專利名稱：：骨肽注射液制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：目前在中國醫(yī)藥出版社出版的《生化制藥學(xué)》中記載了關(guān)于骨寧注射液詳細(xì)的制備過程，骨寧注射液是以豬的四肢骨為原料制備的注射液，主要成份是多肽或蛋白肽，發(fā)射光譜定量分析含量有微量元素，以Ca、Mg、Al、Fe為主，其它痕量元素有Mn、Ba、Cu、Pb、Sn、Ti、Zr等，含量l嗎/ml左右。內(nèi)含成份溶于水和75%以下的乙醇，可被10倍量丙酮沉淀，水溶液pH4和8.5不產(chǎn)生沉淀，對熱穩(wěn)定，較長時(shí)間加熱不失去其藥理作用。其主要的缺點(diǎn)是①在過程中加入苯酚抑菌，使得注射液靜脈注射不可能。②工藝過程中使得1萬分子量的少量蛋白質(zhì)及多肽殘留，極易導(dǎo)致過敏反應(yīng)，在靜脈給藥時(shí)，幾乎均發(fā)生過敏反應(yīng)。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述骨寧注射液存在的缺點(diǎn)，本發(fā)明通過對現(xiàn)有骨寧注射液的工藝過程的改變，從而獲得新的骨肽注射液制備工藝。本發(fā)明的過程是a、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重，原料加水、熱壓，用紗布過濾，骨渣再加水，同上操作熱壓，過濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫中，待冷卻至05。C轉(zhuǎn)入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得濃縮液；b、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇，靜置沉淀，除去雜蛋白，得上清，再真空濃縮；C、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入鹽酸，調(diào)至pH值，常壓加熱；d、將加熱后的液體冷至室溫，立即置于冷庫中，降至05。C后，移入05"C冷庫或冷柜，放置過夜；e、取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值，加熱，再冷至室溫，立即放入冷庫中，待冷卻05t:移入o5t:的冷庫中；d、過濾及超濾將上述清液濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾，再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液；f、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調(diào)含量、調(diào)pH值過濾，灌封，滅菌，即得骨肽注射液。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、除掉了原工藝中的防腐劑笨酚，而是巧妙地運(yùn)用低溫來抑制細(xì)菌的生長。2、在工藝過程中加入了超濾程序，使得原工藝中分子量大于一萬的殘留多肽得以去除。以上二個(gè)優(yōu)點(diǎn)，使得骨肽注射液免除了過敏物質(zhì)和毒性物質(zhì)，大大降低了毒性反應(yīng)，同時(shí)也使其靜脈注射用藥成為可能。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的過程是a、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重，原料加水、熱壓，用紗布過濾，骨渣再加水，同上操作熱壓，過濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫中，待冷卻至05r轉(zhuǎn)入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得濃縮液；b、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇，靜置沉淀，除去雜蛋白，得上清，再真空濃縮；C、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入鹽酸，調(diào)至pH值，常壓加熱；d、將加熱后的液體冷至室溫，立即置于冷庫中，降至05。C后，移入05。C冷庫或冷柜，放置過夜；e、取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值，加熱，再冷至室溫，立即放入冷庫中，待冷卻05"C移入05r的冷庫中；d、過濾及超濾將上述清液濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾，再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液；f、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調(diào)含量、調(diào)pH值過濾，灌封，滅菌，即得骨肽注射液。木發(fā)明的詳細(xì)工藝過程骨肽注射液是以豬的四肢骨為原料制備的注射液，主要成份是多肽或蛋白肽，含有G"Mg.Al.Fe等金屬離子，亦含有其它痕量元素Mn、Ba、Cu、Pb、Sn、Ti、Zr等。內(nèi)含成份溶于水和75%以下的乙醇，可被10倍量丙酮沉淀，水溶液PH4和8.5不產(chǎn)生沉淀，對熱穩(wěn)定，較長時(shí)間加熱不失去其藥理作用。臨床適用于促進(jìn)骨折愈合。1、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重。每75kg原料加水75150kg，1.2kg/cm2熱壓1.5小時(shí)，用雙層紗布過濾，骨渣再加水75kg，同上操作熱壓l小時(shí)，過濾，合并兩次濾液。立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于-20-30。C的冷庫中，待冷卻至05。C轉(zhuǎn)入冷室中靜置12—24小時(shí)，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得體積為50L的濃縮液。為了節(jié)省冷室的體積，也可先將上述兩次合并的濾液先濃縮至50L，再進(jìn)行冷卻處理，除脂。2、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇至濃度為70%,靜置沉淀24—36小時(shí)，除去雜蛋白，得上清，再于6(TC以下真空濃縮至體積20L。3、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入6mol/L鹽酸，調(diào)至pH至4，常壓加熱10(TC，45分鐘，冷至室溫，立即置于-20-30°(:的冷庫中，降至05"C后，移入05"C冷庫或冷柜，放置過夜。次曰取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入5%氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH至8.5，加熱IO(TC，45分鐘，冷至室溫，立即放入-20-3(TC的冷庫中，待冷卻o5i:移入o5x:的冷庫或冰柜中。4、過濾及超濾上述清液調(diào)體積為18升左右，過紙漿或?yàn)V紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾。再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液。5、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調(diào)含量至5.06.0mg/ml調(diào)pH7.47.6過濾，灌封，105"滅菌30分鐘，即得骨肽注射液成品。實(shí)驗(yàn)1、收率實(shí)驗(yàn)精密量取本品2ml，置試管中，精密加入雙縮脲試液(取硫酸銅1.50g和灑石酸鉀鈉5.0g，加水500ml使溶解，邊攪邊加入10%氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻，4ml，混勻，室溫放置30分鐘，照分光光度法，在540mn的波長處測定吸收度，另精密稱取酪蛋白對照品適量，加0.05mol/L氫氧化鈉試液制成每lml中約含7mg的溶液，精密量取2ml，自置試管中……起，同法操作，測定吸收度，計(jì)算。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>提取溫度和時(shí)間是限制收率的關(guān)鍵，提取溫度是相對固定的，所以對時(shí)間的考察是本工藝過程的關(guān)鍵，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>在確定首次提取時(shí)間1.5小時(shí)較合適的基礎(chǔ)上考察了第二次提取時(shí)間對收率的影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2、過敏實(shí)驗(yàn)取體重250350g豚鼠6支，連續(xù)三次，間日腹腔注射本品0.5ml，兩周后，再自靜脈注射本品lml，注射15分鐘內(nèi)，均不得出現(xiàn)過敏性反應(yīng)，如豎毛，呼吸困難，噴嚏、干嘔或咳嗽3次以上等現(xiàn)象中兩種或兩種以上者，或有羅音、抽搐、虛脫或死亡現(xiàn)象之一者，應(yīng)判為陽性。按上述方法對050101、050102、050103批號的制劑(5mg/ml，2m1/支)進(jìn)行了過敏性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均為陰性。3、熱源實(shí)驗(yàn)取上述三個(gè)批號的制劑，依法檢査(中國藥典2000年版二部附錄XID)，劑量按家兔體重每1kg注射0.5ml，應(yīng)符合規(guī)定。結(jié)果表明上述三個(gè)批號制劑均符合規(guī)定。4、異常毒性取本品，依法檢査(中國藥典2000年版二部附錄XIC)，按靜脈注射法給藥，符合規(guī)定。結(jié)果表明，上述三個(gè)批號制劑均符合規(guī)定。5、蛋白質(zhì)取本品lml，加30%磺基水楊酸溶液lml，不得產(chǎn)生混濁。結(jié)果表明，上述三個(gè)批號制劑均符合規(guī)定。6、pH值，應(yīng)為6.67.5，三個(gè)批號分別為7.1、7.05、7.2。7、性狀均為微黃色的澄明液體。8、其他澄明度，無菌、裝量均符合注射劑通則的規(guī)定。權(quán)利要求1、一種骨肽注射液制備工藝，其過程是a、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重，原料加水、熱壓，用紗布過濾，骨渣再加水，同上操作熱壓，過濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫中，待冷卻至0～5℃轉(zhuǎn)入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得濃縮液；b、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇，靜置沉淀，除去雜蛋白，得上清，再真空濃縮；c、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入鹽酸，調(diào)至pH值，常壓加熱；其特征在于d、將加熱后的液體冷至室溫，立即置于冷庫中，降至0～5℃后，移入0～5℃冷庫或冷柜，放置過夜；e、取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值，加熱，再冷至室溫，立即放入冷庫中，待冷卻0～5℃移入0～5℃的冷庫中；d、過濾及超濾將上述清液濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾，再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液；f、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調(diào)含量、調(diào)pH值過濾，灌封，滅菌，即得骨肽注射液。全文摘要一種骨肽注射液制備工藝，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。為了解決現(xiàn)有骨寧注射液存在的缺點(diǎn)，本發(fā)明通過對現(xiàn)有骨寧注射液的工藝過程的改變，從而獲得新的骨肽注射液制備工藝。本發(fā)明將豬四肢骨提取、去脂、濃縮，然后沉淀、濃縮，再進(jìn)行酸性沉淀、堿性沉淀，將加熱后的液體冷至室溫后置于冷庫中，取出除去酸性蛋白，進(jìn)行過濾及超濾得到骨肽原液，再加水調(diào)解、過濾、灌封、滅菌即得骨肽注射液。本發(fā)明使得骨肽注射液免除了過敏物質(zhì)和毒性物質(zhì)，大大降低了毒性反應(yīng)，同時(shí)也使其靜脈注射用藥成為可能。文檔編號A61P19/08GK101103999SQ200610017008公開日2008年1月16日申請日期2006年7月14日優(yōu)先權(quán)日2006年7月14日發(fā)明者海石,英韓申請人:海石