專利名稱：甘草苷在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘草苷(liquiritin)的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
美國化學(xué)文摘(CA 28:30762，1934)，已經(jīng)公開了化合物甘草苷，其結(jié)構(gòu)式為 (甘草苷liquiritin)該化合物其分子式為C21H22O9，無色針狀結(jié)晶，分子量為418?？捎啥箍聘什輰?Glycgrrhiza)多種植物豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖中提取制得。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供甘草苷的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
實(shí)際上，本發(fā)明涉及甘草苷作為制備治療或預(yù)防心律失常疾病藥物的應(yīng)用。
涉及甘草苷作為制備治療或預(yù)防冠心病藥物的應(yīng)用。
涉及甘草苷作為制備治療或預(yù)防胃潰瘍藥物的應(yīng)用。
涉及甘草苷作為制備治療或預(yù)防抗癌藥物的應(yīng)用。
為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用甘草苷的藥理試驗(yàn)及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
采用豆科甘草屬(Glycgrrhiza)植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖2000克，粉碎成粗粉，加10倍量乙醇，提取兩次，每次3小時(shí)。提取液減壓回收溶劑，得到的提取物進(jìn)行柱層析，用乙醇梯度洗脫，收集薄層層析顯甘草苷的部分，洗脫液減壓回收溶劑，用乙醇重結(jié)晶，得到無色粉末甘草苷4克。
將以上提取分離得到的甘草苷，以聚乙二醇6000∶聚乙二醇4000(1∶2-4)混合液作為基質(zhì)，冷卻劑選擇二甲基硅油∶液體石蠟(3∶2)，原料甘草苷與基質(zhì)以1∶4配比，藥液溫度為60-80℃，以冷卻溫度為0～5℃，滴口內(nèi)外徑為4.5/7.0mm的滴頭，滴口距冷卻液面為3-6cm，滴速25-35滴/min的滴制條件，制成每丸含甘草苷10mg的滴丸。
取提取分離得到的甘草苷2g，加注射用水至2000ml，混合均勻后，分裝成2mg/2ml/支濃度的注射液裝入藥瓶中密封，消毒制成產(chǎn)品備用。
1、小鼠急性毒性試驗(yàn)1.1靜脈給藥小鼠LD50的測定取體重19-20g小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，通過預(yù)試驗(yàn)確定最高劑量為100mg/kg，劑量組間距為0.85，以不同濃度，同體積iv給藥(甘草苷注射液，2.5mg/ml)一次，體積為10ml/kg。給藥后即刻觀察動(dòng)物反應(yīng)情況，連續(xù)觀察7天，每日記錄小鼠毒性反應(yīng)及死亡數(shù)。死亡小鼠解剖觀察主要臟器改變情況，病變臟器做病理組織學(xué)檢查。用Bliss法計(jì)算小鼠半數(shù)致死量。結(jié)果見表1。
表1甘草苷注射液靜脈注射急性毒性試驗(yàn)

1.2口服給藥小鼠LD50的測定取體重20-21g小鼠20只，雌雄各半，小鼠禁食不禁水16h，取0.1g/ml濃度的甘草苷以40ml/Kg的體積灌胃給藥，24h內(nèi)給兩次，間隔6h。給藥后開始觀察動(dòng)物的毛色、自主活動(dòng)、呼吸、飲食、體重及死亡情況，連續(xù)觀察7天。死亡小鼠解剖觀察主要臟器改變情況，病變臟器做病理組織學(xué)檢查。
給藥后動(dòng)物無明顯不良反應(yīng)及死亡，體重增長，精神狀態(tài)佳，毛色有光澤，大小便正常。表明甘草苷小鼠灌胃給藥累積8g/Kg未引起動(dòng)物明顯毒性反應(yīng)。
以上結(jié)果說明一次性靜脈注射甘草苷注射液的LD50為73.43mg/Kg，95％可信限為79.83-67.54mg/Kg。小鼠灌胃給藥累積8g/Kg未見明顯毒性反應(yīng)。
2、大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法選取80只健康合格大鼠，雌雄各半，隨機(jī)等分為正常對照組，甘草苷注射液12、6、3mg/kg組，按性別分籠飼養(yǎng)，靜脈注射、腹腔注射交替給藥，體積均為10ml/kg，對照組給同體積的溶劑，每日1次，連續(xù)給藥2個(gè)月，每周稱量記錄體重1次，按體重調(diào)整給藥劑量，同時(shí)觀察動(dòng)物外觀行為、飲食、活動(dòng)、排便、皮毛光澤度等情況。于末次給藥后24小時(shí)，各組均取10只動(dòng)物，斷頭處死，取血做血液學(xué)及血液生化學(xué)檢查。解剖大鼠，肉眼觀察各組動(dòng)物主要臟器情況，并取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、胰腺、腦、淋巴結(jié)、胃、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢稱重，并計(jì)算臟器系數(shù)，同時(shí)取上述各器官及垂體、延髓、視神經(jīng)、十二指腸、回腸、結(jié)腸、膀胱、前列腺、胸骨、血管以10％甲醛溶液固定，脫水，石臘包埋，切片，伊紅染色后置顯微鏡下做病理組織組織學(xué)檢查。剩余大鼠停藥，常規(guī)飼養(yǎng)二周后，重復(fù)上述各項(xiàng)檢查，觀察毒性反應(yīng)恢復(fù)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)方法分析處理，比較各組間的差異顯著性。
2.1對大鼠一般體征的影響給藥大、中、小劑量組與對照組比較，動(dòng)物的一般體征、外觀、飲食、飲水、糞便及活動(dòng)均無明顯異常變化。說明書附

圖1、2為甘草苷對大鼠一般體征(進(jìn)食量、飲水量)影響試驗(yàn)結(jié)果圖。
2.2、對大鼠體重的影響給藥高、中、低劑量組與對照組比較、體重增長趨勢、飲食量基本一致。各給藥組大鼠體重自給藥第3周開始至第9周期間有一定程度的下降，但與對照組比較無顯著性差異。各給藥組大鼠于停藥2周時(shí)體重逐漸恢復(fù)至正常，結(jié)果見表2、表3。
表2甘草苷注射液對雄性大鼠體重的影響(n＝10，5，g x±SD)


表3甘草苷注射液對雌性大鼠體重的影響(n＝10，5，g x±SD)


2.3.對大鼠血常規(guī)的影響2.3.1、給予甘草苷2個(gè)月后對血常規(guī)的影響給予甘草苷2個(gè)月后，給藥高、中、低劑量組大鼠血紅蛋白(HB)、紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)及其分類(分葉細(xì)胞GR％和淋巴細(xì)胞LY％)、網(wǎng)織紅細(xì)胞(RC)、凝血時(shí)間(CT)等均在正常范圍內(nèi)，各給藥組與對照組比較無顯著差異，結(jié)果見表4。
表4給藥2個(gè)月后對大鼠血常規(guī)的影響(n＝10，x±SD)

2.3.2、停藥2周后對血常規(guī)的影響停藥2周后，給藥組與對照組上述各項(xiàng)血液學(xué)檢查指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，各給藥組與對照組比較均無顯著差異，結(jié)果見表5。
表5停藥2周后對大鼠血常規(guī)的影響 (n＝10，x±SD)

2.4、對血液生化學(xué)的影響2.4.1注射給予甘草苷2個(gè)月后對血液生化學(xué)的影響注射給予甘草苷2個(gè)月后，給藥高、中、低劑量組與對照組大鼠血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(T-BIL)、肌酐(CRE)、尿素氮(UREA)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(CHOL)、血糖(GLU)均在正常范圍內(nèi)，各給藥組與對照組比較無顯著差異見表6。
表6給藥2個(gè)月后對大鼠血液生化學(xué)的影響(n＝10，x±SD)


2.4.2、停藥2周后對大鼠血液生化學(xué)的影響停藥2周后，給藥高、中、低劑量組與對照組大鼠血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽紅素(T-BIL)、肌酐(CRE)、尿素氮(UREA)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(CHOL)、血糖(GLU)均在正常范圍內(nèi)，各給藥組與對照組比較無顯著差異，結(jié)果見表7。
表7停藥2周后對大鼠血液生化學(xué)的影響(n＝10，x±SD)

2.5、對大鼠主要臟器系數(shù)的影響2.5.1甘草苷注射液連續(xù)注射2個(gè)月后及停藥2周后，分別處死動(dòng)物，解剖大鼠肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、子宮(卵巢)等無異常變化，稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果各主要臟器系數(shù)均在正常范圍內(nèi)，給藥高、中、低劑量組與對照組的臟器系數(shù)比較均無顯著差異，結(jié)果見表8。
表8給藥2個(gè)月后對大鼠主要臟器系數(shù)的影響(n＝10，x±SD)

2.5.2、停藥2周后對大鼠主要臟器系數(shù)的影響停藥2周后，解剖大鼠肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、子宮(卵巢)等無異常變化，稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果各主要臟器系數(shù)均在正常范圍內(nèi)，給藥高、中、低劑量組與對照組的臟器系數(shù)比較均無顯著差異，結(jié)果見表9。
表9停藥2周后對大鼠主要臟器系數(shù)的影響(n＝10，x±SD)

2.6、對大鼠主要內(nèi)臟器官的影響甘草苷注射液連續(xù)給藥2個(gè)月及停藥2周后，處死大鼠，解剖，肉眼觀察心、肝、脾、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、胰腺、腦、垂體、延髓、視神經(jīng)、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、淋巴結(jié)、膀胱、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢、血管、胸骨等未見異常變化。病理切片檢查結(jié)果個(gè)別動(dòng)物肺臟見有慢性局限性間質(zhì)炎(對照組1只，高劑量組1只，低劑量組1只)，可能與外界飼養(yǎng)環(huán)境有關(guān)，非藥物作用。送檢心、肝、脾、腎、腎上腺、胸腺、甲狀腺、胰腺、腦、垂體、延髓、視神經(jīng)、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、淋巴結(jié)、膀胱、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢、血管、胸骨組織結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞形態(tài)均未見明顯病理改變。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給大鼠注射甘草苷注射液12、6、3mg/kg，每日1次，靜脈注射、腹腔注射交替注射給藥，連續(xù)給予2個(gè)月的長期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，給藥高、中、低劑量組與對照組比較，大鼠一般外觀體征、飲食、活動(dòng)及糞便，體重增長，血象，肝、腎功能及物質(zhì)代謝，主要臟器系數(shù)，心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、胸腺、胰腺、腦、延髓、垂體、胸骨、胃、十二指腸、結(jié)腸、膀胱、淋巴結(jié)、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢的病理切片檢查均無明顯改變。僅見各給藥組大鼠體重自給藥第3周開始至第9周期間有一定程度的下降，但與對照組比較無顯著性差異，并于停藥2周時(shí)體重逐漸恢復(fù)至正常。個(gè)別動(dòng)物的肺組織炎癥改變，分析與藥物作用無關(guān)。表明甘草苷注射液靜脈注射在所給予的劑量無明顯毒性，亦無延遲性毒性，大鼠在12mg/kg以下劑量為安全劑量范圍內(nèi)。
3、抗心律失常的治療作用3.1甘草苷對氯仿所至小鼠心律失常的影響將小鼠隨機(jī)等分7組，分別為NS對照組，溶劑對照組，葛根素20mg/Kg組，維拉帕米3mg/Kg組，甘草苷注射液0.5、1.0、2.0mg/kg組。iv給藥，對照組給NS或溶劑，體積均為10ml/Kg。iv藥物后2-3min，將小鼠逐個(gè)放入含有4ml氯仿棉球的倒置500ml燒杯內(nèi)(每換1只小鼠需加入0.4ml氯仿)，讓小鼠呼吸氯仿直至呼吸停止，立即取出，記錄二道聯(lián)ECG，在示波器上觀察心電圖是否發(fā)生室顫，記錄室顫發(fā)生率。結(jié)果用χ2統(tǒng)計(jì)。結(jié)果見表10。
表10甘草苷對氯仿所致小鼠心室顫動(dòng)的影響

注與溶劑對照組比較*p＜0.05 **p＜0.01結(jié)果表明甘草苷1.0、2.0mg/kg劑量組，葛根素組和維拉帕米組均能明顯減少氯仿所至的小鼠室顫發(fā)生只數(shù)。顯示了甘草苷對氯仿所致小鼠心室顫動(dòng)的對抗作用。
3.2甘草苷對抗烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的作用大鼠60只，隨機(jī)分為6組，即NS對照組，溶劑對照組，甘草苷0.4、0.8、1.6mg/Kg組，維拉帕米3mg/Kg組。iv給藥，體積均為10ml/Kg，對照組給同體積NS或溶劑。動(dòng)物以烏拉坦1.2g/Kg腹腔注射麻醉，仰臥固定，分離頸外靜脈，插入細(xì)導(dǎo)管，與盛有0.01％的烏頭堿恒速輸液泵連接，描記正常II導(dǎo)聯(lián)ECG。分別給予不同的藥物、生理鹽水或溶劑。給藥3min后，以0.068ml/min速度輸入哇巴因，記錄室早、室速、室顫、死亡的發(fā)生時(shí)間，折算出烏頭堿耐量。結(jié)果見表11。
表11甘草苷對烏頭堿誘發(fā)大鼠心律失常的作用(n＝10 x±SD)

注與溶劑對照組比較*p＜0.05 ***p＜0.001由結(jié)果可見，甘草苷0.4、0.8mg/Kg組對烏頭堿的用量有增加趨勢，甘草苷1.6mg/Kg組能明顯增加室早、室速、室顫、死亡發(fā)生時(shí)間的烏頭堿用量，與溶劑對照組比較有顯著差異(p＜0.05)，但沒有維拉帕米(p＜0.001)作用強(qiáng)。NS組與溶劑對照組室早、室速、室顫、死亡的發(fā)生時(shí)間的烏頭堿用量均沒有明顯差異。
3.3甘草苷對哇巴因誘發(fā)的豚鼠心律失常的影響豚鼠48只，隨機(jī)分為6組，每組8只。分別為NS對照組、溶劑對照組、甘草苷0.4、0.8、1.6mg/Kg組，維拉帕米3mg/Kg組。iv給藥，體積均為10ml/kg，對照組分別給等體積的NS和溶劑。動(dòng)物以烏拉坦1.2g/Kg腹腔注射麻醉，仰臥固定，分離靜外靜脈，插入細(xì)導(dǎo)管，與盛有0.06％哇巴因的恒速輸液泵連接，描記正常II導(dǎo)聯(lián)ECG。動(dòng)物分別給予不同的藥物、生理鹽水及溶劑。給藥3min后，以0.067ml/min速度輸入哇巴因，記錄室早、室速、室顫及死亡的發(fā)生時(shí)間，折算出哇巴因耐量。結(jié)果見表12。
表12甘草苷對抗哇巴因誘發(fā)豚鼠心律失常作用(n＝8 x±SD)

注與溶劑對照組比較*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001由結(jié)果可見，溶劑對照組與鹽水對照組比較，豚鼠出現(xiàn)室早、室速、室顫及死亡時(shí)的哇巴因用量均無明顯差異(p＞0.05)；甘草苷0.4、0.8、1.6mg/Kg劑量組與溶劑對照組比較均不同程度提高豚鼠出現(xiàn)室早、室速、室顫及死亡時(shí)的哇巴因用量(p＜0.05，p＜0.01或p＜0.001)，1.6mg/Kg劑量組的作用與陽性對照藥作用相當(dāng)。
3.4甘草苷對抗氯化鋇誘發(fā)大鼠心律失常的作用大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。分別為NS對照組、溶劑對照組、甘草苷0.4、0.8、1.6mg/Kg劑量組及維拉帕米3mg/Kg組，iv給藥，體積均為10ml/Kg，對照組給同體積的生理鹽水或溶劑。動(dòng)物以10％的水合氯醛300mg/Kg腹腔注射麻醉，組分別不同的藥物及NS或溶劑。給藥3min后，舌下靜脈注射氯化鋇3mg/Kg，3s內(nèi)注完。記錄雙相性心律失常出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間。結(jié)果見表13。
表13甘草苷對抗氯化鋇誘發(fā)大鼠心律失常的作用(n＝10 x±SD)


注與溶劑對照組比較*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001由結(jié)果可見，溶劑對照組與NS對照組比較，雙相性心律失常出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間均無明顯差異(p＞0.05)，甘草苷0.8、1.6mg/Kg劑量組與溶劑對照組比較均能明顯提高雙相性心律失常出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間，其作用不如于維拉帕米強(qiáng)。
3.5甘草苷對大鼠心肌缺血再灌性心律失常的影響大鼠60只，隨機(jī)分6組，每組10只。分別為NS對照組、溶劑對照組、甘草苷0.4、0.8、1.6mg/Kg劑量組及維拉帕米3mg/kg組，iv給藥，體積均為10ml/Kg，對照組給同體積的生理鹽水或溶劑。動(dòng)物以20％的烏拉坦1.2g/kg，ip麻醉，麻醉后仰位固定于鼠臺(tái)上，描記一段正常II導(dǎo)聯(lián)ECG。分離氣管，接人工呼吸機(jī)，呼吸比為1∶2；呼吸頻率為60；潮氣量為6ml/100g。在胸骨左緣旁第3～4肋間開胸，剪斷第4肋骨，暴露心臟并剪破心包膜。在心臟左冠狀動(dòng)脈前降支起始端約2mm處進(jìn)針并置一1號(hào)絲線，穩(wěn)定10分鐘后，再將一長1cm，內(nèi)徑為3mm的塑料膠管和動(dòng)脈一起結(jié)扎。隨后開始每分鐘記錄一次心電圖，連續(xù)記錄30分鐘后沿塑料膠管剪斷絲線，使其再灌注。每分鐘記錄1次心電圖，連續(xù)記錄40分鐘，觀察大鼠心律失常發(fā)生的情況，其結(jié)果進(jìn)行x2檢驗(yàn)。結(jié)果見表14。
表14甘草苷對大鼠心肌缺血再灌性心律失常的影響

注與溶劑對照組比較*p＜0.05結(jié)果顯示，甘草苷三個(gè)劑量組均能減少冠脈結(jié)扎再灌注大鼠的室早或傳導(dǎo)阻滯發(fā)生率，其中0.8、1.6mg/kg劑量組更為明顯，與溶劑對照組比較有明顯差異(p＜0.05)，作用與維拉帕米相當(dāng)。表明甘草苷對冠脈結(jié)扎再灌注致大鼠心律失常有一定的保護(hù)作用。
上述結(jié)果說明通過多種實(shí)驗(yàn)性心律失常動(dòng)物模型，觀察甘草苷的抗心律失常作用。結(jié)果顯示甘草苷能明顯對抗烏頭堿、哇巴因引起的動(dòng)物室性心律失常，表現(xiàn)為推遲室性早搏、室性心動(dòng)過速、心室顫動(dòng)和死亡時(shí)間；并能促進(jìn)氯化鋇致大鼠心律失常的心律恢復(fù)，縮短心律失常的時(shí)間；同時(shí)甘草苷能對抗氯仿致小鼠心室纖顫和大鼠冠脈結(jié)扎再灌注所致心律失常的發(fā)生率。表明甘草苷具有較好的抗心律失常的作用，為臨床治療心律失常提供了一定的藥效學(xué)依據(jù)。
4、甘草苷抗胃潰瘍作用4.1對大鼠醋酸損傷型潰瘍模型的影響取體重180-200g大鼠50只，雌雄各半，于試驗(yàn)前禁食24h，自由飲水。在乙醚麻醉下，常規(guī)消毒，腹部手術(shù)暴露胃，于胃腺部漿膜下，注入10％的乙酸0.05ml/只，形成丘疹，縫合切口，消毒。次日將大鼠隨機(jī)分5組，每組10只，罐胃給藥，每天1次，連續(xù)14天。停藥后24h將動(dòng)物處死，開腹節(jié)扎幽門和噴門，剪下胃注入5ml1％甲醛溶液，并將其浸入1％甲醛溶液中，固定10分鐘取出胃，沿胃大彎剪開，沖去內(nèi)容物，將胃平展于玻璃板上，測潰瘍面的橫徑和縱徑，計(jì)算潰瘍面積(s＝π(dl/2)(d2/2))，并計(jì)算潰瘍愈合百分率。計(jì)算結(jié)果進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

結(jié)果見表15。
表15對大鼠醋酸損傷型潰瘍模型的影響(n＝10，X±S)

注與模型組比較*P＜0.05結(jié)果表明，甘草苷有一定的治療作用，潰瘍愈合百分率均大于30％，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)。
4.2對大鼠無水乙醇型胃潰瘍的影響取Wistar大鼠50只，隨機(jī)等分為五組，按表1所示劑量灌胃給藥，給藥體積均為20ml/kg，每日1次，連續(xù)7日。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水48小時(shí)，于末次給藥后3小時(shí)灌胃無水乙醇1ml/只，1小時(shí)后脫臼處死大鼠，結(jié)扎噴門和幽門，取出胃，由腺胃部向胃內(nèi)注入10ml生理鹽水，隨后放入1％甲醛溶液中固定15分鐘，沿胃大彎剪開胃壁，觀察胃粘膜損傷情況。可見胃粘膜損傷表現(xiàn)為腺胃部的條索狀出血性壞死，與胃縱軸平行。用潰瘍指數(shù)判定胃黏膜損傷程度粘膜條索狀損傷1mm者測量其長度，每毫米計(jì)1分，其寬度大于1mm者分?jǐn)?shù)加倍；其寬度與長度均小于1mm者(即小潰瘍點(diǎn))計(jì)0.5分，將計(jì)分相加即為該只動(dòng)物的潰瘍指數(shù)。并計(jì)算潰瘍發(fā)生率，結(jié)果見表16。
表16.對大鼠無水乙醇型胃潰瘍的影響(n＝10，X±S)

注與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01結(jié)果顯示，甘草苷40mg/Kg組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05)。
4.3對大鼠幽門節(jié)扎潰瘍模型的影響取大鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分5組，每組10只，按表所示劑量給藥，每日1次，連續(xù)7日，對照組給生理鹽水。末次給藥前禁食48小時(shí)，末次給藥4小時(shí)后，用乙醚麻醉大鼠，進(jìn)行腹部手術(shù)暴露胃，節(jié)扎幽門，縫手術(shù)切口，術(shù)后禁食禁水18h后將動(dòng)物處死，節(jié)扎噴后取胃，于胃內(nèi)注射1％的甲醛溶液5ml，用10％的甲醛固定10min，沿胃大彎剖開胃，平鋪于玻璃板，量取胃部點(diǎn)狀和條索狀潰瘍，用潰瘍數(shù)表示胃黏膜損傷程度完整粘膜0級(jí)；點(diǎn)狀出血直徑≥1mm，1～5點(diǎn)為1級(jí)，6～10點(diǎn)為2級(jí)，10個(gè)以上為3級(jí)；條狀出血1～5條為4級(jí)；6～10條為5級(jí)；10條為6級(jí)。并計(jì)算潰瘍抑制率，

結(jié)果見表17。
表17.對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的影響(n＝10，X±S)


注與模型組比較*P＜0.05由表17結(jié)果顯示，甘草苷40mg/kg對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍模型的潰瘍指數(shù)有明顯的抑制作用，抑制率分別為30.4、18.2％。
上述實(shí)驗(yàn)研究采用不同發(fā)病機(jī)理的消化性胃潰瘍模型，觀察甘草苷對潰瘍模型的治療作用。實(shí)驗(yàn)表明，甘草苷能減少乙酸損傷胃潰瘍模型的潰瘍面積，增加愈合百分率；減輕無水乙醇型胃潰瘍的潰瘍指數(shù)；對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的潰瘍指數(shù)有明顯的抑制作用。說明甘草苷對胃潰瘍具有預(yù)防和治療作用。
5、甘草苷抗腫瘤作用5.1對胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901、肝癌細(xì)胞株SMMC-7721、肺癌細(xì)胞株SPC-A-1的體外抑制實(shí)驗(yàn)取處于對數(shù)生長期的人胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞、肝癌細(xì)胞株SMMC-7721細(xì)胞、肺癌細(xì)胞株SPC-A-1細(xì)胞，分別經(jīng)0.25％的胰蛋白酶消化后，用10％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔100μl，置于37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)24h后，加入100μl稀釋成不同濃度的甘草苷，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，連續(xù)培養(yǎng)72h，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前4h加入MTT液(mg/ml)，繼續(xù)孵育，棄上清夜，加入DMSO150μl，震蕩10min，酶標(biāo)儀檢測A550。試驗(yàn)中以培養(yǎng)基對照組為空白。
抑制率％＝(1-給藥組A550/細(xì)胞對照組A550)×100％結(jié)果見表18。
表18甘草苷對腫瘤細(xì)胞的抑制作用

與對照組比較 *P＜0.05 **P＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘草苷對人胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞、肝癌細(xì)胞株SMMC-7721細(xì)胞、肺癌細(xì)胞株SPC-A-1細(xì)胞有顯著的抑制作用，抑制率分別為86.5、97.4、78.4％。
5.2腹腔給藥對小鼠S180的抑制作用取小鼠40只，無菌操做下注射S180瘤細(xì)胞懸液，每只小鼠右前肢腋部皮下接種0.2ml(含S180瘤細(xì)胞10×107/ml)，接種次日隨機(jī)分4組，每組10只，分別為甘草苷10、20mg/Kg，5-Fu25mg/Kg，ip給藥10ml/Kg，連續(xù)給藥10天，對照組ip同體積生理鹽水，停藥次日處死動(dòng)物，解剖瘤塊稱重，計(jì)算抑瘤率，結(jié)果見表19。
表19腹腔給藥對小鼠S180的抑制作用(x±s，n＝10)

與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘草苷腹腔給藥對小鼠S180有明顯的抑制腫瘤生長作用與對照組比較有顯著差異。
5.3灌胃給藥對小鼠S180的抑制作用取小鼠，無菌操做下注射S180瘤細(xì)胞懸液，每只小鼠右前肢腋部皮下接種0.2ml(含S180瘤細(xì)胞10×107/ml)，接種次日隨機(jī)分4組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組甘草苷10、20mg/Kg，ig給藥20ml/Kg，連續(xù)給藥10天，對照組in同體積生理鹽水，停藥次日處死動(dòng)物，解剖瘤塊稱重，計(jì)算抑瘤率，結(jié)果見表20。
表20灌胃給藥對小鼠S180的抑制作用(x±s，n＝10)

與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘草苷灌胃給藥對小鼠S180的腫瘤生長有明顯的抑制作用，20mg/Kg作用顯著。
5.4對小鼠艾氏腹水癌(Ec)的抑制作用取小鼠，無菌操做下注射以生理鹽水1∶3稀釋的瘤細(xì)胞懸液，每只小鼠右前肢腋部皮下接種0.2ml，接種次日隨機(jī)分4組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組甘草苷10、20mg/Kg，ip給藥10ml/Kg，連續(xù)給藥10天，對照組ip同體積生理鹽水，停藥次日處死動(dòng)物，解剖瘤塊稱重，計(jì)算抑瘤率，結(jié)果見表21。
表21對小鼠艾氏腹水癌的抑制作用(x±s，n＝10)


與對照組比較*P＜0.05 ***P＜0.001結(jié)果表明，甘草苷對小鼠艾氏腹水癌的腫瘤生長有明顯抑制作用，20mg/Kg組與對照組比較有顯著差異。
基于以上結(jié)果可以得出本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)本發(fā)明對已知化合物甘草苷發(fā)掘了新的醫(yī)藥用途，開拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。
(2)本發(fā)明的甘草苷安全無毒，藥理作用強(qiáng)，藥效好，預(yù)示著有很好的藥用前景。
(3)本發(fā)明的產(chǎn)品原料甘草，是傳統(tǒng)中藥，現(xiàn)已大面積人工種植，目前，該藥材的利用主要是出口原藥材，利潤較低，對其開發(fā)利用也非常有限。至今仍沒有得到充分的開發(fā)利用。因此，本發(fā)明可以使該藥材得到綜合利用，為大量種植的藥材開辟了新的應(yīng)用市場，對藥材的種植、生產(chǎn)、加工及相關(guān)產(chǎn)業(yè)具有提升作用。本發(fā)明以甘草的根及根莖為提取部位能充分利用資源、制備工藝簡單，未見毒副作用。既可做成口服制劑如片劑、滴丸、膠囊劑等口服制劑；也可做成注射制劑如粉針劑、靜脈注射液等。
(4)本發(fā)明的產(chǎn)品制成的藥物對心律失常具有明顯的對抗作用能明顯的提高心律失常出現(xiàn)的時(shí)間和死亡時(shí)間；可減少心肌缺血再灌注心律失常的發(fā)生率。這些作用表明了其抗心律失常作用的顯著性。
(5)本發(fā)明的產(chǎn)品所制成的藥物具有減少乙酸損傷胃潰瘍的潰瘍面積，增加愈合百分率；減少無水乙醇型胃潰瘍的潰瘍指數(shù)；對胃潰瘍具有預(yù)防和治療作用。
(6)本發(fā)明的產(chǎn)品所制成的藥物具有對人胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞、肝癌細(xì)胞株SMMC-7721細(xì)胞、肺癌細(xì)胞株SPC-A-1細(xì)胞有顯著的抑制作用，抑制率分別為86.5、97.4、78.4％；對腹水癌的腫瘤生長有明顯抑制作用，說明有一定的抗腫瘤作用。
具體實(shí)施例方式
以下將描述本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。
實(shí)施例1采用豆科甘草屬(Glycgrrhiza)植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根莖20千克，粉碎成粗粉，加10倍量乙醇，提取兩次，每次3小時(shí)。提取液減壓回收溶劑，得到的提取物進(jìn)行柱層析，用乙醇梯度洗脫，收集薄層層析顯甘草苷的部分，洗脫液減壓回收溶劑，用乙醇重結(jié)晶，得到無色粉末甘草苷4克。
以聚乙二醇6000∶聚乙二醇4000(1∶2-4)混合液作為基質(zhì)，冷卻劑選擇二甲基硅油∶液體石蠟(3∶2)，原料甘草苷與基質(zhì)以1∶4配比，藥液溫度為60-80℃，以冷卻溫度為0～5℃，滴口內(nèi)外徑為4.5/7.0mm的滴頭，滴口距冷卻液面為3-6cm，滴速25-35滴/min的滴制條件，制成每丸含甘草苷10mg的滴丸。口服，每次10粒，每日2次。
實(shí)施例2取實(shí)施例1的方法制備的甘草苷，采取本技術(shù)領(lǐng)域公知的輸液劑制備方法，制備成甘草苷氯化鈉注射液和甘草苷葡萄糖注射液甘草苷20mg，氯化鈉2.25g，制成甘草苷氯化鈉注射液，其規(guī)格為250ml，靜脈注射，每次1瓶，每日一次；甘草苷20mg，葡萄糖12.5g，制成甘草苷葡萄糖注射液，其規(guī)格為250ml，靜脈注射，每次1瓶，每日一次。
實(shí)施例3取按實(shí)施例1的方法制備的甘草苷2g，加適量的注射用水，用碳酸鈉調(diào)PH值至7，攪拌溶解，再加相當(dāng)于甘草苷10-15％量注射用的甘露醇，除菌濾過，測定含量，分裝1000支，2mg/支，封口，即得。靜脈注射，每次8-16mg，每日一次。
實(shí)施例4取實(shí)施例1方法制備的甘草苷100g、10％羥丙甲基纖維素32ml。采取本技術(shù)領(lǐng)域公知的膠囊制備方法，制成1000粒膠囊，每粒含甘草苷100mg?？诜?，每次1粒，每日2次。
實(shí)施例5取實(shí)施例1方法制備的甘草苷100g、乳糖68g、淀粉60g、滑石粉20g。采取本技術(shù)領(lǐng)域公知的片劑制備方法，在適宜容器中混合所有組分，制成顆粒，再加入硬脂酸鎂2g，混勻，用9/32時(shí)標(biāo)準(zhǔn)凹沖壓片，制成1000片，0.25g/片(含甘草苷100mg)?？诜?，每次1片，每日2次。
權(quán)利要求
1.以甘草苷為原料和以甘草苷為主要活性成分的有效部位為原料，在制備具有抗心律失常作用的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，具有抗心律失常作用的藥物為治療或防治心血管疾病的藥物。
3.以甘草苷為原料和以甘草苷為主要活性成分的有效部位為原料，在制備具有抗胃潰瘍作用的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，具有抗胃潰瘍作用的藥物為治療或防治胃潰瘍疾病的藥物。
5.以甘草苷為原料和以甘草苷為主要活性成分的有效部位為原料，在制備具有抗腫瘤作用的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，具有抗腫瘤作用的藥物為治療和防治腫瘤疾病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及以甘草苷(liquiritin)為原料和以甘草苷為主要活性成分的有效部位為原料，在制藥領(lǐng)域中的新用途。該產(chǎn)品具有抗心律失常、胃潰瘍、腫瘤等作用。用于治療或預(yù)防心律失常、心肌缺血、胃潰瘍、腫瘤等病人。
文檔編號(hào)A61P9/10GK101032504SQ200610016770
公開日2007年9月12日 申請日期2006年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月17日
發(fā)明者李超生 申請人:李超生, 潘書洋