專(zhuān)利名稱(chēng)：鳳尾草總黃酮的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鳳尾草總黃酮的新應(yīng)用，特別是在防治缺血性疾病方面的新用途。

背景技術(shù)：
鳳尾蕨科植物鳳尾草(Pteris multifida Poir.)又名井欄邊草、小葉鳳尾草，我國(guó)資源豐富，并擁有上千年的應(yīng)用歷史。其“味淡，微苦，性寒”(《中藥大辭典》)；“入腎、胃二經(jīng)”、“治濕熱小便不通、血淋、咽喉腫痛”(《泉州本草》)；《分類(lèi)草藥性》則云“治一切熱毒。消腫，清火”；《貴州民間方藥集》云“解熱，利尿”；《新藥志》記載它具有清熱利濕，消腫解毒，涼血止血，主治淋證、痢疾等功效。有研究表明，鳳尾草的有效部位為其總黃酮部位，現(xiàn)有鳳尾草總黃酮注射液具有對(duì)金黃色葡萄球菌、淋病球菌、枯草桿菌、痢疾桿菌、黑曲霉均有很強(qiáng)的抑菌效果，其中對(duì)金黃色葡萄球菌，枯草桿菌、黑曲霉的最低抑菌濃度(提取物g/100ml培養(yǎng)基)分別為0.59，0.72，0.78；對(duì)青霉、枯草桿菌的最低抑菌濃度(提取物g/100ml培養(yǎng)基)為0.98、1.05，有不同程度的抑菌效果。公開(kāi)號(hào)為CN1555869的專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了鳳尾草提取物(總黃酮部位)的制備工藝及抗炎用途。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供鳳尾草總黃酮的新用途，特別是在制備防治缺血性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所說(shuō)的缺血性疾病是指由于供血系統(tǒng)循環(huán)障礙、特別是動(dòng)脈輸入的血量減少而造成生物體組織、器官缺血缺氧，進(jìn)而導(dǎo)致其功能障礙的一類(lèi)疾病。常見(jiàn)的缺血性疾病包括冠心病、腦供血不足、腦梗塞等心、腦血管缺血性疾病。近年來(lái)，這類(lèi)疾病發(fā)病率及病死率一直高居首位，研究挖掘防治其的新藥是醫(yī)藥行業(yè)的重點(diǎn)之一。
本發(fā)明所說(shuō)的鳳尾草總黃酮為一種鳳尾草提取物，其有效部位為總黃酮，換言之，也即同上述鳳尾草提取物(總黃酮部位)。
本發(fā)明人通過(guò)諸多的研究及藥物篩選試驗(yàn)，意外地發(fā)現(xiàn)上述總黃酮口服給藥可明顯降低局部性腦缺血大鼠腦壞死百分率，改善缺血大鼠的行為學(xué)評(píng)分；口服給藥能使全腦缺血再灌注損傷大鼠缺血后腦電圖消失時(shí)間延長(zhǎng)，灌注后腦電圖恢復(fù)時(shí)間和翻正反射恢復(fù)時(shí)間明顯縮短，腦水腫明顯減輕，且上述抗局部性和全腦缺血-再灌注損傷作用與劑量呈明顯的正相關(guān)。提示鳳尾草總黃酮對(duì)腦缺血損傷具有明顯保護(hù)作用。
另外，總黃酮5mg/kg和10mg/kg口服給藥可以顯著性降低ISO皮下注射所致的J點(diǎn)位移和血漿中LDH水平升高；口服給藥能明顯縮小冠脈結(jié)扎引起的大鼠心肌缺血心肌梗塞范圍，降低心肌缺血大鼠心電圖J點(diǎn)位移和血漿中LDH水平，且劑量與效應(yīng)呈正相關(guān)。
因此，鳳尾草總黃酮具有防治缺血性疾病、特別是心、腦血管缺血性疾病的作用；而且該有效部位從天然植物中提取，具有更低的毒性。

具體實(shí)施例方式 下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。
實(shí)施例1鳳尾草總黃酮的制備 根據(jù)上述公開(kāi)號(hào)為CN1555869專(zhuān)利文獻(xiàn)實(shí)施例1的工藝來(lái)制備，即將3公斤鳳尾草，用300公斤70％乙醇動(dòng)態(tài)提取兩次，收集提取液，真空濃縮，石油醚萃取脂溶性雜質(zhì)，水液過(guò)大孔樹(shù)脂柱，水液上柱達(dá)飽和后，用水及30％的乙醇洗去親水性雜質(zhì)，用50％的乙醇洗脫黃酮甙，將洗脫液干燥，用有機(jī)溶劑精制一次得鳳尾草總黃酮。
效果實(shí)施例1 總黃酮口服給藥對(duì)大鼠局部性腦缺血損傷的治療作用 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司)，雄性，250～300克，飼養(yǎng)于恒溫凈化通風(fēng)動(dòng)物房，自由進(jìn)食與飲水，25±2℃。
1.2供試樣品將實(shí)施例1制得的總黃酮用0.5％的西黃蓍膠配制成終濃度為0.5mg/ml和1mg/ml混懸液(以總黃酮計(jì))。
1.3陽(yáng)性對(duì)照樣品尼莫地平(鄭州瑞康制藥廠，批號(hào)20030106)；0.5％的西黃蓍膠配制成終濃度為0.5mg/ml混懸液。
1.4其它試劑 水合三氯乙醛(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)20030227)； 紅四氮唑(TTC)(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)F20050620)。
1.5實(shí)驗(yàn)儀器 307-6臺(tái)式牙鉆車(chē)(上海齒科醫(yī)械廠生產(chǎn))； SXP-1B手術(shù)顯微鏡(上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠生產(chǎn))。
1.6動(dòng)物分組 隨機(jī)分為4組，每組8只。
第1組陰性對(duì)照組 0.5％西黃蓍膠 第2組總黃酮低劑量5mg/kg 第3組總黃酮高劑量10mg/kg 第4組陽(yáng)性藥尼莫地平 5mg/kg 1.7實(shí)驗(yàn)方法 取健康雄性Wistar大鼠，體重250-300g，共32只，隨機(jī)分成4組，分別為陰性對(duì)照組(0.5％西黃蓍膠1ml/100g)、陽(yáng)性藥尼莫地平組(5mg/kg)及鳳尾草總黃酮低、高劑量組(5、10mg/kg)。樣品于缺血后立即經(jīng)大鼠口腔灌胃給藥，給藥體積為1ml/100g，陰性對(duì)照組給同等體積的0.5％的西黃蓍膠。
按Tamura的方法，進(jìn)行右側(cè)近端大腦中動(dòng)脈電凝術(shù)。動(dòng)物以12％的水合三氯乙醛麻醉(350mg/kg ip)，側(cè)臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，沿右外耳道與右眼外眥連線(xiàn)的中點(diǎn)垂直于連線(xiàn)切開(kāi)皮膚約2cm，然后在手術(shù)顯微鏡下沿顳肌中線(xiàn)依次切斷顳肌和咬肌，將這些肌肉向兩側(cè)分開(kāi)，暴露顴骨弓。操作時(shí)注意保護(hù)面神經(jīng)和腮腺。用咬骨鉗除去顴弓，并沿顱骨剪開(kāi)筋膜，從而暴露出顳前窩。用小牽張器將顴弓和下頜骨之間的距離撐大，暴露鱗狀骨的大部分。然后在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2mm處鉆孔，開(kāi)一約2mm直徑的小顱窗。此時(shí)，透過(guò)硬腦膜就可見(jiàn)一條較直且少分支的小血管，即為大腦中動(dòng)脈(MCA)。它幾乎垂直路過(guò)嗅束向上而行。在顯微鏡下用細(xì)針刺破硬腦膜，分離血管周?chē)能浤X膜和蛛網(wǎng)膜組織，使之游離。然后用細(xì)分針在嗅束與大腦中動(dòng)脈交界處輕挑起大腦中動(dòng)脈，電凝燒灼嗅束內(nèi)1mm至大腦下靜脈之間的大腦中動(dòng)脈。電凝時(shí)，為避免電凝不完全所致的出血，盡量將大腦中動(dòng)脈挑起，使血管內(nèi)血量減少。另外，為保護(hù)周?chē)M織免受燒傷，用濕棉球保護(hù)。阻斷大腦中動(dòng)脈后，用小塊肌肉組織輕敷于顱窗上，達(dá)到止血作用，縫合傷口，術(shù)后回籠飼養(yǎng)。以上過(guò)程均在室溫恒定情況下進(jìn)行，以利于評(píng)價(jià)腦缺血程度。
術(shù)后24小時(shí)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分采用單盲法，評(píng)分方法為(1)提鼠尾離開(kāi)地面約1尺，觀察前肢情況。正常大鼠兩前肢對(duì)稱(chēng)地伸向地面。如果有左肩內(nèi)旋，左前肢內(nèi)收現(xiàn)象發(fā)生者，評(píng)分為4分，否則為0分。(2)將動(dòng)物置平滑地板上分別推左(或右)肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查抵抗推動(dòng)的阻力。正常大鼠雙側(cè)阻力明顯且對(duì)稱(chēng)。如果推右肩向左側(cè)移動(dòng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)阻力下降者，根據(jù)下降程度的不同，評(píng)分為1-3分。(3)將動(dòng)物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察兩前肢的肌張力。正常大鼠兩前肢張力明顯且對(duì)稱(chēng)。而發(fā)生左前肢張力下降者，根據(jù)下降程度的輕重評(píng)為0-3分。根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)打分，滿(mǎn)分10分。評(píng)分后，斷頭取腦，將大腦平均冠狀分為5片，放于TTC溶液中，37℃溫育10～15min染色。梗死區(qū)不著色，正常腦組織染成紅色。用生理鹽水沖洗后數(shù)碼照相，將照片存入電腦后計(jì)算梗死區(qū)截面積和全腦截面積，求出梗死面積百分比。
所有的數(shù)據(jù)均用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用t檢驗(yàn)。
1.8實(shí)驗(yàn)結(jié)果 如表1所示 表1、鳳尾草總黃酮對(duì)局部永久性腦缺血大鼠組織學(xué)和行為學(xué)影響(

) *P＜0.05，**P＜0.01與陰性對(duì)照組比較 可見(jiàn)，總黃酮不同劑量組與陰性組相比能明顯改善局部性腦缺血大鼠的行為學(xué)缺陷評(píng)分，降低腦壞死百分率，且效應(yīng)與劑量呈明顯的正相關(guān)，與陰性對(duì)照組有非常顯著性差異(p＜0.01)。
1.9結(jié)論 通過(guò)大鼠體內(nèi)試驗(yàn)，證明口服鳳尾草總黃酮5及10mg/kg對(duì)腦缺血性疾病有明顯治療作用。
效果實(shí)施例2鳳尾草總黃酮對(duì)大鼠全腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用 2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司)，雄性，250～300克，飼養(yǎng)于恒溫凈化通風(fēng)動(dòng)物房，自由進(jìn)食與飲水，25±2℃。
2.2受試樣品將實(shí)施例1制得的總黃酮用0.5％的西黃蓍膠配制成終濃度為0.5mg/ml和1mg/ml的混懸液(以總黃酮計(jì))。
2.3陽(yáng)性對(duì)照樣品尼莫地平(鄭州瑞康制藥廠，批號(hào)20030106)；用0.5％的西黃蓍膠配制成終濃度為0.5mg/ml的混懸液。
2.4其它試劑 水合三氯乙醛(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)20030227)； 2.5實(shí)驗(yàn)儀器 NS-30射頻雙極凝固器(上海市檢測(cè)技術(shù)所檢測(cè)儀器廠)； SXP-1B手術(shù)顯微鏡(上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠生產(chǎn))。
2.6動(dòng)物分組 隨機(jī)分為4組，每組8只。
第1組陰性對(duì)照組 西黃蓍膠 第2組總黃酮低劑量5mg/kg 第3組總黃酮高劑量10mg/kg 第4組陽(yáng)性藥尼莫地平 5mg/kg 2.7實(shí)驗(yàn)方法 取健康雄性SD大鼠，體重250-300g，共32只，隨機(jī)分成4組，分別為陰性對(duì)照組(西黃蓍膠1ml/100g)、陽(yáng)性藥尼莫地平組(5mg/kg)及鳳尾草總黃酮低、高劑量組(5、10mg/kg)。于缺血前30分鐘灌胃給藥，給藥體積為1ml/100g，陰性對(duì)照組給同等體積的0.5％的西黃蓍膠，陽(yáng)性對(duì)照組尼莫地平，給藥體積為1ml/100g。
2.8腦缺血及再灌流動(dòng)物模型制作及觀察指標(biāo) 將動(dòng)物用12％的水合三氯乙醛腹腔麻醉(350mg/kg)，在枕后暴露第一頸椎橫突孔，用雙極電凝對(duì)準(zhǔn)橫突孔電灼凝固雙側(cè)椎動(dòng)脈。然后在頸部作一切口暴露雙側(cè)頸動(dòng)脈，分離后，用1號(hào)絲線(xiàn)穿好，縫合傷口。于術(shù)后24小時(shí)，大鼠清醒時(shí)，用帶硅膠管的動(dòng)脈夾將雙側(cè)頸動(dòng)脈夾閉，即造成4根動(dòng)脈閉塞全腦缺血，取出動(dòng)脈夾可使血流再通，為再灌流期。該實(shí)驗(yàn)缺血與再灌時(shí)間均為1小時(shí)。再灌完畢，立即斷頭取腦，于電子天平上稱(chēng)濕重，將大腦置于恒溫干燥箱內(nèi)烘干至恒重(每天稱(chēng)一次，直至連續(xù)兩次重量之差小于1％)，求出各組的腦含水率。

其他觀察指標(biāo)為缺血后腦電圖消失時(shí)間、再灌后腦電圖恢復(fù)時(shí)間及翻正反射恢復(fù)時(shí)間(斷頭前測(cè))。
2.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有的數(shù)據(jù)均用

表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用t檢驗(yàn)。
2.10實(shí)驗(yàn)結(jié)果 如表2、表3所示 表2、總黃酮注射液對(duì)全腦缺血再灌注大鼠腦電和行為學(xué)影響(

) *P＜0.05，**P＜0.01與陰性對(duì)照組比較 表3、總黃酮注射液對(duì)全腦缺血再灌注大鼠腦組織含水率的影響(

) *P＜0.05，**P＜0.01與陰性對(duì)照組比較； 試驗(yàn)結(jié)果表明鳳尾草總黃酮不同劑量組與陰性組相比能使全腦缺血再灌注大鼠缺血后腦電圖消失時(shí)間延長(zhǎng)，灌注后腦電圖恢復(fù)時(shí)間和翻正反射恢復(fù)時(shí)間明顯縮短，腦水腫明顯減輕，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著或極顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，且劑量與效應(yīng)呈明顯正相關(guān)。
2.11、結(jié)論 通過(guò)大鼠體內(nèi)試驗(yàn)，證明口服鳳尾草總黃酮5及10mg/kg對(duì)全腦缺血性疾病有明顯治療作用。
效果實(shí)施例3鳳尾草總黃酮對(duì)異丙腎上腺素(ISO)所至大鼠心肌缺血治療作用的研究 3.1、供試樣品將實(shí)施例1制得的總黃酮用用0.5％的西黃蓍膠配制成終濃度為0.5mg/ml和1mg/ml的混懸液(以總黃酮計(jì))。
3.2、其他藥品水合氯醛中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，AR，批號(hào)20030227，用雙蒸水配成12％的溶液；異丙腎上腺素臨用前用生理鹽水配成8mg/ml的溶液；乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060311)。
3.3、試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司)，雌性，180-220克，動(dòng)物飼養(yǎng)于正壓凈化通風(fēng)動(dòng)物房?jī)?nèi)，室溫25±2℃，自由進(jìn)食與飲水。
3.4、儀器ECG-6511型心電圖機(jī)(日本NIHON-KOHDEN生產(chǎn))。
3.5、劑量設(shè)置總黃酮本試驗(yàn)采用5、10mg/kg 2個(gè)劑量。
3.6、實(shí)驗(yàn)方法 健康雌性SD大鼠32只，隨機(jī)分為4組，每組8只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和鳳尾草總黃酮5、10mg/kg 2個(gè)劑量組。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組分別預(yù)先口服灌胃給予0.5％的西黃蓍膠(同給藥組等體積)，總黃酮各劑量組分別口服灌胃給藥，每日1次，體積為10ml/kg體重，連續(xù)給藥三天。模型對(duì)照組和總黃酮各劑量組第二天和第三天給藥1h后給予ISO(0.1ml/100g體重，s.c.)，正常對(duì)照組給予等容量的生理鹽水(s.c.)，分別記錄最后一次給受試藥物前及第2次注射ISO后30min的心電圖(標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián))，測(cè)量J點(diǎn)值，計(jì)算注射ISO后各組大鼠J點(diǎn)位移的絕對(duì)值。大鼠腹主動(dòng)脈采血，肝素抗凝后離心分離血漿，分光光度法測(cè)定血漿中LDH活性單位。各給藥組統(tǒng)計(jì)結(jié)果和模型組比較進(jìn)行t-檢驗(yàn)。乳酸脫氫酶計(jì)算公式如下

3.7、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 各組對(duì)ISO致大鼠心肌缺血II導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)位移變化見(jiàn)表4。各組對(duì)ISO致大鼠心肌缺血LDH活性單位變化見(jiàn)表5。
表4、總黃酮對(duì)ISO所致大鼠心肌缺血J點(diǎn)位移的影響(n＝8，

) *p＜0.05，**p＜0.01，與模型對(duì)照組比較 △p＜0.05，△△p＜0.01，與正常對(duì)照組比較 表5、鳳尾草總黃酮對(duì)ISO大鼠s.c.后LDH活性單位的影響(

n＝8) *p＜0.05，**p＜0.01，與模型對(duì)照組比較 △p＜0.05，△△p＜0.01，與正常對(duì)照組比較 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在大鼠皮下注射(s.c.)ISO后，模型組動(dòng)物出現(xiàn)J點(diǎn)位移增大，血漿中LDH活力單位增加的顯著性心肌缺血改變?？傸S酮5mg/kg和10mg/kg口服給藥可以顯著性降低J點(diǎn)位移和血漿中LDH水平，與模型組比較有顯著性差異(p＜0.05)，且總黃酮各劑量組均呈現(xiàn)抗心肌缺血作用，劑量與效應(yīng)呈正相關(guān)。
3.8、結(jié)論 鳳尾草總黃酮5～10mg/kg對(duì)ISO引起的大鼠心肌缺血有顯著的抑制作用，并可減輕缺血心肌的損傷，因此對(duì)心肌有明顯的缺血保護(hù)作用。
效果實(shí)施例4鳳尾草總黃酮對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎所致急性心肌缺血的保護(hù)作用 4.1、供試樣品將實(shí)施例1制得的總黃酮用0.5％的西黃蓍膠配制成終濃度為0.5mg/ml和1mg/ml混懸液(以總黃酮計(jì))。
4.2、對(duì)照樣品硝苯地平(上海市第十七制藥廠，批號(hào)051118)，用0.5％西黃蓍膠溶液研磨，配成濃度為1.5mg/ml混懸液。
4.3、其他藥品水合氯醛中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，AR，批號(hào)20030227，用雙蒸水配成12％的溶液；氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)(上海前進(jìn)化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)20040702，250mg×1瓶)，用前用生理鹽水配制成0.1％的新鮮溶液。乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20060411)。
4.4、試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠(上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司)，雌雄各半，190-210克，動(dòng)物飼養(yǎng)于正壓凈化通風(fēng)動(dòng)物房?jī)?nèi)，室溫25±2℃，自由進(jìn)食與飲水。
4.5、儀器ECG-6511型心電圖機(jī)(日本NIHON-KOHDEN生產(chǎn))；722型數(shù)顯分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)。
4.6、劑量設(shè)置總黃酮本試驗(yàn)采用5、10mg/kg 2個(gè)劑量，陽(yáng)性對(duì)照藥為硝苯地平，劑量為15mg/kg。
4.7、實(shí)驗(yàn)方法 取體重200左右的健康SD大鼠40只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成4組模型對(duì)照組(西黃蓍膠10ml/kg)，硝苯地平組(15mg/kg)，鳳尾草總黃酮5mg/kg及鳳尾草總黃酮10mg/kg。所有樣品經(jīng)口服灌胃給藥，給藥體積為10ml/kg，每天1次，連續(xù)2d。
于末次給藥后1h，腹腔注射12％水合氯醛3ml/kg進(jìn)行麻醉，記錄正常心電圖，胸部去毛、消毒，沿左鎖骨中線(xiàn)縱行切開(kāi)皮膚約2cm，在第4或第5肋間鈍性分離肌層，打開(kāi)胸腔，剪開(kāi)心包，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟，在右側(cè)圓錐與左心耳之間冠狀靜脈處結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈后，把心臟放回胸腔，充分排出胸腔內(nèi)空氣，縫合關(guān)閉胸腔，呼吸機(jī)輔助呼吸，頻率20次/分，潮氣量5ml。結(jié)扎后即刻、1h、24h、48h分別描記一段心電圖，并于24h、48h分別口服灌胃鳳尾草總黃酮低、高劑量及西黃蓍膠，藥量同前。
在冠脈結(jié)扎48h后，大鼠再次麻醉，腹主動(dòng)脈采血，肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)離心10min后采血漿，測(cè)定LDH，并于取血后迅速取出心臟，用生理鹽水沖洗，除去血污，剔除血管、脂肪等非心肌組織，用吸水紙吸去水分，稱(chēng)全心濕重。沿冠狀溝切除心房，留下心室，稱(chēng)重，順?lè)渴覝蠌男募獾叫幕科叫袑⑿氖壹M切成厚約0.1cm的心肌片4片，用生理鹽水沖洗干凈，將心肌片放在0.1％的N-BT溶液中，在37℃水浴條件下染色15min，染色后立即用水沖洗去多余的染料。梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)被N-BT溶液染成藍(lán)色。剪去梗死心肌，稱(chēng)濕重，以梗死區(qū)濕重占全心濕重的百分比表示心肌梗死面積百分比。心電圖統(tǒng)計(jì)各時(shí)間點(diǎn)的J點(diǎn)位移絕對(duì)值，并計(jì)算結(jié)扎后J點(diǎn)位移變化的相對(duì)值。
各給藥組統(tǒng)計(jì)結(jié)果和模型組比較進(jìn)行t-檢驗(yàn)。J點(diǎn)位移為給藥各組結(jié)扎后變化值與模型組同時(shí)間點(diǎn)變化值進(jìn)行t檢驗(yàn)。
4.8、試驗(yàn)結(jié)果 鳳尾草總黃酮對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血心電圖J點(diǎn)位移的影響見(jiàn)表6。鳳尾草總黃酮對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血LDH活性單位變化的影響見(jiàn)表7。鳳尾草總黃酮對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠心肌缺血梗死面積百分比的影響見(jiàn)表8。
表6、總黃酮對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血模型J點(diǎn)位移的影響(


n＝10) *p＜0.05，**p＜0.01，與模型對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)變化值比較 表7、鳳尾草總黃酮對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血模型LDH活性單位的影響(

n＝10) *p＜0.05，**p＜0.01，與模型對(duì)照組比較 表8、鳳尾草總黃酮對(duì)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血梗死面積百分比的影響(

n＝10) *p＜0.05，**p＜0.01，與模型對(duì)照組比較 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠行冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)后J點(diǎn)位移迅速升高并且在結(jié)扎后1小時(shí)達(dá)到高峰，結(jié)扎48小時(shí)后模型組動(dòng)物血漿中LDH活性非常顯著性上升，心肌缺血面積也顯著增加。
陽(yáng)性藥硝苯地平組可以使結(jié)扎后即刻以及結(jié)扎后1小時(shí)的J點(diǎn)位移非常顯著性降低(P＜0.01)，24小時(shí)的J點(diǎn)位移顯著性降低(P＜0.05)。LDH活性非常顯著性降低(P＜0.01)，心肌梗死面積百分比非常顯著性降低(P＜0.01)。
鳳尾草總黃酮5mg/kg口服給藥可以使冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后1小時(shí)的J點(diǎn)位移非常顯著性降低(P＜0.01)，即刻及24小時(shí)的J點(diǎn)位移顯著性降低(P＜0.05)；LDH活性非常顯著性降低(P＜0.01)，心肌梗死面積百分比顯著性降低(P＜0.05)。
鳳尾草總黃酮10mg/kg口服給藥可以使冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后即刻和1小時(shí)的J點(diǎn)位移非常顯著性降低(P＜0.01)，24小時(shí)的J點(diǎn)位移顯著性降低(P＜0.05)；LDH活性非常顯著性降低(P＜0.01)，心肌梗死面積百分比非常顯著性降低(P＜0.01)。
4.9結(jié)論 鳳尾草總黃酮5-10mg/kg口服給藥對(duì)冠脈結(jié)扎引起的大鼠心肌缺血有明顯的保護(hù)作用，可以非常顯著的降低心肌缺血引起的組織壞死，對(duì)缺血組織有明顯的保護(hù)作用。
5、結(jié)論 從上述效果實(shí)施例可見(jiàn)，鳳尾草總黃酮在防治缺血性疾病，特別是心、腦缺血性疾病方面具有良好的效果，可制備成應(yīng)用于此方面的新藥。
權(quán)利要求
1、鳳尾草總黃酮在制備防治缺血性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2、如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述缺血性疾病為心和/或腦血管缺血性疾病。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鳳尾草總黃酮在制備防治缺血性疾病，特別是心、腦血管缺血性疾病的藥物中的新應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101091728SQ20061002792
公開(kāi)日2007年12月26日 申請(qǐng)日期2006年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月21日
發(fā)明者夏玉葉, 閔旸, 鐘雁, 盛雨辰, 郭美麗 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院