專利名稱：：分離自calomeriaamaranthoides的治療性化合物的制作方法分離自CALOMERIAAMARANTHOIDES的治療性化合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明廣義上涉及分離自Calomeriaamaranthoides植物的提取物和化合物、以及這些化合物的衍生物和類似物，它們對于顯示增殖過度的細(xì)胞分裂的多種細(xì)胞類型具有細(xì)胞毒活性。
背景技術(shù)：
：Calomeriaamaranthoides，更通常稱為香氣植物(IncensePlant)或李屬灌木(PlumBush)，屬于雛菊(daisy)屬紫菀科(Asteraceae)。其外觀有點(diǎn)類似于煙草植物，萊檬綠色(lime-green)皺縮的葉片散發(fā)出芳香味，接觸時有粘性。這種植物為兩年生，花朵的顏色從各種發(fā)白的粉紅到各種深淺的粉紅，最常見的花朵顏色是紅色。花朵的頭部呈羽毛狀，在切花工業(yè)中很有價值。Calomeriaamaranthoides是澳大利亞原生植物，沿河邊平地以及新南威爾士和維多利亞的海岸區(qū)域生長。這種植物的葉子是生活在這些地區(qū)的澳大利亞原生動物的一部分食物，很明顯，在依賴這些植物作為食物來源的動物體內(nèi)沒有或幾乎沒有毒性。這個信息，加之人們在收割和花卉整理中對Calomeriaamaranthoides的花朵的處理(所獲得的信息)，使人們預(yù)期利用Calomeriaamaranthoides提取物作為藥物對哺乳動物的毒性低。本發(fā)明人現(xiàn)在已確定，Calomeriaamaranthoides提取物對顯示出增殖過度的細(xì)胞分裂的某些細(xì)胞類型，具體地說是對癌細(xì)胞類型但不對各種正常細(xì)胞，具有強(qiáng)力和選擇性的細(xì)胞毒性性質(zhì)。發(fā)明概述根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，g巾R,-R6獨(dú)立地選自H、OH、鹵素、CH2、(C廠Cs)烷基-、(C,-C8)垸基-0-、HO-(C,-C8)烷基-、NC-、H2N-、H2N-(C,-C8)垸基-、HO-(C=0)-、H0-(O0)曙(C廣C8)烷基、(C廣Cs)-垸基(C-O)-、(C廠C8)垸基-(CK))-(C廣C8)烷基-、H2N-(C=0)-、H2N-(C=0)-(C,-C8)烷基-和環(huán)垸基-，條件是當(dāng)R,=CH3;R,'=CH3;R2=H,H;R3=H,H;R3，=H,H;R4=H,H;R5=O時，則R6#CH3(A4,5);當(dāng)R,=H;Rr=-;R2=CH3;R3=H;R3'=H，H;R4=H,H;R5=H,H時，則R^#CH3(Auo);當(dāng)R,=CH3;Rr=H;R2=H,H;R3=H,H;R3'=H,H;R4=H,H;R5=H,H時，則116#CH2;當(dāng)R,=CH3;=H;R2=H,H;R3=H,H;R3'=H，H;R4=H,H;R5=H,H時，貝!JR6#CH3、OH;當(dāng)R4=H;Rr=CH3;R2=H,H;R3=H,H;R3'=H,H;R4=H,H;R5=H,H時，則116#CH3、OH;當(dāng)R,Rr=CH3;R2=H,H;R3=H,H;R3,=H,H;R4=H,H;R5=O時，則Re#CH3(A4,5)式I的具體優(yōu)選化合物的例子是如下的化合物或它們藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>根據(jù)本發(fā)明第二方面，提供Calomeriaamaranthoides的提取物，其對顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂有關(guān)狀況的細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性。該提取物優(yōu)選來自Calomeriaamaranthoides的葉片。在一種實(shí)施方式中，提取物是從有機(jī)溶劑得到的提取物。有機(jī)溶劑優(yōu)選選自氯仿、石油醚(petrolether)、二氯甲垸、乙酸乙酯和甲醇。更優(yōu)選的是，該溶劑是氯仿。在優(yōu)選實(shí)施方式中，該提取物顯示如圖5A所示的質(zhì)子NMR光譜和圖5B所示C"NMR光譜。在另一種實(shí)施方式中，提取物是非極性提取物。在一種實(shí)施方式中，提取物的細(xì)胞毒活性來自于該提取物中兩種或多種化合物之間的協(xié)同相互作用。根據(jù)第三方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的根據(jù)第三方面的提取物和藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)第四方面，本發(fā)明提供一種抑制顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞生長或消除這些細(xì)胞的方法，所述方法包括給予所述細(xì)胞有效量的根據(jù)本發(fā)明第三方面的提取物。根據(jù)第五方面，本發(fā)明提供一種治療或預(yù)防患者中與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括給予患者有效量的根據(jù)本發(fā)明第三方面的提取物。根據(jù)第六方面，本發(fā)明提供根據(jù)本發(fā)明第三方面的Calomeriaamaranthoides提取物在制備用于治療或預(yù)防與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病的藥物中的用途。根據(jù)第七方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)第八方面，本發(fā)明提供一種抑制顯示增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞生長或消除這些細(xì)胞的方法，所述方法包括給予所述細(xì)胞有效量的本發(fā)明化合物。根據(jù)第九方面，本發(fā)明提供一種治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的癥狀的方法，所述方法包括給予患者有效量的根據(jù)本發(fā)明第七方面的組合物。根據(jù)第十方面，本發(fā)明提供本發(fā)明化合物在制備用于治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的藥物中的用途。與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病優(yōu)選是實(shí)體瘤或造血惡性癌癥。所述疾病更優(yōu)選是卵巢癌。本發(fā)明化合物包括式I和式II化合物的所有構(gòu)象異構(gòu)體(例如順式和反式異構(gòu)體)和所有光學(xué)異構(gòu)體(例如對映異構(gòu)體和非對映體)，以及這些異構(gòu)體的外消旋混合物、非對映混合物或其它混合物。.在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及分離自Calomeriaamaranthoides提取物的化合物的衍生物和類似物，它們對顯示出增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種抑制顯示出增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞生長或消除這些細(xì)胞的方法，所述方法包括給予所述細(xì)胞有效量的分離自Calomeriaamaranthoides提取物的一種或多種化合物、和/或所述一種或多種化合物的衍生物或類似物。根據(jù)本發(fā)明另一種實(shí)施方式，提供一種治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括給予患者有效量的Calomeriaamaranthoides提取物、和/或分離自這種提取物的一種或多種化合物、和/或所述一種或多種化合物的衍生物或類似物。根據(jù)本發(fā)明另一種實(shí)施方式，提供分離自Calomeriaamaranthoides提取物的一種或多種化合物、和/或所述一種或多種化合物的衍生物或類似物在制備用于治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病的藥物中的用途。根據(jù)另一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供一種藥物制劑，其包含藥學(xué)上有效量的Calomeriaamaranthoides提取物、和/或分離自Calomeriaamaranthoides提取物的化合物、和/或其衍生物或類似物，以及藥學(xué)上可接受的載體。在特別優(yōu)選的形式中，至少一種提取物含有選自下組的至少一種化合物桉烷醇甙(eudesmanolide)-樣結(jié)構(gòu)，尤其是倍半萜內(nèi)酯，聚乙炔、生物堿、香豆素、異戊烯化香豆素、黃酮類、對羥基苯乙酮、苯乙酮、雙萜、木脂素類(尤其是雙呋喃類(difuranoid)木脂素類)和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，和/或上述化合物的衍生物或類似物。附圖簡述圖1顯示Calomeriaamaranthoides氯仿粗提物的質(zhì)譜圖。圖2A-2J顯示組分2(收集自Calomeriaamaranthoides提取物的柱層析)的HPLC圖譜，在Silica5Si60直接相(straightphase)HPLC柱上分析，在不同波長檢測。圖2K顯示Calomeriaamaranthoides—氯仿粗提物的—HP丄C圖譜，toC-18-DB柱(反相)上分析。圖3A-3C表示用不同濃度Calomeriaamaranthoides氯仿粗提物處理的卵巢癌細(xì)胞、人皮膚成纖維細(xì)胞和人淋巴細(xì)胞的活性百分比。圖4A表示用1、10或100ug/mlCalomeriaamaranthoides提取物、順鉬或Docetaxol處理的人皮膚成纖維細(xì)胞(Fib.)的照片。在48小時時拍攝照片。圖4B表示用1、10或100ug/mlCalomeriaamaranthoides提取物、順鉬或Docetaxol處理的JC卵巢癌細(xì)胞的照片。處理后48小時拍攝照片。圖5A表示組分12(收集自Calomeriaamaranthoides提取物的柱層析)的'HNMR圖譜。圖5B表示組分12(收集自Calomeriaamaranthoides提取物的柱層析)的"CNMR圖譜。圖6表示Calomeriaamaranthoides的57種提取物的TLC板。優(yōu)選實(shí)施方式詳述在整個說明書中，除非上下文另有要求，術(shù)語"包括"、"包含"、"含有"理解為表示包括所述步驟或元素、或所述步驟或元素的組，但不排除任何其它步驟或元素、或步驟或元素的組。說明書中參考的任何現(xiàn)有技術(shù)不是也不應(yīng)該看作承認(rèn)或以任何形式暗示這些現(xiàn)有技術(shù)構(gòu)成了澳大利亞的常識的一部分。在最廣義的形式上，本發(fā)明涉及Calomeriaamaranthoides植物的一個或多個部分的提取物。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，有很多不同的方法可從植物粗制原料中合成提取物，先把植物原料切開或劈開，然后使其暴露于至少一種溶劑以獲得植物提取物。或者，例如，可先將植物原材料碾碎成細(xì)粉然后進(jìn)行索氏萃取器(soxhlet)提取加工。本發(fā)明另一種形式涉及分離自Calomeriaamaranthoides植物的化合物及其衍生物或類似物。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，有很多方法可用于分離和表征植物提取物中含有的化合物。這些方法的例子包括但不限于，用合適的吸附劑通過層析進(jìn)行分級，以及用高效液相和離心逆流色譜純化提取物。另外，可用質(zhì)譜和包括紫外線光譜、紅外線光譜、X-射線光譜、'H和。C核磁共振(NMR)光譜等的光譜學(xué)表征純化的已知組分或新的組分。一旦得到表征，可通過合成方法制備這些組分。在另一種形式中，Calomeriaamaranthoides提取物或分離自所述提取物的化合物及其衍生物或類似物對顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性。本文所用術(shù)語"增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況(或疾病)"指以細(xì)胞分裂速率相對于正常參考速率增加為特征或涉及細(xì)胞分裂速率相對于正常參考速率增加的任何臨床狀況(或疾病)。增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病包括但不限于，骨髓增生綜合征如朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥、肥大細(xì)胞增生癥、混合骨髓增生和骨髓發(fā)育異常病，皮膚增生病，如牛皮癬、先天性非大皰性魚鱗癬樣紅皮病。與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病還包括良性或惡性的癌癥，包括造血惡性癌癥。在優(yōu)選的形式中，與增殖過度的細(xì)m^分裂相關(guān)的疾病是癌癥。在另一種形式中，本發(fā)明涉及來自Calomeriaamaranthoides提取物的化合物的衍生物和類似物，其對顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性。本發(fā)明化合物包括所有的鹽，例如酸加成鹽、陰離子鹽和兩性離子鹽，尤其包括本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"指帶有電荷且能夠與藥物聯(lián)合給藥的有機(jī)或無機(jī)部分，例如鹽中的反-陽離子或反-陰離子。藥學(xué)上可接受的陽離子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括但不限于鈉、鉀、鈣、鋅和季銨。藥學(xué)上接受的陰離子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括但不限于氯化物、醋酸鹽、甲苯磺酸鹽、擰檬酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括用以下酸形成的鹽乙酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、檸檬酸、肉桂酸、乙磺酸(ethanesulphonic)、富馬酸、谷氨酸、戊二酸、葡糖酸、鹽酸、氫溴酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸(methanesulphonic)、萘甲酸、夢5萘甲酸、萘磺酸(naphthalenesulphonic)、萘二石黃酸(naphthalenedisulphonic)、萘丙烯酸(naphthaleneacrylic)、油酸、草酸、草酰乙酸、磷酸、丙酮酸、對甲苯磺酸、酒石酸、三氟乙酸、三苯乙酸、丙三羧酸、水楊酸、硫酸、氨基磺酸(sulphamic)、磺胺酸和琥珀酸。術(shù)語"衍生物"指活性化合物的衍生物，在給予接受者后能夠直接或間接提供母體化合物或代謝物，或者其本身能夠顯示活性，包括例如磷酸鹽衍生物和磺酸鹽衍生物。因此，衍生物包括溶劑化物、藥學(xué)活性酯、前藥等。還包括帶有生理學(xué)可斷裂的離去基團(tuán)的衍生物，其在體內(nèi)可斷裂以提供本發(fā)明化合物或其活性部分。離去基團(tuán)可包括?；⒘姿狨?鹽)、硫酸酯(鹽)，優(yōu)選是單-,雙-和全-酰氧基-取代的化合物，其中的一個或多個懸垂的羥基被?；?優(yōu)選乙酰基)保護(hù)。通常，本發(fā)明酰氧基取代的化合物可容易地斷裂為相應(yīng)的羥基取代的化合物。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的方法，該方法包括給予患者有效量的提取物和/或分離自提取物的一種或多種化合物、或所述一種或多種化合物的衍生物或類似物。當(dāng)指治療或預(yù)防病癥時，"有效量"指以單劑量或一系列劑量的一部分給予需要治療或預(yù)防的個體一定量的活性物質(zhì)，該量有效治療或預(yù)防所述病癥。有效量根據(jù)待治療個體的健康和身體狀況、待治療個體的分類群、組合物的配制(formulation)、醫(yī)學(xué)狀況的評估和其它相關(guān)因素而變化。預(yù)期該量落在可通過常規(guī)試驗(yàn)確定的、相對寬的范圍內(nèi)。術(shù)語"患者"指人患者或其它哺乳動物患者，包括希望用本發(fā)明方法檢査或治療的任何個體。然而應(yīng)理解，"患者"不說明其存在癥狀。落在本發(fā)明范圍內(nèi)的合適的哺乳動物包括但不限于，靈長類、家畜(例如，羊、牛、馬、驢、豬)、實(shí)驗(yàn)室測試動物(例如兔、小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠)、寵物(例如，貓、狗)和被俘的野生動物(例如，狐貍、鹿、澳洲野犬)?？刹捎萌魏魏线m的給藥途徑為患者提供本發(fā)明藥物制品和藥劑。例如，可用口服、直腸、胃腸外、舌下、口含、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)、皮下、吸入、眼內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦室內(nèi)、透皮等給藥途徑。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及Calomeriaamaranthoides提取物和/或分離自Calomeriaamaranthoides提取物的一種或多種化合物、和/或所述一種或多種化合物的衍生物或類似物在制備用于治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病的藥物中的用途。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種藥物制劑，其包含藥學(xué)有效量的Calomeriaamaranthoides提取物禾口/或分離自Calomeriaamaranthoides提取物的一種或多種化合物、和/或所述一種或多種化合物的衍生物或類似物，以及藥學(xué)上可接受的載體。"藥學(xué)上可接受的載體"指固體或液體填充劑、稀釋劑或包裹物質(zhì)，其可以安全地用于將藥劑或藥物制劑給予患者。根據(jù)具體給藥途徑，可采用本領(lǐng)域已知的各種藥學(xué)上可接受的載體。這些載體可選自糖、淀粉、纖維素及其衍生物、麥芽、明膠、滑石粉、硫酸鈣、植物油、合成油、多元醇、藻酸、磷酸鹽緩沖溶液、乳化劑、等滲鹽水和不含熱原的水。適于口服或胃腸外給藥的本發(fā)明藥物制劑和藥品可作為離散單元如膠囊、囊劑(sachets)或片劑，各含有預(yù)定量的提取物、或分離自所述提取物的一種或多種化合物、和/或其衍生物或類似物，或作為粉劑或顆粒劑或在水性液體、非水性液體中的溶液或混懸液，水包油乳液或油包水液體乳液。可用藥劑學(xué)中的任何方法制備這些制劑和藥品，但所有方法都包括將上述提取物與載體相結(jié)合的步驟，所述載體組成一種或多種必須成分。一般，通過均勻和精細(xì)地混合提取物和液體載體或細(xì)分的固體載體或二者，(如果需要)然后將產(chǎn)品制備成所需形狀來制備藥物制劑和藥品?？稍谂c所述狀況相關(guān)的癥狀出現(xiàn)之前或之后給予本發(fā)明藥物組合物。制劑和藥品中的治療性物質(zhì)提供了在一定的時間里足以治療患者的數(shù)量。如前所述，本發(fā)明提取物和化合物可用于制備藥物和藥物制劑，用于治療腫瘤。具體地說，本發(fā)明Calomeriaamaranthoides提取物、包含Calomeriaamaranthoides提取物和/或分離自該提取物的化合物和/或這些化合物的衍生物或類似物，對各種腫瘤尤其有效，包括例如，實(shí)體瘤如胃腸道腫瘤，例如，結(jié)腸直腸癌，胃食管癌，肝癌和膽道癌，胰腺癌，前列腺癌；睪丸癌；肺癌；乳腺癌；惡性黑色素瘤；卵巢癌；子宮癌，包括子宮頸癌；頭部癌癥和頸部癌癥；膀胱癌；肉瘤和骨肉瘤；卡波西肉瘤，包括AIDS相關(guān)卡波西肉瘤；腎癌；造血惡性腫瘤，如白血病和淋巴瘤，包括AIDS相關(guān)淋巴瘤。此外，可根據(jù)上述治療方案給予本發(fā)明提取物和化合物或由其制備的藥物制品或藥物、和/或由分離自該提取物的化合物和/或其衍生物或類似物制備的藥物制品或藥物，任選與其它抗腫瘤劑一起給予，作為組合制劑同時、分開或連續(xù)用于抗癌治療。上述其它抗腫瘤劑包括例如烷化劑，拓?fù)洚悩?gòu)酶i和n抑制劑，抗微管劑和抗代謝物。作為例子，具體的抗腫瘤劑是芥子，如苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、氮芥、環(huán)磷酰胺、異磷酰胺和白消安；亞硝基脲，如卡莫司汀、lormustine、司莫司汀和福替目??；四嗪，如達(dá)卡巴嗪和替莫唑胺；氮丙啶，如塞替派和絲裂霉素C;鉑衍生物，如順鉑、碳鉑、奧沙利鉑、奈達(dá)鉑和洛鉑；喜樹堿衍生物，如CTP-ll、托泊替康、9-氨基-喜樹堿、9-硝基-喜樹堿和10，ll-二氧甲叉基-喜樹堿；蒽環(huán)類抗生素衍生物，如阿霉素、柔紅霉素、表柔比星、奈莫柔比星和去甲氧基柔紅霉素；鬼臼毒素化合物依托泊甙和鬼臼噻吩甙；蒽醌衍生物如鹽酸米托蒽醌和洛索蒽醌；吖啶衍生物如胺苯吖啶和actinomaycinD;紫杉烷類如紫杉醇或紫杉蔽；長春花堿類如長春新堿、長春堿、長春花堿酰胺、長春瑞濱；磷雌氮芥；抗葉酸劑如metotrexate、曲美沙特、拓優(yōu)得；5-氟嘧啶如5-FU、去氧氟尿苷、呋喃氟尿嘧啶和卡培他濱；胞啶類似物，如阿糖胞苷、氮雜胞苷和2，2-二氟脫氧胞噴啶核苷。劑型包括片劑、分散劑、混懸劑、注射劑、溶液劑、糖漿劑、糖錠、膠囊、栓劑、氣霧劑、透皮貼片等。這些劑型也可包括專門設(shè)計用于此目的的注射或植入控釋裝置或還以這種方式進(jìn)行作用的其它形式的修飾的植入物?？赏ㄟ^例如用疏水聚合物涂覆治療劑來實(shí)現(xiàn)治療劑的控釋，疏水聚合物包括丙烯酸樹脂、蠟、高級脂肪醇、聚乳酸和聚乙醇酸以及某些纖維素衍生物，如羥丙基甲基纖維素。此外，可用其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球?qū)崿F(xiàn)控釋?？捎门c劑型相容的方式給予上述藥物或藥物制品，給藥量可治療有效性地緩解患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病有關(guān)的癥狀，或給藥量足以保護(hù)患者不發(fā)生與所述狀況相關(guān)的癥狀。本發(fā)明中給予患者的劑量應(yīng)足以隨時間在患者內(nèi)產(chǎn)生有利的反應(yīng)，如上述的治療或預(yù)防效果。待給予的治療劑的量取決于待治療對象，包括其年齡、性別、體重和總體健康狀況。在這方面，待給藥的治療劑的精確數(shù)量將取決于醫(yī)師的判斷。確定治療或預(yù)防某病癥時將給予的治療劑有效量時，醫(yī)師可評估病癥的進(jìn)展。無論如何，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難確定本發(fā)明治療劑的合適劑量。這種劑量可能是微克或克數(shù)量級的本發(fā)明治療劑。為了使本發(fā)明更易理解并產(chǎn)生實(shí)際效果，通過下文的非限制性實(shí)施例描述優(yōu)選的具體實(shí)施方式。實(shí)施例l從一年和兩年生的Calomeriaamaranthoides植物中進(jìn)行溶劑提取采用各種溶劑從一年生植物或兩年生植物中提取活性組分。干燥植物的葉片，得到10克起始材料，用各種溶劑如氯仿和甲醇提取其中含有的有機(jī)物質(zhì)，其它合適的溶劑包括石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯或水。簡言之，從一年和/或兩年生植物中收集350克Calomeriaamaranthoides葉片。室溫蔽光干燥葉片，然后切成小片。將干燥的葉片浸在氯仿中，24-48小時后，獲得葉片粗提物。然后用柱層析在重力下將該粗提物吸附到硅膠(60H,5-40"m;Merck)上。在一年齡Calomeria植物葉片中獲得13種組分。在一個重復(fù)的純化過程中，從相同的兩年齡Calomeria植物中獲得57種組分。還用甲醇獲得了粗提物以與氯仿提取進(jìn)行對比。實(shí)施例2CalomeriaAmaranthoides粗提物的質(zhì)譜用質(zhì)譜分析根據(jù)實(shí)施例2獲得的氯仿粗提物。結(jié)果示于圖l。用三階段四極質(zhì)譜(triplestagequadropolemassspectrometer,TSQMS)，ThermoFinnigan進(jìn)行化學(xué)電離質(zhì)譜以檢測質(zhì)量范圍。該設(shè)備具有陽離子電噴射。實(shí)施例3CalomeriaAmaranthoides粗提物的薄層層析采用的分析性薄層層析板是購自Merck(Darmstadt)的在鋁支撐的薄片上(0.2mm)的硅膠60F254，。硅膠60H(5-40um)(Merck)用于柱層析。重力下用柱層析上樣Calomeriaamaranthoides氯仿粗提物中獲得的57種組分。將各組分的分析樣品點(diǎn)在TLC板的底部。TLC板在氯仿或氯仿/甲醇中顯影。254mn紫外線下觀察化合物并計算Rf。結(jié)果示于圖6A。實(shí)施例4CalomeriaAmaranthoides提取物的細(xì)胞毒性細(xì)胞生長抑制試驗(yàn)Ln,n的細(xì)胞培養(yǎng)物，卵巢癌細(xì)胞系，結(jié)腸細(xì)胞系，正常卵巢和乳腺細(xì)胞，人皮膚成纖維細(xì)胞和人淋巴細(xì)胞。用Calomeriaamaranthoides提取物檢測以下細(xì)胞系的生長抑制和細(xì)胞毒性小鼠白血病細(xì)胞系(LoiiQ)，五種卵巢癌細(xì)胞系JV、JC、JG(vanHaaften-Day等，CancerResearch43:3725-3731,1983)JoN和NF(vanHaaften-Day等，Cancer65:.1.753-1761,1990)，結(jié)腸癌細(xì)胞系T/0，.來自卵巢和乳腺組織的正常上皮細(xì)胞(vanHaaften-Day等，IntJGynecolCancer2:41-48,1992)、人皮膚成纖維細(xì)胞和人淋巴細(xì)胞1(/或5.10"細(xì)胞/毫升接種在24孔板(Costar,USA)中，至總體積為2ml培養(yǎng)基/孔。所用培養(yǎng)基是添加了6mML-谷氨酰胺、硫酸慶大霉素(garamycin)(2ml)和10-15。/。胎牛血清(FCS)(Flowlaboratories)的RPMI1640。兩個孔用作對照孔。細(xì)胞在37'C、5%(302中生長，24小時后發(fā)現(xiàn)其仍為指數(shù)生長。將細(xì)胞用植物提取物的不同(干燥的)組分處理或用粗提物處理。將樣品溶解在DMSO中，取4ul加入含有細(xì)胞和2ml培養(yǎng)基的各孔中。DMSO的終濃度小于0.02。/。/L。各樣品在終濃度l、10和100ug/ml檢測(一式三份)。然后，處理24、48和72小時后計數(shù)細(xì)胞?；衔锏募?xì)胞毒性表示為IC50值，按照Finlay等(1984)的亞甲藍(lán)試驗(yàn)方法檢測，艮口細(xì)胞生長百分比=x100%對照細(xì)胞的吸光度從孔中除去培養(yǎng)基，加入200ul亞甲藍(lán)/L，孵育1小時。然后用水洗漆孔3次，室溫干燥一天。加入200nl肌氨酰(1%，以PBS配制，Sigma)，將24孔板置于培養(yǎng)箱中5小時。然后用不同的移液槍頭將100ul/孔轉(zhuǎn)移到96孔平底培養(yǎng)板中。用微板讀數(shù)儀在595nm波長讀數(shù)紫外吸光度。24和48小時后胰蛋白酶消化生長在24孔板并如上所述處理的卵巢和乳腺組織的正常上皮細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下用Neubauer血細(xì)胞計數(shù)器手動計數(shù)細(xì)胞活力。采用臺盼藍(lán)排除方法。最少計數(shù)200個細(xì)胞。粗提物處理48小時后，幾乎看不到對生長抑制或細(xì)胞活力的影響。用亞甲藍(lán)試驗(yàn)將評價得自l年生Cabmeria植物的分級粗提物的細(xì)胞毒性并表示為IC50值。使用卵巢癌細(xì)胞系JV(vanHaaften-Day等，CancerRes.43(8),3725-31)，組分2、4、6和8顯示出最高水平的細(xì)胞毒性。還在24孔板中加入AlamarBlue(BioSource,Europe)(Page等，1993)(100ulAlamarBlue和lml培養(yǎng)基/L)之后評價了細(xì)胞活力。將上清液移到96孔板中，用細(xì)胞熒光(cytofluor)器檢測吸光度。圖3A顯示用不同量的氯仿粗提物處理的卵巢癌細(xì)胞的活性百分?jǐn)?shù)(vanHaaften-Day等，(19卯)Cancer65(8),1753-61)。在這些癌細(xì)胞上使用二氯甲烷提取物時觀察到類似的結(jié)果。圖3B顯示用不同濃度的粗提物處理72小時后，生長在24孔板中的正常皮膚成纖維細(xì)胞的活性百分?jǐn)?shù)，圖3C顯示用不同濃度的提取物處理72小時后，生長在96孔板中的人淋巴細(xì)胞的活性百分?jǐn)?shù)(AnsarAhmed.,1994)。還用人皮膚成纖維細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞系JC(VanHaaften-Day等，1983CancerRes.43(8)，3725-3l)比較了順鉬(Pharmachemie，Haarlem)和Docetaxol(AventisPharma,Hoevelaken)的細(xì)胞毒性與Calomeriaamaranthoides提取物的細(xì)胞毒性(圖4)。用l、10或100ug的Calomeria提取物("CA")、順鉑("Cplat")或Docetaxol("紫杉酚")處理成纖維細(xì)胞，處理后48小時觀察細(xì)胞活力，用顯微攝影記錄(圖4A)。類似地，用l、10或100ug的Calomeria提取物、順鉑或Docetaxol處理卵巢癌細(xì)胞系JC，48小時時觀察和記錄細(xì)胞活力(圖4B)。雖然48小時時可觀察至ljlug劑量的順鉑或Docetaxol對成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性，但用10ug和100ug的每種化合物處理時，細(xì)胞活力降低更大。觀察到Calomeria提取物對成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性較小，1ug提取物只有極小的細(xì)胞毒性，即使10yg的細(xì)胞毒性也極小(圖4A)。因此，在正常表型的細(xì)胞中，Calomeria提取物比順鉑或Docetaxol的細(xì)胞毒性小。相反，在JC卵巢癌細(xì)胞系中，1、10或100tig的Calomeria提取物顯示出與l、10或100ug的順鉑類似的毒性(圖4B)。JC細(xì)胞似乎對Docetaxol有更大的抗性。48小時比較10ug劑量的處理效果時，Docetaxol的細(xì)胞毒性似乎比Calomeria提取物或順鉬的細(xì)胞毒性小。因此，相對順鉑或Docetaxol，Calomeria提取物對卵巢癌細(xì)胞系顯示出更大的選擇性，在對癌細(xì)胞有細(xì)胞毒性的劑量水平對正常表型的細(xì)胞顯示顯著較小的作用。發(fā)現(xiàn)Calomeria提取物引起細(xì)胞凋亡，其特征是形態(tài)學(xué)變化，如細(xì)胞和核皺縮、濃縮和片段化。提取物對L^o癌細(xì)胞系的細(xì)胞毒性示于表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>還注意到，從兩年生植物上取的葉片產(chǎn)生的提取物比一年生的相同植物葉片提取物的細(xì)胞毒性更大。實(shí)施例5CalomeriaAmaranthoides粗提物的HPLC分離用HPLC方法分析兩年生Calomeriaamaranthoides植物的葉片粗提物和分級的提取物。使用氯仿/甲醇/水1:1:1(v/v/v)，得到葉片粗提物澄清的兩相分離。然后氯仿層用無水硫酸鈉干燥，過濾，然后吹干。產(chǎn)生的殘留物溶解在HPLC注射溶劑(己烷:二嗯垸99.5:0.5,v/v)中。該方法產(chǎn)生上述溶劑中的澄清溶液。在氧化硅5Si60直接相HPLC柱上用己烷二噁垸99.5:0.5，v/v作為洗脫劑進(jìn)行分離(運(yùn)行時間30分鐘，流速2.5ml/分鐘，UV波長范圍mn)。每次運(yùn)行在分析型250*4.6idmm柱上注入50-100ug粗制樣品。除分析粗產(chǎn)物之外，還用直接相HPLC分析了得自柱層析的濃縮組分。在不同波長運(yùn)行的組分2HPLC分析的讀數(shù)結(jié)果示于圖2A-2J?；蛘?，在LC-18-DB柱(反相)，5u(250*4.6idmm)上層析粗提物。用50mM磷酸鈉緩沖液和10mM庚烷磺酸進(jìn)行分離(pH為3.4;運(yùn)行30-50分鐘；流速lml/分鐘，UV波長254nm)。注射20tM提取物。產(chǎn)生的HPLC讀數(shù)示于圖2K。重復(fù)運(yùn)行(運(yùn)行時間不同)示于圖2L和2M。實(shí)施例6CalomeriaAmarantlM)Wes的氯仿提取組分的核磁共振顯影用核磁共振分光檢定法在VarianGemini300NMR分光計上分析Calomeriaamaranthoides的氯仿粗提物和經(jīng)柱層析純化的組分。在300MHz進(jìn)行)HNMR，75MHz進(jìn)行"CNMR。將植物粗提物中分析量的13和57種組分懸浮在置于玻璃棉塞頂部的5mm直徑NMR管中的0.4mlPBS/D20中，然后置于含有溶于PBS/D20的1mmol/L對氨基苯甲酸的5mm直徑NMR管中(作為參比)。37'C用標(biāo)準(zhǔn)的5mm直徑質(zhì)子頭記錄'HNMR光譜。組分12的'HNMR光譜示于圖5A，組分12的13〔NMR光譜示于圖5B。組分12的'HNMR光譜的特征是以下桉烷醇甙樣結(jié)構(gòu)實(shí)施例7式I化合物的的合成方案<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>編號方案用合適的堿處理2-甲基-3-糠酸(2)，然后用甲氧基環(huán)己烯酰l捕獲如此產(chǎn)生的二價陰離子。用過量的重氮甲垸處理從該反應(yīng)獲得的產(chǎn)物，以產(chǎn)生合成纖維(synthon)(3)。用Li(R，')2Cu處理然后選擇性保護(hù)C4酮，將酯3直接轉(zhuǎn)化為三環(huán)化合物4。C6羰基還原，然后保護(hù)產(chǎn)生的羥基。用二當(dāng)量的間氯過苯甲酸(MCPBA)處理該物質(zhì)，然后用過量的重氮甲垸處理，產(chǎn)生開環(huán)的甲酯5。在甲醇中用NaBH4處理5，產(chǎn)生三環(huán)烯酮(tricyclicenone)6。將該烯酮(enone)催化氫化，然后在Cu處甲基化，并氧化甲基，產(chǎn)生7。將所有保護(hù)基團(tuán)去保護(hù)，得到化合物8。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，很多變化和修飾是顯而易見的。所有這些對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的變化和修飾都應(yīng)認(rèn)為落在上述廣義上的本發(fā)明精神和范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1-R6獨(dú)立地選自H、OH、鹵素、CH2、(C1-C8)烷基-、(C1-C8)烷基-O-、HO-(C1-C8)烷基-、NC-、H2N-、H2N-(C1-C8)烷基-、HO-(C＝O)-、HO-(C＝O)-(C1-C8)烷基、(C1-C8)-烷基(C＝O)-、(C1-C8)烷基-(C＝O)-(C1-C8)烷基-、H2N-(C＝O)-、H2N-(C＝O)-(C1-C8)烷基-和環(huán)烷基-，條件是當(dāng)R1＝CH3；R1’＝CH3；R2＝H，H；R3＝H，H；R3’＝H，H；R4＝H，H；R5＝O；R6≠CH3(Δ4，5)；當(dāng)R1＝H；R1’＝-；R2＝CH3；R3＝H；R3’＝H，H；R4＝H，H；R5＝H，H；R6≠CH3(Δ1，10)；當(dāng)R1＝CH3；R1’＝H；R2＝H，H；R3＝H，H；R3’＝H，H；R4＝H，H；R5＝H，H；R6≠CH2；當(dāng)R1＝CH3；R1’＝H；R2＝H，H；R3＝H，H；R3’＝H，H；R4＝H，H；R5＝H，H；R6≠CH3、OH；當(dāng)R1＝H；R1’＝CH3；R2＝H，H；R3＝H，H；R3’＝H，H；R4＝H，H；R5＝H，H；R6≠CH3、OH；當(dāng)R1＝-；R1’＝CH3；R2＝H，H；R3＝H，H；R3’＝H，H；R4＝H，H；R5＝O；R6≠CH3(Δ4.5)。2.選自下組的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽3.—種藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述化合物，和藥學(xué)上可接受的載體。4.一種抑制顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞生長或消除這些細(xì)胞的方法，該方法包括給予所述細(xì)胞有效量的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述化合物。5.—種治療或預(yù)防患者的與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的方法，該方法包括給予所述患者有效量的權(quán)利要求3所述組合物。6.如權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況或疾病包括實(shí)體瘤和造血惡性腫瘤。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述實(shí)體瘤包括胃腸道腫瘤，肝癌和膽道癌，胰腺癌，前列腺癌，睪丸癌，肺癌，乳腺癌，惡性黑色素瘤；卵巢癌，子宮癌，子宮頸癌，頭部癌和頸部癌，膀胱癌，肉瘤和骨肉瘤，卡波西肉瘤，AIDS相關(guān)的卡波西肉瘤和腎癌。8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述實(shí)體瘤是卵巢癌。9.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化合物在制備用于治療或預(yù)防與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的藥物中的用途。10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病包括實(shí)體瘤和造血惡性腫瘤。11.如權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于，所述實(shí)體瘤包括胃腸道腫瘤，肝癌和膽道癌，胰腺癌，前列腺癌，睪丸癌，肺癌，乳腺癌，惡性黑色素瘤；卵巢癌，子宮癌，子宮頸癌，頭部癌和頸部癌，膀胱癌，肉瘤和骨肉瘤，卡波西肉瘤，AIDS相關(guān)卡波西肉瘤和腎癌。12.如權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于，所述實(shí)體瘤是卵巢癌。13.—種Calomeriaamaranthoides提取物，其對顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性。14.如權(quán)利要求13所述的提取物，其特征在于，所述提取物是得自有機(jī)溶劑的提取物。15.如權(quán)利要求14所述的提取物，其特征在于，所述有機(jī)溶劑是氯仿。16.如權(quán)利要求14所述的提取物，其特征在于，所述提取物顯示圖5A所示的質(zhì)子NMR圖譜和圖5B所示的13CNMR圖譜。17.—種藥物組合物，其包含藥學(xué)有效量的權(quán)利要求13-16中任何一項(xiàng)所述的提取物，和藥學(xué)上可接受的載體。18.—種抑制顯示出與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況的細(xì)胞生長或消除這些細(xì)胞的方法，該方法包括給予所述細(xì)胞有效量的權(quán)利要求13-16中任何一項(xiàng)所述的提取物。19.一種治療或預(yù)防患者的與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的方法，該方法包括給予所述患者有效量的權(quán)利要求13-16中任何一項(xiàng)所述的提取物。20.如權(quán)利要求18或19所述的方法，其特征在于，所述與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)狀況或疾病包括實(shí)體瘤和造血惡性腫瘤。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述實(shí)體瘤包括胃腸腫瘤，肝癌和膽道癌，胰腺癌，前列腺癌，睪丸癌，肺癌，乳腺癌，惡性黑色素瘤；卵巢癌，子宮癌，子宮頸癌，頭部癌癥和頸部癌癥，膀胱癌，肉瘤和骨肉瘤，卡波西肉瘤，AIDS相關(guān)卡波西肉瘤和腎癌。22.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述實(shí)體瘤是卵巢癌。23.如權(quán)利要求13-16中任何一項(xiàng)所述的Calomeriaamaranthoides提取物在制備用于治療或預(yù)防患者與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的藥物中的用途。24.如權(quán)利要求23所述的用途，其特征在于，所述與增殖過度的細(xì)胞分裂相關(guān)疾病包括實(shí)體瘤和造血惡性腫瘤。25.如權(quán)利要求24所述的用途，其特征在于，所述實(shí)體瘤包括胃腸腫瘤，肝癌和膽道癌，胰腺癌，前列腺癌，睪丸癌，肺癌，乳腺癌，惡性黑色素瘤；卵巢癌，子宮癌，子宮頸癌，頭部癌癥和頸部癌癥，膀胱癌，肉瘤和骨肉瘤，卡波西肉瘤，AIDS相關(guān)卡波西肉瘤和腎癌。26.如權(quán)利要求24所述的用途，其特征在于，所述實(shí)體瘤是卵巢癌。全文摘要本發(fā)明涉及分離自Calomeriaamaranthoides的提取物和化合物、以及這類化合物的衍生物和類似物，它們對于顯示出增殖過度的細(xì)胞分裂的多種細(xì)胞類型具有細(xì)胞毒活性。文檔編號A61K36/28GK101098692SQ200580044660公開日2008年1月2日申請日期2005年12月23日優(yōu)先權(quán)日2004年12月23日發(fā)明者卡羅琳·范哈夫騰申請人:卡羅琳·范哈夫騰