專(zhuān)利名稱(chēng)：含氟烷氧基康普立停衍生物及制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物合成領(lǐng)域，尤其涉及抗癌藥物的合成。
背景技術(shù)：
癌癥是目前世界上得病率最高、死亡率最高的疾病之一。癌癥極為嚴(yán)重地威脅著人類(lèi)的生存健康，攻克癌癥是全球面臨的一項(xiàng)難題。在上個(gè)世紀(jì)70年代早期，由于人們對(duì)癌癥的成因一無(wú)所知，科學(xué)家只好盲目的尋找治療癌癥的藥物。1966年，美國(guó)國(guó)家癌癥研究所開(kāi)始贊助的化學(xué)藥物篩選計(jì)劃，逐一測(cè)試成千上萬(wàn)種已知可能治療癌癥的化學(xué)藥品。這項(xiàng)篩選結(jié)果加上其他抗癌計(jì)劃所開(kāi)發(fā)出來(lái)的藥物，包括氨基甲基葉酸、環(huán)磷酰胺，西伯拉丁、氟脲嘧啶、紫杉醇等。這些藥物雖然能減輕腫瘤的病況，但是持續(xù)用藥通常會(huì)導(dǎo)致極嚴(yán)重的“多重藥物抗藥性”，使得繼續(xù)用藥也沒(méi)有太大的療效。更糟的是腫瘤最后發(fā)展出抗藥性，再也無(wú)法治療。
1971年美國(guó)?？寺?Folkman)博士最早提出血管新生理論(AngiogenesisTheory)，大膽作出如下設(shè)想1)腫瘤的生存需要依靠新生血管的生成，2)腫瘤能夠主動(dòng)刺激這種血管的生成，3)腫瘤能夠分泌某種物質(zhì)誘使血管朝它們生長(zhǎng)，并能生長(zhǎng)出分枝。實(shí)體瘤的生長(zhǎng)取決于腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞這兩類(lèi)細(xì)胞的數(shù)量，兩者相互依存，任何一種細(xì)胞群的增減必然會(huì)導(dǎo)致另一類(lèi)細(xì)胞群的相應(yīng)增減。因此，抑制任何一類(lèi)細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物都具有腫瘤治療作用，前者是以細(xì)胞毒藥物為主的腫瘤化學(xué)治療，后者是最近倍受關(guān)注的抗腫瘤血管生成療法。實(shí)體瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成，這是20世紀(jì)70年代初美國(guó)?？寺?Folkman)博士提出的設(shè)想，他認(rèn)為如果抑制腫瘤血管生成，可使腫瘤細(xì)胞因缺血、缺氧而部分死亡，從而延緩腫瘤生長(zhǎng)和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。目前已經(jīng)證明，腫瘤的生長(zhǎng)必須依賴于血管的生成。體積在1-2mm3以下的瘤體可通過(guò)滲透作用從周?chē)M織中獲得營(yíng)養(yǎng)，以維持自身的生存。這時(shí)腫瘤生長(zhǎng)極為緩慢，因?yàn)樗倪M(jìn)一步生長(zhǎng)必須依賴于新生血管以獲得充分的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)。腫瘤血管生成包含毛細(xì)血管基底膜降解、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移增殖、形成管狀結(jié)構(gòu)、基底膜形成、血流貫通等步驟，這一過(guò)程既受機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌因素等影響，又受腫瘤細(xì)胞和腫瘤基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的生長(zhǎng)因子調(diào)控。
腫瘤抗血管生成療法，作用對(duì)象是不同腫瘤組織中幾乎相同的血管內(nèi)皮細(xì)胞，這種腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞除分裂增殖速度較快之外，與正常內(nèi)皮細(xì)胞相比并無(wú)明顯差別。正常內(nèi)皮細(xì)胞壽命較長(zhǎng)，基因型穩(wěn)定。除了神經(jīng)細(xì)胞以外，內(nèi)皮細(xì)胞是體內(nèi)壽命最長(zhǎng)的細(xì)胞之一。存在于成年血管壁上的內(nèi)皮細(xì)胞，同一時(shí)間內(nèi)只有0.01％左右處于分裂狀態(tài)，腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖速度較正常組織中的內(nèi)皮細(xì)胞增殖速度大約高50倍以上。因此使用血管抑制因子對(duì)腫瘤血管有相對(duì)特異性作用，而對(duì)正常組織內(nèi)的血管不會(huì)造成明顯影響。同直接殺傷腫瘤細(xì)胞的化學(xué)治療相比，血管生成抑制劑抗腫瘤具有明顯優(yōu)勢(shì)。第一，腫瘤發(fā)生時(shí)，血管生成已被啟動(dòng)，故具有良好的特異性；療效顯著，藥物直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，只要阻斷單一的血管就可以引起成千上萬(wàn)的癌細(xì)胞缺氧死亡，相關(guān)研究表明給藥兩小時(shí)以后就會(huì)引起缺血部位99％的癌細(xì)胞大面積死亡。第二，血管內(nèi)皮細(xì)胞暴露于血流中，藥物能直接發(fā)揮作用，不直接殺死癌細(xì)胞，只是改變細(xì)胞的形狀或生長(zhǎng)速度，劑量小，僅僅為最大耐受量(MTD)的幾十分之一，而且由于用藥量少療效高，沒(méi)有放療和化療等治療方案帶來(lái)的不良反應(yīng)。第三，內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，不易產(chǎn)生耐藥性。腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖速度較正常組織快幾十倍，血管生成抑制劑對(duì)快速增殖的腫瘤血管內(nèi)皮有選擇性作用，對(duì)正常組織副作用極小，具有很大的優(yōu)越性。
使君子科(Combretastaceae)植物是一類(lèi)分布于熱帶和亞熱帶的灌木和樹(shù)木，具有十分重要的醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。已知風(fēng)車(chē)藤(Combretum)屬的植物中有25種。它們?cè)诜侵藓陀《缺挥糜谥委熉轱L(fēng)和癌癥等。70年代末，美國(guó)國(guó)家癌癥研究所在廣篩中發(fā)現(xiàn)這種植物對(duì)小鼠P388淋巴白血病細(xì)胞具有很高的抑制作用。80年代開(kāi)始，對(duì)這種植物的研究引起了廣泛的興趣。這一時(shí)期，美國(guó)亞利桑納大學(xué)癌癥研究所所長(zhǎng)，化學(xué)家皮特·喬治教授(G.Robert Pettit)和四位同事從學(xué)名為“Combretum caffrum”的南非樹(shù)種中提取Combretastatins，這種樹(shù)以前“曾被祖魯人當(dāng)成退敵的咒符”，皮特教授在《加拿大化學(xué)期刊》中寫(xiě)道，樹(shù)根的外皮確實(shí)具有抗癌效果。以后不僅有大量的高活性的化合物被分離、鑒定出來(lái)，而且對(duì)其藥理作用機(jī)制和結(jié)構(gòu)修飾工作也在不斷深入。由佩提特小組最先開(kāi)展這方面的工作。對(duì)combretum屬植物進(jìn)行深入研究，提純出一系列抗癌活性的菲，芪和二芐苯的衍生物。其中Combretastatin A-1和A-4(簡(jiǎn)寫(xiě)為CA-1和CA-4，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)通式I I)是目前為止，所知的此類(lèi)化合物中作用最強(qiáng)的微管蛋白生長(zhǎng)抑制劑(US 5,561,122；WO 9935150)。
雖然Combretastatins類(lèi)化合物的發(fā)現(xiàn)時(shí)間不長(zhǎng)，但是卻引起廣泛的研究興趣。這不僅是因?yàn)樗鼈兙哂休^高的抗腫瘤活性，而且它們是一類(lèi)結(jié)構(gòu)較為簡(jiǎn)單的抑制微管聚合和阻斷腫瘤新生血管的小分子天然產(chǎn)物。CA-4的作用機(jī)制研究表明，A環(huán)和B環(huán)分別作用于微管蛋白的α和β鏈上的兩個(gè)相離的位點(diǎn)，從而引起腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。CA-4通過(guò)抑制微管蛋白集聚來(lái)進(jìn)攻新生血管進(jìn)一步消滅腫瘤，這種新生血管可提供腫瘤生長(zhǎng)所必需的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
CA-4能夠進(jìn)入癌細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞。在腫瘤內(nèi)部，內(nèi)皮細(xì)胞是發(fā)育不成熟的，相對(duì)與其他的正常體細(xì)胞而言很容易受到CA-4的激發(fā)。一旦CA-4進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)部，內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)就受到CA-4的破壞，其外部形態(tài)發(fā)生變化，由原來(lái)的扁平狀態(tài)變成橢球狀態(tài)，從而有效地堵塞了提供腫瘤細(xì)胞養(yǎng)分的新生毛細(xì)血管，導(dǎo)致腫瘤部位大面積的缺血性壞死，最終導(dǎo)致癌細(xì)胞的凋亡。從以往的實(shí)驗(yàn)和臨床來(lái)看這些部位傳統(tǒng)的抗癌藥物根本沒(méi)有辦法進(jìn)入。這一理論在CA-4的I期臨床實(shí)驗(yàn)中得到證實(shí)。對(duì)于各個(gè)不同的腫瘤患者通過(guò)CA-4的治療，4-6小時(shí)之內(nèi)，他們的腫瘤附近的血流量明顯減少。95％以上的癌細(xì)胞壞死。CA-4還可以治療其它血管增生性疾病，包括糖尿病型增生性視網(wǎng)膜病變，銀屑病，關(guān)節(jié)炎等疾病，對(duì)免疫功能有增強(qiáng)的作用，在治療艾滋病方面有良好的效果(WO02058535；US 6773702)。
最近，由于CA-4作為腫瘤血管靶向試劑，顯示出其阻斷腫瘤血管的優(yōu)良特性(Thorpe PE.Clin Cancer Res.2004 Jan 15，10(2)415-27；West CM，Price P.Anticancer Drugs.2004 Mar，15(3)179-87；Young SL，ChaplinDJ.Expert Opin Investig Drugs.2004 Sep，13(9)1171-82.)因此對(duì)類(lèi)似CA-4的新衍生物的研發(fā)，成為這一領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究目標(biāo)。如Oxigene，Inc.公司研發(fā)的功能性二苯乙烯衍生物CA-1和CA-4的類(lèi)似物(US 6,919,324)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，在生物活性分子中引入氟會(huì)影響該分子的活性，但并不能確定是增加其活性還是減少其活性。
如SIGMA-TAU INDUSTRIE FARMACEUTICHE RIUNITE S.p.A.公司研究了含氟取代的Combretastatin，在其雙鍵橋上引入氟原子(WO 2005/007603 A2)，但其活性與CA-4沒(méi)有大的區(qū)別。
因此，本領(lǐng)域迫切需要尋找Combretastatins類(lèi)化合物的新的衍生物，其生物活性能有進(jìn)一步的提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種含氟烷氧基康普立停衍生物，其結(jié)構(gòu)如通式I。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供通式I化合物的制備方法。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供含有通式I化合物的藥物組合物。
本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供通式I化合物的醫(yī)藥用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種由通式I表示的化合物 其中Rf是含有1-8個(gè)碳原子且具有1-17個(gè)氟原子的烷基；R為氨基、取代氨基、羥基、硝基、鹵素、烷氧基、磷酸鹽或氨基酸側(cè)鏈及其藥學(xué)上可接受的鹽。
更佳地，Rf＝-CH2F，-CHF2，-CnF2n+1，-CH2CnF2n+1，-CHFCnF2n+1或-CH2CHFCnF2n+1，n表示1-3的整數(shù)。
在另一優(yōu)選例中，所述的Rf和R選自下組(a)Rf是含氟甲基，R是羥基，(b)Rf是含氟甲基，R是氨基或取代氨基，(c)Rf是含氟甲基，R是磷酸二鈉鹽或是磷酸銨鹽或是磷酸膽堿內(nèi)式鹽，或(d)Rf是含氟甲基，R是-NH(COCHR′N(xiāo)H)m-H，R′是氫、天然氨基酸側(cè)鏈、苯基，m表示1-3的整數(shù)。
在另一優(yōu)選例中，所述的Rf和R選自下組(a)Rf是含氟乙基，R是羥基，(b)Rf是含氟乙基，R是氨基或取代氨基，(c)Rf是含氟乙基，R是磷酸二鈉鹽或是磷酸銨鹽或是磷酸膽堿內(nèi)式鹽，或(d)Rf是含氟乙基，R是-NH(COCHR′N(xiāo)H)m-H，R′是氫、天然氨基酸側(cè)鏈、苯基，m表示1-3的整數(shù)。
在另一優(yōu)選例中，所述的Rf和R選自下組(a)Rf＝-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2或-CF2CF3，R＝-OH或-OPO3Na2，或(b)Rf＝-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2或-CF2CF3，R＝-NH2或-NHCOCH(NH2)CH2OH。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CHF2，R＝-OH。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CHF2，R＝-OPO3Na2。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CHF2，R＝-NH2。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CHF2，R＝-NHCOCH(NH2)CH2OH。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CH2CF3，R＝-OH。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CH2CF3，R＝-OPO3Na2。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CH2CF3，R＝-NH2。
在另一優(yōu)選例中，Rf＝-CH2CF3，R＝-NHCOCH(NH2)CH2OH。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種通式I化合物的制備方法，它包括步驟(1)間甲氧基對(duì)羥基苯甲醛III，在相轉(zhuǎn)移催化下，用含氟試劑進(jìn)行含氟烷基化反應(yīng)，形成間甲氧基對(duì)含氟烷氧基苯甲醛V； (2)用二苯基膦鋰，脫去間甲氧基對(duì)含氟烷氧基苯甲醛V間位甲氧基，使轉(zhuǎn)化成羥基，得到間位羥基化的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VI；
(3)將間位羥基化的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VI進(jìn)行羥基保護(hù)，然后與3，4，5-三甲氧基芐基三苯膦葉立德發(fā)生維悌希(Wittig)反應(yīng)，脫保護(hù)后，得到通式I化合物。
在另一優(yōu)選例中，它包括步驟(a)對(duì)羥基苯甲醛IV，在相轉(zhuǎn)移催化下，用含氟試劑進(jìn)行含氟烷基化反應(yīng)，形成對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VII； (b)用硝酸和乙酸酐，將對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VII進(jìn)行間位硝化反應(yīng)，得到間位硝基取代的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VIII； (c)將間位硝基取代的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VIII與3，4，5-三甲氧基芐基三苯膦葉立德發(fā)生Wittig反應(yīng)，得到通式I化合物。
在另一優(yōu)選例中，所述的含氟試劑為含氟鹵代甲烷或磺酸含氟烷基酯。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種藥物組合物，它含有治療有效量的通式I化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物選自以下劑型凍干粉劑、粉劑、粒劑、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酊劑、懸浮液、溶液的形式靜脈注射或口服給藥。
在本發(fā)明的第四方面，提供了一種通式I化合物在制備微管蛋白聚集抑制劑中的應(yīng)用。
在本發(fā)明的第五方面，提供了一種通式I化合物在制備治療非正常新生血管引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
在另一優(yōu)選例中，通式I化合物可用于治療非正常新生血管引起的各種腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，所述的腫瘤主要包括肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、食道癌、乳房癌、前列腺癌、睪丸癌、結(jié)腸癌、 卵巢癌、膀胱癌、子宮頸癌、黑色素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊性腺癌、囊性癌、髓狀癌、支氣管癌、骨細(xì)胞癌、上皮癌、膽管癌、絨毛膜癌、胚癌、精原細(xì)胞癌、維爾姆斯癌、膠質(zhì)細(xì)胞癌、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血細(xì)胞瘤、聲帶神經(jīng)瘤、腦膜瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視神經(jīng)細(xì)胞瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維肉瘤、成纖維細(xì)胞瘤、纖維瘤、纖維腺瘤、纖維軟骨瘤、纖維囊瘤、纖維粘液瘤、纖維骨瘤、纖維粘液肉瘤、纖維乳頭狀瘤、粘液肉瘤、粘液囊瘤、粘液軟骨瘤、粘液軟骨肉瘤、粘液軟骨纖維肉瘤、粘液腺瘤、成粘液細(xì)胞瘤、脂肉瘤、脂肪瘤、脂肪腺瘤、成脂細(xì)胞瘤、脂肪軟骨瘤、脂肪纖維瘤、脂肪血管瘤、粘液脂瘤、軟骨肉瘤、軟骨瘤、軟骨肌瘤、脊索瘤、絨毛膜腺瘤、絨毛上皮瘤、成絨毛膜細(xì)胞瘤、骨肉瘤、成骨細(xì)胞瘤、骨軟骨纖維瘤、骨軟骨肉瘤、骨軟骨瘤、骨囊瘤、骨牙質(zhì)瘤、骨纖維瘤、骨纖維肉瘤、血管肉瘤、血管瘤、血管脂肪瘤、血管軟骨瘤、成血管細(xì)胞瘤、血管角質(zhì)瘤、血管神經(jīng)膠質(zhì)瘤、血管內(nèi)皮瘤、血管纖維瘤、血管肌瘤、血管脂肪瘤、血管淋巴管瘤、血管脂肪平滑肌瘤、血管肌脂瘤、血管肌神經(jīng)瘤、血管粘液瘤、血管網(wǎng)狀內(nèi)皮瘤、淋巴管肉瘤、淋巴肉芽瘤、淋巴管瘤、淋巴瘤、淋巴粘液瘤、淋巴肉瘤、淋巴管纖維瘤、淋巴細(xì)胞瘤、淋巴上皮瘤、成淋巴細(xì)胞瘤、內(nèi)皮瘤、成內(nèi)皮細(xì)胞瘤、滑膜瘤、滑膜肉瘤、間皮瘤、結(jié)締組織瘤、尤因瘤、平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、成平滑肌瘤、平滑肌纖維瘤、橫紋肌瘤、橫紋肌肉瘤、橫紋肌粘液瘤、急性淋巴白血病、急性骨髓性白血病、慢性病細(xì)胞、紅細(xì)胞增多癥、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤。
在另一優(yōu)選例中，通式I所述的化合物可用于治療非正常新生血管引起的各種有關(guān)疾病，主要有風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病視網(wǎng)膜病、早熟視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜靜脈閉塞、牛皮癬、紅斑痤瘡、卡波濟(jì)肉瘤、特異性反應(yīng)性角膜炎、流行性角膜結(jié)膜炎、新生血管性青光眼、細(xì)菌性潰瘍、真菌性潰瘍、單純性皰疹感染、帶狀皰疹感染、原生動(dòng)物感染、分支桿菌感染、多動(dòng)脈炎、肉樣瘤、鞏膜炎、潮紅、口干眼燥關(guān)節(jié)炎綜合癥、全身性紅斑狼瘡、艾滋病綜合癥、梅毒。
據(jù)此，本發(fā)明提供了一種Combretastatins類(lèi)化合物的新的衍生物，其生物活性有了進(jìn)一步的提高。


圖1含氟甲氧基康普立停的合成路線。
圖2含氟乙氧基康普立停的合成路線。
圖3含氟甲氧基康普立停氨基酸衍生物的合成路線。
圖4含氟乙氧基康普立停氨基酸衍生物的合成路線。
其中PTC表示相轉(zhuǎn)移催化劑(phase-transfer catalyst)，Cat.表示催化劑，Wittig reaction表示W(wǎng)ittig反應(yīng)；Ph2PLi表示二苯基膦鋰，THF表示四氫呋喃，TFA表示三氟乙酸，iPr2EtN表示二異丙基乙胺，(PhCH2O)2P(O)H表示亞磷酸二芐酯，TMBS表示三甲基溴硅烷，F(xiàn)moc-Ser(Ac)表示N-α-9-芴基甲氧羰基絲氨酸衍生物，DCC表示環(huán)己基碳二亞胺，HOBt表示1-羥基苯并三唑，DMF表示二甲基甲酰胺；aq.HCl表示稀鹽酸，aq.NaOH表示稀氫氧化鈉，conc.HCl表示濃鹽酸，conc.HNO3表示濃硝酸。
具體實(shí)施例方式
發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)天然產(chǎn)物康普立停(Combretastatin)的B芳環(huán)4′位烷氧基是個(gè)活性作用點(diǎn)，在B芳環(huán)的4′位引入含氟烷氧基可提高其對(duì)腫瘤血管靶向活性。
上述化合物的合成是運(yùn)用了二苯基膦鋰選擇性脫甲基化關(guān)鍵反應(yīng)，成功地在B芳環(huán)的4′位引入含氟烷氧基。
這些新化合物具有較強(qiáng)的抑制微管蛋白集聚能力，可用于抗腫瘤和抗非正常新生血管治療。
如本文所用，康普立停(Combretastatin)衍生物是如通式II的化合物。
化合物本發(fā)明提供的含氟烷氧基康普立停(Combretastatin)衍生物是在Combretastatin B芳環(huán)4′位引入含氟烷氧基，結(jié)構(gòu)如通式I 其中Rf是含有1-8個(gè)碳原子且具有1-17個(gè)氟原子的烷基；R為氨基、取代氨基、羥基、硝基、鹵素、烷氧基、磷酸鹽或氨基酸側(cè)鏈及其藥學(xué)上可接受的鹽。
更佳地，Rf＝-CH2F，-CHF2，-CnF2n+1，-CH2CnF2n+1，-CHFCnF2n+1或-CH2CHFCnF2n+1，n表示1-3的整數(shù)。
優(yōu)選含氟甲氧基康普立停或含氟甲氧基康普立停氨基酸衍生物，結(jié)構(gòu)如通式I，其中的Rf＝-CH2F、-CHF2或-CF3，R＝-OH、-OPO3Na2、-NH2或-NHCOCH(NH2)CH2OH；更優(yōu)選Rf＝-CHF2，R＝-OH、-OPO3Na2、-NH2或-NHCOCH(NH2)CH2OH。
本發(fā)明還優(yōu)選含氟乙氧基康普立?；蚝已趸灯樟⑼０被嵫苌铮Y(jié)構(gòu)如通式I，其中的Rf＝-CH2CF2、-CH2CHF2或-CF2CF3，R＝-OH、-OPO3Na2、-NH2或-NHCOCH(NH2)CH2OH。
本發(fā)明提供的含氟烷氧基康普立停衍生物可以與無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿形成藥學(xué)上可接受的堿加成鹽，所述無(wú)機(jī)堿如氫氧化鉀和氫氧化銨，有機(jī)堿如脂肪族胺(如三乙胺)、醇胺類(lèi)(如乙醇胺)、氨基酸(如組氨酸)、氨基糖苷(如新霉胺)。
本發(fā)明提供的含氟烷氧基康普立停衍生物可以與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，所述無(wú)機(jī)酸如鹽酸、硫酸和磷酸，有機(jī)酸如草酸，富馬酸、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸，檸檬酸、酒石酸和谷氨酸。
化合物的制備本發(fā)明在相轉(zhuǎn)移催化下，進(jìn)行含氟烷基化反應(yīng)；再用二苯基膦鋰進(jìn)行選擇性脫甲基反應(yīng)，從而制備了一系列新型的含氟烷氧基苯甲醛衍生物。然后以這些新的含氟烷氧基苯甲醛衍生物為原料進(jìn)行硝化、還原、羥基保護(hù)、Wittig反應(yīng)、脫保護(hù)、磷酸鹽化、氨基酸化等的合成工藝優(yōu)化，制備了一系列含氟烷氧基康普立停(Combretastatin)衍生物。
(一)制備含氟烷氧基苯甲醛衍生物4-羥基-3-甲氧基苯甲醛(香蘭素)III或?qū)αu基苯甲醛IV，用含氟烷基化試劑，在無(wú)機(jī)堿和相轉(zhuǎn)移催化劑的作用下，制備4-含氟烷氧基-3-甲氧基苯甲醛V或?qū)檠趸郊兹￢II。
所述的含氟烷基化試劑選自含氟鹵代烷、磺酸含氟烷基酯，優(yōu)選氟里昂(F22)或?qū)妆交撬岷榛?。所述的無(wú)機(jī)堿選自氫氧化物、碳酸鹽中的一種或多種，優(yōu)選氫氧化鉀或/和碳酸鉀；所述的相轉(zhuǎn)移催化劑(phase-transfer catalyst，PTC)選自季銨鹽、季磷鹽、冠醚、聚乙二醇(PEG)，優(yōu)選芐基三乙基氯化銨、四丁基硫酸氫銨(TBAB)、18-冠-6、二苯基18-冠-6、二環(huán)己基18-冠-6冠醚或PEG-400。
用二醇類(lèi)化合物，對(duì)4-含氟烷氧基-3-甲氧基苯甲醛V進(jìn)行醛基保護(hù)，然后以二苯基膦鋰作為3位甲氧基的選擇性脫甲基試劑，把甲氧基轉(zhuǎn)化成羥基，得到4-含氟烷氧基-3-羥基苯甲醛VI。對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VII，在乙酸酐作溶劑的條件下，用濃硝酸實(shí)施間位的硝化，得到間位硝基取代的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VIII。
(二)制備含氟烷氧基康普立停(Combretastatin)衍生物在有機(jī)堿的催化下，4-含氟烷氧基-3-羥基苯甲醛VI和三苯甲基氯反應(yīng)，得到3位羥基保護(hù)的含氟烷氧基苯甲醛衍生物。溴化3，4，5-三甲氧基芐基三苯鱗在正丁基鋰的作用下，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的膦葉立德，和上述3位羥基保護(hù)的含氟烷氧基苯甲醛衍生物進(jìn)行Wittig反應(yīng)，生成的含氟烷氧基二苯乙烯衍生物，在濃鹽酸和三氟乙酸的聯(lián)合作用下，脫去三苯甲基，得到3’位是羥基的含氟烷氧基康普立停衍生物IX。
同樣，4-含氟烷氧基-3-硝基苯甲醛VIII與上述膦葉立德發(fā)生Wittig反應(yīng)，生成3’位是硝基的含氟烷氧基康普立停衍生物X。
(三)制備含氟烷氧基康普立停的磷酸鹽或氨基酸衍生物如圖1或圖2所示，上述含氟烷氧基康普立停衍生物IX的3’位羥基，經(jīng)過(guò)四氯化碳、二異丙基乙胺、亞磷酸二芐酯、三甲基溴硅烷、甲醇鈉的作用轉(zhuǎn)化成磷酸二鈉鹽，生成含氟烷氧基康普立停的磷酸鹽XI。
或者，如圖3或圖4所示，上述含氟烷氧基康普立停衍生物X的3’位硝基，用還原劑還原成氨基，還原劑優(yōu)選氯化亞錫、鋅粉/乙酸或硫代硫酸鈉。然后在N-α-9-芴基甲氧羰基氨基酸衍生物(FmocAA)和環(huán)己基碳二亞胺(DCC)以及1-羥基苯并三唑(HOBt)的作用下，在3-位引入氨基酸側(cè)鏈，然后在氫氧化鈉的作用下，脫保護(hù)轉(zhuǎn)換成氨基酸酰胺，得含氟烷氧基康普立停的氨基酸衍生物XII。
R’＝氫、苯基或氨基酸側(cè)鏈，m＝1-3的整數(shù)。
藥物組合物將治療有效量的通式I化合物和藥學(xué)上可接受的載體混合，制備成組合物的形式；其中治療有效量的通式I化合物占組合物0.1-99％(w/w)。本發(fā)明的組合物可以多種劑型存在。所述的劑型可以是凍干粉劑、粒劑、粉劑、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射劑、乳劑、酊劑、懸浮液、溶液的形式靜脈注射或口服給藥劑型。
對(duì)于靜脈注射給藥，可使用凍干粉劑，用生理鹽水或葡萄糖溶液配成溶液，進(jìn)行靜脈輸液。
對(duì)于口服給藥，可使用片劑、錠劑、膠囊、丸劑、粉末、顆粒、糊劑、混懸劑、乳劑或者溶液劑。
所用的活性成分的有效劑量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明的化合物每天以約0.5-500mg/kg動(dòng)物體重的劑量給予時(shí)，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開(kāi)的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對(duì)大部分大型哺乳動(dòng)物而言，每天的總劑量約為1-100mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體混合的約0.5-500mg的活性化合物?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開(kāi)的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。通常，成年人的口服每日的合適臨床劑量的選擇范圍為1-1000mg，優(yōu)選為10-200mg，成人非口服的每日劑量為0.1-100mg，優(yōu)選1-100mg。
按上述方法制備得到的本發(fā)明含氟烷氧基康普立停(Combretastatin)衍生物，用作血管靶向藥物時(shí)，該藥劑可通過(guò)靜脈注射或口服給藥。藥劑劑量因疾病的發(fā)展程度而異，成人通常在1和3000mg之間。
在優(yōu)選例中，本發(fā)明的化合物可通過(guò)口服以及靜脈內(nèi)途徑給藥。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括無(wú)菌水、聚乙二醇、甘露醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。
如本文所用，靜脈注射包括腹膜內(nèi)注射和滴注輸液，使用凍干粉劑，用生理鹽水或葡萄糖溶液配成的溶液。其中凍干粉劑由本領(lǐng)域常規(guī)方法制得。
本發(fā)明含氟烷氧基康普立停衍生物配制成口服制劑，包括片劑、膠囊。這種劑型可用有效組分與至少一種添加劑混合而成，這些添加劑包括賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、著色劑、矯味劑等，并將所形成的混合物制成粉劑、粒劑、片劑、涂層片劑、丸劑、膠囊等劑型。賦形劑包括乳糖、玉米淀粉、糖類(lèi)，葡萄糖，山梨醇，結(jié)晶纖維素中的一種或多種。粘合劑包括聚乙烯醇、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯樹(shù)膠、黃耆膠、明膠、紫膠、羥丙基纖維素、羥丙基淀粉，聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種。崩解劑包括淀粉、瓊脂、凝膠粉，結(jié)晶纖維素、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸檬酸鈣、環(huán)糊精，果膠中的一種或多種。潤(rùn)滑劑包括硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、硅石，硬化植物油中的一種或多種。著色劑包括允許加到藥品中的色素。矯味劑包括可可粉、薄荷醇、薄荷油、精制冰片，以及肉桂。如果需要，這些片劑和粒劑可用蔗糖、明膠等包衣。一般這些劑型可含有另外的添加劑，包括惰性稀釋劑，防腐劑如對(duì)羥苯甲酸酯類(lèi)，山梨酸，抗氧劑如維生素C、α-維生素E和半胱氨酸，分解劑，粘結(jié)劑，增稠劑，緩沖液，甜味劑，調(diào)味劑和香料。片劑和丸劑也可覆以腸衣?？诜囊后w劑型包括可藥用的乳劑、糖漿、酊劑、懸液和溶液，可以含有常用的惰性稀釋劑，如水。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于在天然產(chǎn)物Combretastatin(康普立停)的B芳環(huán)的4′位引入含氟烷氧基，提高了其對(duì)腫瘤血管的靶向活性。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。
實(shí)施例1制備對(duì)二氟甲氧基苯甲醛在裝有溫度計(jì)、機(jī)械攪拌、回流冷凝管、導(dǎo)氣管的1L四頸燒瓶加入對(duì)羥基苯甲醛50克(0.41mol)、400mL異丙醇，攪拌20分鐘，用恒壓滴液漏斗緩緩滴入5克18-冠-6醚和106.3克氫氧化鈉(2.665mol.)的120毫升水溶液，攪拌30分鐘，將反應(yīng)體系加熱到65℃，在此溫度下通入一氯二氟甲烷(F22)5-6小時(shí)，TLC跟蹤。反應(yīng)完成后將體系冷卻下來(lái)(15℃)加入400mL的水中止反應(yīng)，產(chǎn)物用乙醚(3×300mL)萃取，有機(jī)相用水洗至中性，無(wú)水MgSO4干燥。減壓蒸去乙醚，減壓蒸餾得到對(duì)二氟甲氧基苯甲醛(85～87℃/10mmHg)。產(chǎn)率95％。1H-NMR(ppm)δ9.87(1H，s；-CHO)；7.70(2H，m；2，6-ArH)；7.36(1H，t；J2H-F＝68Hz；-CHF2)；6.96(2H，m；3，5-ArH)。
實(shí)施例2制備4-二氟甲氧基-3-甲氧基苯甲醛按實(shí)施例一，用4-羥基-3-甲氧基苯甲醛62.5克(0.41mol.)代替對(duì)羥基苯甲醛，得到4-二氟甲氧基-3-甲氧基苯甲醛(117～120℃/10mmHg)。產(chǎn)率93％。1H-NMR(ppm)δ9.85(1H，s；-CHO)；7.38(1H，t；J2H-F＝69Hz；-CHF2)；7.27(1H，m；6-ArH)；7.20(1H，m；2-ArH)；6.83(1H，m；5-ArH)；3.73(3H，s；-OCH3)。
實(shí)施例3制備4-二氟甲氧基-3-羥基苯甲醛步驟1，在氬氣的保護(hù)之下，取4-二氟甲氧基-3-甲氧基苯甲醛61克(0.3mol)加入到三頸瓶中，然后加入乙二醇1 30克(2.1mol)，原甲酸三乙酯133克(0.9mol)，100℃左右回流，加入1ml三氟化硼乙醚溶液，作為催化劑。反應(yīng)24小時(shí)，TLC跟蹤。冷卻到室溫，加入200ml濃度為15％氫氧化鈉水溶液，用300ml的乙醚萃取，分液，用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸去溶劑，得到黃色油狀物。
步驟2，在1.28M二苯基膦鋰四氫呋喃溶液200ml中，分批加入上述縮醛50克(0.2mol)。室溫?cái)嚢?-4小時(shí)，TLC跟蹤。加水中止反應(yīng)，加入200ml濃度為30％的氫氧化鈉溶液后，用300ml乙醚進(jìn)行萃取。水層在冷卻下，用鹽酸酸化，調(diào)節(jié)pH值3-4左右。然后用500ml乙醚萃取，合并乙醚萃取液，用水和飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓除去溶劑，得到黃色固體。苯/石油醚重結(jié)晶，得淺黃色晶體31.2g(m.p.104～106℃)，產(chǎn)率83％。1H-NMR(ppm)δ9.86(1H，s；-CHO)；7.37(1H，t；J2H-F＝72Hz；-CHF2)；7.26(1H，m；6-ArH)；7.17(1H，m；2-ArH)；6.79(1H，m；5-ArH)；4.88(1H，s；-OH)。13C-NMR(ppm)δ191.0(CHO)，163.9(t，CHF2)，157.2(4-ArC)，146.2(3-ArC)，130.6(1-ArC)，123.5(6-ArC)，116.7(2-ArC)，116.2(5-ArC)。
實(shí)施例4制備4-二氟甲氧基-3-硝基苯甲醛在裝有滴液漏斗和機(jī)械攪拌的1000毫升三頸瓶中，加入新蒸的對(duì)二氟甲氧基苯甲醛72克(0.42mol.)和400毫升醋酐。用冰鹽浴冷卻，然后慢慢地滴入濃硝酸二氯甲烷溶液，36毫升濃硝酸加50毫升二氯甲烷。保持滴加溫度低于5度，約3-4小時(shí)滴完。TLC跟蹤。隨后反應(yīng)溫度可以慢慢地升到室溫。繼續(xù)攪拌2天。
冷卻反應(yīng)瓶至0～5℃，攪拌下加入20％的鹽酸，直到沉淀出現(xiàn)停止加酸。再冷卻到沉淀完全。過(guò)濾得到黃色晶體。用95％的乙醇重結(jié)晶，得到淡黃色晶體74克(m.p.88～90℃)產(chǎn)率81％。1H-NMR(ppm)δ9.92(1H，s；-CHO)；7.87(1H，t；J2H-F＝70Hz；-CHF2)；7.68(1H，m；6-ArH)；7.59(1H，m；2-ArH)；7.22(1H，m；5-ArH)。13C-NMR(ppm)δ194.0(CHO)，165.1(t，CHF2)，160.2(4-ArC)，157.4(3-ArC)，137.3(1-ArC)，130.2(6-ArC)，122.5(2-ArC)，120.2(5-ArC)。
實(shí)施例5制備對(duì)三氟乙氧基苯甲醛在裝有溫度計(jì)、機(jī)械攪拌，回流冷凝管的1L四頸燒瓶中，加入對(duì)羥基苯甲醛50克(0.41mol)、400ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，5克18-冠-6，攪拌20分鐘，分批加入168克碳酸鉀粉末(1.22mol.)，攪拌30分鐘，將反應(yīng)體系加熱到110℃，滴入對(duì)甲苯磺酸三氟乙酯115克(0.45mol)的DMF溶液100ml，約1小時(shí)滴完，加熱到130℃，繼續(xù)反應(yīng)3-4小時(shí)，TLC跟蹤。完成后將體系冷卻到0℃。倒入已冷卻的600毫升3N鹽酸。攪拌后，加入1000毫升乙醚萃取。分出水層，水層再用400毫升乙醚萃取三次。合并醚層，隨后，依次用3N鹽酸、蒸餾水、飽和食鹽水各400毫升洗滌。用無(wú)水硫酸鎂干燥。除去乙醚，剩余粗產(chǎn)物。隨后，減壓蒸餾得到對(duì)三氟乙氧基苯甲醛(95～97℃/10mmHg)。產(chǎn)率88％。1H-NMR(ppm)δ9.80(1H，s；-CHO)；7.65(2H，m；2，6-ArH)；6.83(2H，m；3，5-ArH)；4.56(2H，q；J3H-F＝7.2Hz；-CH2CF3)。
實(shí)施例6制備4-三氟乙氧基-3-甲氧基苯甲醛按實(shí)施例五，用4-羥基-3-甲氧基苯甲醛62.5克(0.41mol.)代替對(duì)羥基苯甲醛，得到4-三氟乙氧基-3-甲氧基苯甲醛(126～129℃/10mmHg)。產(chǎn)率83％。1H-NMR(ppm)δ9.88(1H，s；-CHO)；7.27(1H，m；6-ArH)；7.20(1H，m；2-ArH)；6.83(1H，m；5-ArH)；4.48(2H，q；J3H-F＝7.2Hz；-CH2CF3)；3.65(3H，s；-OCH3)。
實(shí)施例7制備4-三氟乙氧基-3-羥基苯甲醛按實(shí)施例三，用4-三氟乙氧基-3-甲氧基苯甲醛70克(0.3mol)代替4-二氟甲氧基-3-甲氧基苯甲醛，得到4-三氟乙氧基-3-羥基苯甲醛(m.p.133～135℃)，產(chǎn)率81％。1H-NMR(ppm)δ9.81(1H，s；-CHO)；7.26(1H，m；6-ArH)；7.17(1H，m；2-ArH)；6.79(1H，m；5-ArH)；4.88(1H，s；-OH)；4.45(2H，q；J3H-F＝7.2Hz；-CH2CF3)。13C-NMR(ppm)δ191.0(CHO)，157.2(4-ArC)，146.2(3-ArC)，130.6(1-ArC)，126(q，CF3)，123.5(6-ArC)，116.7(2-ArC)，116.2(5-ArC)，87(m，CH2)。
實(shí)施例8制備4-三氟乙氧基-3-硝基苯甲醛按實(shí)施例四，用對(duì)三氟乙氧基苯甲醛86克(0.42mol)代替對(duì)二氟甲氧基苯甲醛，得到4-三氟乙氧基-3-硝基苯甲醛(m.p.126～127℃)，產(chǎn)率78％。1H-NMR(ppm)δ9.91(1H，s；-CHO)；7.28(1H，m；6-ArH)；7.20(1H，m；2-ArH)；6.77(1H，m；5-ArH)；4.46(2H，q；J3H-F＝7.2Hz；-CH2CF3)。13C-NMR(ppm)δ191.0(CHO)，157.2(4-ArC)，146.2(3-ArC)，130.6(1-ArC)，127(q，CF3)，123.5(6-ArC)，116.7(2-ArC)，116.2(5-ArC)，89(m，CH2)。
實(shí)施例9制備(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-羥基-4’-二氟甲氧基苯基)-乙烯(DD8011)步驟1，在氬氣氛下，加入4-二氟甲氧基-3-羥基苯甲醛12.5g(0.066mol.)，三苯甲基氯21.1g(0.076mol.)，干燥四氫呋喃42ml到500ml四頸燒瓶中，室溫下攪拌均勻。然后緩慢滴加三乙胺1.3ml。滴完后繼續(xù)攪拌1小時(shí)，TLC跟蹤，反應(yīng)完成后，加水50ml中止。攪拌30分鐘，加入乙酸乙酯100ml，溶解絮狀沉淀。加入正庚烷250ml，沉淀出顆粒狀淺黃色粗品。過(guò)濾，所得的固體用水洗兩次，再用乙酸乙酯/石油醚(10ml/20ml)洗滌，得到淺白色晶體。此晶體用乙酸乙酯/石油醚重結(jié)晶，得到白色的大顆粒晶體25.8克，產(chǎn)率91％。1H-NMR(ppm)δ9.87(s，1H，CHO)；7.37(t，1H；J2H-F＝72Hz；-CHF2)；7.26(m，2H，Ar-H)；7.19(m，15H，Tr-H)；6.85(s，1H，Ar-H).
步驟2，在氬氣保護(hù)下，將溴化三甲氧基苯基亞甲基三苯鱗15g(28.7mmol.)懸浮于30ml THF中，冷卻到-15℃左右。滴入1.6mol/L的正丁基鋰環(huán)己烷溶液22ml，反應(yīng)1小時(shí)。將12.5克(29mmol.)上述所得醛溶解于24ml THF中，緩慢滴加入反應(yīng)中。TLC跟蹤，攪拌過(guò)夜，反應(yīng)溫度升到室溫。次日，將溶液溫度降到-5℃，加入飽和食鹽水中止反應(yīng)。分出有機(jī)層，除去溶劑。經(jīng)快速柱層析分離得到15克白色晶體，產(chǎn)率88％。1H-NMR(ppm)δ7.19(m，15H，Tr-H)；6.94(d，1H，2’-H)；6.80(dd，1H，6’-H)；6.74(d，1H，5’-H)；6.55(s，2H，2，6-H)；6.52(t，1H；J2H-F＝72Hz；-CHF2)6.47(d，1H，1a-H)；6.41(d，1H，1a’-H)；3.88(s，3H，4-OCH3)；3.71(s，6H，3，5-OCH3)。
步驟3，室溫下，取上述Wittig反應(yīng)產(chǎn)物10g(16.8mmol.)，用20ml甲苯溶解。然后滴加37％HCl 4ml，TLC跟蹤，反應(yīng)完成后，加水中止反應(yīng)。反應(yīng)體系冷卻到0℃-5℃。在攪拌狀態(tài)下重結(jié)晶。過(guò)濾出白色晶體5.6克，產(chǎn)率95％。1H-NMR(ppm)δ7.02(d，1H，2’-H)；6.94(dd，1H，6’-H)；6.80(d，1H，5’-H)；6.62(s，2H，2，6-H)；6.53(t，1H；J2H-F＝72Hz；-CHF2)6.46(d，1H，1a-H)；6.40(d，1H，1a’-H)；5.51(broad，1H；OH)；3.86(s，3H，4-OCH3)；3.70(s，6H，3，5-OCH3)。
結(jié)構(gòu)如式XIII
實(shí)施例10制備(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-氨基-4’-二氟甲氧基苯基)-乙烯(DD8021)步驟1，在氬氣保護(hù)下，將溴化三甲氧基苯基亞甲基三苯鱗15g(28.7mmol.)懸浮于30ml THF中，冷卻到-15℃左右。滴入1.6mol/L的正丁基鋰環(huán)己烷溶液22ml，反應(yīng)1小時(shí)。將6.3克(29mmol.)4-二氟甲氧基-3-硝基苯甲醛溶解于24ml THF中，緩慢滴加入反應(yīng)中。TLC跟蹤，攪拌過(guò)夜，反應(yīng)溫度升到室溫。次日，將溶液溫度降到-5℃，加入飽和食鹽水中止反應(yīng)。分出有機(jī)層，除去溶劑。經(jīng)快速柱層析分離得到6.6克淺黃色晶體，產(chǎn)率61％。1H-NMR(ppm)δ7.32(d，1H，2’-H)；7.16(dd，1H，6’-H)；6.90(d，1H，5’-H)；6.78(t，1H；J2H-F＝72Hz；-CHF2)；6.64(s，2H，2，6-H)；6.49(d，1H，1a-H)；6.43(d，1H，1a’-H)；3.86(s，3H，4-OCH3)；3.70(s，6H，3，5-OCH3)。
步驟2，取(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-硝基-4’-二氟甲氧基苯基)-乙烯4.1克(10.8mmol.)溶解在10毫升丙酮-水(V/V，2∶1)混合溶劑中，加熱到50℃，攪拌溶解。然后，加入18.8克硫代硫酸鈉，反應(yīng)混合物回流6小時(shí)，TLC板跟蹤，反應(yīng)完成后，冷卻到室溫，分出有機(jī)層，水層用乙酸乙酯50ml×4萃取，合并有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸去部分溶劑，冷卻后加入石油醚重結(jié)晶。得到2.6克淺黃色晶體，產(chǎn)率68.6％。1H-NMR(ppm)δ7.08(d，1H，2’-H)；6.92(dd，1H，6’-H)；6.76(d，1H，5’-H)；6.62(s，2H，2，6-H)；6.49(d，1H，1a-H)；6.43(d，1H，1a’-H)；6.28(t，1H；J2H-F＝72Hz；-CHF2)；5.13(broad，2H，NH2)；3.86(s，3H，4-OCH3)；3.70(s，6H，3，5-OCH3)。
結(jié)構(gòu)如式XIV
實(shí)施例11制備(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-羥基-4’-三氟乙氧基苯基)-乙烯(DD8031)按實(shí)施例九，用4-三氟乙氧基-3-羥基苯甲醛14.5g(66mmol.)代替4-二氟甲氧基-3-羥基苯甲醛。經(jīng)三步反應(yīng)，得到(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-羥基-4’-三氟乙氧基苯基)-乙烯，總產(chǎn)率79.5％。1H-NMR(ppm)δ6.93(d，1H，2’-H)；6.84(dd，1H，6’-H)；6.72(d，1H，5’-H)；6.60(s，2H，2，6-H)；6.45(d，1H，1a-H)；6.38(d，1H，1a’-H)；5.51(broad，1H；OH)；4.48(2H，q；J3H-F＝7.2Hz；-CH2CF3)；3.86(s，3H，4-OCH3)；3.70(s，6H，3，5-OCH3)。
結(jié)構(gòu)如式XV 實(shí)施例12制備(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-氨基-4’-三氟乙氧基苯基)-乙烯(DD8041)按實(shí)施例十，用4-三氟乙氧基-3-硝基苯甲醛14.5g(66mmol)代替4-二氟甲氧基-3-硝基苯甲醛。經(jīng)二步反應(yīng)，得到(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-氨基-4’-三氟乙氧基苯基)-乙烯，總產(chǎn)率43.6％。1H-NMR(ppm)δ7.08(d，1H，2’-H)；6.92(dd，1H，6’-H)；6.76(d，1H，5’-H)；6.62(s，2H，2，6-H)；6.49(d，1H，1a-H)；6.43(d，1H，1a’-H)；5.13(broad，2H，NH2)；4.40(2H，q；J3H-F＝7.2Hz；-CH2CF3)；3.86(s，3H，4-OCH3)；3.70(s，6H，3，5-OCH3)。
結(jié)構(gòu)如式XVI 實(shí)施例13制備(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-羥基-4’-二氟甲氧基苯基)-乙烯-3’-O-磷酸二鈉鹽(DD8011DP，結(jié)構(gòu)如式XVII)和(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-羥基-4’-三氟乙氧基苯基)-乙烯-3’-O-磷酸二鈉鹽(DD8031DP，結(jié)構(gòu)如式XVIII)Combretastatin A-4的酚羥基轉(zhuǎn)換成磷酸二鈉鹽水溶性前藥，其典型的反應(yīng)過(guò)程，按照Pettit，G.R.et al.，Anti-Cancer Drug Design1998，13，183-191進(jìn)行。見(jiàn)圖1和圖2。
實(shí)施例14制備(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-氨基-4’-二氟甲氧基苯基)-乙烯-3’-N-絲氨酰胺(DD8021AS，結(jié)構(gòu)如式XIX)和(Z)-1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(3’-氨基-4’-三氟乙氧基苯基)-乙烯-3’-N-絲氨酰胺(DD8041AS，結(jié)構(gòu)如式XX).
氨基取代的二苯乙烯衍生物經(jīng)N-α-9-芴基甲氧羰基絲氨酸衍生物(FmocAA)與氨基發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。然后脫保護(hù)，形成氨基酸前藥。其反應(yīng)過(guò)程由Pettit，G.R.et al.，J.Med.Chem.，2002，46，525-31報(bào)道。見(jiàn)圖3和圖4。

表1

實(shí)施例15體外抗腫瘤活性評(píng)估體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞經(jīng)含氟烷氧基康普立停衍生物處理72小時(shí)后，應(yīng)用MTT或SRB方法評(píng)價(jià)其對(duì)腫瘤增殖的抑制作用，并與CA-4比較。
細(xì)胞株H460人肺癌細(xì)胞，SGC7901人胃癌細(xì)胞，HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞，Bel-7402人肝癌細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)細(xì)胞與不同濃度化合物(分別為100，10，1，0.1，0.01，0.001μM)溫育72小時(shí)，采用SRB方法評(píng)價(jià)化合物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制程度，計(jì)算抑制率，根據(jù)抑制率采用Logit方法計(jì)算IC50，比較化合物的體外抗腫瘤活性。
抑制率計(jì)算方法抑制率(％)＝(對(duì)照組OD值-用藥OD值)/對(duì)照組OD值×100％

結(jié)果顯示含氟甲氧基康普立停衍生物的體外抗腫瘤活性與天然化合物Combretastatin A-4相當(dāng)。而含氟乙氧基康普立停衍生物比CA-4的活性要大3到30倍。
實(shí)施例16體外新生血管抑制性能評(píng)價(jià)按實(shí)施例十五的方法，以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為作用對(duì)象，考察含氟烷氧基康普立停衍生物的抗新生血管性能。


結(jié)果表明含氟烷氧基康普立停衍生物具有很強(qiáng)的微管蛋白集聚抑制性能，預(yù)示著含氟烷氧基康普立停衍生物是一類(lèi)潛在的腫瘤血管靶向藥物。
實(shí)施例17制備含氟烷氧基康普立停凍干粉劑

按照處方量精密稱(chēng)取原料，將處方量甘露醇投入，加入約處方總量80％的注射用水?dāng)嚢柚寥芙馔耆玫匠吻迦芤?，加?.1％(g/ml)的針用活性炭，攪拌均勻，靜置約10分鐘，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，補(bǔ)加注射用水至全量。再經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，測(cè)定pH值和含量，合格后，定量灌裝，冷凍干燥，充氮，壓塞，壓鋁蓋，貼簽，包裝，抽檢合格，即得成品。(整個(gè)流程均需避光)在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種由通式I表示的化合物 其中Rf是含有1-8個(gè)碳原子且具有1-17個(gè)氟原子的烷基；R為氨基、取代氨基、羥基、硝基、鹵素、烷氧基、磷酸鹽或氨基酸側(cè)鏈及其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的Rf和R選自下組(a)Rf是含氟甲基，R是羥基，(b)Rf是含氟甲基，R是氨基或取代氨基，(c)Rf是含氟甲基，R是磷酸二鈉鹽或是磷酸銨鹽或是磷酸膽堿內(nèi)式鹽，或(d)Rf是含氟甲基，R是-NH(COCHR′N(xiāo)H)m-H，R′是氫、天然氨基酸側(cè)鏈、苯基，m表示1-3的整數(shù)。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的Rf和R選自下組(a)Rf是含氟乙基，R是羥基，(b)Rf是含氟乙基，R是氨基或取代氨基，(c)Rf是含氟乙基，R是磷酸二鈉鹽或是磷酸銨鹽或是磷酸膽堿內(nèi)式鹽，或(d)Rf是含氟乙基，R是-NH(COCHR′N(xiāo)H)m-H，R′是氫、天然氨基酸側(cè)鏈、苯基，m表示1-3的整數(shù)。
4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的Rf和R選自下組(a)Rf＝-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2或-CF2CF3，R＝-OH或-OPO3Na2，或(b)Rf＝-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2CF3、-CH2CHF2或-CF2CF3，R＝-NH2或-NHCOCH(NH2)CH2OH。
5.一種如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于，它包括步驟(1)間甲氧基對(duì)羥基苯甲醛III，在相轉(zhuǎn)移催化下，用含氟試劑進(jìn)行含氟烷基化反應(yīng)，形成間甲氧基對(duì)含氟烷氧基苯甲醛V； (2)用二苯基膦鋰，脫去間甲氧基對(duì)含氟烷氧基苯甲醛V間位甲氧基，使轉(zhuǎn)化成羥基，得到間位羥基化的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VI； (3)將間位羥基化的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VI進(jìn)行羥基保護(hù)，然后與3，4，5-三甲氧基芐基三苯膦葉立德發(fā)生維悌希反應(yīng)，脫保護(hù)后，得到如權(quán)利要求1所述的通式I化合物。
6.一種如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于，它包括步驟(a)對(duì)羥基苯甲醛IV，在相轉(zhuǎn)移催化下，用含氟試劑進(jìn)行含氟烷基化反應(yīng)，形成對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VII； (b)用硝酸和乙酸酐，將對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VII進(jìn)行間位硝化反應(yīng)，得到間位硝基取代的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VIII； (c)將間位硝基取代的對(duì)含氟烷氧基苯甲醛VIII與3，4，5-三甲氧基芐基三苯膦葉立德發(fā)生維悌希反應(yīng)，得到如權(quán)利要求1所述的通式I化合物。
7.如權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，所述的含氟試劑為含氟鹵代甲烷或磺酸含氟烷基酯。
8.一種藥物組合物，其特征在于，它含有治療有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
9.一種如權(quán)利要求1所述的化合物在制備微管蛋白聚集抑制劑中的應(yīng)用。
10.一種如權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療非正常新生血管引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)新的康普立停(Combretastatin)衍生物及其制備方法。它具有下列結(jié)構(gòu)式(I)，其在天然產(chǎn)物康普立停(Combretastatin)B芳環(huán)的4′位引入了含氟烷氧基，同時(shí)在它的3′位進(jìn)行功能性化學(xué)修飾，導(dǎo)入氨基、硝基、鹵素、烷氧基、磷酸鹽、氨基酸側(cè)鏈等。這些新衍生物具有更強(qiáng)的抑制微管蛋白集聚能力，可用于抗腫瘤和抗新生血管治療。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101085743SQ20061002730
公開(kāi)日2007年12月12日 申請(qǐng)日期2006年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月6日
發(fā)明者沈衛(wèi)平, 王建平, 王建國(guó), 金紅梅, 錢(qián)峰, 王斐 申請(qǐng)人:浙江大德藥業(yè)集團(tuán)有限公司