專利名稱：：5-ht6激動劑用于治療和預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的主要神經(jīng)遞質(zhì)并且在神經(jīng)可塑性中起重要作用。谷氨酸的過高細(xì)胞外水平與急性神經(jīng)退化性疾病和慢性神經(jīng)退化性疾病的病理生理學(xué)均相關(guān)，急性神經(jīng)退化性疾病有例如中風(fēng)、短暫性缺血發(fā)作或脊椎/腦部創(chuàng)傷等，慢性神經(jīng)退化性疾病有例如癲癇、阿茲海默氏病(Alzheimer'sDisease)、肌萎縮性側(cè)索硬化、亨庭頓氏病(Huntington'sdisease)、帕金森氏病(Parkinson'sDisease)、AIDS癡呆癥和視網(wǎng)膜病、抑制谷氨酸釋放的化合物預(yù)計可用于治療其中谷氨酸功能紊亂起作用的慢性疾病，例如慢性神經(jīng)退化、阿茲海默氏病、亨庭頓氏病、帕金森氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、癲癇、精神分裂癥、AIDS癡呆癥或視網(wǎng)膜病。另外，抑制或減弱谷氨酸的釋放的化合物也可提供潛在的神經(jīng)保護劑，來治療由中風(fēng)、短暫性缺血發(fā)作或腦部/脊椎創(chuàng)傷導(dǎo)致的缺血2或由其中必須使血流停止一段時間的手術(shù)(例如，心臟橋接手術(shù))導(dǎo)致的缺血3。僅在美國便有約500-600萬人患有慢性或急性神經(jīng)退化性疾病。因此，需要一種能有效治療和預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的化合物。因此，本發(fā)明的一目的是提供一種治療或預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的方法。本發(fā)明的另一目的是提供一種神經(jīng)保護劑來源。通過下文所給出的詳細(xì)闡述可更加明了本發(fā)明的其他目的和特征。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種用于在有需要的患者中治療神經(jīng)退化性疾病的方法，其包括向所述患者投與治療有效量的5-羥色胺-6激動劑。本發(fā)明也提供一種用于治療神經(jīng)退化性疾病的醫(yī)藥組合物，其包括醫(yī)藥上可接受的載劑和有效量的5-羥色胺-6激動劑。圖l圖1是通過神經(jīng)絲ELISA測得的5-HT6激動劑(測試化合物B)對神經(jīng)元存活的神經(jīng)保護作用示意圖。圖2圖2是5-HT6激動劑(測試化合物B)對神經(jīng)突生長的神經(jīng)保護作用示意圖，其中數(shù)據(jù)以總神經(jīng)突長度表示。圖3是5-HT6激動劑(測試化合物C)在小腦顆粒神經(jīng)元中抗OGD誘發(fā)的神經(jīng)元細(xì)胞死亡的神經(jīng)保護作用示意圖。Mi圖4是5-HT6激動劑(測試化合物C)在小腦顆粒神經(jīng)元中抗鉀撤停誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的神經(jīng)保護作用示意圖。Ml圖5是5-HT6激動劑(測試化合物B)對經(jīng)培養(yǎng)大腦皮質(zhì)神經(jīng)元中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)蛋白質(zhì)水平上的作用示意圖。具體實施例方式紊亂的谷氨酸釋放并且尤其是過量的谷氨酸釋放與急性神經(jīng)退化性疾病和慢性神經(jīng)退化性疾病的病理生理學(xué)均相關(guān)，急性神經(jīng)退化性疾病有例如中風(fēng)、短暫性缺血發(fā)作或脊椎/腦部創(chuàng)傷等，慢性神經(jīng)退化性疾病有例如癲癇、阿茲海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、亨庭頓氏病、帕金森氏病、AIDS癡呆癥或視網(wǎng)膜病。另外，在缺血性腦部損傷后的腦部，內(nèi)源性GABA功能似乎顯著減弱(GreenA.R.等人，NeuroscienceLetters,1992,138，141-144;和GreenA.R.等人，Neuropharmacology,2000.39,1483-1493)。研究表明，能刺激GABA能功能的藥物(例如，GABA激動劑)當(dāng)與能降低谷氨酸能神經(jīng)傳遞的藥劑(例如谷氨酸拮抗劑)組合時具有神經(jīng)保護作用(Lyden等人，JournalofNeurotrauma，1995,12(2),223-230。此外，已證明腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)這一蛋白質(zhì)神經(jīng)生長因子家族的成員可促進神經(jīng)元的神經(jīng)保護和神經(jīng)再生。(Binder,D.K.和Scharfman，H.E.，GrowthFactors,2004，22(3)，第123-131頁)。因此，可增加BDNF水平的化合物可促進神經(jīng)元的存活和可塑性并且相應(yīng)地展示出神經(jīng)保護作用。(Nagappan，G.和Lu，B.，TrendsinNeurosciences,2005，28(9)，第464-471頁)。令人驚奇地，已發(fā)現(xiàn)5-HT6受體激動劑可有效地增加細(xì)胞外GABA濃度并降低由缺血誘發(fā)劑造成的谷氨酸釋放。另外，現(xiàn)在己發(fā)現(xiàn)，5-HT6激動劑可有效地增加經(jīng)培養(yǎng)大腦皮質(zhì)神經(jīng)元中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)蛋白質(zhì)的水平。這些發(fā)現(xiàn)有力地表明，5-HT6激動劑具有神經(jīng)保護性質(zhì)，包括促進神經(jīng)元的存活和可塑性，且可能是治療和預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的有效治療劑。有利地，使用選擇性5-HT6激動劑來治療神經(jīng)退化性疾病可能具有最小的副作用。5-HT6受體在腦部、外周器官系統(tǒng)(例如心血管系統(tǒng))中之獨有定位將不受5-HT6激動劑的影響。另外，5-HT6激動劑的特異性可能使作用快速產(chǎn)生并且增強治療功效。5-HT6激動劑在本文中定義為具有以下性質(zhì)的任何化合物，即如藉由業(yè)內(nèi)習(xí)知的常用結(jié)合分析方法所測定能與5-HT6受體結(jié)合，并且與血清素相比其展示出25%或以上、優(yōu)選地50%或以上、更優(yōu)選地70%或以上、尤其90%或以上的3'，5'-環(huán)一磷酸腺苷(cAMP)在5-HT6受體位點的積聚。尤其適用于本發(fā)明中之5-HT6激動劑是那些在WO99/47516、英國專利第2,341,549號、美國專利第6,770,642號、美國專利第6,767,912號、美國專利第6,800,640號、美國專利第6,727,246號和美國專利第2003-0236278號中闡述的化合物。美國專利第6,770,642號、美國專利第6,767,912號、美國專利第6,800,640號、美國專利第6,727,246號和美國專利第2003-0236278號以引用方式并入本文中。制備適用于本發(fā)明方法中之5-HT6激動劑的方法在上述專利和專利申請案以及美國專利第4,940,710號中闡述。適用于本發(fā)明方法中的優(yōu)選5-HT6激動劑包括那些在WO99/147516、英國專利第2,341,549號、美國專利第6,770,642號和美國專利第2003-0236278號中揭示并且具有式I結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>X是CH或N;和112各自獨立地為H、鹵素、CN、OC02Ru、C02Ri3、CONRwR^CNR!6NRnR！8、SOmRI9、NR2。R21、OR22、COR23或各自視情況經(jīng)取代的C,-C6垸基、(^2-(:6烯基、C2-C6炔基、C3-Q環(huán)垸基、雜環(huán)垸基(cycloheteroalkyl)、芳基或雜芳基；R3在X為CH時為S02R8，或在X為N時為(CH2)nNReR7;R4為H、鹵素，或為各自視情況經(jīng)取代的d-C6垸基、d-C6垸氧基、芳基或雜芳基；R5在X為CH時為(CHANR6R7，或在X為N時為S02R8;n為2或3的整數(shù)；Re和117各自獨立地為H或為各自視情況經(jīng)取代的CrQ烷基、(:2-(:6烯基、C2-C6炔基、CVC6環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，或R6和R7可與它們所連結(jié)的原子一起形成視情況含有選自O(shè)、N或S的另外雜原子的視情況經(jīng)取代5至7元環(huán)；Rs為視情況經(jīng)取代的芳基、雜芳基或在橋頭具有N原子并且視情況含有1、2或3個選自N、O或S的另外雜原子的8至13元雙環(huán)或三環(huán)環(huán)系統(tǒng)；m為0或為1或2的整數(shù)；R12、R13、R^和R23各自獨立地為H或為各自視情況經(jīng)取代的d-C6垸基、C2-C6烯基、Q-C6炔基、CVC6環(huán)垸基、雜環(huán)垸基、芳基或雜芳基；R14、1115和1122各自獨立地為H或視情況經(jīng)取代的CVC6垸基；且R16、R17、R18、R加和1121各自獨立地為H或視情況經(jīng)取代的CVQ垸基；或R2Q和R21可和它們所連結(jié)的原子一起形成視情況含有另一選自O(shè)、N或S的雜原子的5至7元環(huán)；或其立體異構(gòu)體或其醫(yī)藥上可接受的±卜JULn說明書和權(quán)利要求書中所用術(shù)語鹵素意指F、Cl、Br或I，且術(shù)語雜環(huán)垸基意指一含有1或2個雜原子并視情況含有一雙鍵的5至7元環(huán)系統(tǒng)，所述雜原子可相同或不同且選自N、0和S。涵蓋于如本文所定義術(shù)語中的雜環(huán)垸基環(huán)系統(tǒng)實例是下列各環(huán)，其中Xi是NR、O或S;且R是H或如下文所述的可選取代基類似地，說明書和權(quán)利要求書中所用術(shù)語雜芳基意指一含有1、2或3個雜原子的5至10元芳族環(huán)系統(tǒng)，所述雜原子可相同或不同且選自N、O或S。所述雜芳基環(huán)系統(tǒng)包括吡咯基、唑基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并異噁唑基或諸如此類。術(shù)語芳基意指例如具有6-14個碳原子的碳環(huán)芳族環(huán)系統(tǒng)，例如苯基、萘基、蒽基或諸如此類。本文所用術(shù)語鹵代烷基意指一具有1至2n+l個可相同或不相同的鹵素原子的0^2。+1基團，且如本文所用術(shù)語鹵代烷氧基意指一具有1至2n+l個可相同或不相同的鹵素原子的OCnH2^基團。涵蓋于本文所定義術(shù)語中于橋頭具有一N原子且視情況含有1、2或3個選自N、O或S的額外雜原子的8至13元二環(huán)或三環(huán)環(huán)系統(tǒng)的實例是下列環(huán)系統(tǒng)，其中W2是NR、O或S;且R是H或如本文所述的可選取代基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>在說明書和權(quán)利要求書中，當(dāng)指明術(shù)語例如Q-C6垸基、C2-Q烯基、C2-CV炔基、cvc7環(huán)垸基、雜環(huán)垸基、芳基或雜芳基視情況可經(jīng)取代時，視情況存在的所述取代基可以是一或多個、例如2或3個在研制醫(yī)藥化合物或改進所述化合物中通常采用的旨在影響其結(jié)構(gòu)/活性、持續(xù)性、吸收、穩(wěn)定性或其他有益性質(zhì)的取代基。所述取代基的具體實例包括鹵素原子、硝基、氰基、羥基、烷基、鹵代垸基、烷氧基、鹵代烷氧基、氨基、垸基氨基、二烷基氨基、甲?；③趸驶?、羧基、烷?；⑼榱蚧?、烷基亞磺?；?、垸基磺酰基、氨基酰胺基、苯基、苯氧基、節(jié)基、節(jié)氧基、雜環(huán)基(例如雜芳基或雜環(huán)垸基)或環(huán)烷基，優(yōu)選是鹵素原子或低碳烷基。通常，可存在0至3個取代基。當(dāng)任一前述取代基表示垸基取代基基團或包含烷基取代基作為基團的一部分時，其可以是直鏈或具支鏈的且可包含多至12個、優(yōu)選地多至6個、更優(yōu)選地多至4個碳原子。式I化合物可根據(jù)英國專利第2，341，549號、美國專利第6,770,642號和美國專利第2003-0236278號中所述方法制備。適用于本發(fā)明方法中的更優(yōu)選5-HT6激動劑為1-磺?；费苌?，其包括其中X為CH、n為2、并且R8為各自視情況經(jīng)取代的苯基或咪唑并[2,l-b][l，3]噻唑基的那些式I化合物。適用于本發(fā)明方法中的另一組更優(yōu)選5-HT6激動劑為3-磺酰基氮雜fl引哚，其包括那些其中X為N、n為2、并且Rs為各自視情況經(jīng)取代的苯基或咪唑并<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>[l，3]噻唑基的式I化合物。尤其適用于本發(fā)明方法的式I5-HT6激動劑化合物有:2-U-[6-氯咪唑并[2，l-b][1，3]噻唑-5-基)磺酰基]-lH-吲哚-3-基)乙胺；(2-(3-[(2，5-二甲氧基苯基)磺?；鵠-lH-吡咯并[2，3七]吡啶-1-基}乙基)胺；N-(2-(3-[(3-氟苯基)磺酰基]-lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-l-基)乙基)-N，N-二甲胺；2-Ul-(苯基磺?；?-lH-吲哚-3-基]乙基l-N，N-二甲胺；其醫(yī)藥上可接受的鹽；或其立體異構(gòu)體。展示出5-HT6受體激動劑活性的化合物可與例如下列酸形成酸加成鹽習(xí)用醫(yī)藥上可接受的酸，例如乙酸、磷酸、硫酸、氫氯酸、氫溴酸、檸檬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富馬酸、乙酸、乳酸、酒石酸、水楊酸、硝酸、磺酸、對甲苯磺酸、甲垸磺酸或諸如此類。因此本發(fā)明方法涵蓋5-HT6受體激動劑的鹽。本發(fā)明方法包括5-HT6激動劑化合物的酯、氨基甲酸酯或其他常見前藥形式，它們通常是5-HT6激動劑化合物的功能衍生物并且可容易在活體內(nèi)轉(zhuǎn)化成所述活性部分。因此，本發(fā)明方法涵蓋用5-HT6激動劑(例如式I化合物)或用未具體揭示但施用后可在活體內(nèi)轉(zhuǎn)化成5-HT6激動劑的化合物來治療神經(jīng)退化性疾病。所包括的還有5-HT6激動劑化合物的代謝產(chǎn)物，所述代謝產(chǎn)物被定義為在將所述激動劑導(dǎo)入一生物系統(tǒng)時所產(chǎn)生的活性物質(zhì)。展示出5-HT6受體激動劑活性的化合物可以一或多種立體異構(gòu)體形式存在。所述各種立體異構(gòu)體包括對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體。所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員會了解，一種立體異構(gòu)體當(dāng)相對于其他立體異構(gòu)體富集或當(dāng)與其他立體異構(gòu)體分離開來時可更具活性或可展現(xiàn)有益作用。另外，所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員知曉如何分離、富集或選擇性制備所述立體異構(gòu)體。因此，本發(fā)明方法涵蓋5-HT6激動劑化合物、其立體異構(gòu)體和其醫(yī)藥上可接受的鹽。所述激動劑化合物可以立體異構(gòu)體混合物、單個立體異構(gòu)體或以光學(xué)活性或?qū)τ钞悩?gòu)體純形式存在。因此，本發(fā)明提供一種在有需要的患者中有效治療和預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的方法，其包括向所述患者提供治療有效量的上文所述5-HT6激動劑。在本發(fā)明一實施例中，提供一種在有需要的患者中增加腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子蛋白質(zhì)的方法，其包括向所述患者提供治療有效量的上文所述5-HT6激動劑。所述5-HT6激動劑可通過經(jīng)口或非經(jīng)腸施與方式或以任一已知有效施與治療劑的習(xí)用方式來提供給有其需要的患者。本文所用治療有效量是足以提供一定程度的神經(jīng)保護作用或足以治療、預(yù)防或緩解與神經(jīng)退化或者過度的或紊亂的谷氨酸釋放有關(guān)的癥狀的量。適合用本發(fā)明方法治療的神經(jīng)退化性疾病包括慢性神經(jīng)退化性疾病和急性神經(jīng)退化性疾病二者。慢性神經(jīng)退化性疾病包括但不限于阿茲海默氏病、肌萎縮性側(cè)索硬化、亨庭頓氏病、帕金森氏病、AIDS癡呆癥、癲癇或視網(wǎng)膜病。急性神經(jīng)退化性疾病包括但不限于中風(fēng)、頭部或脊椎創(chuàng)傷或窒息。中風(fēng)包括急性血栓栓塞性中風(fēng)、局灶性腦缺血和全腦缺血、瞬時腦缺血發(fā)作或其他伴有腦部缺血的腦血管病。其他急性神經(jīng)退化性疾病與下列有關(guān)腦部創(chuàng)傷、脊椎創(chuàng)傷、全身性缺氧、組織缺氧(包括胎兒缺氧)、低血糖癥、低血壓以及在手術(shù)期間由栓塞、高灌注或組織缺氧導(dǎo)致的類似損傷。本發(fā)明方法可用于多種事件中，包括在手術(shù)、尤其心臟手術(shù)期間，用于頭顱出血的事件中，用于圍產(chǎn)兒窒息中，用于心動停止中，或癲癇持續(xù)狀態(tài)，尤其是流向腦部的血流中止一段時間的情況下。在治療神經(jīng)退化性疾病中所提供的治療有效量可根據(jù)下列因素而有所變化患者的體型、年齡和反應(yīng)方式、病癥嚴(yán)重程度、主治醫(yī)師的判斷及諸如此類。一般而言，每日經(jīng)口施與的有效量可以是約0.01至1,000mg/kg，優(yōu)選地約0.5至500mg/kg，且非經(jīng)腸施與的有效量可以是約0.1至100mg/kg，優(yōu)選地約0.5至50mg/kg。在實際應(yīng)用中，所述5-HT6激動劑通過以固體或液體形式施與所述5-HT6激動劑化合物或其前體來提供，其或單獨施與或與一或多種習(xí)用醫(yī)藥載劑或賦形劑組合施與。因此，本發(fā)明提供一種用于治療和預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的醫(yī)藥組合物，其包括醫(yī)藥上可接受的載劑和有效量的上文所述5-HT6激動劑。適用于本發(fā)明組合物的固體載劑包括一或多種可起調(diào)味劑、潤滑劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、滑動劑、壓縮助劑、粘結(jié)劑、錠劑崩解劑或封裝材料作用的物質(zhì)。在粉劑中，載劑可為與微細(xì)5-HT6激動劑化合物混合在一起的微細(xì)固體。在錠劑中，所述5-HT6激動劑化合物可與具有必需的壓縮性質(zhì)的載劑以適宜比例混合并以期望形狀和尺寸壓制。所述粉劑和錠劑可包含多至99重量呢的所述5-HT6激動劑化合物。適用于本發(fā)明組合物的固體載劑包括磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、糖類、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧基甲基纖維素納、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點蠟和離子交換樹脂?？捎诒景l(fā)明組合物中采用任一適用于制備溶液、懸浮液、乳液、糖漿和酏劑的醫(yī)藥上可接受的液體載劑?？蓪⑺?-HT6激動劑化合物溶解于或懸浮于醫(yī)藥上可接受的液體載劑中，例如水、有機溶劑或醫(yī)藥上可接受的油或脂肪或其混合物。所述液體組合物可包含其他適宜醫(yī)藥添加劑，例如增溶劑、乳化劑、緩沖劑、防腐劑、甜味劑、調(diào)味劑、懸浮劑、增稠劑、著色劑、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、滲透調(diào)節(jié)劑或諸如此類。適用于經(jīng)口和非經(jīng)腸施與的液體載劑實例包括水(尤其是包含例如纖維素衍生物等上述添加劑的水，優(yōu)選地是羧基甲基纖維素鈉溶液)、醇類(包括一元醇和多元醇，例如二醇類)或其衍生物、或油類(例如，精制椰子油和花生油)。對于非經(jīng)腸施與，載劑也可以是油酯，例如油酸乙酯或肉豆蔻酸異丙酯。為無菌溶液或懸浮液的本發(fā)明組合物適用于肌內(nèi)、腹膜腔內(nèi)或皮下注射。無菌溶液也可經(jīng)靜脈施與。適用于經(jīng)口施與的本發(fā)明組合物可呈液體或固體組合物形式。為使理解更為清楚并且更清楚地闡明本發(fā)明，下文對其具體實例加以闡述。下列實例僅具有闡述性質(zhì)而不應(yīng)將其理解成以任何方式對本發(fā)明范圍和基本原理加以限制。對多種5-HT6配體的5-HT6結(jié)合親和性和cAMP產(chǎn)生的測定A)對測試化合物5-HT6結(jié)合親和性的評價以下列方法評價測試化合物對血清素5-HT6受體的親和性。收集表達(dá)克隆的人類5-HT6受體的Hela培養(yǎng)細(xì)胞并以低速(1，000xg)離心10.0分鐘以去除培養(yǎng)基。將收集的細(xì)胞懸浮于一半體積的新鮮的磷酸鹽緩沖生理鹽水溶液中并再次以相同速率離心。重復(fù)此操作。然后將收集到的細(xì)胞于10體積50mMTris.HCl(pH7.4)和0.5mMEDTA中勻漿。將勻漿液以40,000xg離心30.0分鐘并收集沉淀。將所得沉淀重懸于10體積Tris.HCl緩沖液中并再次以相同速率離心。將最終得到的沉淀懸浮于少量Tris.HCl緩沖液中并于10至25pl體積等份中測定組織蛋白質(zhì)含量。根據(jù)Lowry等人在J.Biol.Chem.193:265(1951)中所述方法用牛血清白蛋白作為蛋白質(zhì)測定的標(biāo)準(zhǔn)物。調(diào)整懸浮細(xì)胞膜體積以得到組織蛋白質(zhì)濃度為1.0mg/ml的懸浮液。將所制備的膜懸浮液(IO倍濃縮)等分成l.Oml體積的小份，并在用于后續(xù)結(jié)合實驗之前保存在-70。C下。結(jié)合實驗以96孔微滴定板形式以200pl的總體積實施。向每一孔中添加下列混合物于含有10.0mMMgCI2和0.5mMEDTA的50mMTris.HCl緩沖液(pH7.4)中制備的80.0|il培育緩沖液和20[3H]-LSD(S.A.，86.0Ci/mmol，購自AmershamLifeScience),3.0nM。[3H]LSD對人類血清素5-HT6受體的離解常數(shù)KD是2.9nM，如通過利用[SH]LSD的不斷增加濃度的飽和結(jié)合所測定。本反應(yīng)通過最終添加100.0pl組織懸浮液來起始。在10.0pM美賽西平(methiothepin)存在下測量非特異性結(jié)合。測試化合物以20.0pi體積添加。使所述反應(yīng)于室溫下在暗處持續(xù)120min，其間將已結(jié)合的配體-受體復(fù)合體于配有一PackardFiltermate196Harvester的96孔Unifilter上過濾除去。在向各淺孔中添加40.0|ilMicroscint-20閃爍劑后，將附著于過濾片上的已結(jié)合復(fù)合體在空氣中干燥并在配有6個光電倍增管檢測器的PackardTopCo皿t③中測量放射活性。將Unifilter板加熱密封并在PackardTopCount③中計數(shù)，其中氚效率為31.0%。將對5-HT6受體的特異性結(jié)合定義為總結(jié)合放射活性減去在10.0未標(biāo)記美賽西平存在下的結(jié)合量。將不同濃度測試化合物存在下的結(jié)合表示為不存在測試化合物時特異性結(jié)合的百分比。將結(jié)果以log呢結(jié)合對log測試化合物濃度作圖。用計算機輔助程序Prism⑧進行數(shù)據(jù)點的非線性回歸分析，得到測試化合物的IQ。和Ki值二者，其中置信界限為95%。繪制數(shù)據(jù)點的線性回歸線，根據(jù)下列公式自所述線性回歸線測定ICso值并測定Ki值Ki=IC50/(1+L/KD)其中L是所用放射性配體的濃度且KD是所述配體對受體的離解常數(shù)，二者皆以nM表示。使用本分析，測定下列Ki值并將其與那些由已知可對5-HT6受體展現(xiàn)結(jié)合的代表性化合物得到的數(shù)值加以比較。所述數(shù)據(jù)示于下表I中。B)使用cAMP積聚測定5-HT6激動劑活性使用含有穩(wěn)定轉(zhuǎn)染入HELA細(xì)胞中的人類5-HT6受體的24孔板測量細(xì)胞內(nèi)cAMP水平。在分析開始后，抽吸出細(xì)胞維持的培養(yǎng)基并將細(xì)胞在37'C下在KREBS緩沖液中預(yù)培養(yǎng)15分鐘。在此初始培養(yǎng)后，抽吸出緩沖液并在37'C下在含有100nMIBMX(3-異丁基-l-甲基黃嘌呤)的KREBS緩沖液中實施另外的培養(yǎng)。隨后，在37'C下用在10—6至10-11M間的測試化合物濃度將細(xì)胞培養(yǎng)10分鐘。通過添加0.5M高氯酸中止分析。經(jīng)由cAMPSPA篩選試劑盒通過放射性免疫分析測定細(xì)胞內(nèi)cAMP水平。使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,SanDiego，CA)以圖表形式分析數(shù)據(jù)。5-HT6激動劑從而定義為相對于通過添加血清素(100nM)測量的cAMP水平展示出》25%活性的化合物。所述值記錄為Emax(9fc)并示于表I中。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實例2對5-HT6激動劑在神經(jīng)元存活方面的評價在此評價中，自E16大鼠胚胎制備神經(jīng)元培養(yǎng)物。在經(jīng)過24小時后，將測試化合物B以不同濃度添加到所述培養(yǎng)物中。在經(jīng)過72小時后，通過神經(jīng)絲ELISA測定神經(jīng)元存活率。數(shù)據(jù)以總T神經(jīng)絲含量表示。在此評價中測試化合物B的ECso為50nM。結(jié)果示于圖1中。結(jié)果和討論如圖1中所示，通過在72小時后存在的神經(jīng)絲的量來測量培養(yǎng)物中神經(jīng)元的存活率。當(dāng)與媒劑處理的對照相比時，用測試化合物B處理經(jīng)培養(yǎng)神經(jīng)元可增加神經(jīng)絲含量。能使存活率顯著增大的測試化合物B的最低濃度為10nM。實例3對5-HT6激動劑在經(jīng)培養(yǎng)大腦皮質(zhì)神經(jīng)元中神經(jīng)突生長方面的評價在此評價中，自E16大鼠胚胎制備大腦皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)物。在經(jīng)過24小時后，將測試化合物B以不同濃度添加到所述培養(yǎng)物中。在經(jīng)過72小時后，通過用微管蛋白抗體(TUJ-1)將細(xì)胞染色并用CellomicsArrayScan測量神經(jīng)突長度，使用增強的神經(jīng)突生長(EnhancedNeuriteOutgrowth,ENO)算法來測定神經(jīng)突生長。數(shù)據(jù)以總神經(jīng)突長度表示。在此評價中測試化合物B的EC5o為48nM。結(jié)果示于圖2中。結(jié)果和討論如圖2中所示，72小時后定量培養(yǎng)物中經(jīng)培養(yǎng)神經(jīng)元的總長度。當(dāng)與媒劑處理的對照相比時，用測試化合物B處理經(jīng)培養(yǎng)神經(jīng)元可增加總神經(jīng)絲長度。能使總神經(jīng)突長度顯著增加的測試化合物B的最低濃度為10nM。實例4對5-HT6激動劑在小腦顆粒神經(jīng)元中抗缺氧和缺糖的神經(jīng)保護作用的評價小腦顆粒神經(jīng)元(CGN)的制備將自P7大鼠幼崽腦部分離的小腦切成1mm的片并轉(zhuǎn)移到含有在HBSS中的0.3mg/ml胰蛋白酶的試管中。在酶切消化后，以機械方式粉碎所述組織。收集上清液并在1200rpm下離心10分鐘。將所產(chǎn)生的沉淀重懸浮在完全培養(yǎng)基(Neurobasal，25nM鉀，0.5mML-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100}ig/ml鏈霉素，10%FBS)中并以0.5x106細(xì)胞/孔的密度涂布在24孔板中。24小時后，將培養(yǎng)基更換為完全不含血清的培養(yǎng)基(Neurobasal，25nM鉀，0.5mML-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100pg/ml鏈霉素，B-27補充劑)。CGN中的缺氧缺糖(OGD).-這是一個熟知的與谷氨酸誘發(fā)的興奮毒性有關(guān)的缺血樣神經(jīng)元損傷模型T(A.Kaasik等人，Neuroscience(2001)102，第427-432頁)。在實驗前將培養(yǎng)物在活體外保持14天。將培養(yǎng)物用不同濃度的測試化合物C預(yù)處理1小時并轉(zhuǎn)移到無氧室中，在這里將培養(yǎng)基更換為去氧緩沖液并在存在新鮮測試化合物C下保持4小時。在4小時的OGD后，將去氧緩沖液更換為完全培養(yǎng)基。將培養(yǎng)物在存在新鮮測試化合物C下保持24小時。在24小時結(jié)束后，通過測量釋放到培養(yǎng)基中的乳酸脫氫酶(LDH)測定細(xì)胞死亡并以細(xì)胞死亡百分率表示。結(jié)果示于圖3中并以5次實驗的平均值+SD表示。Sham條表示使培養(yǎng)物經(jīng)受調(diào)節(jié)和培養(yǎng)基的改變而不進行OGD或藥物處理而獲得的結(jié)果。結(jié)果和討論如圖3中所示，使CGN培養(yǎng)物經(jīng)受4小時的OCG可產(chǎn)生50%以上的細(xì)胞死亡，這是通過測量釋放入培養(yǎng)基中的胞質(zhì)酶(LDH)獲得。用測試化合物C預(yù)處理經(jīng)培養(yǎng)神經(jīng)元，隨后在測試化合物C的存在下使之經(jīng)受OGD和24小時的回收期，結(jié)果神經(jīng)元細(xì)胞死亡以劑量依賴方式降低。提供顯著保護的測試化合物C的最低濃度為10nM。用1測試化合物C處理可使神經(jīng)元死亡降低50%。實例5對5-HT6激動劑在小腦顆粒神經(jīng)元中抗鉀撤停誘發(fā)的細(xì)胞凋亡的神經(jīng)保護作用的評價鉀撤停，即更換掉CGN培養(yǎng)基中的25nM鉀是熟知的由細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的神經(jīng)元細(xì)胞死亡模型(T.M.Miller和E.M.Johnson,JournalofNeuroscience,(1996)16(23)，第7487-7495頁)。在實驗前將培養(yǎng)物保持7天。將含25mMK+的完全培養(yǎng)基更換為含5mMK+的完全培養(yǎng)基。將不同濃度的測試化合物C添加到培養(yǎng)物中。24小時后，通過經(jīng)由ELISA測量DNA斷裂來測定凋亡性細(xì)胞死亡。凋亡性細(xì)胞死亡以％細(xì)胞凋亡表示。結(jié)果以2次實驗的平均值+SD表示并示于圖4中。結(jié)果和討論在圖4中可看出，將25mM鉀更換為5mM鉀在經(jīng)過24小時后可誘發(fā)75%的凋亡性神經(jīng)元細(xì)胞死亡。在低鉀期間存在測試化合物C可顯著地并且以劑量依賴方法減少在此模型中用作細(xì)胞凋亡量度的斷裂DNA的量。所評價的測試化合物C的低濃度(0.3pM)使細(xì)胞死亡降低50%，而在存在3.0(iM測試化合物C下發(fā)現(xiàn)幾乎百分百的抗細(xì)胞凋亡保護。實例6對5-HT6激動劑在經(jīng)培養(yǎng)大腦皮質(zhì)神經(jīng)元中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子蛋白質(zhì)水平上的作用的評價在此評價中，自E16大鼠胚胎制備大腦皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)物并將其涂在預(yù)涂覆10cmPetri培養(yǎng)皿上。在24小時后，將測試化合物B添加到培養(yǎng)物中。在72小時后通過裂解細(xì)胞并使用BDNF三明治ELISA測量腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)蛋白質(zhì)的水平。更具體的說，用抗BDN單克隆抗體涂布ELISA板。阻斷非特異性結(jié)合并添加50pg的試樣蛋白質(zhì)。添加第二抗BDNF抗體并培養(yǎng)。添加與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗IgY抗體并培養(yǎng)。添加TMB溶液并在板式讀取器中測量比色反應(yīng)(450nm的吸光率)。72小時后定量培養(yǎng)物中的BDNF水平。數(shù)據(jù)以圖表形式顯示于圖6中。結(jié)果和討論如圖6中所示，當(dāng)與媒劑處理的對照相比時，用測試化合物B處理經(jīng)培養(yǎng)神經(jīng)元顯著增大BDNF蛋白質(zhì)水平。參者文獻(xiàn)iHolt，^V.F.等人，GlutamateinHealthandDisease:TheRoleofInhibitors,NeuroprotectioninCNSDiseases,Bar,P,R.及Beal,M.F.編輯，MarcelDekker公司，NewYork,1997.第87-199頁。Engelsen,B.A.等人，AlterationsinExcitatoryAminoAcidTransmittersinHumanNeurologicalDiseaseandNeuropathology,NeurotoxicityofExcitatoryAminoAcids.Guidotti，A.編輯，RavenPress有限公司，NewYork,1990,第311-332頁。Ince,RG.,等人，TheRoleofExcitotoxicityinNeurologicalDisease,Res.Contemp.Pharmacother，(1997)，8，第195-212頁。Meldrum，B.S.，TheGutamateSynapseasaTherapeuticalTarget:PerspectivefortheFuture,Prog.BrainRes.，(1998)，第441-458頁。2Koroshetz，W.J.andMoskowitz,M.A.,EmergingTreatmentforStrokeinHumans,TrendsinPharmacol.Science,(1996),17,第227-233頁。Dunn,C.D,R.，Stroke:Trends,TratmentsandMarkets,ScripReports,PJBPublications,RichmondVirginia,1995。3Arrowsmith，J.E.，等人，NeuroprotectionoftheBrainDuringCardiopulmonaryBypass:ARandomizedTrialofRemacemideDuringCoronaryArteryBypassin171Patients,Stroke,(1998)，29，第2357-2362頁。權(quán)利要求1、一種在有需要的患者中治療神經(jīng)退化性疾病的方法，其包括向所述患者提供治療有效量的5-羥色胺-6激動劑。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述5-羥色胺-6激動劑是1-磺?；费苌?。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述5-羥色胺-6激動劑是l-氨基垸基-3-磺?；s吲哚衍生物。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述5-羥色胺-6激動劑是式I化合物，其中X為CH或N;R！和112各自獨立地為H、卣素、CN、OC02Ri2、C02R!3、CONR!4R!5、CNRwNRnR比、SOmR19、NR20R21、OR22、COR23或各自視情況經(jīng)取代的Q-C6烷基、C2-Q烯基、C2-C6炔基、C3-C6環(huán)烷基、雜環(huán)垸基(cycloheteroalkyl)、芳基或雜芳基；R3在X為CH時為S02R8，或在X為N時為(CHANR6R7;R4為H、鹵素，或為各自視情況經(jīng)取代的CVC6烷基、d-Q烷氧基、芳基或雜芳基；R5在X為CH時為(CH2)nNR6R7，或在X為N時為S02R8;n為2或3的整數(shù)；R6和R7各自獨立地為H或為各自視情況經(jīng)取代的d-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、CVC6環(huán)烷基、雜環(huán)垸基、芳基或雜芳基，或R6和R7可與它們所連結(jié)的原子一起形成視情況含有選自O(shè)、N或S的另外雜原子的視情況經(jīng)取代5至7元環(huán)；R8為視情況經(jīng)取代的芳基、雜芳基或在橋頭具有一N原子并且視情況含有1、2或3個選自N、O或S的另外雜原子的8至13元雙環(huán)或三環(huán)環(huán)系統(tǒng)；m為0或l或2的整數(shù)；R12、R13、Rw和R23各自獨立地為H或為各自視情況經(jīng)取代的d-C6烷基、C2-C6烯基、C2-Q炔基、CVC6環(huán)烷基、雜環(huán)垸基、芳基或雜芳基；R14、Ru和R22各自獨立地為H或視情況經(jīng)取代的d-C6烷基；且R16、R17、R18、R2o和Ru各自獨立地為H或視情況經(jīng)取代的d-C4垸基；或R20和Ru可和它們所連結(jié)的原子一起形成視情況含有另一選自O(shè)、N或S的雜原子的5至7元環(huán)；或其立體異構(gòu)體或其醫(yī)藥上可接受的鹽。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其具有式I化合物，其中X為CH;n為2;并且R8為各自視情況經(jīng)取代的苯基或咪唑并[2，l-b][l，3]噻唑基。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其具有式I化合物，其中X為N;n為2;并且R8為各自視情況經(jīng)取代的苯基或咪唑并[2，l-b][l，3]噻唑基。7、根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其具有選自由下列化合物組成的群組的式I化合物2-(l-[6-氯咪唑并[2，l-b][l，3]噻唑-5-基)磺?；鵠-lH-吲哚-3-基)乙胺；(2-(3-[(2，5-二甲氧基苯基)磺?；鵠-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-l-基)乙萄胺；N-(2-(3-[(3-氟苯基)磺?；鵠-lH-吡咯并[2，3-b]吡啶-l-基)乙基)-N,N-二甲胺；2-([l-(苯基磺酰基)-lH-吲哚-3-基]乙基卜N，N-二甲胺；其醫(yī)藥上可接受的鹽；及其立體異構(gòu)體。8、根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述疾病為急性神經(jīng)退化性疾病。9、根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述疾病為慢性神經(jīng)退化性疾病。10、根據(jù)權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的方法，其中所述疾病選自中風(fēng)；頭部創(chuàng)傷；脊椎創(chuàng)傷；窒息；阿茲海默氏病(Alzheimer'sdisease);亨庭頓氏病(Huntington'sdisease);帕金森氏病(Parkinson'sdisease);癲癇；肌萎縮性側(cè)索硬化；AIDS癡呆癥；和視網(wǎng)膜病。11、一種用于治療神經(jīng)退化性疾病的醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥上可接受的載劑和有效量的5-HT6激動劑或權(quán)利要求2至8中任一項所述的5-HT6激動劑。12、一種5-HT6激動劑或權(quán)利要求2至8中任一項所述的5-HT6激動劑的用途，其用于制備治療神經(jīng)退化性疾病用藥物。13、根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中所述疾病選自中風(fēng)；頭部創(chuàng)傷；脊椎創(chuàng)傷；窒息；阿茲海默氏?。缓嗤ヮD氏??；帕金森氏?。话d癇；肌萎縮性側(cè)索硬化；AIDS癡呆癥；和視網(wǎng)膜病。全文摘要本發(fā)明提供用于在有需要的患者中治療、改善或預(yù)防神經(jīng)退化性疾病的方法，其包括向所述患者投與有效量的5-羥色胺-6激動劑。文檔編號A61P25/16GK101098683SQ200580046420公開日2008年1月2日申請日期2005年12月12日優(yōu)先權(quán)日2004年12月14日發(fā)明者凱文·蓬,李·歐文·謝克特,瑪格麗特·瑪麗亞·扎列斯卡申請人:惠氏公司