專利名稱：一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯b粉針及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑的給藥方法及制備方法，更具體地說(shuō)，涉及一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針及其制備方法、應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著銀杏葉研究的發(fā)展，現(xiàn)已證明銀杏葉的活性成分主要是黃酮和內(nèi)酯類化合物。銀杏內(nèi)酯是僅在銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的一類具有特殊結(jié)構(gòu)及顯著藥理活性的重要成分，迄今尚未發(fā)現(xiàn)存在于其他任何植物中。更重要的是它們具有獨(dú)特的藥理作用和治療價(jià)值。銀杏內(nèi)酯類化合物有銀杏內(nèi)酯A(BN52020)、銀杏內(nèi)酯B(BN52021)、銀杏內(nèi)酯C(BN52022)、銀杏內(nèi)酯M(BN52023)、銀杏內(nèi)酯J(SN52024)及白果內(nèi)酯，已證明銀杏內(nèi)酯均為強(qiáng)血小板活化因子(plateletacllvatfactor，PAF)受體拮抗劑。隨著對(duì)銀杏葉中有效藥用成分的明確，單一有效成分新藥成為近十年來(lái)法國(guó)、英國(guó)、德國(guó)和美國(guó)等國(guó)家競(jìng)相開(kāi)發(fā)的目標(biāo)。對(duì)銀杏葉中有效成分的深入研究，發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯B具有更高的藥用價(jià)值。
銀杏內(nèi)酯B純品(BN52021)目前國(guó)外已經(jīng)應(yīng)用于II、III期臨床，用于休克、燒傷、中風(fēng)、移植排斥和血液透析等試驗(yàn)，還可能為預(yù)防和治療過(guò)敏生哮喘提供一類新的藥物。由于銀杏內(nèi)酯B的理化性質(zhì)特殊，將銀杏內(nèi)酯B制成溶液劑或粉針劑較為困難。因此，尋找出適合國(guó)內(nèi)現(xiàn)有制藥設(shè)備工藝的制備方法，以及充分發(fā)揮銀杏內(nèi)酯B藥效的給藥途徑，成為國(guó)內(nèi)銀杏開(kāi)發(fā)的重要課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決上述研究的難點(diǎn)，提供一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針及其制備方法、應(yīng)用，提供了銀杏內(nèi)酯B的靜脈給藥途徑，并為實(shí)現(xiàn)此給藥途徑提供了一種銀杏內(nèi)酯B粉針的制備方法。
一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針及其制備方法、應(yīng)用是采取以下方案實(shí)現(xiàn)
一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于由治療有效量的銀杏內(nèi)酯B加藥品制備允許的溶劑溶解后，加入賦形劑，經(jīng)冷凍干燥后制成粉針，其中銀杏內(nèi)酯B與賦形劑重量配比為1∶0～55。
所述的溶劑是乙醇、水、丙二醇中的一種或混合物。
所述的凍干賦形劑是甘露醇、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖，或者是乳糖、氯化鈉、甘氨酸中的一種或混合物。
一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，由以下步驟制備用溶劑將銀杏內(nèi)酯B溶解，充分?jǐn)嚢杌蛘叱曁幚碇镣耆芙?，再加入適量溶劑和凍干賦形劑，調(diào)節(jié)溶液pH值為3～8.5后，添加溶劑至銀杏內(nèi)酯B濃度為1mg/ml～50mg/ml，加入適量活性炭，充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾脫炭；經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針。
其中制備時(shí)所用的凍干賦形劑是甘露醇、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖、乳糖、氯化鈉、甘氨酸中的一種或混合物；溶劑是乙醇、水、丙二醇中的一種或混合物。
其中制備時(shí)所用的溶劑選用水時(shí)，需加表面活性劑，表面活性劑選用非離子表面活性劑，表面活性劑采用司盤、吐溫、泊洛沙姆中的一種。銀杏內(nèi)酯B與表面活性劑重量配比為1∶0.1～1.5。
上述所述的一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B針劑在治療中風(fēng)、冠心病及其它涉及血小板凝聚引起的心腦血管病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明解決了銀杏內(nèi)酯B難以制成合適粉針的問(wèn)題，所得制成的凍干粉針可供靜脈使用。能充分發(fā)揮其藥效，制得的樣品性質(zhì)穩(wěn)定，無(wú)明顯的降解產(chǎn)物，符合國(guó)家對(duì)靜脈使用粉針的質(zhì)量要求。藥效學(xué)研究表明，制得的樣品對(duì)動(dòng)物模型有明顯的治療作用。本發(fā)明制備的一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B針劑可應(yīng)用于治療中風(fēng)、冠心病、及其它涉及血小板凝聚引起的心腦血管病。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例，結(jié)合藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，下述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明沒(méi)有限制。
實(shí)施例1處方銀杏內(nèi)酯B2g乙醇 1000g制法稱取處方量的銀杏內(nèi)酯B精制品2g，加乙醇500g溶解，超聲處理至完全溶解，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值3.0，加入0.05％(w/v)活性炭，充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾脫炭；經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針。
實(shí)施例2處方銀杏內(nèi)酯B2g司盤 3g甘露醇 50g乙醇 500g注射用水 500g制法稱取處方量的銀杏內(nèi)酯B精制品2g，加500g乙醇溶解，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加?g司盤，再加入500g注射用水和50g甘露醇，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值8.5，加入0.05％(w/v)活性炭，充分?jǐn)嚢瑁^(guò)濾脫炭，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針。
實(shí)施例3處方銀杏內(nèi)酯B1g吐溫-80 0.1g甘露醇 25g
葡萄糖 30g注射用水 750g制法稱取處方量的銀杏內(nèi)酯B精制品1g、葡萄糖30g，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加?g吐溫-80，再加入750g注射用水和25g甘露醇，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓名}酸溶液或氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值5.5，加入0.05％(w/v)活性炭，充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾脫炭，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針。
實(shí)施例4處方銀杏內(nèi)酯B10g泊洛沙姆 1g甘露醇 25g乙醇 100g注射用水 100g制法稱取處方量的銀杏內(nèi)酯B精制品10g，加100g乙醇溶解，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加?g泊洛沙姆，再加入100g注射用水和25g甘露醇，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值5.2，加入0.05％(w/v)活性炭，充分?jǐn)嚢瑁^(guò)濾脫炭，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得。
實(shí)施例5處方銀杏內(nèi)酯B10g吐溫-80 5g右旋糖酐 25g丙二醇 50g注射用水 500g
制法稱取處方量的銀杏內(nèi)酯B精制品10g，加50g丙二醇溶解，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓尤?g吐溫-80，再加入500g注射用水和25g右旋糖酐，用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)溶液pH值5.0，加入0.05％(w/v)活生炭，充分?jǐn)嚢瑁^(guò)濾脫炭，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針。
銀杏內(nèi)酯B粉針抗大鼠大腦中動(dòng)脈阻斷致局灶性缺血再灌注損傷作用地點(diǎn)東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室試驗(yàn)?zāi)康淖C實(shí)銀杏內(nèi)酯B粉針的抗大鼠腦局灶性缺血再灌注損傷作用。
實(shí)驗(yàn)材料1、受試藥品與給藥銀杏內(nèi)酯B粉針，提供單位江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司給藥體積1ml/kg(用生理鹽水配制)。阻塞前20min給藥，速度0.2ml/min。
2、試劑與實(shí)驗(yàn)儀器丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，超氧化物(SOD)測(cè)定試劑盒，蛋白定量試劑盒(均為南京建成生物工程研究所提供)，2，3，5，-三苯基氯化四氮唑(TTC，上?；瘜W(xué)試劑公司，用1％磷酸鹽PBS溶液配制成2％工作液)，752型紫外分光光度計(jì)(上海醫(yī)用分析儀器廠)。
3、試驗(yàn)動(dòng)物健康雄性SD大鼠80只，體重250～300g，10周齡，SPF級(jí)，南京軍區(qū)總院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供。在室溫18～22℃、12h明/暗交替條件下飼養(yǎng)3d，自由取食，飲清潔水。所有對(duì)大鼠的實(shí)驗(yàn)程序已經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠腦局灶性缺血再灌注損傷模型制備將直徑2.8mm的尼龍線一端仔細(xì)打磨光滑，在距此端18mm、20mm、22mm處做標(biāo)志。采用改良Koizumi法(4)制作大腦中動(dòng)脈阻斷(MACO)模型，手術(shù)過(guò)程中監(jiān)測(cè)肛溫，使之保持在37±0.5℃。大鼠用水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，頸部腹側(cè)正中切口，暴露氣管和右側(cè)頸總動(dòng)脈，在頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈分支點(diǎn)，從近心端結(jié)扎頸總動(dòng)脈，從分支處分離結(jié)扎頸外動(dòng)脈，距分支處2mm在頸總動(dòng)脈上剪一小切口，由切口處向頸內(nèi)動(dòng)脈放入栓塞線約20mm或遇到阻力后?？p合頸部皮膚切口。約10mm栓塞線留置在頸部切口外。缺血2h后拔出栓塞線約10mm，使血流再通。再灌注22h，剔除死亡或無(wú)神經(jīng)功能缺失行為的大鼠。偽手術(shù)組大鼠除頸動(dòng)脈不插栓線外，其它同缺血再灌注模型組。
腦組織SOD和MDA測(cè)定再灌注末將大鼠斷頭處死，迅速取出大腦，取右大腦半球前1/3，制作10％腦勻漿。按試劑盒說(shuō)明書用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定MDA含量，用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD含量。
病理組織學(xué)觀察用10％甲醛溶液固定右側(cè)大腦，一周后送本校病理科行病理組織學(xué)觀察。
銀杏內(nèi)酯B 5mg組和銀杏內(nèi)酯B 10mg組可以增加大鼠局灶性腦缺血2h再灌注22h后的腦組織的SOD活性(P＜0.05)，減少其MDA含量(P＜0.05)，且有劑量依賴關(guān)系，具體結(jié)果見(jiàn)下表。
銀杏內(nèi)酯B對(duì)大鼠腦局灶性缺血再灌注損傷后腦組織MDA和SOD的影響。

注1)為與溶劑對(duì)照組比較P＜0.05；2)為與偽手術(shù)組比較P＜0.05大腦海馬CA1區(qū)病理變化鏡下觀察結(jié)果表明偽手術(shù)組神經(jīng)元排列整齊，層次清楚，無(wú)細(xì)胞壞死，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；溶劑對(duì)照組神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，排列紊亂，大量壞死細(xì)胞，胞質(zhì)呈嗜酸性改變，核腫脹，碎裂或溶解消失，炎性細(xì)胞(主要為中性粒細(xì)胞)浸潤(rùn)明顯；銀杏內(nèi)酯B 5mg/kg和銀杏內(nèi)酯B 10mg/kg組少量壞死細(xì)胞，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)輕微，神經(jīng)元數(shù)量多于溶劑對(duì)照組但少于偽手術(shù)組。
討論大腦中動(dòng)脈阻斷模型一種很好的研究腦缺血再灌注損傷以及其相關(guān)藥物的動(dòng)物模型，因?yàn)榇竽X中動(dòng)脈是臨床栓塞最常見(jiàn)的部位，且模仿人腦卒中的病理?yè)p傷。本實(shí)驗(yàn)利用該模型證實(shí)銀杏內(nèi)酯B可減少腦組織MDA的生成、增加SOD的活力；組織學(xué)檢查表明銀杏內(nèi)酯B可減少缺血再灌注引起的海馬CA1區(qū)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減少神經(jīng)元壞死或凋亡。
大腦缺血再灌注損傷過(guò)程中存在氧自由基的損傷作用，主要表現(xiàn)偽對(duì)細(xì)胞膜和線粒體等各種膜性器官的損傷；損傷RNA和DNA；能引起一系列炎癥因子的表達(dá)增加，致使炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，從而加重對(duì)神經(jīng)元的損傷；可以誘導(dǎo)一系列促凋亡基因的表達(dá)，使神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞凋亡。線粒體是真核細(xì)胞的能量供應(yīng)的來(lái)源，也是氧自由基的主要產(chǎn)生場(chǎng)所，最近研究認(rèn)為呼吸鏈復(fù)合體I中的黃素單核苷酸基團(tuán)和復(fù)合體III中的輔酶Q是氧自由基產(chǎn)生的重要的生理位點(diǎn)，在缺血再灌注過(guò)程中而氧自由基的產(chǎn)生主要是由于血流再通后組織中氧含量突然增多，與上述分子作用而形成。大量的氧自由基還可以與NO作用形成的ONOO-，ONOO-具有極強(qiáng)的氧化脂質(zhì)的能力，且可使SOD失活，影響了機(jī)體清除氧自由基的能力，加重其對(duì)組織細(xì)胞的損傷。鑒于氧自由基在損傷過(guò)程中的作用，清除氧自由基，減輕氧應(yīng)激損傷是臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究中減輕腦缺血再灌注損傷的重要策略之一?？梢酝ㄟ^(guò)減少生成和增加清除來(lái)減輕氧自由基對(duì)機(jī)體的損傷，如通過(guò)使用鈣離子拮抗劑抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載、使用線粒體鉀通道開(kāi)放劑以及線粒體解耦聯(lián)減少其產(chǎn)生、增加組織SOD活性以增強(qiáng)其清除氧自由基的能力等。
MDA為是自由基攻擊細(xì)胞膜不飽和脂肪酸使脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其含量的測(cè)定間接反應(yīng)了細(xì)胞損傷的程度。SOD是體內(nèi)清除氧自由基的重要酶類，其含量的測(cè)定可以反映機(jī)體清除氧自由基能力的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示銀杏內(nèi)酯B可能減少氧自由基的生成，增強(qiáng)組織清除氧自由基的能力，抑制脂質(zhì)的過(guò)氧化，從而減輕了腦組織的損傷。其微觀作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
權(quán)利要求
1.一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于由治療有效量的銀杏內(nèi)酯B加藥品制備允許的溶劑溶解后，加入賦形劑，經(jīng)冷凍干燥后制成粉針，其中銀杏內(nèi)酯B與賦形劑重量配比為1∶0～55。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于所述的溶劑是乙醇、水、丙二醇中的一種或混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于所述的凍干賦形劑是甘露醇、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖，或者是乳糖、氯化鈉、甘氨酸中的一種或混合物。
4.一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于由以下步驟制備用溶劑將銀杏內(nèi)酯B溶解，充分?jǐn)嚢杌蛘叱曁幚碇镣耆芙猓偌尤肴軇┖蛢龈少x形劑，調(diào)節(jié)溶液pH值為3～8.5后，添加溶劑至銀杏內(nèi)酯B濃度為1mg/ml～50mg/ml，加入適量活性炭，充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾脫炭；經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，蓋上丁基橡膠塞，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針；其中制備時(shí)所用的凍干賦形劑是甘露醇、右旋糖酐、葡萄糖、蔗糖、乳糖、氯化鈉、甘氨酸中的一種或混合物；溶劑是乙醇、水、丙二醇中的一種或混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于溶劑選用水時(shí)，需加表面活性劑，表面活性劑選用非離子表面活性劑，表面活性劑采用司盤、吐溫、泊洛沙姆中的一種，銀杏內(nèi)酯B與表面活性劑重量配比為1∶0.1～1.5。
6.權(quán)利要求1或4所述的一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針在治療中風(fēng)、冠心病、及其它涉及血小板凝聚引起的心腦血管病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物制劑的給藥方法及制備方法，更具體地說(shuō)，涉及一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針及其制備方法、應(yīng)用。一種靜脈給藥的銀杏內(nèi)酯B粉針，其特征在于由治療有效量的銀杏內(nèi)酯B加藥品制備允許的溶劑溶解后，加入賦形劑，經(jīng)冷凍干燥后制成粉針，其中銀杏內(nèi)酯B與賦形劑重量配比為1∶0～55。由以下步驟制備用溶劑將銀杏內(nèi)酯B溶解，充分?jǐn)嚢杌蛘叱曁幚碇镣耆芙猓偌尤肴軇┖蛢龈少x形劑，調(diào)節(jié)溶液pH值為3～8.5后，添加溶劑至銀杏內(nèi)酯B濃度為1mg/ml～50mg/ml，加入適量活性炭，充分?jǐn)嚢?，過(guò)濾脫炭；經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，灌裝于管制低硼硅玻璃管制注射劑瓶中，放入凍干機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥，壓緊瓶塞取出樣品，鋁蓋壓口，包裝即得。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1830436SQ20061003961
公開(kāi)日2006年9月13日 申請(qǐng)日期2006年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月18日
發(fā)明者張國(guó)清 申請(qǐng)人:張國(guó)清