專利名稱：人參皂苷f(shuō)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)是人參皂苷F1(ginsenoside F1)的醫(yī)藥用途。
人參皂苷F1分子式C36H62O9分子量638.87背景技術(shù)人參(Panax ginseng C.A.Mey.)為五加科植物人參的根，分布于黑龍江、吉林、遼寧和河北北部的深山中。作為常用中草藥首載于漢代《神農(nóng)本草經(jīng)》，并被列為上品。人參性溫、味甘微苦，具有大補(bǔ)元?dú)?、固脫生津、益智安神等功效。用治勞傷虛脫，食少，倦怠，反胃吐食，大便滑泄，虛咳喘促，自汗暴脫，驚悸，健忘，眩暈頭痛，陽(yáng)萎，尿頻，消渴，婦女崩漏，小兒慢驚，及久虛不復(fù)，一切氣血津液不足之證。
目前公認(rèn)人參皂苷是人參的有效部位，其中的Rg1作為有效成分之一，含量較高，活性強(qiáng)，作用廣。但是，天然人參皂苷被腸道吸收的能力極差，難以入血發(fā)揮藥效作用，從而影響了人參皂苷的新藥開(kāi)發(fā)及產(chǎn)業(yè)化。
近年研究表明，人和大鼠口服人參皂苷后，在人腸道內(nèi)代謝途徑為Rg1→Rh1→原人參三醇(Ppt)，在大鼠腸道內(nèi)的代謝途徑為Rg1→Rh1/F1(ginsenoside F1)→原人參三醇(Ppt)。其中F1為Rh1的同分異構(gòu)體Kanaoks M，Akao T，Kobashi K.Metabolism of ginseng saponins，ginsenoside，by human intestinal flora.Wakan Iyakugaku Zasshi，1994，11241；HideoH，Jong HS，Satoshi M，et al.Main ginsengsaponin metabolites formed by intestinalbacteria.Planta Med，1996，62453。說(shuō)明Rg1經(jīng)腸內(nèi)菌代謝后，兩個(gè)中間產(chǎn)物(Rh1及F1)被吸收入血產(chǎn)生藥理作用。
對(duì)于人參單體皂苷的藥理作用的研究發(fā)現(xiàn)，盡管人參中主要有效成分是人參皂苷，然而各單體的藥理作用并不完全一致，有些甚至截然相反，因此單體皂苷的生物活性研究非常重要。
近年國(guó)內(nèi)外多側(cè)重于天然人參皂苷的研究，而對(duì)于人參皂苷F1的藥理活性研究則較少，已有文獻(xiàn)報(bào)道的人參皂苷F1藥理活性有以下幾方面抗癌張有為，竇德強(qiáng)，陳英杰，等.人參皂苷對(duì)人體骨肉瘤細(xì)胞U2OS增殖的影響.中草藥，2001，32(3)232-236；HasegawaHideo，Sung Jong-Hwan，Matsumiya Satoshi，et al.Reversal of daunomycin andvinblastine resistance in multidrug-resistant P388 Leukemia in vitro throughenhanced cytotoxicity by triterpenoids.Planta Med，61(5)，409-1、抗紫外線引起的細(xì)胞凋亡Lee Enn Hee，Cho Si Young，Kim Su Jong，et al.Ginsenoside F1protects humanHaCaT keratinocytes from ultraviolet-B-induced apoptosis by maintaining constantlevels of Bcl-2.Journal of Investigative Dermatology，121(3)607-613、抗HIVHasegawa Hideo，Matsumiya Satoshi，Satoshi Uchiyama Masamori，et al.Inhibitoryeffect of some triterpenoid saponins on glucose transport in tumor cells and itsapplication to in vitro cytotoxic and antiviral activities.Planta Med，60(3)，240-3、調(diào)節(jié)綿羊紅細(xì)胞葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)Hasegawa Hideo，Matsumiya Satoshi，Murakami Chikgar，et al.Interactions of ginseng extract，ginseng separated fractions，and sometriterpenoid saponins with glucose transporters in sheep erythrocytes.PlantaMed，60(2)，153-7、誘導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間通訊的降低Zhang YW，Dou DQ，Zhang L，etal.Effects of ginsenosides from Panax ginseng on cell-to-cell communication functionmediated by gap junctions.Planta Med.2001 Jul；67(5)417。關(guān)于人參皂苷F1在治療帕金森病方面的活性則未見(jiàn)報(bào)道。
帕金森氏病(Parkinson’s disease，簡(jiǎn)稱PD)是以震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)減少和姿勢(shì)異常為特征的慢性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，是中老年人常見(jiàn)病。目前其公認(rèn)的發(fā)病機(jī)理是腦黑質(zhì)細(xì)胞變性，致密斑部不能合成多巴胺(DA)而致DA嚴(yán)重缺失。臨床主要采用多巴胺類藥物替代治療，但只能控制癥狀，副作用較大。故尋找并開(kāi)發(fā)能治療帕金森氏病的藥物將具有重要的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供人參皂苷F1在制備治療帕金森氏病的藥物中的應(yīng)用。
人參的抗衰老、促智作用經(jīng)幾千年的臨床實(shí)踐已得到充分證實(shí)，而帕金森氏病為慢性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，為老年人常見(jiàn)病。從而提示我們對(duì)來(lái)源于人參的成分人參皂苷F1是否具有治療帕金森氏病的作用進(jìn)行探索，結(jié)果表明人參皂苷F1能改善PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，從而為人參皂苷F1治療帕金森氏病提供藥效學(xué)支持。
人參皂苷F1是一種已知的具有藥物活性的物質(zhì)，因此，可以按常規(guī)制劑方法，將其制備成臨床適用的任何一種藥劑，例如片劑、膠囊劑、顆粒劑等口服固體制劑、口服液體制劑、注射劑等。
在制備上述制劑的過(guò)程當(dāng)中，可以將人參皂苷F1與任何一種適用于制備成臨床藥劑的賦型劑混合使用，制備成藥物制劑。
通過(guò)本發(fā)明，人參皂苷F1可有效用于治療帕金森氏病，并且副作用小。
由于人參皂苷F1在制備治療帕金森氏病的藥物中的應(yīng)用是發(fā)明人的首次發(fā)現(xiàn)，因此，無(wú)論是人參皂苷F1單獨(dú)使用為活性成分制成的藥劑，還是利用人參皂苷F1的抗帕金森氏病活性與其他活性成分配合使用制成的藥劑，均在本專利的保護(hù)范圍之內(nèi)。
本發(fā)明通過(guò)下列實(shí)施方式證明了人參皂苷F1在治療帕金森氏病方面的用途，但不僅限于這些實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式試驗(yàn)例人參皂苷F1對(duì)帕金森氏病(PD)大鼠的影響1試驗(yàn)材料1.1動(dòng)物Sprague Dawley(簡(jiǎn)稱SD)雄性大鼠共130只，清潔2級(jí)，體重200～300g。購(gòu)自海南省人民醫(yī)院試驗(yàn)動(dòng)物中心，自由飲水進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)2-3d，實(shí)驗(yàn)室溫度控制在(24±1)℃，相對(duì)濕度為40％-80％。
1.2藥品、試劑及設(shè)備人參皂苷F1按制備例4、5方法制備。
6-羥基多巴購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。
阿撲嗎啡購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。
注射用青霉素鈉規(guī)格160萬(wàn)單位。天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)。
維生素C東北制藥總廠生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦立體定位儀(SN2型)為日本成茂公司產(chǎn)品。
小動(dòng)物旋轉(zhuǎn)監(jiān)測(cè)儀Bacman公司生產(chǎn)。
2分組與給藥將造模成功的70只PD大鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，具體如下(1)模型組；(2)人參皂苷F1低劑量組(2.5mg/kg，ig)；(3)人參皂苷F1中劑量組(5mg/kg，ig)；(4)人參皂苷F1高劑量組(10mg/kg，ig)；(5)人參皂苷F1低劑量組(1.5mg/kg，ip)；(6)人參皂苷F1中劑量組(3mg/kg，ip)；(7)人參皂苷F1高劑量組(6mg/kg，ip)。
給藥方法各組動(dòng)物于造模前一周開(kāi)始腹腔注射或灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3周。
3試驗(yàn)方法3.1造模方法130只SD大鼠，隨機(jī)分出10只作正常對(duì)照組，10只作假手術(shù)組(注射等量含2g/L維生素C的生理鹽水)，其余110只進(jìn)行造模。造模方法如下戊巴比妥鈉按體重50mg/kg腹腔注射麻醉并固定于立體定位儀，顱骨鉆孔，6-羥基多巴(6-OHDA)8μg溶于2μL生理鹽水(其中含2g/L維生素C)，微量注射于一側(cè)黑質(zhì)或/和內(nèi)側(cè)前腦束，注射完畢留針5min再緩慢拔出，封閉傷口。腹腔注射青霉素10萬(wàn)u/kg，換藥，每日1次，7日后拆線。術(shù)后2周用0.01％阿樸嗎啡腹腔注射(1ml/只)，觀察記錄每5min向健側(cè)旋轉(zhuǎn)次數(shù)及40min旋轉(zhuǎn)的總次數(shù)，旋轉(zhuǎn)次數(shù)≥7圈/min(280圈/40min)者為陽(yáng)性。每周1次，連續(xù)4周陽(yáng)性者為合格的PD模型大鼠。假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)行為。
3.2觀察指標(biāo)與方法分別于給藥第1、2、3周末用鹽酸阿撲嗎啡誘導(dǎo)檢測(cè)PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為。
4.結(jié)果人參皂苷F1對(duì)治療前后大鼠旋轉(zhuǎn)行為的影響表1顯示模型組大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)不斷增加，與治療前比較2周后即有顯著性差異(P＜0.01)；灌胃與注射給藥的中、高劑量人參皂苷F1治療后第2周即可改善PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，使旋轉(zhuǎn)圈數(shù)減少(與模型組比較，P＜0.05或P＜0.01)；灌胃與注射給藥的低劑量人參皂苷F1治療3周后比模型組的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)減少(P＜0.01)。
表1各組大鼠治療前后旋轉(zhuǎn)行為比較

注#與治療前比較，P＜0.05；##P＜0.01；*與模型組比較，P＜0.05；**P＜0.01。
5結(jié)論人參皂苷F1能改善PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為。
制備例中所述的人參皂苷Re、人參皂苷Rg1采用云南植物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的市售品；柚皮苷酶采用上海寶豐生化有限公司生產(chǎn)的市售品；二甲亞砜采用盤錦興海制藥有限公司生產(chǎn)的市售品；甲酰胺采用淄博市博山華耀試劑廠生產(chǎn)的市售品；羧甲基纖維素鈉采用上海邦成化工有限公司生產(chǎn)的市售品。
制備例1人參皂苷F1的制備500mg人參皂苷Re、150mg柚皮苷酶溶于50ml磷酸-檸檬酸緩沖液(pH 4.5，離子強(qiáng)度為0.01M，含10％的乙醇)中，于40℃水浴中水解7天；反應(yīng)液經(jīng)離心收集沉淀；用10ml水洗滌沉淀，洗滌3次(10ml×3)，洗液與母液合并，濃縮至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗滌沉淀，洗滌5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集殘余物得人參皂苷F1301mg。HPLC法測(cè)定人參皂苷F1含量為63％。
制備例2人參皂苷F1的制備500mg人參皂苷Rg1，150mg柚皮苷酶溶于50ml甘氨酸-HCl緩沖液(pH 4.5，離子強(qiáng)度為0.01M，含10％的二甲亞砜)中，于40℃水浴中水解7天；反應(yīng)液經(jīng)離心收集沉淀；用10ml水洗滌沉淀，洗滌3次(10ml×3)，洗液與母液合并，濃縮至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗滌沉淀，洗滌5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集殘余物得人參皂苷F1325mg。HPLC法測(cè)定人參皂苷F1含量為84％。
制備例3人參皂苷F1的制備500mg人參皂苷Re和Rg1混合物，150mg柚皮苷酶溶于50ml為醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 4.5，離子強(qiáng)度為0.01M，含10％的甲酰胺)中，于40℃水浴中水解7天；反應(yīng)液經(jīng)離心收集沉淀；用10ml水洗滌沉淀，洗滌3次(10ml×3)，洗液與母液合并，濃縮至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗滌沉淀，洗滌5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集殘余物得人參皂苷F1310mg。HPLC法測(cè)定人參皂苷F1含量為69％。
制備例4人參皂苷F1注射藥物的制備取制備例2的人參皂苷F10.1g，加水10ml，加入0.1g吐溫80，充分溶解，0.22μm微孔濾膜濾過(guò)，分裝，121℃滅菌15min，即得。
制備例5動(dòng)物試驗(yàn)灌胃藥物的制備取制備例1的人參皂苷F10.1g，加水10ml，加入1g助懸劑羧甲基纖維素鈉，充分混懸，即得。
權(quán)利要求
1.人參皂苷F1在制備治療帕金森氏病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
人參皂苷F
文檔編號(hào)A61P25/00GK1839860SQ20061000847
公開(kāi)日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月28日
發(fā)明者吳巍, 滕厚雷 申請(qǐng)人:?？诰G科南藥研究開(kāi)發(fā)有限公司