專利名稱：腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療實(shí)體瘤中作為增效劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及腫瘤細(xì)胞核單抗的新用途，更具體地說涉及腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療各種實(shí)體瘤中作為增效劑的新用途。
背景技術(shù)：
(一)腫瘤的分子靶向治療1、概述腫瘤的分子靶向治療是近年來最具活力、倍受關(guān)注的領(lǐng)域，是根本意義上的腫瘤特異性治療手段，其技術(shù)核心是靶向分子，人們可以選擇任一種殺瘤物質(zhì)與靶向分子結(jié)合。理想的靶向分子應(yīng)具有以下特點(diǎn)①高特異的靶抗原結(jié)合性；②在適當(dāng)?shù)姆肿恿糠秶?，以便于靶向分子在瘤組織內(nèi)通透；③與靶分子結(jié)合時，呈高親合力；④分子結(jié)構(gòu)有利用于穩(wěn)定，減少清除；⑤與治療對象有生物同源性，能最大限度地避免宿主的異種蛋白反應(yīng)等。從目前的研究情況看，抗體是最佳靶向分子，抗腫瘤抗體的有效性取決于靶抗原的特異性與表達(dá)狀態(tài)，而腫瘤特異性抗原、高表達(dá)膜抗原在腫瘤中卻甚為少見，尋找新的瘤細(xì)胞特異的表面分子作為靶點(diǎn)是非常困難的，也是非常有限的，這恰恰是分子靶向治療的瓶頸所在。此外，作為臨床治療用抗體，人源抗體自然是最佳選擇，鼠源抗體的人源化還是一項比較繁雜的技術(shù)，但全人源抗體的制備相對于鼠源抗體而言有更大的難度和更高的技術(shù)要求。
腫瘤細(xì)胞核單抗治療(簡稱TNT)是分子靶向治療的重要方法之一，其技術(shù)核心利用細(xì)胞核組分作為抗原，制備特異性抗體以治療各種實(shí)體瘤。
2、TNT的基本原理早在50多年前，人們就發(fā)現(xiàn)相對于正常細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)極高的增殖特征，并伴有異常分化和中心部位的壞死；同時，腫瘤組織內(nèi)的微血管也因快速增長和瘤細(xì)胞某些分泌成分的作用，呈現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能上存在的滲漏缺陷(Leaky)，這種缺陷原本是有利于瘤組織的血流和營養(yǎng)灌輸?shù)?，但這一“Leaky”特征也為靶向分子的通透與靶點(diǎn)結(jié)合提供了條件(Dvorak HF，Nagy JA，Dvorak JT，et alIdentification and characterization of the bloodvessels of solid tumors that are leaky to circulating macromolecules.Am J Pathol 1988，13395-109)。利用腫瘤組織的微血管和細(xì)胞膜的“Leaky”特點(diǎn)，應(yīng)用能與細(xì)胞內(nèi)核抗原成份結(jié)合的靶向分子攜帶殺瘤物質(zhì)，滯留或定位于腫瘤組織內(nèi)，造成腫瘤的特異性殺傷。這些靶向分子主要是抗細(xì)胞核內(nèi)某些組份的抗體，殺傷腫瘤物質(zhì)為核素、生物酶、前體藥物或某些抗瘤細(xì)胞因子等。瘤細(xì)胞被殺傷壞死后釋出的細(xì)胞核內(nèi)組分又可成為新的靶向分子造成對腫瘤組織的進(jìn)一步的殺傷，如此使殺瘤范圍不斷循環(huán)擴(kuò)大，直至徹底清除腫瘤細(xì)胞。鑒于TNT靶向分子在正常組織中的高清除、低滯留，因而在達(dá)到較好殺瘤效果的同時，對周圍正常組織的損傷卻很小。
因此，TNT雖然屬分子靶向治療，但與其他分子靶向治療有根本的不同，基點(diǎn)是其針對的靶點(diǎn)是細(xì)胞核的成分，這些成分本身是無腫瘤特異性，但由于其在細(xì)胞內(nèi)，非靶向分子常規(guī)可及之處。而瘤組織的毛細(xì)血管和瘤細(xì)胞膜具有較高的通透特性(Sharifi J，KhawliLA，Hu P，King S，Epstein AL.Characterization of a phage display-derived human monoclonalantibody(NHS76)counterpart to chimeric TNT-1 directed against necrotic regions of solidtumors.Hybrid Hybridomics.2001；20(5-6)305-12)，對腫瘤細(xì)胞而言，核內(nèi)成分抗原就成了瘤細(xì)胞的特異性靶分子。從理論上講，TNT靶向分子可適用于包括實(shí)體瘤在內(nèi)的各種腫瘤，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，TNT制劑確有治療上的廣譜性，為腫瘤的特異治療提供了一條可行、有效的新思路、新途徑。
3、靶向分子是TNT技術(shù)的關(guān)鍵所在目前已有眾多報道充分肯定了TNT的治療效果(Mizokami MM，Hu P，Khawli LA，Li J，Epstein AL.Chimeric TNT-3 antibody/murine interferon-gamma fusion protein for theimmunotherapy of solid malignancies.Hybrid Hybridomics.2003；22(4)197-207和Li J，Hu P，Khawli LA，Epstein AL.Complete regression of experimental solid tumors by combinationLEC/chTNT-3 immunotherapy and CD25(+)T-cell depletion.Cancer Res.2003 Dec 1；63(23)8384-92)，Peregrine制備的chTNT-3已與多種殺瘤物質(zhì)偶聯(lián)，在肺癌、結(jié)腸癌、等做到了I、II期臨床并取得了極佳效果(Jack Gaddy.Innovative administration of radiolabeled TNTsuccessfully treats inoperative lung cancer.2002，619.49th Annual Meeting of NuclearMedicine.http://www.peregrineinc.com/prelease.asp？id＝6190271436和Jack Gaddy.CHINESEREPORT SUCCESS IN TREATING 8 BRAIN CANCERS WITH TNT.BIOWORLD Today，ByDavid N.Leff，Science Editor 5/20/1997)。而且，該公司正與Oakwood和Biopharm等諸家公司合作，將TNT治療向更廣泛的領(lǐng)域推進(jìn)。
(二)腫瘤細(xì)胞核單抗(簡稱chTNT-MAb)1、chTNT的進(jìn)展1988年美國南加州大學(xué)病理部Dr.Alan L.Epstein提出一種嶄新的觀點(diǎn)，即用以腫瘤細(xì)胞核特異性的單抗為靶向載體，將該抗體攜帶的放射性核素或其它細(xì)胞毒性藥物送到實(shí)體瘤的壞死核心，由內(nèi)到外摧毀腫瘤。此理論經(jīng)過大量的體內(nèi)體外動物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)得到證實(shí)，并已于1991年5月獲得美國專利(專利號5019368)。在此基礎(chǔ)上，于1992年11月開始試制人鼠嵌合型的腫瘤細(xì)胞核單抗(腫瘤細(xì)胞核單抗，簡稱chTNT-MAb)。
目前臨床上治療和診斷用的大部分單抗都是鼠源性抗體，鼠源性抗體作為外源性大分子蛋白質(zhì)，在反復(fù)使用時，常會誘導(dǎo)人抗鼠抗體(簡稱HAMA)的產(chǎn)生，以此異源性單抗體內(nèi)應(yīng)用易于導(dǎo)致HAMA的產(chǎn)生。當(dāng)患者再次接受單抗時，抗體將會被HAMA中和而失去活性，從而影響診斷的準(zhǔn)確性和降低臨床療效，還可能導(dǎo)致過敏等毒副反應(yīng)的發(fā)生。
為了降低抗體的免疫原性并改善其功能，人們利用基因工程技術(shù)的原理，根據(jù)不同的需要可以制備各種特異性的基因工程抗體。基因工程抗體是用人抗體的部分氨基酸序列代替某些鼠源性抗體的氨基酸序列，保留其結(jié)合抗原的特異性部位，經(jīng)修飾而成。著眼點(diǎn)在于盡量減少抗體中的鼠源成分同時又盡量保留原有的抗體特異性。基因工程抗體可以獲得從最小的抗原結(jié)合位點(diǎn)(簡稱Fv)到較大的F(ab’)2片段，甚至完整的抗體分子?；蚬こ炭贵w經(jīng)改造后可以具有更佳的生物學(xué)活性，免疫原性大大降低，且對各種水解酶的抵抗力增強(qiáng)?；蚬こ炭贵w主要包括嵌合抗體、人源化抗體、全人抗體、雙價抗體、雙特異性抗體等。腫瘤細(xì)胞核單抗chTNT-MAb是一種嵌合抗體，嵌合抗體又稱鼠人嵌合抗體或者人鼠嵌合抗體，是將鼠源性抗體的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而成的抗體，主要是減輕鼠源性抗體誘發(fā)的免疫應(yīng)答反應(yīng)。建立嵌合抗體要先建立分泌鼠源性特異性單抗的雜交瘤，然后從小鼠雜交瘤細(xì)胞中克隆可變區(qū)基因，再根據(jù)需要克隆人抗體的恒定區(qū)基因，將小鼠可變區(qū)基因與人恒定區(qū)基因連接成嵌合基因后插入載體中，最后在真核系統(tǒng)或原核系統(tǒng)表達(dá)嵌合抗體分子。
近年來，單抗的應(yīng)用越來越多，并且取得了一定的診斷價值和有效的治療作用。但是目前批準(zhǔn)使用的治療用單抗大多仍為鼠源性，以此異源性單抗體內(nèi)應(yīng)用易于導(dǎo)致HAMA的產(chǎn)生。當(dāng)患者再次接受單抗時，抗體將會被HAMA中和而失去活性，從而影響診斷的準(zhǔn)確性和降低臨床療效，還可能導(dǎo)致過敏等毒副反應(yīng)的發(fā)生。
經(jīng)申請人上海美恩生物技術(shù)有限公司改造后，嵌合型的chTNT-MAb的免疫原性大大下降，在國內(nèi)進(jìn)行的近200例臨床研究中，無一例發(fā)生HAMA和HACA反應(yīng)。
2、治療原理結(jié)合腫瘤細(xì)胞核的單抗(腫瘤細(xì)胞核單抗)提供了一種治療實(shí)體瘤的新方法。它是抗不溶性、非擴(kuò)散性的壞死細(xì)胞的細(xì)胞核的單抗，靶向于腫瘤變性細(xì)胞，到達(dá)腫瘤壞死部位；同時，與腫瘤細(xì)胞核單抗結(jié)合的腫瘤細(xì)胞殺傷物質(zhì)(如放射性核素)對壞死區(qū)邊緣的腫瘤活細(xì)胞進(jìn)行殺傷，造成新的壞死，接著腫瘤細(xì)胞核單抗擴(kuò)展到新的壞死區(qū)，周而復(fù)始使腫瘤壞死區(qū)不斷擴(kuò)大，由內(nèi)向外摧毀腫瘤，達(dá)到治療目的。
癌細(xì)胞和正常細(xì)胞之間存在明顯的差異。在不同階段的細(xì)胞變化周期中，癌細(xì)胞變性和細(xì)胞死亡占據(jù)很高的比例，同時胞膜完整性喪失，細(xì)胞膜表面滲透性異常。而健康細(xì)胞只有很少細(xì)胞以很慢的速度壞死，且壞死的組織會快速有序地被組織清除，它們在死亡過程中只有核碎裂，沒有反常的膜滲透。以往的針對腫瘤的治療均集中在殺死活的癌細(xì)胞，忽視了變性壞死細(xì)胞。經(jīng)過測算發(fā)現(xiàn)，與正常組織不同，50％左右的腫瘤細(xì)胞在分裂后很快出現(xiàn)變性。由于腫瘤中血供不足及巨噬細(xì)胞反應(yīng)不正常，使變形細(xì)胞越來越多，形成大片壞死，這是惡性腫瘤的典型特征。
如圖1所示由于惡性腫瘤具有壞死區(qū)，同時變性或壞死的細(xì)胞有膜滲透性，腫瘤細(xì)胞核單抗TNT可穿過腫瘤細(xì)胞膜，到達(dá)壞死區(qū)與核內(nèi)抗原結(jié)合。對放射性碘131標(biāo)記chTNT-MAb作藥效、藥代動力學(xué)、免疫組織和生物分布研究，發(fā)現(xiàn)該抗體能和所有具有壞死組織的惡性實(shí)體瘤結(jié)合。
(三)放射免疫治療(簡稱RIT)放射免疫治療(radioimmunotherapy，簡稱RIT)是放射療法的一種，其具體定義為體外進(jìn)行直接放射性核素標(biāo)記或采用螯合劑標(biāo)記的方法對腫瘤相關(guān)或特異性抗體進(jìn)行標(biāo)記，得到標(biāo)記抗體，將其經(jīng)一定途徑引入體內(nèi)，與相關(guān)腫瘤細(xì)胞的特異性抗原發(fā)生特異結(jié)合，利用抗體所攜帶的核素放射出的核射線，產(chǎn)生電離輻射生物效應(yīng)，作用于腫瘤局部并殺傷腫瘤細(xì)胞直至死亡。
如針對惡性肝臟實(shí)體瘤的RIT治療就是以放射性核素為“彈頭”，將針對肝癌腫瘤特異性抗原的單抗作為“載體”，通過特定的標(biāo)記方法使兩者結(jié)合，由于載體的親腫瘤性，彈頭可濃集于腫瘤內(nèi)，從而發(fā)揮穩(wěn)定的殺傷作用。已有的文獻(xiàn)報道經(jīng)放射性核素碘131標(biāo)記的腫瘤相關(guān)或特異性抗體如抗AFP單抗、抗鐵蛋白抗體，抗人肝細(xì)胞株單抗和抗人肝癌細(xì)胞膜單抗等都已被證明對肝癌患者有明顯的緩解作用，給肝臟惡性實(shí)體瘤(特別是晚期肝癌)患者提供了更多的治療選擇和生存希望。
RIT進(jìn)行腫瘤治療具有靶向性強(qiáng)、腫瘤/本底比值較高和血本底低等優(yōu)勢，但是傳統(tǒng)的鼠源抗體存在人抗鼠抗體(簡稱HAMA)反應(yīng)和腫瘤對抗體攝取率低等局限性，影響了藥物的臨床使用效果。目前采用基因工程技術(shù)改造鼠類抗體使之“人源化”或者“全人化”，這種重組型抗體鼠源蛋白含量很低甚至不含鼠源蛋白，分子量小，進(jìn)入腫瘤組織穿透力強(qiáng)，同時具有高特異性及高親和力，大大提高了治療的效果。
放射性碘131等核素標(biāo)記chTNT-MAb進(jìn)行腫瘤治療臨床上屬于腫瘤放射性免疫治療。
(四)物理治療實(shí)體瘤的研究進(jìn)展1、物理治療腫瘤的概況物理療法主要是指利用電、光、熱、冷、超聲、射頻、微波等各種物理手段都用于疾病的治療和診斷。主要包括放射療法、冷凍療法、氬氦刀靶向療法、微波療法、高效聚焦超聲療法、電化學(xué)療法、激光療法、射頻熱凝療法、電穿孔療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、局部乙酸注射療法、動脈栓塞療法、賽博刀療法等。
采用物理學(xué)方法治療腫瘤古已有之。古埃及的紙草文字中，曾有用燒灼法治療“乳腺隆起腫塊”的記載；中國民間用加熱的金屬器物燙灼“乳巖”、“乳癖”也已流傳千年。腫瘤的近代物理治療則應(yīng)始自1898年居里夫人發(fā)現(xiàn)鐳的放射性，并將之用于照射惡性腫瘤(皮膚癌、宮頸癌、淋巴瘤等)以達(dá)到治療的目的。百余年來，放射治療迅速發(fā)展，在腫瘤的物理治療中一統(tǒng)江山，成為腫瘤治療中公認(rèn)的三大柱石(手術(shù)、化療、放療)之一，乃至放射治療幾乎成了腫瘤物理治療的代名詞。
近20余年來，隨著分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)工程學(xué)以及信息工程學(xué)的發(fā)展，在腫瘤綜合治療理念被普遍接受的大環(huán)境中，各種物理治療手段越來越多地滲透到腫瘤治療領(lǐng)域。除放射治療繼續(xù)取得長足進(jìn)步外，電、光、熱、冷、超聲、射頻、微波等各種物理手段都用于癌癥的治療，且各有建樹，發(fā)表的論文逐年遞增，新的治療儀器不斷出現(xiàn)。
一方面，面對腫瘤患者特別是許多中晚期腫瘤患者的嚴(yán)峻預(yù)后，大家深感治療手段的單薄和人類在現(xiàn)階段對癌癥的無奈；另一方面，又經(jīng)常看到有的患者由于被濫用于某些不成熟、不科學(xué)乃至屬偽科學(xué)的所謂“新技術(shù)”而增加痛苦、延誤病情，因此物理治療技術(shù)的飛速發(fā)展為腫瘤病人提供了新的生存機(jī)會和希望。本發(fā)明所涉及到的多項物理治療技術(shù)，有的已廣泛應(yīng)用于臨床，療效已獲得肯定，并成為腫瘤規(guī)范治療的一部分。還有的技術(shù)雖已趨成熟，但因剛剛獲準(zhǔn)用于臨床，尚需廣大腫瘤工作者繼續(xù)積累經(jīng)驗(yàn)，使其不斷發(fā)展。少數(shù)技術(shù)則處于試驗(yàn)階段，雖有明確應(yīng)用前景，但還未獲準(zhǔn)進(jìn)入臨床。還有一些尚在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處于萌芽狀態(tài)，應(yīng)用前景不明確的理念性的新技術(shù)。
2、物理治療實(shí)體瘤的各種常用方法(1)冷凍治療液氮是目前冷凍外科中應(yīng)用最廣的冷凍劑(-196℃)，具有降溫低，安全和來源廣的特點(diǎn)。其它包括氧化亞氮(-40℃)、氟里昂(-40℃)和高壓氧氣(-70℃)等。
治療原理①細(xì)胞內(nèi)冰晶形成和冰晶的機(jī)械損傷?？焖倮鋬鰰r，細(xì)胞死亡主要與細(xì)胞內(nèi)冰晶形成有關(guān)。同時，細(xì)胞外冰晶形成，體積膨脹，相互擠壓，使細(xì)胞變形和損傷。冷凍后的融化，特別是緩慢自然融化，使細(xì)胞內(nèi)的小冰晶聚集成大冰晶，促使細(xì)胞破壞。②細(xì)胞脫水和皺縮。當(dāng)組織緩慢冷凍至0℃以下，首先是細(xì)胞間隙出現(xiàn)冰晶，細(xì)胞外液逐漸濃縮，引起細(xì)胞內(nèi)、外滲透壓差異，細(xì)胞內(nèi)液外滲而致細(xì)胞脫水和皺縮。細(xì)胞脫水，尤其是結(jié)合水減少，將改變蛋白質(zhì)的理化性能，產(chǎn)生聚合作用。③細(xì)胞電解質(zhì)毒性濃縮和pH值改變。細(xì)胞脫水、皺縮，使電解質(zhì)濃度升高，酶的活力亦受冷凍干擾，這些因素促使細(xì)胞中毒和損傷。冷凍時細(xì)胞pH值降低，偏酸性，加劇了蛋白質(zhì)變性。④細(xì)胞膜指蛋白成分變性。細(xì)胞膜是由各種類脂蛋白復(fù)合體組成，這些類脂蛋白復(fù)合體之間以弱鍵連結(jié)，極不穩(wěn)定，冷凍能引起脂蛋白變性，細(xì)胞膜破裂。⑤血流淤積和微血栓形成。對活體組織的冷凍，還可引起小血管收縮；待融化時，小血管擴(kuò)張，滲透性增加，血流緩慢淤積。同時，冷凍時毛細(xì)血管迅速栓塞，微循環(huán)停止，導(dǎo)致局部缺血。這是細(xì)胞死亡的又一原因。
目前用以治療腫瘤的冷凍設(shè)備一般有以下幾種①液氮冷凍機(jī)。利用液態(tài)氮吸熱變成氣態(tài)的一種相變致冷方法。液氮是無色、無臭、無毒的透明液體，具有降溫低、不燃以及來源豐富等優(yōu)點(diǎn)。常用的液氮冷凍機(jī)有兩種類型，一是“灌注式”，將液氮直接灌入冷凍頭進(jìn)行治療，具有結(jié)構(gòu)簡單、成本低和使用方便等特點(diǎn)；另一是“噴射式”，這是一種可直接噴射液氮，或裝上不同類型的冷凍頭進(jìn)行治療的兩用手術(shù)器，它具有降溫快和冷量大的特點(diǎn)，冷凍頭濕度一般可達(dá)-180℃。②高壓氧氣“冷刀”。利用節(jié)流效應(yīng)，即高壓氣體通過一個小孔后降壓膨脹，使溫度急劇下降的原理，在“冷刀”內(nèi)裝一只節(jié)流效應(yīng)微型制冷器，一般可達(dá)-70℃。其優(yōu)點(diǎn)系一般醫(yī)療機(jī)構(gòu)均備有氧氣，不需另添設(shè)備和冷源；另外“冷刀”結(jié)構(gòu)簡單，操作方便。但降溫及冷量不及液氮冷凍機(jī)。③熱電制冷，也稱半導(dǎo)體制冷或溫差電制冷。由兩種不同的導(dǎo)體或半導(dǎo)體焊接后，當(dāng)該點(diǎn)的溫度有變化時，即可產(chǎn)生電流，此即溫差電現(xiàn)象。利用直流電通過兩個不同導(dǎo)體或半導(dǎo)體組成的閉合回路中，此兩不同接點(diǎn)之間即可產(chǎn)生溫差，即Peltier效應(yīng)。據(jù)此原理，利用碲鉍合金(Te3，Bi2)等組成溫差電結(jié)，可以制冷。單級可達(dá)-30～-20℃，二級串聯(lián)可達(dá)-38℃，三級串聯(lián)可達(dá)-123℃。該法目前已用于冰凍組織切片、小血管瘤等治療中。
目前常用的冷凍方法大致有5種，①接觸冷凍。冷凍頭置于腫瘤表面輕輕加壓冷凍，產(chǎn)生離心性冷凍。其冷凍深度相當(dāng)于表面冷凍范圍的半徑。②插入冷凍。將針形冷凍頭插入腫瘤內(nèi)，以達(dá)較深部的腫瘤的治療。③液氮通過漏斗灌入癌腔。常用于骨和膀胱腫瘤。④液氮直接噴在病變區(qū)。適用于表面積大而高低不平的彌散性淺表腫瘤。⑤棉拭子或棉球浸蘸法。對幾毫米大小的小病灶，如血管瘤、乳頭狀瘤、白斑、疣等，選用相應(yīng)大小的消毒棉拭子(棉簽)浸足液氮，再直接接觸病灶。由于冷凍范圍和深度易控制，愈合后瘢痕輕且薄。
冷凍治療腫瘤尚有一定局限性，即冷凍壞死區(qū)不包括鄰近不受冷凍的淋巴管，故治療僅是局部的，而不是區(qū)域性地(包括淋巴系統(tǒng)在內(nèi))消滅腫瘤；冷凍對某些惡性腫瘤的絕對破壞能力亦尚有疑問。
(2)激光治療激光能汽化腫瘤組織，是因其對生物組織具有熱、壓、光和電磁場效應(yīng)的作用①熱效應(yīng)。激光能量密度極高，在激光束輻照下，幾毫秒的短時間內(nèi)可使生物組織的局部溫度高達(dá)200～1000℃，使蛋白質(zhì)變性、凝固壞死或使之汽化。②壓力效應(yīng)(或稱沖擊波)。激光本身的光壓加之由高熱引起的組織膨脹產(chǎn)生的二次沖擊波，可使已產(chǎn)生熱效應(yīng)的癌組織破壞，蛋白質(zhì)分解。③光效應(yīng)。激光能被色素組織(特別是黑色組織)吸收，增加熱效應(yīng)的作用。④電磁場效應(yīng)。激光是一種電磁波，因此必然產(chǎn)生電磁場，可使組織離化、核分解。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，激光部分破壞腫瘤后，殘癌可自行消退。黑色素瘤經(jīng)激光完全破壞后，再接種該腫瘤細(xì)胞不能再生長，提示激光的作用還可能和免疫有關(guān)。大功率激光對生物組織具有破壞作用，小功率激光具有刺激作用，逐次輻照具有累積效應(yīng)。含水量高的組織，由于散熱快且均勻，容易被切割且破壞局限；而失水組織則散熱慢易引起炭化。
在B型超聲引導(dǎo)下經(jīng)皮穿刺瘤內(nèi)插入導(dǎo)光纖維，采用低功率激光治療肝腫瘤是近年一大進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，正常肝組織間隔1.5cm插入4根低功率Nd:YAG激光導(dǎo)光纖維(1.5W，500s)，受熱區(qū)中央溫度可達(dá)60℃，兩根導(dǎo)光纖維頂端問細(xì)胞均發(fā)生凝固性壞死。
(3)微波治療微波治療腫瘤，主要是利用其熱效應(yīng)，基本原理是生物組織被微波輻照后，即吸收微波能導(dǎo)致該區(qū)組織細(xì)胞內(nèi)的極性分子處于一種“激勵”狀態(tài)，發(fā)生高速振蕩，與相鄰分子頻頻磨擦而將微波能量轉(zhuǎn)變?yōu)闊崮?，從而使組織凝固、壞死。實(shí)驗(yàn)證明，腫瘤組織的pH值和血流量均比正常組織低，因此微波加熱效果對腫瘤組織明顯增強(qiáng)。同時研究表明，腫瘤組織中含水量可高達(dá)89％，而正常軟組織的含水量一般在65％以下。由于水是一種耦極分子，介電常數(shù)大，能強(qiáng)烈地吸收微波能并轉(zhuǎn)化為熱能。因此，微波輻射可選擇性地破壞腫瘤。
目前常用的微波治療機(jī)有2450MHz、915MHz、434MHz3種頻率，對生物組織有效的透熱深度分別為2cm、4cm和6cm左右。輸出微波的輻射器(也稱天線)主要有3種①外照射式輻射器，有方形、半球形、圓柱形、矩形等多種形狀，適于治療肢體或軀干體表隆突形腫瘤，力爭整個腫瘤一次可被均勻加熱至43℃以上；②接觸式輻射器，有介質(zhì)填充型、平面波導(dǎo)型、桿型等多種形狀，適于治療體表皮下腫瘤、腔道內(nèi)腫瘤；③插入式輻射器，呈針形，用于肝、脾、腎手術(shù)。微波通過內(nèi)境局部熱凝固化治療腔內(nèi)腫瘤報道較多。微波熱療也可配合放療或化療等，可增加放療或化療作用，從而減少它們的劑量，提高療效。
(4)高效聚焦超聲(簡稱HIFU)高功率聚焦超聲(high intensity focused ultrasound，簡稱HIFU)是一種既能聚焦定位又能瞬間產(chǎn)生高溫的超聲加熱裝置，是在腫瘤溫?zé)岑煼ɑA(chǔ)上發(fā)展起來的新型超聲加熱技術(shù)，在腫瘤局部治療中展現(xiàn)了重要地位。
HIFU破壞腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制尚未完全明了，但熱壞死顯然是主要因素。對肝腫瘤而言，局部溫度超過58℃可致腫瘤組織熱凝固壞死，而HIFU可使組織溫度高達(dá)100℃，足以將靶區(qū)內(nèi)腫瘤組織全部破壞。其他非熱效應(yīng)還包括物理性汽化(cavitation)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生氧化基團(tuán)所導(dǎo)致的一系列化學(xué)反應(yīng)等。
HIFU裝置大致由三部分組成A超聲探頭 由換能器和聚焦晶片構(gòu)成。換能器發(fā)射超聲波，頻率一般在0.5～5.0MHz。晶片將超聲波反射聚焦，根據(jù)腫瘤大小可制成各種規(guī)格。目前新型超聲探頭(4MHz，550W/cm2，4s，Diasonics)聚焦深度為8cm，聚焦點(diǎn)范圍為0.6cm×0.6cm×0.7cm。對較大腫瘤可反復(fù)多點(diǎn)聚焦。
B聲耦合劑連接超聲探頭與靶區(qū)。超聲波在空氣中100％反射，因此用聲耦合劑作為中間媒介。一般用水或Ringer液制成囊袋。
C測溫系統(tǒng)超 聲波對金屬測溫針無干擾，可用熱電耦針插入靶區(qū)測定溫度變化。常用的測溫方法有三種①在腫瘤中心、邊緣及正常組織內(nèi)各插入一根熱耦電極，可了解靶區(qū)及周邊溫度。②金屬棒上每隔1cm嵌有一個微電極(一般4～6個電極)，將該金屬棒插入腫瘤組織內(nèi)，通過計算機(jī)處理可顯示腫瘤內(nèi)每隔1cm的溫度變化。③在HIFU治療的同時間隔1～2s將電極自腫瘤邊緣向中心插入，每次深入1cm，也同樣顯示腫瘤內(nèi)溫度變化。熱耦電測溫的缺點(diǎn)是有損傷性。目前國外報道用紅外線測溫技術(shù)，不僅無損傷，而且測溫更精確，尤其適合于體內(nèi)深部腫瘤的測溫。
現(xiàn)已證明，HIFU治療體表或體內(nèi)深部腫瘤有以下3個優(yōu)點(diǎn)①聚焦區(qū)域溫度高，能直接破壞癌組織；②聚焦區(qū)域以外組織無損傷或損傷較少；③可反復(fù)多次進(jìn)行，直至將腫瘤組織全部破壞。
(5)電化學(xué)療法(簡稱ECT)又稱直流電療法，其機(jī)制大致是通過直流電的電離作用，改變腫瘤組織生存內(nèi)環(huán)境，使腫瘤細(xì)胞內(nèi)代謝發(fā)生紊亂。陽性電極區(qū)內(nèi)pH值極度降低，酸性刺激癌灶血管引起腫瘤缺血、脫水；陰性電極區(qū)內(nèi)pH值極度升高，使細(xì)胞膜通透性增加，局部組織水腫壓迫血管，使腫瘤血供減少。氧、氫離子等通過電離作用可能直接殺傷腫瘤細(xì)胞，這些生理變化促使蛋白質(zhì)凝固，組織內(nèi)微血栓形成，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞分解、破壞和死亡。ECT還可能誘發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，增強(qiáng)抗腫瘤能力。
(6)射頻熱凝治療1)概述采用射頻方法治療腫瘤是近幾年發(fā)展的新技術(shù)。該方法的機(jī)理是在超聲、CT或內(nèi)腔鏡引導(dǎo)下，將針狀或多針狀電極直接刺入患者腫瘤部位，通過射頻消融儀測控單元和計算機(jī)控制，將大功率射頻能量通過消融電極傳送到腫瘤組織內(nèi)，利用腫瘤組織中的導(dǎo)電離子和極化分子按射頻交變電流的方向作快速變化，使腫瘤組織本身產(chǎn)生摩擦熱。當(dāng)溫度達(dá)到60℃以上時，腫瘤組織產(chǎn)生不可逆的凝固性壞死，壞死組織(滅活組織)在患者體內(nèi)(原位)將部分被吸收(術(shù)后約一個月)，壞死組織周圍形成纖維胞膜，胞膜內(nèi)聚集了中性DNA，它能增強(qiáng)患者的免疫功能，提高療效。射頻消融儀具有創(chuàng)傷小，療效確切，適應(yīng)癥廣等優(yōu)點(diǎn)。受到臨床醫(yī)生的普遍認(rèn)可，減少了腫瘤患者的治療痛苦。
2)射頻腫瘤消融儀如何快速增大一次消融的凝固壞死區(qū)是射頻消融儀研究的核心技術(shù)。早期用射頻消融儀僅能產(chǎn)生直徑為16mm的凝固性壞死區(qū)。這樣的殺傷力對較大的腫塊顯然是不夠的，需要在技術(shù)上不斷改進(jìn)。
射頻腫瘤消融儀由射頻消融源、測控單元、消融電極、外電極和計算機(jī)五個部分組成。射頻消融源的工作頻率一般在200KHZ-500KHZ范圍內(nèi)。輸出功率在100W-400W。測控單元是通過監(jiān)控腫瘤組織的阻抗，溫度等參數(shù)的變化，自動調(diào)節(jié)射頻消融源的輸出功率，使腫瘤組織快速產(chǎn)生大范圍的凝固性壞死。經(jīng)驗(yàn)證明，采用測量阻抗的手動調(diào)節(jié)功率的方法不易做到既能使凝固壞死范圍快速增大，又能使消融電極周圍組織不結(jié)痂或碳化。只有采用精確測溫和自動控溫系統(tǒng)才能解決上述難題。在治療中，消融電極周圍組織結(jié)痂或碳化。不僅使凝固壞死區(qū)范圍大大縮小，影響療效，且術(shù)后易出現(xiàn)收回電極子針困難而產(chǎn)生醫(yī)療事故。采用中空冷循環(huán)水降低消融電極溫度的方法也能解決電極針周圍組織結(jié)痂與碳化問題。
消融電極是射頻消融儀的核心部件，因?yàn)樗苯佑绊懩虊乃绤^(qū)的大小、形狀和產(chǎn)生凝固性壞死區(qū)的速度，目前有單針形和多針形兩種形狀。理想的凝固壞死區(qū)形狀應(yīng)為球形或扁球形。采用多針形消融電極目前一次消融的直徑最大可達(dá)55mm。
由于消融儀的功率較大，治療時間較長，故射頻腫瘤消融儀的外電極有效面積必須足夠大，否則易造成患者皮膚與電極接觸部位的灼傷。
計算機(jī)一般用來設(shè)定控溫曲線，記錄患者檔案和治療過程中的各種參數(shù)。
①療程最短每次15～30分鐘，酌情可需1～2周即可。
②痛苦最小創(chuàng)傷小，無明顯不良反應(yīng)。
③療效最佳迅速將腫瘤滅活，腫瘤細(xì)胞即即刻死亡，且不受腫瘤的分化影響；尤其對于小肝癌可達(dá)到一次原位滅活的效果。
④喚醒自身免疫系統(tǒng)，提高免疫力。
3)射頻消融術(shù)尚待解決的難題實(shí)時判斷消融范圍是射頻消融尚待解決的難題，因B超、CT等影相設(shè)備是根據(jù)器官組織的密度的改變來診斷疾病。而在消融治療時，凝固壞死組織與非壞死組織的密度無明顯差異，所以在治療時，不易分清凝固性壞死的邊緣。
4)適應(yīng)癥與前景目前國內(nèi)外應(yīng)用射頻消融術(shù)多為治療肝癌、肺癌、腎癌、前列腺肥大癥、乳腺癌、腎上腺癌和盆腔腫瘤等實(shí)體器官腫瘤。
射頻治療技術(shù)是一項新興的微創(chuàng)技術(shù)，對手術(shù)無法切除的肝臟惡性腫瘤有很好的療效。具有安全、微創(chuàng)、操作簡便等特點(diǎn)，術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率低。近年來發(fā)明的多極射頻針加大了毀損的體積，對于小于50mm的腫瘤可一次毀損成功，對較大的腫瘤可通過多次毀損達(dá)到治療目的。腹腔鏡和術(shù)中應(yīng)用射頻治療由于同時有術(shù)中超聲的引導(dǎo)，可發(fā)現(xiàn)并治療術(shù)前未發(fā)現(xiàn)的腫瘤，且定位更準(zhǔn)確。
(7)氬氦刀靶向治療氬氦刀低溫冷凍治療系統(tǒng)，是世界上唯一兼具超低溫冷凍、介入熱療和免疫治療多重效能的療系統(tǒng)。這個多探頭、高精確度、快速凍融的治療系統(tǒng)的發(fā)明，代表國際腫瘤治療儀器的先進(jìn)水平，也引起腫瘤治療的革命。氬氣冷媒和氦氣熱媒的引入使氬氣靶向冷凍技術(shù)與氦氣熱融解技術(shù)相結(jié)合，極大促進(jìn)了腫瘤超低溫治療技術(shù)的臨床應(yīng)用。特別是Endocare外科系統(tǒng)的研制使腫瘤冷凍外科技術(shù)，微創(chuàng)外科技術(shù)及腫瘤綜合治療技術(shù)進(jìn)入了一個嶄新的階段。
所以氬氦刀并不是真正意義上的手術(shù)刀，它是一種采用全監(jiān)控準(zhǔn)確定位微小創(chuàng)傷經(jīng)皮穿刺治療癌瘤的新高科技的治療系統(tǒng)。它是選擇出4～8支超導(dǎo)并具有溫差電偶監(jiān)測的超導(dǎo)針，在胸腔鏡、腹腔鏡、膀胱鏡，X光，B超或CT的引導(dǎo)下直接準(zhǔn)確地定位穿入癌瘤組織，在電子計算機(jī)的監(jiān)控下，在3分鐘內(nèi)立即將癌瘤組織細(xì)胞凍至攝氏零下195度(-195℃)，幾分鐘內(nèi)將癌瘤組織凍成冰球，癌瘤組織細(xì)胞破裂壞死而不傷及正常組織。
與其他方法相比，氬氦刀治療腫瘤有許多優(yōu)點(diǎn)a)適應(yīng)癥廣泛，對病人無毒性、損傷小，療效確切，并發(fā)正少；b)對正常組織無毒性，可和放、化療、介入、中藥或手術(shù)結(jié)合應(yīng)用；c)有選擇摧毀癌；d)費(fèi)用低、并發(fā)癥少、恢復(fù)快、局部消融療效顯著。氬氦刀還可與手術(shù)、放療、化療等結(jié)合應(yīng)用。有些腫瘤患者估計手術(shù)難以全部切除，可在術(shù)中與氬氦刀配合，或在氬氦刀術(shù)前或術(shù)后應(yīng)用介入治療、全身化療或放療等。
氬氦刀在醫(yī)學(xué)上的突破還在于其獨(dú)特的高壓氦氣快速加溫系統(tǒng)。它不僅可以解決超低溫對正常組織的冷凍傷害這個難題，更可急速加熱至一定溫度再行二次快速冷凍。此種冷凍逆轉(zhuǎn)治療過程對病變組織的摧毀尤為徹底。同時又可以調(diào)控腫瘤抗原，激活抗癌瘤免疫反應(yīng)，這就形成一次治療，兩種方法，三種效應(yīng)的高療效。
氬氦刀治療癌瘤成功率高，通過微創(chuàng)穿刺技術(shù)，不用開刀不損傷周圍正常組織，不出血，治療徹底，可靠無毒害副作用，恢復(fù)快，病人無痛苦。國外研究資料顯示，氬氦刀對多種局部癌瘤治療，病人的生存率明顯增高，生活質(zhì)量明顯改善，使眾多的癌瘤患者生命得以延長，健康狀況得到保障。
(8)伽瑪?shù)?簡稱γ刀)伽瑪?shù)队址Q立體定向伽瑪射線放射治療系統(tǒng)，是一種融合現(xiàn)代計算機(jī)技術(shù)、立體定向技術(shù)和外科技術(shù)于一體的治療性設(shè)備，它將鈷-60發(fā)出的伽瑪射線幾何聚焦，集中射于病灶，一次性、致死性的摧毀靶點(diǎn)內(nèi)的組織，而射線經(jīng)過人體正常組織幾乎無傷害，并且劑量銳減，因此其治療照射范圍與正常組織界限非常明顯，邊緣如刀割一樣，人們形象的稱之為“伽瑪?shù)丁?。伽瑪?shù)斗譃轭^部伽瑪?shù)逗腕w部伽瑪?shù)丁ｎ^部伽瑪?shù)妒菍⒍鄠€鈷源安裝在一個球型頭盔內(nèi)，使之聚焦于顱內(nèi)的某一點(diǎn)，形成一窄束邊緣銳利的伽馬射線。在治療時將窄束射線匯聚于病灶形成局限的高劑量區(qū)來摧毀病灶，主要用于顱內(nèi)小腫瘤和功能性疾病的治療。體部伽瑪?shù)吨饕糜谥委熑砀鞣N腫瘤。目前臨床應(yīng)用比較廣泛的是頭部伽瑪?shù)丁?br> 治療前，首先要用立體定位系統(tǒng)對病灶進(jìn)行診斷定位，立體定位系統(tǒng)是一個特制的坐標(biāo)系，病人在立體定位系統(tǒng)相對固定后，通過CT/MRI對病灶進(jìn)行斷層掃描可顯示出病灶與坐標(biāo)系各參考點(diǎn)的相對位置。診斷定位后，治療計劃系統(tǒng)自動對CT/MRI掃描圖片進(jìn)行處理，計算機(jī)重建體表、病灶和其周圍敏感組織的三維形態(tài)，并依據(jù)醫(yī)生開據(jù)的處方劑量進(jìn)行治療規(guī)劃，計算出治療所需靶點(diǎn)數(shù)、靶點(diǎn)坐標(biāo)、每個靶點(diǎn)使用的準(zhǔn)直器號和照射時間等。在接受到治療計劃系統(tǒng)的有關(guān)數(shù)據(jù)后，電氣控制系統(tǒng)控制治療床依次將各靶點(diǎn)送到焦點(diǎn)，并打開相應(yīng)的準(zhǔn)直器進(jìn)行定量的輻照，一次性、致死性的摧毀靶點(diǎn)內(nèi)的組織，達(dá)到治療腫瘤的目的。
醫(yī)生先要根據(jù)CT或MRI片上顯示的腫瘤確定治療靶區(qū)，也就是畫出腫瘤的邊界，這種邊界肉眼可見，被稱為“物理學(xué)邊界”。但是，腫瘤是向周圍正常組織浸潤性生長，在CT或MRI片上是很難顯示出來的，因此，目前還很難界定腫瘤真正的生長范圍，即“生物學(xué)邊界”。伽瑪?shù)吨委煼秶锌赡苓_(dá)不到″生物學(xué)邊界″，就像斬草未能除根一樣，殘留的腫瘤細(xì)胞仍然會在體內(nèi)興風(fēng)作浪。另外，經(jīng)血行轉(zhuǎn)移的腫瘤，病變一般都比較廣泛，例如腦轉(zhuǎn)移瘤70～80％為多發(fā)病灶。這些轉(zhuǎn)移的腫瘤在體積很小的時候，也同樣不能在CT或MRI片上顯示出來，因此，在做伽瑪?shù)稌r難免遺漏病灶。
伽瑪?shù)兜闹饕R床應(yīng)用為各種顱內(nèi)腫瘤、顱內(nèi)功能性疾患(如帕金森綜合癥)和動靜脈畸形等疾病的治療。據(jù)國內(nèi)外統(tǒng)計，惡性腫瘤患者有60～70％在病程的不同階段都需放射治療。放射治療可以單獨(dú)使用，也可以同其它方法一起綜合使用。在做伽瑪?shù)肚盎蚝?，適當(dāng)配合普通放療，就可以減少遺漏病灶的情況發(fā)生。
(9)局部無水酒精注射(percutaneous ethanol injection，簡稱PEI)酒精注射治療腫瘤最早是由日本學(xué)者Sugiura在1983年開始施行，當(dāng)時是用于治療肝癌，由于副作用很少且效果不錯，故很快推行至世界各地，目前已被廣泛地應(yīng)用于腫瘤(尤其是肝癌)的局部治療。
酒精注射治療腫瘤主要是利用酒精可以造成腫瘤細(xì)胞脫水、壞死、蛋白質(zhì)變性、破壞腫瘤血管內(nèi)皮，造成腫瘤缺血、壞死，或經(jīng)由血小板凝集而造成腫瘤血管栓塞之原理。注射時醫(yī)生依靠影像學(xué)技術(shù)的引導(dǎo)，將注射針頭直接插到腫瘤部位，先抽取癌細(xì)胞樣本，進(jìn)行病理學(xué)分析，之后再根據(jù)腫瘤的大小注入2到5毫升純度為99.8％的酒精。
在針對肝癌的治療中主要用以治療3cm以下之肝癌，其完全治愈率可以達(dá)到80％。如果為小于2cm的肝癌，其完全治愈率可以達(dá)到90％以上。但腫瘤如果為3～5cm，則其治愈率將降至50％左右。所以肝癌如果能早期發(fā)現(xiàn)，早期治療，其治愈率非常良好，與外科手術(shù)切除不相上下。
但是酒精注射也一定的局限性，例如酒精在肝癌內(nèi)部不易均勻散布，所以有些部分可能會有殘余存活癌細(xì)胞。而且酒精注射不易制造出一個安全的邊界，因此酒精注射后的再發(fā)病率也偏高，需要重復(fù)注射或者配合其他的治療方法。
酒精注射的副作用主要為局部疼痛，其次為低血壓及發(fā)燒。國外文獻(xiàn)報告可能出現(xiàn)下列并發(fā)癥腹腔出血、肝衰竭、膽道壞死、肝梗塞以及腎衰竭等，其發(fā)生率約在1％以下，死亡率約在0.1％以下，但只要小心謹(jǐn)慎，以上情況甚少發(fā)生。比較容易發(fā)生并發(fā)癥的狀況包括肝動脈/肺動脈高壓、食道靜脈曲張、凝血功能異常及黃疸等。因此所有病人在接受治療前都應(yīng)接受審慎評估?，F(xiàn)在文獻(xiàn)認(rèn)為此項治療并不會增加腫瘤擴(kuò)散的機(jī)率。
酒精注射的禁忌癥，根據(jù)國外文獻(xiàn)包括已有肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈栓塞、C期肝硬化、凝血酶時間大約正常之40％、血小板低于4萬者。
因酒精注射相對于其他的治療方法，仍然比較安全，故以上禁忌癥可以只是相對的禁忌癥而非絕對，故對于那些無法手術(shù)切除，無法施行經(jīng)導(dǎo)管肝動脈栓塞或射頻燒灼的病人，酒精注射可考慮作為輔助治療或消極治療的方法之一。酒精注射治療肝癌是一種簡單、方便、副作用與禁忌癥均較少的治療方法。對于3cm以下之腫瘤，單獨(dú)的酒精注射療法與外科切除的存活率相似，可作為根除治療(curative treatment)的選擇。對于3cm以上之腫瘤，酒精治療的效果不佳，需考慮與經(jīng)導(dǎo)管肝動脈栓塞，射頻燒灼，放射電療或外科手術(shù)合并治療，作為輔助治療或消極治療(palliative treatment)的選擇。注射酒精不但損傷小，病人的生活質(zhì)量也不會受到太大影響，所以患者比較容易接受。再加上超聲定位技術(shù)不斷進(jìn)步，注射的效果也有所提高，如今酒精注射后五年的存活率和復(fù)發(fā)率都與開刀差不多。一般來說，只要腫瘤不是很大，而且數(shù)目不是太多，不超過3個，就可以考慮注射酒精。因此，酒精注射在腫瘤特別是肝癌的治療上，扮演非常重要的角色。
(10)局部乙酸注射超聲引導(dǎo)經(jīng)皮肝穿刺瘤內(nèi)注射乙酸(percutaneous acetic acid injection，簡稱PAI)治療肝癌最早由Ohnishi于1994年報道，作者在動物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用25％～50％乙酸注射入肝癌瘤體內(nèi)，達(dá)到殺滅腫瘤的目的。之后一系列研究報道表明該方法治療肝癌具有明顯的療效，較大程度地提高患者的生存質(zhì)量，延長生存期，部分患者達(dá)到治愈的目的。
乙酸與組織細(xì)胞接觸后，可迅速引起蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子變性，導(dǎo)致細(xì)胞核碎裂、溶解，細(xì)胞破裂，在組織中形成一定范圍的壞死區(qū)，壞死大小與注射的劑量和濃度相關(guān)。壞死區(qū)附近的組織細(xì)胞可表現(xiàn)為輕微的腫脹，但為可逆性，兩者之間分界清晰。隨后大量淋巴細(xì)胞浸潤，注射后7天左右，周圍可形成一層纖維包膜。乙酸除能直接引起細(xì)胞破壞以外，還能溶解脂肪和部分膠原，以及它的低pH值特性，使乙酸注入組織后，能較容易地向四周滲透，因此低劑量注射即可產(chǎn)生較大范圍的壞死區(qū)。
大多肝癌組織中存在纖維分隔，外周有包膜，包膜外也存在一些癌細(xì)胞。無水酒精等藥物都難穿過這些分隔和包膜，需要大劑量，多點(diǎn)注射，即使如此，往往也難以達(dá)到完全殺滅癌細(xì)胞的目的，為日后復(fù)發(fā)留下隱患。乙酸由于具有較強(qiáng)的穿透能力，小劑量注射即可致較完全的壞死。
PAI術(shù)操作簡單，只需一臺帶有穿刺導(dǎo)向裝置的B超儀，一根穿刺針、注射器，一個無菌穿刺包就可以進(jìn)行。同時還應(yīng)配備一些止血藥，腎上腺素等藥物以備出現(xiàn)出血等并發(fā)癥時使用。穿刺前應(yīng)明確診斷，最好做穿刺活檢以獲得明確的病理診斷，因?yàn)橹委熀笕绻捎诜N種原因?qū)υ\斷又發(fā)生懷疑，這時穿刺活檢往往為壞死組織，很難做出明確的病理診斷。術(shù)前檢查患者的肝功能，AFP、出、凝血時間、B超以明確患者的一般情況，腫瘤的數(shù)目和大小，也為術(shù)后療效判斷做準(zhǔn)備。條件許可還可進(jìn)行彩色多普勒超聲，增強(qiáng)CT掃描，血管造影等檢查，對于指導(dǎo)治療及療效判斷有一定的幫助。
PAI術(shù)的適應(yīng)癥主要包括①小肝癌位置特殊或多中心病灶；全身情況較差伴有肝硬化不宜手術(shù)；小肝癌拒絕手術(shù)；手術(shù)前治療，用于配合小肝癌手術(shù)切除以減少復(fù)發(fā)；②中晚期肝癌境界清楚，包膜完整，不能手術(shù)治療；③腫瘤切除術(shù)后復(fù)發(fā)；④配合其他非手術(shù)療法，如肝動脈插管栓塞、肝動脈或門脈藥物灌注、放射治療；⑤中等程度以下食管靜脈曲張，白細(xì)胞和血小板過低不宜手術(shù)或化療者。
PAI術(shù)無絕對禁忌，但對于以下情況應(yīng)慎重或進(jìn)行相應(yīng)處理后再治療；①重度黃疸，中等量腹水；②腫瘤巨大(超過半肝以上)且呈浸潤性或彌漫性生長者；③門脈廣泛癌栓；④出血傾向。
PAI術(shù)的具體操作方法為患者取平臥位或左側(cè)臥位，按穿刺常規(guī)消毒，局部麻醉后，于超聲引導(dǎo)下將穿刺針刺入腫瘤內(nèi)，緩慢注射相應(yīng)劑量和濃度的乙酸，隨后迅速拔針，即完成一次穿刺。
對于小于3cm的腫瘤2～6次為一個療程，大于3cm的腫瘤3～8次為一個療程，兩次注射間隔3～6天。注射次數(shù)的選擇應(yīng)根據(jù)療效判斷來決定，當(dāng)出現(xiàn)以下情況時可以認(rèn)為治療有效。可囑患者每2～3個月復(fù)查一次即可①腫瘤縮小或消失；②AFP持續(xù)下降或降至正常；③穿刺活檢未見癌細(xì)胞；④超聲檢查出現(xiàn)不易消失的高回聲，腫瘤周邊出現(xiàn)高回聲或低回聲暈包繞；⑤血管造影，CT增強(qiáng)掃描，磁共振和彩色多普勒顯像證實(shí)腫瘤血流減少或消失；⑥介入性穿刺治療時感覺腫瘤質(zhì)地硬，穿刺針管無血液流出，注射藥物時阻力增大或穿刺時抽出壞死液化組織；⑦患者體重增加，食欲改善，癥狀減輕，肝功能好轉(zhuǎn)。
以下情況應(yīng)視為治療不徹底或復(fù)發(fā)，需再次治療①腫塊增大；②穿刺活檢可見癌細(xì)胞；③血管造影，CT增強(qiáng)掃描，磁共振和彩色多普勒血流顯像顯示腫瘤血流豐富；④患者全身情況惡化，AFP上升。
乙酸對肝癌組織具有強(qiáng)大的致壞死能力，瘤內(nèi)注射后大部分可達(dá)腫瘤的完全壞死。Ohnishi等進(jìn)行了一系列PAI治療肝癌的研究，對于＜3cm的肝癌，5年生存率可達(dá)49％(Ohnishi K，Yoshioka H，Ito S，F(xiàn)ujiwara K.Prospective randomized controlled trial comparingpercutaneous acetic acid injection and percutaneous ethanol injection for small hepatocellularcarcinoma.Hepatology.1998 Jan；27(1)67-72.)。呂國榮等報道28例1.2～11.5cm肝癌行PAI術(shù)，1年生存率90％，2年生存率50％(呂國榮等，超聲引導(dǎo)經(jīng)皮醋酸注射治療肝癌新方法，中華超聲影像學(xué)雜志，1999，8229-231.)。Ohnishi等還將PAI術(shù)與經(jīng)皮肝穿刺無水酒精注射治療肝癌進(jìn)行比較，結(jié)果PAI術(shù)生存率高于PEI術(shù)，局部復(fù)發(fā)率PAI術(shù)低于PEI術(shù)。Ohnishi等還將PAI術(shù)與經(jīng)皮肝動脈插管栓塞(transcatheter arterial embolization，簡稱TAE)治療肝癌比較，結(jié)果前者1、2、3年生存率均高于后者(Ohnishi K.Comparison ofpercutaneous acetic acid injection and percutaneous ethanol injection for small hepatocellularcarcinoma.Hepatogastroenterology.1998 Aug；45Suppl 31254-8.)。
乙酸為一種低毒的有機(jī)酸，其大鼠經(jīng)口半致死量為3.3g/kg，臨床使用的劑量遠(yuǎn)低于半致死量，且為局部注射用藥，因此是相對安全的。眾多的臨床應(yīng)用報道中也極少見到嚴(yán)重的并發(fā)癥發(fā)生。臨床上常見的副反應(yīng)有以下一些①局部疼痛，為乙酸自針道漏出刺激肝包膜及腹膜所致。②發(fā)熱，通常低于39℃，1周內(nèi)可降至正常。③轉(zhuǎn)氨酶升高，為一過性肝損傷，2周內(nèi)可恢復(fù)正常。以上反應(yīng)大多不需特殊處理。
總之，超聲引導(dǎo)PAI治療肝癌是一種有效的微創(chuàng)性治療方法，損傷性小，適應(yīng)范圍廣，操作簡便，費(fèi)用低廉，可與外科手術(shù)或化療栓塞等方法聯(lián)合使用。但尚有一些問題有待進(jìn)一步研究，如PAI能否對機(jī)體免疫功能造成影響，治療使用的最適濃度和劑量，客觀的療效評價標(biāo)準(zhǔn)，長期療效。因此尚需更多的基礎(chǔ)研究和長期大量的臨床觀察以進(jìn)一步完善該方法。
(11)動脈栓塞惡性腫瘤的血管性介入治療是在醫(yī)學(xué)影象設(shè)備如X射線、CT、B超、MRI的引導(dǎo)下，利用各種儀器或者器械，以血管為進(jìn)入途徑，對人體的各種腫瘤進(jìn)行診斷和治療的技術(shù)。
惡性腫瘤的血管性介入治療包括腫瘤動脈栓塞術(shù)和化療栓塞術(shù)。選擇性動脈灌注化療雖是治療實(shí)質(zhì)性惡性腫瘤的重要方法，但是仍存在著灌注藥物從給藥器官快速代謝、排泄及不能顯著降低全身正常組織細(xì)胞毒副作用等特點(diǎn)。70年代開始采用選擇性動脈栓塞術(shù)栓塞腫瘤供血動脈，即采用血管栓塞劑，如明膠海綿、不銹鋼圈、自體血凝塊等暫時或永久地阻斷腫瘤供血動脈，使瘤體體積縮小，利于手術(shù)切除和減少術(shù)中出血。對不能手術(shù)的晚期惡性腫瘤患者并用動脈灌注療法，可起到較好的姑息治療效果，緩解病人的疼痛和出血癥狀，延長生存時間。但是，這些栓塞方法一般栓塞在較大的動脈及分支，短時間內(nèi)易形成側(cè)支循環(huán)使腫瘤組織恢復(fù)供血，治療效果仍欠滿意。近10幾年來，許多學(xué)者在新的藥物劑型，即藥物載體方面進(jìn)行了研究，將抗癌藥物和栓塞劑有機(jī)結(jié)合在一起注入靶動脈，既栓塞腫瘤組織末梢分支，阻斷血供，又可緩慢釋放化療藥物起到局部化療作用，并且可顯著降低體循環(huán)的藥物濃度，減少全身化療毒性，稱之為化療栓塞術(shù)，取得了明顯的效果。化療栓塞術(shù)的理論基礎(chǔ)是將栓塞所致的腫瘤缺血作用和化療藥物的抗腫瘤作用相結(jié)合，達(dá)到殺死腫瘤組織的目的。其協(xié)同作用的主要優(yōu)越性是提高局部藥物濃度和延長局部藥物作用時間，同時降低全身藥物濃度，減少毒副作用。
惡性腫瘤化療栓塞術(shù)存在一定的副反應(yīng)和并發(fā)癥惡性腫瘤化療栓塞術(shù)的副反應(yīng)和并發(fā)癥有二大方面一是一般介入技術(shù)所致并發(fā)癥和化療藥物的副反應(yīng)；二是栓塞術(shù)所致并發(fā)癥，主要有以下3個方面①栓塞后綜合征可發(fā)生于大多數(shù)腫瘤栓塞術(shù)后，原因通常認(rèn)為是器官缺血、水腫和腫瘤組織壞死。主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、發(fā)熱、疼痛和麻痹性腸淤血等。發(fā)熱通常不超過38℃，嚴(yán)重者可有高熱，1周內(nèi)可逐漸恢復(fù)正常，對有高熱持續(xù)不退應(yīng)注意有無感染發(fā)生。疼痛在注射栓塞劑當(dāng)時即可發(fā)生，嚴(yán)重時不得不中止栓塞。處理措施包括給予鎮(zhèn)痛、止吐藥物，吸氧等對癥處理。為防止感染可于術(shù)前、術(shù)后使用廣譜抗生素。
②誤栓和異位栓塞導(dǎo)管不能超選擇插管、栓塞劑選擇不當(dāng)、注射造影劑壓力過高等原因可以造成栓塞劑反流，誤栓其他器官。栓塞的靶動脈與其他器官有側(cè)支循環(huán)可造成異位栓塞。如腦、肺梗死，皮膚、膽囊、腸道、神經(jīng)和肢體等部位缺血壞死。預(yù)防和處理措施有A.栓塞前進(jìn)行詳細(xì)地血管造影，觀察有無其他正常臟器側(cè)支血管或動靜脈瘺，如有應(yīng)盡量進(jìn)一步超選擇插管至靶動脈，或采用較大近端栓塞劑堵塞側(cè)支血管或動靜脈瘺。B.選擇合適的栓塞劑和栓塞技術(shù)。C.如果發(fā)生誤栓或異位栓塞，應(yīng)立即給予擴(kuò)張血管、抗凝血、激素等藥物，以減少組織梗死的范圍和程度。
③感染和膿腫形成較少見，原因多為栓塞后腫瘤組織壞死液化，加上手術(shù)器械、導(dǎo)管和栓塞劑消毒不嚴(yán)或未嚴(yán)格無菌操作。預(yù)防措施是嚴(yán)格按無菌術(shù)操作，栓塞劑必要時高壓滅菌處理，術(shù)前和術(shù)后使用廣譜抗生素預(yù)防等。一旦膿腫形成，應(yīng)采用經(jīng)皮穿刺引流術(shù)治療。
3、各種實(shí)體瘤的治療現(xiàn)狀(1)食管癌食管癌(carcinoma of esophagus)是食管鱗狀上皮的惡性腫瘤，進(jìn)行性咽下困難為其最典型的臨床癥狀。本病是人類常見的惡性腫瘤之一。中國是食管癌的高發(fā)國家，也是本病死亡率最高的國家。全世界每年食管癌新發(fā)病例約31.04萬，而中國占16.72萬。
食道癌的放療不同于其它部位的腫瘤治療，由于腫瘤始終與食管于一體，在規(guī)劃靶區(qū)時，管腔和病變一起被劃入，如果和照射其它部位的腫瘤一樣，一次大劑量照射勢必會引起食管粘膜的損傷，甚至穿孔，有發(fā)現(xiàn)在肺部腫瘤的定向放射時，食管接受24～30Gy量，即可出現(xiàn)放射性損傷，后期表現(xiàn)食管局部性狹窄。又由于食道癌患者就癥時絕大多數(shù)已屬晚期，不僅局部病變已廣泛浸潤，而且已有亞臨床病灶的遠(yuǎn)處播散或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，尸檢發(fā)現(xiàn)，許多臨床認(rèn)為局部早期的病例死亡時，已有半數(shù)以上伴遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，70％以上有廣泛的淋巴結(jié)受侵，真正能根治性切除的病例不足1/3，常規(guī)放療5年生存率僅為13％，局部復(fù)發(fā)也是食道癌手術(shù)和放療失敗的主要原因，占80％以上，由此可以看出，食道癌的治療僅靠手術(shù)和放療是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。
1)發(fā)病率歐、美和大洋洲諸國的食管癌發(fā)病率一般在20/10萬，前蘇聯(lián)的中亞地區(qū)高達(dá)100/10萬以上；中國北方各省的發(fā)病率和死亡率均高于南方。
2)死亡率目前中國是世界上食管癌死亡率最高的國家之一，年平均死亡率為14.59/10萬。據(jù)1990年的統(tǒng)計資料，部分城市惡性腫瘤死亡率位次為肺癌、胃癌、肝癌、食管癌，其死亡率分別為32.89/10萬、21.51/10萬、20.1/10萬和9.70/10萬。
3)性別和年齡男女發(fā)病比例為1.37∶1。發(fā)病年齡以高齡組為主，35歲以前的構(gòu)成比例很小，35歲以后隨年齡增長而構(gòu)成比增高，以60～64歲組最高(17.95％)，其次為65～69歲組，70歲以后逐漸降低。
食管癌的發(fā)病主要與以下5點(diǎn)有關(guān)①亞硝胺類亞硝胺類化合物是一種很強(qiáng)的致癌物質(zhì)，研究表明食管癌高發(fā)區(qū)林縣食用酸菜的居民，胃液、尿液中存在有誘發(fā)食管癌的甲基芐基亞硝胺、亞硝基吡咯烷、亞硝基胍啶。并發(fā)現(xiàn)食用酸菜量和食管癌發(fā)病率成正比。②食管粘膜的損傷長期喜進(jìn)燙食、粗食，飲濃茶，多食辣椒等刺激性食物可引起食管粘膜損傷、引起食管粘膜增生間變，也可能是致癌因素之一。吸煙、飲烈性酒與食管癌發(fā)病有一定關(guān)系。各種長期不愈的食管炎可能是食管癌的癌前病變。③霉菌致癌因素用霉變食品可以誘發(fā)小鼠食管和胃的癌前病變或鱗狀上皮癌。這類霉菌與亞硝胺促癌有協(xié)同作用。④微量元素食道癌高發(fā)區(qū)人群中血清鉬、發(fā)鉬、尿鉬及食管癌組織中的鉬都低于正常。林縣食管癌高發(fā)區(qū)水土中缺少鉬，鉬的抑癌作用被多數(shù)學(xué)者證實(shí)。⑤遺傳因素食管癌具有顯著的家族聚集現(xiàn)象，高發(fā)區(qū)連續(xù)三代或三代以上患病家族屢見。
從食道癌的長期病例普查來看，食道癌細(xì)胞的發(fā)展過程是從輕度增生開始逐步發(fā)展到重度增生，原位癌和浸潤癌，從食管粘膜輕度增生到原位癌發(fā)展較慢，有認(rèn)為這一演變過程大約5到10年時間，一旦形成浸潤癌，其發(fā)展速度相當(dāng)快，當(dāng)病人有明顯吞咽梗阻癥狀，此間的治愈率很低。食道癌的治療目前仍以手術(shù)和放療為主，由于化療對人體的毒副反應(yīng)較大，僅作為一種輔助手段。而在目前的手術(shù)治療容易在短期內(nèi)重新復(fù)發(fā)并擴(kuò)散，且有很多患者由此拒絕接受手術(shù)治療。在放療中，一旦患者有惡液質(zhì)。穿孔、CT證實(shí)有嚴(yán)重的氣管或大血管受侵或嚴(yán)重的胸背部疼痛，白細(xì)胞升高等都不宜再放療，相對禁忌。
化學(xué)藥物治療常用藥有順鉑、平陽霉素等，雖然其有效率在50％左右，但其遠(yuǎn)期療效并不理想。
由于在化療過程中，伴有極大的副反應(yīng)及并發(fā)癥，即使通過放療結(jié)合化學(xué)治療，其5年生存率也僅13％左右。生存5年以上者，對于后期的生活質(zhì)量也大受影響，不能從根本上有效地來治療食道癌，更不能做到防患于未然。
(2)肝癌肝癌發(fā)病率在惡性腫瘤中位居前列，是中國和亞洲地區(qū)的常見病。90％以上肝癌病例為原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma，簡稱PHC)。由于人體的肝臟系動脈、門靜脈雙重血供，腫瘤組織在生長過程中易于奪取血供，隨著病情進(jìn)展，使肝功能惡化，直接影響患者的基本狀況，因此肝臟惡性腫瘤的患者預(yù)后較人體其他部位惡性腫瘤患者更差。迄今為止肝癌尚無特效療法，各種方法均非根治，治療的首選仍然是早期發(fā)現(xiàn)、診斷并進(jìn)行外科手術(shù)切除，但復(fù)發(fā)率較高，易發(fā)生肺轉(zhuǎn)移。由于肝癌早期多無明顯臨床癥狀，絕大部分病例發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)屬于中晚期，喪失了手術(shù)時機(jī)，治療以放療、化療為主，骨髓抑制等副反應(yīng)較大，病人往往不能耐受。目前臨床對于晚期肝癌除了肝移植之外尚無安全有效的治療手段，但是肝移植治療成本過高，適用人群小，大部分患者難以承擔(dān)，而接受移植的患者多屬中晚期肝癌，常有血管侵犯和肝外轉(zhuǎn)移，加上術(shù)后免疫抑制劑的應(yīng)用，患者多死于早期復(fù)發(fā)。
(3)肺癌肺癌的確切病因至今尚欠了解。經(jīng)過多年的大量調(diào)查研究，目前公認(rèn)下列因素與肺癌的病因有密切關(guān)系。
1)吸煙根據(jù)各國的大量調(diào)查資料都說明肺癌的病因與吸紙煙關(guān)系極為密切，長期吸煙可引致支氣管粘膜上皮細(xì)胞增生，磷狀上皮生成，誘發(fā)鱗狀上皮癌或未分化小細(xì)胞癌。肺癌發(fā)病率的增長與紙煙銷售量增多呈平行關(guān)系。紙煙中含有苯并芘等多種致癌物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)動物吸入紙煙煙霧或涂抹焦油可誘發(fā)呼吸道和皮膚癌腫。有吸煙習(xí)慣者肺癌發(fā)病率比不吸煙者高10倍，吸煙量大者發(fā)病率更高，比不吸煙者高20倍。臨床確診的肺癌病例中，每日吸紙煙20支以上，歷時30年以上者，約占80％以上。中國是一個煙草大國，尤其是近20～30年以來，中國吸煙的情況非常嚴(yán)重，近3億人口有吸煙習(xí)慣。京、津、滬等大城市男性成年人吸煙率近50％，女性近5％，并且吸煙人口有低齡化發(fā)展的趨勢，可以預(yù)見今后10～30年中國肺癌發(fā)病率必將進(jìn)一步增長。
2)大氣污染大氣污染的主要原因是由于工業(yè)和交通發(fā)達(dá)地區(qū)，石油，煤和內(nèi)燃機(jī)等燃燒后和瀝青公路塵埃產(chǎn)生的含有苯并芘致癌烴等有害物質(zhì)污染大氣有關(guān)。中國作為發(fā)展中國家，經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展，工業(yè)生產(chǎn)和交通工具都要排放大量富含二硝苯芘、苯并芘等致癌物質(zhì)的煙塵和廢氣。據(jù)估計，大氣中苯并芘的濃度增加百萬分之一，居民的肺癌死亡率將上升5％。近50年來全世界各地肺癌呈10～30倍增長，中國一些污染嚴(yán)重的工業(yè)城市的肺癌死亡率為臨近非工業(yè)城市的3～4倍，而調(diào)查材料說明大氣中苯并芘濃度高的地區(qū)，肺癌的發(fā)病率也增高。大氣污染與吸紙煙對肺癌的發(fā)病率可能互相促進(jìn)，起協(xié)同作用。
3)職業(yè)因素本世紀(jì)30年代文獻(xiàn)上就有歐洲Schneeberg礦區(qū)肺癌發(fā)病率高的報道。經(jīng)過多年的調(diào)查研究，目前已公認(rèn)長期接觸鈾、鐳等放射性物質(zhì)及其衍化物、致癌性碳?xì)浠衔铩⒅亟饘?、石棉、芥子氣等物質(zhì)，均可誘發(fā)肺癌。
4)肺部慢性疾病如肺結(jié)核、矽肺、塵肺等可與肺癌并存。這些病例癌腫的發(fā)病率高于正常人。
5)人體內(nèi)在因素如家族遺傳，以及免疫機(jī)能降低，代謝活動、內(nèi)分泌功能失調(diào)等也可能對肺癌的發(fā)病起一定的促進(jìn)作用。
肺癌發(fā)生于支氣管粘膜上皮，故也稱之為支氣管癌，根據(jù)各型肺癌的分化程度和形態(tài)特征，目前將肺癌分為兩大類，即小細(xì)胞肺癌(簡稱SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(簡稱NSCLC)，后者又包括鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌等。不同類型的肺癌在治療方法上有所區(qū)別，預(yù)后亦不盡相同。對于肺癌的治療的主要臨床策略與惡性腫瘤的治療一致，首選治療方案是外科手術(shù)，術(shù)前或者術(shù)后輔以放療和化療。
1)外科治療對肺癌的治療目前大多主張最大限度地切除肺癌和最大限度地保留肺功能，近年來更多的主張是肺葉切除及手術(shù)與多種方法綜合治療。
2)放射治療SCLC的放療常配合化療應(yīng)用。NSCLC的放療有術(shù)前放療、術(shù)后放療、根治性放療及腔內(nèi)近距離后裝放療和間質(zhì)放療。放療并發(fā)癥主要有食管損傷、肺損傷、心臟傷害及脊髓炎等。
3)化學(xué)治療近年來，化療在肺癌的治療中日益受到重視，對SCLC和NSCLC的化療應(yīng)區(qū)別對待?；熓侵委烻CLC的主要方法，主要有單藥化療、聯(lián)合化療和交替化療等。而對于對NSCLC而言化療的療效則遠(yuǎn)不如對SCLC，目前的化療方案主要有單藥和聯(lián)合化療、放射治療中的輔助化療等。
肺癌患者的存活時間主要看在第一次診斷的時候肺癌的類型以及它的擴(kuò)散范圍。處于NSCLC的早期階段的病人大約只有三分之一可通過外科手術(shù)治愈，這個比率比SCLC患者的治愈率低五個百分點(diǎn)。在大多數(shù)不可能治愈的病人中，存活時間從幾個月到幾年不等，這主要取決于肺癌的擴(kuò)散范圍、病人的全身狀況、還有他(她)對治療的反應(yīng)以及治療方案的有效性。
(4)腦膠質(zhì)瘤腦腫瘤中膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)病率最高，約占40.49％，綜合發(fā)病年齡高峰在30-40歲，或10-20歲。大腦半球發(fā)生的膠質(zhì)瘤約占全部膠質(zhì)瘤的51.4％，以星形細(xì)胞瘤為最多，其次是膠質(zhì)細(xì)胞瘤和少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤，腦室系統(tǒng)也是膠質(zhì)瘤較多的發(fā)生部位，占膠質(zhì)瘤總數(shù)的23.9％，主要為管膜瘤，髓母細(xì)胞瘤，星形細(xì)胞瘤，小腦膠質(zhì)瘤占膠質(zhì)瘤總數(shù)的13％，主要為星形細(xì)胞瘤。
幾種常見膠質(zhì)瘤的臨床表現(xiàn)1)星形細(xì)胞瘤一般癥狀為顱內(nèi)壓增高表現(xiàn)，頭痛、嘔吐、視神經(jīng)乳頭水腫、視力視野改變、癲癇、復(fù)視、顱擴(kuò)大(兒童期)和生命體征改變等。
局部癥狀依腫瘤生長位置不同而異①大腦半球星形細(xì)胞瘤約1/3患者以癲癇為首發(fā)癥狀約60％患者發(fā)生癲癇。
②小腦星形細(xì)胞瘤患側(cè)肢體共濟(jì)失調(diào)，動作笨拙，持物不穩(wěn)，肌張力和腱反射低下等。
③丘腦星形細(xì)胞瘤病變對側(cè)肢體輕癱，感覺障礙及半身自發(fā)性疼痛，患側(cè)肢體共濟(jì)運(yùn)動失調(diào)、舞蹈樣運(yùn)動，亦可表現(xiàn)為精神障礙，內(nèi)分泌障礙，健側(cè)同向偏盲，上視障礙及聽力障礙等。
④視神經(jīng)星形細(xì)胞瘤主要表現(xiàn)為視力損害和眼球位置異常。
⑤第三腦室星形細(xì)胞瘤因梗阻性腦積水患者常表現(xiàn)為劇烈的發(fā)作性頭痛，并可出現(xiàn)突然的意識喪失，精神障礙，記憶力減退等。
⑥腦干星形細(xì)胞瘤中樞腫瘤常表現(xiàn)為眼球運(yùn)動障礙，橋腦腫瘤多表現(xiàn)為眼球外展受限，面神經(jīng)及三叉神經(jīng)受累，延髓腫瘤常表現(xiàn)為吞咽障礙及生命體證改變。
2)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤腫瘤高度惡性生長快，病程短，自出現(xiàn)癥狀至就診多數(shù)在3個月之內(nèi)，高顱內(nèi)壓癥狀明顯，33％患者有癲癇發(fā)作，20％患者表現(xiàn)淡漠、癡呆、智力減退等精神癥狀，患者可出現(xiàn)不同程度的偏癱，偏身感覺障礙、失語和偏盲等。
少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤及間變(惡性)少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤癲癇常為首發(fā)癥狀，精神癥狀以情感異常和癡呆為主，侵犯運(yùn)動、感覺區(qū)可產(chǎn)生偏癱，偏身感覺障礙及失語等，高顱壓癥狀出現(xiàn)較晚。
3)髓母細(xì)胞瘤①腫瘤生長快，高顱壓癥狀明顯②小腦功能損害表現(xiàn)為步態(tài)蹣跚，走路不穩(wěn)等。
③復(fù)視、面癱、頭顱增大(兒童)、嗆咳等。
④腫瘤轉(zhuǎn)移是髓母細(xì)胞瘤的重要特征。
4)室管膜瘤①顱內(nèi)壓增高癥狀②腦干受壓癥狀(嘔吐、嗆咳、各咽困難、聲音嘶啞、呼吸困難)、小腦癥狀(走路不穩(wěn)、眼球震顫等)及偏癱、眼球上運(yùn)動障礙等。
③手術(shù)后復(fù)發(fā)率幾乎為100％易發(fā)生椎管內(nèi)轉(zhuǎn)移。
5)脈絡(luò)叢乳頭狀瘤①腦積水及腫瘤占位引起高顱壓癥狀，兒童常見頭顱增大；精神淡漠，嗜睡或易激惹。
②腫瘤位于側(cè)腦室者有對側(cè)錐體束征；后顱凹者內(nèi)走路不穩(wěn)，眼球震顫，共濟(jì)運(yùn)動失調(diào)，第三腦室者為雙眼上視困難。
6)松果體細(xì)胞瘤顱內(nèi)壓增高；聽力及眼球運(yùn)動障礙，影響到視力下部表現(xiàn)為尿崩癥、嗜睡和肥胖等，內(nèi)分泌癥狀表現(xiàn)為性征發(fā)育停滯或不發(fā)育；部分患者可出現(xiàn)癲癇發(fā)作及意識障礙。
膠質(zhì)瘤的特點(diǎn)及治療現(xiàn)狀膠質(zhì)細(xì)胞瘤的生長特點(diǎn)為浸潤性生長，與正常腦組織無明顯界限，多數(shù)不限于一個腦葉，向腦組織外呈指狀深入破壞腦組織，偏良性者生長緩慢，病程較長，自出現(xiàn)癥狀至就診時間平均兩年，惡性者瘤體生長快，病程短，自出現(xiàn)癥狀到就診時多數(shù)在3個月之內(nèi)，70-80％多在半年之內(nèi)。
目前國內(nèi)外對于膠質(zhì)瘤的治療普遍為手術(shù)、放療、化療、γ刀等。
手術(shù)治療基于膠質(zhì)瘤的生長特點(diǎn)，理論上手術(shù)不可能完全切除，生長在腦干等重要部位的腫瘤有的則根本不能手術(shù)，所以手術(shù)的治療目的只能局限于以下5個方面①明確病理診斷，②減少腫瘤體積降低腫瘤細(xì)胞數(shù)量，③改善癥狀緩解高顱壓癥狀；④延長生命并為隨后的其他綜合治療創(chuàng)造時機(jī)；⑤獲得腫瘤細(xì)胞動力學(xué)資料，為尋找有效治療提供依據(jù)。
放射治療幾乎是各型膠質(zhì)瘤的常規(guī)治療，但療效評價不一，除髓母細(xì)胞瘤對放療高度敏感，室管膜瘤中度敏感外，其他類型對放療均不敏感，有觀察認(rèn)為放療與非放療者預(yù)后相同。此外射線引起的放射性壞死對于腦功能的影響亦不可低估。γ-刀屬放射治療范疇，因腫瘤的部位、瘤體大小(一般限于3厘米以下)及瘤體對射線的敏感程度，治療范疇局限，目前認(rèn)為膠質(zhì)瘤，特別是性質(zhì)惡性的星形III-IV級或膠質(zhì)母細(xì)胞瘤均不適合采用γ-刀治療。
化療原則上可用于惡性腫瘤，但化療藥物限于血腦屏障及藥物的毒副作用，療效尚不肯定，常用BCNU、CCNU、VM-26等有效率均在30％以下。
(5)大腸癌大腸是結(jié)腸和直腸的總稱，大腸癌是指這兩個部位發(fā)生的惡性腫瘤。不同國家、不同種族的人的大腸癌的好發(fā)部位不同，亞洲與拉丁美洲直腸癌發(fā)病率較高，占大腸癌發(fā)病的70％，而歐洲與與南北美州結(jié)腸癌發(fā)病率較高，占大腸發(fā)病的60％左右。中國結(jié)腸癌發(fā)病大多集中在結(jié)腸遠(yuǎn)端乙狀結(jié)腸附近，占整個結(jié)腸癌發(fā)病的將近70％左右。中國直腸癌的發(fā)病部位一般較接近體表。80％以上發(fā)生在距離肛門7cm以下，通過指診就能發(fā)現(xiàn)，而在美國和西方國家的直腸癌發(fā)病部位則更接近乙狀結(jié)腸，在大多數(shù)國家中結(jié)腸癌男女發(fā)病率沒有明顯的區(qū)別，但直腸癌的發(fā)病率男性普遍高于女性。
由于結(jié)腸癌和直腸癌從發(fā)病因素、預(yù)防、治療和預(yù)后方面有較多的相似之處，所以將其統(tǒng)稱為大腸癌一并進(jìn)行討論。
大腸癌是威脅人們健康的惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)屬于4大常見惡性腫瘤之一，在發(fā)達(dá)國家大腸癌已成為死亡率位居第2位的惡性腫瘤，且大腸癌的發(fā)病率呈逐年升高趨勢。根據(jù)西方國家大腸癌的發(fā)病趨勢預(yù)測，每個活到70歲以上的人均有50％的概率發(fā)生大腸腫瘤(包括早期良性息肉，估計10％的良性息肉發(fā)展成癌)，每個人有6％的機(jī)會患大腸癌，對于婦女每17人中有1人可能患大腸癌。
近期研究表明，與大部分癌癥發(fā)病率逐年下降相反，世界上腸癌的發(fā)病率正以年均2％的速度上升，而上海的調(diào)查顯示，中國腸癌發(fā)病率的增速是世界平均水平的兩倍，達(dá)到年均4％。大腸癌已經(jīng)是癌癥中的首要?dú)⑹种?，每年?4萬人被確診。還有調(diào)查顯示，大腸癌的發(fā)病率有逐年上升的趨勢，并且發(fā)病年齡趨于年輕化，尤其經(jīng)濟(jì)較發(fā)達(dá)的沿海城市和東部地區(qū)。目前大腸癌在中國大部分地區(qū)已經(jīng)成為發(fā)病率上升最快的惡性腫瘤之一，也是中國常見腫瘤之一，占全國惡性腫瘤死因的第五位。大腸癌的病因除環(huán)境因素和生活方式有關(guān)外，遺傳因素也是大腸癌的重要病因之一。在臨床實(shí)踐中，大腸癌患者子女患大腸癌的危險性比一般人群高2～4倍，而進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在大腸癌患者一級親屬(包括父母、兄弟姐妹、子女)中，遺傳因素對大腸癌的影響達(dá)到16.8％，通過對遺傳性大腸癌的早期診斷和家屬的追蹤，及早發(fā)現(xiàn)癌前病變，提高早期診斷率，減少大腸癌的發(fā)病率有重要的指導(dǎo)意義。
大腸癌徹底根治性切除后5年生存率可高達(dá)70％左右。術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是其死亡的重要原因。目前公認(rèn)的治療大腸癌的方法是以手術(shù)為主的綜合治療，大腸癌的治療首先強(qiáng)調(diào)手術(shù)切除，并注重聯(lián)合術(shù)前化療、放療等綜合治療以提高手術(shù)切除率，降低手術(shù)后復(fù)發(fā)率，提高生存率。手術(shù)治療的原則是(1)盡量根治；(2)盡量保護(hù)盆腔植物神經(jīng)，保存患者的性功能、排尿功能和排便功能；(3)盡量保肛，提高生存質(zhì)量結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移灶手術(shù)切除效果滿意，許多研究已證實(shí)其5年生存率為25％～35％，其10年生存率也達(dá)20％，總的中位生存時間28～40個月，肝轉(zhuǎn)移灶切除后復(fù)發(fā)的患者，可再次手術(shù)。
(5)腎癌腎癌亦稱腎細(xì)胞癌、腎腺癌，是最常見的腎臟實(shí)質(zhì)惡性腫瘤，由于平均壽命延長和醫(yī)學(xué)影像學(xué)的進(jìn)步，腎癌的發(fā)病率比前增加，臨床上并無明顯癥狀而在體檢時偶然發(fā)現(xiàn)的腎癌日見增多，可達(dá)1/2～1/5。腎癌發(fā)病年齡多在45～60歲，以男性患者為多見，在泌尿男生殖系腫瘤中，發(fā)病率僅次于膀胱腫瘤。腎癌在臨床上常見有血尿、腰痛和腫塊等癥狀。
腎臟腫瘤的病因至今尚不清楚，各族及地理條件不是引起腎臟腫瘤的重要因素。有報道芳香族碳?xì)浠衔?、芳香胺、黃曲霉毒素、激素、放射線和病毒可引起腎癌；某些遺傳性疾病如結(jié)節(jié)性硬化癥、多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤等可合并腎細(xì)胞癌；腎細(xì)胞癌合并腎盂癌，可能與局部長期慢性刺激有關(guān)。有學(xué)者在1990年提出吸煙與腎癌的關(guān)系，戒煙者比從不吸煙者患腎癌的危險性高2倍，重度吸煙者較輕度吸煙者發(fā)病率更高，吸煙時間長短與患病率直接相關(guān)，并認(rèn)為吸煙者尿內(nèi)各種誘變活性物質(zhì)含量增高；煙草中的二甲基亞硝基胺導(dǎo)致腎癌，雖尚未得到臨床證實(shí)，但動物實(shí)驗(yàn)中已使家兔誘發(fā)了腎癌，因而他們認(rèn)為吸煙習(xí)慣加上其他危險因素如酗酒、職業(yè)接觸等，可進(jìn)一步增加發(fā)生腎癌的危險性。
腎癌患者的主訴和臨床表現(xiàn)多變，容易誤診為其他疾病。腎位置隱蔽，與外界主要的聯(lián)系是尿，因此血尿是發(fā)現(xiàn)腎癌最常見的病狀，但血尿的出現(xiàn)必須在腫瘤侵入腎盂后方有可能，因此已不是早期病狀。多年來，把血尿、疼痛和腫塊稱為腎癌的“三聯(lián)征”，大多數(shù)病人就診時已具有1個～2個病狀，三聯(lián)征俱全者占10％左右，很少有可能治愈。
1)血尿
血尿常為無痛性間歇發(fā)作肉眼可見全程血尿，間歇期隨病變發(fā)展而縮短。腎癌出血多時可能伴腎絞痛，常因血塊通過輸尿管引起。腎癌血尿的血塊可能因通過輸尿管形成條狀。血尿的程度與腎癌體積大小無關(guān)。腎癌有時可表現(xiàn)為持久的鏡下血尿。
2)腰痛腰痛為腎癌另一常見癥狀，多數(shù)為鈍痛，局限在腰部，疼痛常因腫塊增長充脹腎包膜引起，血塊通過輸尿管亦可引起腰痛已如前述。腫瘤侵犯周圍臟器和腰肌時疼痛較重且為持續(xù)性。
3)腫塊腫塊亦為常見癥狀，大約1/3～1/4腎癌患者就診時可發(fā)現(xiàn)腫大的腎臟。腎臟位置較隱蔽，腎癌在達(dá)到相當(dāng)大體積以前腫塊很難發(fā)現(xiàn)。一般腹部摸到腫塊已是晚期癥狀。
4)疼痛疼痛約見于50％的病例，亦是晚期癥狀，系腎包膜或腎盂為逐漸長大的腫瘤所牽扯，或由于腫瘤侵犯壓迫腹后壁結(jié)締組織、肌肉、腰椎或腰神經(jīng)所致的患側(cè)腰部持久性疼痛。
5)其他癥狀不明原因的發(fā)熱，或剛發(fā)覺時已轉(zhuǎn)移，有乏力、體重減輕、食欲不振、貧血、咳嗽和咳血等肺部癥狀。另外，腎腺癌的作用是由腫瘤內(nèi)分泌活動而引起的，包括紅細(xì)胞增多癥、高血壓、低血壓、高鈣血癥，發(fā)熱綜合癥。雖然這些全身性、中毒性和內(nèi)分泌的作用是非特殊性的，但約30％的病人首先有許多混合的表現(xiàn)。因而是有價值的線索，這種發(fā)現(xiàn)考慮為腫瘤的系統(tǒng)作用。
腎癌可通過直接浸潤、淋巴途徑和血運(yùn)三種途徑轉(zhuǎn)移。肺和骨髂是常見的轉(zhuǎn)移部位。
1)直接浸潤腎癌逐漸長大，穿破腫瘤包膜朝四周擴(kuò)散，向內(nèi)侵入腎盂，向外突破腎包膜侵及腎周脂肪和筋膜，蔓延到鄰近組織如結(jié)腸、腎上腺、肝、脾及橫膈等。
2)淋巴途徑據(jù)統(tǒng)計15％～30％的腎癌可經(jīng)淋巴途徑轉(zhuǎn)移。左側(cè)轉(zhuǎn)移到腎蒂、主動脈前和左外側(cè)淋巴結(jié)；右側(cè)累及腎門附近、下腔靜脈前淋巴結(jié)、主動脈和下腔靜脈間淋巴結(jié)。
3)血運(yùn)轉(zhuǎn)移是腎癌重要的轉(zhuǎn)移途徑，癌細(xì)胞侵犯靜脈，從毛細(xì)血管、腎內(nèi)靜脈至腎靜脈，在靜脈內(nèi)形成瘤栓，可進(jìn)一步伸入下腔靜脈到達(dá)右心房，并向肺、骨髂和其他臟器，引起廣泛的血運(yùn)轉(zhuǎn)移。
1)一般檢查血尿是重要的癥狀，紅細(xì)胞增多癥多發(fā)生于3％～4％；亦可發(fā)生進(jìn)行性貧血。雙側(cè)腎腫瘤，總腎功能通常沒有變化，血沉增高。某些腎癌患者并無骨骼轉(zhuǎn)移，卻可有高血鈣的癥狀以及血清鈣水平的增高，腎癌切除后癥狀迅速解除，血鈣亦回復(fù)正常。有時可發(fā)展到肝功能不全，如將腫瘤腎切除，可恢復(fù)正常。
2)X線造影術(shù)為診斷腎癌的主要手段(a)X線平片X線平片可以見到腎外形增大，輪廓改變，偶有腫瘤鈣化，在腫瘤內(nèi)局限的或廣泛的絮狀影，亦可在腫瘤周圍成為鈣化線，殼狀，尤其年輕人腎癌多見。
(b)靜脈尿路造影，靜脈尿路造影是常規(guī)檢查方法，由于不能顯示尚未引起腎孟腎盞未變形的腫瘤，以及不易區(qū)別腫瘤是否腎癌。腎血管平滑肌脂肪瘤，腎囊腫，所以其重要性下降，必須同時進(jìn)行超聲或CT檢查進(jìn)一步鑒別。但靜脈尿路造影可以了解雙側(cè)腎臟的功能以及腎盂腎盞輸尿管和膀胱的情況，對診斷有重要的參考價值。
(c)腎動脈造影腎動脈造影可發(fā)現(xiàn)泌尿系統(tǒng)造影未變形的腫瘤，腎癌表現(xiàn)有新生血管，動靜脈瘺，造影劑池樣聚集(Pooling)包膜血管增多。血管造影變異大，有時腎癌可不顯影，如腫瘤壞死，囊性變，動脈栓塞等。腎動脈造影必要時可向腎動脈內(nèi)注入腎上腺素正常血管收縮而腫瘤血管無反應(yīng)。
在比較大的腎癌。選擇性腎動脈造影時亦可隨之進(jìn)行腎動脈栓塞術(shù)，可減少手術(shù)中出血腎癌不能手術(shù)切除而有嚴(yán)重出血者可行腎動脈栓塞術(shù)作為姑息性治療。
3)超聲掃描超聲檢查是最簡便無創(chuàng)傷的檢查方法，可作為常規(guī)體檢的一部分。腎臟內(nèi)超過1cm腫塊即可被超聲掃描所發(fā)現(xiàn)，重要的是鑒別腫塊是否是腎癌。腎癌為實(shí)性腫塊，一般為低回聲，腎癌的境界不甚清晰，這一點(diǎn)和腎囊腫不同。腎內(nèi)占位性病變都可能引起腎盂、腎盞、腎竇脂肪變形或斷裂。腎乳頭狀囊腺癌超聲檢查酷似囊腫，并可能有鈣化。腎癌和囊腫難以鑒別時可以穿刺，在超聲引導(dǎo)下穿刺是比較安全的。
4)CT掃描CT對腎癌的診斷有重要作用，可以發(fā)現(xiàn)未引起腎盂腎盞改變和無病狀的腎癌，可準(zhǔn)確的測定腫瘤密度，并可在門診進(jìn)行，CT可準(zhǔn)確分期。
5)核磁共振成像(簡稱MRI)磁共振成像檢查腎臟是比較理想的。腎門和腎周間隙脂肪產(chǎn)生高信號強(qiáng)度。腎外層皮質(zhì)為高信號強(qiáng)度，其中部髓質(zhì)為低信號強(qiáng)度，可能由于腎組織內(nèi)滲透壓不同，兩部分對比度差50％，這種差別可隨恢復(fù)時間延長和水化而縮小，腎動脈和靜脈無腔內(nèi)信號，所以為低強(qiáng)度。集合系統(tǒng)有尿?yàn)榈蛷?qiáng)度。腎癌的MRI變異大，由腫瘤血管，大小，有無壞死決定。MRI不能很好地發(fā)現(xiàn)鈣化灶，因其質(zhì)子低密度。MRI對腎癌侵犯范圍、周圍組織包膜，肝、腸系膜、腰肌的改變?nèi)菀装l(fā)現(xiàn)查明。尤其是腎癌出現(xiàn)腎靜脈、下腔靜脈內(nèi)癌栓和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。
只要患者身體狀況允許及可以耐受手術(shù)，各期腎癌患者均應(yīng)首選手術(shù)治療。根據(jù)患者病情不同及分期不同可采取不同的手術(shù)方式。放射治療對腎癌的治療尚無重要作用。多數(shù)學(xué)者不主張腎癌進(jìn)行放射治療，僅可作為手術(shù)前后的輔助治療。腫瘤短期內(nèi)增長快，毒性癥狀明顯者，術(shù)前放療可使腫瘤體積縮小，減少術(shù)中癌細(xì)胞擴(kuò)散，有利于手術(shù)操作。對II、III期腎癌或病變已擴(kuò)散到鄰近器官，或腫瘤切除不徹底的病例，術(shù)后放療可減輕局部復(fù)發(fā)。同時對于不能手術(shù)切除的晚期腎癌，放療可減輕骨轉(zhuǎn)移的局部疼痛、血尿和緩解毒性癥狀。
免疫治療分為非特異性免疫和特異性免疫，但各種免疫治療都處在試驗(yàn)階段，雖有一定療效，但仍需進(jìn)一步觀察和研究。非特異性免疫最常用的是卡介苗(簡稱BCG)，可通過免疫活性細(xì)胞來擴(kuò)大細(xì)胞及抗體免疫反應(yīng)的效應(yīng)，用以增強(qiáng)人體免疫力及抗腫瘤能力。干擾素是目前非特異性免疫治療腎癌患者較有效的藥物。主要調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)使機(jī)體免疫功能，激活T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和釋放淋巴因子，進(jìn)而活化巨噬細(xì)胞，加強(qiáng)殺傷腫瘤作用。因藥物來源問題，臨床上主要應(yīng)用基因重組干擾素a治療。有效率20％。主要副作用為流感樣癥狀，如發(fā)熱、寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、食欲下降、嘔吐等。白細(xì)胞介素-2(簡稱IL-2)也屬非特異性免疫治療，能誘導(dǎo)LAK細(xì)胞的抗腫瘤活性，溶解多種腫瘤細(xì)胞，造成腫瘤細(xì)胞的變性壞死。激素同免疫制劑及化療藥物聯(lián)合應(yīng)用時，有協(xié)同作用，能增加晚期腎癌的療效。臨床應(yīng)用中以安宮黃體酮為首選，其他可應(yīng)用丙酸睪丸酮、羥基孕酮、潑尼松龍等。腎癌的化療效果較差，往往與干擾素聯(lián)合應(yīng)用。
綜上所述，目前大部分類型的腫瘤治仍然沿用早期診斷，以手術(shù)為主、輔之以放療、化療，加以其他生物治療，物理治療等綜合手段進(jìn)行治療。但是，迄今為止，尚未見關(guān)于腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療各種實(shí)體瘤中作為增效劑的新用途方面的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療各種實(shí)體瘤中作為增效劑的新用途。
(一)本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思中國藥物研發(fā)具有悠久的歷史，在預(yù)防、診斷、治療等各方面都積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是中國醫(yī)藥界目前的一項緊迫任務(wù)，而抓緊尋找有效的增效劑、改進(jìn)和提高現(xiàn)有的治療手段也是一條有效的途徑。因此，本發(fā)明通過對腫瘤細(xì)胞核單抗以及相關(guān)內(nèi)容的系統(tǒng)研究，并篩選和證明該腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療各種實(shí)體瘤中作為增效劑的新用途。
目前外科治療仍然是臨床上大多數(shù)腫瘤的首選治療方法，但部分患者雖然腫瘤屬于早期，但患者的身體狀況無法承受常規(guī)手術(shù)治療，大部分患者明確診斷時已屬于中晚期，由于患者的腫瘤負(fù)荷大，病灶多，分布于多個部位；或者因?yàn)榛颊叩男姆蔚戎匾K器功能無法承受手術(shù)，因而有70％～80％的患者入院時已經(jīng)失去了常規(guī)手術(shù)根治切除的機(jī)會，而放療、化療等輔助治療手段往往因?yàn)槎靖狈磻?yīng)患者難以完成，因此對失去手術(shù)機(jī)會或不能承受手術(shù)的患者如何快速消除腫瘤負(fù)荷，提高生活質(zhì)量，是近年來的研究熱點(diǎn)。而針對腫瘤的物理治療，尤其是一些近年發(fā)展起來的新技術(shù)、新方法，有著其他傳統(tǒng)治療無法替代的優(yōu)勢(如氬氦刀，伽瑪?shù)兜?，這些新型的治療手段具備精確控制、微創(chuàng)和影像學(xué)指導(dǎo)靶向摧毀腫瘤的臨床特點(diǎn)，能夠快速準(zhǔn)確的滅活腫瘤細(xì)胞，消除腫瘤負(fù)荷，且對患者損傷小，并發(fā)癥少，改善臨床癥狀顯著，使得許多失去了常規(guī)手術(shù)根治切除機(jī)會的腫瘤患者重新獲得治療的機(jī)會。
但是物理治療在臨床實(shí)踐的過程中也遇到許多問題，諸如如何在最大限度摧毀瘤灶的同時避免對周圍組織器官的損傷；腫瘤發(fā)生的早期往往就已經(jīng)出現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶的轉(zhuǎn)移，而物理治療只能針對腫瘤局部病灶，而微小轉(zhuǎn)移灶的清除必須依賴于其他治療方法；如何手術(shù)后瘤灶進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化評價；如何與其他治療方法相結(jié)合以提高患者生存率等等，都需要我們今后進(jìn)行更多的研究。而惡性腫瘤作為一種全身性疾病，不是某一種治療方法所能治愈的，而物理治療作為一種重要的腫瘤局部治療手段尚不能完全代替手術(shù)根治，應(yīng)同時結(jié)合其它治療方法或者藥物進(jìn)行綜合性治療，以期獲得最好的治療效果，提高生活質(zhì)量與遠(yuǎn)期生存率。
放射性標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗是一種用于導(dǎo)向治療實(shí)體瘤的新型單抗。它與以往采用的靶向腫瘤表面抗原的單抗，除了具有高特異性，靶向性和低毒副作用的優(yōu)點(diǎn)之外還具有以下的優(yōu)點(diǎn)(1)廣譜性，以往對于不同種類的腫瘤，需要采用相對應(yīng)的不同品種的單抗進(jìn)行治療。放射性標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與之不同，它利用惡性腫瘤的具有大量壞死組織特點(diǎn)，特異結(jié)合腫瘤壞死區(qū)的細(xì)胞核，從而對多種實(shí)體瘤，如胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肝癌、肺癌等均有效；(2)持久有效性，當(dāng)抗體攜帶的放射性核素將腫瘤組織殺死后抗體也隨之代謝，故一般的腫瘤細(xì)胞膜單抗只到達(dá)實(shí)體瘤表面，療效差；而放射性標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗被注入人體后，可進(jìn)入各種實(shí)體瘤壞死的核心部位，殺傷壞死區(qū)邊緣的腫瘤活細(xì)胞，形成新的壞死，使更多的抗體結(jié)合，周而復(fù)始，使腫瘤壞死區(qū)不斷擴(kuò)大，放射性核素在腫瘤部位不斷積聚，由內(nèi)向外摧毀腫瘤；(3)臨床實(shí)用性，放射性標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗屬于人鼠嵌合體，消除了鼠源性單抗治療過程中通常發(fā)生的HAMA現(xiàn)象(即人體對鼠源性抗體產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)，使治療無法多次進(jìn)行，嚴(yán)重影響治療效果)，從而使放免導(dǎo)向治療惡性腫瘤的臨床使用成為現(xiàn)實(shí)。
但是由于實(shí)體腫瘤的細(xì)胞被致密的基質(zhì)包裹，單純使用抗體難以穿透這一屏障；大多數(shù)實(shí)體腫瘤都存在淋巴回流障礙，導(dǎo)致間質(zhì)內(nèi)壓力升高，阻止了抗體進(jìn)入腫瘤實(shí)質(zhì)。而小部分進(jìn)入實(shí)體腫瘤內(nèi)部的抗體，首先遇到的是血管周圍的腫瘤細(xì)胞而被結(jié)合，使得抗體無法到達(dá)距離血管較遠(yuǎn)的腫瘤細(xì)胞。因此目前應(yīng)用抗體治療大體積的實(shí)體腫瘤的療效仍不理想，很多研究建議對于實(shí)體腫瘤的抗體治療，主要應(yīng)考慮選擇用于腫瘤的微小殘留或微轉(zhuǎn)移病灶中，但這種疾病的治療需要長時間及大規(guī)模的多中心臨床試驗(yàn)才能評估其療效，這也使抗體治療在實(shí)體瘤的臨床應(yīng)用及推廣上受到了一定的限制。
就以上針對兩種治療方法的分析而言，兩種方法單獨(dú)應(yīng)用治療腫瘤都有不足之處，因此本發(fā)明人經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)積累和文獻(xiàn)資料的檢索之后，利用物理治療和腫瘤細(xì)胞核單抗針對腫瘤治療的互補(bǔ)性，提出以腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療實(shí)體瘤中作為增效劑的用途，該發(fā)明利用物理治療手段對于腫瘤局部可見病灶的進(jìn)行直接有效的摧毀，且同時產(chǎn)生大量的腫瘤壞死細(xì)胞，然后利用腫瘤細(xì)胞核特異性抗體對于腫瘤的微小殘留或微轉(zhuǎn)移病灶的特異性結(jié)合，達(dá)到惡性實(shí)體瘤患者根治的效果。
本發(fā)明對以上的構(gòu)思進(jìn)行了逐一驗(yàn)證，研究結(jié)果均證明本構(gòu)思的正確性。
(二)作為增效劑的攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗腫瘤細(xì)胞核單抗識別的是腫瘤中的壞死組織，并能夠定向地與該腫瘤壞死組織結(jié)合；在該抗體攜帶殺傷性核素的情況下，則該核素能夠殺傷該腫瘤壞死組織周圍的腫瘤組織；而正常的組織中沒有壞死組織，所以正常的組織不會被殺傷。也就是說，攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合，產(chǎn)生了協(xié)同抗腫瘤作用，因此核素標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗是物理療法的增效劑，能夠顯著克服物理療法的缺點(diǎn)，適合臨床多種實(shí)體瘤的治療。
親代雜交細(xì)胞系TNT-1是由Alan Epstein博士建立的，利用Raji Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞系(用來生產(chǎn)雜交瘤的免疫原)，對該細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核提取。對8周大的Balb/c小鼠用細(xì)胞核提取物進(jìn)行免疫。在最后一次免疫的4天后，處死小鼠，并在無菌條件下取出脾臟。脾臟被處理成單細(xì)胞混懸液，并和8-azaguanine-resistant鼠骨髓瘤NS-1在40％聚乙二醇1540中混合構(gòu)建融合細(xì)胞。然后將混合的細(xì)胞被放在含有次黃嘌呤、氨喋呤和胸苷的RPMI-1640培養(yǎng)基的96孔組織細(xì)胞板上進(jìn)行培養(yǎng)。挑選出對固定Raji淋巴瘤細(xì)胞的核免疫熒光反應(yīng)呈陽性的鼠源性TNT單克隆抗體(簡稱muTNT-MAb)融合細(xì)胞分泌株，存儲在液氮中。
合成引物，利用反轉(zhuǎn)錄技術(shù)，從TNT-1中擴(kuò)增出的muTNT-MAb重鏈和輕鏈可變區(qū)基因序列為人抗體重鏈和輕鏈的恒定區(qū)基因序列(gammal鏈和kappa鏈)融合，構(gòu)建含腫瘤細(xì)胞核人鼠嵌核合單抗(簡稱chTNT-MAb)全基因序列的真核表達(dá)載體，將載體轉(zhuǎn)染入NS0細(xì)胞株，構(gòu)建最終的chTNT-MAb工程細(xì)胞株(簡稱NS0-chTNT-MAb)。將NS0-chTNT-MAb大規(guī)模擴(kuò)增表達(dá)目的蛋白，提取細(xì)胞表達(dá)上清，經(jīng)一系列純化步驟后獲得chTNT-MAb原液，原液檢定合格后進(jìn)行放射性核素標(biāo)記，獲得最終的產(chǎn)品及放射性核素標(biāo)記的chTNT-MAb。
最佳的放射性核素標(biāo)記的chTNT-MAb是放射性核素碘131標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核人鼠嵌核合單抗。
所述的核素是能發(fā)射β射線的核素，包括碘131(簡稱131I)、錸188、釔90或碘125(簡稱125I)等中的一種或多種，優(yōu)選碘131、錸188或釔90等中的一種或多種，最優(yōu)選是碘131或釔90等中的一種或多種。
攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗是采用給腫瘤細(xì)胞核單抗標(biāo)記核素的辦法，是包括氯胺T法、Iodogen法或其他的現(xiàn)有的有效標(biāo)記方法等中的一種或多種。
物理療法的機(jī)理是利用物理方法，如加熱、制冷、超聲等，使腫瘤局部組織壞死；物理療法是包括放射療法、冷凍療法、氬氦刀靶向療法、微波療法、高效聚焦超聲療法、電化學(xué)療法、激光療法、射頻熱凝療法、電穿孔療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、局部乙酸注射療法、動脈栓塞療法或賽博刀療法等中的一種或多種，優(yōu)選放射療法、氬氦刀靶向療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、局部乙酸注射療法、動脈栓塞療法或射頻熱凝療法等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選氬氦刀靶向療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、動脈栓塞療法或射頻熱凝療法等中的一種或多種，最優(yōu)選的氬氦刀靶向療法、局部無水酒精注射療法或射頻熱凝療法等中的一種或多種。
所述的實(shí)體瘤是目前臨床所謂的實(shí)體瘤一般指具有影像學(xué)證據(jù)，腫瘤的細(xì)胞被致密的基質(zhì)包裹的腫瘤。
本說明書所述的實(shí)體瘤包括鼻咽癌、食管癌、頭頸部鱗癌、腦瘤、肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、直腸癌、結(jié)腸癌、腦膠質(zhì)瘤、淋巴瘤或?qū)m頸癌等中的一種或多種，優(yōu)選肺癌、肝癌、腦瘤、直腸癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤、胃癌或淋巴瘤等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選肺癌、肝癌、直腸癌、結(jié)腸癌或腦膠質(zhì)瘤等中的一種或多種。
攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗一般是在物理治療后給藥，包括經(jīng)靜脈或動脈等全身給藥方式，或者是經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行局部給藥；優(yōu)選經(jīng)導(dǎo)管局部給藥方式。
完成了抗體的生物活性檢測與藥代動力學(xué)研究，應(yīng)用已建荷瘤動物模型，通過核素標(biāo)記抗體片段的瘤內(nèi)注射、靜脈注射、肌肉注射方式等目前已公開的常規(guī)方法，已檢測抗體的抗原結(jié)合特異性、血液中的半衰期、組織闊清、細(xì)胞內(nèi)滯留、殺瘤活性等。
本發(fā)明下文所述的腫瘤細(xì)胞核單抗(簡稱chTNT-MAb)沒有特別注明的，一般均是指核素標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗。
(三)作為增效劑的攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗的聯(lián)合用藥本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗作為增效劑，可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合用于科學(xué)研究、疾病治療或疾病診斷等領(lǐng)域。
可以與本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗聯(lián)用的腫瘤治療藥物的非限制性例子包括以下(1)影響核酸生物合成的藥物甲氨蝶呤、巰嘌呤、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、羥基脲等中的一種或多種；(2)影響DNA結(jié)構(gòu)與功能的藥物氮芥、環(huán)磷酰胺、噻替派、白消安、博萊霉素、絲裂霉素、順鉑等中的一種或多種；(3)干擾轉(zhuǎn)錄過程和阻止RNA合成的藥物放線菌素D、阿霉素、多柔比星、柔紅霉素等中的一種或多種；(4)抑制蛋白質(zhì)合成與功能的藥物長春堿類、三尖杉酯堿、紫杉醇類、L-門冬酰胺酶等中的一種或多種；(5)影響激素平衡的藥物雌激素、雄激素、腎上腺皮質(zhì)激素、他莫昔芬等中的一種或多種；(6)酪氨酸酶抑制劑；(7)其他腫瘤特異性抗體。
(四)作為增效劑的攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗及其組合物的使用方法與要求本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于治療、診斷、檢測和研究相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、檢測試劑、診斷試劑等，尤其是藥物。
在具體使用方面，本發(fā)明所述的腫瘤細(xì)胞核單抗能夠單獨(dú)使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解腫瘤細(xì)胞核單抗的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物、獸用藥或人類用藥等中的一種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
本文使用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等等及其組合物。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇、或氯化鈉。藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液，它們增強(qiáng)了該腫瘤細(xì)胞核單抗的有效期或效力。
從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；崩解劑，如瓊脂、碳酸氫鈉或微晶纖維素等中的一種或多種；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽或明膠等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。
例如，將活性組分腫瘤細(xì)胞核單抗溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水和格林溶液等)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油和玉米油、丙二醇等)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇、苯酚等)或滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇、葡萄糖等)等中的一種或多種。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，水楊酸鈉、乙酸鈉等)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)或止痛劑(例如，苯甲醇等)等中的一種或多種。
本發(fā)明所述及的腫瘤細(xì)胞核單抗還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對動物尤其是哺乳動物包括人或其他動物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式。這些形式包括例如液體、半固體和固體劑量形式；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的腫瘤細(xì)胞核單抗為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。所述的本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗的組合物的各種形式，例如液體溶液(例如注射液和輸注液)、分散液或懸液、片劑、丸劑、粉劑、脂質(zhì)體和栓劑。推薦的形式取決于給藥方式和治療用途。典型的推薦組合物是注射液或輸注液的形式，例如與用其它基因工程藥物對人進(jìn)行治療所用的組合物類似的組合物。推薦的給藥方式是非腸道的(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi))。最優(yōu)選為影像學(xué)指導(dǎo)下的腫瘤組織局部注射或者靜脈注射該腫瘤細(xì)胞核單抗。
腫瘤細(xì)胞核單抗的藥物組合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的該腫瘤細(xì)胞核單抗與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該腫瘤細(xì)胞核單抗加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動性。通過在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽和明膠)可以達(dá)到注射組合物的延長吸收。
(五)作為增效劑的攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的腫瘤細(xì)胞核單抗及其組合物制備的用于實(shí)體瘤及其相關(guān)病癥的治療、診斷、檢測或科學(xué)研究的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠進(jìn)行實(shí)體瘤及其相關(guān)病癥的治療、診斷、檢測或科學(xué)研究；按照醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療、診斷、檢測或保健，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療、診斷、檢測或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療、診斷、檢測或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。
在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級或藥用級的物料。
腫瘤細(xì)胞核單抗的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括混懸劑、乳劑、溶液劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑等)等，采取注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射、皮下注射等)、粘膜透析等給藥途徑進(jìn)行實(shí)體瘤的治療作用的治療、診斷、檢測或科學(xué)研究以及治療腫瘤或移植排斥及其相關(guān)病癥的治療、診斷、檢測或科學(xué)研究。
本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是靜脈內(nèi)注射或輸液。但是，技術(shù)人員會理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些實(shí)施方案中，該活性化合物可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物、透皮貼和微囊傳遞系統(tǒng)。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯和聚乳酸等。制備這種制劑的許多方法均已申請專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson編輯，Marcel Dekker，Inc.，紐約，1978)。
制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑等；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等。
以上所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是混懸劑、乳劑、溶液劑或注射劑等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選乳劑、溶液劑或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選注射劑。
用于患者時，本發(fā)明所述的chTNT-MAb的單劑量為5～1000mg，該劑量或用量通常根據(jù)處方組成及重量配比、患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。
根據(jù)治療的對象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗的每日劑量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動物、尤其是成年人(60kg體重)，所述腫瘤細(xì)胞核單抗的單劑量約為10～1200mg，優(yōu)選約10mg，優(yōu)選每周給藥1～3次。優(yōu)選每療程1～3周?？梢哉{(diào)整劑量單位以提供最佳所需反應(yīng)(例如治療等)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時間內(nèi)給與幾個均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式指適于欲治療的哺乳動物受治療者的單元劑量的物理分離單位；每個單位含有預(yù)定量的計算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性化合物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格由以下確定并直接取決于以下(a)該活性化合物的獨(dú)特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個體敏感性活性化合物的技術(shù)中的內(nèi)在限制。
本發(fā)明的藥用組合物可以包括“治療有效量”或“預(yù)防有效量”的本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗?！爸委熡行Я俊笔侵冈诒匾膭┝亢蜁r間下有效達(dá)到所需治療效果的量。腫瘤細(xì)胞核單抗的治療有效量可以根據(jù)諸如個體的病況、年齡、性別和體重以及該腫瘤細(xì)胞核單抗在該個體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該腫瘤細(xì)胞核單抗的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量?！邦A(yù)防有效量”是指在必要劑量和時間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因?yàn)轭A(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是0～20mg/kg，更優(yōu)選為0.1～1mg/kg。應(yīng)注意劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說用于患者時，本發(fā)明所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時間根據(jù)個體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。
綜上所述，本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核單抗及其組合物可用于制備實(shí)體瘤的治療以及腫瘤或移植排斥及其相關(guān)病癥的治療、診斷、檢測或科學(xué)研究的產(chǎn)品，優(yōu)選藥物、試劑和食品，進(jìn)一步優(yōu)選藥物和試劑，最優(yōu)選藥物。
(六)技術(shù)特長本發(fā)明的研究結(jié)果，可深入開發(fā)為具有臨床應(yīng)用前景的治療多種實(shí)體瘤的產(chǎn)品如設(shè)備、新藥、試劑等，具有療效確切、低毒副作用和微創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，與國內(nèi)外同類產(chǎn)品相比具有顯著的優(yōu)勢。
腫瘤的死亡率在全世界各種疾病的死亡率中居于榜首，惡性腫瘤已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人們健康和生命的殺手。據(jù)不完全統(tǒng)計，在中國，每年有200萬新發(fā)惡性腫瘤患者，其中150萬人死于惡性腫瘤。在美國，每年診斷為腫瘤的患者為100萬，死于腫瘤者達(dá)54.7萬，用于腫瘤的治療費(fèi)用1020億美元。腫瘤是多發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜疾病，目前仍用手術(shù)、放療、化療、生物治療等綜合手段進(jìn)行治療。有資料顯示，今后10年抗腫瘤生物藥物會急劇增加，2004年美國共有超過500種新藥在進(jìn)行抗腫瘤的臨床試驗(yàn)，其中生物技術(shù)類產(chǎn)品占近一半，可見生物技術(shù)類抗腫瘤藥物在腫瘤的防治中具有十分重要的意義，其中抗體類藥物的發(fā)展尤為引人注目。
放射免疫治療(Radioimmunotherapy，簡稱RIA)即是選擇與惡性腫瘤抗原特異性結(jié)合的單抗，利用基因工程手段進(jìn)行商業(yè)化大量生產(chǎn)，然后連接上對腫瘤有殺傷性的負(fù)載如放射性核素131I，這種具有靶向性的放療技術(shù)又叫生物導(dǎo)向治療技術(shù)或，具有靶向性好、毒性小等優(yōu)點(diǎn)，非常適合用于腫瘤的內(nèi)放射治療。多年來，人們嘗試過采用針對腫瘤細(xì)胞膜抗原的單抗進(jìn)行放射免疫治療，但是針對腫瘤細(xì)胞膜抗原的單抗存在如下各種問題(1)目前還沒有發(fā)現(xiàn)所有腫瘤共同的抗原，不管是腫瘤特異性抗原(TSA)還是腫瘤相關(guān)性抗原(簡稱TAA)，都只表達(dá)于部分腫瘤，因此，對不同的腫瘤需要不同的單抗；(2)由于腫瘤的不均勻性，只有部分腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)抗原，該類單抗注入體內(nèi)后，只有少量單抗聚集在腫瘤部位，放射性核素積聚較少，因此抗腫瘤細(xì)胞膜抗原的單抗用于實(shí)體瘤的治療效果不夠理想，探索治療其他腫瘤抗原治療實(shí)體瘤的新方法就顯得十分必要。
本發(fā)明提供具有腫瘤特異性結(jié)合活性的的腫瘤細(xì)胞核單抗，該抗體經(jīng)放射性標(biāo)記后可在體內(nèi)特異性的靶向腫瘤細(xì)胞進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞。
腫瘤細(xì)胞核單抗是針對腫瘤壞死組織的新型抗體，將腫瘤壞死組織作為抗原的靶向治療技術(shù)是一種全新的通用型抗體靶向技術(shù)，具有以下特點(diǎn)(1)是一種具有廣譜的抗腫瘤作用的腫瘤細(xì)胞核單抗，動物實(shí)驗(yàn)和初步臨床試驗(yàn)表明，對于多種實(shí)體瘤，如肝、肺、結(jié)腸、乳腺、前列腺、胰腺等癌癥均有效；(2)該單抗可將其荷載的放射性核素輸送到實(shí)體腫瘤壞死核心，由內(nèi)向外摧毀腫瘤，放射性核素不斷積聚，大大提高放射療法治療效果；(3)采用人鼠嵌合型單抗，可消除使用鼠源性單抗而產(chǎn)生的人抗鼠抗體反應(yīng)(簡稱HAMA反應(yīng))，使放免導(dǎo)向治療惡性腫瘤可以應(yīng)用于臨床；(4)腫瘤特異性高，因?yàn)檎＝M織細(xì)胞膜完整，沒有壞死的細(xì)胞組織，因此不會和TNT抗體結(jié)合；(5)能大規(guī)模制備，通過以抗Fc段抗體進(jìn)行親和層析，葡萄球菌A蛋白可方便地純化，而且檢測更加方便、特異、敏感，使制備成本和使用成本明顯減低；(6)直接用哺乳動物工程細(xì)胞生產(chǎn)，不僅更接近天然分子的狀況適合機(jī)體吸收，而且避免了AIDS、肝炎病毒及其它病源微生物的污染；(7)抗體分子與其他基因工程類藥物相比，半衰期更長，更適合于體內(nèi)的應(yīng)用，甚至可穿過胎盤發(fā)揮藥效。
目前，臨床上使用的大部分實(shí)體瘤的治療劑均為非特異性抑制劑，特異性低，毒副作用強(qiáng)，本發(fā)明人所制備的腫瘤細(xì)胞核單抗可以起特異性地實(shí)體瘤的治療作用，毒副作用小，安全可靠，而且可以在體外進(jìn)行大規(guī)模制備，生產(chǎn)成本較低，因此，本發(fā)明可以為開發(fā)新的腫瘤治療方法研究打下良好的基礎(chǔ)，有利于推廣應(yīng)用，具有良好的臨床應(yīng)用和科學(xué)研究的價值及良好的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。


圖1是本發(fā)明TNT作用原理示意圖；其中，1表示TNT單抗穿過“滲漏”的細(xì)胞膜；2表示TNT單抗與細(xì)胞核組織結(jié)合；3表示死亡或者頻死、滲漏的腫瘤細(xì)胞；4表示暴露的腫瘤細(xì)胞核組織。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明公開了腫瘤細(xì)胞核單抗的主要臨床前研究資料，包括藥效學(xué)，毒理學(xué)等安全性、有效性評價，以及應(yīng)用該抗體作為增效劑，臨床通過多種物理治療方法治療惡性實(shí)體瘤患者的研究資料，以滿足人們疾病治療、科學(xué)研究、藥物開發(fā)等方面的需要。
下面，以作為增效劑的攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗制劑的幾個具體應(yīng)用為例，進(jìn)一步闡述該抗體在新用途中的應(yīng)用。
本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取腫瘤細(xì)胞核單抗，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含腫瘤細(xì)胞核單抗10～100mg，-20℃保存待用。
本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取腫瘤細(xì)胞核單抗，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含腫瘤細(xì)胞核單抗10～100mg，-20℃保存待用。
制備的粉針劑用前加入適量注射用水或者生理鹽水充分溶解后，采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤埃?80℃保存待用。
本發(fā)明制備水針劑時，以注射用水、生理鹽水等作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中、人血白蛋白的一種或幾種。每支含腫瘤細(xì)胞核單抗5～100mg，-20℃保存待用。
制備的水針劑用前取出室溫充分溶解約1小時，然后采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤埃?80℃保存待用。
下面通過實(shí)施例來進(jìn)一步具體說明本發(fā)明的內(nèi)容，所述的實(shí)施例是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗藥效學(xué)活性測定(1)藥物131I-chTNT-MAb注射液，2ml/瓶，放射性濃度50mCi/ml，放化純＞95％，免疫活性＞50％，無菌，熱原檢查合格。使用時用4％人血白蛋白生理鹽水溶液稀釋到需要的濃度。
(2)動物荷瘤裸鼠。
每種荷瘤裸鼠隨機(jī)分組，每組6只。
(3)方法本實(shí)驗(yàn)選擇荷人結(jié)腸癌裸鼠動物模型、荷人肝癌裸鼠動物模型和荷人宮頸癌裸鼠動物模型為研究對象，裸鼠動物模型腹腔注入不同劑量的131I-chTNT-MAb注射液后，使用SPECT儀觀察該藥在腫瘤中的定位和濃集的情況，并分別觀察治療組和對照組腫瘤生長的情況，通過測定腫瘤大小和稱重，定量和計算腫瘤生長抑制率，以獲得注入不同計量131I-chTNT-MAb對腫瘤抑制的作用。
(4)結(jié)果由腹腔注入200μCi和400μCi的131I-chTNT-MAb注射液后，荷人肝癌裸鼠在30天內(nèi)無一只死亡(n＝6)，而注入600μCi131I-chTNT-MAb的荷人肝癌裸鼠在30天內(nèi)卻有4只死亡(n＝6)。
在荷人結(jié)腸癌、荷人肝癌和荷人宮頸癌裸鼠動物模型實(shí)驗(yàn)中，腫瘤組織/非腫瘤組織比(簡稱T/NT)在第一天已達(dá)1.4±0.1(n＝12)，在第三天可高達(dá)9.2至16.4，直到第二十一天或三十天腫瘤組織中仍可發(fā)現(xiàn)明顯的放射性濃集。注入50μCi、100μCi、150μCi、300μCi和450μCi的131I-chTNT-MAb注射液后，各組腫瘤生長抑制率分別是25.0、27.1、31.9、44.1和49.5(腸癌裸鼠)；15.4、29.2、36.5、49.7和40.6(肝癌裸鼠)。
(5)結(jié)論131I-chTNT-MAb對人結(jié)腸癌、人肝癌和人宮頸癌裸鼠動物模型的腫瘤組織具有親和性，能很好定位于腫瘤組織且有較高的瘤/非癌之比。
每裸鼠注入150μCi(相當(dāng)于人使用等效劑量0.83mCi/kg)或150μCi以上劑量的131I-chTNT-MAb治療組具有確切療效(對人結(jié)腸癌、人肝癌和人宮頸癌裸鼠動物模型的腫瘤抑制率都大于30％)。每裸鼠注入450μCi(相當(dāng)于人使用等效劑量2.49mCi/kg)或450μCi以下劑量的131I-chTNT-MAb治療組被認(rèn)為是安全的，超過此劑量引起裸鼠生存期縮短，體重及生命體征下降。
因此，經(jīng)過131I-chTNT-MAb在荷瘤裸鼠動物模型的初步藥效學(xué)研究表明131I-chTNT-MAb抗腫瘤作用確切，其有效劑量的范圍是0.83mCi/kg到2.49mCi/kg，相當(dāng)于58.19mCi/人到174.56mCi/人(按70kg/人計算)。
實(shí)施例2、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗藥效學(xué)活性測定(1)藥物90Y-chTNT-MAb注射液，2ml/瓶，放射性濃度50mCi/ml，放化純＞95％，免疫活性＞50％，無菌，熱原檢查合格。使用時用4％人血白蛋白生理鹽水溶液稀釋到需要的濃度。
(2)動物荷瘤裸鼠。
每種荷瘤裸鼠隨機(jī)分組，每組6只。
(3)方法本實(shí)驗(yàn)選擇荷人結(jié)腸癌裸鼠動物模型、荷人肝癌裸鼠動物模型和荷人宮頸癌裸鼠動物模型為研究對象，裸鼠動物模型腹腔注入不同劑量的90Y-chTNT-MAb注射液后，使用SPECT儀觀察該藥在腫瘤中的定位和濃集的情況，并分別觀察治療組和對照組腫瘤生長的情況，通過測定腫瘤大小和稱重，定量和計算腫瘤生長抑制率，以獲得注入不同計量90Y-chTNT-MAb對腫瘤抑制的作用。
(4)結(jié)果由腹腔注入200μCi和400μCi的90Y-chTNT-MAb注射液后，荷人肝癌裸鼠在30天內(nèi)無一只死亡(n＝6)，而注入600μCi90Y-chTNT-MAb的荷人肝癌裸鼠在30天內(nèi)卻有2只死亡(n＝6)。
在荷人結(jié)腸癌、荷人肝癌和荷人宮頸癌裸鼠動物模型實(shí)驗(yàn)中，腫瘤組織/非腫瘤組織比(簡稱T/NT)在第一天已達(dá)1.6±0.1(n＝12)，在第三天可高達(dá)11.7至15.4。注入50μCi、100μCi、150μCi、300μCi和450μCi的90Y-chTNT-MAb注射液后，各組腫瘤生長抑制率分別是25.0、27.1、31.9、44.1和49.5(腸癌裸鼠)；15.4、29.2、36.5、49.7和40.6(肝癌裸鼠)。
(5)結(jié)論90Y-chTNT-MAb對人結(jié)腸癌、人肝癌和人宮頸癌裸鼠動物模型的腫瘤組織具有親和性，能很好定位于腫瘤組織且有較高的瘤/非癌之比。
每裸鼠注入150μCi(相當(dāng)于人使用等效劑量0.83mCi/kg)或150μCi以上劑量的131I-chTNT-MAb治療組具有確切療效(對人結(jié)腸癌、人肝癌和人宮頸癌裸鼠動物模型的腫瘤抑制率都大于30％)。每裸鼠注入450μCi(相當(dāng)于人使用等效劑量2.49mCi/kg)或450μCi以下劑量的131I-chTNT-MAb治療組被認(rèn)為是安全的，超過此劑量引起裸鼠生存期縮短，體重及生命體征下降。
因此，經(jīng)過131I-chTNT-MAb在荷瘤裸鼠動物模型的初步藥效學(xué)研究表明131I-chTNT-MAb抗腫瘤作用確切。
實(shí)施例3、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗的急性毒性研究(1)藥物131I-chTNT-MAb注射液，放射性濃度2mCi/ml，放化純＞95％，免疫活性＞50％，無菌，熱原檢查合格。使用時用4％人血白蛋白生理鹽水溶液稀釋到需要的濃度。
(2)動物昆明種小鼠，隨機(jī)分4組，5只/組，共20只，雌雄各半。
(3)方法小鼠尾靜脈分別注入三種劑量，即0.25mCi131I-chTNT-MAb/0.25mgchTNT-MAb/只，0.5mCi131I-chTNT-MAb/0.5mg chTNT-MAb/只，1mCi131I-chTNT-MAb/1mgchTNT-MAb/只，觀察48小時。
(4)結(jié)果131I-chTNT-MAb用藥量單位重量為人用劑量的20倍，chTNT-MAb用藥量單位重量為人用劑量的200倍時，觀察48小時，無一小鼠死亡，表明該藥無異常毒性反應(yīng)發(fā)生。
實(shí)施例4、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗的長期毒性研究(1)藥物131I-chTNT-MAb注射液，放射性濃度0.5mCi/ml，0.8mCi/ml，1.6mCi/ml，4.0mCi/ml，放化純＞95％，免疫活性＞50％，無菌，熱原檢查合格。使用時用4％人血白蛋白生理鹽水溶液稀釋到需要的濃度。
(2)動物遠(yuǎn)交系大白鼠，5組，25只/組，共125只，雌雄各半。
(3)方法本實(shí)驗(yàn)采用四個劑量組和一個對照組，共五組，每組25只大白鼠。從鼠尾靜脈注入藥物，連續(xù)每周加強(qiáng)給藥一次，共四次，劑量分別為1mCi(低劑量組)；1.6mCi(中劑量組)；3.2mCi(次高劑量組)；8.0mCi(高劑量組)，對照組給藥為未標(biāo)有131I單抗(800μg chTNT-MAb)的溶液。實(shí)驗(yàn)期間，觀察動物的一般狀況，體重和白細(xì)胞改變情況。實(shí)驗(yàn)終結(jié)時，各組除留5只動物進(jìn)行恢復(fù)性觀察外，其余均作血液生化指標(biāo)測定和血液學(xué)指標(biāo)測定，并對實(shí)驗(yàn)動物的主要臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
(4)結(jié)果實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各組中(除高劑量組外)實(shí)驗(yàn)動物一般癥狀和生化指標(biāo)的變化無顯著差異，血液學(xué)指標(biāo)中的白細(xì)胞計數(shù)隨注入劑量的增高而降低，逐步體現(xiàn)出中毒反應(yīng)現(xiàn)象。高劑量組與對照組比較后發(fā)現(xiàn)高劑量組的體重和白細(xì)胞計數(shù)有明顯的降低；骨髓像觀察發(fā)現(xiàn)高劑量組細(xì)胞增生不良，粒紅比例升高，細(xì)胞學(xué)形態(tài)異常明顯；病理組織學(xué)檢查，高劑量組甲狀腺及脾臟萎縮，臟器重量縮小，有明顯病理學(xué)改變。二周半恢復(fù)期后同樣觀察上述指標(biāo)，高劑量組的病理變化均有恢復(fù)跡象，但不完全，而造血損傷有延緩反應(yīng)。其他各組中毒反應(yīng)恢復(fù)情況根據(jù)劑量不同略有不同。
(5)結(jié)論中毒反應(yīng)主要表現(xiàn)為白細(xì)胞下降，低劑量組沒產(chǎn)生中毒反應(yīng)；中毒劑量組產(chǎn)生輕微的毒性反應(yīng)；次高及高劑量組產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性反應(yīng)；但無一死亡。中毒靶器官甲狀腺、脾臟和造血器官。無毒劑量＜1.0mCi/200g大鼠(＜0.80mCi/kg)，中毒劑量＞3.2mCi/200g大鼠(＞2.56mCi/kg)，安全劑量范圍＜1.6mCi/200g大鼠(＜1.28mCi/kg)，中毒的嚴(yán)重程度及可逆性當(dāng)劑量＞8.0mCi/200g大鼠(＞6.40mCi/kg)可產(chǎn)生嚴(yán)重的中毒現(xiàn)象，雖然在恢復(fù)期中毒靶器官有所恢復(fù)，但不完全。
實(shí)施例5、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核人鼠嵌合單抗的體內(nèi)應(yīng)用后的HAMA檢測本實(shí)驗(yàn)對接受細(xì)胞核人鼠嵌合單抗(簡稱chTNT-MAb)作載體，標(biāo)記放射核素(簡稱131I)作放射免疫治療(簡稱RIT)的腫瘤患者，用間接酶聯(lián)免疫吸附法(簡稱ELISA)檢測其靜脈血中HAMA的產(chǎn)生情況。
1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料11.1.1 0.1mol/L過碘酸鈉(NaIO4)稱取214mg高碘酸鈉溶于雙蒸水10ml中。
1.1.2 0.001mol/L醋酸鈉緩沖液，pH4.4①0.061g NaAc②0.072ml HAc③加雙蒸水至2000ml1.1.3 0.2mol/L Na2CO3緩沖液，pH9.5①0.127g Na2CO3②0.235g NaHCO3③加雙蒸水至20ml1.1.4硼氫化鈉(NaBH4)臨用時稱取NaBH44mg溶于1ml蒸餾水中。
1.1.5 1M NaH2PO4.2H2O 10ml1.56g NaH2PO4.2H2O溶于10ml蒸餾水中。
1.1.6 HRP(RZ＞3.0)1.1.7攪拌器，分光光度計1.1.8透析袋，大、小燒杯，試管，吸管等。
1.1.9 chTNT-MAb，2mg/ml批號20050816，上海美恩生物技術(shù)有限公司制備。
1.1.10待測血清標(biāo)本1.1.11酶標(biāo)記抗體，上海美恩生物技術(shù)有限公司制備。
1.1.12包被緩沖液0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)稱取Na2CO30.159g，NaHCO30.293g，加雙蒸水溶解并稀釋至100mL。
1.1.13稀釋液0.02mol/L，PBS pH7.2，稱取NaH2PO4.2H2O0.437g Na2HPO4.12 H2O2.581g NaCl 4.38g加雙蒸水溶解，加聚山梨酯-20250μl，并稀釋至500mL。
1.1.14封閉液(1％BSA上海實(shí)生細(xì)胞生物技術(shù)有限公司，批號91165126)1g小牛血清白蛋白溶于100mLPBS，pH7.2中。
1.1.15洗板液同1.1.13稀釋液1.1.16底物溶液(1)A液(0.05mol/L檸檬酸溶液)檸檬酸1.051g加雙蒸水至100mL。
(2)B液(0.1mol/LNa2HPO4溶液)Na2HPO4.12H2O 3.581g加雙蒸水至100mL。
(3)臨用前取A液4.86mL與B液5.14mL混合，加入鄰苯二胺(簡稱OPD)4mg，待充分溶解后加入30％(V/V)的H2O215μL，即成底物應(yīng)用液。
1.1.17終止液(1mol/LH2SO4溶液)取分析純濃硫酸5.5mL，加雙蒸水至100mL。
1.1.18其他實(shí)驗(yàn)材料酶標(biāo)儀(Model 550，BIO RAD)，酶標(biāo)板(Costar公司，批號06304013)，其它均為上?；瘜W(xué)試劑公司分析純試劑。
1.2方法1.2.1酶標(biāo)記物的制備采用標(biāo)記辣根過氧化物酶的過碘酸鈉法制備酶標(biāo)記物稱取2mg辣根過氧化物酶溶于1ml雙蒸水中。加入200μl新配制的0.1mol/lNaIO4，4℃，30分鐘，勿超過此時間。溶液呈棕綠色。于4℃，醋酸鈉緩沖液中透析過夜。加入20μl 0.2mol/lNa2CO3緩沖液，使溶液pH提升至約9-9.5。立即加入1ml(2mg)待標(biāo)記抗原。4℃過夜。加入新配制的NaBH4100μl，4℃2h。于4℃，在0.1mol/l硼酸鹽緩沖液中透析24h，其間更換緩沖液1-2次。加入等量用0.1mol/l硼酸鹽緩沖液配制的中性甘油。于-20℃中保存。
1.2.2HAMA的檢測每例患者接受碘[131I]腫瘤細(xì)胞核人鼠嵌合單抗后采靜脈血分離血清作檢測。另外取8例正常健康人血清標(biāo)本作陰性對照。
采用ELISA法檢測HAMA將單抗chTNT-MAb以0.1mol/l PH8.9的碳酸鈉緩沖液稀釋至10ug/ml。以每孔50μl包被于96孔反應(yīng)板，4℃過夜。取出后以PBS洗滌后，以1％小牛血清白蛋白/磷酸緩沖液(簡稱PBS，pH7.2)每孔200μl封閉，4℃過夜。取出以PBS洗滌后，每孔加入1∶50稀釋的待測血清標(biāo)本50μl，室溫1小時。PBS洗滌三次，每孔加入1∶100稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的chTNT-MAb 50μl，室溫1小時。PBS洗滌3次，每孔加入含鄰苯二胺(17mg/50ml PBS)及過氧化氫(5μl/10ml)的底物溶液200μl，室溫20分鐘。每孔加入終止液50μl終止顯色反應(yīng)。應(yīng)用ELISA READER在492nm波長下讀取光密度值(簡稱OD值)。HAMA陽性標(biāo)準(zhǔn)樣品OD值≥陰性對照孔OD值×2.1者判為陽性。
2結(jié)果從147個血清樣品OD值結(jié)果中可以看出，無一例血清樣品出現(xiàn)抗人鼠嵌合抗體，占測試血清樣品的4.0％。
3討論酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)間接法是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)中最常用的方法之一，用于對各種抗體的檢測。具有操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、不需要特殊設(shè)備，檢測快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
應(yīng)用鼠源性單抗后，HAMA的產(chǎn)生阻礙了單抗的重復(fù)應(yīng)用。因此，我們應(yīng)用ELISA法，可以檢測患者體內(nèi)HAMA的產(chǎn)生情況，將為其再次應(yīng)用提供必要的科學(xué)依據(jù)和有效性的保證，同時減少了盲目性。同時，根據(jù)免疫反應(yīng)動力學(xué)的規(guī)律，調(diào)整給藥時間，避免HAMA對抗體再次應(yīng)用的不利影響，提高腫瘤組織的藥物攝取量，改善治療效果。
實(shí)施例6至10，用以進(jìn)一步說明本發(fā)明腫瘤細(xì)胞核人鼠嵌合單抗(簡稱chTNT-MAb)的制劑制備方法。
實(shí)施例6、粉針劑的制備1取100mg的chTNT-MAb，加10ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10ml，加1g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，分裝成5瓶。用前每瓶粉針劑加入適量注射用水或者生理鹽水充分溶解后，采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤啊?br> 實(shí)施例7、粉針劑的制備2取100mg的chTNT-MAb，加入乳糖50g，加10ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成5瓶。用前每瓶粉針劑加入適量注射用水或者生理鹽水充分溶解后，采取Iodogen法標(biāo)記chTNT-MAb，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤啊?br> 實(shí)施例8、小針劑的制備1取10mg的chTNT-MAb，加10ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶2ml，-80℃保存，用前取出充分溶解，然后采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤啊?br> 實(shí)施例9、小針劑的制備2取10mg的chTNT-MAb，加入丙二醇30g，加10ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶2ml每瓶2ml，-80℃保存，用前取出室溫充分溶解約1小時，然后采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤啊?br> 實(shí)施例10、葡萄糖輸液的制備取100mg的chTNT-MAb，加入聚乙二醇1g，加入葡萄糖5g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至500ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，-80℃保存。用前取出室溫充分溶解約1小時，然后采用氯胺T法進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記后的樣品經(jīng)進(jìn)一步純化后，用0.22μm微孔濾膜過濾，分裝入管制玻璃瓶內(nèi)，丁基橡膠藥用瓶塞和鋁蓋密封包裝。外包裝包括屏蔽鉛罐、發(fā)泡塑料防震襯里和外包裝鐵桶或?qū)Ｓ盟芰贤啊?br> 實(shí)施例11、腫瘤細(xì)胞核單抗的標(biāo)記方法1采取氯胺T法標(biāo)記chTNT-MAb(1)材料和方法①高比度無載體碘化鈉131I溶液，放射性純度≥95％，放射性濃度約1000mCi/ml。
②chTNT-MAb，純度＞95％，蛋白濃度≥5mg/ml。
③氯化鈉注射液，0.9％NaCl，上海延安制藥廠產(chǎn)品。
④氯胺T，活性氯≥12％，已消毒，F(xiàn)isherScientific公司產(chǎn)品。
⑤偏重亞硫酸鈉，化學(xué)純98.8％，ACS試劑，Sigma公司產(chǎn)品。
⑥葡聚糖凝膠G-25，細(xì)粒(20-80)，色譜純，Sigma公司產(chǎn)品。
⑦人血清白蛋白注射液，20％濃度，衛(wèi)生部上海生物制品研究所產(chǎn)品。
(2)實(shí)驗(yàn)步驟
①標(biāo)記反應(yīng)瓶中加入Na131I溶液，適量磷酸緩沖液，混勻再加入chLym-1溶液，混勻；加入氧化劑氯胺T后，混勻，計時10分鐘后迅速加入還原劑偏重亞硫酸鈉，混勻以中止反應(yīng)。
②純化反應(yīng)液加入已用人血清白蛋白飽和的0.9％氯化鈉注射液平衡過的葡聚糖凝膠G-50(2.5×30cm或1.6×30cm)色譜柱，洗脫液用部分收集器按1ml/分鐘的速度自動收集用γ活度計測量每管的放射性，所得第一主峰為131I-chTNT-MAb產(chǎn)品。
③分裝多管產(chǎn)品合并后，加入適量20％人血清白蛋白，配制成含4％人血清蛋白131I-chTNT-MAb溶液0.22um濾膜滅菌過濾分裝，貼簽后放置4℃或-20℃冰箱待檢。
實(shí)施例12、腫瘤細(xì)胞核單抗的標(biāo)記方法2采取Iodogen法標(biāo)記chTNT-MAb，此法具有標(biāo)記率高、反應(yīng)體積小、可用低濃度的放射性碘原料、對多肽激素和蛋白質(zhì)的免疫活性損失小、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，系常規(guī)的碘化方法之(1)原理用Iodogen為氧化劑，對蛋白質(zhì)和多肽抗原進(jìn)行碘化標(biāo)記，把125I直接引進(jìn)分子中的酪氨酸殘基上。標(biāo)記過程中被標(biāo)記樣品不與Iodogen混合，標(biāo)記后取出樣品即停止反應(yīng)，不使用任何還原劑。
(2)方法①標(biāo)記之前，先把Iodogen溶于有機(jī)溶劑，涂于管底，并使之干燥。
②標(biāo)記時，將chTNT-MAb抗體溶液濃度調(diào)整為5mg/ml，取樣10μl置于反應(yīng)管中，反應(yīng)管置于冰浴中。
碘化時，125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1～1.2。反應(yīng)時間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達(dá)10分鐘，從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液，使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl磷酸緩沖液(0.01mol/L、pH7.2)和0.15mol/L NaCl溶液中，層析分離前再放置5分鐘，使其未標(biāo)記的碘離子還原成分子碘，以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
實(shí)施例13、腫瘤細(xì)胞核單抗的標(biāo)記方法3采取乳過氧化物酶法(簡稱LPO)標(biāo)記chTNT-MAb本法反應(yīng)溫和，對抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應(yīng)用。
(1)原理此法是利用乳過氧化物酶(Lactoperoxidase)有促進(jìn)微量過氧化氫對125I-的氧化作用，生成125I+，并標(biāo)記在多肽、蛋白質(zhì)酪氨酸分子上。
(2)方法以標(biāo)記chTNT-MAb為例。
①反應(yīng)液組成chTNT-MAb抗體溶液5mg/ml，取10μl加入Na125I 10mCi(10μl)、乳過氧化物酶溶液25ng(10μl)、H2O2200ng(10μl)；
②在室溫保溫7分鐘；③加入H2O2200ng(10μl)；④過7分鐘再加入H2O2(3μl)；⑤保溫7分鐘后，加入0.5ml、10mmol/L巰基乙醇以停止反應(yīng)；⑥10分鐘后加入NaI載體溶液1ml；⑦按常規(guī)方法分離純化。
實(shí)施例14、腫瘤細(xì)胞核單抗的標(biāo)記方法4此方法用以標(biāo)記放射性核素錸188(簡稱188Re)(1)抗體還原在240μg/200μlchTNT-MAb中加入10μl 2-ME，37oC下靜置反應(yīng)30分鐘，經(jīng)SephadexG50柱分離，用生理鹽水洗脫，流速為1.2ml/分鐘，收集洗脫液0.5ml/管，用考馬斯亮蘭鑒定蛋白峰位。
(2)配體交換法在300μg/60μl的檸檬酸溶液中加入188ReO4-洗脫液11.1～37MBq/0.5ml及4.57g/l的SnCl2的0.1mol.L-1HCl溶液800μl，反應(yīng)10分鐘，調(diào)節(jié)pH約為6.0，離心去除亞錫沉淀，將上清液(188Re-檸檬酸)加入還原抗體中，用PBS緩沖液調(diào)至適當(dāng)?shù)膒H值，振蕩反應(yīng)。測定不同pH值及不同反應(yīng)時間的標(biāo)記率，選擇最佳的標(biāo)記條件進(jìn)行標(biāo)記。
實(shí)施例15、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用1局部注射131I-chTNT-MAb聯(lián)合經(jīng)皮穿刺氬氦刀冷凍治療晚期肝癌57例，目的為探討以131I-chTNT-MAb為增效劑，氬氦刀冷凍治療肝臟惡性腫瘤的療效及臨床意義。
試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(131I-chTNT-MAb為增效劑，29例)和對照組(單純物理治療，無增效劑，28例)，比較兩個治療組患者影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化和疾病無進(jìn)展存活時間。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受氬氦刀冷凍治療肝臟惡性腫瘤后，肝臟原腫瘤部位局部注射131I-chTNT-MAb作為氬氦刀冷凍治療的增效劑。對照組患者僅接受氬氦刀冷療治療前，131I-chTNT-MAb經(jīng)B超引導(dǎo)射入患者肝臟腫瘤殘余組織內(nèi)，注射劑量為1.5mg(體積約為1.5ml，核素標(biāo)記量為30mCi)。第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。復(fù)發(fā)病人均在手術(shù)2周后進(jìn)行治療。對照組病人接受氬氦刀冷凍治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后12個月，影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化、血清腫瘤標(biāo)志物監(jiān)測及近期和遠(yuǎn)期并發(fā)癥和副作用。腫瘤根治標(biāo)準(zhǔn)血清腫瘤標(biāo)記物陽性者術(shù)后(1～2月)轉(zhuǎn)陰；MRI或CT等影像資料提示腫瘤壞死、無明確存活病灶。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組29例可評估的病人中，治療后1年生存率為45.3％，3年生存率為27.7％；對照組28例可評估的病人中，治療后1年生存率為31.5％，3年生存率為11.9％(P均＜0.01)。因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)氬氦刀冷凍治療晚期肝癌的療效及臨床意義。
實(shí)施例16、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用2局部注射131I-chTNT-MAb聯(lián)合伽瑪?shù)吨委煇盒阅X膠質(zhì)瘤患者，目的為探討以131I-chTNT-MAb為增效劑，伽瑪?shù)吨委煇盒阅X膠質(zhì)瘤患者的療效及臨床意義。
共入組患者50例，其中男33例，女17例，平均年齡36(5～80)歲。根據(jù)其臨床表現(xiàn)，電子計算機(jī)體層攝影(簡稱CT)及磁共振成像(簡稱MRI)影像和病理診斷為星形細(xì)胞瘤者27例，其中I～I(xiàn)I級16例，III～I(xiàn)V級11例。室管膜瘤7例，少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤12例，脈絡(luò)叢乳頭狀瘤4例。病人治療前卡諾斯基評分(karnofsky performance score，簡稱KPS)平均70(59～100)分。試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(131I-chTNT-MAb為增效劑，25例)和對照組(單純伽瑪?shù)吨委?，無增效劑，25例)，比較兩個治療組患者影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化和疾病無進(jìn)展存活時間。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受伽瑪?shù)吨委熀?，在手術(shù)過程中對未能切除的腫瘤(位于功能區(qū)或包繞重要血管、神經(jīng))局部留下一個孔腔術(shù)中置放化療囊及導(dǎo)管，將導(dǎo)管的尖端置于手術(shù)所產(chǎn)生的孔腔的中央，使局部注射的131I-chTNT-MAb最大限度地擴(kuò)散入腫瘤組織。131I-chTNT-MAb通過化療囊及導(dǎo)管注射入腫瘤組織，注射劑量為1.5mg(體積約為1.5ml，核素標(biāo)記量為30mCi)，第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。對照組患者僅接受伽瑪?shù)吨委?，對照組病人接受氬氦刀冷凍治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后12個月，影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化、血清腫瘤標(biāo)志物監(jiān)測及近期和遠(yuǎn)期并發(fā)癥和副作用。腫瘤根治標(biāo)準(zhǔn)血清腫瘤標(biāo)記物陽性者術(shù)后(1～2月)轉(zhuǎn)陰；MRI或CT等影像資料提示腫瘤壞死、無明確存活病灶。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組25例可評估的病人中，治療后1年生存率為30.8％，3年生存率為17.7％；對照組25例可評估的病人中，治療后1年生存率為21.5％，3年生存率為3.9％(P均＜0.01)。因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)伽瑪?shù)吨委煇盒阅X膠質(zhì)瘤患者的療效及臨床意義。
實(shí)施例17、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用3局部注射90Y-chTNT-MAb聯(lián)合射頻熱凝治療晚期乳腺癌患者，目的為探討以90Y-chTNT-MAb為增效劑，頻熱凝治療乳腺癌患者的療效及臨床意義。
共入組患者47例，平均年齡44(36～62)歲。試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(131I-chTNT-MAb為增效劑，24例)和對照組(單純射頻熱凝治療，無增效劑，23例)，比較兩個治療組患者影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化和治療后一年和三年生存期。。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受單純射頻熱凝治療后，腫瘤局部131I-chTNT-MAb，注射劑量為3mg(體積約為3ml，核素標(biāo)記量為30mCi)，第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。對照組患者僅接受射頻熱凝治療，對照組病人接受射頻熱凝治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后36個月。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組24例可評估的病人中，治療后1年生存率為41.1％，3年生存率為25.3％；對照組26例可評估的病人中，治療后1年生存率為22.5％，3年生存率為10.3％(P均＜0.05)。因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)無水乙醇腫瘤局部注射治療晚期肝癌的療效及臨床意義。
實(shí)施例18、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用4局部注射131I-chTNT-MAb聯(lián)合無水乙醇腫瘤局部注射治療晚期肝癌，目的為探討以131I-chTNT-MAb為增效劑，無水乙醇腫瘤局部注射治療肝臟惡性腫瘤的療效及臨床意義。
試驗(yàn)共入組晚期肝癌患者52例，其中男38例，女14例，平均年齡51.4(38～68)。單個患者腫瘤負(fù)荷數(shù)為1～6個，平均2.4個，腫瘤直徑2.2～10.7cm，平均7cm)。試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(131I-chTNT-MAb為增效劑，26例)和對照組(單純無水乙醇腫瘤局部注射治療，無增效劑，26例)，比較兩個治療組患者影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化和治療后一年和三年生存期。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受無水乙醇腫瘤局部注射治療后，肝臟原腫瘤部位局部注射131I-chTNT-MAb作為無水乙醇腫瘤局部注射治療的增效劑。對照組患者僅接受無水乙醇腫瘤局部注射治療。131I-chTNT-MAb經(jīng)B超引導(dǎo)射入患者肝臟腫瘤殘余組織內(nèi)，注射劑量為1.5mg(體積約為1.5ml，核素標(biāo)記量為15mCi)。第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。復(fù)發(fā)病人均在手術(shù)2周后進(jìn)行治療。對照組病人接受無水乙醇腫瘤局部注射治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后12個月。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組26例可評估的病人中，治療后1年生存率為38.1％，3年生存率為25.3％；對照組26例可評估的病人中，治療后1年生存率為22.5％，3年生存率為10.3％(P均＜0.05)。因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)無水乙醇腫瘤局部注射治療晚期肝癌的療效及臨床意義。
實(shí)施例19、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用5局部注射188Re-chTNT-MAb聯(lián)合高效聚焦超聲(簡稱HIFU)膀胱癌者，目的為探討以188Re-chTNT-MAb為增效劑，HIFU治療膀胱癌患者的療效及臨床意義。
共入組患者31例，皆為經(jīng)BCG和/或化療治療失敗的原位膀胱癌病人。試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(188Re-chTNT-MAb為增效劑，16例)和對照組(單純HIFU治療，無增效劑，15例)，比較兩個治療組患者影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化和疾病無進(jìn)展存活時間。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受HIFU治療后，局部注射188Re-chTNT-MAb，注射劑量為5mg(體積約為5ml，核素標(biāo)記量為50mCi)，第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。對照組患者僅接受HIFU治療，對照組病人接受HIFU治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后12個月，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組16例可評估的病人中，有36％的病人在一年后仍保持疾病無進(jìn)展，12％病人達(dá)到部分應(yīng)答，12個月的總應(yīng)答率為47％。病人對治療的耐受極好，沒有明顯的安全性問題。而對照組15例可評估的病人中，有27％的病人在一年后仍保持疾病無進(jìn)展，5％病人達(dá)到部分應(yīng)答，12個月的總應(yīng)答率為33％。
因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看188Re-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)HIFU治療膀胱癌患者的療效及臨床意義。
實(shí)施例20、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用6局部注射131I-chTNT-MAb聯(lián)合電化學(xué)療法(簡稱ECT)治療晚期肺癌患者，目的為探討以131I-chTNT-MAb為增效劑，ECT治療晚期肺癌患者的療效及臨床意義。
共入組晚期肺癌患者43例，其中男33例，女10例，平均年齡57.3(31～70)。病人一般情況ECOG評分0～2，卡氏評分90～70。按病理分類，腺癌23例，鱗癌12例，小細(xì)胞肺癌6例，腺鱗癌1例，肺淋巴瘤1例。試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(131I-chTNT-MAb為增效劑，23例)和對照組(單純ECT治療，無增效劑，20例)，比較兩個治療組患者影像學(xué)觀察腫瘤有無復(fù)發(fā)及大小變化和疾病無進(jìn)展存活時間。
治療前準(zhǔn)備治療前三天起口服Lugol’s溶液直至治療結(jié)束后7天，檢查肝腎功能、心電圖、血HAMA等。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受ECT治療后，局部注射131I-chTNT-MAb，注射劑量為8mg(體積約為8ml，核素標(biāo)記量為80mCi)，第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。對照組患者僅接受HIFU治療，對照組病人接受ECT治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后12個月。
觀察隨訪內(nèi)容
(1)療效指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)用藥后觀察CT或X胸片所獲得的瘤體最大直徑與垂直徑的乘積，瘤體基本消失為完全緩解(簡稱CR)，瘤體縮小數(shù)值大于50％為部分緩解(簡稱PR)，瘤體無明顯變化或增大小于25％為無變化(簡稱NC)，瘤體增大超過25％為病變擴(kuò)展(簡稱PD)。觀察時間治療前為一月內(nèi)、治療后為6周與10周，部分略有延長也在期后一月內(nèi)。
(2)副作用指標(biāo)一般反應(yīng)隨訪10周，血象主要為白細(xì)胞、血小板、血紅蛋白，其它為血生化、肝腎功能、甲狀腺激素、心電圖、血HACA、HAMA等。
(3)腫瘤標(biāo)志物，檢測CEA等。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組23例可評估的病人中，有33.1％的病人在1年后仍保持疾病無進(jìn)展，27.2％患者PR，1例患者CR，12個月的總應(yīng)答率為41.2％。病人對治療的耐受極好，沒有明顯的安全性問題。而對照組20例可評估的病人中，有21％的病人在1年后仍保持疾病無進(jìn)展，11.6％病人達(dá)到部分應(yīng)答，12個月的總應(yīng)答率為29.1％。
因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)ECT治療肺癌患者的療效及臨床意義。
實(shí)施例21、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用7局部注射131I-chTNT-MAb聯(lián)合激光治療黑色素瘤患者，目的為探討以131I-chTNT-MAb為增效劑，激光治療黑色素瘤患者的療效及臨床意義。
共入組86例惡性黑色素瘤患者，其中男60例，女26例。年齡19～78歲，中位年齡45歲。腫瘤部位以頭面部和四肢最多見(71.9％)，軀干、消化道和生殖系統(tǒng)分別占11.0％、8.1％、6.5％。臨床分期I期28例(32.6％)；II期37例(43.0％)；III期21例(24.4％)。試驗(yàn)方案設(shè)試驗(yàn)組(131I-chTNT-MAb為增效劑，43例)和對照組(單純激光治療，無增效劑，43例)。觀察指標(biāo)為治療后3年生存率。統(tǒng)計學(xué)方法采用社會科學(xué)統(tǒng)計分析軟件包(SPSS 10.0)進(jìn)行數(shù)據(jù)管理及統(tǒng)計分析。
給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受激光治療后，局部注射131I-chTNT-MAb，注射劑量為2mg(體積約為2ml，核素標(biāo)記量為20mCi)，第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。對照組患者僅接受激光治療，對照組病人接受激光治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后36個月。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組43例可評估的病人中，治療后3年生存率為33.1％，對照組43例可評估的病人中，治療后3年生存率為20.9％(P均＜0.05)。因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)激光治療黑色素瘤患者的療效及臨床意義。
實(shí)施例22、標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合的應(yīng)用8局部注射90Y-chTNT-MAb聯(lián)合射頻熱凝治療晚期結(jié)直腸癌患者，目的為探討以90Y-chTNT-MAb為增效劑，頻熱凝治療為結(jié)直腸癌患者的療效及臨床意義。
入組病人經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為結(jié)直腸癌，治療前血象、肝腎功能及心電圖均正常，無心、腦及周圍神經(jīng)系統(tǒng)疾病，KPS評分≥60分，預(yù)計生存期≥3月以上未進(jìn)行任何抗腫瘤治療的患者40例。其中試驗(yàn)組30例，男15例，女25例，年齡36～78(平均55.0，中位55.9)歲。入組前結(jié)腸癌25例，直腸癌15例，病理均為腺癌。觀察指標(biāo)為給藥方法和劑量為試驗(yàn)組患者在接受射頻熱凝治療后，靜脈注射90Y-chTNT-MAb，注射劑量為10mg(體積約為10ml，核素標(biāo)記量為50mCi)，第一次注射后2周左右進(jìn)行第二次注射，劑量與第一次相同。對照組患者僅接受射頻熱凝治療，對照組病人接受射頻熱凝治療后局部注射生理鹽水，注射量、注射時間、治療周期與試驗(yàn)組一致。所有患者定期隨訪，隨訪時間為治療后36個月。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在試驗(yàn)組20例可評估的病人中，治療后1年生存率為33.6％，3年生存率為21.1％；對照組26例可評估的病人中，治療后1年生存率為22.5％，3年生存率為9.0％(P均＜0.05＝。因此從臨床試驗(yàn)結(jié)果看131I-chTNT-MAb具有明顯促進(jìn)射頻熱凝治療晚期結(jié)直腸癌患者的療效及臨床意義。
權(quán)利要求
1.腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療實(shí)體瘤中作為增效劑的應(yīng)用。
2.腫瘤細(xì)胞核單抗的組合物在物理治療實(shí)體瘤中作為增效劑的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞核單抗均是指核素標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞核單抗。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的核素是包括碘131、錸188、釔90或碘125中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的核素是碘131或釔90中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的核素標(biāo)記的辦法是包括氯胺T法、Iodogen法或其他的現(xiàn)有的有效標(biāo)記方法中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的物理療法是包括放射療法、冷凍療法、氬氦刀靶向療法、微波療法、高效聚焦超聲療法、電化學(xué)療法、激光療法、射頻熱凝療法、電穿孔療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、局部乙酸注射療法、動脈栓塞療法或賽博刀療法中的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的物理療法是包括放射療法、氬氦刀靶向療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、局部乙酸注射療法、動脈栓塞療法或射頻熱凝療法中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的物理療法是包括氬氦刀靶向療法、伽嗎刀療法、局部無水酒精注射療法、動脈栓塞療法或射頻熱凝療法中的一種或多種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的實(shí)體瘤是包括鼻咽癌、食管癌、頭頸部鱗癌、腦瘤、肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、直腸癌、結(jié)腸癌、腦膠質(zhì)瘤、淋巴瘤或?qū)m頸癌中的一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的實(shí)體瘤是包括肺癌、肝癌、腦瘤、直腸癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、腦膠質(zhì)瘤、胃癌或淋巴瘤中的一種或多種。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的實(shí)體瘤是包括肺癌、肝癌、直腸癌、結(jié)腸癌或腦膠質(zhì)瘤中的一種或多種。
13.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞核單抗是在物理治療后給藥，是包括經(jīng)靜脈或動脈全身給藥方式中的一種或多種，或者是經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行局部給藥。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的腫瘤細(xì)胞核單抗的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞核單抗是在物理治療后經(jīng)導(dǎo)管局部給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及腫瘤細(xì)胞核單抗在物理治療實(shí)體瘤中作為增效劑的用途。物理療法直接有效地摧毀腫瘤的局部可見病灶，同時產(chǎn)生大量的腫瘤壞死細(xì)胞；而腫瘤細(xì)胞核單抗能定向地與該腫瘤壞死組織(包括微小殘留或微轉(zhuǎn)移病灶)特異性結(jié)合。攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗與物理療法結(jié)合后，殺傷該腫瘤壞死組織周圍的腫瘤組織，而正常的組織不會被殺傷，即該單抗能夠顯著克服物理療法的缺點(diǎn)，增強(qiáng)了物理療法的抗腫瘤作用，達(dá)到惡性實(shí)體瘤患者根治的效果。該單抗制備工藝成熟，質(zhì)量可控，能體外大規(guī)模制備，生產(chǎn)成本較低，且療效確切、微創(chuàng)，安全低毒。也就是說，攜帶殺傷性核素的腫瘤細(xì)胞核單抗是物理療法的增效劑，適合臨床多種實(shí)體瘤的治療。
文檔編號A61P35/00GK101028525SQ20061003076
公開日2007年9月5日 申請日期2006年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月1日
發(fā)明者鞠佃文, 張昕泂, 陶群, 葉丹, 楊建軍 申請人:上海美恩生物技術(shù)有限公司