專利名稱：：穩(wěn)定的^99mTc組合物的制作方法穩(wěn)定的"mTc組合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及穩(wěn)定的"mTc-替曲膦的"mTc放射性藥物組合物，其包括抗壞血酸或抗壞血酸鹽輻射防護劑，不存在抗微生物防腐劑。還公開了適于批量制備多單位患者劑量的9^Tc-替曲膦放射性藥物組合物的凍干試劑盒，以及由凍干散裝瓶(bulkvial)制備這樣單位劑量的方法。技術(shù)背景基于放射性同位素锝-99m("""Tc)的診斷成像放射性藥物是已知用于各種臨床診斷，包括功能研究(例如，腎臟)、灌注(特別是心和腦)。放射性同位素99mTc具有6小時的半衰期，由此這樣的99mTc放射性藥物通常是由所謂的"試劑盒"制得的。這些用于制備99mTc放射性藥物的試劑盒允許使用者保存非放射性的原料、包含必需的反應試劑的凍干小瓶，其是設計用來自供應的99mTc的99mTc-高锝酸鹽(Tc04—)重建，以容易的方式得到需要的無菌的99mTc放射性藥物。通過本領(lǐng)域已知的無菌鹽水洗脫锝生成器得到99mTc-高锝酸鹽的等滲鹽水的無菌溶液。用于制備99mTc放射性藥物的試劑盒通常包含(i)與""^c形成金屬絡合物的配體，(ii)生物相容性的還原劑，其能夠還原高锝酸鹽，即Tc(VII)成較低氧化態(tài)的期望的99mTc金屬絡合物產(chǎn)品。用于99mTc高锝酸鹽的生物相容性的還原劑通常是亞錫離子，即Sn(II)。試劑盒可以含有另外的賦形劑如弱的螯合劑(如葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、酒石酸鹽、膦酸鹽或EDTA);穩(wěn)定劑；pH-調(diào)節(jié)劑；緩沖劑；增溶劑或填充劑(如甘露醇、肌醇或氯化鈉)，以便于試劑盒組分的操作和凍干。為了便于貯藏和分配，非放射性的試劑盒通常是以具有關(guān)閉物(closure)的無菌小瓶的形式冷凍干燥地提供。此凍干制劑還允許實際用戶用無菌的99mTc-高锝酸鹽的鹽水容易地重建，以得到期望的人用的無菌、可注射的""^c放射性藥物。非放射性的锝試劑盒的貯藏壽命可以為數(shù)月。放射性藥物組合物可能因輻解作用而受損，特別是溶劑(通常是水)，后果是產(chǎn)生了高活性的自由基，其可能降解重建后試劑盒組合物的一個或多個組分。使用輻射防護劑或自由基清除劑來幫助抑制這樣的降解是已知的。通常，自由基清除劑是選自已知類型的抗氧劑化合物。在US4,364,920中公開了抗壞血酸和抗壞血酸鹽是作為制備99mTc放射性藥物的含亞錫的非放射性的試劑盒的穩(wěn)定劑起作用，隨后已經(jīng)廣泛地應用于99mTc放射性藥物制劑。用于99mTc放射性藥物的龍膽酸穩(wěn)定劑公開于US4,233,284中。用于99mTc放射性藥物制劑的對-氨基苯甲酸(PABA)和相關(guān)的穩(wěn)定劑在US4,451，451中公開了。MyoviewTM試劑盒是10ml的小瓶，其含有凍干配方替曲膦0.23mg氯化亞錫二水合物30嗎磺基水楊酸二鈉0.32mgD-葡糖酸鈉1.0mg碳酸氬鈉1.8mg重建的pH8.3-9.1其在氮氣USP/NF下密封在10ml的玻璃小瓶中，一旦用無菌的(99mTc)高锝酸鈉注射液USP/Ph.Eur重建時，得到含有心臟成像的放射性藥物99mTc-替曲膦的溶液。因此，MyoviewTM試劑盒不含有輻射防護劑。MyoviewTM的現(xiàn)成注射或"共扼物(conjugate)"制劑，自1997年已經(jīng)在日本銷售。這種"共軛物"形式含有在注射器小瓶的水溶液中預制"""Tc-替曲膦锝絡合物，即含有分離的注射器內(nèi)芯和針頭的小瓶，其設計來容易地裝配，以得到含有放射性藥物的注射器。MyoviewTM"共軛物"溶液含有濃度為1.36mg/ml(7.7亳摩爾)的抗壞血酸。Bastien等人[Nucl.Med.Comm.，20，480-Abstract84(1999)^艮道了，向MyoviewTM試劑盒中加入鹽水和高锝酸鹽的順序可影響99mTc-替曲膦的放射化學純度(RCP)。Murray等人[Nucl.Med.Comm.,21，845-849(2000)]報道了，在重建過程中，MyoviewTM小瓶的液面上空間存在的太多氮氣可能導致變化的RCP結(jié)果，由于不期望的放射化學雜質(zhì)。Murray等人和MyoviewTM試劑盒的包裝說明書主張，在重建過程中有意地把空氣引入小瓶中以排除這些問題。這是如下實現(xiàn)的，當孔針就緒時通過抽取2ml的液面上空間氣體，以致2ml的空氣引入小瓶中。據(jù)信，問題的原因是減少的自身輻解，引入氧氣抑制了這樣的降解。Patel等人[J.Nucl.Med.Technol"26(4)，269-273(1998)]4艮道了商購的MyoviewTM小瓶的研究結(jié)果，并推論用制造商的放射性的上限(最高至18GBq的"mTc)重建兩次是成功的，但是未能澄清對于所用的99mTc-高锝酸鹽生成器洗脫物施加何種限制。如此巨大的放射性水平據(jù)說是給予工作人員減少的放射暴露的益處(一種制劑代替多種制劑)及QC結(jié)果的減少的變異性。Murray等人(引用如上)事實上報道了，超過MyoviewTM包裝說明書的放射性濃度的使用，導致差的RCP結(jié)果。WO02/053192公開了穩(wěn)定的放射性藥物組合物，其包含(i)"""Tc金屬絡合物；(ii)輻射防護劑，其包含抗壞血酸、對氨基苯甲酸或龍膽酸或其與生物相容性陽離子形成的鹽；(iii)一種或多種式(I)的抗微生物防腐劑，其中R是d—4烷基，M是H或生物相容性陽離子。WO02/053192的實施例包括，通過向常規(guī)的MyoviewTM試劑盒中加入輻射防護劑和抗微生物防腐劑溶液來制得穩(wěn)定的99mTc-替曲膦絡合物組合物。含有替曲膦和輻射防護劑的凍干試劑盒的非特異性的實施例，公開于WO02/053192中。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明本發(fā)明涉及制備穩(wěn)定的"mTc-替曲膦放射性藥物組合物的試劑盒，以及制備單位劑量的"mTc-替曲膦的方法。解決99mTc放射性藥物試劑重建后具有延長的有效性的問題意味著在重建時，""^c放射性的起始水平必須很高。這是因為99mTc6小時的半衰期意味著有一半的用于診斷成像的放射性在每6小時會經(jīng)放射性衰退而丟失，因此，12小時后僅僅保留原始放射性的1/4。對于99mTc放射性藥物組合物來說，這樣高水平的延長時間的放射性會造成顯著的潛在輻解問題。因此本發(fā)明的組合物中包括輻射防護劑。99mTc-替曲膦活性成分易受還原劑(其存在以幫助影響99mTc的標記)的還原作用的降解和輻解的影響。通過使用本發(fā)明穩(wěn)定的組合物，有可能延長放射標記后的有效壽命，甚至增加""^c放射性活性水平。發(fā)明詳述在第一方面，本發(fā)明提供了一種凍干的非放射性的試劑盒，其一旦用99mTc-高锝酸鹽溶液重建時，則得到穩(wěn)定"mTc-替曲膦放射性藥物組合物，該試劑盒具有包含下列組分的配方(i)替曲膦；(ii)輻射防護劑，其選自抗壞血酸或其與生物相容性陽離子形成的鹽；(iii)生物相容性還原劑；(iv)pH-調(diào)節(jié)劑，其用量有效地確保，當試劑盒用鹽水重建時，得到的溶液具有8.0-9.2范圍的pH;條件是，試劑盒或99mTc-替曲膦放射性藥物組合物都不含抗微生物防腐劑。術(shù)語"替曲膦"指的是醚取代的二膦螯合劑1,2-二[二(2-乙氧基乙基)膦基)I乙烷；如下所示其用于商購的99mTc試劑盒中，以制備"mTc-替曲膦，即，稱為MyoviewTM的"mTc(0)2(替曲膦)2+。術(shù)語"福射防護劑"指的是指通過捕獲高活性自由基(例如由水輻解產(chǎn)生的含氧自由基)抑制降解反應(例如氧化還原反應)的化合物。本發(fā)明的輻射防護劑合適地選自抗壞血酸及其與生物相容性陽離子形成的鹽。術(shù)語"生物相容性陽離子"是指與離子化的負電荷陰離子基團形成鹽的正電荷抗衡離子，其中所述正電荷抗衡離子在所需劑量時還是非毒性的，因此適合給藥于哺乳動物體，特別是人體。合適的生物相容性陽離子的實例包括堿金屬鈉或鉀；堿土金屬釣和鎂；以及銨離子。優(yōu)選的生物相容性陽離子是鈉和鉀，最優(yōu)選是鈉。術(shù)語"生物相容性還原劑"是指適于把Tc(VII)高锝酸鹽還原成較低氧化態(tài)锝的還原劑，其在所需劑量時還是非毒性的，因此適合給藥于哺乳動物體，特別是人體。合適的這種還原劑包括連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、曱脒亞磺酸、亞錫離子、Fe(II)或Cu(I)。生物相容性還原劑優(yōu)選是亞錫鹽如氯化亞錫或酒石酸亞錫。術(shù)語"冷凍干燥，，具有常規(guī)的意義，即凍干組合物，優(yōu)選是以無菌方式制得的。術(shù)語"抗微生物防腐劑"指的是抑制潛在有害的微生物(例如細菌、酵母菌或霉菌)生長的試劑。所述抗微生物防腐劑還可以顯示某些殺菌特性，其特性取決于劑量?？刮⑸锓栏瘎?們)通常是用于微生物在重建后放射性藥物組合物(即在放射性診斷產(chǎn)品自身)中的生長。然而，所述抗微生物防腐劑還可以有時用于抑制潛在有害的微生物在所述非放射性試劑盒重建前的一種或多種成分中的生長?？刮⑸锓栏瘎?們)包括對羥苯曱酸酯，即對羥苯曱酸甲基、乙基、丙基或丁基酯或其混合物，節(jié)醇、苯盼、甲盼、溴化十六烷基三甲銨和硫柳汞。某些這樣的抗微生物防腐劑太易于揮發(fā)而不能存在于冷凍干燥(例如節(jié)醇或苯酚)，或者具有非常低的水溶性。這就使它們并入凍干試劑盒是有問題的，所述凍干試劑盒是設計來用水性溶劑重建得到放射性藥物溶液。某些這樣的抗微生物防腐劑還可以和"mTc形成金屬絡合物，因此可以不利地影響"""Tc-替曲膦的放射化學純度(RCP)，以及其生物學分布。制劑中抗微生物防腐劑的存在還增加了試劑盒儲藏期間化學上不相容性問題的風險，例如由于氧原子或硫原子被替曲膦的膦提取(abstraction)。這樣的試劑盒是設計來獲得適于給藥人類的無菌的放射性藥物產(chǎn)品，例如，通過直接注射進入血流。凍干試劑盒是設計來用來自99Tc放射性同位素生成器的無菌99mTc-高锝酸鹽(Tc04-)溶液重建，以得到無需進一步處理適于人類給藥的溶液。99mTc-高锝酸鹽溶液是以生物相容性載體的形式提供的。"生物相容性的載體"是流體，特別是液體，放射性藥物懸浮或溶解于其中，這樣以致于組合物是生理學上可耐受的，即可以給藥于哺乳動物體，無毒性或無過度的不適。生物相容性栽體是適于注射用的載體液體如無菌、無熱源的注射用水；水性溶液如鹽水(其可以有利地被平衡以致于注射用的最終產(chǎn)品是等滲的或非低張的)；一種或多種張力調(diào)節(jié)物質(zhì)的水性溶液(例如，等離子體(plasma)陽離子與生物相容性抗衡離子的鹽)，糖類(例如，葡萄糖或蔗糖)，糖醇類(例如，山梨糖醇或甘露醇)，二醇類(例如，甘油)，或者是其他的非離子多元醇物質(zhì)(例如，聚乙二醇、丙二醇等)。生物相容性載體還可以包含生物相容性有機溶劑如乙醇。這樣的有機溶劑是用于溶解更親脂性化合物或制劑。優(yōu)選地，生物相容性載體是無熱源的注射用水、等滲的鹽水或水性乙醇溶液。如上指出的，靜脈注射的生物相容性載體的pH適于在4.0-10.5的范圍。生物相容性載體優(yōu)選含有水性溶劑，更優(yōu)選含有等滲的鹽水溶液。使用本發(fā)明的生物相容性載體，在不存在抗微生物防腐劑的情況下。本發(fā)明的試劑盒包含含有第一實施方案的組合物的適合容器。替曲膦可以是游離堿或酸式鹽的形式，或者可以是替曲膦非放射性的金屬絡合物，一旦加入锝，其經(jīng)過金屬轉(zhuǎn)移作用(即，金屬交換)得到想要產(chǎn)品。替曲膦優(yōu)選是游離堿的形式。適合的容器是那些，其是密封的，并因此允許保持無菌完整性和/或放射安全性，加上任選的惰性液面上空間氣體(例如，氮氣或氬氣)，同時還允許用注射器加入和抽取溶液。優(yōu)選的這樣的容器是隔膜密封的小瓶，其中氣密性的關(guān)閉物是用罩密封(overseal)(通常是鋁)壓褶上的(crimped)。所述的容器具有另外的好處，即如果需要，關(guān)閉物可以經(jīng)得起真空，例如以改變液面上空間氣體或給溶液脫氣。非放射性的試劑盒可任選進一步含有另外的組分如轉(zhuǎn)螯合劑(transchelator)、pH-調(diào)節(jié)劑或填充劑。"轉(zhuǎn)螯合劑"是一種化合物，其與锝快速反應形成弱絡合物，然后被配體取代。這使得由于高锝酸鹽的快速還原與锝絡合的竟爭導致形成還原的水解锝(RHT)的風險最小。適宜的這樣的轉(zhuǎn)螯合劑為有機酸與生物相容陽離子的鹽，特別是"弱有機酸"的鹽，即pKa為3到7的有機酸與生物相容性陽離子的鹽。適宜的這樣的弱有機酸為乙酸、檸檬酸、酒石酸、葡糖酸、葡庚糖酸、苯甲酸、酴類或者膦酸類。因此，適宜的鹽為乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯曱酸鹽、酴鹽或膦酸鹽。優(yōu)選的這些鹽是酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯甲酸鹽，或膦酸鹽，最優(yōu)選膦酸鹽、最尤其二膦酸鹽。優(yōu)選的這些轉(zhuǎn)螯合劑是葡糖酸與生物相容性陽離子形成的鹽，特別是葡糖酸鈉。另外優(yōu)選的轉(zhuǎn)螯合劑是5-磺基水楊酸或其與生物相容性陽離子形成的鹽。兩種或多種轉(zhuǎn)螯合劑可以是聯(lián)合使用，且本發(fā)明的替曲膦試劑盒最優(yōu)選包含5-磺基水楊酸鈉和葡糖酸鈉的組合。術(shù)語"pH-調(diào)節(jié)劑"指的是用于確保重建試劑盒的pH是在給藥人或哺乳動物的可接受的界限(約pH4.0到10.5)內(nèi)的化合物或者化合物的混合物。適宜的這樣的pH調(diào)節(jié)劑包括藥學上可接受的緩沖劑，如兩性離子緩沖劑(tricine)、磷酸鹽或者TRIS[即三(羥基甲基)氨基曱烷]，及藥學上可接受的堿，如碳酸鈉、碳酸氫鈉或者其混合物。用于本發(fā)明的替曲膦試劑盒的優(yōu)選的pH-調(diào)節(jié)劑是碳酸氫鈉。術(shù)語"填充劑，，是指藥學上可接受的填充劑(bulkingagent)，其可以促進在生產(chǎn)和凍干期間的材料處理。適宜的填料包括無機鹽，如氯化鈉，和水溶性糖或者糖醇，如蔗糖、麥芽糖、甘露醇或者海藻糖。某些pH-調(diào)節(jié)劑可以作為填充劑。優(yōu)選的這樣的雙功能的填料是碳酸氫鈉。本發(fā)明優(yōu)選的試劑盒包含促進凍干的填料。優(yōu)選的這樣的填料本發(fā)明的替曲膦試劑盒是雙功能填料碳酸氫鈉。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明的試劑盒中摻入輻射防護劑給予好處，即是99mTc-替曲膦絡合物是以良好的RCP制得，并具有制備后最高達12小時的良好的重建后穩(wěn)定性，無需現(xiàn)有技術(shù)和MyoviewTM包裝說明書教導的空氣加入步驟。這是一種有用的簡化處理，因為其除去了一個加工步驟，其意味著一種更少的操作并因此對操作員產(chǎn)生減少的放射劑量，以及更快和更容易地實施。在放射藥物學實踐中，空氣加入步驟還是有點獨特，因此存在風險，其可能不注意地被忽略，結(jié)果是對RCP產(chǎn)生不利影響。用于本發(fā)明的試劑盒的輻射防護劑的濃度適于是0.0003-0.7摩爾，優(yōu)選是0.001-0.07摩爾，最優(yōu)選是0.0025-0.01摩爾。對于抗壞血酸而言，這相當于適合的濃度0.05-100mg/cm3,優(yōu)選是0.2-10mg/cm3，最優(yōu)選是0.4-1.5mg/cm3。當本發(fā)明的"mTc-替曲膦放射性藥物給藥于人類時，所用的適量的放射性的范圍是185-1，221MBq(5-33mCi)。對于心臟成像而言，當支托(rest)和應力注射在相同天給給予時，第一劑量應當是185-444MBq(5-12mCi)，接著大約1-4小時后給予第二劑量555-1221MBq(15-33mCi)。因此，本發(fā)明穩(wěn)定的99mTc放射性藥物組合物中開始的99mTc活性是0.2-100GBq，甚至在考慮到99mTc的放射性衰變之后，其允許多次給藥相同的制劑。本發(fā)明的凍干試劑盒優(yōu)選是這樣配制的，以致于用水或鹽水重建的溶液的pH是8.0-9.2，最優(yōu)選是8.0-8.6。這就意味著，當輻射防護劑是抗壞血酸即是一種酸時，需要調(diào)節(jié)pH調(diào)節(jié)劑的量。這就需要確保維持試劑盒的最佳pH，因為99mTc放射標記的替曲膦；重建后穩(wěn)定劑和患者給藥的適應性。實施例2給出了優(yōu)選30ml小瓶包裝規(guī)格的這樣的試劑盒制劑，其顯示了碳酸氫鈉的量必須是按比例增加顯著地超過常規(guī)的MyoviewTM的10ml小瓶制劑。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，對于30ml小瓶的試劑盒，增加抗壞血酸的量至5.5mg/小瓶或減少碳酸氫鈉的量至10mg/小瓶，導致了凍干餅具有不能接受的視覺外觀。這據(jù)信是由于抗壞血酸的低玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(~541C)，其有可能降低了制劑的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。因此，對于可以加入的抗壞血酸的量存在上限，如果制備可接受的凍干試劑盒。發(fā)現(xiàn)相當高水平的碳酸氫鈉對于調(diào)節(jié)抗壞血酸是必須的，然而還給予可接受的凍干填料(plug)。本發(fā)明的輻射防護劑是從若干供應商處市售購得的。替曲膦可以根據(jù)Chen等人[Zhong.Heyix.Zazhi，.17(1)13-15(1997)]或Reid等人Synth.Appl.Isotop丄ab.Comp"笫7巻，252-255(2000)]所述的制得。常規(guī)的合成涉及首先制得1,2-二(膦基)乙烷或H2PCH2CH2PH2，接著加入過量的乙基乙烯基醚的自由基，使用如實施例1所述的自由基引發(fā)劑。在第二個方面，本發(fā)明提供了多劑量的試劑盒，其包含第一個實施方案的凍干制劑，以密封的、無菌的裝備關(guān)閉物的容器形式，其允許加入和抽取溶液同時保持無菌完整性；其中試劑盒這樣配制的，以便可以從單個試劑盒中獲得4-30個單位患者劑量的99mTc-替曲膦放射性藥物。多劑量試劑盒必須是足夠堅固的經(jīng)得起相當高水平的放射性；而且還是比常規(guī)MyoviewTM試劑盒更大的容積的溶液。多劑量小瓶的容器適當?shù)厥?0-50cm3容積，優(yōu)選是20-40cm3，最優(yōu)選是30113容積。容器配備有氣密性的密封圈，其適于用皮下注射針頭多次穿刺(例如，壓皺的隔膜密封關(guān)閉物)。多劑量試劑盒包含用于多個患者劑量的足夠的物質(zhì)(例如，每瓶最高達IOOGBqW99mTc)，借此，在穩(wěn)定制劑的有效期之內(nèi)的在不同的時間間隔，單位患者劑量因此可以被抽取進臨床級的注射器，以適合臨床情形。單位劑量的"mTc-替曲膦放射性藥物可以可供選擇地以上述的密閉容器的形式的提供。術(shù)語"單位患者劑量"或"單位劑量"是指具有適于給藥單個病人之后在體內(nèi)成像的99mTc放射性含量的99mTc-替曲膦放射性藥物組合物。這樣的"單位劑量，，進一步在(以下的)第5個實施方案中描述。本發(fā)明的多劑量試劑盒是配制成適于得到4-30，優(yōu)選是6-24的這種單位劑量的99mTc-替曲膦放射性藥物，以用于""^c生成器洗脫物的范圍的可重現(xiàn)的方式。然而，使用多劑量試劑盒以得到1-40，可能甚至是超過40的這樣的單位劑量將是有可能的。如同第一個實施方案一樣，第二個實施方案的多劑量試劑盒在重建的方案中不需要空氣加入步驟，其是非常有利的。本發(fā)明的多劑量試劑盒還允許更加快速制備時間用于多種99mTc-替曲膦放射性藥物制劑，并且實質(zhì)上降低了操作者的放射劑量。多劑量試劑盒還顯示了至少78周的增加的保存期穩(wěn)定性，然而常規(guī)的MyoviewTM試劑盒具有37周的保存期穩(wěn)定性。多劑量試劑盒的進一步的好處是描述在第三個實施方案的方法中(以下)。在第三個方面，本發(fā)明提供了一種制備多單位患者劑量的放射性藥物"mTc-替曲膦的方法，該方法(i)用99mTc-高锝酸鹽的無菌溶液或首先是生物相容性載體接著99mTc-高锝酸鹽的無菌溶液重建第二實施方案的多劑量試劑盒；(ii)在抗微生物防腐劑存在下，任選進行步驟(i);(iii)使99mTc替曲膦絡合物形成，以得到含大批供應的期望的99mTc替曲膦放射性藥物的溶液；(iv)任選檢查大批供應的99011^替曲膦絡合物的放射化學純度；(v)從步驟(iii)的大批供應中抽取單位劑量進適合的注射器或容器；(vi)在較后的時間，用另外的注射器或容器重復步驟(v)，得到進一步的單位劑量。單位劑量如第一個實施方案(以上)所定義的，并且在第四個實施方案中更充分地描述(以下)。生物相容性栽體及其優(yōu)選的實施方案是如第一個實施方案定義的(以上)。用于此方法的優(yōu)選的生物相容性載體是無菌鹽水溶液。該方法優(yōu)選是在無抗微生物防腐劑存在下進行。99mTc-高锝酸鹽的無菌溶液是優(yōu)選從锝發(fā)生器(generator)獲得的。步驟(i)中所用的99mTc-高锝酸鹽的放射性含量適當?shù)厥?-100GBq，優(yōu)選地是5-75GBq。99mTc的放射性濃度優(yōu)選是不超過10GBq/cm3，最優(yōu)選是不超過2.5GBq/cm3。一旦制得，大批供應的期望的"""Tc替曲膦放射性藥物具有最高至12小時的可用的貯藏壽命。"mTc替曲膦絡合物形成，即步驟(iii)，通常是在室溫下15分鐘內(nèi)完成的。本發(fā)明的方法相對于重建多Myoview10ml小瓶的選擇性方案具有的優(yōu)點在于(a)涉及放射性("mTc-高锝酸鹽)操作的數(shù)量是顯著減少的；(b)不需要空氣加入步驟；(c)同每個劑量的QC測定相比，僅僅需要每批單位劑量的單個QC測定；(d)散裝小瓶是以這樣的方式配制，以便制劑可以經(jīng)得起""Tc發(fā)生器洗脫條件的范圍；(e)包括更少的步驟，那么更容易自動化；(f)需要更少的非放射性的試劑盒小瓶，那么節(jié)約了電冰箱的貯藏空間。關(guān)鍵的結(jié)果是減少操作者加工時間(即，效率)，并降低了操作者放射劑量，其中將要制得的單位劑量的數(shù)目越大，所述放射劑量更大。在第四個方面，本發(fā)明提供了穩(wěn)定的放射性藥物組合物，其包含(i)生物相容性載體中的替曲膦的"mTc絡合物；(ii)0.5-6.0亳摩爾濃度的輻射防護劑，其選自抗壞血酸或其與生物相容性陽離子的鹽；條件是，放射性藥物組合物不含抗微生物防腐劑。"生物相容性載體"及其優(yōu)選的實施方案是如上定義的。毫摩爾(mmolar)的濃度是這樣的，1.0mmolar等于0.001molar。輻射防護劑的濃度優(yōu)選是在0.6-5.7mmolar，最優(yōu)選是0.7-5.5mmolar。這些符合當?shù)谝粋€實施方案的優(yōu)選試劑盒用需要體積范圍的含""^c-高锝酸鹽的鹽水重建時得到的濃度范圍。輻射防護劑的這些濃度還是低于在日本可得到的MyoviewTM"共軛物"溶液制劑中所用的那些。穩(wěn)定組合物的優(yōu)選輻射防護劑是如第一個實施方案定義的。穩(wěn)定組合物的pH優(yōu)選是7.5-9.0，最優(yōu)選是8.0-8.6范圍。在第五個方面，本發(fā)明提供了單位患者劑量的放射性藥物""^c-替曲膦，其包含第四個實施方案的組合物，具有適于單個患者成像的"""Tc放射性含量。單位患者劑量是如第一個實施方案定義的，以適于人類給藥的無菌形式在適合的容器或注射器中提供。這樣的注射器適于臨床使用，優(yōu)選用完即丟棄，以便注射器將僅用于單個患者。該注射器可以任選地裝配注射器隔離罩(shield)，防止操作者免受放射劑量。適合的這樣的放射性藥物注射器隔離罩是商購的，優(yōu)選地包含鉛或鴒，如Logan[J.Nucl.Med.Technol，21.(3)，167-170(1993)所述。單位劑量的99mTc-替曲膦放射性藥物可以選擇性的以容器的形式提供，其具有適于用皮下注射器針頭多次穿刺的密封圈(例如，壓皺的隔膜密封關(guān)閉物)。本發(fā)明的單位劑量優(yōu)選是以臨床級的注射器提供，最優(yōu)選的是裝配有注射器隔離罩。單位劑量的"mTc放射性含量適當?shù)厥?50-1500MBq，優(yōu)選是l85-12S0MBq。當在相同天給予休息(rest)和應激注射時，第一劑量應當是185-450MBq，接著1-4小時之后的第二劑量是550-1250MBq。單位劑量中使用的優(yōu)選組合物是如第三個實施方案中所述的(以上)。本發(fā)明通過以下詳述的非限制性實施例加以說明。實施例1提供了替曲膦的合成。實施例2提供了本發(fā)明的凍干的多劑量或"散裝"試劑盒，優(yōu)選的提供品稱為Myoview30。實施例3顯示了本發(fā)明凍干的多劑量或"散裝"試劑盒怎樣用于制備多單位劑量的"mTc-替曲膦。實施例4顯示了，含輻射防護劑的凍干試劑盒在用99mTc-高锝酸鹽重建之后的許多小時顯示出極好的放射化學純度。實施例5顯示，對于Myoview30試劑盒甚至沒有空氣加入步驟，隨著增加放射性濃度(RACs)，Myoview30試劑盒重建之后的穩(wěn)定性是比MyoviewTM優(yōu)秀的。實施例5還顯示了，Myoview30試劑盒可以成功地用于廣泛范圍的99mTc發(fā)生器洗脫間隔。放射性濃度(RAC)和99mTc發(fā)生器洗脫間隔的范圍是指本發(fā)明的試劑盒具有有用的靈活性，特別是對于放射性藥物操作，其中多數(shù)的"mTc-替曲膦制劑可能需要在每曰的基礎(chǔ)上制得。實施例6顯示了本發(fā)明的Myoview30試劑盒對于多數(shù)的99mTc-替曲膦放射性藥物制劑允許更加快速的制備時間，具有實質(zhì)上減少的操作者放射劑量。用于QC樣品的放射性的量對于Myoview30和MyoviewTM是相同的，但是Myoview30涉及70%更少時間和75%更少的放射性。此外，對于操作者來講，在輻射防護屏后放置4個QC色譜法試劑條比放置16個是更容易的。實施例7顯示了，本發(fā)明的多劑量瓶可用于制得30個單位劑量的99mTc-替曲膦，同時維持令人滿意的RCP，無需兼顧小瓶內(nèi)含物的無菌度。因此，在重建后12小時，甚至在多重塞子(stopper)穿刺之后，RCP滿足規(guī)格。在12小時之后沒有在培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)生長，產(chǎn)物根據(jù)USP/Ph.Eur.無菌試驗行事。檢查的制劑稀釋液顯示了細菌內(nèi)毒素量小于313IU/瓶。這意味著沒有檢測到可見的細菌或其降解產(chǎn)物，此后多劑量小瓶無需加入抗微生物防腐劑就能有效地起作用。實施例8顯示了經(jīng)受起最多達35次的針穿刺的本發(fā)明的多劑量小瓶的關(guān)閉物。實施例9顯示了，當貯藏在5TC(2X:-8"€)和避光下本發(fā)明的多劑量小瓶具有78-周(18個月)的可用的非放射性的貯藏壽命。附圖簡要說明圖l顯示了，本發(fā)明的輻射防護劑組合物在重建后最多達12小時給予超過95%的令人滿意的RCP(即，制劑的有效的壽命)。圖2顯示了，99mTc-替曲膦RCP隨時間損失的速率的比較結(jié)果，作為Myoview30和MyoviewTM(加入空氣)的放射性濃度(RAC)的函數(shù)?？梢钥闯龅氖?，本發(fā)明的Myoview30試劑盒是更加堅固的。具體實施方式實施例1:替曲膦的合成所有反應和操作是在真空中或無氧的氮氣氛下進行。使用前，干燥溶劑，通過氮氣吹掃脫氣。a-偶氮-異丁腈(AIBN)和乙基乙烯基醚分別是從BDH和Aldrich購得。二(二膦基)乙烷是根據(jù)文獻[InorganicSynthesis,第14巻，10制得。向裝配TeflonTM攪拌棒的Fischer耐壓瓶中，裝入乙基乙烯基醚(5cm3，52.3mmol)、二(二膦基)乙烷(lcm3，10mmol)和a-偶氮-異丁腈(0.1g，0.61mmo1)。反應混合物再攪拌并加熱至751C，持續(xù)16小時。冷卻回至室溫之后，把粘稠的液體轉(zhuǎn)移到50113的圓底燒瓶中。真空下加熱除去揮發(fā)性的物質(zhì)。所得的不揮發(fā)性物質(zhì)通過NMR純化。產(chǎn)率3.0g，80%。'HNMR(CDC13):5U2(12H,dtJ=1.16Hz，7.15Hz;OCH2CH3)1.51(4H,brm;PC2H4P),1.7(8H;brt,J=7.4Hz;PCH2CH2OEt)，3.4(8H，dtJ=1.16Hz，7.15Hz'OQi2CH3)，3.49(8H;brm;PCH2CH2OEt)ppm.3PNMR:S-33.17ppm.在室溫下通過與乙醇中的2.3-2.5摩爾當量的5-磺基水楊酸反應，接著在乙醇/醚中重結(jié)晶，替曲膦轉(zhuǎn)化成磺基水楊酸替曲膦。實施例2:凍干散裝(bulk)小瓶試劑盒配方和制劑30ml散裝小瓶制劑的最佳配方是如下所示替曲膦0.69mg，氯化亞錫二水合物90ng，磺基水楊酸二鈉0.96mg，D-葡糖酸鈉3.0mg，抗壞血酸5.0mg，碳酸氬鈉11.0mg，用鹽水重建的pH8.3-9.1。這種試劑盒配方稱為"Myoview30"。制得500ml的批次。因此，向制備容器中加入注射用水(WFI)總體積的大約90%。WFI通過氮氣掃吹來去氧。在恒定攪拌下，以連續(xù)的順序調(diào)配、加入和溶解替磺基水楊酸替曲膦、氯化亞錫二水合物、D-葡糖酸鈉、抗壞血酸及碳酸氫鈉。配藥大口杯用去氧的WFI沖洗。在連續(xù)混合下，用去氧的WFI調(diào)節(jié)散裝溶液至最終體積的100%。中止氮氣掃吹。在制造過程的休息期間，應用液面上空間的氮氣層。溶液是無菌過濾的，3.0ml過濾溶液分配進30ml小瓶。小瓶局部塞好，再凍干。實施例3:含輻射防護劑的散裝試劑盒的重建歩驟Myoview30試劑盒30ml小瓶(來自實施例2)插入適合的屏蔽放射性的容器，橡膠隔膜用異丙醇海綿衛(wèi)生處理過。無菌針頭(排氣針)穿過橡膠隔膜插入。使用屏蔽的無菌的注射器加入"""Tc-高锝酸鹽發(fā)生器洗脫物[10-30cm3的體積；用氯化鈉注射液稀釋，為適當?shù)牟缓志鷦┑腢SP;在最高達10GBq/cm3的放射性濃度和最高至100GBq(2.7Ci)的總99mTc放射性含量]。除去排氣針。重建的小瓶溫和地混合10秒，以確保凍干粉的完全溶解，再在室溫下培養(yǎng)15分鐘。重建的Myoview30在2-251C下貯藏，內(nèi)含物在制備的12小時內(nèi)使用。抽取的等分試樣也在2-25TC下貯藏，并在與重建Myoview30小瓶相同的12小時期間內(nèi)使用。實施例4:隨時間進行的含輻射防護劑的凍干試劑盒的RCP的放射化學分析重建的Myoview30試劑盒(實施例2)的放射化學純度[RCP]，采用兩種色i普法系統(tǒng)測量系統(tǒng)l:固定相ITLC-SG流動相丙酮/二氯甲烷[35:65v/v]這個系統(tǒng)影響親脂的"""Tc-替曲膦從99mTc-親水部分的分離，和從親脂的雜質(zhì)[SpeciesB、C和X]和99mTc_高锝酸鹽的分離。系統(tǒng)2:固定相華特門1號紙流動相乙腈/水50:50v/v這個系統(tǒng)影響還原水解的锝[RHT的分離，其留在試條的原點，不同于遷移的其他锝絡合物。Myoview30小瓶的重建無需使用空氣加入步驟。Myoview30小瓶用99mTc-高锝酸鹽(17.5ml含37.9GBq;RAC-2.2GBq/ml)重建的結(jié)果在圖1中給出。實施例5:隨時間進行的含輻射防護劑的凍干試劑盒RCP對于現(xiàn)有技術(shù)的放射化學分析Myoview試劑盒是從Amershamplc(現(xiàn)在為GEHealthcare的部分)獲得。比較本發(fā)明的Myoview30試劑盒制劑和增加放射性濃度(RAC)的商業(yè)上MyoWewTM10ml試劑盒制劑的重建后穩(wěn)定性。根據(jù)包裝插入物的重建操作是接著用于MyoviewTM，即跟著空氣加入步驟。研究是基于MyoviewTM的8個制劑和Myoview30的89個制劑。MyoviewTM小瓶重建，最高至4.5GBq/ml，Myoview30小瓶重建，最高至11.0GBq/ml。對于所有8個制劑，Myoview是用來自99mTc發(fā)生器在24小時洗脫間隔洗脫的洗脫物重建。Myoview30小瓶是用來自99mTc發(fā)生器在不同洗脫間隔的洗脫物重建，最高至96小時，無需使用空氣加入步驟。結(jié)果在圖2中給出。實施例6:比較Myoview30與Myoview1M的制備時間和搡作者放射劑16個單位劑量的各個18.5GBq(500mCi)的99mTc-替曲膦是通過以下任一方式制得的方法1:各自用74GBq的99mTc-高锝酸鹽重建4個Myoview30小瓶(來自實施例2);方法2:各自用18.5GBq的99mTc-高锝酸鹽重建16個Myoview小瓶。結(jié)果在表l中給出方法對操作者手部的化合時間QC時間總的制備時間相對放射劑量(分鐘)(分鐘)(分鐘)18811213217528735實施例7:多劑量小瓶的無菌度的證明研究三個分開批次的Myoview30，其根據(jù)實施例2所述制得。就在重建之前，在三個Myoview30ml批次的兩個小瓶的每個中，立即插入通氣針、裝配0.22nm無菌和無熱源的MillexGP過濾器的BDMicrolance21G。小瓶用23ml無菌鹽水溶液重建。稀釋的99mTc-洗脫物(2ml)之后立即注射進小瓶，這樣使放射性含量是約2GBq/瓶。小瓶在25匸下貯藏12小時。15分鐘之后，小瓶按照表2所示進行處理。表2重建后時間(小時)抽取的模擬劑量體積(mL)抽取的個體劑量的總數(shù)0.250.251060.51012110因此，在15分鐘、6小時和貯藏壽命的末端、12小時抽取30個模擬劑量。使用裝配BDMicrolance25G針頭的lmlBD(BectonDickinson)注射器來抽取劑量。新的注射器/針頭用于每次抽取。劑量數(shù)1和21送出用于RCP分析。最后的"劑量"(數(shù)目30)遞送用于LAL(bacterialendotoxinsbyLimulusAmebocyteLysate)檢驗和滲透壓試驗。在12小時之后Myoview30小瓶中的剩余體積，大約7.5ml，用于無菌度檢驗，根據(jù)當前的USP/Ph.Eur檢驗。因此，剩余體積分成兩份，進行無菌度檢驗，并在25"C和32*C的培養(yǎng)箱中的硫膠質(zhì)介質(zhì)(TGY)和胰蛋白酶的大豆肉湯(TSB)中培養(yǎng)14天。LAL試驗來自各個小瓶的劑量數(shù)30送于細菌內(nèi)毒素試驗。瓶中的內(nèi)含物最初用25ml無菌鹽水溶液的重建。取O.lml的這種溶液并加至9.9ml的注射用水(WFI)中進一步地稀釋。使用試管法完成LAL試驗。這種稀釋液的細菌內(nèi)毒素極限值是313IU/瓶。結(jié)果無菌度:報道結(jié)果，如果培養(yǎng)介質(zhì)中沒有發(fā)現(xiàn)生長，則產(chǎn)物遵照無菌度的試驗(通過二P)。RCE:所有制劑顯示了96-97%的"加Tc-替曲膦的RCP。pH:每瓶的pH測量是8.2。LAL:4艮道每瓶的結(jié)果，產(chǎn)品遵照給出的極限值，通過(P)。結(jié)果總結(jié)在表3中表3:無菌度和RCP穩(wěn)定性的總結(jié)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>NA^殳有進行；P-通過。實施例8:多劑量小瓶的關(guān)閉物整體性的證實所用的Myoview30關(guān)閉物是PH701/45棕紅色(1178)，容器是30ml小瓶，1型，Schott。10個Myoview30小瓶是根據(jù)Ph.Eur.3.2.9檢驗的，除了進行35個穿孔，而Ph.Eur中有IO個之外。這是必須的，以模擬多劑量小瓶的多次給藥的擴大數(shù)。每個關(guān)閉物用新的外徑0.8mm的皮下注射針頭穿刺35次。每個穿孔在不同的位點。最后的穿孔也是注入超濾水至標稱體積，即是301111。IO個穿孔并填充的小瓶直立淹沒在裝有亞甲藍溶液(lg/l)的大口杯中。外部的壓力在IO分鐘內(nèi)減少270mbar至7S0mbar。隨后，恢復大氣壓，小瓶浸入亞曱基藍溶液中再停留30分鐘。小瓶徹底的漂洗，再白色背景下檢查任何變色。檢測的結(jié)果顯示了沒有染料侵入任何小瓶。實施例9:多劑量小瓶的穩(wěn)定性試驗多數(shù)的小瓶是來自三個分開批次的Myoview30，根據(jù)實施例2制備，在避光的5TC的受控溫度下貯藏。在最高至52周貯藏的間隔期檢驗小瓶。測定替曲膦、抗壞血酸、亞錫的、磺基水楊酸二鈉、氧含量及含水量。通過iH和"PNMR監(jiān)測替曲膦的純度。在各個時間點，測量使用貯藏的試劑盒制得的99mTc-替曲膦的RCP。獲得的所有結(jié)果顯示了，在51C(2-8TC)避光下貯藏整個52周的期間，產(chǎn)品滿足所有的技術(shù)指標(spcrifications)。評估了所有結(jié)果，進行統(tǒng)計分析。對定量參數(shù)進行了線性回歸分析，以調(diào)查各個參數(shù)和j^藏時間之間的關(guān)系。由回歸分析得到的相關(guān)系數(shù)使用皮爾森檢驗來檢驗顯著性。計算了各個參數(shù)的95%的置信區(qū)間。當參數(shù)僅僅是隨時間減少(或增加)時，計算單側(cè)的置信區(qū)間。95%的置信區(qū)間和回歸線已經(jīng)外推至最大78周(18個月)，其是超過長期數(shù)據(jù)適用的周期6個月。這是貯藏壽命最大的延伸，基于根據(jù)ICH(TheInternationalConferenceonHarmonisationofTechnicalRequirementsforRegistrationofPharmaceuticalsforHumanUse)指引Q1E的有效結(jié)果。在均值的95%置信界限的最初期的時間，交叉提出的驗收準則是超過78周，對于在5r下貯藏的樣品。如上述貯藏78周的批次的Myoview30，在用5.5-89GBq的99mTc-高锝酸鹽重建時，在重建后12小時顯示了超過90%的RCP。權(quán)利要求1、一種凍干的非放射性的試劑盒，當用99mTc-高锝酸鹽溶液重建時，其得到穩(wěn)定的99mTc-替曲膦放射性藥物組合物，該試劑盒具有包含以下組分的配方(i)替曲膦；(ii)選自抗壞血酸或其與生物相容性陽離子的鹽的輻射防護劑；(iii)生物相容性的還原劑；(iv)pH-調(diào)節(jié)劑，其用量足以確保，當試劑盒用鹽水重建時，得到的溶液具有8.0-9.2范圍的pH；條件是，試劑盒或99mTc-替曲膦放射性藥物組合物都不含抗微生物防腐劑。2、權(quán)利要求l的試劑盒，其進一步包含至少一種轉(zhuǎn)螯合劑，選自5-磺基水楊酸和葡糖酸或其與生物相容性陽離子的鹽。3、權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中生物相容性的還原劑包含亞錫離子。4、權(quán)利要求l-3任一項的試劑盒，其中pH-調(diào)節(jié)劑包含碳酸氫鈉。5、一種多劑量試劑盒，其包含權(quán)利要求1-4的凍干制劑，其在密封的無菌的裝配關(guān)閉物的容器中，所述關(guān)閉物允許加入和抽取溶液同時保持無菌的整體性；其中試劑盒是這樣配制的，以致于從單個的多劑量試劑盒中可以得到4-30個單位患者劑量的99mTc-替曲膦放射性藥物。6、權(quán)利要求5的多劑量試劑盒，其中容器是20-40cn^容積的隔膜密封的小瓶。7、一種制備多單位患者劑量的放射性藥物"mTc-替曲膦的方法，該方法包含(i)用99mTc-高锝酸鹽的無菌溶液或首先是生物相容性載體接著是99mTc-高锝酸鹽的無菌溶液重建權(quán)利要求5或6的多劑量試劑盒；(ii)在抗微生物防腐劑存在下任選性地進行步驟(i);(iii)使"mTc替曲膦絡合物形成，以生得到含有大批供應的期望的99mTc替曲膦放射性藥物的溶液；(iv)任選擇檢查大批供應的99mTc替曲膦絡合物的放射化學純度；(V)從步驟(m)的大批供應中抽取單位劑量進入適合的注射器或容器中；(vi)在更后面的時間，用另外的注射器或容器重復步驟(v)，得到進一步的單位劑量。8、權(quán)利要求7的方法，其中步驟(i)中所用的99mTc-高锝酸鹽具有5-100GBq范圍的放射性含量。9、一種穩(wěn)定的放射性藥物組合物，其包含(i)生物相容性載體中的替曲膦的""^c絡合物；(ii)選自抗壞血酸或其與生物相容性陽離子的鹽的輻射防護劑，濃度為0.5-6.0mmolar;條件是，放射性藥物組合物不含抗微生物防腐劑。10、權(quán)利要求9的組合物，其中輻射防護劑的濃度是1.4-5.5mmol3r。11、權(quán)利要求9或IO的組合物，其中輻射防護劑是抗壞血酸。12、權(quán)利要求9或IO的組合物，其中輻射防護劑是抗壞血酸鈉。13、權(quán)利要求9-12任一項的組合物，其中生物相容性載體包含鹽水溶液。14、權(quán)利要求9-13任一項的組合物，其中""^c的放射性含量是150-850MBq。15、一種單位患者劑量的放射性藥物"mTc-替曲膦，其包含在臨床級的容器或注射器中的權(quán)利要求9-14的組合物，其中放射性藥物的99mTc放射性含量適于單個患者的成像。16、權(quán)利要求15的單位患者劑量，其以具有注射器隔離罩的注射器形式提供，以保護操作者免受放射性劑量。全文摘要本發(fā)明涉及穩(wěn)定的配體替曲膦的^99mTc放射性藥物組合物，其包括抗壞血酸或抗壞血酸鹽輻射防護劑，不存在抗微生物防腐劑。本發(fā)明還提供了適于批量制備多單位患者劑量的^99mTc-替曲膦金屬絡合物的凍干試劑盒。還公開的是單位劑量的^99mTc-替曲膦，以及由凍干散裝瓶制備這樣單位劑量的方法。文檔編號A61K103/10GK101107017SQ200580043065公開日2008年1月16日申請日期2005年10月14日優(yōu)先權(quán)日2004年12月15日發(fā)明者G·K·馬蒂努森,G·斯滕斯魯?shù)?奧利·克里斯蒂安·耶爾斯圖申請人:通用電氣健康護理有限公司;奧利·克里斯蒂安·耶爾斯圖恩