的說明書和權(quán)利要求2～4、6～8、10～12、14～18、20、21、23～27、29～35、37～42和44～46所描述內(nèi)容加以特征化。
具體實施例方式
定義“莰佛胺”(Canfosfamide)是以下結(jié)構(gòu)式的化合物 其CAS命名為L-γ-谷氨?；?3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]乙基]-磺酰基]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸。
莰佛胺和本發(fā)明的化合物合適的鹽[參見Berge等人，J.Pharm.Sci.，661(1971)，非窮舉]是，當(dāng)無機堿(例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫氧化鈣)或有機堿(例如，乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、緩血酸胺、N-甲基葡糖胺)與莰佛胺和所述化合物的羧基反應(yīng)時生成的那些鹽，以及當(dāng)無機酸(例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和氯磺酸)或有機酸(例如，乙酸、丙酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、或酒石酸，以及烷基磺酸或芳基磺酸如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、取代的苯磺酸如氯苯磺酸和甲苯磺酸、萘磺酸和取代的萘磺酸、萘二磺酸和取代的萘二磺酸，以及樟腦磺酸)反應(yīng)時生成莰佛胺和所述化合物的氨基基團的酸加成鹽。這些鹽優(yōu)選由藥用酸和堿形成。莰佛胺的合適鹽是酸加成鹽，尤其是鹽酸鹽。
“氨基保護基團”是能夠在氨基保護的莰佛胺合成期間保護L-γ-谷氨?；?L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸的谷?；?氨基，并隨后在不影響莰佛胺分子其余部分的情況下可移除的基團?！翱纱呋サ陌被Ｗo基團”是能夠通過催化還原或催化異構(gòu)化除去的氨基保護基團。常用的這種基團是含有芐基碳原子或烯丙基碳原子的形成尿烷的基團。適合用于本發(fā)明的可催化除去的氨基保護基團的實例是通過催化氫解很方便除去的(可選取代的芐基)氧羰基，以及通過催化異構(gòu)化很方便除去的(可選取代的烯丙基)氧羰基。特別合適的可催化除去的氨基保護基是芐氧羰基。
“(可選取代的芐基)氧羰基”包括芐氧羰基和在苯環(huán)上用一個或兩個(一般是一個)吸電子取代基如鹵素(典型地是氯或溴)、硝基、氰基和三氟甲基取代的芐氧羰基。(可選取代的芐基)氧羰基的實例包括芐氧羰基、鹵代芐氧羰基如2-和4-溴代芐氧羰基，2-，3-和4-氯代芐氧羰基，和2，4-二氯代芐氧羰基、2-，3-和4-硝基芐氧羰基、4-氰基芐氧羰基等。
“(可選取代的烯丙基)氧羰基”包括烯丙氧羰基和用吸電子取代基(如可選地用一個或兩個(一般是一個)吸電子取代基如鹵素(典型地為氯或溴)、硝基、氰基和三氟甲基取代的苯基，或吡啶基)在烯丙基的3-位取代的烯丙氧羰基，和1-異丙基烯丙氧羰基。(可選取代的烯丙基)氧羰基的實例包括烯丙氧羰基、肉桂氧羰基、4-硝基肉桂氧羰基、3-(3′-吡啶基)烯丙氧羰基，以及1-異丙基烯丙氧羰基。
“硫保護基”是能夠在合成本發(fā)明第四方面的化合物過程中保護L-γ-谷?；?L-半胱氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸的硫原子并隨后在不影響本發(fā)明第三方面相應(yīng)化合物的分子其余部分(包括氨基保護基)的情況下可除去的基團。“可酸解除去的硫保護基”是能夠通過酸解反應(yīng)除去的硫保護基團。常用的這種基團是(可選取代的苯基)-取代的甲基。適合用于本發(fā)明的可酸解除去的硫保護基的實例是三苯甲基，其中一個或多個苯環(huán)被一個或多個(一般為一個)供電子取代基如甲氧基可選取代，例如，三苯基甲基、(4-甲氧基苯基)二苯基甲基和二(4-甲氧基苯基)苯基甲基；二苯基甲基，其中一個或多個苯環(huán)被一個或多個(一般為一個)供電子取代基如甲氧基可選取代，例如，二苯甲基、(4-甲氧基苯基)苯基甲基和二(4-甲氧基苯基)甲基；二苯基甲基類似物如9H-氧雜蒽-9-基、2-甲氧基-9H-氧雜蒽-9-基、5H-二苯并[a，d]環(huán)庚-5-基，以及10，11-二氫-5H-二苯并[a，d]環(huán)庚-5-基；以及用兩個或多個供電子取代基如甲氧基取代的芐基，例如，2，4-二甲氧基芐基和2，4，6-三甲氧基芐基。特別適合的可酸解除去的硫保護基是三苯甲基。
氨基保護基(包括可催化除去的氨基保護基)和硫保護基(包括可酸解除去的硫保護基)在有機合成領(lǐng)域，尤其是肽合成中是眾所周知的。合適的這種基團及其除去條件，描述于一些書籍中，如Synthesis of Peptides and Peptidomimetics，Workbench edition，M.Goodman，ed.，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，Germany，2004，和Protective groups in organic synthesis，3ed.，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，eds.，John Wiley & Sons，Inc.，New York，New York，U.S.A.，1999，并且對于本領(lǐng)域普通技術(shù)員來說是眾所周知的。
因為本發(fā)明第四方面的化合物既含有氨基保護基，尤其是催化可除去的氨基保護基，和硫保護基，尤其是可酸解除去的硫保護基，而且本發(fā)明第八方面涉及這些化合物中硫原子的去保護，而同時保持氨基保護基不受影響，所以本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會理解到“氨基保護基”和“硫保護基”并不是獨立選擇的，其定義應(yīng)該根據(jù)本申請的說明和反應(yīng)圖解1和2的反應(yīng)順序來理解；氨基保護基和硫保護基的選擇要使得在保持氨基保護基不受影響的條件下，可以除去硫保護基。考慮本申請中的這些信息以及本領(lǐng)域的普通技術(shù)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在選擇合適的氨基保護基和硫保護基以及除去條件方面并不困難。
“N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯”是以下結(jié)構(gòu)式的化合物 其中A是可選取代的烷基、可選取代的芳基、可選取代的雜芳基、可選取代的芳烷基，或可選取代的雜芳烷基。因此，A包括C1～4烷基，可選地用1至3個鹵原子取代和進一步可選地用硝基或氰基取代；C6～10芳基如苯基和萘基，尤其是苯基，可選地用1至3個選自鹵素、硝基、氰基、以及可選地被1至3個鹵原子取代的C1～2烷基(例如，三氟甲基)取代；C5～10雜芳基，如呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基和嘧啶基，可選地用1至3個選自鹵素、硝基、氰基和可選地被1至3個鹵原子取代的C1～2烷基的基團所取代；和C6～10芳基-C1～2烷基和C5～10雜芳基-C1～2烷基，每一個可選地在芳基或雜芳基上用1至3個選自鹵素、硝基、氰基以及可選地被1至3個鹵原子取代的C1-2烷基的基團取代，并可選地在烷基上用1至3個鹵原子取代。A基團的實例包括甲基、三氟甲基、苯基、4-甲苯基、4-硝基苯基和4-鹵代苯基如4-氯苯基和4-溴苯基。
“對溴苯磺?；笔侵?-溴苯磺酰基。
“治療有效量”是指，當(dāng)向哺乳動物尤其是人給藥以治療癌癥時，足以達到治療癌癥的量。對哺乳動物癌癥的“治療”包括下列中的一種或多種(1)抑制癌癥增長，即阻止其發(fā)展，(2)阻止癌癥的擴散，即阻止其轉(zhuǎn)移，(3)使癌癥減輕，即使癌變消退，(4)防止癌癥復(fù)發(fā)，以及(5)減輕癌癥癥狀。
如果本發(fā)明第一方面的化合物作為具有一種或多種其它抗癌藥或放射療法的聯(lián)合療法的部分進行給藥，則“治療有效量”可以比該化合物單獨給藥的治療有效量更低。
“含有”和“包括”及其語法變化詞是包括和不限制的表達，意思是指定有所述特征的存在而不排除其他特征的存在或加入。
本發(fā)明的化合物及其制備本發(fā)明第一方面的化合物是以下結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽(化合物4)
其中R1是氨基保護基，尤其是可催化除去的氨基保護基。
本發(fā)明第一方面的具體化合物是其中R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基的化合物。特別有用的化合物是這些化合物，其中R1是芐氧羰基，即N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]磺?；鵠-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，及其鹽，特別是藥用鹽。
本發(fā)明第二方面的化合物是以下結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽(化合物3) 其中R1是氨基保護基，尤其是可催化除去的氨基保護基。
本發(fā)明第二方面的具體化合物是其中R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基的化合物。特別有用的化合物是這些化合物，其中R1是芐氧羰基，即N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]硫代]-L-丙氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸，及其鹽。
本發(fā)明第三方面的化合物是以下結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽(化合物2) 其中R1是氨基保護基，尤其是可催化除去的氨基保護基。
本發(fā)明的第三方面的具體化合物是其中R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基的化合物。特別有用的化合物是這些化合物，其中R1是芐氧羰基，即N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，及其鹽。
本發(fā)明第四方面的化合物是以下結(jié)構(gòu)式的化合物及其鹽(化合物1) 其中R1是氨基保護基，尤其是可催化除去的氨基保護基，而R2是硫保護基，尤其是可酸解除去的硫保護基。
本發(fā)明第四方面的具體化合物是其中R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基的化合物。特別有用的化合物是R1為芐氧羰基的那些化合物。
本發(fā)明第四方面的其它具體化合物是其中R2是(可選取代的苯基)-取代的甲基的化合物。特別有用的化合物是其中R2為三苯甲基的化合物。
本發(fā)明第四方面的特別有用的化合物是其中R1是芐氧羰基而R2是三苯甲基的化合物，即N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酰基-S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，及其鹽。
通過本發(fā)明的方法制備本發(fā)明的化合物和莰佛胺及其鹽如反應(yīng)圖解1所示。
本申請描述的和權(quán)利要求主張的制備方法中，在方法步驟中溶劑的命名并不指溶劑必須是單獨使用的溶劑可以與一種或多種共溶劑一起使用，條件是任何溶劑混合物的性質(zhì)主要由所指定的溶劑決定。
反應(yīng)圖解1
在第一步中，對化合物1的硫原子進行去保護以給出化合物2。
可以通過任何適于去除硫保護基而不會除去氨基保護基的方法對化合物1進行去保護。當(dāng)硫保護基是可酸解除去的硫保護基時，通過酸解可以很方便地對化合物1進行去保護。
典型地，可選地在清除劑存在的情況下，將化合物1溶解于強度足以除去可酸解除去的硫保護基但不足以除去可催化除去的氨基保護基的酸中。合適的這樣的酸包括三氟乙酸和其他強酸如三氟甲磺酸，可選地存在共溶劑如二氯甲烷；合適的清除劑包括芳香族醚和硫化物如茴香醚和茴香硫醚，酚如甲酚，和最有效的硅烷，包括三烷基硅烷如三乙基硅烷和三異丙基硅烷和硅烷聚合物如聚(甲基氫硅氧烷)；以及在聚(甲基氫硅氧烷)存在的情況下，特別適合的去保護劑是三氟乙酸?；衔?可以通過加入抗溶劑，例如質(zhì)子非極性溶劑如烴或醚從反應(yīng)混合物中分離出來；并且特別適合的抗溶劑是庚烷和甲基叔丁基醚的混合物。
在第二步中，用N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯對化合物2的硫醇陰離子進行烷基化以制備化合物3。
典型地，將化合物2溶解于強堿(例如，堿金屬或堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽、磷酸鹽或醇鹽，或氫氧化銨；或有機胺堿如四甲基胍、DBU(1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-7-烯)，等；尤其是堿金屬氫氧化物)的合適溶劑(例如，C1～6烷醇、二醇如1，2-乙二醇或1，3-丙二醇、醚如2-甲氧基乙醇，1，2-二甲氧基乙烷，或四氫呋喃等；尤其是C1～3烷醇如甲醇)的溶液中，以生成硫醇陰離子，加入二氨基磷酸酯(典型地是過量的，例如對化合物2至少過量1.5倍，尤其是至少2倍，例如約2.5倍)，使反應(yīng)混合物在合適的溫度下保持一定時間直至反應(yīng)完成。如果二氨基磷酸酯是以非極性非質(zhì)子溶劑(例如，芳烴如甲苯)的溶液使用，那么一旦生成化合物3的反應(yīng)完成，就對反應(yīng)混合物進行中和，對水相和非水相進行分離，以除去未反應(yīng)的二氨基磷酸酯起始原料。然后從水相中除去溶劑(例如，C1～6烷醇)，并用非極性非質(zhì)子溶劑(例如，酯如乙酸異丙酯)萃取水相，以除去更多未反應(yīng)的二氨基磷酸酯起始原料。然后使水相的pH值進一步降低，化合物3就被萃取到非極性非質(zhì)子溶劑中?；衔?可以通過除去溶劑而從溶液中分離出來；但是，如果溶劑是適合于該方法第三步的溶劑，那么化合物3可以在溶液中帶入第三步中。
在第三步中，化合物3的硫原子被氧化，以制備化合物4。
典型地，將化合物3溶解于合適的溶劑中，加入氧化劑，然后將反應(yīng)混合物保持足夠的時間和足夠的溫度直至氧化反應(yīng)完成。合適的溶劑/氧化劑組合包括C2～3烷酸/過氧化氫/過氧烷酸組合如乙酸/過氧乙酸和乙酸/過氧化氫/過氧乙酸，以及使用C2～3過氧烷酸或過氧三氟乙酸既作為溶劑又作為氧化劑。在有必要用試劑如甲硫醚淬滅過量的氧化劑之后，通過簡單地濃縮來分離化合物4。特別合適的溶劑/氧化劑組合包括氧化作用在兩相系統(tǒng)中發(fā)生的組合，其中將化合物3溶解于非極性非質(zhì)子溶劑如酯(例如，乙酸異丙酯)中，而氧化劑處于水溶液中。對于這些兩相氧化作用的合適氧化劑包括硼酸鹽和過氧化物如過硼酸鹽和過硫酸鹽，如過硫酸銨、過硫酸鈉或過硫酸鉀，特別適合的氧化劑是單過硫酸氫鉀，如OXONETM(2KHSO5·KHSO4·K2SO4)。水相和非水相分離后，可選地洗滌非水相，以確保除去任何氧化劑，化合物4通過濃縮從非水相中分離出來。
在第四步中，對化合物4的氨基進行去保護，以制備莰佛胺，可選地接著生成莰佛胺的酸加成鹽。
化合物4可以通過任何適合于除去氨基保護基而又不會影響莰佛胺分子其余部分的方法來實現(xiàn)去保護。當(dāng)氨基保護基是可催化除去的氨基保護基時，化合物4通過催化還原或異構(gòu)化可以很方便地去保護。
對于催化還原，典型地，將化合物4溶解于合適的溶劑如C1～4烷醇，或極性質(zhì)子溶劑，或在非極性非質(zhì)子溶劑中，尤其是在存在水時，例如在水存在時的乙酸異丙酯中，然后在還原催化劑(典型地為鈀催化劑如鈀黑、硫酸鋇載鈀和碳載鈀)存在的情況下，與氫或氫供體如環(huán)己烯或1，4-環(huán)己二烯接觸。在除去催化劑之后，莰佛胺可以通過加入將成為鹽的抗溶劑的溶劑如非質(zhì)子溶劑例如烴或鹵代烴如二氯甲烷很方便地作為酸加成鹽分離出來，接著加入選擇的酸以生成鹽，尤其是單獨以無水酸的形式或在非質(zhì)子溶劑中存在的酸，例如氯化氫氣體。如果必要或需要，可以加入鹽的其它抗溶劑例如醚如乙醚、甲基叔丁基醚和四氫呋喃，尤其是甲基叔丁基醚。對于催化異構(gòu)化，典型地在親核烯丙基清除劑如仲胺存在下，可以使用零價鈀絡(luò)合物如四(三苯基膦)鈀(0)。以合適的方式分離莰佛胺，通常得到酸加成鹽。
化合物的用途和方法本發(fā)明第一、第二、第三和第四方面的化合物(分別是結(jié)構(gòu)式4、3、2和1的化合物)和本發(fā)明第五、第六、第七和第八方面的方法步驟，在已知的抗癌劑莰佛胺及其鹽的制備中是很有用的。
另外，本發(fā)明第一方面的化合物也是活性的細胞毒性劑。因此，他們可以用于治療癌癥，尤其是可以用莰佛胺及其鹽治療的癌癥類型。這些癌癥包括哺乳動物的癌癥，尤其是人類的癌癥。特別是可治療的癌癥是對細胞凋亡誘導(dǎo)劑敏感的癌癥，更具體地是那些表達或尤其過表達GST P1-1的癌癥。當(dāng)用其它抗癌療法(即不是本發(fā)明第一方面的化合物)治療時，表達或過表達GST P1-1的那些癌癥，當(dāng)與其它抗癌療法組合使用時也尤其適合用本發(fā)明第一方面的化合物進行治療。對于莰佛胺及其類似物的這種類型的組合化療描述于美國專利申請公開號US2004/0138140和PCT國際公開號WO2004/045593中。這樣的癌癥包括腦癌、乳腺癌、膀胱癌、子宮癌、結(jié)腸直腸癌、食道癌、頭頸癌、腎臟癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌以及胃癌；白血病如ALL、AML、AMML、CLL、CML、CMML以及毛細胞白血病；霍奇金和非霍奇金淋巴瘤；間皮瘤、多發(fā)性骨髓瘤；以及骨骼和軟組織的惡性瘤(肉瘤)。本發(fā)明第一具體實施方式
的化合物可特別治療的癌癥包括乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌和非小細胞肺癌。
本發(fā)明第九方面是含有本發(fā)明第一方面化合物的藥物組合物，這些化合物用于治療癌癥和用于制備治療癌癥藥物的應(yīng)用，以及通過一般以治療有效量給予這些化合物來治療癌癥的方法。
這些化合物可以采用任何適合于受治療的主體以及主體疾病的特征的途徑進行給藥。給藥的途徑包括但不限于通過注射給藥，包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、以及皮下注射，通過跨粘膜或經(jīng)皮遞送、采取局部施藥、鼻內(nèi)噴霧、栓劑等，或者可以口服給藥。含有這些化合物的藥物組合物可以可選地是脂質(zhì)體制劑、乳劑、設(shè)計用來通過粘膜給藥的劑型或經(jīng)皮給藥的劑型。對于這些給藥方法中的每一個的合適劑型都可以在，例如，RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy，20 ed.，A.Gennaro，ed.，Iippincott Williams &Wilkins，Philadelphia，Pennsylvania，U.S.A.，2003中找到。典型的組合物要么是口服的，要么是用于靜脈輸注的溶液，而其將含有所述化合物，并一般也含有一種或多種藥用賦形劑。典型的制劑形式是片劑、用于靜脈輸注的溶液以及用于重配成溶液以便靜脈輸注的凍干粉末。
本發(fā)明第一方面化合物的治療有效量為約50～3000mg/m2身體表面積，尤其是500～1500mg/m2?？梢砸?～35天的時間間隔進行給藥；例如，以1～5周的時間間隔，尤其是1、2、3或4周的時間間隔以約500～1000mg/m2的量，或者以更高的頻率，包括達在數(shù)天內(nèi)(如5或7天)以1次/天的頻率進行給藥，每2、3或4周重復(fù)這種給藥，或連續(xù)輸注6～72h的時間段，也每2、3或4周重復(fù)這種給藥；這樣的給藥靈活性將能夠容易地與其它抗癌療法實現(xiàn)組合治療。
實施例以下實施例將說明通過本發(fā)明的方法制備本發(fā)明化合物的方法和制備莰佛胺鹽酸鹽的方法，以及本發(fā)明第一方面的化合物作為抗癌劑的應(yīng)用。
反應(yīng)圖解2表示通過本發(fā)明的方法制備本發(fā)明優(yōu)選化合物的方法和制備莰佛胺鹽酸鹽的方法。N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸(化合物1A)的制備方法并未顯示在反應(yīng)圖解2中，因為其將取決于其前體化合物的保護性質(zhì)，但是從O-α-芐基-N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸進行制備的方法將在以下的實施例1中進行描述。
O-α-芐基-N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸可以通過肽合成的標(biāo)準(zhǔn)方法制備。使用容易獲得的N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酸α-芐基酯、S-三苯甲基-L-半胱氨酸和D-苯基甘氨酸為起始原料的方便的合成如下通過與N-羥基琥珀酰亞胺和二環(huán)己基碳二酰亞胺在無水1，4-二氧雜環(huán)己烷中反應(yīng)而作為N-羥基琥珀酰亞胺酯來活化N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酸α-芐基酯。將N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酸α-芐基酯的γ-N-羥基琥珀酰亞胺酯溶解于無水四氫呋喃中，并加入到S-三苯甲基-L-半胱氨酸和三乙胺的水溶液中，以給出O-α-芐基-N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨酸。其作為N-羥基琥珀酰亞胺酯被活化，并與D-苯基甘氨酸偶聯(lián)，以給出所需的O-α-芐基-N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，偶聯(lián)方式與γ-谷氨酸和半胱氨酸之間的偶聯(lián)方式相同。
也可以使用類似的方法但使用不同的活化基團或方法來活化谷氨酸的γ-羧基和/或用于偶聯(lián)的半胱氨酸羧基；正如可以使用以下方法首先進行半胱氨酸-苯基甘氨酸的偶聯(lián)，接著使所得的S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸與N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酸α-芐基酯的偶聯(lián)。也可以使用N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酸的α-羧基的其它保護，條件是最終可以對α-羧基進行去保護，同時保持N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酰基-S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R))-苯基甘氨酸分子的其余部分不受影響。
反應(yīng)圖解2
實施例1.莰佛胺鹽酸鹽的制備N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸，1A。
向裝有過頂機械攪拌器、溫度計和2L恒壓滴液漏斗的5L三口圓底燒瓶中加入O-α-芐基-N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸(500g，590mmol)和甲醇(1L)。攪拌器設(shè)置成中速攪拌，以獲得清澈琥珀色溶液，并在20min內(nèi)加入NaOH水溶液(1.2L，1M，1.2mol)。在這段時間內(nèi)，加入試劑使反應(yīng)混合物放熱，使內(nèi)部反應(yīng)溫度升高到35℃，該溫度在整個添加過程中被維持。開始沉淀出固體但是到添加結(jié)束時固體發(fā)生再溶解。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并攪拌90min，隨后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓除去甲醇(40mbar，最終浴溫35℃)，以獲得N-α-(苯氧羰基)-L-γ-谷氨酰基-S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸的二鈉鹽水溶液。將混合物加入到裝備有過頂機械攪拌器、溫度計和2L恒壓滴液漏斗的5L三口圓底燒瓶中，然后用水(1L)稀釋。將混合物用冰/水浴冷卻至0℃，然后在20min內(nèi)加入鹽酸水溶液(1.3L，1M，1.3mol)。在這段時間中，加入導(dǎo)致固體沉淀，混合物達到的最終pH值為4。將所得的淤漿在0℃下攪拌30min，通過真空過濾收集沉淀，并用水(1L)洗滌。將沉淀溶解于二氯甲烷(3L)中，然后將所得溶液轉(zhuǎn)移到5L分液漏斗中。除去水溶液部分，有機相用水(2×1L)和飽和氯化鈉溶液(1L)洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥(100g)。澄清后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上并在減壓(40mbar，35℃)下除去溶劑，得到琥珀色泡沫。固體產(chǎn)物進一步干燥過夜(40mbar，40℃)，以給出作為白色粉末的N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸，1A(400g，89％的產(chǎn)率)。TLC分析顯示為單點(Rf＝0.50，硅膠，1∶4甲醇/氯仿)。質(zhì)子NMR譜(DMSO-d6)與所提出的結(jié)構(gòu)一致。HPLC分析顯示一個主峰(RT＝22.1min；在30min內(nèi)，20∶80乙腈/0.1M NH4H2PO4水溶液至80∶20乙腈/0.1M NH4H2PO4水溶液；流速＝1.0mL/min；檢測波長220nm；25℃)。
N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，2A。
在吹氮氣下向裝有過頂機械攪拌器、溫度計和恒壓滴液漏斗的12L帶夾套的三口圓底燒瓶中加入N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?S-三苯甲基-L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸(900g×93.7％純度，843.3g，1.11mol)和甲苯(3.6L)。在吹氮氣之后進行攪拌，并加入三氟乙酸(TFA，824mL，11.1mol)。在1h內(nèi)加入聚(甲基氫硅氧烷)(PMHS，270g)，維持25℃的溫度，然后使反應(yīng)混合物再攪拌17h。然后，反應(yīng)通過在1.5h內(nèi)加入1∶1庚烷/甲基叔丁基醚(5.4L)而停止，沉淀出N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸。再攪拌2h后，過濾混合物，用庚烷(3.6L)洗滌沉淀，然后在40℃并在真空下干燥該沉淀。
N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸。精確分子量517.15；MS(API-ES+)m/z 518(M+H+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.78(1H，d，J＝7.2Hz，NH)，8.09(1H，d，J＝8.0Hz，NH)，7.62(IH，d，J＝8.0Hz，NH)，7.36(8H，m)，7.21(2H，m)，5.35(1H，d，J＝7.6Hz)，5.03(2H，s)，4.56(1H，m)，3.98(1H，m)，2.68(1H，m)，2.61(1H，m)，2.26(2H，m)，2.02(1H，m)，1.78(1H，m)。
N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]硫代]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，3A。
在吹氮氣下向裝有過頂機械攪拌器、溫度計和恒壓滴液漏斗的12L帶夾套的三口圓底燒瓶中加入NaOH(49.46g，1.24mol)和甲醇(1.99L)，在氮氣氛下攪拌直至溶解，然后冷卻至約5℃。加入N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?L-半胱氨?；?2(R)-苯基甘氨酸(398.5g×80.3％純度，320g，0.62mol)，隨后加入N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(4-溴苯磺酰氧基)乙酯(1487.5g×63.3％純度，941.6g，1.55mol)在甲苯中的約1M溶液。在氮氣氛下，在5h內(nèi)加入NaOH(56.88g，1.42mol)甲醇(1.99L)溶液，同時將反應(yīng)混合物的溫度維持在5℃，然后使反應(yīng)混合物在此溫度下再攪拌17h。一邊保持冷卻，一邊加入水(1.12L)，用1M的磷酸調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的pH值至6.9，加入甲苯(1.92L)，并加入水(2.72L)。攪拌反應(yīng)混合物，然后進行相分離，并除去甲苯相(含有過量的N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(4-溴苯磺酰氧基)乙酯)。用甲苯(1.92L)洗滌水層，進行相分離后，除去甲苯相。然后在真空下蒸餾水層，以除去甲醇，維持該批料溫度(batch temperature)低于35℃。然后加入乙酸異丙酯(iPAc，1.6L)，將pH值調(diào)節(jié)至6.9，進行相分離，隨后除去乙酸異丙酯相(含有N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2(4-溴苯磺酰氧基)乙酯)。加入乙酸異丙酯(3.2L)，并將pH值調(diào)節(jié)至4.8～4.85，進行相分離，留下乙酸異丙酯相(含有N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]硫代]-L-丙氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸)。將乙酸異丙酯(0.64L)加入到水相中，將pH值調(diào)節(jié)至4.8～4.85，進行相分離，然后將該乙酸異丙酯相與先前pH為4.8～4.85的乙酸異丙酯相合并。向合并的乙酸異丙酯相中加入水(1.6L)，將pH值調(diào)節(jié)至5.25～5.3，進行相分離，然后除去水相。反復(fù)進行水洗，分離出水相后，在真空下蒸餾乙酸異丙酯相，以在進一步處理之前將批量體積降低至約3.15L。N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酰基-3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]硫代]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸就可以通過除去溶劑而從溶液中分離出來。
N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]硫代]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸。精確分子量887.15；MS(API-ES+)m/z 890，888(M+H+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.93(1H，d，J＝7.8Hz，NH)，8.13(1H，d，J＝8.6Hz，NH)，7.60(1H，d，J＝8.2Hz，NH)，7.36(10H，m)，5.35(1H，d，J＝7.8Hz)，5.03(2H，s)，4.66(1H，m)，3.97(3H，m)，3.68(8H，m)，3.30(8H，m)，2.76(3H，m)，2.57(1H，m)，2.25(2H，tn)，1.99(1H，m)，1.76(1H，m)。
N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]磺酰基]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，4A。
在吹氮氣下向裝有過頂機械攪拌器、溫度計和恒壓滴液漏斗的12L夾套的三口圓底燒瓶中加入來自前面步驟的N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]硫代]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸(442.6g，0.50mol)的乙酸異丙酯(2.65L)溶液。在攪拌和氮氣氛下，加入在水(2.66L)中的2KHSO5·KHSO4·K2SO4(OXONETM)(663.9g，1.08mol)溶液，維持溫度為20～30℃，然后將反應(yīng)混合物攪拌過夜以完成氧化過程。分離并除去水相，用水(885L)洗滌乙酸異丙酯相三次，每次洗滌后用淀粉/KI試紙檢測過硫酸鹽的存在。將乙酸異丙酯(2.65L)加入到乙酸異丙酯相中，然后，蒸餾合并后的溶液，以將體積減少到約1.77L。然后加入乙酸異丙酯(1.77L)，溶液通過Karl Fischer滴定進行測試，以確保水含量不超過0.2％。使混合物攪拌過夜，過濾出的N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]磺?；鵠-L-丙氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸，然后在35℃下進行干燥。
N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]磺?；鵠-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸。精確分子量919.14；MS(API-ES+)m/z 924，922，920(M+H+)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.81(1H，d，J＝7.4Hz，NH)，8.41(1H，d，J＝8.2Hz，NH)，7.61(1H，d，J＝8.2Hz，NH)，7.36(10H，m)，5.30(1H，d，J＝7.4Hz)，5.03(2H，s)，4.94(1H，m)，4.25(2H，m)，3.98(1H，m)，3.68(8H，m)，3.54(3H，m)，3.33(9H，m)，2.25(2H，m)，1.99(1H，m)，1.78(1H，m)。
莰佛胺鹽酸鹽在2L高壓釜中，通過以下方法對在乙酸異丙酯(350mL)中的碳載鈀(5％，26.25g)進行預(yù)還原進行三循環(huán)的氮氣吹掃(真空、氮氣、釋放)，接著三循環(huán)的氫氣充入(3.4bar)和釋放，在最后一次氫氣充入后將混合物攪拌30min，接著進行另一次吹氮氣。將N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]-乙基]磺?；鵠-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸(190.6g×91.89％純度，175g，190mmol)溶解于乙酸異丙酯(700mL)和水(53.9mL)中，并將溶液加入到高壓釜內(nèi)。重復(fù)進行三個循環(huán)氮氣吹掃，接著進行兩循環(huán)的氫氣充入和釋放，然后用氫氣將高壓釜加壓至3.4bar，加熱到30℃，并在此溫下保持7.7h，通過HPLC監(jiān)控反應(yīng)的完成。通過硅藻土(CELITETM)來過濾反應(yīng)混合物，以除去催化劑，過濾器用乙酸異丙酯(2×175mL)洗滌。合并的濾液和沖洗液通過真空蒸餾和再次加入乙酸異丙酯使脫水，然后，將溶液再濃縮到最終溶液質(zhì)量為485.7g。向溶液中加入二氯甲烷(350mL)，接著通入氯化氫氣體(8.37g)，并用甲基叔丁基醚(858mL)稀釋。攪拌2.5h后，過濾反應(yīng)混合物；并用甲基叔丁基醚(2×576mL)洗滌莰佛胺鹽酸鹽殘留物，然后在55℃并在真空下干燥。
莰佛胺鹽酸鹽。精確分子量785.10；MS(API-ES+)m/z 800，788，786(M+H+)；1H NMR(300MHz，DMSC-d6)δ8.81(1H，d，J＝7Hz，NH)，8.62(1H，d，J＝7Hz，NH)，8.4(2H，bs)，7.35(5H，m)，5.31(1H，d，J＝7Hz)，4.95(1H，m)，4.36(2H，J＝6Hz，q)，3.87(1H，J＝6Hz，t)，3.66(8H，m)，3.57(3H，m)，3.31(9H，m)，2.50(1H，s)，2.35(1H，m)，2.02(2H，m)。
實施例2.N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨酰基-3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]乙基]磺?；鵠-L-丙氨酰基-2(R)-苯基甘氨酸，4A，的細胞毒性活性。
該實施例舉例說明了N-α-(芐氧羰基)-L-γ-谷氨?；?3-[[2-[[二[二(2-氯乙基)氨基]氧膦基]氧代]乙基]磺酰基]-L-丙氨?；?2(R)-苯基甘氨酸，化合物4A，對體外人體癌細胞系的有益效果。這些結(jié)果被認為預(yù)示著在人體癌癥化療中的效果，因為在這些分析中試驗的其它抗癌劑如莰佛胺已經(jīng)顯示出在人體中的抗癌活性。
人體癌細胞系HL-60(前髓細胞性白血病)和MX-1(乳腺癌)獲自美國馬里蘭州貝塞斯達的國家癌癥研究所。CellTiter-Glo分析試劑盒獲自美國威斯康星州麥迪遜Promega公司，并根據(jù)制造商的指示說明使用。所有分析在三個相同的孔中進行，同時用二甲亞砜(DMSO)溶劑對照。細胞生長的程度被表達為來自溶劑對照孔(solvent control well)的信號的百分數(shù)。
Log-階段細胞被胰蛋白酶化，通過離心收集，再懸浮于小體積的新鮮介質(zhì)中，在錐蟲藍染色后測定活細胞的密度。細胞被稀釋在新鮮介質(zhì)(對于HL-60為5×103細胞/mL而對于MX-1細胞為3×103細胞/mL)中，在稀釋使最終的DMSO濃度為0.5％之后，立即加入化合物4A(濃度為0.1至200μM之間，溶解于DMSO中，50μL)，然后以150μL/孔向96-孔板加入懸浮液，培養(yǎng)數(shù)小時，以允許在粘附細胞的情況下粘連。培養(yǎng)細胞大約三個倍增時間(3天)。然后通過離心收集細胞，用CellTiter-Glo劑代替100μL的培養(yǎng)基上清液。在室溫下培養(yǎng)15min之后，孔板用光度計解讀。以對細胞系的IC50表示的化合物4A的活性為HL-60，2.2μM，和MX-1，34.6μM。化合物在這種分析中與莰佛胺大約具有一樣的效力。
實施例3.制劑和治療實施例用于口服給藥的固體制劑通過組合以下物質(zhì)而制備化合物4A25.0％w/w硬脂酸鎂0.5％w/w淀粉2.0％w/w
羥丙基甲基纖維素1.0％w/w微晶纖維素 71.5％w/w將該混合物壓成片劑或填充到硬明膠膠囊中，例如含有250mg的化合物4A。如果有必要，則可以通過施加成膜劑(例如，羥丙基甲基纖維素)、顏料(例如，二氧化鈦)、以及增塑劑(例如，鄰苯二甲酸二乙酯)的懸浮液對片劑進行涂敷，并通過蒸發(fā)溶劑來干燥該膜。
用于IV給藥的制劑是通過在磷酸鹽緩沖鹽水中將化合物4A(例如以藥用鹽形式)溶解至1％w/v的濃度；并將該溶液消毒殺菌(例如通過滅菌過濾)，然后密封在無菌容器中，其中容納例如250mg的本發(fā)明化合物。
可替換地，通過將化合物4A(又例如以藥用鹽形式)溶解在合適的緩沖液(例如上述磷酸鹽-緩沖鹽水的磷酸鹽緩沖液)中，對該溶液進行滅菌，然后將其分配到合適的無菌小瓶中，凍干該溶液以除去水，并密封該小瓶而制得凍干制劑?？赏ㄟ^加入消毒水重配該凍干制劑，并且該重配的溶液可以進一步用例如0.9％的氯化鈉靜脈注射液或5％的葡萄糖靜脈注射液的溶液加以稀釋以用于給藥。
將稀釋在5％的葡萄糖靜脈注射液中的化合物4A，在30min內(nèi)以100mg/m2的初始劑量靜脈注射給藥至患有代謝卵巢癌的患者；并將該劑量增大至250mg/m2、500mg/m2、750mg/m2、以及1000mg/m2。以1周的間隔期給予該化合物。以2周和3周的間隔期將相同的劑量增加給藥至患有同樣癌癥的其他患者。
雖然已結(jié)合具體實施方式
和實施例描述了本發(fā)明，但對參考了該技能和本披露內(nèi)容的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是顯而易見的具體披露的物質(zhì)和方法的等同替換也可用于本發(fā)明；并且這些等同替換包括在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種以下結(jié)構(gòu)式的化合物或其鹽 其中R1是氨基保護基團。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中，R1是芐氧羰基。
5.一種以下結(jié)構(gòu)式的化合物或其鹽 其中R1是氨基保護基團。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的化合物，其中，R1是芐氧羰基。
9.一種以下結(jié)構(gòu)式的化合物或其鹽 其中R1是氨基保護基團。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中，R1是芐氧羰基。
13.一種以下結(jié)構(gòu)式的化合物或其鹽 其中R1是氨基保護基團，而R2是硫保護基團。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化合物，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物，其中，R2是可酸解除去的硫保護基團。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的化合物，其中，R2是(可選取代的苯基)-取代的甲基。
18.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中，R1是芐氧羰基，而R2是三苯甲基。
19.一種制備莰佛胺或其鹽的方法，包括對權(quán)利要求1至4中任一項所述的化合物進行去保護，可選地接著形成莰佛胺的鹽。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述去保護包括催化還原或異構(gòu)化。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述去保護包括在碳載鈀存在下與氫氣反應(yīng)。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述反應(yīng)在水存在下在乙酸異丙酯中進行。
23.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述莰佛胺的鹽酸鹽通過通入氯化氫氣體形成。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，進一步包括在通入所述氯化氫氣體后加入甲基叔丁基醚。
25.一種制備權(quán)利要求1所述化合物的方法，包括氧化以下結(jié)構(gòu)式的化合物 其中R1是氨基保護基團。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，R1是芐氧羰基。
29.根據(jù)權(quán)利要求25至28中任一項所述的方法，其中，所述氧化包括與過硫酸鹽反應(yīng)。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述過硫酸鹽是2KHSO5·KHSO4·K2SO4。
31.一種制備權(quán)利要求5的化合物的方法，包括使以下結(jié)構(gòu)式的化合物在堿性條件下與N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯反應(yīng) 其中R1是氨基保護基團。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，R1是芐氧羰基。
35.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯是N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-((可選取代的)-苯磺酰氧基)乙酯。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中，所述N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-((可選取代的)-苯磺酰氧基)乙酯是N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(4-溴苯磺酰氧基)乙酯。
37.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中，所述N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯以過量使用。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中，所述N，N，N′，N′-四(2-氯乙基)二氨基磷酸2-(A-磺酰氧基)乙酯至少過量2倍使用。
39.根據(jù)權(quán)利要求31至38中任一項所述的方法，其中，所述堿性條件包括C1～6烷醇中的堿金屬氫氧化物。
40.一種制備權(quán)利要求9的化合物的方法，包括對以下結(jié)構(gòu)式的化合物的硫原子進行去保護 其中R1是氨基保護基團，而R2是硫保護基團。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中，R1是可催化除去的氨基保護基團，而R2是可酸解除去的硫保護基團。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中，R1是(可選取代的芐基)氧羰基或(可選取代的烯丙基)氧羰基。
43.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中，R2是(可選取代的苯基)-取代的甲基。
44.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中，R1是芐氧羰基，而R2是三苯甲基。
45.根據(jù)權(quán)利要求40至44中任一項所述的方法，其中，所述去保護包括與酸和硅烷反應(yīng)。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中，所述去保護過程包括與三氟乙酸和聚(甲基氫硅氧烷)反應(yīng)。
47.一種含有權(quán)利要求1至4中任一項的化合物的藥物組合物。
48.權(quán)利要求1至4中任一項的化合物在用于制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
49.一種治療哺乳動物癌癥的方法，包括向所述哺乳動物給予權(quán)利要求1至4中任一項的化合物。
全文摘要
制備莰佛胺及其鹽的方法和制備過程中的中間體，包含一些中間體的藥物組合物，以及它們作為抗癌藥的用途。
文檔編號A61P35/00GK101080251SQ200580042860
公開日2007年11月28日 申請日期2005年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月21日
發(fā)明者威廉·A·布朗熱, 史蒂文·J·科利爾, 斯蒂芬·A·伊斯特漢, 丹尼斯·L·伊迪, 羅南·Y·蓋韋爾, 佩德里·E·埃爾南德斯阿瓦德, 詹森·R·海若, 漢斯·J·謝爾斯高, 哈羅德·梅克勒, 羅伯特·E·波沃姆斯基, 史蒂文·R·修, 帕維爾·E·日奇金 申請人:泰立克公司